KR101488208B1 - 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스 및 그 제조방법 - Google Patents

악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

악티게닌을 고함량으로 포함하는 우엉열매 엑기스 및 그 제조방법을 제공하고, 이를 췌장암 치료에 제공한다.
우엉열매에 내재하는 효소인 β-글루코시다제에 의해, 악티인을 악티게닌으로 효소 변환하고, 에탄올을 가하여 추출, 농축한 후, 동결건조 또는 분무 건조함으로써 악티게닌을 고농도에 함유하는 우엉열매 엑기스를 제공한다.

Description

악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스 및 그 제조방법{Burdock Fruit Extract Containing Arctigenin at High Content and Process for Producing Same}
본 발명은 악티게닌을 고함량으로 포함한 우엉열매 엑기스 및 그 추출·제조방법에 관한 것이다.
우엉열매는 일국(日局: 의약품 관련 일본 품질 규격서) 15에서 우엉{(Arctium lappaLinne (Compositae)}의 열매라고 규정되어 있고 은교산, 구풍해독탕, 소풍산 등에 처방되는 생약으로, 오로지 의약품으로서 사용되는 성분 본질로 분류된다.
우엉열매는 리그낭 배당체로 분류되는 악티인(Arctiin)을 약 7 중량% 및 그 아글리콘(aglycone)인 악티게닌(Arctigenin)을 약 0.6 중량% 포함한다.
최근, PANC-1, AsPC-1, BxPC1, KP3와 같은 췌장암 유래의 세포는, 극도의 영양 기아 상태에서도 강한 내성을 갖는 것을 볼 수 있어 그 내성을 해제하는 것이 암치료에 있어서의 새로운 생화학적 접근법이 될 가능성이 있음이 보고되어 있다(특허 문헌 1).
게다가 췌장암 세포주 PANC-1을 이용하여 저영양 상태에 있는 종양 세포의 생존 능력을 해제할 수 있는 물질의 스크리닝을 실시한 결과, 악티게닌이 유효하다는 것이 보고되어 있다(비특허 문헌 1).
일본 공개특허공보 특개2002-065298호
S. Awale, J. Lu, S. K. Kalauni, Y. Kurashima, Y. Tezuka, S. Kadota, H. Esumi,Cancer Res.,2006,66(3),1751-1757)
현재 알려져 있는 우엉열매는, 우엉열매 중의 악티게닌 함량이 약 0.6 %로 낮고, 또한 물에 쉽게 녹지 않는다. 이 때문에, 종래부터 행해지고 있는 열수 추출법으로는 악티게닌을 고함량으로 포함하는 엑기스을 제조하기가 매우 어려웠다.
그 때문에, 실제로 생체에 투여 가능한 형태이고, 또 악티게닌을 고함량으로 포함하는 우엉열매 엑기스의 제공이 요구되고 있었다.
따라서, 본 발명의 과제는 악티게닌을 고함량으로 포함하는 우엉열매 엑기스 및 그 제조방법을 제공하는 것에 있다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해서 열심히 검토를 실시한 결과, 생약에 내재되어 있는 효소인 β-글루코시다제에 주목하여, 이 효소 반응을 이용해 악티인을 악티게닌으로 변환하는 기술, 변환한 악티게닌을 효율적으로 추출하는 기술 및 악티게닌을 고함량으로 포함하는 우엉열매 엑기스를 찾아냈다.
제1의 발명은, 악티게닌을 3 중량%이상 함유하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스이다.
제2의 발명은, 우엉열매에 내재된 β-글루코시다제에 의해, 악티인을 악티게닌으로 효소 변환해 추출하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법이다.
제3의 발명은, 상기 발명중 어느 하나에 있어서, 악티인을 악티게닌으로 효소 변환한 후, 에탄올을 가하여 추출하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법이다.
제4의 발명은, 상기 발명중 어느 하나에 있어서, 추출 후, 농축하고, 동결건조 또는 분무 건조해 제조하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법이다.
