KR101168620B1 - Ｐｅｇ화된 소분자 - Google Patents

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KR101168620B1
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리차드 알 구딘
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넥타르 테라퓨틱스
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Abstract

본 발명은 단분산성 또는 이중모드 수용성 올리고머 조성물로부터 얻어진 수용성 올리고머의 공유 부착에 의해 화학적으로 변형된 소분자 약물을 제공한다. 본 발명의 콘쥬게이트는 여러 투여 경로 중 어느 것에 의해 투여되는 경우, 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물의 생물학적 막 횡단 속도에 비해 감소된 생물학적 막 횡단 속도를 나타낸다.
막 횡단, 콘쥬게이트, 소분자, 화학적 변형

Description

ＰＥＧ화된 소분자 {PEGYLATED SMALL MOLECULES}
본 발명은 화학적 변형이 결여된 소분자에 비해 특정 이점들을 갖는 화학적으로 변형된 소분자 및 관련 방법들을 제공한다. 본원에서 기재되는 화학적으로 변형된 소분자들은 약물 발견, 약물요법, 생리학, 유기화학, 고분자 화학 및 기타 분야에 관한 것이고(이거나) 그러한 분야에 적용된다.
몇 가지 인자들, 즉 단백질의 식별, 단리, 정제 및(또는) 재조합 제조에 관한 개선된 기법; 프로테오노믹스 출현으로 인한 단백질의 생체 내 역할에 대한 증가된 이해; 및 약동학 또는 약동력학적 특성들을 증진시키기 위한 화학적 변형 단백질의 개선된 제제, 전달 비히클 및 접근법으로 인해, 활성제로서의 단백질 사용이 최근에 증가하였다.
단백질을 화학적으로 변형하기 위한 개선된 접근법들에 관하여, 단백질에 대한 폴리(에틸렌 글리콜) 또는 PEG와 같은 폴리머의 공유 부착이, 순환 반감기 개선, 면역원성 감소, 및(또는) 단백질 분해 감소에 사용되었다. 단백질 또는 다른 활성제에 PEG를 공유 부착하는 이러한 접근법은 통상적으로 PEG화 (PEGylation)라 고 불린다. PEG의 공유 부착에 의해 변형된 주입용 단백질은 전형적으로, 흔히 약 5,000 내지 약 40,000 달톤 범위인 비교적 고분자량의 PEG 폴리머 부착에 의해 변형된다.
제약학적 유용성을 개선할 목적의, 비교적 큰 단백질의 변형이 아마도 가장 통상적인 PEG화 적용분야들 중 하나이면서도, PEG화는 또한, 제한된 정도이기는 하지만, 불량한 수 용해도를 갖는 소분자 약물의 생체이용률 및 제제 용이성을 개선시키는데 사용되었다. 예를 들어, PEG와 같은 수용성 폴리머는 아르틸린산에 공유 부착되어 그 수 용해도를 개선시킨다. 예를 들어, 미국 특허 제6,461,603호를 참조하라. 유사하게, PEG는 트리멜라몰과 같은 트리아진계 화합물에 공유 부착되어 물 중의 이들의 용해도를 개선시키고 이들의 화학적 안정성을 증진시킨다. 예를 들어, 국제 특허 공개 WO 02/043772호를 참조하라. 비스인돌릴 말레이미드에 대한 PEG의 공유 부착이, 낮은 수 용해도로 인한 그러한 화합물의 불량한 생체 이용률을 개선시키는데 사용되었다. 예를 들어, 국제 특허 공개 WO 03/037384호를 참조하라. 수 용해도를 증가시킬 목적으로 소분자 약물에 부착되는 PEG 쇄는, 소분자 약물의 분자량에 따라, 전형적으로 약 500 달톤 내지 약 5000 달톤 범위의 크기이다.
활성제는, 주입, 경구, 흡입, 코, 및 경피를 포함하는 수많은 투여 경로 중 임의의 것에 의해 투여될 수 있다. 가장 바람직한 투여 경로 중 하나는, 그 용이성으로 인해, 경구 투여이다. 소분자 약물(즉, 비-단백질계 약물)에 있어 가장 통상적인 경구 투여는 간편하고, 흔히 다른 투여 경로에 비해 더 우수한 환자 순응도를 야기한다. 불행히도, 많은 소분자 약물들은 경구 투여를 비실용적으로 만드는 특성들(예를 들어, 낮은 경구 생체이용률)을 갖고 있다. 흔히, 용해 및 다양한 생물학적 막을 통한 선택적 확산에 필요한 소분자 약물의 특성들은 직접적으로, 최적의 표적 친화성 및 투여에 요구되는 특성들과 상충된다. 소분자 약물이 특정 기관 또는 조직 내로 들어가는 것을 제한하는 주요한 생물학적 막들은 특정 생리학적 장벽, 예를 들어, 혈액-뇌 장벽, 혈액-태반 장벽, 및 혈액-고환 장벽과 연관된 막들이다.
혈액-뇌 장벽은 뇌를 대부분의 독물들로부터 보호한다. 성상세포라고 불리는 분화된 세포들은 뇌의 모세혈관 내피와 뉴런 사이에서 장벽을 형성하는 많은 작은 분지들을 가진다. 성상세포 세포벽 내의 지질 및 인접한 내피 세포들 사이의 매우 단단한 연접들은 수용성 분자들의 통과를 제한한다. 혈액-뇌 장벽이 필수적인 영양분을 통과시킬지라도, 그 장벽은 일부 외래 물질들의 통과를 제거하는데 효과적이며, 다른 물질들이 뇌 조직 내로 횡단하는 속도를 줄일 수 있다.
태반 장벽은 발생하고 있는 민감한 태아를, 모체 순환 중에 존재할 수 있는 많은 독물들로부터 보호한다. 이 장벽은 태반 내 모체와 태아 순환 혈관들 사이에서 몇몇 세포 층들을 이룬다. 세포막 중의 지질은 수용성 독물들의 확산을 제한한다. 하지만, 영양분, 기체, 및 발생하는 태아의 노폐물과 같은 다른 물질들은 태반 장벽을 통해 통과할 수 있다. 혈액-뇌 장벽의 경우와 같이, 태반 장벽은 완전히 불투과성은 아니지만, 모체로부터 태아로 많은 독물들이 확산되는 것을 효과적으로 늦춘다.
많은 경구 투여되는 약물들에 있어, 혈액-뇌 장벽 또는 혈액-태반 장벽과 같 은 특정 생물학적 막을 횡단하는 투과는 매우 바람직스럽지 못하며, 신경독성, 불면증, 두통, 착란, 악몽 또는 최기성과 같은 심각한 부작용들을 야기할 수 있다. 이러한 부작용들은, 심각한 경우, 그러한 바람직하지 않은 뇌 또는 태반 흡수를 보이는 약물들의 개발을 중단시키기에 충분할 수 있다. 따라서, 효과적으로 약물, 및 특히 소분자 약물을 환자에게 전달하면서도, 동시에 소분자 약물들의 불리하고, 흔히는 독성인 부작용들을 감소시키는 새로운 방법이 필요하다. 구체적으로, 우수한 경구 생체이용률, 생체활성, 및 약동학 프로파일이 최적으로 균형잡힌 약물들을 전달하기 위한 개선된 방법이 필요하다. 본 발명은 이러한, 그리고 다른 필요들을 충족한다.
<발명의 개요>
본 발명은, 독특한 특성(예를 들어, 낮은 생물학적 막 횡단 속도)을 갖는 화학적으로 변형된 소분자 약물들뿐 아니라, 그러한 화합물들을 제조 및 투여하는 방법의 개발 및 발견에 기초하고 있다.
한 측면에 있어, 본 발명은 단분산성 또는 이중모드 콘쥬게이트를 포함하는 조성물을 제공하며, 각각의 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 대해 안정한 결합으로 공유 부착된 소분자 약물로부터 유도된 잔기를 포함한다. 바람직하게는, 본 올리고머는 단분산성(즉, 단분자) 또는 이중모드, 또는 심지어는 삼중모드 또는 사중모드 조성물로부터 얻어진다. 단분산성 올리고머 조성물로부터 제조되는 콘쥬게이트는 단분산성 콘쥬게이트라고 불리며, 이중모드 올리고머 조성물로부터 제조된 콘쥬게이트는 이중모드 콘쥬게이트로 불린다 (나머지도 이런 방식으로 불린다).
유리하게는, 수용성 올리고머는, 소분자 약물에 부착되는 경우, 얻어지는 콘쥬게이트가 혈액-뇌 장벽 또는 혈액-태반 장벽과 연관된 것들과 같은 특정 생물학적 막을 횡단하는 능력을 효과적으로 경감시킨다. 하나 이상의 실시태양에서, 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물의 생물학적 막 횡단 속도에 비해 감소된 생물학적 막 횡단 속도를 보이는 콘쥬게이트가 제공된다.
본 콘쥬게이트는 일반적으로, 구조 O-X-D를 갖는 것으로 기재될 수 있으며, 여기서 O는 수용성 올리고머에 대응되고, X는 안정한 결합에 대응되며, D는 소분자 약물로부터 유도된 잔기에 대응된다.
한 가지 이상의 실시태양에서, 소분자 약물은 경구로 생체이용 가능하다. 뿐만 아니라, 본 콘쥬게이트 또한 경구로 생체이용 가능하다. 소분자 약물 및 대응하는 소분자 약물-올리고머 콘쥬게이트 모두 생체 이용가능한 경우들에 있어, 콘쥬게이트가 비콘쥬게이팅된 형태 중 소분자 약물의 경구 생체이용률의 10% 이상인 경구 생체이용률을 갖는 것이 바람직하다. 비콘쥬게이팅된 형태 중 소분자 약물에 비해 콘쥬게이트에 의해 보유되는 경구 생체이용률의 예시적인 백분율은 하기를 포함한다: 약 20% 이상; 약 30% 이상; 약 40% 이상; 약 50% 이상; 약 60% 이상; 약 70% 이상; 약 80% 이상; 및 약 90% 이상.
하나 이상의 실시태양에서, 본 콘쥬게이트 투여는, 비콘쥬게이팅된 형태 중 대응하는 소분자 약물에 비해, 일차 통과 대사의 감소를 보인다. 따라서, 본 발명은 (다른 것들 중에서도) 활성제 대사를 감소시키는 방법을 제공하며, 본 방법은 단분산성 또는 이중모드 콘쥬게이트를 제공하는 단계(각각의 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 안정한 결합으로 공유 부착된 소분자 약물로부터 유도된 잔기를 포함하며, 여기서 상기 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물의 대사 속도에 비해 감소된 대사 속도를 보인다); 및 상기 콘쥬게이트를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
콘쥬게이트를 제조하는데 사용할 수용성 올리고머는 달라질 수 있고, 본 발명은 이에 관해 특정하게 제한되지 않는다. 예시적인 올리고머는 알킬렌 옥사이드, 올레핀 알콜, 비닐피롤리돈, 히드록시알킬메타크릴아미드, 히드록시알킬메타크릴레이트, 사카라이드, α-히드록시 산, 포스파젠, 옥사졸린, 아미노산, 모노사카라이드, 및 N-아크릴로일모르폴린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 모노머들로 구성된 올리고머들을 포함한다. 하나 이상의 바람직한 실시태양에서, 수용성 올리고머는 에틸렌 옥사이드 모노머들로 구성된다.
본원에서 제공되는 콘쥬게이트의 올리고머 부분은 연속하여 부착된 개개의 모노머들로 구성된다. 예시적인 올리고머들은 수많은 반복하는 모노머들을 연속하여 함유할 수 있으며, 모노머들의 수는 하기 범위들 중 하나 이상을 만족한다: 1-25; 1-20; 1-15; 1-12; 1-10; 및 2-9. 본 올리고머는 하기 값들 중 임의의 하나에 대응하는 다수의 모노머들을 가질 수 있다: 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9; 10; 11; 및 12.
본원에서 제공되는 콘쥬게이트의 올리고머 부분은 다양한 기하구조, 구조 및 특징들을 가질 수 있다. 비제한적인 실시예들은 직쇄 및 분지형 올리고머 골격을 포함한다.
하나 이상의 실시태양에서, 본 콘쥬게이트는 본원에서 각각, 소분자 약물로부터 유도된 단일 잔기에 공유 부착된 단일의 수용성 올리고머를 갖는다. 즉, 올리고머 대 소분자 약물로부터 유도된 잔기의 비율은 1:1이다. 하지만, 하나 이상의 추가적인 실시태양에서, 본 콘쥬게이트는 소분자 약물로부터 유도된 잔기에 공유 부착된 1, 2, 또는 3개의 올리고머를 가질 수 있다.
수용성 올리고머와 소분자 약물로부터 유도된 잔기를 연결하는 결합은 분자들을 결합시키는 임의의 적합한 결합일 수 있지만, (하나 이상의 원자들을 통한) 공유 결합이 바람직하다. 수용성 올리고머와 소분자 약물 사이의 적합한 공유 결합들은 하기를 포함하지만, 제한적이지는 않다: 에테르; 아미드; 우레탄; 아민; 티오에테르; 및 탄소-탄소 결합.
본원에서 제공되는 조성물은 단일 콘쥬게이트 종만을 포함하거나, 본 조성물은 2, 3, 4 이상의 상이한 콘쥬게이트 종들을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 조성물은 단일 콘쥬게이트 종을 포함할 수 있으며, 다른 콘쥬게이트 종들(예를 들어, 분자량, 분자 구조 등이 상이한 콘쥬게이트 종들)은 실질적으로 존재하지 않는다. 뿐만 아니라, 본원에서 제공되는 조성물들은 또한, 예를 들어, 함께 혼합된 2개의 상이한 콘쥬게이트 종들을 함유할 수 있으며, 여기서 (a) 소분자 약물로부터 유도된 동일한 잔기는 조성물 중 모든 콘쥬게이트들 중에 존재하고, (b) 한 콘쥬게이트 종의 올리고머 크기는 나머지 콘쥬게이트 종들의 올리고머 크기와 다르다. 상이한 콘쥬게이트 종들을 갖는 혼합물들을 포함하는 조성물들에 있어, 각각의 종들은 공지되고 정해진 양으로 조성물 중에 존재할 것이다. 비록 임의의 주어진 조성물 중 콘쥬게이트 종들은 상기에서 기재된 바와 같은 올리고머 크기에 있어 다를 수 있지만, 콘쥬게이트 종들의 차이점들은 또한, 올리고머 유형, 소분자 약물로부터 유도된 잔기, 콘쥬게이트의 입체이성질체 등에 기초할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서는, 본원에 기재된 조성물을 투여하는 방법이 제공된다. 이에 관해서, 본 방법은 단분산성 또는 이중모드 콘쥬게이트를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 각각의 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 안정한 결합으로 공유 부착된 소분자 약물로부터 유도된 잔기를 포함하며, 여기서 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물의 생물학적 막 횡단 속도에 비해 감소된 생물학적 막 횡단 속도를 보인다. 간편하게도, 투여 단계는, 예를 들어, 경구 투여, 경피 투여, 협측 투여, 경점막 투여, 질 투여, 직장 투여, 비경구 투여, 및 폐 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는 것들을 포함하는 임의의 수많은 투여 접근법들로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 소분자 약물의 선택적인 생물학적 막 횡단을 최적화하는 방법이 제공된다. 이에 관해, 본 방법은 단분산성 또는 이중모드 올리고머 조성물로부터 안정한 공유결합을 통해 소분자 약물로 수용성 올리고머를 접합시키는 단계를 포함하며, 그에 의해, 상기 접합 전의 소분자 약물의 생물학적 막 횡단 속도에 비해 감소된 생물학적 막 횡단 속도를 보이는 콘쥬게이트가 형성된다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 소분자 약물의 생물학적 막 횡단의 감소를 최적화하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 하기 단계들을 포함한다: (a) 일련의 단분산성 또는 이중모드 콘쥬게이트 제조 단계(일련의 각 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 안정한 결합으로 공유 부착된 소분자 약물로부터 유도된 잔기를 포함하며, 여기서 일련의 각 콘쥬게이트는 올리고머 내 모노머의 수에 기초한 올리고머의 크기에 있어서만 상이하다); (b) (a) 단계에서 제조된 일련의 각 콘쥬게이트에 있어, 콘쥬게이트가 생물학적 막을 횡단하지 않는 정도를 특성화하는 단계; 및 (c) (b)로부터의 결과에 기초하여, (a) 단계에서 제조된 일련의 콘쥬게이트들로부터, 생물학적 막 횡단에 있어 최적의 감소를 보이는 콘쥬게이트를 식별하는 단계.
본 발명은 또한, 소분자 약물에, 단분산성 또는 이중모드 올리고머 조성물로부터 얻은 수용성 올리고머를 공유 부착하는 단계를 포함하는, 콘쥬게이트 제조 방법을 제공한다. 이러한 방식으로, 소분자 약물로부터 유도된 잔기에 올리고머를 연결하는 안정한 결합을 포함하는 콘쥬게이트가 형성된다. 콘쥬게이트를 제공하는 예시적인 접근법은 하나 이상의 합성 단계 중, 단분산성 또는 다중모드 올리고머 조성물로부터의, 반응성 기 A를 갖는 수용성 올리고머를, A와 B의 반응으로 얻어지는 가수분해에 안정한 결합을 형성하기에 효과적인 조건 하에서, A와의 반응에 적합한 반응성 기 B를 포함하는 소분자 약물과 반응시키는 단계를 포함하며, 이에 의해 소분자 약물-수용성 올리고머 콘쥬게이트가 형성된다.
콘쥬게이트를 제조하는 방법이 이성질체(또는 다른 콘쥬게이트 종)들의 혼합물을 야기하는 한, 단일 콘쥬게이트 이성질체(또는 콘쥬게이트 종)을 얻기 위한 추가적인, 이성질체(또는 다른 콘쥬게이트 종) 분리 단계가 수행될 수 있다. 선택적으로, 각각의 조성물이 단일 콘쥬게이트 이성질체(또는 콘쥬게이트 종)을 갖는 임의의 2 이상의 조성물에 있어, 2 이상의 별도 조성물들을 조합하는 단계가, 공지되고 정해진 양의 각 콘쥬게이트 이성질체(또는 콘쥬게이트 종)를 갖는 조성물을 제공하기 위해 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 올리고(에틸렌 옥사이드)와 같은 단분산성 수용성 올리고머를 제조하는 방법을 제공한다. 본 방법은, (m) 모노머를 갖는 할로-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)를, 할로 기를 치환하여, (m)+(n) 모노머 소단위체들(OEGm+n)을 갖는 모노머 올리고(에틸렌 옥사이드)를 형성하는데 효과적인 조건 하에서, (n) 모노머를 갖는 히드록시-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)와 반응시키는 단계를 포함하며, 여기서 (m) 및 (n) 각각은 독립적으로 1 내지 10 범위이다. 바람직하게는, (m)은 2-6 범위(더 바람직하게는 1-3)이고, (n)은 2-6 범위이지만, 반드시 그런 것은 아니다.
단분산성 수용성 올리고머를 제조하는 방법은 일반적으로, 히드록시-종결 올리고(에틸렌 글리콜)의 히드록시기를 대응하는 알콕사이드로 변환하는데 적합한, 나트륨, 칼륨, 수소화나트륨, 수소화칼륨, 메톡시화나트륨, 메톡시화칼륨, tert-부톡시화나트륨, 또는 tert-부톡시화칼륨과 같은 강 염기의 존재 하에서 수행된다.
할로-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)(또는 다른 할로-종결 올리고머)에 결합된 할로(또는 할로겐 기)에 관해, 할로는 전형적으로, 클로로, 브로모, 및 요오도로 이루어진 군으로부터 선택된다. 뿐만 아니라, 할로-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)는 전형적으로, 예를 들어 메틸 또는 에틸 기로 말단 캡핑되어 대응하는 메틸 또는 에틸 에테르 종결부를 제공한다. 바람직한 할로-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)는 H3CO-(CH2CH2O)m-Br이며, 여기서 (m)은 상기와 같이 정의된다.
히드록시-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)에 관해, 그러한 히드록시-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)는 구조 HO-(CH2CH2O)n-H에 대응되며, 여기서 (n)은 상기에서 기재된 바와 같다.
단분산성 수용성 올리고머를 제조하는 방법은 또한, OEGm +n의 종결부 히드록시기를 할로 기로 변환하여 OEGm +n-X를 형성하는 단계를 포함하며, 여기서 X는 할로 기이다. 이에 이어서, 할로 기를 치환하기에 효과적인 조건 하에서, OEGm +n-X와, (n) 모노머를 갖는 히드록시-종결 올리고(에틸렌 옥사이드)와의 반응이 있을 수 있으며, 그에 의해 (m)+2(n) 모노머 소단위체 (OEGm +2n)을 갖는 올리고(에틸렌 옥사이드)가 형성되며, 여기서 (m) 및 (n)은 상기에서 기재된 바와 같다. 선택적으로, 상기 단계들은, 원하는 이산 수의 모노머를 갖는 단분산성 올리고(에틸렌 옥사이드)가 얻어질 때까지 반복될 수 있다.
상기에서 기재된 바와 같이 제조된 단분산성 올리고(에틸렌 옥사이드) 조성물을 사용하여 콘쥬게이트를 제조하는 방법 또한 제공된다. 상기에서 기재된 바와 같은 에틸렌 옥사이드의 단분산성 올리고머는, 본 발명 콘쥬게이트를 제조하는데 사용하기에 바람직하면서도, 수많은 활성제 또는 표면 중 임의의 것에 부착하는데 사용될 수 있다. 상기 방법에 의해 제조되는 단분산성 올리고(에틸렌 옥사이드)와 커플링하기에 바람직한 생활성제들은 소분자 치료제, 진단제, 염료, 영상화제, 표적화제, 계면활성제, 화장품, 코스모슈티칼(cosmoceutical), 뉴트리슈티칼(neutriceutical) 등을 포함한다.
본 발명의 이들, 그리고 다른 목적, 측면, 실시태양 및 특징들은 이하의 상세한 설명과 함께 읽을 때, 보다 완전히 명백해 질 것이다.
<도면의 간단한 설명>
도 1은 실시예 7에서 상세하게 기재된 바와 같이 스프래그 돌리(Sprague Dawley) 래트에 투여된 13-시스 레티노산("13-시스-RA") 및 그 예시적인 작은 PEG 콘쥬게이트들(PEG3-13-시스 레틴아미드, "PEG3-13-시스 RA"; PEG5-13-시스 레틴아미드, "PEG5-13-시스 RA"; PEG7-13-시스 레틴아미드, "PEG7-13-시스 RA"; 및 PEG11-13-시스 레틴아미드, "PEG11-13-시스 RA")의 혈장 농도 대 시간 그래프이다.
도 2는 실시예 7에 상세하게 기재된 바와 같이 스프래그 돌리 래트에 투여된 6-날록솔 및 그의 예시적인 작은 PEG 콘쥬게이트들(3-머, 5-머, 7-머)의 혈장 농도 대 시간 그래프이다.
도 3은 스프래그-돌리 래트 내에서의 다양한 PEG-13-시스-RA 콘쥬게이트 및 13-시스-RA의 창자 운반에 대한 PEG 쇄 길이의 효과(경구 생체이용률 지표로서)를 보여주는 그래프이다.
도 4는 13-시스-RA 및 다양한 PEG-13-시스-RA 콘쥬게이트의 혈액-뇌 장벽 운반에 대한 다양한 크기의 PEG-머 공유 부착의 효과를 보여주는 그래프이다.
도 5는 날록손 및 PEGn-Nal의 창자 운반에 대한 다양한 크기의 PEG-머 공유 부착의 효과(경구 생체이용률 지표로서)를 보여주는 그래프이다.
도 6은 날록손 및 PEGn-Nal의 혈액-뇌 장벽 운반에 대한 다양한 크기의 PEG-머 공유 부착의 효과를 보여주는 그래프이다.
도 7은 경구 위관영양법 후의 래트 내 날록손 및 PEGn-Nal의 약동학을 보여주는 그래프이다.
도 8 및 도 9는 날록손 대사산물 및 PEGn-Nal 대사산물 수준에 대한 다양한 크기의 PEG-머 공유 부착의 효과를 보여주는 그래프이다.
도 10은 상업적 공급원(시그마-알드리치(Sigma-Aldrich))로부터 얻은 메톡시-PEG-350의 질량 스펙트럼이다. 분석으로부터 볼 수 있는 바와 같이, 비록 본 시약이 350의 분자량을 갖는 메톡시-PEG로서 판매되지만, 본 시약은 실제로는 9개의 상이한 PEG 올리고머들과, 약 7 내지 약 15 범위 개수의 모노머 소단위체들과의 혼합물이다.
<발명의 상세한 설명>
이 명세서에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태 "하나의(a)", "하나의(an)", 및 "그(the)"는, 문맥이 명확히 다르게 지시하지 않는다면, 복수의 지시대상들을 포함한다는 것을 염두에 두어야 한다.
본 발명을 기재하고 청구함에 있어, 이하의 용어들은, 하기 기재된 정의들에 따라 사용될 것이다.
"수용성 올리고머" 내에서와 같은 "수용성"은, 실온에서 물 중 35 (중량)% 이상이 가용성, 바람직하게는 95% 초과가 가용성인 올리고머를 나타낸다. 전형적으로, "수용성" 올리고머의 여과되지 않은 수성 제조물은, 여과 후 동일한 용액에 의해 투과되는 광량의 75% 이상, 더 바람직하게는 95% 이상을 투과시킨다. 중량 기준으로, "수용성" 올리고머는 바람직하게는 물 중 35 (중량)% 이상이 가용성, 더 바람직하게는 물 중 50 (중량)% 이상이 가용성, 더욱더 바람직하게는 물 중 70 (중량)% 이상이 가용성이며, 더욱더 바람직하게는 물 중 85 (중량)% 이상이 가용성이다. 하지만, 본 수용성 올리고머는 물 중 95 (중량)% 이상이 가용성이거나, 물 중 완전히 가용성인 것이 가장 바람직하다.
