KR101334887B1 - 고삼 추출물을 함유하는 숙취 예방 또는 해소용 조성물 - Google Patents
고삼 추출물을 함유하는 숙취 예방 또는 해소용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
고삼 (Sophora flavescens) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알코올성 숙취 예방 또는 숙취 해소용 약학 조성물; 고삼 (Sophora flavescens) 추출물을 포함하는 숙취 해소용 식품 조성물; 및 알코올 대사 활성화 작용이 우수한 고삼 추출물의 분획물의 제조 방법이 제공된다.
Description
본 발명은 알코올 탈수소효소(ADH) 및 아세트알데히드 탈수소효소(ALDH) 활성화 및 숙취해소를 위한 혈중 알코올 제거작용을 갖는 고삼 추출물 또는 이로부터 제조된 고삼 추출물의 분획물을 함유하는 알코올성 숙취 예방 및/또는 숙취 해소용 조성물에 관한 것이다.
우리나라 음주 문화에서 잦은 음주와 과음으로 많은 사람이 숙취를 제거할 수 있는 약물 또는 음료에 높은 관심을 보이고 있다.
숙취는 술을 마신 후에 나타나는 두통, 설사, 식욕부진, 오심, 구토, 오한, 식은땀 등의 증상을 뜻하며, 객관적인 증상으로는 인식, 운동능력 저하, 혈액학적 변화 및 호르몬의 변화를 일컫는다. 숙취의 원인은 탈수, 알코올 및 알코올 대사물(아세트알데히드, 포름알데히드, 아세톤 등)의 독성, 흡수 장애에 의한 영양소 결핍(혈당, 비타민, 무기질 결핍) 등인 것으로 알려져 있다. 숙취 정도는 유전에 따른 개인의 편차, 환경상태(영양 상태, 운동 상태, 탈수 정도, 건강 상태)에 따라 정도의 차이가 매우 심하다 (권 등, 한국응용약물학회지, 2005, 13, 107).
음주 후 알코올은 3가지 경로를 통해 대사되는데, 에탄올의 농도가 낮을 때는 위장관 또는 간에 존재하는 알코올 탈수소효소(Alcohol dehydrogenase)와 아세트알데히드탈수소효소(Acetaldehyde dehydrogenase)의 작용에 의해, 에탄올의 농도가 높을 때는 소포체에 존재하는 마이크로좀 에탄올 산화체계(MEOS: Microsomal ethanol oxidizing system)에 의해 아세트알데히드와 아세트산으로 대사되며, 이후 퍼옥시좀(peroxisome)에 존재하는 카탈라제(catalase)의 작용 등을 거쳐 이산화탄소(CO2)와 물(H2O)로 최종 분해된다. 적당량의 알코올이 유입되면 상기 기술한 대사체계가 원활하게 작용하여 알코올 때문에 일어나는 제반 증상이 일어나지 않지만, 다량의 알코올 유입 시 대사체계의 균형이 파괴되어 생체 항상성을 유지하지 못하게 되어 단기적으로는 두통 또는 두중감, 집중력 감퇴, 속쓰림 및 소화불량 등이 초래되고 장기적으로는 간 기능 장애가 발생할 수 있다.
현재 시판 숙취해소용 드링크는 자리, 황기, 연꽃씨(Lotus seed), 쌀 배아 및 헛개나무 추출물 등을 사용한 컨디션(CJ사), 미배아대두발효추출액 및 밀크씨슬 추출분말 성분을 주원료로 한 모닝케어(동아제약), 오리나무, 마가목 추출물을 사용한 여명808(그래미)등을 중심으로 다수의 음료가 시판되고 있다.
고삼(Sophora flavescens Aiton)은 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 여러해살이풀로서 도둑놈의지팡이, 너삼, 또는 뱀의정자나무라고도 한다. 양지 바른 풀밭에서 자란다. 높이 80∼100cm로 녹색이지만 어릴 때는 검은빛을 띤다. 줄기는 곧고 잎은 어긋나며 홀수깃꼴겹잎이다. 작은잎은 15∼40개이고 긴 타원형 또는 긴 달걀 모양이며 길이 2∼4cm, 나비 7∼15mm이다. 잎자루가 길며 가장자리는 밋밋하다. 6∼8월에 가지 끝에 20cm 정도의 꽃줄기가 나와 나비 모양의 연한 노란색 꽃이 총상꽃차례로 핀다. 꽃 길이는 15∼18mm이다. 꽃받침은 통처럼 생겼고 겉에 털이 나며 끝이 5개로 얕게 갈라진다. 열매는 협과로 염주 모양이다. 짧은 대가 있으며 길이 7∼8cm로 9∼10월에 익는다. 한방에서는 뿌리를 말린 것을 고삼이라 하는데, 대한약전에 기재되어 있는 생약으로서 맛이 쓰고 인삼의 효능이 있어 소화불량·신경통·간염·황달·치질 등에 처방한다. 민간에서는 줄기나 잎을 달여서 살충제로 쓰기도 한다. 같은 속의 식물로 산두근(山豆根)이 있는데 생김새가 매우 비슷하다. 한국·일본·중국·시베리아 등지에 분포한다.