제5의 발명은, 상기 발명중 어느 하나에 있어서, 추출 후 농축하고, 덱스트린을 첨가해 분무 건조하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법이다.
본 발명에 의해, 항종양 효과를 가지는 악티게닌을 고함량으로 갖는 우엉열매 엑기스의 제공이 가능해졌다. 특히 췌장암환자에게 투여함으로써 종양의 증식 억제나 항종양 효과를 기대할 수 있다. 또 제조시의 생산성도 향상시킬 수 있다.
[도 1] 효소 변환 유효성 결과의 분석 크로마토그램.
[도 2] 배양 세포(CAPAN-1)를 이용한 세포 독성의 평가.
[도 3] 배양 세포(PANC-1)를 이용한 세포 독성의 평가.
[도 4] 배양 세포(PSN-1)를 이용한 세포 독성의 평가.
[도 5] 종양 모델 동물(CAPAN-1 Xenografts)에 있어서의 항종양성의 평가.
[도 6] 종양 모델 동물(PSN-1 Xenografts)에 있어서의 항종양성의 평가.
[도 7] 인간혈중 악티게닌(AG)의 혈중농도 추이.
[도 8] 인간혈중 악티게닌 글루크로산 포합체(AGG)의 혈중농도 추이.
이하, 본 발명에 관해 상세하게 설명하기로 한다. 개시하는 조건은 일례에 불과하며, 본 발명은 이에 한정되는 것이 아니다.
본원 발명의 우엉열매 엑기스는 생약절제공정·추출 공정·고액분리 공정·농축 공정·건조 공정을 거쳐 제조된다.
(생약절제공정)
원료로 하는 우엉열매를 추출에 적당한 크기로 절단한다. 원료가 되는 생약은 식물의 여러 부위나 광물, 동물 등 각종 크기, 형상, 경도에 있어, 그 특질에 따른 절단이 필요하다. 입도는 세밀할수록 효소 반응이 촉진되고 엑기스 수율도 상승하지만, 그 반면, 효소 반응이 너무 빨라서 프로세스 관리가 곤란하게 되거나 후속 공정에서 정확한 고액분리에 지장이 생기는 일이 있다. 그 때문에, 본 발명에 이용하는 생약의 입도는 잘게 절단하는 정도가 바람직하다.
(추출공정)
추출 공정은 한방 엑기스 분말 제조 공정 중에서, 품질상 가장 중요한 공정이며, 여기서 한방 엑기스 분말의 품질이 결정된다. 본원 발명에서는 추출 공정을 효소 반응 공정과 유기용매 추출 공정의 2 단계로 나누어 실시한다.
(효소 반응 공정)
본원 발명이 찾아낸 가장 중요한 공정으로, 우엉열매에 포함되어 있는 악티인을 악티게닌으로 효소 변환하는 공정이다.
전(前) 공정에서 준비한 우엉열매 절단조각 1 kg에 물 7 L를 가해 20 ~ 40 ℃에서 교반하는 등의 방법을 행하여 약 1시간 경과시킨다. 이 공정에 의해 악티인이 악티게닌으로 효소 변환되어 악티게닌의 함유량이 비약적으로 상승한다. 해당 추출 방법을 냉침 추출이라고 한다. 덧붙여 반응속도의 관점에서 보면, 효소 반응의 피크 온도인 37 ~ 40 ℃가 바람직하지만, 품질 제어면에서 보면 반응속도가 너무 빨라서 프로세스 관리가 곤란하게 되기도 한다.
따라서 소(小)스케일에서는 20 ~ 25 ℃에서 약 1시간의 추출이 바람직하지만, 공업 스케일에서는 교반 장치의 능력이나 온도 제어의 능력에 따라 30 ℃에서 30분간, 37 ℃에서 15분간 등 적절히 설정하면 된다. 덧붙여서, 60 ℃를 넘으면 효소가 활성을 잃으므로, 그 이상의 온도가 되는 종래의 열수가열법은 사용할 수 없다.