용어 "모노머", "모노머형 소단위체" 및 "모노머형 단위체"는 본원에서 호환가능하게 사용되며, 폴리머 또는 올리고머의 기본적인 구조적 단위체 중 하나를 의미한다. 호모-올리고머의 경우, 이는 올리고머의 구조적 반복 단위로서 정의된다. 코-올리고머의 경우, 구조적 반복 단위가 하나 이상 유형의 모노머형 단위체를 포함할 수 있으므로, 모노머형 단위체는 더 유용하게는, 올리고머화되어 올리고머를 형성하는 모노머 잔기로서 정의된다. 본 발명의 바람직한 올리고머는 호모-올리고머이다.
"올리고머"는 약 1 내지 약 30개의 모노머들을 갖는 분자이다. 올리고머의 구조는 달라질 수 있다. 본 발명에 사용될 특정 올리고머들은, 하기에서 보다 상세하게 기재될 선형, 분지형, 또는 포크형과 같은 다양한 기하구조를 갖는 것들을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "PEG" 또는 "폴리에틸렌 글리콜"은 임의의 수용성 폴리(에틸렌 옥사이드)를 포함하는 것으로 의미된다. 다르게 표시되지 않는다면, "PEG 올리고머" 또는 올리고에틸렌 글리콜은, 그 중 모든 모노머 소단위체들이 에틸렌 옥사이드 소단위체인 것이다. 본 올리고머가, 예를 들어 콘쥬게이션을 위해, 상이한 말단 캡핑 잔기 또는 관능기들을 함유할 수 있지만, 전형적으로는, 실질적으로 모든, 또는 모든 모노머형 소단위체들은 에틸렌 옥사이드 소단위체들이다. 전형적으로, 예를 들어 합성 변환 동안, 종결 산소(들)이 치환되었는지 여부에 따라, 본 발명에 사용될 PEG 올리고머들은 하기 2개의 구조들 중 하나를 포함할 것이다: "-(CH2CH2O)n-" 또는 "-(CH2CH2O)n-1CH2CH2-". 상기에서 서술한 바와 같이, 본 발명 PEG 올리고머에 있어, 변수 (n)은 1 내지 30 범위이고, 종결기 및 전체 PEG 구조는 달라질 수 있다. PEG가, 예를 들어 소분자 약물에 결합될 관능기 A를 추가로 포함하는 경우, 관능기는 PEG 올리고머에 공유 부착될 때, (i) 산소-산소 결합(-O-O-, 퍼옥사이드 결합), 또는 (ii) 질소-산소 결합(N-O, O-N)의 형성을 야기하지 않는다.
"말단 캡핑 기"는 일반적으로, PEG 올리고머의 종결 산소에 부착되는 비반응성 탄소-함유 기이다. 본 발명 목적에 있어, 메틸 또는 에틸과 같은 비교적 저분자량을 갖는 캡핑 기가 바람직하다. 말단-캡핑 기는 또한 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 그러한 표지들은 형광물질, 화학발광물질, 효소 표지에 사용되는 잔기, 비색성 표지(예를 들어, 염료), 금속 이온, 및 방사성 잔기를 포함하지만, 제한적이지는 않다.
올리고머의 기하구조 또는 전체 구조와 관련하여, "분지형"은 분지점으로부터 연장되는 둘 이상의 폴리머 "팔"을 갖는 올리고머를 의미한다.
올리고머의 기하구조 또는 전체 구조와 관련하여, "포크형"은 분지점으로부터 연장되는 둘 이상의 관능기(전형적으로는 하나 이상의 원자를 통해)를 갖는 올리고머를 의미한다.
"분지점"은, 올리고머가 선형 구조로부터 하나 이상의 추가적인 팔 내로 분지되거나 분기되는 하나 이상의 원자들을 포함하는 분기점을 의미한다.
용어 "반응성" 또는 "활성화된"은, 통상적인 유기 합성 조건 하에서 쉽게 또는 실용적인 속도로 반응하는 관능기를 의미한다. 이는, 반응하지 않거나 반응하기 위해 강한 촉매 또는 비실용적인 반응 조건을 요구하는 기들(즉, "비반응성" 또는 "불활성" 기)과 대조적이다.
반응 혼합물 중 분자 상에 존재하는 관능기와 관련하여, "쉽게 반응성이지 않은"은, 반응 혼합물 중 원하는 반응을 생성하기에 효과적인 조건 하에서 그 기가 매우 온전하게 남아 있는 것을 나타낸다.
"보호기"는 특정 반응 조건 하에서 분자 중 특정 화학적 반응성 관능기의 반응을 방지 또는 차단하는 잔기이다. 보호기는 보호되는 화학적 반응성 기의 유형 뿐 아니라, 사용될 반응 조건 및 분자 중 추가적인 반응성 기 또는 보호성 기의 존재에 따라 달라질 것이다. 보호될 수 있는 관능기들은, 예로서, 카르복시산기, 아미노기, 히드록시기, 티올기, 카르보닐기 등을 포함한다. 카르복시산에 대한 대표적인 보호기들은 에스테르(예를 들어, p-메톡시벤질 에스테르), 아미드 및 히드라지드를 포함하며; 아미노 기에 대해서는, 카바메이트(예를 들어, tert-부톡시카르보닐) 및 아미드; 히드록시기에 대해서는, 에테르 및 에스테르; 티올기에 대해서는, 티오에테르 및 티오에스테르; 카르보닐기에 대해서는, 아세탈 및 케탈 등이다. 그러한 보호기들은 당업자에게 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [T. W. Greene and G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999], 및 거기에 인용된 참고문헌들에 기재되어 있다.
"보호된 형태"의 관능기는 보호기를 보유하는 관능기를 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "관능기" 또는 그의 임의의 동의어는 이들의 보호된 형태를 포함하는 것으로 의미된다.
"생리학적으로 절단가능"하거나 "가수분해성"이거나 "분해성"인 결합은, 생리학적 조건 하에서 물과 반응하는(즉, 가수분해되는) 비교적 불안정한 결합이다. 결합이 물 중에서 가수분해되는 경향은, 두 중심 원자를 연결하는 결합의 일반적인 유형 뿐 아니라, 이들 중심 원자들에 부착된 치환체에 의존적일 것이다. 적당한, 가수분해적으로 불안정하거나 약한, 결합들은 카르복시산 에스테르, 인산 에스테르, 무수물, 아세탈, 케탈, 아실옥시알킬 에테르, 이민, 오르토에스테르, 펩티드, 올리고뉴클레오티드, 티오에스테르, 티올에스테르, 및 카보네이트를 포함하지만, 이들에 한정되지는 않는다.
"효소 분해성 결합"은 하나 이상의 효소에 의한 분해를 겪는 결합을 의미한다.
"가수분해 안정성" 연결 또는 결합은, 실질적으로 물 중에서 안정한, 즉 더 오랜 시간 동안 생리학적 조건 하에서 임의의 상당한 정도로 가수분해를 겪지 않는, 화학 결합, 전형적으로는 공유 결합을 의미한다. 가수분해 안정성 결합의 예들은 하기를 포함하지만, 이들에 한정되지는 않는다: 탄소-탄소 결합(예를 들어, 지방족 쇄), 에테르, 아미드, 우레탄, 아민 등. 일반적으로, 가수분해 안정성 결합은, 생리학적 조건 하에서 하루에 약 1-2% 미만의 가수분해 속도를 보이는 것이다. 대표적인 화학 결합의 가수분해 속도는 대부분의 표준 화학 교과서에서 찾을 수 있다.
"실질적으로" 또는 "본질적으로"는 거의 전부 또는 완전히, 예를 들어 95% 이상, 더 바람직하게는 97% 이상, 더욱더 바람직하게는 98% 이상, 훨씬 더 바람직하게는 99% 이상, 매우 더욱더 바람직하게는 99.9% 이상을 의미하며, 일부 주어진 양의 99.99% 이상이 가장 바람직하다.
"단분산성"은, 조성물 중 실질적으로 모든 올리고머들이, 크로마토그래피 또는 질량 분광기에 의해 측정되는 바와 같이, 명확한 단일(즉, 동일한) 분자량 및 정해진 수의 모노머를 갖는, 올리고머 조성물을 의미한다. 단분산성 올리고머 조성물들은 한 가지 의미에서, 순수한, 즉 실질적으로 넓은 분포보다는 단일의 정해질 수 있는 수(자연수로서)의 모노머들을 갖는다. 본 발명의 단분산성 올리고머 조성물은 1.0005 이하의 MW/Mn 값, 더 바람직하게는 1.0000의 MW/Mn 값을 갖는다. 나아가, 단분산성 콘쥬게이트를 포함하는 조성물은, 조성물 중 모든 콘쥬게이트의 실질적으로 모든 올리고머가, 넓은 분포보다는 단일의 정해질 수 있는 수(자연수로서)의 모노머를 갖고, 올리고머가 소분자 약물로부터 유도된 잔기에 부착되지 않는다면, 1.0005의 MW/Mn 값, 더 바람직하게는 1.0000의 MW/Mn 값을 가질 것이라는 것을 의미한다. 하지만, 단분산성 콘쥬게이트를 포함하는 조성물은 하나 이상의 용매, 시약, 부형제 등과 같은 비콘쥬게이트 물질들을 포함할 수 있다.
올리고머 조성물과 관련하여, "이중모드"는, 조성물 중 실질적으로 모든 올리고머들이 넓은 분포보다는 2개의 정해질 수 있고 상이한 수(자연수로서)의 모노머들 중 하나를 갖고, 수 분율 대 분자량으로 그래프화할 경우, 그 분자량 분포가 두 개의 분리된 확인가능한 피크를 보이는, 올리고머 조성물을 의미한다. 바람직하게는, 본원에서 기재된 바와 같은 이중모드 올리고머 조성물에 있어, 각각의 피크는 그 평균 주변으로 대칭이지만, 두 피크의 크기는 상이할 수 있다. 이상적으로, 이중모드 분포 내 각 피크의 다분산성 지수 Mw/Mn은 1.01 이하, 더 바람직하게는 1.001 이하, 훨씬 더 바람직하게는 1.0005 이하이며, 가장 바람직하게는 MW/Mn 값이 1.0000이다. 나아가, 이중모드 콘쥬게이트를 포함하는 조성물은, 조성물 중 모든 콘쥬게이트의 실질적으로 모든 올리고머가 넓은 분포보다는 두 개의 정해질 수 있고 상이한 수(자연수로서)의 모노머들 중 하나를 갖고, 올리고머가 소분자 약물로부터 유도된 잔기에 부착되지 않는다면, 1.01 이하, 더 바람직하게는 1.001 이하, 훨씬 더 바람직하게는 1.0005 이하의 MW/Mn 값을 갖고, 가장 바람직하게는 1.0000의 MW/Mn 값을 가질 것이라는 것을 의미한다. 하지만, 이중모드 콘쥬게이트를 포함하는 조성물은 하나 이상의 용매, 시약, 부형제 등과 같은 비콘쥬게이트 물질들을 포함할 수 있다.
"소분자 약물"은, 전형적으로 약 1000 미만의 분자량을 갖는 유기, 무기, 또는 유기금속성 화합물을 의미하도록 본원에서 넓게 사용되고 있다. 본 발명 소분자 약물은 약 1000 미만의 분자량을 갖는 올리고펩티드 및 다른 생체분자들을 포함한다.
용어 "소분자 약물로부터 유도된 잔기" 및 "소분자 약물 잔기"는, 본 발명 올리고머에 대한 약물(또는 이들의 활성화 또는 화학적 변형 형태)의 공유 부착으로부터 야기되는 공유 결합까지의 어미 소분자 약물의 부분 또는 잔기를 의미하도록, 본원에서 호환가능하게 사용되고 있다.
"생물학적 막"은, 전형적으로, 적어도 일부 생체 이물 또는 다르게는 원치 않는 물질에 대한 장벽으로서 작용하는, 분화된 세포 또는 조직으로부터 만들어진 임의의 막이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "생물학적 막"은, 예를 들어 혈액-뇌 장벽; 혈액-뇌척수액 장벽; 혈액-태반 장벽; 혈액-젖 장벽; 혈액-고환 장벽; 및 질 점막, 요도 점막, 항문 점막, 협측 점막, 설하 점막, 직장 점막 등을 포함하는 점막 장벽을 포함하는 생리학적 보호 장벽들과 연관된 막들을 포함한다. 문맥이 명확히 다르게 지시하지 않는다면, 용어 "생물학적 막"은 중간 위장관(예를 들어, 위 및 소장)과 연관된 막들을 포함하지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "생물학적 막 횡단 속도"는, 화합물이 혈액-뇌 장벽("BBB")와 같은 생물학적 장벽을 횡단하는 능력의 척도를 제공한다. 다양한 방법들이 임의의 주어진 생물학적 막을 가로지르는 분자 운반을 평가하는데 사용될 수 있다. 임의의 주어진 생물학적 장벽(예를 들어, 혈액-뇌척수액 장벽, 혈액-태반 장벽, 혈액-젖 장벽, 창자 장벽 등)과 연관된 생물학적 막 횡단 속도를 평가하는 방법은 공지되어 있고, 본원 및(또는) 관련 문헌에 기재되어 있으며(있거나), 당업자에 의해 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 "혈액-뇌 장벽을 횡단"하는 화합물은, 본원에서 기재된 바와 같은 방법을 사용하는 아테놀롤보다 더 빠른 속도로 BBB를 횡단하는 것이다.
본 발명과 관련하여, "대사 속도 감소"는, 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물(즉, 소분자 약물 자체) 또는 기준이 되는 표준 물질의 대사 속도에 비해, 수용성 올리고머-소분자 약물 콘쥬게이트의 대사 속도가 측정가능하게 감소되는 것을 의미한다. 특별한 "일차 통과 대사 속도 감소"의 경우, 소분자 약물(또는 기준이 되는 표준 물질) 및 대응 콘쥬게이트가 경구 투여되는 것을 제외하고는, 동일한 "대사 속도 감소"가 요구된다. 경구 투여되는 약물들은 위장관으로부터 문맥 순환 내로 흡수되고, 체순환에 도달하기 전에 간을 통과해야 한다. 간이 약물 대사 또는 생변환의 주된 부위이기 때문에, 상당량의 약물이 체순환에 도달하기도 전에 대사될 수 있다. 일차 통과 대사의 정도, 그리고 그에 따른 임의적인 그의 감소는 수많은 상이한 접근법들에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 동물 혈액 샘플들이 정해진 간격으로 수집되고, 대사산물 수준을 위해, 혈장 또는 혈청이 액체 크로마토그래피/질량 분광기에 의해 분석될 수 있다. 일차 통과 대사 및 다른 대사 과정들에 관련된 "대사 속도 감소"를 측정하는 다른 기법들이 공지되어 있고, 본원 및(또는) 관련 문헌에 기재되어 있고(있거나), 당업자에 의해 측정될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명 콘쥬게이트는 이하의 값들, 즉 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 15% 이상; 약 20% 이상; 약 25% 이상; 약 30% 이상; 약 40% 이상; 약 50% 이상; 약 60% 이상; 약 70% 이상; 약 80% 이상; 및 약 90% 이상 중 하나 이상을 만족하는 감소된 대사 속도 감소를 제공할 수 있다.
"경구로 생체이용 가능한" 화합물(예를 들어, 그의 소분자 약물 또는 콘쥬게이트)은, 경구 투여되는 경우, 1% 초과, 바람직하게는 10% 초과의 생체이용률을 갖는 것이며, 여기서 화합물의 생체이용률은 대사되지 않은 형태로 체순환에 도달하는, 투여된 약물 분율이다.
"알킬"은, 전형적으로 길이에 있어, 약 1 내지 20개의 원자 범위인 탄화수소 쇄를 의미한다. 그러한 탄화수소 쇄는 바람직하게는, 포화되어 있지만, 필수적인 것은 아니며, 분지형 또는 직쇄일 수 있지만, 전형적으로는 직쇄가 바람직하다. 예시적인 알킬기들은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 1-메틸부틸, 1-에틸프로필, 3-메틸펜틸 등을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "알킬"은 3개 이상의 탄소 원자들이 연관되는 경우, 시클로알킬을 포함한다.
"저급 알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 알킬기를 의미하며, 메틸, 에틸, n-부틸, i-부틸, t-부틸에 의해 예시되는 바와 같이, 직쇄 또는 분지형일 수 있다.
"비방해 치환체"는 분자 내에 존재할 때 그 분자 내에 함유된 다른 관능기와 전형적으로 비-반응성이다.
"알콕시"는 R이 알킬 또는 치환된 알킬, 바람직하게 C1-C20 알킬 (예를 들어, 메톡시, 에톡시, 프로필옥시, 벤질, 등), 바람직하게 Cl-C7인 -O-R기를 지칭한다.
"친전자체"는 친핵체와 반응할 수 있는 이온, 원자, 또는 친전자성 중심, 즉 , 전자를 구하는 중심을 갖는 원자의 이온성 또는 중성 집합을 지칭한다.
"친핵체"는 친전자체와 반응할 수 있는 이온 또는 원자 또는 친핵성 중심, 즉 친전자성 중심을 구하는 중심을 갖는 원자의 이온성 또는 중성 집합을 지칭한다.
본원에서 사용하는 "약물"은 생체 내 또는 시험관 내에서 증명할 수 있는 일부 약리학적, 종종 유리한 효과를 제공하는 물질 또는 혼합물의 임의의 제제, 배합물, 조성물을 포함한다. 이는 음식, 음식 보충제, 영양제, 뉴트리슈티칼, 약물류, 백신, 항체, 비타민제, 및 기타 유용한 제제를 포함한다. 본원에서는, 이들 용어는 환자 내에 국소 또는 전신적 효과를 만들어내는 생리학적으로 또는 약리학적으로 활성 성분도 더 포함한다.
"제약학적으로 허용되는 부형제" 또는 "제약학적으로 허용되는 담체"는 본원 발명의 조성물에 포함될 수 있고 환자에게 유의한 나쁜 독성 효과를 야기하지 않는 부형제를 의미한다.
"약리학적 유효량", "생리학적 유효량" 및 "치료학적 유효량"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 표적 조직 내에서 또는 혈액에서 활성제 및(또는) 콘쥬게이트의 바람직한 양을 제공하기에 필요한 조성물 내에 존재하는 수용성 올리고머-소분자 약물 콘쥬게이트의 양을 의미한다. 정확한 양은 다양한 인자에 의존할 것이며, 예를 들어 특별한 활성제, 조성물의 성분 및 물리적 특성, 의도되는 환자의 집단, 환자에 대한 배려사항 등에 의존되며, 본원에서 제공되고 관련 문헌에서 입수되는 정보에 기초하여 당업자에게 용이하게 결정될 수 있다.
"이관능성" 올리고머는 그속에 전형적으로 말단에 두 개의 관능기를 갖는 올리고머이다. 관능기가 동일한 경우, 올리고머는 동종-이관능성이라고 불린다. 관능기가 상이할 경우, 올리고머는 이종-이관능성이라고 부른다.
본원에서 염기성 또는 산성 반응물질은 중성, 전하를 띠는 것 또는 이들 의 상응하는 염의 형태를 포함한다.
용어 "환자"는 본원에서 기재된 바와 같이 반드시는 아니지만 전형적으로, 수용성 올리고머-소분자 약물 콘쥬게이트의 형태로 콘쥬게이트의 투여에 의하여 예방 또는 치료될 수 있는 증상이 되기 쉽거나 증상을 겪고 있는 살아있는 유기체를 의미하고, 인간 및 동물을 모두 포함한다.
"선택적" 또는 "선택적으로"는 다음에 기술될 환경들이 일어나거나 일어나지 않을 수 있음을 기재하고, 따라서, 상기 기재는 환경이 일어나는 경우와 일어나지 않은 경우를 모두 포함한다.
본원 발명은 (다른 경우 중에서) 수용성 올리고머의 단분산성 또는 이중모드 조성물로부터 얻어진 수용성 올리고머의 공유 부착에 의하여 화학적으로 변형된 소분자 약물의 조성물에 관한 것이다. 수용성 올리고머는 수용성 올리고머의 단분산성 또는 이중모드 조성물로부터 얻어지기 때문에, 본원 발명의 얻어지는 소분자 약물-올리고머 조성물은 아주 순수하고 구조적 관점으로 볼 때 잘 정의된 것이다.
본원에서 기술된 콘쥬게이트의 이점은 콘쥬게이팅된 형태이지 않은 상응하는 활성제와 비교시에, 감소된 생물학적 막 횡단 속도를 보일 수 있는 능력이다. 이론에 얽매이기를 원하지 않으면서, 분자 크기는 임의의 주어진 분자가 임의의 주어진 생물학적 막을 통과 또는 횡단할 수 있는가와 어느 정도로 통과 또는 횡단할 수 있는가를 결정하기 위한 중요한 인자라고 믿어진다. 예를 들어, 모든 보호 장벽은 아니라도 대부분은 적어도 부분적으로, 단지 상대적으로 소분자만이 통과하는 폐쇄 연접을 갖는 막을 형성하는 매우 팩킹된 세포에 따른다. 이와 같이, 주어진 소분자 약물에 대하여, 수용성 폴리머의 소분자 약물에의 부착은 필수적으로 더 큰 크기의 콘쥬게이트를 제공하고, 이 콘쥬게이트가 생물학적 막을 횡단하는 것을 막거나 비콘쥬게이팅된 소분자 약물과 비교하여 감소된 생물학적 막 횡단 속도를 가질 것이라는 예상을 준다.
이하 및 실험 부분에서 더 상세히 보여주겠지만, 수용성 올리고머를 소분자 약물 용량에 콘쥬게이팅함으로써 분자 크기를 증가시킴으로써 생물학적 막 횡단 속도를 감소하는 것은 완전히 만족스런 콘쥬게이트를 전형적으로 제공하지는 않는다. 이상적으로, 이 콘쥬게이트는 단분산성 또는 이중모드 콘쥬게이트를 포함하는 조성물로서 제공될 것이다. 다시, 이론에 얽매이길 바라지 않으면서, 콘쥬게이트 간의 모노머의 수에서 매우 작은 차이조차도 약리학적 활성, 대사, 경구 생체이용률, 생물학적 막 횡단 속도, 용해도 등과 같은 성질에서의 상대적으로 큰 차이를 제공할 수 있다고 믿어진다.
나아가, 도 10에서 제공되는 질량 스펙트럼에 의하여 증명되듯이, PEG-350와 같이 상업적으로 입수가능한 올리고머는 어느 정도의 올리고머 크기의 범위가 조성물 내에 존재한다는 점에서 사실 상대적으로 순수하지 못하다.
따라서, (더 정제를 하지 않고서) 콘쥬게이트의 합성에서 이러한 상대적으로 불순한 올리고머 조성물의 사용은 (콘쥬게이트를 형성하기 위하여 사용되는 조성물에서의 분자량의 넓은 범위의 결과로서) 콘쥬게이트 분자량 크기의 넓은 범위를 초래한다. 그 결과, 얻어지는 콘쥬게이트 조성물은 많은 종류의 콘쥬게이트를 포함하며, 여기서, 각 콘쥬게이트는 다른 성질을 갖는 것으로 예상될 것이다. 조절 및 의료적 견해로부터, 이상적으로, 현저하게 상이한 성질을 갖는 잔기를 포함하는 조성물은 회피된다.
그 결과, 본원 발명은 (상응하는 비콘쥬게이팅된 소분자 약물과 비교하여) 상대적으로 큰 콘쥬게이트를 제공하여 (다시, 상응하는 비콘쥬게이팅된 소분자 약물과 비교하여) 생물학적 막 횡단을 감소할 뿐만 아니라, 실질적으로 순수하여 조성물의 일관되고 바람직한 활성 및 다른 성질을 보장한다. 이처럼, 단분산성 또는 이중모드 콘쥬게이트를 포함하는 조성물이 제공되며, 각 콘쥬게이트는 수용성 올리고머와 안정한 결합에 의하여 공유적으로 부착된 소분자 약물로부터 유도된 잔기로 구성된다. 여기서, 상기 콘쥬게이트는 수용성 올리고머와 부착되지 않은 소분자 약물의 생물학적 막 횡단 속도와 비교하여 감소된 생물학적 막 횡단 속도를 보여준다.
앞서 지적한 바와 같이, 콘쥬게이트를 형성하는 잘 정의된 올리고머의 조성물로부터 별개 올리고머의 용도는 상응하는 소분자 약물과 관련된 특정 성질을 유리하게 바꿀 수 있다. 예를 들어, 본원 발명의 콘쥬게이트는 임의의 다수의 적당한 투여 경로, 예컨대 비경구, 경구, 경피, 협측, 폐, 또는 코로 투여될 때, 생물학적 막(예컨대 혈액-뇌 장벽 및 혈액-태반 장벽과 연관된 생물학적 막)을 통한 감소된 침투를 보여준다. 경구 전달을 의도한다면 위-창자(GI) 벽 및 체순환 내로 여전히 횡단하면서, 콘쥬게이트가 생물학적 막(혈액-뇌 장벽 및 혈액-태반 장벽과 연관한 생물학적 막)을 느리게, 최소로 또는 유효적으로 전혀 통과하지 않는 것이 바람직하다. 폐 전달을 의도한다면, 투여되는 콘쥬게이트는 바람직하게 체순환 내로 횡단하지 않거나 감소된 폐 조직-혈액 장벽 횡단 속도를 가져서, 폐에서의 국소 약리학적 활성에 대한 국소 허파에서의 양이 유지된다. 더구나, 본원 발명의 콘쥬게이트는 콘쥬게이팅된 형태에서의 생체이용률 뿐만 아니라 생체활성의 정도를 유지한다.