고삼은 플라보노이드(flavonoid) 및 알칼로이드(alkaloid) 성분을 주로 함유하고 있으며 신경보호작용 (Park, S.-J. et al , Phytomedicine (2009), 16(11), 1042-1051)과 글루코시다아제 억제효과 (Kim, J.-H. et al , Biological & pharmaceutical bulletin (2006), 29(2), 302-5)에 관한 연구결과가 보고되었다. 그리고 고삼의 플라보노이드 분획에서 항염증 및 관절염에 대한 효능(Jin 등, Journal of ethnopharmacology, 2010, 123, 589)과 항균효과 (Zheng 등 Wuhan Daxue Xuebao, Lixueban , 2008, 54, 439), 그리고 에스트로겐 유사활성 및 항암활성이 보고되었다 (De Naeyer 등, Journal of natural products, 2004, 67, 1829).
상기한 연구보고를 포함하여 고삼 추출물 및 이로부터 분리된 화합물들의 다양한 생리활성이 보고되어 있으나, 고삼 또는 고삼 추출물의 알코올 대사 효소 및 숙취해소 관련 생리활성에 대한 보고는 전무하다.
본 발명자들은 고삼으로부터 유래된 추출물이 혈중 알코올 농도를 감소시키며, 고삼 추출물로부터 제조된 분획물 중 초산에틸 분획물과 이염화메탄 분획물이 알코올 탈수소효소와 아세트알데히드탈수소효소의 활성을 증가시켜 알코올 대사를 촉진함으로써 숙취해소에 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 일례는 고삼(Sophora flavescens)의 추출물, 상기 추출물의 건조물 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 알코올성 숙취 예방 및/또는 숙취 해소용 조성물을 제공한다.
또 다른 예는 본 발명의 다른 목적은 숙취 예방 및/또는 숙취해소 작용이 최적화된 고삼 추출물의 분획물 및 이의 제조 방법을 제공한다.
본 발명자들은 대한약전에 등재되어 있는 전통적으로 임상에서 의약적 용도로 식용되던 생약인 고삼(Sophora flavescens)의 추출물이 알코올을 투여한 레트에 대한 고삼추출물의 혈중 알코올 농도 저감 촉진 작용과 알코올에 의한 간 손상 측정 인자인 글루탐산 옥살로아세트산 트랜스아미나아제(GOT)의 저하 효과를 가짐을 확인하고, 고삼 추출물로부터 유래된 초산에틸 분획물과 이염화메탄 분획물이이 현저한 생체 내 알코올 대사작용에 중요한 역할을 하는 알코올 탈수소효소 (ADH) 및 아세트알데히드탈수소효소(ALDH)의 활성을 증가시키는 효과를 갖고, 생체 내 알코올 대사를 촉진하여 주류 섭취를 통하여 증가된 혈중 알코올 농도와 아세트알데히드 농도를 감소시킬 수 있음을 증명하여, 고삼의 추출물 또는 고삼 추출물로부터 제조된 분획물이 알코올성 숙취 예방 및/또는 숙취 해소를 위한 용도로 효과적으로 사용될 수 있음을 제시한다.
우선, 본 발명은 고삼 추출물, 상기 추출물의 건조물 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 알코올성 숙취 예방 및/또는 숙취 해소용 약학 조성물들 제공한다.
본 발명의 일 실험예에서는 고삼을 알코올과 물의 8:2부피비로 혼합한 용액으로 제조한 추출물을 레트에 경구투여한 후 알코올을 경구투여 한 결과, 혈중 알코올 농도 (실험예 1 참조)및 GOT (Glutamate-Oxaloacetate Transaminase) 수치(실험예 2 참조)가 감소됨을 확인하였다. 또 다른 실험예에서는 고삼 추출물로부터 조제된 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올 및 물 분획물의 알코올 탈수소효소와 아세트알데히드 탈수소효소에 대한 효과를 측정한 결과 초산에틸 분획이 알코올 탈수소효소(실험예 3 참조) 및 아세트알데히드 탈수소효소의(실험예 4 참조) 활성을 증가시키는 효과가 가장 현저함을 확인하였다.
본 발명에 있어서 '고삼 추출물'은 조추출물과 조추출물을 용매분획하여 얻어진 분획물을 모두 포함하는 개념으로 사용된다.