(유기용매 추출 공정)
악티게닌이 고함량이 된 상태로, 가열 환류하여 우엉열매 엑기스를 추출하는 공정이다. 여기서 악티게닌은 수난용성(水難溶性)이기 때문에 용매를 첨가함으로써 수율을 향상시킬 수 있다.
구체적으로는 효소 반응 공정을 끝낸 용액(우엉열매 세절 1 kg + 물 7 L)에 용매 3 L를 가하고 1시간 더 가열 환류한다. 여기서 용매는 안전성의 면에서 에탄올이 바람직하다.
에탄올량이 많을수록 악티게닌의 용해도가 높아져 수율도 향상하지만, 불필요한 유지류가 많이 녹아내려 농축 공정의 부하가 커지므로, 투입량은 상황에 따라 적절히 결정하면 된다. 또한 이 공정에서의 가열 환류는 멸균·살균도 겸하고 있다.
(고액분리 공정)
추출이 끝난 생약을 추출액으로부터 분리하는 공정이다. 고액분리 방식에는 여과법, 침강법 등이 있고, 공업적으로는 원심분리 방식이 바람직하다.
(농축 공정)
건조하기에 앞서 추출액 중의 용매를 제거하는 공정이다. 얻어진 엑기스의 추출액이 더욱 고온에 장시간 노출되는 일이 없도록 감압농축법을 이용한다. 이 공정에서는, 다음 공정의 건조가 적정하게 행해지고, 또 건조 엑기스 분말을 제제(製劑)했을 경우에 적절한 제제 특성을 얻을 수 있는 농도까지 농축을 실시한다.
또한, 악티게닌은 수난용성이기 때문에, 건조 공정의 제조장치 내에 부착하는 양이 많아, 최종적인 수율이 큰 폭으로 저하된다. 거기서 덱스트린을 첨가함으로써 제조 장치로의 부착을 방지할 수 있다. 첨가량은 농축액의 고형분에 대해 20 % 정도가 바람직하다.
(건조 공정)
추출한 엑기스를 분말상으로 완성하는 공정이다. 건조법에는 동결건조와 분무건조가 알려져 있지만, 실험실 레벨이면 전자, 양산 레벨이면 후자를 임용하는 것이 일반적이다.
이상의 제조 프로세스에 의해, 악티게닌 고함유의 우엉열매 엑기스를 얻을 수 있다.
(우엉열매 엑기스 분말 배합 제재)
이와 같이 해서 얻어진 엑기스 분말은 그대로의 형태로 사용할 수도 있지만, 통상, 식품 및/또는 의약품에 사용되는 통상의 부형제(예를 들면, 결정 셀룰로오스, 자당 지방산 에스테르, 유당 등)를 가하여, 예를 들면, 건식 조립법 혹은 습식 조립법으로 조립하여 제조하고, 이와 같이 한 조립물을 그대로 사용할 수도 있지만, 그들을 또한 타정기를 이용한 압축성형물로서 사용할 수도 있다.
또한, 엑기스 분말은 특유의 씁쓸한 맛이 있기 때문에 엑기스 분말을 마스킹하는 제제가 복용상 바람직하고, 피복제로 피복 하는 필름 코트제로 할 수도 있다.
또, 성분의 안정성 면이나 간단하게 섭취할 수 있는 형태로서, 상술한 엑기스 분말 또는 상기 조립물을 그대로 하드 캡슐이나 소프트 캡슐에 충전하여 섭취해도 된다.
(시험) 악티게닌의 효소 변환 유효성 시험
추출 공정의 효소 반응 공정(냉침 추출)에 있어서, 악티인이 악티게닌으로 효소 변환되어 있는지의 여부를 평가했다.
[비교예 1]
우엉열매 조말(粗末 : 입자가 굵은분말)(18호체통과) 0.1 g을 취하고, 50 % 에탄올 50 mL를 가하여 1시간 가열한 후, 여과한다.
[시험예 1]
우엉열매 조말(18호체통과) 0.1 g을 취하고, 물 25 mL를 가하여 흔들어 섞어 실온(20 ℃)에 1시간 방치한 후, 에탄올 25 mL를 가하고 여과한다.