혈액-뇌 장벽 ("BBB")에 관하여, 이 장벽은 혈액에서 뇌로의 약물의 운반을 제한한다. 이 장벽은 폐쇄 연접에 의해 결합된 독특한 상피 내피 세포의 연속층으로 이루어진다. BBB의 총 표면적의 95% 초과로 포함되는 이 뇌 모세관은 대부분의 용질 및 약물이 뇌 신경 체계 내로 들어가기 위한 주요 경로를 대표한다.
일부 화합물이 뇌 조직 내에 적당한 농도를 달성하도록 약리학적으로 작용하는 것이 바람직할 수 있지만, 뇌 조직에서 아무런 유용한 약리학적 활성이 없는 많은 다른 화합물이 중추 신경계의 조직에 궁극적으로 도달 할 수 있다. 이들 비중앙적으로 작용하는 화합물을 중추 신경계로 들어가는 횡단 속도를 감소함으로써, 중추 신경계의 부작용의 위험을 감소시키고 치료적 효과도 증가시킬 수 있다.
혈액-뇌 장벽 횡단 능력의 정도가 용이하게 알려지지 않은 화합물에 대하여, 이러한 활성은 본원에서 기술된 바와 같은 래트 뇌 관류 ("RBP") 모델과 같은 적당한 동물 모델을 사용하여 결정할 수 있다. 간략히 하면, RBP 기술은 목동맥에 캐뉼라를 부착하고 다음에 조절된 조건하에서 화합물 용액으로 관류를 하고, 세척 단계를 거쳐 맥관 공간에 남아있는 화합물을 제거하는 것을 포함한다. (이러한 분석을 예를 들어 업소션 시스템스(Absorption Systems; Exton, PA 소재)와 같은 약정 연구 기관에 의하여 수행될 수 있다). 더 구체적으로, RBP 모델에서, 캐뉼라를 좌측 목동맥에 설치하고 측면 분지를 묶어버린다. 단일 통과 관류 실험에서 화합물 (5마이크로몰)을 함유하는 생리적 완충액을 10 mL/분의 유동 속도로 관류시킨다. 30 초 후에, 관류를 멈추고, 뇌 맥관 함유물을 화합물이 없는 완충액으로 추가 30초 동안 씻어냈다. 다음에 뇌 조직을 빼내고, 탠덤 질량 분광기 검출(LC/MS/MS)로써 액체 크로마토그래피를 통해 화합물 농도에 대하여 분석하였다. 이와 별법으로, 혈액-뇌 장벽 투과성을 화합물의 분자적 극성 표면적 ("PSA")의 계산에 의하여 추정할 수 있다. 이는 분자 내에 극성 원자 (대개 산소, 질소 및 부착된 수소)의 표면 기여도의 총합으로 정의된다. PSA는 혈액-뇌 장벽 운반과 같은 화합물 운반 성질과 관련이 있는 것으로 보여진다. 화합물의 PSA를 결정하기 위한 방법들은 예를 들어 문헌 [Ertl, P., et al., J. Med. Chem. 2000,43, 3714-3717] 및 [Kelder, J., et al., Pharm. Res. 1999, 16, 1514-1519]에서 찾을 수 있다.
혈액-뇌 장벽에 대한 유사한 장벽은 혈액-뇌척수액 장벽이다. 혈액-뇌척수액 장벽은 장벽을 생성하거나, 그렇지않으면 심실 시스템 및 거미막 공간에 대부분 위치하는 뇌척수액에 도달하는 독성 또는 바람직하지 않은 물질의 양을 감소시킨다.
환자에게 투여된 화합물(예를 들어, 소분자 약물 또는 콘쥬게이트)이 혈액-뇌척수액 장벽을 횡단하는지 여부 및 어느 정도 횡단하는지를 결정하기 위하여, 알려진 양의 화합물을 주입을 통하여 마우스에게 투여할 수 있다. 화합물을 투여한 날부터 며칠 후에, 마우스 뇌척수액의 샘플을 화합물의 존재 및 양에 대하여 분석할 수 있다.
혈액-태반 장벽은 모체 순환에 의하여 분배된 대부분의 독물로부터 성장 중의 태아를 보호한다. 이 장벽은 태반에서 어머니와 태아의 순환 혈액 사이에서 수개의 세포층으로 이루어진다.
혈액-뇌 장벽의 경우와 같이, 태반 장벽은 완전히 불투과성이지 않고, 대부분의 독물의 확산을 유효적으로 감소한다. 임신한 포유류에게 투여된 화합물 (예를 들어 소분자 약물 또는 콘쥬게이트)이 혈액-태반 장벽을 횡단하는지 여부 및 어느 정도 횡단하는지를 결정하기 위하여, 알려진 양의 화합물을 주입에 의하여 임신한 마우스에 투여할 수 있다. 화합물의 투여 다음 몇일째, 마우스의 태아 조직의 샘플을 화합물의 존재 및 양에 대하여 분석하였다.
생물학적 막이 체순환에서의 특정 물질이 횡단하는 것을 분리하고 제한하는 점에서 혈액-젖 장벽은 혈액-뇌 장벽과 유사하다. 혈액-젖 장벽의 경우, 생물학적 막은 특정 물질이 유선으로 통과해 들어가는 것을 막는다. 임신한 포유류에 투여된 화합물 (예를 들어 소분자 약물 또는 콘쥬게이트)이 혈액-젖 장벽을 횡단하는지 여부 및 횡단하는 양을 결정하기 위하여, 알려진 양의 화합물을 주입에 의하여 젖분비하는 마우스에 투여할 수 있다. 화합물의 투여후 며칠 후에, 유선으로부터 나온 젖 샘플을 화합물의 존재 및 양에 대하여 분석할 수 있다.
혈액-고환 장벽은 남성 생식선을 정렬시키고 폐쇄 연접에 의하여 연결된 버팀세포 (세르톨리 세포(Sertoli cells))로 구성되어 있다. 남성 포유류에게 투여된 화합물 (예를 들어 소분자 약물 또는 콘쥬게이트)가 혈액-고환 장벽을 횡단할 수 있는지 여부 및 어느 정도로 횡단하는지를 결정하기 위하여, 알려진 양의 화합물을 남성 마우스에게 주입에 의하여 투여할 수 있다. 화합물의 투여한지 몇일째, 마우스의 고환을 제거하고 화합물의 존재 및 양에 대하여 분석하였다.
점막 장벽은 바람직하지 않은 물질들이 체순환에 도달하는 것을 전형적으로 차단하거나 감소하는 다른 생물학적 막을 나타낸다. 관심있는 특별한 점막 구역에 화합물을 투여하고 화합물의 존재 및 양을 분석하는 것은 화합물이 그 특별한 점막 구역을 횡단하는가 여부 및 어느 정도 횡단하는가를 결정할 수 있다.
임의의 생물학적 막에 관하여, 수용성 올리고머-소분자 약물 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물의 생물학적 막 횡단속도와 비교하여 감소되는 생물학적 막 횡단속도를 보여준다. 생물학적 막 횡단 속도의 예시적인 감소는 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물의 생물학적 막 횡단속도와 비교하여 적어도 약 5 %; 적어도 약 10%; 적어도 약 25%; 적어도 약 30%; 적어도 약 40%; 적어도 약 50%; 적어도 약 60%; 적어도 약 70%; 적어도 약 80%; 또는 적어도 약 90%의 감소를 포함한다. 콘쥬게이트에 대한 생물학적 막 횡단 속도의 바람직한 감소는 적어도 약 20%이다. 일부 태양에서, 본원에서 기술된 생물학적 막의 하나 이상을 횡단하는 소분자 약물 자체가 바람직하다.
감소된 생물학적 막 횡단 속도를 나타내는 콘쥬게이트는 전형적으로 하기 구조를 포함한다.
O-X-D
상기 식에서, O는 수용성 올리고머에 해당하고, X는 안정한 결합에 해당하고, D는 소분자 약물로부터 유도된 잔기에 해당한다.
소분자 약물로부터 유래된 잔기는 한 의미로서는 모 소분자 약물과 회합되지 않은 원자와 전형적으로 공유결합을 통하여 연결된다는 점에서 모 소분자 약물과 상이하다. 그러나, 다른 원자와 연결되는 차이점을 제외하고는, 소분자 약물로부터 유래된 잔기는 소분자 약물과 본질적으로 동일하고, 유사한 약리학적 작용 메카니즘을 가질 것이다. 따라서, 소분자 약물에 관한 논의는 소분자 약물로부터 유래된 잔기를 기술하는 데에도 동일하게 잘 작용될 것이다.
콘쥬게이트에서 사용되는 활성제는 소분자 약물, 즉 약 1000 달톤 미만의 분자량을 갖는 약리학적으로 활성 화합물이다. 본 발명의 목적상, 소분자 약물은 올리고펩티드, 올리고뉴클레오티드, 및 약 1000 달톤 미만의 분자량을 갖는 다른 생체분자를 포함한다. 또한, 용어 "소분자 약물"에 관계되는 것은 자연 서열 및 앞서 언급한 분자량 이내에 있는 변형물을 포함하는 펩티드, 단백질 또는 항체의 임의의 단편이다.
소분자 약물의 예시적인 분자량은 약 950 미만; 약 900 미만; 약 850 미만; 약 800미만; 약 750 미만; 약 700 미만; 약 650 미만; 약 600 미만; 약 550 미만; 약 500 미만; 약 450 미만; 약 400 미만; 약 350 미만; 및 약 300 미만의 분자량을 포함한다.
본원 발명에서 사용되는 소분자 약물은 키랄이라면, 라세미 혼합물 또는 광학적으로 활성 형태, 예컨대 단일 광학적 활성 거울상이성질체, 또는 거울상이성질체의 임의의 형태 및 비율로부터 얻을 수 있다. 또한, 소분자 약물은 하나이상의 기하 이성질체를 가질 수 있다.
기하 이성질체에 대해서, 조성물은 단지 단일 기하 이성질체 또는 두 개 이상의 기하 이성질체의 혼합물을 포함할 수 있다. 본원 발명에서 사용되는 소분자 약물은 통례적으로 더 활성일 수 있거나, 일부 정도의 변형을 가질 수 있다. 예를 들어, 소분자 약물은 올리고머의 공유 부착 이전 또는 이후에 부착된 목표하는 시약, 태그, 또는 운반자를 가질 수 있다. 이와 별법으로, 소분자 약물은 인지질(예를 들어, 디스테아로일포스파티딜에탄올아민 즉 "DSPE," 디팔미토일포스파티딜에탄올아민 즉 "DPPE" 등) 또는 작은 지방산과 같이 부착된 친유성 잔기를 가질 수 있다. 그러나, 어떤 경우에는 소분자 약물 잔기 용량은 친유성 잔기와의 부착을 포함하지 않는 것이 바람직하다.
본원 발명의 올리고머와 커플링에 사용되는 소분자는 다음의 어느 것일 수 있다. 적당한 시약은 예를 들어 순환기 약물, 항경련제, 근육 이완제, 소염제, 식욕 억제제, 편두통 억제제, 근육 수축제, 항감염제 (항생제, 항바이러스제, 항진균제, 백신) 항관절염제, 항말라리아제, 진토제, 기관지확장제, 항혈전제, 항고혈압제, 심혈관 약물, 항부정맥제, 항산화제, 항천식제, 이뇨제, 지질 조절제, 항안드로젠제, 구충제, 항응고제, 종양치료제, 종양제, 저혈당제, 영양공급제 및 보충제, 성장 보충제, 장염치료제, 백신, 항체, 진단시약 및 조영제를 포함한다.
더 특별하게는, 활성제는 소분자, 올리고펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 모방체, 단편, 또는 유사체, 스테로이드, 뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드, 전해질 등을 비제한적으로 포함하는 다수의 구조적 부류 중 하나일 수 있다. 바람직하게는, 본원 발명의 올리고머에 커플링하기 위한 활성제는 올리고머에 공유 부착하기에 적합한 자유 히드록시, 카르복실, 티오, 아미노기 (즉 "핸들") 등을 갖는다.
이와 별법으로, 약물은 바람직하게는 존재하는 관능기의 하나를 올리고머와 약물 사이의 안정된 공유 결합의 형성에 적합한 관능기로의 전환에 의하여 적합한 "핸들"의 도입에 의하여 개질된다. 양 접근은 실시예 부분에서 설명될 것이다.
본원 발명의 올리고머에 공유 부착하기 적당한 활성제의 구체적 예는 소분자 모방체 및 다음의 활성 단편 (변형물을 포함함)을 포함한다: 아스파리기나제, 암독소버 (DAPD), 안티드(antide), 베카프러민(becaplermin), 칼시토닌(calcitonin), 시아노비린(cyanovirin), 데니류킨 디프티톡스 (denileukin diftitox), 에리트로포이에틴(erythropoietin) (EPO), EPO 작용제 (예를 들어 길이 약 10-40 아미노산으로부터 유래되고 WO 96/40749에서 기술된 바와 같은 특별 코어 서열을 포함하는 펩티드), 도르나제 알파(dornase alpha), 적혈구생성 자극 단백질 (NESP), 응고 인자 예컨대 인자 V, 인자 VII, 인자 VIIa, 인자 VIII, 인자 IX, 인자 X, 인자 XII, 인자 XIII, 폰 윌브란드 인자; 세레다제(ceredase), 세레자임(cerezyme), 알파-글루코시다제, 콜라겐, 시클로스포린, 알파 디펜신(defensin), 베타 디펜신, 엑스딘(exedin)-4, 과립구 콜로니 자극 인자 (GCSF), 트롬보포이틴 (TPO), 알파-1 프로티나제 억제제, 엘카토닌(elcatonin), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GMCSF), 피브리노겐, 필그라스팀(filgrastim), 성장 호르몬 인간 성장 호르몬(hGH), 성장 호르몬 방출 호르몬 (GHRH), GRO-beta, GRO-베타 항원, 뼈 형태발생 단백질 예컨대 뼈 형태발생 단백질-2, 뼈 형태발생 단백질-6, OP-1; 산성 섬유모세포 성장 인자, 염기성 섬유모세포 성장 인자, CD-40 리간드, 헤파린, 인간 혈청 알부민, 저분자량 헤파린 (LMWH), 인터페론 예컨대 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터페론 오메가, 인터페론 타우, 교감 인터페론; 인터루킨 및 인터루킨 수용체 예컨대 인터루킨-1 수용체, 인터루킨-2, 인터루킨-2 융합 단백질, 인터루킨-1 수용체 길항제, 인터루킨-3, 인터루킨-4, 인터루킨-4 수용체, 인터루킨-6, 인터루킨-8, 인터루킨-12, 인터루킨-13 수용체, 인터루킨-17 수용체; 락토페린 및 락토페린 단편, 성장 호르몬 방출 호르몬 (LHRH), 인슐린, 프로-인슐린, 인슐린 유사체 (예를 들어, U. S. Patent No. 5,922, 675에 기재된 바와 같이 모노-아실레이트 인슐린), 아밀린, C-펩티드, 소마토스타틴, 옥토레오티드를 비롯한 소마토스타틴 유사체, 바소프레신, 난포 자극 호르몬 (FSH), 인플루엔자 백신, 인슐린형 성장 인자 (IGF), 인슐린트로핀, 대식세포 콜로니 자극 인자 (M-CSF), 플라스미노겐 활성제 예컨대 알테플라제(alteplase), 우로키나제(urokinase), 레테플라제(reteplase), 스트렙토키나제(streptokinase), 파미테플라제(pamiteplase), 라노테플라제(lanoteplase), 및 테네플라제(teneteplase); 신경 성장 인자 (NGF), 오스테오프로테게린(osteoprotegerin), 혈소판 유도 성장 인자, 조직 성장 인자, 전환 성장 인자-1, 혈관 상피 성장 인자, 백혈병 억제 인자, 케라티노사이트 성장 인자 (KGF), 아교 성장 인자 (GGF), T 세포 수용체, CD 분자/항원, 종양 괴사 인자 (TNF), 단핵세포화학유인물질 단백질-1, 상피 성장 인자, 부갑상선 호르몬 (PTH), 글루카곤형 펩티드, 소마토트로핀, 티모신 알파 1, 티모신 알파 1 IIb/IIIa 억제제, 티모신 베타 10, 티모신 베타 9, 티모신 베타 4, 알파-1 안티트립신, 포스포디에스테라제 (PDE) 화합물, VLA-4 (very late antigen-4), VLA-4 억제제, 비포스포네이트, 호흡기 융합 바이러스 항체, 낭성섬유증 막전도 조절자 (CFTR) 유전자, 데옥실리보뉴클레아제 (Dnase), 살균/침투 향상 단백질 (BPI), 및 항-CMV 항체. 예시적인 모노클로날 항체는 에타너셉트(etanercept; IgG1의 Fc 부분에 연결된 인간 75kD TNF 수용체의 세포외 리간드 결합 부분으로 이루어진 이량체 융합단백질), 압식시맙(abciximab), 아페리오모맙(afeliomomab), 바실릭시맙(basiliximab), 다클리주맙(daclizumab), 인플릭시맙(infliximab), 이브리투모맙(ibritumomab) 티우엑세탄(tiuexetan), 미투모맙(mitumomab), 무로모납(muromonab)-CD3, 요오딘 131 토시투모맙(tositumomab) 콘쥬게이트, 올리주맙(olizumab), 리툭시맙(rituximab), 및 트라스투주맙(trastuzumab) (허셉틴(herceptin))을 포함한다.
본 발명의 올리고머에 공유부착하기 적당한 추가 시약의 비제한적인 예로 아미포스틴(amifostine), 아미오다론(amiodarone), 아미노카프로산, 아미노히푸레이트 나트륨(aminohippurate sodium), 아미노글루테티미드, 아미노레불린산(aminolevulinic acid), 아미노살리실산, 암사크린(amsacrine), 아나그렐리드(anagrelide), 아나스트로졸(anastrozole), 아스파라기나제, 안트라시클린, 벡사로텐(bexarotene), 비칼루타미드(bicalutamide), 블레오마이신(bleomycin), 부세렐린(buserelin), 부술판(busulfan), 카베르골린(cabergoline), 카펙시타빈(capecitabine), 카르보플라틴(carboplatin), 카르무스틴(carmustine), 클로람부신(chlorambucin), 실라스타틴 나트륨(cilastatin sodium), 시스플라틴(cisplatin), 클라드리빈(cladribine), 클로드로네이트(clodronate), 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 시프로테론(cyproterone), 시타라빈(cytarabine), 캄토테신(camptothecin), 13-시스 레틴산(retinoic acid), 올 트랜스 (all trans) 레틴산; 다카르바진(dacarbazine), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 데페록사민(deferoxamine), 덱사메타손(dexamethasone), 디클로페낙(diclofenac), 디에틸스틸베스트롤(diethylstilbestrol), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신, 에피루비신, 에스트라무스틴(estramustine), 에토포시드(etoposide), 엑세메스탄(exemestane), 펙소페나딘(fexofenadine), 플루다라빈(fludarabine), 플루드로코르티손(fludrocortisone), 플루오로우라실, 플루옥시메스테론(fluoxymesterone), 플루타미드(flutamide), 겜시타빈(gemcitabine), 에피네프린, L-도파, 히드록시우레아, 이다루비신(idarubicin), 이포스파미드(ifosfamide), 이마티닙(imatinib), 이리노테칸(irinotecan), 이트라코나졸, 고세렐린(goserelin), 레트로졸, 류코보린(leucovorin), 레바미솔(levamisole), 리시노프릴(lisinopril), 로보티록신 나트륨(lovothyroxine sodium), 로무스틴(lomustine), 메클로레타민(mechlorethamine), 메드록시프로게스테론(medroxyprogesterone), 메게스트롤(megestrol), 멜파란(melphalan), 머캅토푸린(mercaptopurine), 메타라미놀 비타르타레이트(metaraminol bitartrate), 메토트렉세이트(methotrexate), 메토클로프라미드(metoclopramide), 멕시레틴(mexiletine), 미토마이신(mitomycin), 미토탄(mitotane), 미톡산트론(mitoxantrone), 날록손, 니코틴, 닐루타미드(nilutamide), 옥트레오티드(octreotide), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 파미드로네이트(pamidronate), 펜토스타틴(pentostatin), 필카마이신(pilcamycin), 포르피머(porfimer), 프레드니손(prednisone), 프로카바진(procarbazine), 프로클로르페라진(prochlorperazine), 온단세트론(ondansetron), 랄티트렉세드(raltitrexed), 시롤리무스(sirolimus), 스트렙토조신(streptozocin), 타크롤리무스(tacrolimus), 타목시펜(tamoxifen), 테모졸로미드(temozolomide), 테니포시드(teniposide, 테스토스테론, 테트라히드로카나비놀, 탈리도미드, 티오구아닌, 티오테파(thiotepa), 토포테칸(topotecan), 트레티노인(tretinoin), 발루비신(valrubicin), 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine), 빈데신(vindesine), 비노렐빈(vinorelbine), 돌라세트론(dolasetron), 그라니세트론(granisetron); 포르모테롤(formoterol), 플루티카손(fluticasone), 루프롤리드(leuprolide), 미다졸람(midazolam), 알프라졸람(alprazolam), 암포테리신(amphotericin) B, 포도필로톡신(podophylotoxins), 뉴클레오시드 항바이러스제, 아로일 히드라존, 수마트립탄(sumatriptan); 마크롤리드 예컨대 에리트로마이신, 올레안도마이신(oleandomycin), 트롤레안도마이신(troleandomycin), 록시트로마이신(roxithromycin), 클라리트로마이신(clarithromycin), 다베르신(davercin), 아지트로마이신(azithromycin), 플루리트로마이신(flurithromycin), 디리트로마이신(dirithromycin), 조사마이신(josamycin), 스피로마이신(spiromycin), 미데카마이신(midecamycin), 류코마이신, 미오카마이신(miocamycin), 로키타마이신(rokitamycin) , 안다지트로마이신(andazithromycin), 및 스위놀리드(swinolide) A; 플루오로퀴놀론 예컨대 시프로플록사신(ciprofloxacin), 오플록사신(ofloxacin), 레보플록사신(levofloxacin), 트로바플록사신(trovafloxacin), 알라트로플록사신(alatrofloxacin), 목시플록시신(moxifloxicin), 노르플록사신(norfloxacin), 에녹사신(enoxacin), 그레파플록사신(grepafloxacin), 가티플록사신(gatifloxacin), 로메플록사신(lomefloxacin), 스파르플록사신(sparfloxacin), 테마플록사신(temafloxacin), 페플록사신(pefloxacin), 아미플록사신(amifloxacin), 플레록사신(fleroxacin), 토수플록사신(tosufloxacin), 프루리플록사신(prulifloxacin), 이르록사신(irloxacin), 파주플록사신(pazufloxacin), 클리나플록사신(clinafloxacin), 및 시타플록사신(sitafloxacin) ; 아미노글리코시드, 예컨대 겐타마이신(gentamicin), 네틸마이신(netilmicin), 파라메신(paramecin), 토브라마이신(tobramycin), 아미카신(amikacin), 카나마이신(kanamycin), 네오마이신(neomycin), 및 스트렙토마이신(streptomycin), 반코마이신(vancomycin), 테이코플라닌(teicoplanin), 람폴라닌(rampolanin), 미데플라닌(mideplanin), 콜리스틴(colistin), 답토마이신(daptomycin), 그라미시딘(gramicidin), 콜리스티메테이트(colistimethate); 폴리믹신(polymixins) 예컨대 폴리믹신 B, 카프레오마이신(capreomycin), 바시트라신(bacitracin), 페넴(penem); 페니실린 G, 페니실린 V와 같이 페니실리나제에 민감한 약제를 비롯한 페니실린; 메티실린(methicillin), 옥사실린(oxacillin), 클록사실린(cloxacillin), 디클록사실린(dicloxacillin), 플록사실린(floxacillin), 나프실린(nafcillin)과 같이 페니실리나제에 내성인 시약; 그람 음성 미생물 활성제, 예컨대 암피실린(ampicillin), 아목시실린(amoxicillin), 및 헵타실린(hetacillin), 실린(cillin), 및 갈람피실린(galampicillin); 항슈도모날 페니실린 예컨대 카르베니실린 (carbenicillin), 티카르실린(ticarcillin), 아즈록실린(azlocillin), 메즈록실린(mezlocillin), 및 피페라실린(piperacillin); 세팔로스포린 예컨대 세프포독심(cefpodoxime), 세프프로질(cefprozil), 세프트부텐(ceftbuten), 세프티족심(ceftizoxime), 세프트리악손(ceftriaxone), 세팔로틴(cephalothin), 세파피린(cephapirin), 세팔렉신(cephalexin), 세프라드린(cephradrine), 세폭시틴(cefoxitin), 세파만돌(cefamandole), 세파졸린(cefazolin), 세팔로리딘(cephaloridine), 세파클로(cefaclor), 세파드록실(cefadroxil), 세팔로글리신(cephaloglycin), 세푸록심(cefuroxime), 세포라니드(ceforanide), 세포탁심(cefotaxime), 세파트리진(cefatrizine), 세파세트릴(cephacetrile), 세페핌(cefepime), 세픽심(cefixime), 세포니시드(cefonicid), 세포페라존(cefoperazone), 세포테탄(cefotetan), 세프메타졸(cefmetazole), 세프타지딤(ceftazidime), 로라카르베프(loracarbef), 및 목사락탐(moxalactam), 아즈트레오남(aztreonam)와 같은 모노박탐(monobactams) ; 및 카르바페넴(carbapenem) 예컨대 이미페넴(imipenem), 메로페넴(meropenem), 펜타미딘(pentamidine) 이세티오우에이트(isethiouate), 알부테롤(albuterol) 술페이트, 리도케인, 메타프로테레놀(metaproterenol) 술페이트, 베클로메타손(beclomethasone) 디프레피오네이트(diprepionate), 트리암시놀론(triamcinolone) 아세트아미드, 부데소니드 아세토니드, 플루티카손(fluticasone), 이프라트로피움(ipratropium) 브로마이드, 플루니솔리드(flunisolide), 크로몰린(cromolyn) 나트륨 및 에르고타민(ergotamine) 타르트레이트; 탁산 예컨대 파클리탁셀(paclitaxel); SN-38, 및 티르포스티딘(tyrphostine)을 비제한적으로 포함한다.