따라서, 본 발명의 약학 조성물의 유효성분인 상기 고삼 추출물은
고삼을 물, C1 내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 이염화메탄, 초산에틸, 아세톤 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출용매로 추출하여 얻어진 고삼 조추출물; 및
보다 우수한 숙취해소 작용을 얻기 위하여, 상기 고삼 조추출물에 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올, 물 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획용매를 첨가하여 용매 분획하여 얻어진 고삼 분획물
로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 것일 수 있다.
상기 고삼(Sophora flavescens)은 야생 또는 재배된 것일 수 있으며, 특히 고삼은 Sophora flavescens의 뿌리를 칭하나 상기 고삼의 추출물 제조에 있어서 뿌리뿐만 아니라 뿌리를 포함하는 전초도 사용할 수 있으며, 건조되거나 건조되지 않은 상태로 사용 가능하다.
상기 고삼 조추출물을 얻기 위한 추출 용매의 사용량은, 충분하고 효과적인 유효 성분 추출을 위하여, 고삼의 중량 기준으로 1내지 30배 부피배 (예컨대, 고삼 1g에 대하여 1 내지 30mL의 용매 사용), 바람직하게는 2 내지 10 부피배일 수 있다.
추출 시간은, 이에 한정되지 않지만, 유효성분의 충분한 추출을 위하여 1 내지 12시간, 바람직하게는 3 내지 6시간으로 할 수 있다. 추출 온도는 이에 한정되지 않지만, 유효성분의 효과적인 추출을 위하여, 실온 내지 추출용매의 끓는점까지로 할 수 있다.
본 발명의 추출물을 얻기 위한 추출방법은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상적으로 사용되는 공지된 추출방법에 따라 제조될 수 있다. 구체적으로 냉침법, 가열 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 가압추출법, 환류추출법, 초임계 추출법, 전기적 추출법 등 통상적으로 사용되는 추출법을 사용할 수 있다.
상기 고삼 분획물은 상기와 같이 얻어진 고삼 조추출물에 분획 용매를 가하여 분획하여 얻어진 것을 의미하며; 예컨대, 상기 얻어진 고삼 조추출물을 물에 현탁한 후, 얻어진 현탁액에 물과 동부피의 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획 용매를 가하여 분획하여 얻어지거나; 및/또는 상기 얻어진 고삼 조추출물에 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올, 물 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획 용매를 가하여 용매 분획하여 얻어진 것일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 고삼 분획물은 상기 얻어진 고삼 조추출물을 조추출물 고형분 중량(건조 중량)을 기준으로 5 내지 40배 부피배, 바람직하게는 10 내지 30배 부피배의 물에 현탁한 후, 얻어진 현탁액에 물과 동부피의 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획 용매를 가하여 분획하여 얻어지거나; 다른 구체예에서, 상기 얻어진 고삼 조추출물에 조추출물 고형분 중량(건조 중량)을 기준으로 1 내지 30배 부피배, 바람직하게는 2 내지 10배 부피배의 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올, 물 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획 용매를 가하여 용매 분획하여 얻어진 것일 수 있다.
상기 분획 용매로서 2종 이상을 사용하는 경우, 상기 고삼 분획물은 2종 이상의 분획 용매를 상기 기재된 순서에 따라 사용하여 용매 분획을 수행하여 얻어진 각각의 용매 분획물일 수 있다.
또한, 필요한 경우 상기 추출 및/또는 분획 후, 당업계에 공지된 여과 및/또는 농축 및/또는 동결건조 방법을 추가적으로 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용된 추출물(조추출물 및/또는 분획물)의 건조물 또는 농축물은 상기와 같이 공지된 방법으로 건조 또는 농축된 것을 의미한다.
본 발명에 따른 조성물 내의 유효성분으로서 고삼 추출물(조추출물 및/또는 분획물)의 함량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 고형분 중량 기준으로 0.001 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 '고형분 중량'은 조추출물 또는 분획물 중 용매 성분을 제거하고 남은 성분의 중량을 말한다.