시험예 1과 비교예 1에서 얻은 농축액을 이하의 분석 조건으로 HPLC법으로 측정하였다.
[악티게닌 함량 측정 방법]
칼럼: YMC-Pack ProC18 AS-307-3(3 ㎛, 4.6 mmID * 7.5 cm)
칼럼 온도: 30 ℃
검출: UV280 nm(상단), UV230 nm(하단)
유량: 0.8 mL/min
주입량: 5, 10 μL
이동상: A액/0. 05 M 인산이수소나트륨 용액 : 아세트니트릴 혼액(5 : 1),
B액/0. 05M 인산이수소나트륨 용액: 아세트니트릴 혼액(1 : 1)
gradient 조건 : 0~10 min/B액 20%, 10~25 min/B액 40%
[비교예 1] 표 1에 나타내는 바와 같이, 원료 생약 중의 악티인 및 악티게닌의 함량은 각각 6.88 중량% 및 0.58 중량%로 악티게닌/악티인 함량비(이하, AG/A라고 한다)=0.08이었다.
[시험예 1] 표 1에 나타내는 바와 같이, 악티인 및 악티게닌 함량은 각각 0.15 중량% 및 3.80 중량%로, AG/A비=25.33이고, 악티게닌 함량은 분명하게 상승했다. 또 도 1에 나타내는 바와 같이 원료 생약 중의 악티인은 대략 정량적으로 악티게닌으로 변환했다.
원료생약의 입도 산소변환처리 악티인 함량
(중량%)		 악티게닌 함량
(중량%%)		 AG/A비
비교예 1 조말 없음 6.88 0.58 0.08
시험예 1 조말 있음(22 ℃) 0.15 3.80 25.33
실시예
[실시예 1] (조각, 냉침추출에 의한 우엉열매 엑기스의 제조)
우엉열매 세절 300 g을 물(22 ℃) 1.5 L에 가하여 1시간 교반한 후, 다시 1시간 가열환류한다. 마찬가지로 여과하여 물 0.5 L로 세정하여 배합한 추출액(1.5 L)을 동결건조했다.
표 2에 나타내는 바와 같이, 생약 조각을 냉침추출한 엑기스는 악티인 및 악티게닌 함량이 각각 10.1 중량% 및 4.8 중량%이고 AG/A비=0.48이었다.
[실시예 2] (조각, 냉침추출, 에탄올 첨가에 의한 우엉열매 엑기스의 제조)
우엉열매 세절 200 g를 물(22 ℃) 1 L에 가하여 1시간 교반한 후, 에탄올 0.45 L를 가하고, 다시 1시간 가열환류한다. 거즈 4장(철망 1070 mesh)으로 여과하고, 30 % 에탄올 0.5 L로 세정하여 배합한 추출액(1.5 L)을 동결건조했다.
표 2에 나타내는 바와 같이, 생약 조각을 냉침추출한 엑기스는 악티인 및 악티게닌 함량이 각각 13.3 중량% 및 11.4 중량%이고 AG/A비=0.86이었다. 실시예 1보다 악티게닌 함량이 큰 폭으로 상승한 것은 에탄올 첨가에 의해 악티게닌을 용해할 수 있었기 때문이라고 추측할 수 있다.
[실시예 3~6] (중간 스케일, 분무 건조에 의한 우엉열매 엑기스의 제조)
우엉열매 세절 2 kg을 물(37 ℃) 14 L에 가하여 1시간 교반한 후, 에탄올 6L를 가하여 다시 1시간 가열환류한다. 이 액을 원심분리하여 얻어진 추출액 약 16 L를 감압 농축하고, 엑기스 고형분에 대해 덱스트린 0~50 %를 가하여 분무 건조했다.
악티게닌은 물에 쉽게 녹지 않기 때문에, 분무 건조 공정에서 부착에 의한 손실이 크고, 엑기스 수율이 5 %로 저하되었다. (실시예 3)
이 때문에, 덱스트린을 첨가(실시예 3~6)함으로써 기계로의 부착이 방지되고 유동성이 뛰어난 분무 건조 엑기스를 조제할 수 있었다. 엑기스 수율은 5 %에서20 % 정도로 향상되었다.