상기 예시한 약물은 적용 가능한 경우, 유사체, 작용제, 길항제, 억제제, 이성질체, 동질이상체, 및 제약학적으로 허용되는 염 형태를 포함하는 것을 의미한다. 이에 따라서, 예를 들어, 상기에 제시된 예시적인 약물이 상대적으로 크고 소분자 약물로서 분류되어 질 수 없는 한도까지는, 상기 예시적인 약물은 유사한 활성을 가지나 작은 크기를 갖는 그 큰 분자의 유사체를 사용할 수 있기 때문에 여전히 나열하였다.
본원 발명에서 특별히 잘 만족하는 소분자 약물은 생물학적 막을 측정가능할 정도로 횡단할 수 있는 것들이다. 피부 장벽을 통한 경로를 나타내는 소분자 약물도 고려된다. 몇가지 경우에서, 소분자 약물은 경구 또는 심지어 비경구로 투여될 경우 현저한 정도로 생물학적 장벽을 바람직하지 않게 횡단하는 것이다. 예를 들어, 혈액-뇌 장벽을 바람직하지 않게 횡단하는 소분자 약물은 아테놀롤보다 더 큰 뇌 섭취율을 보여주는 것이다. 이와 관련하여, 본원에서 기술된 바와 같이 측정시에 약 15 pmol/gm 뇌/초보다 큰 뇌 섭취율 ("BUR")을 갖는 소분자 약물은 혈액-뇌 장벽을 바람직하지 않게 횡단하는 소분자 약물의 비제한적인 사례이다.
이와 같이, 혈액-뇌 장벽에 관하여, 이들 약물의 콘쥬게이션이 더적은 중추 신경계 부작용을 갖는 분자를 제공하기 때문에 혈액-뇌 장벽을 횡단하는 비-중추 신경계 징후에 의도되는 소분자 약물이 그럼에도 불구하고 바람직하다. 예를 들어, 구조적으로 관련된 뉴클레오티드 및 뉴클레오시드 (예를 들어, 8-아자구아닌, 6-머캅토푸린(mercaptupurine), 아자티오프렌(azathioprene), 티오이노시네이트(thioinosinate), 6-메틸티오이노시네이트(methylthioinosinate), 6-티오우릭산(6-thiouric acid), 6-티오구아닌, 비다라빈(vidarabine), 클라드리빈(cladribine), 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacytidine), 에리트로-9-(2-히드록시-3-노닐) 아데닌, 플루다라빈(fludarabine), 겜시타빈(gemcitabine) 등)이 바람직하다.
플루다라빈에 관하여, 이 소분자 약물은 약 70% 경구 생체이용률을 보여주고, 만성 림프구 백혈병의 치료 및 머리 세포 백혈병, 비-호지킨스 림프종, 및 균상 식육종의 치료에 사용된다. 또한 플루다라빈은 실명, 혼수상태 및 심지어 사망을 포함하는 심각한 신경학적 효과와 함께 중추 신경계 관련 부작용을 보여준다. 래트 및 토끼에 대한 동물 연구에서 이 약물도 기형발생일 수 있다는 것을 가리킨다. 이처럼, 플루다라빈 콘쥬게이트는 혈액-뇌 장벽 및(또는) 혈액-태반 장벽을 통하여 약물의 침투를 차단하거나 이들 장벽을 횡단하는 횡단 속도를 적어도 느리게 하여, 플루다라빈의 나쁜 부작용을 완화시키는 데에 효과적인 것으로 예상된다.
말초 활성에 대하여 전형적으로 사용되지만, 공통의 중추 신경계 관련 부작용을 갖는 소분자 약물의 다른 부류는 항히스타민의 소분자 약물 부류이다. 구조적으로, 상기 부류로서의 항히스타민은 아미노알킬 에테르로서 관련있다. 이러한 소분자 약물은 디펜히드라민(diphenhydramine), 브로모디펜히드라민(bromodiphenhydramine), 독실아민(doxylamine), 카르비녹사민(carbinoxamine), 클레마스틴(clemastine), 디멘하이드리네이트(dimenhydrinate), 트리펠렌아민(tripelennamine), 피릴아민(pyrilamine), 메타피릴렌(methapyrilene), 톤질아민(thonzylamine), 페니라민(pheniramine), 클로르페니라민(chlorpheniramine), 덱스클로르페니라민(dexchlorpheniramine), 브로모페니라민(bromopheniramine), 덱스브로모페니라민(dexbromopheniramine), 피로부타민(pyrrobutamine), 트리프롤리딘(triprolidine), 프로메타진(promethazine), 트리메프라진(trimeprazine), 메트딜라진(methdilazine), 시클리진(cyclizine), 클로르시클리진(chlorcyclizine), 디페닐피랄린(diphenylpyraline), 페닌다민(phenindamine), 디메틴덴(dimethindene), 메클리진(meclizine), 부클리진(buclizine), 안타졸린(antazoline), 시프로헵타딘(cyproheptadine), 아자타딘(azatadine), 테르페나딘(terfenadine), 펙소페나딘(fexofenadine), 아스테미졸(astemizole), 세티리진(cetirizine), 아젤라스틴(azelastine), 아자타딘(azatadine), 로라타딘(loratadine), 및 데슬로라타딘(desloratadine)을 포함한다.
혈액-뇌 장벽 횡단 속도에서의 감소가 바람직한 소분자 약물의 또 다른 부류는 아편유사제 길항제이다. 아편유사제 길항제는 날록손, N-메틸날록손, 6-아미노-14-히드록시-17-알릴노르데소모르핀, 날트렌돌(naltrendol), 날트렉손(naltrexone), N-메틸날트렉손(methylnaltrexone), 날부핀(nalbuphine), 부토르파놀(butorphanol), 시클라조신(cyclazocine), 펜타조신(pentazocine), 날메펜(nalmephene), 날트렌돌(naltrendol), 날트린돌(naltrindole), 노르-비날토르피민(binaltorphimine), 옥실로르판(oxilorphan), 6-아미노-6-데속소-날록손, 펜타조신(pentazocine), 레발로르파메틸날트렉손(levallorphanmethylnaltrexone), 부프레노르핀(buprenorphine), 시클로르판(cyclorphan), 레발로르판(levalorphan), 및 날로르핀(nalorphine), 뿐만 아니라 미국 특허 번호 5,159,081, 5,250,542, 5,270,328, 및 5,434,171 및 문헌 [Knapp et al. "The pharmacology of Opiod Peptides" L. F. Tseng Ed. , p.15, Harwood Academic Publishers, 1995]에 기재된 것들을 포함한다. 그러나, 일반적으로, 옥시모르폰 화학 부류의 임의의 일원(상기 아편유사제 길항제를 비롯하여 옥시모르폰, 코데인, 옥시코돈, 모르핀, 에틸모르핀, 디아세틸모르핀, 히드록모폰, 디히드로코데인, 디히드로모르핀, 및 메틸디히드로모르핀을 포함함)도 포함한다.
다른 소분자 약물의 화학 종류는 백금 배위 기재 약물이다. 이들은 예를 들어 시스-플라틴, 히드로플라틴, 시스-플라틴, 카르보플라틴 및 옥살리플라틴을 포함한다.
콘쥬게이팅되기에 특히 잘 적합한 다른 부류의 소분자 약물은 스테로이드 부류이다. 바람직한 스테로이드는 분자 구조에 히드록시기를 갖는다 (또는 환원되어 히드록시기를 형성할 수 있는 아실기를 갖는다). 스테로이드의 비제한적인 예는 알도스테론, 데옥시코르티코스테론, 플루드로코르티손(fludrocortisone), 코르티손(cortisone), 히드로코르티손(hydrocortisone), 프레드니솔론(prednisolone), 프레드니손, 메드리손(medrysone), 메프레드니손(meprednisone), 알클로메타손(alclometasone), 베클로메타손(beclomethasone), 베타메타손(betamethasone), 덱사메타손(dexamethasone), 디플로라손(diflorasone), 플루메타손(flumethasone), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 파라메타손(paramethasone), 암시노니드(amcinonide), 데소니드(desonide), 플루오시놀론(fluocinolone), 플루니솔리드(flunisolide), 플루란드레놀리드(flurandrenolide), 트리암시놀론(triamcinolone), 클로베타솔(clobetasol), 할시노니드(halcinonide), 모메타손(mometasone), 클로코르톨론(clocortolone) 및 데속시메타손을 포함한다.
이 부류에서 플루오로퀴놀론 및 관련 소분자 약물을 사용하여 콘쥬게이트를 형성할 수 있다. 예시적인 플루오로퀴놀론은 이들 시프로플록사신, 오플록사신, 레보플록사신, 트로바플록사신, 알라트로플록사신, 목시플록시신, 노르플록사신, 에녹사신, 그레파플록사신, 가티플록사신, 로메플록사신, 스파르플록사신, 테마플록사신, 페플록사신, 아미플록사신, 플레록사신, 토수플록사신, 프루리플록사신, 이르록사신, 파주플록사신, 클리나플록사신 및 시타플록사신을 포함한다.
이들의 몇몇 일원은 기형발생물질로 알려져 있는 말초적 징후에 일반적으로 사용되는 약물의 다른 부류는 소분자 약물 중 레티노이드 부류이다. 레티노이드인 구조적으로 관련된 부류는 비제한적으로 레티놀, 레티날, 3-데히드로레티놀, α-카로틴, β-카로틴, γ-카로틴, δ-카로틴, 크리토산틴, 트레티노인(tretinoin), 이소트레티노인(isotretinoin), 에트레티네이트 및 에레틴을 포함한다. 이 소분자 약물 부류(기형발생을 야기하는 임의의 부류의 약물)에 대한 높은 기형발생성 때문에, 기형발생물질로 의심되는 시약의 혈액-태반 장벽 횡단 속도를 감소하거나 전적으로 제거함으로써 태아에 가능성있는 손상을 줄이는 것이 바람직하다.
본원에서 기술된 콘쥬게이트의 일부로서 사용될 수 있는 추가적인 소분자 약물은 페노티아진, 디벤조-디아제핀, 최유제(galactogogue) 예컨대 메토클로프라미드 및 티아지드를 포함한다. 페노티아진의 예는 프로클로르페라진(prochlorperazine), 퍼페나진(perphenazine), 트리플루오로페라진(trifluoroperazine), 및 플루페나진(fluphenazine)을 포함한다. 디벤조-디아제핀의 예로 클로자핀(clozapine), 올란자핀(olanzapine), 및 퀘티아핀(quetiapine)을 포함한다. 다른 소분자 약물은 암로디핀(amlodipine), 니페디핀(nifedipine), 니모디핀(nimodipine), 니모디핀(nimodipine), 5-히드록시트립토판, 레틴산 및 이소트레트노인(isotretinoin)을 포함한다. 다른 바람직한 약물은 네비라핀(nevirapine)을 포함하며, 이는 태반 장벽을 용이하게 횡단한다.
본원 발명에 사용되기에 적합한 추가의 소분자 약물은 예를 들어 문헌 ["The Merck Index, 13th Edition, Merck & CO. , Inc (2001)] ;["The AHFS Drug Handbook, 2nd Edition", American Society of Health System Pharmacists and Lippincott, Williams and Wilkins] ; ["The Physicians Desk Reference", Thomson Healthcare Inc. , 2003]; 및 ["Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 19th Edition, 1995]에서 찾을 수 있다.
상기 제공한 바와 같이 단분산성 또는 이중모드 올리고머 조성물로부터 얻을 수 있는 수용성 올리고머의 공유 부착으로써 소 약물 분자를 변형함으로써, 소분자 약물의 운반 및 약리학적 성질에서의 현저한 변화를 낳을 수 있다. 얻어진 콘쥬게이트가 모노머 소단위체(따라서 분자량)의 분포를 갖는 일련의 소분자 약물-올리고머 콘쥬게이트 종의 분포 보다는 잘 정의된 조성물을 형성하기 때문에, 단분산성 또는 이중모드 수용성 올리고머의 조성물로부터의 수용성 올리고머의 사용으로 약물 성질의 짜맞춤(tailoring)을 가능하게 한다. 앞서 설명한 바와 같이, 하나의 모노머와 같이 작은 것의 첨가 또는 삭제는 얻어지는 콘쥬게이트의 성질에 측정가능한 효과를 갖는 것으로 관찰된다. 다른 크기 (1 내지 30개의 모노머 소단위체)의 별개의 올리고머의 매트릭스를 스크리닝하는 것은 합당한 양의 시간으로 수행할 수 있고, 최적화된 성질을 갖는 콘쥬게이트의 설정화를 맞추는 것이 가능하다.
소분자 약물에 부착시 올리고머는 모 소약물 분자와 비교하여 성질에서 차이점을 제공한다. 또한 소 올리고머의 사용은 (단백질에 전형적으로 부착되는 5K 내지 60K 폴리머 사슬과 비교하여) 적어도 어느 정도의 생체 활성을 유지하고 바람직하게는 현저한 정도의 생체활성을 유지하는 약물의 가망을 증가시킨다. 이 특징은 표 VI (실시예 10)에서 설명되는데, 본원 발명의 예시적인 콘쥬게이트에 대한 생체활성(EC50) 데이터를 제공한다. 이 도시적인 PEG 올리고머- 날록손/날록솔 콘쥬게이트는 비변형된 모약물의 약 5% 내지 약 35%에 걸치는 생체활성을 갖는데, 본원 발명의 화합물의 이로운 특징을 더욱 설명해준다.
올리고머는 전형적으로 직렬로 부착되어 모노머 사슬을 형성하는 두 개 이상의 모노머를 포함한다. 이 올리고머는 단일 모노머 유형 (즉, 호모-올리고머성) 또는 두 개 또는 세 개의 모노머 유형 (즉, 코-올리고머성)으로부터 형성될 수 있다. 바람직하게는, 각각의 올리고머는 두 개의 모노머의 코-올리고머이거나 더 바람직하게는, 호모-올리고머이다. 채택된 이 모노머(들)는 본원에서 정의된 수용성인 올리고머를 본원에서 정의된 바와 같이 생리학적 pH (약 7.2- 7.6)에서 실온에서 물에 > 95% 수용성, 바람직하게 > 99% 수용성인 올리고머를 결과적으로 생성한다.
따라서, 각각 올리고머는 알킬렌 옥사이드, 예컨대 에틸렌 옥사이드 또는 프로필렌 옥사이드; 올레핀 알콜 예컨대 비닐 알콜, 1- 프로펜올 또는 2-프로펜올; 비닐 피롤리돈 ; 히드록시알킬 메타크릴아미드 또는 알킬이 바람직하게 메틸인 히드록시알킬 메타크릴레이트; α-히드록시산, 예컨대 락트산 또는 글리콜산; 포스파젠, 옥사졸린, 아미노산, 탄화수소물 예컨대 모노사카라이드, 사카라이드 또는 만니톨; 및 N-아크릴로일모르폴린으로 이루어진 군에서 선택되는 세 개의 상이한 모노머 유형까지로 구성된다. 바람직한 모노머 유형은 알킬렌 옥사이드, 올레핀 알콜, 히드록시알킬 메타크릴아미드 또는 메타크릴레이트, N-아크릴로일모르폴린 및 α-히드록시산을 포함한다. 바람직하게는, 각각의 올리고머는 독립적으로 이들 군에서 선택된 두 개의 모노머의 코올리고머이고, 더 바람직하게는 이들 군에서 선택된 한 개의 모노머 유형의 호모-올리고머이다.
코-올리고머 내의 두가지 모노머 유형은 동일한 모노머 유형일 수 있고, 예를 들어 두 개의 알킬렌 옥사이드, 예컨대 에틸렌 옥사이드 및 프로필렌 옥사이드일 수 있다. 바람직하게, 올리고머는 에틸렌 옥사이드의 호모-올리고머이다. 보통, 반드시는 아니지만, 소분자와 공유적으로 부착되지 않은 말단은 캡핑되어 비반응성이 된다. 이와 별법으로, 말단은 반응성 기를 포함할 수 있다. 말단이 반응성 기인 경우, 반응성 기는 최종 올리고머의 형성 조건 하에서 또는 소분자 약물에 공유부착하는 동안에 비반응성이도록 선택되거나, 필요한 경우 보호화된다. 하나의 통상적인 말단-관능기는 특별하게는 올리고에틸렌 옥사이드에 대한 히드록시 즉 -OH이다.
수용성 올리고머 (콘쥬게이트 화학식 O-X-D에서 "O")는 임의의 개수의 상이한 기하구조를 가질 수 있다. 예를 들어, "0" (화학식 O-X-D 내에서)는 선형, 분지형, 또는 포오크형일 수 있다. 아주 전형적으로, 수용성 올리고머는 선형 또는 분지형이며, 예를 들어 하나의 분지점을 갖는 것이다. 본원에서 설명하고 있는 다수가 예시적인 올리고머로서 폴리(에틸렌 옥사이드)에 촛점을 두고 있지만, 본원에서 제공된 논의 및 구조는 상기 기술된 수용성 올리고머의 임의의 것까지 용이하게 확장할 수 있다.
링커 부분을 제외한 수용성 올리고머의 분자량은 일반적으로 비교적 낮다. 수용성 폴리머의 분자량 값의 예는 약 1500 달톤 미만, 약 1400 달톤 미만, 약 1300 달톤 미만, 약 1200 달톤 미만, 약 1100 달톤 미만, 약 1000 달톤 미만, 약 900 달톤 미만, 약 800 달톤 미만, 약 700 달톤 미만, 약 600 달톤 미만, 약 500 달톤 미만, 약 400 달톤 미만, 약 300 달톤 미만, 약 200 달톤 미만, 및 약 100 달톤 미만를 포함한다.
수용성 올리고머 (링커 제외)의 분자량 범위의 예는 약 100 내지 약 1400 달톤, 약 100 내지 약 1200 달톤, 약 100 내지 약 800 달톤, 약 100 내지 약 500 달톤, 약 100 내지 약 400 달톤, 약 200 내지 약 500 달톤, 약 200 내지 약 400 달톤, 약 75 내지 약 1000 달톤, 및 약 75 내지 약 750 달톤을 포함한다.
바람직하게는, 수용성 올리고머 내 모노머의 수는 하기 범위 중 하나 이상에 속한다: 약 1 내지 약 30 (이 범위 내의 값을 포함), 약 1 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 약 1 내지 약 15, 약 1 내지 약 12, 약 1 내지 약 10. 어떤 경우에, 올리고머 (및 상응하는 콘쥬게이트) 내 연속하는 모노머의 수는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 중 하나이다. 부가의 실시태양에서, 올리고머 (및 상응하는 콘쥬게이트)는 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 모노머를 연속하여 함유한다. 또 다른 실시태양에서, 올리고머 (및 상응하는 콘쥬게이트)는 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 모노머를 연속하여 갖는다.
수용성 올리고머가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 모노머를 갖는 경우, 이들 값은 분자량이 각각 75, 119, 163, 207, 251, 295, 339, 383, 427 및 471 달톤인, 메톡시 말단으로 캡핑된 올리고(에틸렌 옥사이드)에 상응한다. 올리고머가 11, 12, 13, 14 또는 15개의 모노머를 가질 경우, 이들 값은 분자량이 각각 515, 559, 603, 647 및 691 달톤인, 메톡시 말단으로 캡핑된 올리고(에틸렌 옥사이드)에 상응한다.
이중모드 올리고머가 사용될 경우, 이 올리고머는 상기 모노머 수 중 임의의 2개에 집중하는 이중모드 분포를 가질 것이다. 이상적으로는, 이중모드 분포에서 각 피크의 다분산성 지수 Mw/Mn는 1.01 이하, 훨씬 더 바람직하게는 1.001 이하, 훨씬 더 바람직하게는 1.0005 이하이다. 가장 바람직하게는, 각 피크는 1.0000의 Mw/Mn 값을 갖는다. 예를 들면, 이중모드 올리고머는 하기의 모노머 소단위체의 예시적 조합 중 임의의 하나를 가질 것이다: 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10 등; 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2-10 등; 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10 등; 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4-10 등; 5-6, 5-7, 5-8, 5-9, 5-10 등; 6-7, 6-8, 6-9, 6-10 등; 7-8, 7-9, 7-10 등; 및 8-9, 8-10 등.
또한, 본 발명의 올리고머는 상술한 모노머 단위체의 범위를 갖는 삼중모드 또는 심지어 사중모드일수 있다. 잘 규정된 올리고머 혼합물(즉, 이중모드, 삼중모드, 사중모드 등)을 갖는 올리고머 조성물은 정제된 단분산성 올리고머를 혼합하여 목적하는 올리고머 프로파일을 얻음으로써 제조될 수 있거나(모노머의 수만 다른 2개 올리고머의 혼합물은 이중모드이고; 모노머의 수만 다른 3개 올리고머의 혼합물은 삼중모드이며; 모노머의 수만 다른 4개 올리고머의 혼합물은 사중모드이다), 목적하는 규정된 분자량 범위의 올리고머 혼합물을 얻기 위한 "중심 컷(center cut)"을 찾아냄으로써 다분산성 올리고머의 컬럼 크로마토그래피로부터 얻어질 수 있다. 도 10으로부터 알 수 있는 바와 같이, 상업적으로 입수가능한 PEG는 저분자량 물질인 경우에도 전형적으로 다분산성 혼합물이다. 도시된 메톡시-PEG 샘플을 질량 분광기로 분석하였으며, 메톡시-PEG-350으로 표지되었지만, 상기 시약은, 각각 모노머 소단위체의 수가 다른 9개의 상이한 PEG 올리고머 성분을 함유하는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 목적상, 즉, 본원에 기술된 특징을 갖는 콘쥬게이트를 제조하는데 있어서, 다분산성 폴리머는 특히 바람직하지 않은데, 모노머 수의 약간의 변화가 얻어진 콘쥬게이트의 성질에 심한 영향을 미치는 것으로 발견되었기 때문이다. 이러한 효과는 다분산성 올리고머를 사용하여 제조된 콘쥬게이트 혼합물에서 완화되거나 심지어 감지되지 않을 것이다. 게다가, 다분산성 폴리머(또는 올리고머)의 상업적 배치(batch)는 그의 조성에 있어서 종종 매우 가변성이고, 이러한 이유로, 본원에 기재된 올리고머에 있어서 배치-대-배치 균일성이 바람직한 특징인 본 출원에 특히 바람직하지 않다.
상술한 바와 같이, 수용성 올리고머는, 바람직하게는 단분자 또는 단분산성인 조성물로부터 얻어진다. 즉, 상기 조성물 중의 올리고머는 분자량 분포보다는 동일한 별개의 분자량 값을 갖는다. 일부 단분산성 올리고머는 시그마-알드리치로부터 입수가능한 것들과 같이 상업적 근원으로부터 구입될 수 있거나, 또는 시그마-알드리치와 같이 상업적으로 이용가능한 출발 물질로부터 직접 제조될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 올리고에틸렌 글리콜은, 예를 들어 문헌 [Chen Y., Baker, G. L., J. Org. Chem., 6870-6873 (1999)] 또는 WO 02/098949 Al에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 별법으로, 상기 올리고머는 본원의 실시예 9에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 한 측면은 올리고(에틸렌 옥사이드)와 같은 단분산성 올리고머를 제조하는 개선된 방법이다. 이들 올리고머는 상기 제시된 유익한 성질을 갖는 소분자 약물-수용성 올리고머 콘쥬게이트의 제조를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 분야 중 임의의 분야에서 사용될 수 있다.
목적하는 단분산성 올리고머를 제공하기 위해, 새로운 방법이 사용되었다. 할로 종결기를 갖는 올리고머 시약이 더 반응성이고, 이전에 기재된 시약에 비해 단일관능기 제품의 더 높은 수율을 생성한다는 것이 밝혀졌다.
따라서, 본 발명은 또한, 단분산성 올리고머 조성물의 제조 방법을 포함한다. 본 방법은 (m) 모노머를 갖는 올리고(에틸렌 옥사이드)와 같은 할로 종결기를 갖는 올리고머를 (n) 모노머를 갖는 히드록시 종결기를 갖는 올리고(에틸렌 옥사이드)와 반응시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 할로 종결기를 갖는 올리고에틸렌 글리콜 상의 할로기는 염소, 브롬 또는 요오드기이다. 그러나, 바람직하게는, 상기 할로기는 브롬이다. 본 반응은 할로 종결기를 갖는 올리고머로부터 할로기를 치환함으로써 (m) + (n) 모노머 소단위체를 갖는 올리고(에틸렌 옥사이드) (OEGm+n)를 형성하기에 효과적인 조건 하에서 수행되며, 여기서 (m) 및 (n)은 각각 독립적으로 1 내지 10이다. 즉, (m) 및 (n) 각각은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다. 바람직하게는, (m) 및 (n)은 각각 독립적으로 1 내지 약 6이다. 선택된 실시태양에서, (m)은 1, 2 또는 3이고, (n)은 1 내지 6이다. 다른 경우, (m)은 1, 2 또는 3이고, (n)은 2 내지 6이다. 전형적으로, 본 반응은 히드록시 종결기를 갖는 올리고에틸렌 옥사이드의 히드록시기를 상응하는 알콕시드 종으로 전환하는데 효과적인 강염기의 존재 하에서 수행된다. 적당한 염기는 나트륨, 칼륨, 수소화나트륨, 수소화칼륨, 나트륨 메톡시드, 칼륨 메톡시드, 나트륨 t-부톡시드 및 칼륨 t-부톡시드를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 할로 종결기를 갖는 올리고에틸렌 글리콜은 메톡시 또는 에톡시와 같은 말단 캡핑기를 갖는다.