본 발명의 약학적 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 알코올성 숙취해소 조성물은 고삼의 추출물(조추출물 및/또는 분획물) 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제 등의 보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 고삼 추출물 또는 이로부터 제조된 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 경피제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 인간에게 단독으로 투여될 수 있으나, 일반적으로 투여방식과 표준 약제학적 관행(standard phamaceutical practice)을 고려하여 선택된 약제학적 담체와 혼합되어 투여될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약학적 조성물은 전분 또는 락토오즈를 함유하는 정제 형태로, 또는 단독 또는 부형제를 함유하는 캡슐 형태로, 또는 맛을 내거나 색을 띄게 하는 화학 약품을 함유하는 엘릭시르 또는 현탁제 형태로 경구, 구강내 또는 혀밑 투여될 수 있다. 이러한 액체 제제는 현탁제(예를 들면, 메틸셀룰로오즈, 위텝솔(witepsol)과 같은 반합성 글리세라이드 또는 행인유(apricot kernel oil)와 PEG-6 에스테르의 혼합물 또는 PEG-8과 카프릴릭/카프릭 글리세라이드의 혼합물과 같은 글리세라이드 혼합물)와 같은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 제형화될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 고삼의 추출물, 상기 추출물의 건조물, 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 숙취 예방 및/또는 해소용 식품 조성물을 제공한다. 상기한 바와 같이, 상기 고삼 추출물은 고삼 조추출물과 상기 조추출물로부터 분획된 고삼 분획물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이며, 고삼 조추출물 및 고삼 분획물은 상기에 설명한 바와 같다.
본 발명에서의 식품은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 통상적인 의미로서, 각종 식품, 건강기능 식품, 음료, 식품 첨가제, 및 음료 첨가제를 모두 포함하는 의미로 사용되며, 식품 조성물을 상기 식품을 제조하기 위한 재료의 조합을 의미한다. 상기 식품의 예로서 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 과자류(예, 스넥류), 기타 가공식품, 음료, 건강기능음료(예컨대, 숙취해소 음료 등), 및 그 밖의 건강보조식품류를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 건강기능식품, 음료, 식품첨가제 또는 음료첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
상기 식품 조성물 내의 고삼 추출물 또는 분획물의 함량은 식품사용 형태, 목적 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 고형분 중량 기준으로 0.00001 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
또 다른 측면에서 알코올 대사 활성화 작용 및/또는 숙취해소 작용이 우수한 고삼 추출물의 제조 방법이 제공된다. 상기 제조 방법은
1) 고삼에 물, C1내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 이염화메탄, 초산에틸, 아세톤 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 추출하여 고삼 조추출물을 얻는 단계; 및
2) 상기 얻어진 고삼 조추출물에 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올, 물 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용액을 가하여 용매 분획하여 고삼 분획물을 제조하는 단계
를 포함할 수 있다.
상기 추출하는 단계 1)은 고삼에 물과 C1내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올(예컨대, 에탄올)이 부피기준으로 1:9 내지 5:5 (예컨대 약 2:8)의 혼합비로 혼합된 혼합액, 또는 C1내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올(예컨대, 에탄올)을 가하여 수행되는 것일 수 있다.
또한, 상기 추출 단계는 1회 수행되거나, 2회 이상, 예컨대 2회 또는 3회 반복 수행되어 각 추출 단계에서 얻어진 여액을 합하여 고삼의 조추출물을 얻을 수 있다.
예컨대, 상기 추출하는 단계 1)은
1-1) 건조된 고삼에 물과 C1내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올(예컨대, 에탄올)이 부피기준으로 1:9 내지 5:5의 혼합비로 혼합된 혼합액, 또는 C1내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올(예컨대, 에탄올)을 가하여 추출하고, 여과하여 여액을 얻는 단계; 및
1-2) 상기 단계 1-1)에서 얻어진 여액을 농축하여 조추출물 농축액 또는 조추출물의 건조물을 조제하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 추출은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상적으로 사용되는 공지된 모든 방법에 따라 제조될 수 있으며, 예컨대, 냉침법, 가열 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 가압추출법, 환류추출법, 초임계 추출법, 전기적 추출법 등 통상적으로 사용되는 추출법에 의하여 수행될 수 있다.