첨가량으로서 농축액의 고형분에 대해 20 % 정도의 첨가가 바람직하다.
[실시예 7] (중간 스케일, 분무 건조에 의한 우엉열매 엑기스의 제조)
우엉열매 세절 2 kg을 물(22 ℃) 14 L에 가하여 1시간 교반한 후, 에탄올 6L를 가하여 다시 1시간 가열환류한다. 이 액을 원심분리하여 얻어진 추출액 약 16 L를 감압농축하고, 엑기스 고형분에 대해 덱스트린 20 %를 가하여 분무 건조했다.
악티인 및 악티게닌 함량은 각각 7.1 중량% 및 6.3 중량%이고 AG/A비=0.89가 되어, 실험실에서의 결과를 재현할 수 있어 대량의 엑기스를 얻을 수 있었다.
[실시예 8] (공업 스케일, 분무 건조에 의한 우엉열매 엑기스의 제조)
우엉열매 세절 80 kg을 30 ℃로 보온한 물 560 L에 가하여 30분간 교반한 후, 에탄올 265 L를 가하여 85 ℃로 승온하고, 30분간 더 가열 추출했다. 이 액을 원심분리하여 얻어진 추출액을 얻었다. 이 조작을 2회 반복해 얻어진 추출액을 합하여 감압 농축하고, 엑기스 고형분에 대해 덱스트린 20 %를 가하여 분무 건조했다.
악티인 및 악티게닌 함량은 각각 6.8 중량% 및 5.9 중량%이고 AG/A비=0.87이 되어 중간 스케일에서의 결과를 재현할 수 있어 31.5 kg의 엑기스 분말(덱스트린 20 % 함유)을 얻을 수 있었다.
[비교예 2] (조각, 열수추출에 의한 우엉열매 엑기스의 제조)
우엉열매 세절(8.6호 통과) 300 g을 열수(80 ℃) 1.5 L에 가하여 1시간 가열환류한 후, 뜨거울 때 거즈 4매(철망 100 mesh)로 여과했다. 물 0.5 L로 세정하여 배합한 추출액(1.4 L)을 동결건조했다.
본 원료 생약을 통상적으로 행해지는 물을 추출 용매로 하고, 가열 추출하여 얻어진 열수 추출 엑기스 중의 악티인 및 악티게닌 함량은 각각 29.2 중량% 및 0.92 중량%이고 AG/A비 0.03이었다. AG/A비율이 더욱 작아져 있기 때문에 악티게닌은 엑기스로 이행하기 어려운 것을 확인할 수 있었다.
원료생약의 입도 산소변환
처리		 에탄올추출 덱스트린
첨가		 엑기스 수율(%) 악티인
함량
(중량%)		 악티게닌함량
(중량%)		 AG/A비
실시예 1 세절 있음(22℃) 없음 없음 10.9 10.1 4.8 0.48
실시예 2 세절 있음(22℃) 있음 없음 19.1 13.3 11.4 0.86
실시예 3 세절 있음(37℃) 있음 없음 5.0 6.3 11.2 1.78
실시예 4 세절 있음(37℃) 있음 있음(15%) 17.1 4.3 11.5 2.67
실시예 5 세절 있음(37℃) 있음 있음(25%) 19.6 4.0 10.7 2.68
실시예 6 세절 있음(37℃) 있음 있음(50%) 21.0 2.7 10.8 4.00
실시예 7 세절 있음(22℃) 있음 있음(20%) 19.0 7.1 6.3 0.89
실시예 8 세절 있음(30℃) 있음 있음(20%) 15.8 6.8 5.9 0.87
비교예 2 세절 없음 없음 없음 11.3 29.2 0.9 0.03
[실시예 9] (우엉열매 엑기스 분말 배합 과립제)
(1) 실시예 8의 우엉열매 엑기스 분말 33.3 중량%
(2) 유당 65.2 중량%
(3) 히드록시 프로필 셀룰로오스 1.5 중량%
합계 100 중량%
(제조방법)
「일국」제제 총칙, 과립제 항에 준하여 과립제를 제조한다. 즉 상기 표에 기재된 우엉열매 엑기스 분말로부터 히드록시 프로필 셀룰로오스까지의 성분을 취하고 과립상태로 제조하여, 이것을 1.5 g씩 알루미라미네이트 필름으로 충전하여 1포당 우엉열매 엑기스 분말을 0.5 g 함유하는 실시예 9의 과립제를 얻었다.