대표적인 히드록시 종결기를 갖는 올리고(에틸렌 글리콜)은 HO-(CH2CH20)n-H 구조 (여기서, n은 상술한 바와 같음)에 상응한다. 본 방법은 바람직하게는 OEGm +n의 말단 히드록시기를 할로기 -X로 전환하여 OEGm +n-X를 형성하는 단계를 포함한다. 상기 단계는 목적하는 소단위체 수를 갖는 단분자 올리고머가 얻어질 때까지 반복된다.
예시적 반응식은 다음과 같다.
Figure 112006050428054-pct00001
도시된 바와 같이, 본 방법은 하나의 올리고머, 바람직하게는 올리고머 에틸렌 옥사이드, 훨씬 더 바람직하게는 할로-유도체화 올리고에틸렌 옥사이드 메틸 에테르 상의 할로겐화물이 올리고에틸렌 글리콜-알콕시드와 반응하여 상응하는 올리고머를 생성하는 치환 반응을 이용함으로써, 2개 단분자 올리고머 종을 커플링하는 것을 포함한다(상기 반응 1 참고).
알콕시드는 전형적으로, 강염기의 존재 하에서 상응하는 올리고에틸렌 옥사이드로부터 말단 히드록시를 상응하는 알콕시드로 전환함으로써 생성된다. 이 반응은 일반적으로 약 0 내지 약 80℃의 온도에서 테트라히드로푸란("THF")과 같은 유기 용매 중에서 수행된다. 반응 시간은 전형적으로 약 10분 내지 약 48시간이다. 상기 예시적 반응에서, 생성물인 말단 캡핑된 올리고에틸렌 옥사이드는 할로-유도체화 올리고머의 모노머 수와 올리고에틸렌 글리콜 알콕시드의 모노머 수의 합[(m) + (n)]을 함유한다. 수율은 전형적으로, 정제된 커플링된 생성물에 대해 약 25% 내지 약 75%이고, 가장 전형적으로는 약 30 내지 약 60%이다.
상기 예에서, 반응 1로부터의 생성물에 존재하는 히드록시 말단은, 필요한 경우, 소분자와의 커플링을 위해 활성화된다. 별법으로, 원하는 경우, 상기 도시된 예시적 생성물[상기 예에서 (m) + (n) 소단위체를 가짐]에 존재하는 히드록시 말단은 할로겐화물, 바람직하게는 브롬화물로 전환된다. 알콜의 알킬 할로겐화물로의 전환은 직접 또는 술포네이트나 할로포르메이트와 같은 중간체를 통해 달성될 수 있다. 이 변환을 달성하는데 적당한 조건 및 시약은, 예를 들어 문헌 [Larock, R., "Comprehensive Organic Transformations", VCH, 1994, pp. 353 내지 363]에서 발견된다.
한 바람직한 방법은 실시예 11에 제시된 것이다. 상술한 바와 같이, 올리고에틸렌 옥사이드 할로겐화물을 올리고에틸렌 옥사이드로 단계적으로 첨가하는 것을 반복하여, (m) + 2(n) 모노머 등을 갖는 올리고에틸렌 옥사이드를 형성한다. 이러한 방식으로, 별개의 올리고에틸렌 옥사이드 소단위체가 존재하는 모노머 (단분자) 올리고머 에틸렌 옥사이드 생성물에 단계적으로 조절된 방식으로 첨가되어, 정확한 소단위체 수를 갖는 잘 규정된 올리고머의 제조를 보장한다.
약 1-3 모노머 소단위체를 갖는 단분자 올리고에틸렌 글리콜은 상업적으로 이용가능하다(시그마-알드리치). 할로-치환된 올리고머 에틸렌 글리콜 반응물의 사용은 기존의 방법, 예를 들어, 메실레이트를 사용하는 방법에 비해 개선점을 나타내는데, 본원에 제공된 방법이, 할로겐화물, 특히 브롬-치환된 올리고에틸렌 글리콜 시약의 더 높은 반응성으로 인해 향상된 수율, 더 짧은 반응 시간 및 더 완만한 반응 조건을 가져오기 때문이다. 이렇게 제조된 올리고머는 전형적으로, 예를 들어 HPLC, 이온 교환 크로마토그래피, 컬럼 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피, 침전 또는 재결정화 중 하나 이상에 의해 정제된 후 추가로 사용된다. 순도는 NMR, GPC 및 FTIR과 같은 다수의 분석 기술 중 임의의 것에 의해 확인된다. 이렇게 형성된 제품은 추가의 사용에 적당하다.
본 발명의 링커 또는 결합은 산소 또는 황과 같은 단일 원자, 두 개의 원자 또는 다수의 원자일 수 있다. 전형적으로, 링커는 본래 선형이나, 반드시 선형일 필요는 없다. 결합 "X" (O-X-D 구조에서)는 가수분해 안정성이고, 바람직하게는 또한 효소 안정성이다. 바람직하게는, 결합 "X"는 약 12개 미만, 바람직하게는 약 10개 미만, 훨씬 더 바람직하게는 약 8개 미만, 훨씬 더 바람직하게는 약 5개 미만 원자의 사슬 길이를 갖는 것이며, 여기서 길이는 치환체를 세지 않고 단일 사슬 내 원자의 수를 의미한다. 예를 들면, R올리고머-NH-(C=O)-NH-R'약물과 같은 우레아 결합은 3개 원자(-NH-C(O)-NH-)의 사슬 길이를 갖는 것으로 고려된다. 선택된 실시태양에서, 결합은 추가의 스페이서 기를 포함하지 않는다. 소 결합이 바람직하고 본 발명의 성질에 적합한데, 이와 같은 소 결합이, 하나 또는 소수의 모노머 소단위체의 첨가가 본 발명의 콘쥬게이트의 운반 성질의 차이에 미치는 영향을 좌우하거나 보호하는 경향이 적기 때문이다.
어떤 경우에, 결합 "X"는 가수분해 안정성이고, 에테르, 아미드, 우레탄, 아민, 티오에테르, 우레아 또는 탄소-탄소 결합을 포함한다. 실시예에 예시되고 이하에 논의되는 것들과 같은 관능기가 상기 결합을 형성하는데 전형적으로 사용된다. 덜 바람직하게는, 이하에 더 기술되는 바와 같이, 상기 결합은 스페이서 기를 포함할(또는 이에 인접하거나 이에 의해 플랭킹될) 수 있다. 콘쥬게이트의 생체활성이 모약물 상의 올리고머의 위치로 인해 상당히 감소되는 경우에 스페이서가 가장 유용하다.
더 구체적으로, 선택된 실시태양에서, 본 발명의 링커 L은 하기 중 임의의 것일 수 있다:
Figure 112006050428054-pct00002
2가 사이클로알킬기, -N(R6)- (R6은 H, 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 유기 라디칼임).
그러나, 본 발명의 목적상, 연속되는 원자가 올리고머 부분에 바로 인접하거나, 또는 연속되는 원자가, 제안된 결합이 올리고머 사슬의 단순한 연장을 나타내도록 하는 또 다른 모노머일 경우, 상기 연속되는 원자는 결합으로 고려되지 않는다.
올리고머와 소분자 사이의 결합 "X"는 전형적으로, 올리고머 말단 상의 관능기를 소분자 약물 내의 상응하는 관능기와 반응시킴으로써 형성된다. 예시적 반응을 이하에 간략하게 기재한다. 예를 들면, 올리고머 "O" 상의 아미노기는 소분자 상의 카르복시산 또는 활성화된 카르복시산 유도체와 반응하거나 또는 그 반대로 반응하여 아미드 결합을 생성할 수 있다. 별법으로, 올리고머 상의 아민과 약물 상의 활성화된 카보네이트 (예, 숙신이미딜 또는 벤조트리아질 카보네이트)와의 반응 또는 그 반대의 반응은 카바메이트 결합을 형성한다. 올리고머 상의 아민과 약물 상의 이소시아네이트(R-N=C=O)와의 반응 또는 그 반대의 반응은 우레아 결합(R-NH-(C=O)-NH-R')을 형성한다. 또한, 올리고머 상의 알콜(알콕시드)기와 약물 내의 알킬 할로겐화물 또는 할로겐화물 기와의 반응 또는 그 반대의 반응은 에테르 결합을 형성한다. 또 다른 커플링 방법에서, 알데히드 관능기를 갖는 소분자가 환원적 아민화에 의해 올리고머 아미노기와 커플링되어, 올리고머와 소분자 사이에 이차 아민 결합을 형성한다.
특히 바람직한 올리고머는 알데히드 관능기를 갖는 올리고머이다. 이와 관련하여, 상기 올리고머는 CH30-(CH2-CH2-0)n-(CH2)p-C(O)H (여기서, (n)은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10 중 하나이고, (p)는 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7중 하나임) 구조를 가질 것이다. 바람직한 (n) 값은 3, 5 및 7을 포함하고, 바람직한 (p) 값은 2, 3 및 4를 포함한다. 또한, -C(O)H 잔기에 대해 알파 위치의 탄소 원자는 알킬로 치환될 수 있다. 올리고머 시약은 바람직하게는 단분산성 조성물로 제공된다.
전형적으로, 관능기를 갖지 않는 올리고머의 말단은 캡핑되어 비반응성으로 된다. 올리고머가 콘쥬게이트의 형성에 의도된 것 이외에 말단에서 추가의 관능기를 포함하는 경우, 상기 기는 그것이 결합 "X"의 형성 조건 하에서 비반응성이도록 선택되거나, 또는 결합 "X"의 형성 동안 보호된다.
상술한 바와 같이, 올리고머는 본원에 기재된 성질을 갖는 소분자 콘쥬게이트를 형성하기 위한 관능기를 포함한다. 상기 관능기는 전형적으로, 소분자 내에 함유되거나 이에 도입된 반응성 기에 따라, 소분자에의 공유 부착을 위한 친전자성 또는 친핵성기를 포함한다. 올리고머 또는 소분자에 존재할 수 있는 친핵성기의 예는 히드록시, 아민, 히드라진 (-NHNH2), 히드라지드 (-C(O)NHNH2) 및 티올을 포함한다. 바람직한 친핵체는 아민, 히드라진, 히드라지드 및 티올, 특히 아민을 포함한다. 올리고머에의 공유 부착을 위한 대부분의 소분자 약물은 유리 히드록시, 아미노, 티오, 알데히드, 케톤 또는 카르복시기를 가질 것이다.
올리고머 또는 소분자에 존재할 수 있는 친전자성 관능기의 예는 카르복시산, 카르복시산 에스테르, 특히 이미드 에스테르, 오르토에스테르, 카보네이트, 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 알데히드, 케톤, 티온, 알케닐, 아크릴레이트, 메타크릴레이트, 아크릴아미드, 설폰, 말레이미드, 디설피드, 요오드, 에폭시, 설포네이트, 티오설포네이트, 실란, 알콕시실란 및 할로실란을 포함한다. 이들 기의 더 구체적인 예는 숙신이미딜 에스테르 또는 카보네이트, 이미다졸 에스테르 또는 카보네이트, 벤조트리아졸 에스테르 또는 카보네이트, 비닐 설폰, 클로로에틸설폰, 비닐피리딘, 피리딜 디설피드, 요오도아세트아미드, 글리옥살, 디온, 메실레이트, 토실레이트 및 트레실레이트 (2,2,2-트리플루오로에탄설포네이트)를 포함한다.
상기 기 중 몇몇 기의 황 유사체, 예를 들어 티온, 티온 수화물, 티오케탈 등, 및 상기 잔기 중 임의의 잔기의 수화물 또는 보호된 유도체(예, 알데히드 수화물, 헤미아세탈, 아세탈, 케톤 수화물, 헤미케탈, 케탈, 티오케탈, 티오아세탈)도 포함된다. 또 다른 유용한 콘쥬게이션 시약은 2-티아졸리딘 티온이다.
상기한 바와 같이, 카르복시산의 "활성화된 유도체"는 일반적으로 비유도체화 카르복시산보다 훨씬 더 쉽게 친핵체와 반응하는 카르복시산 유도체를 지칭한다. 활성화된 카르복시산은, 예를 들어, 산 할로겐화물 (예, 산 염화물), 무수물, 카보네이트 및 에스테르를 포함한다. 상기 에스테르는 일반적 형태 -(CO)O-N[(CO)-]2의 이미드 에스테르, 예를 들어 N-히드록시숙신이미딜 (NHS) 에스테르 또는 N-히드록시프탈이미딜 에스테르를 포함한다. 또한, 이미다졸릴 에스테르 및 벤조트리아졸 에스테르가 바람직하다. 공동 소유의 미국 특허 제5,672,662호에 기재된 바와 같은, 활성화된 프로피온산 또는 부타논산 에스테르가 특히 바람직하다. 이것은 -(CH2)2-3C(=O)O-Q (여기서, Q는 바람직하게는 N-숙신이미드, N-설포숙신이미드, N-프탈이미드, N-글루타르이미드, N-테트라히드로프탈이미드, N-노르보넨-2,3-디카르복스이미드, 벤조트리아졸, 7-아자벤조트리아졸 및 이미다졸로부터 선택됨) 군을 포함한다.
기타 바람직한 친전자성기는 숙신이미딜 카보네이트, 말레이미드, 벤조트리아졸 카보네이트, 글리시딜 에테르, 이미다조일 카보네이트, p-니트로페닐 카보네이트, 아크릴레이트, 트레실레이트, 알데히드 및 오르토피리딜 디설피드를 포함한다.
상기 친전자성기는 친핵체, 예를 들어 히드록시, 티오 또는 아미노기와 반응하여 다양한 결합 유형을 생성한다. 가수분해 안정성 결합의 형성을 촉진하는 반응이 본 발명에 바람직하다. 예를 들면, 카르복시산 및 그의 활성화된 유도체 (오르토에스테르, 숙신이미딜 에스테르, 이미다졸릴 에스테르 및 벤조트리아졸 에스테르를 포함함)는 상기 유형의 친핵체와 반응하여 각각 에스테르, 티오에스테르 및 아미드를 형성하고, 이 중 아미드가 가장 가수분해 안정성이다. 상기에서 언급한 바와 같이, 올리고머와 약물 사이에 가수분해 안정성 결합을 갖는 콘쥬게이트가 가장 바람직하다. 숙신이미딜, 이미다졸릴 및 벤조트리아졸 카보네이트를 비롯한 카보네이트는 아미노기와 반응하여 카바메이트를 형성한다. 이소시아네이트 (R-N=C=O)는 히드록시 또는 아미노기와 반응하여 각각 카바메이트 (RNH-C(O)-OR') 또는 우레아 (RNH-C(O)-NHR') 결합을 형성한다. 알데히드, 케톤, 글리옥살, 디온 및 이들의 수화물 또는 알콜 부가 생성물 (즉, 알데히드 수화물, 헤미아세탈, 아세탈, 케톤 수화물, 헤미케탈 및 케탈)은 바람직하게는 아민과 반응하고, 원하는 경우, 얻어진 이민을 환원시켜, 아민 결합을 제공한다(환원적 아민화).
친전자성 관능기 중 일부는 친전자성 이중 결합을 포함하며, 여기에 티올과 같은 친핵성기가 첨가되어 예를 들어 티오에테르 결합을 형성할 수 있다. 이들 기는 말레이미드, 비닐 설폰, 비닐 피리딘, 아크릴레이트, 메타크릴레이트 및 아크릴아미드를 포함한다. 기타 기는 친핵체에 의해 치환될 수 있는 이탈기를 포함하며, 이들은 클로로에틸 설폰, 피리딜 디설피드(절단가능한 S-S 결합을 포함함), 요오도아세트아미드, 메실레이트, 토실레이트, 티오설포네이트 및 트레실레이트를 포함한다. 에폭시드는 친핵체에 의해 개환됨으로써 반응하여, 예를 들어 에테르 또는 아민 결합을 형성한다. 올리고머 및 소분자에 대하여 위에서 기재한 것들과 같은 보완적 반응성 기를 포함하는 반응을 이용하여 본 발명의 콘쥬게이트를 제조한다.
예를 들면, 레티노산의 예시적 올리고머 콘쥬게이트의 제조가 실시예 1에 자세히 기재되어 있다. 요약하면, 반응성 카르복시기를 함유하는 소분자인 레티노산이 아미노-활성화된 올리고머 에틸렌 글리콜과 커플링되어, 소분자를 올리고머에 공유 결합시키는 아미드기를 갖는 콘쥬게이트를 제공한다. 각 PEG 3-머 (3개의 에틸렌 글리콜 모노머 소단위체를 갖는 올리고머 에틸렌 글리콜을 의미함), PEG 7-머 및 PEG 11-머를 레티노산에 공유 부착시키는 것이 기재된다.
또한, 날록손의 올리고머-콘쥬게이트의 제조가 실시예 4에 기재되어 있다. 이 대표적 합성에서, 방향족 히드록시기의 보호 후, 날록손의 케토기가 상응하는 히드록시기로 환원된 다음, 이것이 올리고머 에틸렌 글리콜 할로겐화물과 커플링되어, 에테르 (-O-) 결합된 소분자 콘쥬게이트를 생성한다. 흥미롭게도, 이 예에서, 날록손에서 히드록시기의 환원이, 히드록시기의 배향이 다른 2개의 입체이성질체를 형성하였다. 상응하는 올리고머 콘쥬게이트가 제조 및 분리되었으며, 이하에 더 자세히 기재되는 바와 같이, 다소 상이한 특징을 갖는 것으로 나타났다. 이는 본 발명의 또 다른 특징, 즉, 올리고머-소분자 콘쥬게이트의 단일 이성질체의 제조/분리, 및 그의 용도를 나타낸다.
본 발명의 콘쥬게이트는, 상술한 바와 같이, 감소된 생물학적 장벽 횡단 속도를 나타낸다. 게다가, 상기 콘쥬게이트는 비변형된 모 소분자 약물의 생체활성의 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 그 이상을 유지한다. 변형에 적합한 하나를 초과하는 반응성 부위를 갖는 주어진 소분자 약물의 경우, 얻어진 콘쥬게이트의 생물학적 활성을 평가하고 올리고머의 공유 부착에 가장 적합한 부위를 결정하기 위해, 분자 모델링, 또는 생체내 또는 시험관내 생물학적 활성 분석을 수행할 필요가 있을 수 있다. 예를 들어, 날록손 및 유도체화 날록손, 6-NH2-날록손 및 6-OH-날록솔의 다양한 올리고머 콘쥬게이트에 대한 표 VI의 예시적 생체활성 데이터를 참조하라. 이 연구에서, 변수는 모약물 상의 화학적 변형 부위, 공유 결합의 유형, 입체 화학, 및 약물 잔기에 공유 부착된 올리고머의 크기를 포함한다. 상기 데이터로부터 알 수 있는 바와 같이, 콘쥬게이트의 생체활성은 모약물의 생체활성의 약 5% 내지 약 35%였다.
작고 수용성인 올리고머를 경구로 생체이용 가능한 소분자 약물에 안정하게 공유 부착시키는 것이 상기 분자의 성질을 상당히 변화시키고, 이에 따라 이들을 임상적으로 더 유효하게 하는데 효과적이라는 것이 밝혀졌다. 더 구체적으로, 올리고에틸렌 옥사이드와 같은 단분산성 올리고머의 공유 부착이 혈액 뇌 장벽을 횡단하는 약물의 운반을 감소, 어떤 경우에는 제거하는데 효과적이며, 이는 중추 신경계와 관련된 부작용의 상당한 감소로 해석된다. 최적 크기의 올리고머의 선택은 전형적으로 다음과 같이 수행된다.
먼저, 단분산성 또는 이중모드 수용성 올리고머로부터 얻어진 올리고머를 소분자 약물에 콘쥬게이션시킨다. 바람직하게는, 상기 약물은 경구로 생체이용 가능하며, 단독으로 생물학적 막 횡단 속도를 나타낸다. 다음으로, 적당한 모델을 사용하여, 콘쥬게이트가 비변형된 모약물과 비교하여 생물학적 막을 횡단하는 능력을 측정한다. 결과가 좋은 경우, 즉, 예를 들어, 횡단 속도가 상당히 감소된 경우, 콘쥬게이트의 생체활성을 더 평가한다. 본 발명에 따른 유익한 콘쥬게이트는, 결합이 가수분해 안정성이고 투여시 비변형된 약물을 방출시키지 않으므로, 생물학적으로 활성이다. 따라서, 콘쥬게이트 형태의 약물은 생물학적으로 활성이고, 바람직하게는, 모약물에 대해 상당한 정도의 생체활성, 즉, 모약물의 생체활성의 약 30% 초과, 훨씬 더 바람직하게는 모약물의 생체활성의 약 50% 초과를 유지한다.
이어서, 모노머 유형은 동일하나 상이한 수의 소단위체를 갖는 올리고머를 사용하여 상기 단계를 반복한다.
위장관 ("GIT")이 약물 및 음식의 소화관으로부터 혈액 및 림프로의 운반을 제한하므로, GIT는 콘쥬게이트가 시험되어야 할 또 다른 장벽이다. 그러나, GIT 장벽은, 콘쥬게이트가 전신 전달을 위해 경구 투여로 의도되는 경우, 콘쥬게이트를 차단하지 않아야 하는 장벽이다. GIT 장벽은 장 상피에서 폐쇄 연접에 의해 연결된 장 세포의 연속층으로 이루어져 있다.
비콘쥬게이팅된 소분자 약물에 비해 생물학적 막을 횡단하는 능력이 감소된 각 콘쥬게이트에 대해, 그의 경구 생체이용률을 평가한다. 상기 결과를 기초로, 즉, 소분자 내의 주어진 위치에서 당해 소분자에 별개 모노머의 수를 증가시켜 순차적으로 첨가하는 것에 기초하여, 생물학적 막 횡단의 감소, 경구 생체이용률 및 생체활성 사이에서 최적의 균형을 갖는 콘쥬게이트를 제공하는데 가장 효과적인 올리고머의 크기를 결정할 수 있다. 작은 크기의 올리고머가 상기 스크리닝을 편리하게 하고, 얻어진 콘쥬게이트의 성질을 효과적으로 맞출 수 있게 한다. 올리고머 크기에 작고 점진적인 변화를 가하고 실험적 설계 접근을 이용함으로써, 생물학적 막 횡단 속도의 감소, 경구 생체이용률 및 생체활성의 유리한 균형을 갖는 콘쥬게이트를 효과적으로 식별할 수 있다. 어떤 경우에는, 본원에 기재된 올리고머의 부착이 약물의 경구 생체이용률을 실제로 증가시키는데 효과적이다.
예를 들면, 통상의 실험을 사용하여, 당업자는 먼저 상이한 무게 및 관능기를 갖는 연속된 올리고머를 제조한 다음, 환자에게 콘쥬게이트를 투여하고 주기적 혈액 및(또는) 뇨 샘플을 채취하여 필요한 청소율 프로파일을 얻음으로써, 경구 생체이용률을 향상시키는데 최적화된 분자 크기 및 결합을 결정할 수 있다. 각 시험된 콘쥬게이트에 대해 일련의 청소율 프로파일이 얻어지면, 적당한 콘쥬게이트를 식별할 수 있다.
동물 모델 (설치류 및 개)을 사용하여 경구 약물 운반을 연구할 수도 있다. 또한, 비-생체내 방법은 설치류 외번 창자 절단 조직 및 Caco-2 세포 단층 조직 배양 모델을 포함한다. 이 모델들은 경구 약물 생체이용률을 예측하는데 유용하다.
본 발명은 또한, 본원에 제공된 콘쥬게이트를 제약학적 부형제와 함께 포함하는 제약 제제를 포함한다. 일반적으로, 콘쥬게이트 자체는, 고체 또는 액체 형태일 수 있는 적당한 제약학적 부형제와 조합될 수 있는 고체 형태 (예, 침전물)일 것이다.
부형제의 예는 비제한적으로 탄수화물, 무기염, 항균제, 항산화제, 계면활성제, 완충액, 산, 염기 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 포함한다.
당, 유도체화 당, 예컨대 알디톨, 알돈산, 에스테르화 당 및(또는) 당 폴리머와 같은 탄수화물이 부형제로 존재할 수 있다. 구체적인 탄수화물 부형제는, 예를 들어 과당, 맥아당, 갈락토스, 포도당, D-만노스, 소르보스 등과 같은 단당류; 젖당, 자당, 트레할로스, 셀로비오스 등과 같은 이당류; 라피노스, 멜레지토스(melezitose), 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등과 같은 다당류; 및 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 소르비톨(글루시톨), 피라노실 소르비톨, 미오이노시톨 등과 같은 알디톨을 포함한다.
부형제는 또한, 시트르산, 염화나트륨, 염화칼륨, 황산나트륨, 질산칼륨, 일염기성 인산나트륨, 이염기성 인산나트륨 및 이들의 조합과 같은 무기염 또는 완충액을 포함할 수 있다.
본 제제는 미생물 성장을 방지하거나 억제하기 위한 항균제를 포함할 수 있다. 본 발명에 적당한 항균제의 비제한적 예는 염화 벤잘코늄, 염화 벤제토늄, 벤질 알콜, 염화 세틸피리디늄, 클로로부탄올, 페놀, 페닐에틸 알콜, 질산 페닐수은, 티메로살 및 이들의 조합을 포함한다.