또 다른 예에서, 상기 분획하는 단계 2)는,
2-1) 상기 단계 1)에서 얻어진 고삼 추출물을 추출물 고형분 중량(건조 중량)을 기준으로 5 내지 40배 부피배, 바람직하게는 10 내지 30배 부피배의 물에 현탁하는 단계; 및
2-2) 상기 단계 2-1)에서 얻어진 고삼 추출물의 물 현탁액에 물과 동일한 부피의 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하고 혼합한 후 분획하는 단계; 및
2-3) 상기 단계 2-2)에서 얻어진 분획물을 농축 및/또는 건조하여 하여 분획물의 농축액 또는 분획물의 건조물을 조제하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
또 다른 예에서, 상기 분획하는 단계 2)는
2-1') 상기 단계 1)에서 얻어진 고삼 조추출물에 조추출물 고형분 중량(건조 중량)을 기준으로 1 내지 30배 부피배, 바람직하게는 5 내지 10배 부피배의 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 부탄올, 물 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 분획하는 단계; 및
2-2') 상기 단계 2-1')에서 얻어진 분획물을 농축 및/또는 건조하여 하여 분획물의 농축액 또는 분획물의 건조물을 조제하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 단계 2-1) 또는 2-1')의 분획 단계는 하나의 용매를 사용하여 단일 과정으로 진행되거나, 2 이상의 용매를 선택하여 상기 기재 순서에 따라서 차례로 사용하여 각 용매에 용해된 부분을 취하고, 잔존하는 부분에 다음 차례의 용매를 가하여 다단계로 진행될 수 있으며, 각 분획 용매로 1회 수행되거나, 2회 이상, 예컨대 2회 또는 3회 반복 수행되고 각 분획 단계에서 얻어진 분획물을 합하여 진행될 수 있다. 또한 분획 용매로서 2 이상의 용매를 순차적으로 사용하는 경우, 상기 단계 2-2) 또는 2-2')의 농축 및/또는 건조 단계는 상기 분획단계에서 순차적으로 취한 여액에 대하여 수행될 수 있다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명에서의 고삼은 대한약전에 기재되어 안전성이 입증된 국내 전통생약이며, 고삼의 추출물은 알코올을 투여한 레트에서 혈중 알코올 농도의 감소를 촉진하고 GOT 수치를 감소시킬 수 있으며, 고삼의 추출물로부터 제조한 분획물은 알코올 탈수소효소와 아세트알데히드 탈수소효소의 활성도를 증가시켜 고삼의 추출물 또는 이로부터 제조된 고삼 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 생체 알코올 대사 활성화 및/또는 숙취해소에 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 <실시예 1>로부터 제조된 고삼 조추출물을(KNA32) 알코올을 미리 경구투여한 레트에 세가지의 다른 용량으로 투여한 후 시간별 혈중 알코올 농도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 제조된 고삼 조추출물을(KNA32) 알코올을 미리 경구투여한 레트에 세가지의 다른 용량으로 투여한 후 혈중 GOT 농도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 <실시예 2>로부터 제조된 고삼 조추출물의(KNA32) 분획물들의 첨가 농도에 따른 알코올 탈수소효소의 활성 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 <실시예 2>로부터 제조된 고삼 조추출물의(KNA32) 분획물들의 첨가 농도에 따른 아세트알데히드 탈수소효소의 활성 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 제조된 고삼 조추출물을(KNA32) 알코올을 미리 경구투여한 레트에 세가지의 다른 용량으로 투여한 후 혈중 GOT 농도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 <실시예 2>로부터 제조된 고삼 조추출물의(KNA32) 분획물들의 첨가 농도에 따른 알코올 탈수소효소의 활성 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 <실시예 2>로부터 제조된 고삼 조추출물의(KNA32) 분획물들의 첨가 농도에 따른 아세트알데히드 탈수소효소의 활성 변화를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
1>
고삼
추출물의 제조
건조된 고삼 뿌리 (경북영천 채집) 0.5kg을 세절하여 추출병에 넣고 에탄올과 물이 8:2의 부피비로 혼합된 80%(v/v) EtOH 수용액 1.25L (시료중량 대비 2.5부피배)을 가하여 침지하고 3시간 동안 환류 추출한 후 여과지를 이용하여 여과하였다. 상기 추출액(여액)을 용액이 완전히 증발할 때까지 감압 하에 30℃에서 농축기를 사용하여 농축함으로써, 고삼 조추출물(이하 'KNA32'이라고 함) 75g을 얻었다.
<
실시예
2>
고삼추출물로부터
분획물의
제조
상기 <실시예 1>에서 제조된 고삼 조추출물 KNA32 75g을 물 1.5L에 현탁한 후, 이염화메탄, 초산에틸 및 부탄올 각 1.5L를 각각 2회씩 차례로 가하여 용매 분획하고 상기 분획액의 용액이 완전히 증발할 때까지 감압하에 30℃에서 농축기를 사용하여 농축함으로써, 이염화메탄에 용해되었던 이염화메탄 분획물 6.4g (이하 'KNA32 MC'라고 함), 초산에틸에 용해되었던 초산에틸 분획물 10.4g (이하 'KNA32 EA'라고 함), 부탄올에 용해되었던 부탄올 분획물 11.5g (이하 'KNA32 BuOH'라고 함), 및 잔존하는 물 분획물 46.3g (이하 'KNA32 Water'라고 함)을 수득하였다.
<
실험예
1> 에탄올 투여
레트에
대한 혈중 알코올농도
저감
효능 측정
상기 <실시예 1>에서 수득한 고삼 조추출물의 혈중 알코올 농도 저감 효능을 측정하기 위하여 실험동물로서 5 내지 6 주령(무게 140 g 내지 160 g)의 웅성 SD(Sprague Dawley)계 랫트(㈜오리엔트바이오, 성남, 대한민국)를 사용하였으며, 고형 사료와 수돗물을 자유 섭취케 하여 1주간 예비사육 후 시험에 사용하였다.