[실시예 10] (우엉열매 엑기스 분말 배합 정제)
(1) 실시예 8의 우엉열매 엑기스 분말 37.0 중량%
(2) 결정 셀룰로오스 45.1 중량%
(3) 카르메로스칼슘 10.0 중량%
(4) 크로스포피돈 3.5 중량%
(5) 함수이산화규소 3.4 중량%
(6) 스테아린산마그네슘 1.0 중량%
합계 100 중량%
(제조방법)
「일국」제제 총칙, 정제의 항에 준하여 정제를 제조한다. 즉 상기의 표에 기재된 우엉열매 엑기스 분말로부터 스테아린산마그네슘까지의 성분을 취하여 실시예 10의 정제를 얻었다.
[시험예 2] (배양 세포를 이용한 세포 독성의 평가)
(시험 방법)
췌장암 세포주 CAPAN-1, PANC-1 및 PSN-1을 96공 플레이트에 파종하고 통상 영양상태의 DMEM 배지 중에서 37 ℃, 5 % CO2/95 % Air로 24시간 전배양했다. 세포를 PBS로 세정한 후, 통상 영양상태의 DMEM 배지(그래프중 : 말미가 D) 및 영양 기아 배지인 NDM 배지(그래프중 : 말미가 I)에 추출 방법이 다른 엑기스(그래프중10 : 실시예 2 및 비교예 2)를 악티게닌 농도를 일정하게 하여 첨가한 것을 각 웰에 가하여 24시간 인큐베이션했다. 세포를 다시 PBS로 세정하고, 10 % WST-8을 포함한 DMEM 배지 100 μL를 가하여 2시간 반응시키고 마이크로 플레이트 리더로 450 nm의 흡광도를 측정하여 세포의 생존 상태를 평가했다.
평가 결과, 우엉열매 엑기스는, 도 2~4에 나타내는 바와 같이, 영양 기아 배지 중의 췌장암 세포주에 대해 모두 현저한 선택적 세포 독성을 나타냈다. 또, 그 효과는 엑기스에 있어서도 악티게닌의 농도에 의존한, 정제 악티게닌과 동등한 항종양 효과를 가지는 것이 밝혀졌다. 또, 악티게닌(그래프중 : AG)의 전구체인 악티인(그래프중 : A) 에는 어떤 조건에서도 항종양성은 보이지 않았다.
[시험예 3] (종양 모델 동물에 있어서의 항종양성의 평가)
(시험 방법)
종양 모델 동물은, 도너가 되는 누드 마우스(BALB-cAJnu/nu ; 일본 쿠레아)의 등피부 아래에 인간 췌장암 세포주 CAPAN-1 혹은, PSN-1을 파종하여, 얻어진 도너 마우스의 종양덩어리를 레시피언트 마우스의 등 피부 아래에 이식함으로써 제작했다. 악티게닌(AG), 악티인(A) 및 우엉열매 엑기스(실시예 2)는 DMSO에 10 mg/ml의 농도로 용해한 것을 생리식염수로 희석하고, 마우스 1마리당 50 ㎍을 1주일에 5회, 위 내에 경구투여했다. 항종양성은 등 피부 아래의 종양덩어리의 사이즈를 시간 경과에 따라 계측함으로써 평가했다.