항산화제도 제제에 존재할 수 있다. 항산화제는 산화를 방지함으로써 콘쥬게이트 또는 제제의 기타 성분의 악화를 방지하기 위해 사용된다. 본 발명에 유용한 적당한 항산화제는, 예를 들어 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 하이포아인산, 모노티오글리세롤, 프로필 갈레이트, 나트륨 비설파이트, 나트륨 포름알데히드 설폭실레이트, 나트륨 메타비설파이트 및 이들의 조합을 포함한다.
계면활성제가 부형제로서 존재할 수 있다. 계면활성제의 예는 "트윈 20" 및 "트윈 80"과 같은 폴리소르베이트, 및 F68 및 F88 (둘 다 미국 뉴저지주 마운트 올리브 소재의 BASF로부터 입수가능)과 같은 플루로닉; 소르비탄 에스테르; 레시틴 및 기타 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민(바람직하게는 리포솜 형태가 아님)과 같은 인지질, 지방산 및 지방 에스테르와 같은 지질; 콜레스테롤과 같은 스테로이드; 및 EDTA, 아연 및 기타 적당한 양이온과 같은 킬레이트제를 포함한다.
산 또는 염기가 제제에서 부형제로 존재할 수 있다. 사용될 수 있는 산의 비제한적 예는 염산, 아세트산, 인산, 시트르산, 말산, 락트산, 포름산, 트리클로로아세트산, 질산, 과염소산, 황산, 푸마르산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 산을 포함한다. 적당한 염기의 비제한적 예는 수산화나트륨, 아세트산나트륨, 수산화암모늄, 수산화칼륨, 아세트산암모늄, 아세트산칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨, 포름산나트륨, 황산나트륨, 황산칼륨, 푸머르산칼륨, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 포함한다.
조성물 내 콘쥬게이트의 양은 다수의 인자에 따라 달라질 것이나, 최적으로는, 조성물이 단위 용량 용기에 저장될 경우 치료학적으로 유효한 용량일 것이다. 치료학적으로 유효한 용량은 임상적으로 목적하는 종료점을 나타내는 양을 결정하기 위해 콘쥬게이트의 증가량을 반복적으로 투여함으로써 실험적으로 결정될 수 있다.
조성물 내 개별 부형제의 양은 부형제의 활성 및 조성물의 특정한 요구에 따라 달라질 것이다. 전형적으로, 임의의 개별 부형제의 최적 양은 통상의 실험, 즉, 상이한 양(적은 양 내지 많은 양)의 부형제를 함유하는 조성물을 제조하고, 안정성 및 기타 변수를 조사한 다음, 심각한 부작용 없이 최적 성능이 달성되는 범위를 결정함으로써 결정될 수 있다.
그러나, 일반적으로, 부형제는 약 1 내지 약 99 중량%, 바람직하게는 약 5 내지 98 중량%, 더 바람직하게는 약 15 내지 95 중량%의 양으로 조성물에 존재할 것이며, 30 중량% 미만의 농도가 가장 바람직하다.
상기 제약학적 부형제가 기타 부형제와 함께 문헌 [Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 19th ed., Williams & Williams, (1995), the "Physician's Desk Reference", 52nd ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), and Kibbe, A. H., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Edition, American Pharmaceutical Association, Washington, D. C., 2000]에 기재되어 있다.
제약학적 조성물은 임의의 수의 형태를 취할 수 있고, 본 발명은 이러한 면에서 제한되지 않는다. 예시적 제제는 가장 바람직하게는 정제, 캐플릿, 캡슐, 겔 캡, 트로키, 분산제, 현탁제, 용액, 엘릭시르, 시럽, 로젠지, 경피 패치, 스프레이, 좌제 및 산제와 같은 경구 투여에 적당한 형태이다.
경구 투여 형태는 경구적으로 활성인 콘쥬게이트에 바람직하고, 정제, 캐플릿, 캡슐, 겔 캡, 현탁제, 용액, 엘릭시르 및 시럽을 포함하며, 캡슐에 넣어질 수 있는 복수의 과립, 비드, 분말 또는 펠릿을 포함할 수 있다. 이러한 투여 형태는 제약학적 제형 분야에 공지되고 관련 교재에 기재된 통상의 방법을 사용하여 제조된다.
예를 들어, 정제 및 캐플릿은 표준 정제 가공 방법 및 장치를 사용하여 제조될 수 있다. 본원에 기재된 콘쥬게이트를 함유하는 정제 또는 캐플릿을 제조하는 경우 직접 압축 및 과립화 기술이 바람직하다. 콘쥬게이트 이외에, 정제 및 캐플릿은 일반적으로 제약학적으로 허용되는 불활성 담체 물질, 예를 들어 결합제, 윤활제, 붕해제, 충전제, 안정제, 계면활성제, 착색제 등을 함유할 것이다. 결합제는 정제에 응집성을 부여하기 위해 사용되고, 따라서, 정제가 온전하게 유지되도록 한다. 적당한 결합제 물질은 전분(옥수수 전분 및 예비젤라틴화 전분을 포함함), 젤라틴, 당(자당, 포도당, 덱스트로스 및 젖당을 포함함), 폴리에틸렌 글리콜, 왁스, 및 천연 및 합성 고무, 예를 들어 아카시아 나트륨 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스 중합체(히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 미소결정질 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스 등을 포함함) 및 비검(Veegum)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 윤활제는 분말 흐름을 촉진하고, 압력이 제거될 때 입자 캡핑(즉, 입자 파괴)을 방지하며, 정제 제조를 용이하게 하기 위해 사용된다. 유용한 윤활제는 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘 및 스테아르산이다. 붕해제는 정제의 붕해를 용이하게 하기 위해 사용되며, 일반적으로 전분, 점토, 셀룰로스, 알긴, 고무 또는 가교된 중합체이다. 충전제는, 예를 들어, 이산화실리콘, 이산화티탄, 알루미나, 탈크, 카올린, 분말화 셀룰로스 및 미소결정질 셀룰로스와 같은 물질, 및 만니톨, 우레아, 자당, 젖당, 덱스트로스, 염화나트륨 및 소르비톨과 같은 용해성 물질을 포함한다. 당업계에 널리 공지된 바와 같이, 안정제는, 예를 들어 산화 반응을 포함하는 약물 분해 반응을 억제하거나 지연시키기 위해 사용된다.
또한, 캡슐이 바람직한 경구 투여 형태이며, 이 경우 콘쥬게이트 함유 조성물이 액체, 겔 (예, 겔 캡의 경우) 또는 고체 형태(과립, 비드, 분말 또는 펠릿과 같은 미립자를 포함함)로 캡슐에 넣어질 수 있다. 적당한 캡슐은 경질 및 연질 캡슐을 포함하고, 일반적으로 젤라틴, 전분 또는 셀룰로스 물질로 제조된다. 2-부분 경질 젤라틴 캡슐은 바람직하게는 젤라틴 밴드 등으로 밀봉된다.
실질적으로 건조 형태의 비경구 제형(전형적으로, 분말 또는 케이크 형태일 수 있는 동결건조물 또는 침전물로서), 및 전형적으로 액체이고 비경구 제형의 건조 형태를 재구성하는 단계를 필요로 하는 주사용 제형이 포함된다. 주사 전에 고체 조성물을 재구성하는데 적당한 희석제의 예는 주사용 멸균수, 덱스트로스 5% 수용액, 인산염 완충 식염수, 링거액, 식염수, 멸균수, 탈이온수 및 이들의 조합을 포함한다.
어떤 경우에, 비경구 투여용 조성물은 비수성 용액, 현탁제 또는 유제 형태를 취할 수 있으며, 이들 각각은 전형적으로 무균이다. 비수성 용매 또는 비히클의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물유, 예를 들어 올리브유 및 옥수수유, 젤라틴 및 주사가능한 유기 에스테르, 예를 들어 올레인산 에틸이다.
본원에 기재된 비경구 제제는 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 또한 함유할 수 있다. 제제는 멸균제의 혼입, 세균-보유 필터를 통한 여과, 조사, 또는 열에 의해 멸균된다.
콘쥬게이트는 통상의 경피 패치 또는 다른 경피 전달 시스템을 사용하여 피부를 통하여 투여될 수도 있고, 여기서 콘쥬게이트는 피부에 부착되는 약물 전달 장치로서 작용하는 적층 구조 내에 함유된다. 이러한 구조에서, 콘쥬게이트는 상부의 배킹층 아래 놓이는 층, 또는 "저장소(reservoir)"에 함유된다. 적층 구조는 단일 저장소를 함유할 수 있거나, 다수의 저장소를 함유할 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 제공된 콘쥬게이트를 콘쥬게이트를 이용한 치료에 반응성인 질환에 걸린 환자에게 투여하는 방법을 포함한다. 그 방법은 일반적으로 경구로, (바람직하게는 제약 제제의 일부로서 제공되는) 치료적 유효량의 콘쥬게이트를 투여하는 것을 포함한다. 폐, 코, 협측, 직장, 설하, 경피, 및 비경구와 같은 다른 투여 방법도 역시 상정된다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 피하, 정맥내, 동맥내, 복강내, 심장내, 경막내, 및 근육내 주사를 포함한다.
비경구 투여가 사용되는 경우, 분자량이 약 500 내지 30K 달톤(예를 들면, 분자량이 약 500, 1000, 2000, 2500, 3000, 5000, 7500, 10000, 15000, 20000, 25000, 30000 또는 그 이상)의 범위인, 전기한 것보다 다소 큰 올리고머를 사용하는 것이 필요할 수 있다.
투여 방법은 특정 콘쥬게이트의 투여에 의해 치료 또는 예방될 수 있는 임의의 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 당업자는 어떤 질환을 특정 콘쥬게이트가 효과적으로 치료하는지 이해한다. 투여될 실제 용량은 연령, 체중, 및 환자의 일반적 상태, 및 치료될 질환의 심각도, 건강 보호 전문가의 판단, 및 투여될 콘쥬게이트에 따라 달라질 것이다. 치료적 유효량은 당업자에게 알려져 있고(있거나) 관련 참고 도서 및 문헌에 기재되어 있다. 일반적으로, 치료적 유효량은 약 0.001 mg 내지 100 mg의 범위일 것이고, 바람직하게는 0.01 mg/일 내지 75 mg/일의 용량, 더욱 바람직하게는 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량의 범위일 것이다.
주어진 콘쥬게이트(역시, 바람직하게는 제약 제제의 일부로서 제공됨)의 단위 투약량은 임상의의 판단, 환자의 요구 등에 따라 다양한 투약 스케줄로 투여될 수 있다. 특정 투약 스케줄은 당업자에게 알려져 있거나 통상의 방법을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 예시적 투약 스케줄은 비제한적으로 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 1주에 3회, 1주에 2회, 1주에 1회, 1달에 2회, 1달에 1회, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 임상적 종말점이 달성되면, 조성물의 투약이 중단된다.
본 발명의 콘쥬게이트 투여의 하나의 이점은 모약물에 비하여 일차 통과 대사의 감소가 달성될 수 있다는 것이다. 예를 들어 이를 뒷받침하는 실시예 8의 결과를 참조하라. 이러한 결과는 장 통과에 의해 실질적으로 대사되는 많은 경구 투여 약물에 대해 유익하다. 이러한 방법으로, 콘쥬게이트의 청소율은 바람직한 청소율 성질을 제공하는 올리고머 분자 크기, 결합, 공유 부착의 위치를 선택함으로써 조절될 수 있다. 당업자는 본원의 교시에 기초하여 올리고머의 이상적 분자 크기를 결정할 수 있다. 상응하는 비콘쥬게이팅된 약물 소분자에 비한 콘쥬게이트에 대한 바람직한 일차 통과 대사의 감소는 약 10% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상 및 약 90% 이상을 포함한다.
따라서, 본 발명은 활성제의 대사를 감소시키는 방법을 제공한다. 방법은 각 콘쥬게이트가 수용성 올리고머에 안정한 결합에 의해 공유 부착된 소분자 약물로부터 유도된 잔기로 이루어진 단분산성 또는 이중모드 콘쥬게이트를 제공하는 단계, (여기서 상기 콘쥬게이트는 수용성 올리고머에 부착되지 않은 소분자 약물의 대사율에 비하여 감소된 대사율을 나타냄); 및 상기 콘쥬게이트를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 전형적으로, 투여는 경구 투여, 경피 투여, 협측 투여, 경점막 투여, 질 투여, 직장 투여, 비경구 투여, 및 폐 투여로 이루어진 군에서 선택된 투여의 한 유형을 통하여 수행된다.
많은 유형의 대사를 감소시키는데 유용하지만(I상 및 II상 대사를 모두 포함), 콘쥬게이트는 소분자 약물이 간 효소(예를 들면 하나 이상의 시토크롬 P450 이소폼) 및(또는) 하나 이상의 장 효소에 의해 대사될 때 특히 유용하다.
실험
특정의 바람직하고 구체적인 실시태양과 결부시켜 본 발명을 기술하였지만, 상기 기술 및 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이고 그 범위를 제한하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명의 범위 내에서의 다른 측면, 이점 및 변형은 본 발명이 속한 기술분야의 당업자에게 자명할 것이다.
첨부된 실시예에서 언급되는 모든 화학 시약은 달리 명시되지 않는 한 상업적으로 입수가능하다. 예시적 단분자 PEG-머의 제조는 실시예 9에 기재된다. 하기 실시예에 사용된 모든 올리고(에틸렌 글리콜) 메틸 에테르는 역상 크로마토그래피에 의해 결정할 때 단분산성이고 크로마토그래피적으로 순수했다.
모든 1H NMR(핵 자기 공명) 데이터는 브루커(Bruker)에서 제조된 300 MHz NMR 스펙트로미터에 의해 생성되었다. 특정 화합물의 목록 및 화합물의 공급원을 하기에 제공한다.
2-브로모에틸 메틸 에테르, 92%, 알드리치;
1-브로모-2-(2-메톡시에톡시)에탄, 90%, 알드리치;
CH3(OCH2CH2)3Br은 CH3(OCH2CH2)30H로부터 제조되었다;
트리(에틸렌 글리콜)모노메틸 에테르, 95%, 알드리치;
디(에틸렌 글리콜), 99%, 알드리치;
트리(에틸렌 글리콜), 99%, 알드리치;
테트라(에틸렌 글리콜), 99%, 알드리치;
펜타(에틸렌 글리콜), 98%, 알드리치;
헥사(에틸렌 글리콜), 97%, 알드리치;
소듐 하이드리드, 95% 건조 분말, 알드리치;
메탄술포닐 클로라이드, 99%, ACE;
테트라부틸 암모늄 브로마이드, 시그마.
실시예 1
CH 3 ( OCH 2 CH 2 ) 3 -NH-13- 시스 - 레틴아미드(PEG 3 -13-시스-RA)의 합성
PEG3-13-시스-RA를 제조하였다. 합성의 개요는 다음과 같다.
Figure 112006050428054-pct00003
0.1085 그램의 CH3(OCH2CH2)3-NH2(0.6656 mmoles), 0.044 그램의 1-히드록시벤질트리아졸("HOBT", 0.3328 mmoles), 및 0.200의 13-시스-레티노산("13-시스-RA", 0.6656 mmoles)을 10 mL의 벤젠에 용해시켰다. 이 용액에 0.192 그램의 1,3-디시클로헥실카르보디이미드("DCC", 0.9318 mmoles)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 회전 증발에 의해 용매를 제거하였다. 조 생성물을 진공 하에서 더 건조하고, 20 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 유기상을 15 mL의 탈이온수로 두번 세척하였다. 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 회전 증발로 용매를 제거하였다. 회수된 생성물에 50 ppm의 부틸화 히드록시톨루엔을 함유하는 디클로로메탄 두 방울을 첨가하고, 생성물을 진공 하에서 건조하였다. 수율 0.335g. 1H NMR (DMSO):δ 1.02 (단일선, 2 CH3), 1.67 (단일선, CH3), 3.5 (넓은 다중선, PEG), 6.20 (m, 3H).
실시예 2
CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 7 -NH-13- 시스 - 레틴아미드(PEG 7 -13-시스-RA)의 합성
0.2257 그램의 CH3(OCH2CH2)7-NH2(0.6656 mmoles), 0.044 그램의 1-히드록시벤질트리아졸(0.3328 mmoles), 및 0.200 그램의 13-시스-레티노산(0.6656 mmoles)을 10 mL의 벤젠에 용해시켰다. 이 용액에 0.192 g의 1,3-디시클로헥실카르보디이미드(0.9318 mmoles)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 회전 증발로 용매를 제거하고, 생성물을 진공 하에서 건조시켰다. 생성물을 20 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 용액을 15 mL 탈이온수로 두 번 세척하였다. 유기상을 Na2S04 상에서 건조하고, 여과하고, 회전 증발을 사용하여 용매를 제거하였다. 회수된 생성물에 50 ppm의 부틸화 히드록시톨루엔을 함유하는 디클로로메탄 두 방울을 첨가하고, 생성물을 진공 하에서 건조하였다. 수율 0.426g. 1H NMR (DMSO): δ 1.01 (s, 2 CH3), 1.68 (s, CH3), 3.5 (br m, PEG), 6.20 (m, 3H).
CH3-(OCH2CH2)5-NH-13-시스-레틴아미드("PEG5-13-시스-RA")를 이 과정을 사용하되, CH3(OCH2CH2)7-NH2 대신 CH3(OCH2CH2)5-NH2("mPEG5-NH2")를 사용하여 유사하게 제조하였다.
실시예 3
CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 11 -NH-13- 시스 - 레틴아미드(PEG 11 -13-시스-RA)의 합성
0.349 그램의 CH3(OCH2CH2)11-NH2(0.6789 mmoles), 0.044 그램의 1-히드록시벤질트리아졸(0.3328 mmoles), 및 0.204 그램의 13-시스-레티노산 (0.6789 mmoles)을 10 mL의 벤젠에 용해시켰다. 이 용액에 0.192g 1,3-디시클로헥실카르보디이미드(0.9318 mmoles)을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 회전 증발을 사용하여 용매를 증발시켰다. 생성물을 진공 하에서 건조하고 20 mL의 디클로로메탄에 용해시켰다. 용액을 15 mL 탈이온수로 두 번 세척하고, 유기상을 Na2S04 상에서 건조하였다. 용액을 여과하고, 용매를 회전 증발로 증발시켰다. 회수된 생성물에 50 ppm의 부틸화 히드록시톨루엔을 함유하는 디클로로메탄 두 방울을 첨가하고, 생성물을 진공 하에서 건조하였다. 수율 0.541g. 1H NMR (DMSO): δ 1.01 (s, 2 CH3), 1.68 (s, CH3), 3.5 (br m, PEG), 6.20 (m, 3H).
실시예 4
PEG 3 -3- 날록솔의 합성
소분자 약물의 예로서, 날록솔의 구조는 하기와 같다.
Figure 112006050428054-pct00004
날록솔
(보호된 히드록실기를 갖는) 이 분자를 실시예 5에 기재된 더 큰 합성 반응식의 일부로서 제조하였다.
실시예 5
α,β-6- CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 1 - 날록솔(α,β-PEG 1 -Nal)의 합성
α,β-PEG1-날록솔을 제조하였다 합성의 개요는 하기와 같다.
Figure 112006050428054-pct00005
5.A. 3- MEM - 날록손의 합성
디이소프로필에틸아민(390 mg, 3.0 mmole)을 CH2Cl2(10 mL) 중의 날록손?HCl?2H2O(200 mg, 0.50 mmole)의 용액에 교반하면서 첨가하였다. 메톡시에틸 클로라이드("MEMCl", 250 mg, 2.0 mmole)을 상기 용액에 적가하였다. 용액을 N2 하에서 밤새 실온에서 교반하였다.
조 생성물을 HPLC로 분석한 결과, 3-MEM-O-날록손(1)이 97% 수율로 생성되었 음을 확인하였다. 용매를 회전 증발로 제거하여 점성의 오일을 얻었다.
5.B. 3- MEM - 날록솔의 α 및 β 에피머 혼합물(2)의 합성
3 mL의 0.2 N NaOH를 5 mL의 에탄올 중의 3-MEM-날록손(1)(상기 5.A.로부터 얻어서 추가의 정제 없이 사용)의 용액에 첨가하였다. 여기에 물(1 mL) 중의 NaBH4(76 mg, 2.0 mmole)의 용액을 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 회전 증발로 에탄올을 제거한 후 0.1 N HCl 용액을 첨가하여 과량의 NaBH4를 없애고 pH를 1로 맞추었다. 용액을 CHCl3로 세척하여 과량의 메톡시에틸 클로라이드 및 그 유도체를 제거한 후(3 x 50 mL), K2CO3를 첨가하여 용액의 pH를 8.0으로 올렸다. 생성물을 CHCl3(3 x 50 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조하였다. 용매를 증발시켜 제거하여 무색의 점성 고체를 얻었다(192 mg, 0.46 mmole, 날록손?HCl?2H2O를 기준으로 단리된 수율 92%).
HPLC 결과 생성물은 3-MEM-날록솔의 α 및 β 에피머 혼합물(2)인 것으로 나타났다.
5.C. 6- CH 3 - OCH 2 CH 2 -0-3- MEM - 날록솔의 α 및 β 에피머 혼합물(3a)의 합성
NaH(광유 중의 60%, 55 mg, 1.38 mmole)을 디메틸포름아미드("DMF", 6 mL) 중의 6-히드록실-3-MEM-날록솔(2)(192 mg, 0.46 mmole)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 N2 하 실온에서 15 분 동안 교반한 후, DMF(1 mL) 중의 2-브로모에틸 메틸 에테르(320 mg, 2.30 mmole)를 첨가하였다. 그 후 용액을 N2 하 실온에서 3 시간 동안 교반하였다.
HPLC 분석 결과 약 88%의 수율로 α- 및 β-6-CH3-OCH2CH2-0-3-MEM-날록솔(3)의 혼합물의 형성을 확인하였다. DMF를 회전 증발로 제거하여 점성 백색 고체를 얻었다. 생성물을 추가의 정제 없이 추후 변환에 사용하였다.
5.D. 6- CH 3 - OCH 2 CH 2 - 날록솔의 α 및 β 에피머 혼합물(4)의 합성
조 α- 및 β-6-CH3-OCH2CH2-0-3-MEM-날록솔(3)을 5 mL의 CH2Cl2에 용해시켜서 흐린 용액을 형성하고, 여기에 5 mL의 트리플루오로아세트산("TFA")을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. HPLC 분석에 기초하여 반응이 완결된 것으로 판단하였다. 회전 증발기로 CH2Cl2를 제거한 후, 10 mL의 물을 첨가하였다. 이 용액에 충분한 양의 K2CO3를 첨가하여 과량의 TFA를 없애고 pH를 8로 조정하였다. 그 후 용액을 CHCl3(3 x 50 mL)로 추출하고 추출물을 합하고 0.1 N HCl 용액(3 x 50 mL)으로 더 추출하였다. 회수한 수상의 pH를 K2CO3를 첨가하여 pH 8로 조정한 후, CHCl3(3 x 50 mL)로 더 추출하였다. 합한 유기층을 Na2S04로 건조하였다. 용매를 제거하여 무색 점성 고체를 얻었다.
고체를 CHCl3/CH30H(30:1)를 용리제로 사용하여 실리카겔 컬럼(2 cm x 30 cm)을 통하여 2회 통과시킴으로써 정제하여 점성의 고체를 얻었다. 정제된 생성물을 1H NMR로 확인한 결과 약 30%의 α 에피머와 약 70%의 β 에피머를 함유하는 6- CH3-OCH2CH2-날록솔의 α 및 β 에피머 혼합물(4)인 것으로 측정되었다[100 mg, 0.26 mmole, 6-히드록실-3-MEM-날록솔(2)을 기준으로 단리된 수율 56%].
1H NMR (δ, ppm, CDCl3): 6.50-6.73 (2 H, 다중선, 날록솔의 방향족 양성자), 5.78 (1 H, 다중선, 날록손의 올레핀 양성자), 5.17 (2 H, 다중선, 날록솔의올레핀 양성자), 4.73 (1 H, 이중선, α 날록솔의 C5 양성자), 4.57 (1 H, 이중선, β 날록솔의 C5 양성자), 3.91 (1H, 다중선, α 날록솔의 C6 양성자), 3.51-3.75 (4 H, 다중선, PEG), 3.39 (3 H, 단일선, PEG의 메톡시 양성자, α 에피머), 3.36 (3 H, 단일선, PEG의 메톡시 양성자, β 에피머), 3.23 (1 H, 다중선, β 날록솔의 C6 양성자), 1.46-3.22 (14 H, 다중선, 날록솔의 양성자).
실시예 6
6- CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 3 - 날록솔(α,β-PEG 3 -Nal)의 합성
6.A. 6- CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 3 -O-3- MEM - 날록솔의 α 및 β 에피머 혼합물의 합성
NaH(광유 중의 60%, 38 mg, 0.94 mmole)를 디메틸포름아미드("DMF", 8 mL) 중의 3-MEM-날록솔[98 mg, 0.24 mmole, 실시예 5에서 제조된 것이며 실시예 5의 반응식에서 (2)로 표시됨]의 용액에 첨가하였다. 용액을 N2 대기 하 실온에서 15 분 동안 교반하고, 여기에 DMF(1 mL) 중의 CH3-(OCH2CH2)3Br (320 mg, 1.41 mmole)의 용 액을 첨가하였다. 생성된 용액을 N2 하에서 오일 조에서 2 시간 동안 가열하였다.