18시간 절식 후, 대조군에는 생리식염수를 투여하고, 실험군에는 실시예 1의 고삼 조추출물(KNA32)을 0.5, 1.0 및 1.5 g/kg/5ml 농도로 생리식염수에 현탁하여 각각 경구 투여하였다. 비교군 1 내지 2에는 시중에 판매하는 숙취해소음료 2종을 선정했으며(비교군 1: 헛개컨디션파워 (㈜CJ제일제당), 비교군 2: 모닝케어 (㈜동아제약)), 각각의 1회 권장 섭취량을 성인 1인의 기준 체중(70 kg)에 적용하여 이에 비례하는 투여 농도를 1가지씩 선정하고 생리식염수에 희석한 후 경구 투여하였다(투여 농도: 헛개컨디션파워 및 모닝케어 1.5 ml/kg).
30분 후, 상기 대조군, 실험군 (고삼 조추출물 0.5, 1.0 및 1.5 g/kg/5ml 투여) 및 비교군 1 내지 2에 알코올을 3 g/kg/10ml 농도로 경구 투여 후 0.5, 2.5 및 4.5 시간에 안와 및 심장에서 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 4℃, 10,000 rpm에서 10분간 원심분리를 수행하여 혈청을 분리하였다. 분리된 혈청은 0.7 M Perchloric acid와 동량으로 혼합한 후, 4℃, 700 g에서 10분간 원심분리를 수행하였고, 상등액을 완충 용액 I (Buffer Solution I; 0.4 M KOH, 0.13 M K2CO3, 0.5 M Tris) 0.5 부피배 (Volume)와 혼합하여 4℃에서 30분간 방치하였다. 4℃, 700 g에서 10분간 원심분리하여 단백질을 제거한 후 에탄올 측정 키트 (Roche, USA)를 이용하여 에탄올의 농도를 측정하여 도 1 및 표 1에 나타냈다.
구분 | 혈중 에탄올 농도 (%, v/v) | |||
0.5 시간 | 2.5 시간 | 4.5 시간 | ||
대조군 | 0.0016 | 0.0015 | 0.0017 | |
에탄올 투여군 | 0.0784 | 0.0709 | 0.0571 | |
비교군 1 | 0.0540 | 0.0414 | 0.0327 | |
비교군 2 | 0.0527 | 0.0437 | 0.0321 | |
KNA32 | 1.0 g/kg | 0.0231 | 0.0360 | 0.0390 |
1.5 g/kg | 0.0220 | 0.0226 | 0.0172 |
(대조군은 생리식염수 투여한 군이고, 에탄올 투여군은 생리식염수 투여한 대조군에 에탄올을 투여한 군임)
도 1 및 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 고삼 조추출물(KNA32)은 혈중 알코올 농도를 감소시키는 효능이 시중에 판매하는 숙취해소음료와 동등 이상임을 알 수 있다.
<
실험예
2> 글루탐산
옥살로아세트산
트랜스아미나아제 (
GOT
) 활성도 측정
상기 <실시예 1>에서 수득한 고삼 조추출물의 혈중 GOT 저감 효능을 측정하기 위하여 실험동물로서 5~6 주령(무게 140~160 g)의 웅성 SD(Sprague Dawley)계 랫트(㈜오리엔트바이오, 성남, 대한민국)를 사용하였으며, 고형 사료와 수돗물을 자유 섭취케 하여 1주간 예비사육 후 시험에 사용하였다.
18시간 절식 후, 대조군에는 생리식염수를 투여하고, 실험군에는 실시예 1의 고삼 조추출물(KNA32)을 0.5, 1.0 및 1.5 g/kg/5ml 농도로 생리식염수에 현탁하여 각각 경구 투여하였다. 비교군에는 시중에 판매하는 숙취해소음료 2종(비교군 1: 헛개컨디션파워 (㈜CJ제일제당), 비교군 2: 모닝케어 (㈜동아제약))을 선정했으며, 각각의 1회 권장 섭취량을 성인 1인의 기준 체중(70 kg)에 적용하여 이에 비례하는 투여 농도를 1가지씩 선정하고 (헛개컨디션파워 및 모닝케어 1.5 ml/kg), 생리식염수에 희석한 후 (5 ml/kg) 경구 투여하였다.