투여 개시 후 1개월에서 컨트롤에 비해 약제 투여군에게 현저한 종양의 증식 억제 효과가 인정되었다. 또, 정제 악티게닌의 투여군에 있어서도 항종양 효과를 얻을 수 있었지만, 전구체인 악티인을 함께 포함한 우엉열매 엑기스(실시예 2) 쪽이 보다 강한 항종양 효과를 볼 수 있었다(도 5, 6).
[시험예 4] (혈중농도)
(시험 방법)
정상 남성 자원봉사 1명을 대상으로 실시예 9의 과립제 2포(우엉열매 엑기스 분말 1 g)를 복용 후, 경시(經時)적(복용전 30분), 0.5시간, 1시간, 1.5시간, 2시간, 3시간, 4시간, 7시간, 24시간)으로 정맥으로부터 약 5 mL의 혈액을 채취하여 혈장 샘플을 얻었다. 이와 같이 하여 얻어진 혈장 샘플 500 μL에 0.1 mol/L 인산이수소나트륨 용액 500 μL 및 내표준 용액(IS) 100 μL를 가했다. 이것을 시험관으로 옮겨 에탄올 6 mL를 가하여 흔들어 섞은 후, 원심분리하여 에탄올층을 취하고 감압하에서 건고(乾固: 건조해서 굳게) 하고, 잔류물에 70% 아세트니트릴 250 μL를 가하여 시료 용액으로 했다. 이것을 이하의 조건을 이용한 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)법에 따라 측정하고, 내표준 물질에 대한 피크 높이비로부터 악티게닌(AG)과 악티게닌의 글루크로산 포합체(AGG)의 농도를 각각 산출했다.
(HPLC 조건)
칼럼: YMC-pack ODS-A-312
이동상: 0.2 % 인산 함유의 0.1 mol/L 인산에 수소 나트륨용액/아세트니트릴 혼액(73.5: 26.5)
칼럼 온도 : 40 ℃
유량 : 1.0 mL/min
검출 : UV210 nm
주입량 : 10 μL
내표준 용액
4-히드록시 안식향산이소프로필 10 mg를 50 % 에탄올에 녹여 50 mL로 하고, 이 액 1 mL에 50 % 에탄올을 가하여 100 mL로 하고 내표준 용액으로 한다.
(시험 결과)
인간혈장 중의 AG 및 AGG의 농도 추이를 각각 도 7 및 도 8에 나타냈다. 도 7 및 도 8에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 우엉열매 엑기스 분말의 복용에 의해, 혈중에 검출되는 주요 성분은 AGG였다. AG농도(CAG)는 1시간과 2시간에 2봉성의 피크가 검출되고 최대 농도(Cmax)는 0.15 ㎍/mL였다. 또, 혈중으로부터의 소실이 완만하기 때문에 장-간순환에 의한 영향이 있는 것을 생각할 수 있다. AGG의 혈중농도(CAGG)는 1.5시간에 피크가 인정되고, Cmax는 10.7 ㎍/mL였다. 또, 24시간 후에 있어서도 3.6 ㎍/mL와 혈중으로부터의 소실은 완만하고, 마찬가지로 장-간순환에 의한 영향을 생각할 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 우엉열매 엑기스 분말의 복용에 의해, 혈중에 장시간 AG 및 AGG 농도가 유지되기 때문에 생체 내에서의 효과를 기대할 수 있다.

Claims (10)

  1. 삭제
  2. 우엉열매에 내재하는 β-글루코시다제에 의해 악티인을 악티게닌으로 효소 변환하여 추출하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법.
  3. 제 2 항에 있어서,
    악티인을 악티게닌으로 효소 변환한 후, 에탄올을 가하여 추출하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법.
  4. 제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,
    추출 후 농축하고 동결건조 또는 분무 건조하여 제조하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법.
  5. 제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,
    추출 후 농축하고 덱스트린을 첨가하여 분무 건조하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법.
  6. 제 4 항에 있어서,
    추출 후 농축하고 덱스트린을 첨가하여 분무 건조하는 것을 특징으로 하는 악티게닌 고함유 우엉열매 엑기스의 제조방법.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
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