HPLC 분석 결과 원하는 생성물인 α- 및 β-6-CH3-(OCH2CH2)3-O-3-MEM-날록솔의 혼합물이 약 95%의 수율로 형성된 것으로 나타났다. DMF를 회전 증발하여 제거하여 점성의 백색 고체를 얻었다. 조 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
6.B. 6- CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 3 -O- 날록솔의 α 및 β 에피머 혼합물(α,β- PEG 3 - Nal )의 합성
상기 6.A.에서 얻은 조 α- 및 β-6-CH3-(OCH2CH2)3-O-3-MEM-날록솔 혼합물을 3 mL의 CH2Cl2에 용해시켜 흐린 용액을 형성하고, 여기에 4 mL의 트리플루오로아세트산("TFA")을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. HPLC 분석 결과 반응이 완결된 것으로 나타났다. 용매인 CH2Cl2를 회전 증발로 제거하였다. 남은 용액에 5 mL의 물을 첨가한 후, K2C03를 첨가하여 과량의 TFA를 없애고, pH를 8로 조정하였다. 그 후 용액을 CHCl3(3 x 50 mL)로 추출하였다. CHCl3 추출물을 합하고 0.1 N HCl 용액(3 x 50 mL)로 추출하였다. 남은 수상을 K2C03를 첨가하여 다시 pH 8로 조정한 후, CHCl3(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조하였다. 용매를 제거한 후, 무색의 점성 고체를 얻었다.
고체를 CHCl3/CH30H(30:1)을 용리제로 사용하여 실리카겔 컬럼(2 cm x 30 cm)을 2회 통과시켜 정제하였다. 정제된 생성물인 대략 동량의 α 및 β 에피머를 함유하는 6-CH3-(OCH2CH2)3-O-날록솔의 α 및 β 에피머의 혼합물을 NMR로 확인하였다. (46 mg, 0.097 mmole, 6-히드록실-3-MEM-O-날록손을 기준으로 41%의 단리된 수율). 1H NMR(δ, ppm, CDCl3): 6.49-6.72 (2 H, 다중선, 날록솔의 방향족 양성자), 5.79 (1 H, 다중선, 날록솔의 올레핀 양성자), 5.17 (2 H, 다중선, 날록솔의 올레핀 양성자), 4.71 (1 H, 이중선, α 날록솔의 C5 양성자), 4.52 (1 H, 이중선, β 날록솔의 C5 양성자), 3.89(1H, 다중선, α 날록솔의 C6 양성자), 3.56-3.80 (12 H, 다중선, PEG), 3.39 (3 H, 단일선, PEG의 메톡시 양성자, α 에피머), 3.38 (3 H, 단일선, PEG의 메톡시 양성자, β 에피머), 3.22 (1 H, 다중선, β 날록솔의 C6 양성자), 1.14-3.12 (14 H, 다중선, 날록솔의 양성자).
6.C. α-6 - CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 3 -O- 날록솔 및 β-6- CH 3 -( OCH 2 CH 2 ) 3 -O- 날록솔의 분리
PEG3-Nal의 α 및 β 에피머의 조 혼합물 약 80 mg을 최소량의 CHCl3에 용해시키고, CHCl3를 사용하여 제조된 실리카겔 컬럼(2 cm x 30 cm) 상에 로딩하였다. CHCl3/CH30H 혼합물(60:1)로 컬럼을 조심스럽게 용출시켰다. 순수한 α-PEG3-Nal이 첫번째 용출 종이었고(26 mg, 단리된 수율 33%), 그 후 순수한 β-PEG3-Nal(30 mg, 단리된 수율 38%)가 용출되었다. 두 화합물은 모두 무색의 점성 고체였다. α- PEG3-Nal, 1H NMR (δ, ppm, CDCl3): 6.49-6.73 (2 H, 두 개의 이중선, 날록솔의 방향족 양성자), 5.79 (1 H, 다중선, 날록솔의 올레핀 양성자), 5.17 (2 H, 삼중선, 날록솔의 올레핀 양성자), 4.71 (1 H, 이중선, 날록솔의 C5 양성자), 3.81 (1H, 다중선, 날록솔의 C6 양성자), 3.57-3.80 (12 H, 다중선, PEG), 3.40 (3 H, 단일선, PEG의 메톡시 양성자), 1.13-3.12 (14 H, 다중선, 날록손의 양성자). β-PEG3-Nal, 1H NMR(δ, ppm, CDCl3): 6.54-6.72 (2 H, 두 개의 이중선, 날록솔의 방향족 양성자), 5.77 (1 H, 다중선, 날록솔의 올레핀 양성자), 5.15 (2 H, 삼중선, 날록솔의 올레핀 양성자), 4.51 (1 H, 이중선, 날록솔의 C5 양성자), 3.58-3.78 (12 H, 다중선, PEG), 3.39 (3 H, 단일선, PEG의 메톡시 양성자), 3.20 (1 H, 다중선, 날록솔의 C6 양성자), 1.30-3.12 (13 H, 다중선, 날록솔의 양성자).
α,β-6-CH3-(OCH2CH2)5-O-날록솔("α,β-PEG5-Nal") 및 α,β-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔("α,β-PEG7-Nal")을 유사하게 제조하고, 각 이성질체를 분리하고 단리하였다.
실시예 7
시스 - 레티노산 및 날록솔의 PEG- 머의 경구 생체이용률
암컷 스프래그 돌리® 래트(150-200 g)를 할란 랩스(Harlan Labs)로부터 입수하였다. 래트를 외측 경정맥에 삽관하고 연구의 시작 전 72 시간 이상 동안 순응시켰다. 동물을 밤새 절식시켰으나(-1일) 물은 임의로 제공하였다.
투약하는 날 아침(0일), 각 래트의 체중을 재고 캐뉼라를 헤파린(1000 U/mL)으로 씻어 내었다. 급식 튜브를 이용하여 동물에게 PEG화된 약물 또는 유리 약물을 함유하는 수용성 제제를 경구로(위관영양법) 투약하였다. 용량은 mg/kg 체중을 기초로 결정하였다. 용량의 총 부피는 10 mL/kg을 넘지 않았다. 특정한 시간 간격으로(1, 2 및 4 시간), 혈액 샘플(약 1.0 mL)을 캐뉼라를 통해 채취하고, 14 μL의 헤파린을 함유하는 1.5 mL 원심분리관에 넣고, 혼합하고 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 분석 때까지 혈장 샘플을 냉동시켰다(<-70℃). 혈장 샘플을 침전 기술에 의해 정제하고 분석물을 추출하고 질량 선택적 검출기(MSD)가 구비된 고성능 액체 크로마토그래피(LC) 법을 사용하여 분석하였다. 표준 샘플을 동일한 방법으로 제조하여 표준 곡선을 얻고, 이로부터 미지 샘플의 농도를 외삽할 수 있었다(표 II의 결과 참조). 적절한 경우, 내부 표준을 분석에 사용하였다.
시험 화합물의 선택된 성질(예를 들면 분자량 및 용해도)를 표 I에 요약한다. 시험 화합물 중 몇몇의 시험관내 효소 결합 활성도 표 I에 IC50 값으로 보고한다.
Figure 112006050428054-pct00006
* 날록손 계열의 화합물에 대한 Mu-아편제 결합 활성
히드록시진 및 세티리진 계열의 화합물에 대한 히스타민 H-1 결합 활성
레티노산 계열의 화합물의 경구 생체이용율을 계산하고 그 결과를 표 II에 제공한다. 모든 데이터는 6 mg/kg 용량으로 표준화시켰다. 이 화합물에 대한 혈장 농도 대 시간 프로파일을 도 1에 제공한다.
Figure 112006050428054-pct00007
날록손 계열의 화합물에서 각 이성질체의 경구 생체이용율을 계산하여 표 III에 제공한다. 경구 날록손의 용량은 5 또는 10 mg/kg이었고, PEG화 화합물에 대한 용량은 1 mg/kg 용량으로 표준화시켰다. 이 화합물들에 대한 혈장 농도 대 시간 프로파일을 도 2에 제공한다.
Figure 112006050428054-pct00008
상기 결과는 레티노산 및 날록손(유리 염기 형태)과 같은 작고, 친지성인 화합물의 PEG화가 이들의 용해도 및 경구 생체이용율을 증가시킨다는 것을 나타낸다. 반면, 올리고머 PEG의 부착은 모 화합물의 분자량도 증가시키고(약 500 달톤보다 크게), 특히 PEG7-13-시스-RA 및 PEG11-13-시스-RA를 사용한 실시예에서 보는 바와 같이 PEG-머의 길이가 증가됨에 따라, 고도로 수용성인 화합물의 경구 투과를 제한할 수 있다.
실시예 8
시스 - 레티노산 및 날록손의 PEG- 머의 혈액 뇌 장벽(BBB)을 통한 운반
이 실험에 사용된 인 시투(in situ) 뇌 관류 기술에서는 손상되지 않은 래트 뇌를 사용하여 (i) 정상 생리 조건 하에서 BBB를 통한 약물 투과를 결정하고, (ii) 수동 확산 대 담체 매개 운반과 같은 운반 기전을 연구하였다.
단일 시점 방법(single time-point method)을 사용하여 관류를 수행하였다. 간략히 설명하면, 시험 화합물을 함유하는 관류액(perfusate)을 주입 펌프를 사용하여 일정한 속도로(20 mL/min) 왼쪽 외측 경동맥을 통하여 래트에게 주입하였다. 관류 유속은 정상 생리 압력(80-120 mmHg)에서 뇌로의 액 흐름을 완전히 조절하도록 설정되었다. 관류의 지속 시간은 30초였다. 관류 후 즉시 뇌 맥관계를 추가의 30 초 동안 약물이 없는 관류액으로 관류하여 잔류 약물을 제거하였다. 펌프를 끄고 두 개골로부터 뇌를 즉시 제거하였다. 먼저 각 래트로부터의 왼쪽 뇌 샘플의 중량을 측정하고 폴리트론(Polytron) 호모게나이저를 사용하여 균질화시켰다. 4 mL의 20% 메탄올을 각 래트 뇌에 균질화를 위해 첨가하였다. 균질화 후, 균질화물의 총 부피를 측정하고 기록하였다.
측정된 양의 균질화물을 유기 용매로 희석시키고 이어서 원심분리시켰다. 상등액을 제거하고, 질소 기류에서 증발시키고 재구성하고 LC/MS/MS로 분석하였다. 블랭크(즉, 약물이 없는) 뇌 균질화물에 약물을 가하여 생성시킨 검정 곡선에 대하여 뇌 균질화물의 약물 농도의 정량을 수행하였다. 뇌 균질화물의 약물 농도의 분석은 삼중으로 수행하고, 그 값을 사용하여 관류 초당 래트 뇌 그램당 피코몰로 뇌 섭취 속도를 계산하였다.
각 관류 용액은 아테놀롤(표적 농도, 50 μM), 안티피린(표적 농도, 5 μM) 및 20μM 표적 농도의 시험 화합물(13-시스-레티노산, PEGn-13-시스-레티노산, 날록손 또는 PEGn-Nal)을 함유했다.
각 시험 화합물의 BBB 섭취를 계산하고, 표준화하여 표 IV에 기록하였다. 모든 데이터는 30초 동안 20 mL/min의 관류 속도에서 5 μM 투약 용액에 대하여 표준화되었다.
Figure 112006050428054-pct00009
상기 결과는 13-시스-레티노산과 같은 친지성 화합물의 PEG화가 뇌 섭취 속도("BUR")를 현저히 감소시킬 수 있고, 예를 들면, 모화합물 "13-시스-레티노산"에 비하여 PEG7-13-시스-RA의 경우에는 4 배, PEG11-13-시스-RA의 경우에는 5 배 만큼 감소시킬 수 있다는 것을 입증한다. 날록손의 경우에는 PEG5-Nal 및 PEG7-Nal에 대하여 16 배의 BUR의 감소를 관찰하였다. 히드록시진에 대하여, BUR은 PEG7-Hyd로서 투여하였을 때 약 29 배 감소하였다. 혈액-뇌 장벽을 통한 세티리진의 상대적으로 최소의 운반은 PEG7-Cet로서 투여하였을 때 현저히 변경되지 않았다.
따라서, 종합적으로, 이와 같은 소분자 약물에 작은 수용성 폴리머를 부착함으로써, 생물학적 막, 예를 들면 위-장 장벽, 혈액-뇌 장벽, 태반 장벽 등과 관계된 막을 통과하는 능력을 변형시켜서 약물의 전달 프로파일을 최적화시킬 수 있다는 것을 놀랍게도 발견하였다. 더욱 중요하게는, 경구 투여 약물의 경우, 하나 이상의 작은 수용성 폴리머의 부착이 혈액-뇌 장벽과 같은 생물학적 장벽을 통한 이러한 약물의 운반 속도를 현저히 감소시키는데 효과적이라는 것을 발견하였다. 이상적으로는, 이러한 변형된 약물의 위-장관을 통한 운반은 의미 있는 정도로 부정적 영향을 받지 않아서, 혈액-뇌 장벽과 같은 생물학적 장벽을 통한 운반은 현저하게 저해되는 반면 변형된 약물의 경구 생체이용율은 임상적으로 효과적인 수준으로 유지된다.
실시예 7 및 8에서 생성된 데이터는 각각 13-시스-레티노산 및 날록손의 BBB 운반 및 상대적 경구 생체이용율에 PEG 크기가 미치는 영향을 비교하기 위하여 도시되었다. 도 3-7을 참조하라. 도 3에서, PEG 3-머, PEG 5-머, PEG 7-머 및 PEG 11-머 각각을 13-시스-레티노산에 부착하는 것이 그의 경구 생체이용율에 미치는 효과를 조사하였다. 도 4에서는, 이 다양한 PEG머의 공유 부착이 13-시스-레티노산의 혈액-뇌 장벽 운반에 미치는 효과를 조사하였다. 도 5에서는, PEG 3-머, PEG 5-머 및 PEG 7-머 각각의 공유 부착이 날록손의 경구 생체이용율에 미치는 효과를 조사하였다. 도 6에서는 이러한 PEG-머의 공유 부착이 날록손의 혈액 뇌-장벽 운반에 미치는 효과를 입증한다. 도 7은 PEGn-Nal 화합물이 날록손보다 더 높은 경구 생체이용율을 갖는다는 것을 나타낸다. 이 도면들에서 알 수 있는 바와 같이, PEG 올리고머의 크기가 증가함에 따라, BBB 섭취 속도는 현저히 감소하는 반면, 모 분자에 비한 경구 생체이용율은 증가한다.
날록손의 α- 및 β-이성질체 사이의 경구 생체이용율의 차이는 그들의 물리화학적 성질의 차이에 기인할 수 있다. 하나의 이성질체가 다른 이성질체보다 약간 더 친지성인 것으로 보이며, 따라서 경구 생체이용율에 작은 차이가 나타난다.
실시예 9
PEG- 날록솔의 시험관내 대사
PEG화가 날록손의 II 상 대사(글루쿠론화)에 미치는 효과를 연구하기 위해 시험관내 방법을 개발하였다. 이 방법은 NADPH 재생성 시스템(NRS) 용액의 제조를 필요로 한다. NRS 용액은 1 mL의 탈이온수에 중탄산나트륨(22.5 mg)을 용해시켜서 제조한다. 이 용액에 B-니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트 소듐 염 또는 NADP(1.6 mg), 글루코스-6-포스페이트(7.85 mg), 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나제(3 μL), 우리딘 5-디포스포글루쿠론산 트리소듐 염 또는 UDPGA (2.17 mg), 아데노신 3'-포스페이트 5'-포스포술페이트 리튬 염 또는 PAPS(0.52 mg), 및 1 M 염화마그네슘 용액(10 μL)을 첨가하였다. 고체가 모두 용해된 후, 용액을 얼음 조에 저장하였다.
중량을 측정한 양의 날록손 HCl, 6-mPEG3-O-날록손, α-6-mPEG5-0-날록손, 및 α-mPEG7-O-날록손을 1 mL의 탈이온수에 용해시켜서 30 mM 시험 품목 스톡 용액을 제조하였다.
수컷 스프래그 돌리 래트 마이크로좀(20 mg/mL 농도로 0.5 mL; 인-비트로 테크놀로지스(In-vitro Technologies, Baltimore, MD)의 M00001)을 냉동고에서 꺼내 얼음 조에서 해동시켰다. 40 μL의 간 마이크로좀을 시험 바이알에서 60 μL의 탈이온수를 넣어 100 μL로 희석하였다. 시험 바이알에 pH 7.4(640 μL)의 트리스 완충액 및 시험 품목 스톡(10 μL)를 첨가하여 750 μL 부피로 만들었다.
각 시험 바이알 및 NRS 용액을 별도로 5 분 동안 37℃ 수조에 두었다. NRS 용액(250 μL)을 각 시험 바이알에 첨가하였다. 첫번째 시험 바이알에 NRS의 첨가시 반응 타이머를 시작시켰다. 각 샘플(200 μL)을 모은 후 과염소산(20 μL)을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 샘플을 하기 시점에 수거하였다: 0-2, 20, 40 및 60 분. 종결된 시험 바이알 모두를 얼음 조에 저장하였다.
아세토니트릴(100 μL)을 각 시험 바이알에 첨가하고, 이것을 3000 x g에서 5 분 동안 원심분리시켰다. 상등액(230 μL)을 회수한 후 10 μL의 시험 용액을 LC/MS 방법으로 분석하였다. 각 샘플에서 시험 품목의 농도를 각 시점에서 측정하고 기록하였다.
표 V는 간 마이크로좀과 함께 배양한 후 남은 활성 성분의 퍼센트를 나타낸다.
Figure 112006050428054-pct00010
표 V의 결과로부터 볼 때, 올리고머로 PEG화하는 것이 날록솔과 같은 소분자에 대한 글루쿠론화의 속도를 감소시키는 것으로 결론지을 수 있다. 또한, PEG 올리고머 사슬이 증가함에 따라, 글루쿠론화의 속도가 감소된다. 또한, PEG3-날록솔의 α-이성질체 및 β-이성질체의 비교로부터 β-이성질체가 단리된 래트 간 마이크로좀의 시토크롬 P450 동종효소에 대해 좋지 않은 기질이라는 것을 알 수 있다. 이 관찰은 도 7에 도시된 생체내 데이터를 확인시켜 준다.
도 8 및 9의 데이터를 보면, 작은 PEG의 부착이 약물 대사의 속도를 감소시키는데 효과적일 수 있는 것으로 보인다(날록손의 경우 글루쿠로니드 형성에서 보는 바와 같이). α-이성질체에 비교할 때 혈중의 β-이성질체의 더 높은 수준은 올리고머 PEG 분자의 공유 부착의 결과, 일차 통과 효과의 현저한 저해, 즉 일차 통과 대사의 정도의 현저한 저해에 기인하는 것 같다(도 7). PEG 분자는 입체 장애 및(또는) 친수성 또는 소수성 효과를 생성시킬 수 있고, 이는 PEG가 β-이성질체 형에 부착될 때 β-이성질체 콘쥬게이트의 시토크롬 P450 동종효소에 대한 친화도를 PEG가 α-이성질체 형에 부착될 때에 비해 더 큰 정도로 변경시킨다. β-이성질체 대사체의 수준은 α-이성질체 대사체 및 비-PEG화 날록손과 비교할 때 더 낮다.
실시예 10
μ- 아편제 수용체에 대한 여러 가지 아편유사제 길항제의 활성
개별적인 일련의 실험에서, 날록손, 기타 아편유사제 길항제 및 여러 가지 콘쥬게이트의 μ-아편제 수용체에 대한 생체활성을 시험관 내에서 측정하였다. 결과는 표 VI에 요약되어 있다.
Figure 112006050428054-pct00011
상기 표에서는, 각 화합물에 대해, 모약물과 비교할 때의 여러 가지 PEG 콘쥬게이트 각각의 상대적 생체활성의 측정치로서 생체활성이 기재되어 있다. EC50은 표준 용량-반응 곡선에서 기저선과 최대 반응 사이의 중간의 반응을 일으키는 작용제의 농도이다. 상기 데이터에서 보는 바와 같이, 각각의 PEGn-Nal 콘쥬게이트는 생체활성이며, 사실상 모든 6-날록손 또는 날록솔 콘쥬게이트는 비변형된 모화합물의 약 5% 내지 약 35%에 이르는 생체활성을 나타내면서 모약물의 생체활성 정도보다 5% 이상인 생체활성 정도를 유지하였다. 생체활성에 있어서, PEG550-6-NH-날록손은 모화합물 (6-NH2-날록손)의 생체활성의 약 13%를 갖고, α-PEG3-Nal는 모화합물 (α-6-OH-날록솔)의 생체활성의 약 30%를 갖고, β-PEG3-Nal는 모화합물(α-6-OH-날록솔)의 생체활성의 약 35%를 갖는다.
실시예 11
실질적으로 단분자량인 올리고(에틸렌 글리콜)메틸 에테르 및 그들의 유도체를 만드는 방법
본 발명의 단분자 (단분산성) PEG를 아래 상세히 제시된 바와 같이 제조하였다. 이들 단분자 PEG는 특히 본 발명의 변형된 활성제를 제공하고 목적 활성제의 장벽 운반 특성에 원하는 변형을 부여하는데 유리하다.
아래 예시된 방법은 본 발명의 또 다른 측면을 나타내는데, 그것은 할로-유도된 (예컨대, 브로모 유도된) 올리고(에틸렌 옥사이드)를 이용하여 저분자량의 단분산성 올리고(에틸렌 글리콜)로부터 단분산성 올리고(에틸렌 옥사이드)메틸 에테르를 제조하는 방법이다. 또한 본원에서 제공되는 본 발명의 또 다른 측면은 할로-유도된 올리고(에틸렌 옥사이드)메틸 에테르를 이용하여 활성제에 (단분자량 조성물로부터의) 올리고(에틸렌 옥사이드)메틸 에테르를 커플링시키는 방법이다.
도식적으로, 반응은 다음과 같이 표시될 수 있다.
Figure 112006050428054-pct00012
10.A. CH 3 0CH 2 CH 2 Br 로 CH 3 O -( CH 2 CH 2 O ) 5 - H의합성
Figure 112006050428054-pct00013
테트라(에틸렌 글리콜) (55 mmol, 10.7 g)을 100 mL의 테트라히드로푸란 ("THF")에 용해시키고, 이 용액에 실온에서 KOtBu (55 mL, THF 중 1.O M)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 30 분 동안 교반하고, 이어서 CH3OCH2CH2Br (55 mmol, 50 mL THF 중 5.17 mL)를 적가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 후, H20 (300 mL)/CH2Cl2 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 혼합하고, 이어서 무수 Na2S04 상에서 건조하였다. 고체 건조제를 여과해 내고 증발하여 용매를 제거한 후, 회수된 조 잔류물을 실리카겔 컬럼 (CH2Cl2 : CH30H = 60 : 1 ~ 40 : 1)를 이용하여 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 순수한 펜타(에틸렌 글리콜)모노메틸 에테르를 얻었다. (수율 35%). 1H NMR(CDC13) δ 3.75-3.42 (m, 20 H, OCH2CH20), 3.39 (s, 3H,MeO).
10.B. MeOCH 2 CH 2 Br 를 이용한 CH 3 O -( CH 2 CH 2 O ) 7 -H의 합성
THF (100 mL) 중의 헥사(에틸렌 글리콜) (10 g, 35 mmole) 및 2-브로모에틸 메틸 에테르 (4.9 g, 35 mmole)의 용액에 수소화 나트륨 (2.55 g, 106 mmole)을 서서히 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 두 시간 동안 교반하였다. HPLC은 mPEG7-OH가 약 54 % 수율로 형성되었음을 나타내었다. 그리고 나서 묽은 염산을 첨가하여 과량의 수소화 나트륨을 없앰으로써 이 반응을 중지시켰다. 모든 용매를 회전 증발기를 이용하여 제거하여 갈색의 점성 액체를 얻었다. 준분취용 HPLC (20 cm x 4 cm, C18 컬럼, 이동상으로서 아세토니트릴 및 물)를 이용하여 순수한 mPEG7-OH를 무색 액체로 얻었다 (4.9 g, 41 % 단리 수율).
lH NMR(CDCl3): 2.57 ppm (삼중선, 1H, OH); 3.38 ppm (단일선, 3H, CH30) ; 3.62 ppm (다중선, 30 H, OCH2CH2).
10.C. CH 3 O -( CH 2 CH 2 O ) 5 -Br의 합성
트리에틸 아민 (5.7ml, 40 mmol)을 CH30-(CH2CH20)5-OH (5.0 g, 20 mmol)에 교반하면서 첨가하였다. 용액을 N2 하의 얼음 조에서 냉각하고, 2.5 ml의 메탄술포닐 클로라이드 (32 mmol)를 30 분에 걸쳐 적가하였다. 이어서 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물 (40 ml)을 반응 혼합물에 첨가하고 용액을 CH2Cl2 (3 x 150 ml)로 추출하고 유기상을 0.1 N HCl (3 x 80 ml) 및 물 (2 x 80 ml)로 세척하였다. Na2S04로 건조하고 용매를 제거한 후에, 밝은 갈색의 액체를 얻었다. 생성물 및 Bu4NBr (12.80 g, 39.7 mmol)을 CH3CN (50 ml)에 용해시키고 생성된 용액을 N2 하에서 15 시간 동안 50 ℃에서 교반하였다. 실온까지 냉각한 후, CH3CN를 회전 증발기로 제거하여 붉은색 액체를 얻었고, 이것을 150 ml 물에 용해시키고 EtOAc (2 x 200ml)로 추출하였다. 유기상을 혼합하고, 물로 세척하고 Na2SO4 상에서 건조하였다. 용매를 제거한 후, 붉은색 액체를 얻었다 (4.83 g, 77.4%). 1H NMR (300 Hz, CDCl3): δ 3.82 (t, 2H), 3.67 (m, 14H), 3.51 (m, 2H), 3.40 (s, 3H).