30분 후, 상기 대조군, 실험군 (고삼 조추출물 0.5, 1.0 및 1.5 g/kg/5ml 투여) 및 비교군 1 내지 2에 알코올을 3 g/kg/10ml 농도로 경구 투여 후 0.5, 2.5 및 4.5 시간에 안와 및 심장에서 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 4℃, 10,000 rpm에서 10분간 원심분리를 수행하여 혈청(시료 혈청)을 분리하였다. GOT의 활성 측정은 사전 예비 실험에서 수치가 가장 높게 나왔던 4.5 시간 때의 실험군 혈청을 GOT 측정 키트 (영동제약, 용인, 한국)를 이용하여 측정하였으며, 흡광도 340 nm에서 NADH의 분해속도를 지표로 사용하였다. 측정 키트 내 반응액 (NADH 0.22 mM, LDH 800 U/L, MDH 600 U/L, L-Aspartic acid 200 mM) 각 1 ml와 각 시료 혈청 0.1 ml 를 큐벳(Cuvette)에 넣어 37℃에서 1분간 전체 반응시킨 후, 1분간 340 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 각 시료 혈청의 GOT 효소량은 U/L 단위로 측정 결과 도 2 및 표 2에 나타냈다.
구분 | 혈중 GOT 농도 (U/L) | |
4.5 시간 | ||
대조군 | 57.1653 | |
에탄올 투여군 | 191.7017 | |
비교군 1 | 172.7589 | |
비교군 2 | 127.5486 | |
KNA32 | 1.0 g/kg | 136.6411 |
1.5 g/kg | 117.9509 |
(대조군은 생리식염수 투여한 군이고, 에탄올 투여군은 생리식염수 투여한 대조군에 에탄올을 투여한 군임)
도 2 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 고삼(KNA32) 추출물은 혈중 GOT의 증가를 억제하는 효능이 투여한 모든 농도군에서 시중에 판매하는 숙취해소음료와 동등 이상을 나타냄을 알 수 있다.
<
실험예
3> 알코올 탈수소효소(
ADH
)의 활성도 측정
상기 실시예 2에서 수득한 고삼 분획물의 알코올 탈수소효소 활성화 효과를 알아보기 위하여, 동결 건조된 S9 쥐의 간 분쇄액(rat liver homogenate)(MOLTOX Co., USA) 26.4 ㎎을 최종 농도가 3.3 ㎎/㎖이 되도록 하여 0.1%(w/v) BSA(bovine serum albumin) 용액 8 ㎖에 용해하여, 0.45 ㎛ 시린지 필터(syringe filter)로 여과하여 조제한 효소원을 사용하였다.
알코올 탈수소효소 활성 측정은 흡광도 340 nm에서 NADH의 생성속도를 지표로 사용하였다. 반응액의 조성은 증류수 2.1 ㎖; 1.0 M 트리스-HCl 완충액(pH 8.0) 0.3 ㎖, 20 mM NAD+ 0.1 ㎖, 1.0 M 아세트알데히드 0.1 ㎖; 3.0 M KCl 0.1 ㎖; 0.33 M 2-머캅토에탄올 0.1 ㎖; 50 또는100 ㎍/㎖의 고삼 분획물(실시예 2) 0.1 ㎖ 또는 비교물질(모닝케어, 동아제약) 10㎕들의 혼합액과 효소원 0.1 ㎖를 큐벳(cuvette)에 넣고 총 3 ㎖이 되도록 조절하여 30 ℃에서 5분간 전체 반응시킨 후, 5분간 340 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다.
이때 고삼 분획물을 첨가하지 않는 것을 대조군으로 하였고, 시판하는 1종의 숙취해소 음료(모닝케어, 동아제약)를 선정하여 비교군으로 하였다. 비교군 및 고삼 분획물의 알코올 탈수소효소 활성은 대조군에 대한 상대 활성(%)으로 측정하였다. 측정결과를 도 3 및 표 3에 나타냈다.
구분 | 알코올 탈수소효소 활성도 (%) |
대조군 | 100.0 |
비교군 (모닝케어) | 156.7 |
KNA32 MC 50 μg/ml | 296.0 |
KNA32 MC 100 μg/ml | 546.4 |
KNA32 EA 50 μg/ml | 400.5 |
KNA32 EA 100 μg/ml | 875.8 |
KNA32 BuOH 50 μg/ml | 124.9 |
KNA32 BuOH 100 μg/ml | 162.6 |
KNA32 Water 50 μg/ml | 111.2 |
KNA32 Water 100 μg/ml | 118.4 |
도 3 및 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 고삼 추출물로부터 제조된 분획물들 중 초산에틸 분획물(KNA32 EA)이 분획물 중 가장 뛰어난 알코올 탈수소효소의 활성을 효과적으로 증가시킴을 알 수 있다. 또한 이염화메탄 (KNA32 MC) 분획물 또한 현저한 알코올 탈수소효소의 활성화 작용을 나타내었다.
<
실험예
4> 아세트알데히드 탈수소효소(
ALDH
)의 활성도 측정
상기 실시예 2에서 수득한 고삼 분획물의 아세트알데히드 탈수소효소 활성화 효과를 알아보기 위하여, 동결 건조된 S9 쥐의 간 분쇄액(rat liver homogenate)(MOLTOX Co., USA) 26.4 ㎎을 최종 농도가 3.3 ㎎/㎖이 되도록 하여 0.1%(w/v) BSA(bovine serum albumin) 용액 8 ㎖에 용해하여, 0.45 μm 시린지 필터(syringe filter)로 여과하여 효소원으로 사용하였다.
아세트알데히드 탈수소효소 활성 측정은 흡광도 340 nm에서 NADH의 생성속도를 지표로 사용하였다. 반응액의 조성은 증류수 2.1 ㎖; 1.0 M 트리스-HCl 완충액(pH 8.0) 0.3 ㎖, 20 mM NAD+ 0.1 ㎖, 1.0 M 아세트알데히드 0.1 ㎖; 3.0 M KCl 0.1 ㎖; 0.33 M 2-머캅토에탄올 0.1 ㎖; 50 및 100 ㎍/㎖의 고삼 분획물(실시예 2) 0.1 ㎖ 또는 10㎕/㎖의 비교물질(모닝케어, 동아제약)의 혼합액과 효소원 0.1 ㎖를 큐벳(cuvette)에 넣어 총 3 ㎖이 되도록 조절하여 30 ℃에서 5분간 전체 반응시킨 후, 5분간 340 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 시료를 첨가하지 않는 것을 대조군으로 하였고 시판하는 숙취해소음료 1종(모닝케어, 동아제약)을 선정하여 비교군으로 하였다. 시료의 아세트알데히드 탈수소효소 활성은 대조군에 대한 상대 활성(%)으로 측정하였다. 측정결과를 도 4 및 표 4에 나타냈다.
구분 | 아세트알데히드 탈수소효소 활성도 (%) |
대조군 | 100.0 |
비교군 (모닝케어) | 109.7 |
KNA32 MC 50 μg/ml | 327.4 |
KNA32 MC 100 μg/ml | 310.2 |
KNA32 EA 50 μg/ml | 266.7 |
KNA32 EA 100 μg/ml | 478.4 |
KNA32 BuOH 50 μg/ml | 125.3 |
KNA32 BuOH 100 μg/ml | 153.5 |
KNA32 Water 50 μg/ml | 113.6 |
KNA32 Water 100 μg/ml | 116.5 |
도 4 및 표 4에 나타낸 바와 같이, 상기 고삼 추출물로부터 제조된 분획물들 중 초산에틸 분획물(KNA32 EA)이 가장 우수한 아세트알데히드 탈수소효소의 활성화 작용을 가짐을 알 수 있다. 이염화메탄 분획물(KNA32 MC) 또한 아세트알데히드 탈수소효소의 활성을 효과적으로 증가시킴을 알 수 있다.
Claims (7)
- 고삼 (Sophora flavescens) 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 알코올성 숙취 예방 또는 숙취 해소용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 고삼의 추출물은,
고삼을 물, C1 내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 이염화메탄, 초산에틸, 및 아세톤으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출용매로 추출하여 얻어진 고삼 조추출물; 및
고삼 조추출물을 물에 현탁한 후, 얻어진 현탁액에 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 및 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획용매로 용매 분획하여 얻어진 고삼 분획물
로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인,
알코올성 숙취 예방 또는 숙취 해소용 약학 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 고삼 분획물은
고삼 조추출물을 물에 현탁한 후, 얻어진 현탁액에 물과 동부피의 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 및 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획 용매를 가하여 분획하여 얻어진 분획물인 것인
알코올성 숙취 예방 또는 숙취 해소용 약학 조성물.
- 고삼 (Sophora flavescens) 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 알코올성 숙취 개선용 식품 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 고삼의 추출물은,
고삼을 물, C1 내지 C4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 이염화메탄, 초산에틸, 및 아세톤으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 추출용매로 추출하여 얻어진 고삼 조추출물; 및
고삼 조추출물을 물에 현탁한 후, 얻어진 현탁액에 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 및 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획용매로 용매 분획하여 얻어진 고삼 분획물
로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인,
알코올성 숙취 개선용 식품 조성물.
- 제5항에 있어서,
상기 고삼 분획물은
고삼 조추출물을 물에 현탁한 후, 얻어진 현탁액에 물과 동부피의 헥산, 클로로포름, 에테르, 이염화메탄, 초산에틸, 및 부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 분획 용매를 가하여 분획하여 얻어진 분획물인 것인
알코올성 숙취 개선용 식품 조성물.
- 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품 조성물은 음료인, 알코올성 숙취 개선용 식품 조성물.
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