실시예 11
mPEG3N - 메플로퀸의 합성
메플로퀸 HCl 염 (200 mg, 0.48 mmol) 및 mPEG3-부티알데히드 (280 mg, 1.20 mmol)의 메탄올 용액 (5 mL)에 소듐 시아노보로하이드리드 (60 mg, 0.96 mmol) 수 용액 (1 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하에서 교반하면서 50 ℃의 오일 조에서 16 시간 동안 가열하였다. HPLC는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 이어서, 모든 용매를 회전 증발기로 제거하여 조 생성물을 얻었다. 분취용 역상 HPLC로 정제한 후에, 순수한 mPEG-3-N-메플로퀸 콘쥬게이트를 무색의 점성 액체로서 수득하였다 (160 mg, 0.27 mmol, 56% 단리 수율). 1H NMR(CDCl3, ppm): 8.15 (다중선, 3 H, 방향족 고리); 7.73 (삼중선, 1 H, 방향족 고리); 5.86 (이중선, 1 H, CH); 3.67 (다중선, 14 H, PEG 주쇄); 3.52 (단일선, 3 H, PEG-OCH3); 3.18 (다중선, 2 H, PEG-CH2); 0.52-2.74 (다중선, 13 H, PEG 및 시클로헥실 양성자).
도식적으로, 반응은 다음과 같이 묘사된다.
Figure 112006050428054-pct00014

Claims (55)

  1. 6-CH3-(OCH2CH2)5-O-날록솔;
    6-CH3-(OCH2CH2)6-O-날록솔;
    6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔;
    6-CH3-(OCH2CH2)8-O-날록솔; 및
    6-CH3-(OCH2CH2)9-O-날록솔
    또는 이들의 제약학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물로서, α-6 이성질체, β-6 이성질체 또는 α-6 및 β-6 이성질체의 혼합물인 화합물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    α,β-6-CH3-(OCH2CH2)5-O-날록솔;
    α,β-6-CH3-(OCH2CH2)6-O-날록솔;
    α,β-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔;
    α,β-6-CH3-(OCH2CH2)8-O-날록솔; 및
    α,β-6-CH3-(OCH2CH2)9-O-날록솔
    또는 이들의 제약학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 화합물은 α,β-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔 또는 이의 제약학적으로 허용되는 염인 화합물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    α-6-CH3-(OCH2CH2)5-O-날록솔;
    α-6-CH3-(OCH2CH2)6-O-날록솔;
    α-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔;
    α-6-CH3-(OCH2CH2)8-O-날록솔; 및
    α-6-CH3-(OCH2CH2)9-O-날록솔
    또는 이들의 제약학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 화합물은 α-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔 또는 이의 제약학적으로 허용되는 염인 화합물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    β-6-CH3-(OCH2CH2)5-O-날록솔;
    β-6-CH3-(OCH2CH2)6-O-날록솔;
    β-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔;
    β-6-CH3-(OCH2CH2)8-O-날록솔; 및
    β-6-CH3-(OCH2CH2)9-O-날록솔
    또는 이들의 제약학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 화합물은 β-6-CH3-(OCH2CH2)7-O-날록솔 또는 이의 제약학적으로 허용되는 염인 화합물.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용되는 염, 및 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약학적 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090143328A1 (en) * 2001-08-13 2009-06-04 Mcdonald George Method of Treating Cancer by Administration of Topical Active Corticosteroids
EP2939696B1 (en) 2001-10-18 2016-03-09 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of opioid antagonists
NZ583573A (en) 2003-12-16 2011-12-22 Nektar Therapeutics Pegylated naloxol
US20060182692A1 (en) * 2003-12-16 2006-08-17 Fishburn C S Chemically modified small molecules
US8435940B2 (en) 2006-01-05 2013-05-07 University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to improving properties of pharmacological agents targeting nervous system
PT1988910T (pt) 2006-02-28 2018-02-07 Kodiak Sciences Inc Acriloiloxietilfosforilcolina contendo conjugados de polímeros e sua preparação
ES2629766T3 (es) * 2006-04-21 2017-08-14 Nektar Therapeutics Reducción estereoselectiva de una morfinona
JP2010509227A (ja) * 2006-11-07 2010-03-25 ネクター セラピューティックス エイエル，コーポレイション オピオイド作動薬およびオピオイド拮抗薬の用量形態および同時投与
KR100829890B1 (ko) 2007-02-08 2008-05-16 주식회사 바이오폴리메드 신규한 레티놀 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는주름 개선용 화장료 조성물
AU2014200906B2 (en) * 2007-03-12 2016-07-07 Nektar Therapeutics Oligomer-protease inhibitor conjugates
PL2134371T3 (pl) 2007-03-12 2015-06-30 Nektar Therapeutics Koniugaty oligomeru agonisty opioidowego
US8173666B2 (en) 2007-03-12 2012-05-08 Nektar Therapeutics Oligomer-opioid agonist conjugates
EP2500039A1 (en) 2007-03-12 2012-09-19 Nektar Therapeutics Oligomer-antihistamine conjugates
WO2008112286A2 (en) * 2007-03-12 2008-09-18 Nektar Therapeutics De novo synthesis of conjugates
US9782488B2 (en) * 2007-03-12 2017-10-10 Nektar Therapeutics Oligomer-beta blocker conjugates
US10512644B2 (en) 2007-03-12 2019-12-24 Inheris Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-opioid agonist conjugates
US8389759B2 (en) * 2007-03-12 2013-03-05 Nektar Therapeutics Oligomer-anticholinergic agent conjugates
CN102816111B (zh) * 2007-03-12 2014-08-06 尼克塔治疗公司 低聚物-蛋白酶抑制剂偶联物
WO2009032286A2 (en) 2007-09-06 2009-03-12 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-calcium channel blocker conjugates
US8741858B2 (en) 2007-09-21 2014-06-03 Zhongxu Ren Oligomer-nucleoside phosphate conjugates
WO2009045539A2 (en) 2007-10-05 2009-04-09 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-corticosteroid conjugates
WO2009054916A2 (en) * 2007-10-19 2009-04-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer conjugates of lidocaine and its derivatives
WO2009058387A2 (en) 2007-11-02 2009-05-07 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-nitroimidazole anti-infective conjugates
US8536213B2 (en) 2007-11-16 2013-09-17 Nektar Therapeutics Oligomer-dantrolene conjugates and related compounds
MX2010005813A (es) * 2007-11-28 2010-06-15 Nektar Therapeutics Conjugados oligomero-triciclicos.
WO2009089053A1 (en) * 2008-01-11 2009-07-16 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-guanidine class conjugates
WO2009094209A1 (en) * 2008-01-25 2009-07-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-diarylpiperazine conjugates
JP5704925B2 (ja) * 2008-02-08 2015-04-22 ウェルズ ファーゴ バンク ナショナル アソシエイション オリゴマー−カンナビノイドコンジュゲート
US8466276B2 (en) 2008-02-22 2013-06-18 Nektar Therapeutics Oligomer conjugates of heteropentacyclic nucleosides
US9095620B2 (en) * 2008-03-12 2015-08-04 Nektar Therapeutics Reagents
US9006219B2 (en) * 2008-03-12 2015-04-14 Nektar Therapeutics Oligomer-foscarnet conjugates
US20110059921A1 (en) * 2008-03-27 2011-03-10 Ektar Therapeutics Oligomer-Nitrogenous Base Conjugates
CN101998866A (zh) * 2008-04-11 2011-03-30 尼克塔治疗公司 低聚物-芳氧基-取代的丙胺共轭物
US9095621B2 (en) 2008-04-25 2015-08-04 Nektar Therapeutics Oligome-bis-chromonyl compound conjugates
KR20210005318A (ko) 2008-04-30 2021-01-13 이뮤노젠 아이엔씨 가교제 및 그 용도
CA2723685C (en) * 2008-05-07 2016-09-27 Nektar Therapeutics Oral administration of peripherally-acting opioid antagonists
US11033631B2 (en) 2008-06-09 2021-06-15 Nektar Therapeutics Methods of treating CYP2D6 alternative metabolizers
EP3342427A1 (en) 2008-09-16 2018-07-04 Nektar Therapeutics Pegylated opioids with low potential for abuse
WO2010033219A2 (en) 2008-09-17 2010-03-25 Nektar Therapeutics Protease inhibitors having enhanced features
EP2344201A1 (en) * 2008-09-17 2011-07-20 Nektar Therapeutics Oligomer-protease inhibitor conjugates
MX2011007940A (es) * 2009-01-28 2011-08-15 Nektar Therapeutics Conjugados de oligomero-fenotiazina.
EP2400989B1 (en) 2009-02-24 2016-08-10 Nektar Therapeutics Gabapentin-peg conjugates
US8530492B2 (en) 2009-04-17 2013-09-10 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
WO2010120388A1 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
MX2011012044A (es) 2009-05-13 2011-12-14 Nektar Therapeutics Compuestos de triazina aromatica sustituida que contienen oligomeros.
WO2010132693A2 (en) 2009-05-13 2010-11-18 Nektar Therapeutics Oligomer-containing pyrrolidine compounds
SG176068A1 (en) 2009-06-03 2011-12-29 Immunogen Inc Conjugation methods
US20120108501A1 (en) 2009-06-12 2012-05-03 Nektar Therapeutics Protease Inhibitors
CN105503889B (zh) * 2009-07-21 2019-12-24 尼克塔治疗公司 低聚物-阿片样激动剂轭合物
CA2768392C (en) 2009-07-21 2018-04-17 Nektar Therapeutics Oligomer-opioid agonist conjugates
CN102573921B (zh) * 2009-09-29 2015-11-25 尼克塔治疗公司 低聚物-拟钙剂结合物及相关化合物
US8722732B2 (en) 2009-09-29 2014-05-13 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
US20130023553A1 (en) 2010-01-12 2013-01-24 Nektar Therapeutics Pegylated opioids with low potential for abuse and side effects
WO2011091050A1 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Nektar Therapeutics Oligomer-tricyclic conjugates
WO2011103559A1 (en) 2010-02-22 2011-08-25 Nektar Therapeutics Oligomer modified diaromatic substituted compounds
US20160015656A2 (en) * 2010-08-05 2016-01-21 Nitto Denko Corporation Composition for regenerating normal tissue from fibrotic tissue
US9012469B2 (en) * 2010-09-30 2015-04-21 Astrazeneca Ab Crystalline naloxol-peg conjugate
WO2012051551A1 (en) 2010-10-15 2012-04-19 Nektar Therapeutics N-optionally substituted aryl-2-oligomer-3-alkoxypropionamides
JP6002144B2 (ja) 2010-12-10 2016-10-05 ネクター セラピューティクス ヒドロキシル化三環化合物
US9540330B2 (en) 2010-12-15 2017-01-10 Nektar Therapeutics Oligomer-containing hydantoin compounds
CN103517712A (zh) * 2010-12-15 2014-01-15 神经佐剂股份有限公司 神经肽类似物、组合物和治疗疼痛的方法
WO2012083153A1 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Nektar Therapeutics Oligomer-containing apremilast moiety compounds
WO2012088506A1 (en) 2010-12-23 2012-06-28 Nektar Therapeutics Polymer-semaxanib moiety conjugates
US10525054B2 (en) 2011-11-07 2020-01-07 Inheris Biopharma, Inc. Compositions, dosage forms, and co-administration of an opioid agonist compound and an analgesic compound
US9457024B2 (en) 2011-11-07 2016-10-04 Nektar Therapeutics Compositions, dosage forms, and co-administration of an opioid agonist compound and a non-steroidal anti-inflammatory drug
CN103289075B (zh) * 2012-02-22 2016-01-20 天津键凯科技有限公司 聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物和应用
JP6265998B2 (ja) 2012-09-17 2018-01-24 ネクター セラピューティクス オリゴマー含有ベンズアミド系化合物
US10131682B2 (en) 2012-11-24 2018-11-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to a cell binding molecules
US9789198B2 (en) * 2013-05-31 2017-10-17 Jenkem Technology Co., Ltd. (Tianjin) Low molecular weight polyethylene glycol drug conjugates having improved drug biological activity
CN104208715B (zh) * 2013-05-31 2016-12-28 天津键凯科技有限公司 具有提高的药物生物活性的低分子量聚乙二醇药物结合物
JP6577943B2 (ja) 2013-06-28 2019-09-18 ネクター セラピューティクス κオピオイド作動薬及びその使用
SI3041513T1 (sl) 2013-09-08 2020-11-30 Kodiak Sciences Inc. Zwitterionski polimerni konjugati faktorja VIII
WO2015079459A1 (en) 2013-11-27 2015-06-04 Nektar Therapeutics (India) Pvt.Ltd. Opioid agonists and uses thereof
US9192570B2 (en) 2013-12-20 2015-11-24 AntiOP, Inc. Intranasal naloxone compositions and methods of making and using same
AU2014384434B2 (en) 2014-02-28 2016-11-03 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Charged linkers and their uses for conjugation
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US10272158B2 (en) * 2014-07-03 2019-04-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Compounds for treating biofilm infection
EP3207128B1 (en) 2014-10-17 2022-07-27 Kodiak Sciences Inc. Butyrylcholinesterase zwitterionic polymer conjugates
US10314839B2 (en) 2014-10-20 2019-06-11 Elysium Therapeutics, Inc. Diversion-resistant opioid formulations
CN104473927A (zh) * 2014-12-05 2015-04-01 北京键凯科技有限公司 一种聚乙二醇与药物分子结合物及其制备方法
EP3237388B1 (en) 2014-12-23 2019-07-03 Nektar Therapeutics N-methyl-n-(1-phenyl-2-(1-pyrrolidinyl)ethyl)-2-aminophenylacetamide derivatives agonists for the kappa opioid receptor
US10766864B2 (en) 2015-05-08 2020-09-08 Nektar Therapeutics Morphinan derivatives for the treatment of neuropathic pain
EP3319936A4 (en) 2015-07-12 2019-02-06 Suzhou M-conj Biotech Co., Ltd. PLACES OF CONDUCT FOR THE CONJUGATION OF CELL BINDING MOLECULES
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
AU2016381964B2 (en) 2015-12-30 2024-02-15 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
CN107033154B (zh) * 2016-02-02 2020-02-04 上海瀚迈生物医药科技有限公司 阿片受体拮抗剂缀合物及其应用
CN107033155B (zh) * 2016-02-04 2019-04-26 国药集团国瑞药业有限公司 一种吗啡酮类化合物的立体选择性还原方法
EP3228307A1 (en) 2016-04-05 2017-10-11 Sandoz Ag Solid dispersion comprising opioid antagonists
KR20220147720A (ko) 2016-11-14 2022-11-03 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용
WO2018096464A1 (en) * 2016-11-23 2018-05-31 Aurobindo Pharma Limited Naloxegol oxalate and solid dispersion thereof
WO2018180914A1 (ja) 2017-03-30 2018-10-04 日油株式会社 自壊性アセタールリンカーを有する親水性ポリマー誘導体及びそれを用いた複合体
JP6990355B2 (ja) 2017-03-30 2022-01-12 日油株式会社 ヘテロ二官能性単分散ポリエチレングリコール及びそれを用いた複合体
CN109134479A (zh) * 2017-06-27 2019-01-04 石家庄蒎格医药科技有限公司 结晶聚乙二醇纳洛酮草酸盐及制备方法
WO2019058387A1 (en) * 2017-09-19 2019-03-28 Msn Laboratories Private Limited, R&D Center IMPROVED PROCESS FOR THE PREPARATION OF (5Α, 6Α) -17-ALLYL-6- (2,5,8,11,14,17,20-HEPTAOXADOCOSAN-22-YLOXY) -4,5-EPOXYMORPHINANE-3,14-DIOL AND ITS PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALTS
US20210047465A1 (en) 2018-03-13 2021-02-18 Nof Corporation Heterobifunctional compound having monodispersed polyethylene glycol in main chain and side chain
US20220362397A1 (en) 2019-09-26 2022-11-17 Nof Corporation Heterobifunctional monodispersed polyethylene glycol having peptide linker
EP4041312A4 (en) 2019-10-10 2023-12-20 Kodiak Sciences Inc. METHOD FOR TREATING AN EYE DISORDER
CN113827576B (zh) * 2021-11-17 2023-08-01 北京尚修堂医药科技有限公司 一种活性成分为草酸纳洛解的药物组合物及制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003032990A2 (en) * 2001-10-18 2003-04-24 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of opioid antagonists

Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4223163A (en) * 1976-12-10 1980-09-16 The Procter & Gamble Company Process for making ethoxylated fatty alcohols with narrow polyethoxy chain distribution
US4366159A (en) * 1981-09-08 1982-12-28 Michael Richard Magruder Nalbuphine-narcotic analgesic composition and method of producing analgesia
FR2514644A1 (fr) 1981-10-19 1983-04-22 Sanofi Sa Composition pharmaceutique a action antagoniste peripherique des opiaces
US4587046A (en) * 1982-05-18 1986-05-06 The Regents Of The University Of California Drug-carrier conjugates
EP0206448B1 (en) * 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4730048A (en) * 1985-12-12 1988-03-08 Regents Of The University Of Minnesota Gut-selective opiates
US4806556A (en) * 1985-12-12 1989-02-21 Regents Of The University Of Minnesota Gut-selective opiates
US4861781A (en) * 1986-03-07 1989-08-29 The University Of Chicago Quaternary derivatives of noroxymorphone which relieve nausea and emesis
US4719215A (en) * 1986-03-07 1988-01-12 University Of Chicago Quaternary derivatives of noroxymorphone which relieve nausea and emesis
US4801575A (en) * 1986-07-30 1989-01-31 The Regents Of The University Of California Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
US5080891A (en) * 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
JPH01207320A (ja) 1988-02-15 1989-08-21 Daicel Chem Ind Ltd 芳香族ポリエーテルの製造方法
IT1216687B (it) * 1988-04-01 1990-03-08 Boehringer Biochemia Srl Complessi di platino (ii), loro preparazione e impiego come antitumorali.
US5102887A (en) * 1989-02-17 1992-04-07 Arch Development Corporation Method for reducing emesis and nausea induced by the administration of an emesis causing agent
ES2104566T3 (es) * 1989-03-10 1997-10-16 Hoffmann La Roche Reactivos para la determinacion de drogas.
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5324844A (en) * 1989-04-19 1994-06-28 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
JPH0383914A (ja) * 1989-08-18 1991-04-09 W R Grace & Co ドラッグキャリアー
DE3937797A1 (de) * 1989-11-14 1991-05-16 Basf Ag Verfahren zur herstellung von polyetherglykolen
US5130126A (en) * 1990-07-09 1992-07-14 Nippon Oil & Fats Co., Ltd. Polymer-drug conjugate and a method of producing it
IE912365A1 (en) * 1990-07-23 1992-01-29 Zeneca Ltd Continuous release pharmaceutical compositions
JP2829794B2 (ja) * 1991-02-08 1998-12-02 エスエス製薬 株式会社 徐放性経口投与型プラノプロフェン製剤
US5250542A (en) * 1991-03-29 1993-10-05 Eli Lilly And Company Peripherally selective piperidine carboxylate opioid antagonists
US5270328A (en) * 1991-03-29 1993-12-14 Eli Lilly And Company Peripherally selective piperidine opioid antagonists
US5159081A (en) * 1991-03-29 1992-10-27 Eli Lilly And Company Intermediates of peripherally selective n-carbonyl-3,4,4-trisubstituted piperidine opioid antagonists
AU4406793A (en) 1992-06-04 1993-12-30 Clover Consolidated, Limited Water-soluble polymeric carriers for drug delivery
GB9316895D0 (en) * 1993-08-13 1993-09-29 Guy S And St Thomas Hospitals Hepatoselective insulin analogues
EP0599303A3 (en) * 1992-11-27 1998-07-29 Takeda Chemical Industries, Ltd. Peptide conjugate
US5298643A (en) * 1992-12-22 1994-03-29 Enzon, Inc. Aryl imidate activated polyalkylene oxides
US5321095A (en) * 1993-02-02 1994-06-14 Enzon, Inc. Azlactone activated polyalkylene oxides
US5298410A (en) * 1993-02-25 1994-03-29 Sterling Winthrop Inc. Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life
KR100321649B1 (ko) * 1993-03-17 2002-07-22 미네소타 마이닝 앤드 매뉴팩춰링 캄파니 에스테르,아미드또는머캅토에스테르로부터유도된분산보조제를함유하는에어로졸제제
AU7113594A (en) * 1993-06-21 1995-01-17 Enzon, Inc. Site specific synthesis of conjugated peptides
US5643575A (en) * 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5434171A (en) 1993-12-08 1995-07-18 Eli Lilly And Company Preparation of 3,4,4-trisubstituted-piperidinyl-N-alkylcarboxylates and intermediates
US5693609A (en) * 1994-11-17 1997-12-02 Eli Lilly And Company Acylated insulin analogs
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5670477A (en) * 1995-04-20 1997-09-23 Joseph F. Poduslo Method to enhance permeability of the blood/brain blood/nerve bariers to therapeutic agents
WO1996040749A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Johnson & Johnson Corporation Compounds and peptides that bind to the erythropoietin receptor
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
EP0856026A1 (en) 1995-10-19 1998-08-05 Receptagen Corporation Discrete-length polyethylene glycols
US5639705A (en) * 1996-01-19 1997-06-17 Arco Chemical Technology, L.P. Double metal cyanide catalysts and methods for making them
ES2168610T3 (es) * 1996-03-12 2002-06-16 Alza Corp Composicion y forma galenica que contiene un antagonista opioide.
US5856369A (en) 1996-07-30 1999-01-05 Osi Specialties, Inc. Polyethers and polysiloxane copolymers manufactured with double metal cyanide catalysts
DE19632440A1 (de) 1996-08-12 1998-02-19 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von aus Polykationen aufgebauten, geformten Mischhydroxiden
US6214966B1 (en) * 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
DE19651551C2 (de) * 1996-12-11 2000-02-03 Klinge Co Chem Pharm Fab Opioidantagonisthaltige galenische Formulierung
US6011008A (en) * 1997-01-08 2000-01-04 Yissum Research Developement Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Conjugates of biologically active substances
GB9703044D0 (en) * 1997-02-14 1997-04-02 Glaxo Group Ltd Phenyl xanthine esters and amides
US6565885B1 (en) * 1997-09-29 2003-05-20 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Methods of spray drying pharmaceutical compositions
US5972954A (en) * 1997-11-03 1999-10-26 Arch Development Corporation Use of methylnaltrexone and related compounds
WO1999030727A1 (en) * 1997-12-17 1999-06-24 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US6624142B2 (en) * 1997-12-30 2003-09-23 Enzon, Inc. Trimethyl lock based tetrapartate prodrugs
AU2903899A (en) 1998-03-12 1999-09-27 Shearwater Polymers Inc. Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
US6316644B1 (en) * 1998-03-30 2001-11-13 Lg Chemical Ltd. Pilyethoxylated retinamide derivatives and process for preparing the same
US6703381B1 (en) * 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
EP0995757A3 (en) * 1998-08-26 2002-05-22 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Bivalent inhibitors of the proteasome
US7060708B2 (en) 1999-03-10 2006-06-13 New River Pharmaceuticals Inc. Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
KR100345214B1 (ko) 1999-08-17 2002-07-25 이강춘 생체적합성 고분자가 수식된 펩타이드의 비점막 전달
US6713454B1 (en) * 1999-09-13 2004-03-30 Nobex Corporation Prodrugs of etoposide and etoposide analogs
US6541508B2 (en) * 1999-09-13 2003-04-01 Nobex Corporation Taxane prodrugs
US6380405B1 (en) 1999-09-13 2002-04-30 Nobex Corporation Taxane prodrugs
US6451806B2 (en) * 1999-09-29 2002-09-17 Adolor Corporation Methods and compositions involving opioids and antagonists thereof
DK1223915T3 (da) * 1999-10-29 2006-03-06 Nektar Therapeutics Törpulverpræparater med forbedret dispersivitet
ATE317868T1 (de) * 1999-12-22 2006-03-15 Nektar Therapeutics Al Corp Sterisch gehinderte derivate von wasserlöslichen polymeren
US6413507B1 (en) * 1999-12-23 2002-07-02 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol)
AU2001257577A1 (en) 2000-02-28 2001-09-03 Shearwater Corporation Water-soluble polymer conjugates of artelinic acid
US20010049375A1 (en) 2000-03-15 2001-12-06 Wolfgang Sadee Neutral antagonists and use thereof in treating drug abuse
PT1642885E (pt) * 2000-08-29 2009-12-17 Biocon Ltd Utilização de uma composição farmacêutica contendo um derviado de ácido para-aminofenilacético para o tratamento de estados inflamatórios do tracto gastrointestinal
US7829074B2 (en) * 2001-10-18 2010-11-09 Nektar Therapeutics Hydroxypatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers
EP1355671A2 (en) * 2000-11-30 2003-10-29 Nektar Therapeutics Al, Corporation Water-soluble polymer conjugates of triazine derivatives
KR100840846B1 (ko) * 2000-12-22 2008-06-23 스미스클라인비이참피이엘시이 5-[4-[2-(ｎ-메틸-ｎ-(2-피리딜)아미노)에톡시]벤질]티아졸리딘-2,4-디온 메실레이트염
MXPA03007392A (es) 2001-02-20 2003-12-04 Enzon Inc Enlazantes polimericos ramificados terminalmente y conjugados polimericos que contienen los mismos.
PE20020908A1 (es) * 2001-03-21 2002-10-26 Cell Therapeutics Inc Produccion recombinante de polimeros polianionicos y uso de de los mismos
US6828305B2 (en) * 2001-06-04 2004-12-07 Nobex Corporation Mixtures of growth hormone drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6858580B2 (en) * 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6835802B2 (en) 2001-06-04 2004-12-28 Nobex Corporation Methods of synthesizing substantially monodispersed mixtures of polymers having polyethylene glycol moieties
US6713452B2 (en) * 2001-06-04 2004-03-30 Nobex Corporation Mixtures of calcitonin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6756354B2 (en) * 2001-09-05 2004-06-29 Deanna Jean Nelson Therapeutic compositions containing oligo (ethylene glycol)-terminated 1,2-dithiolanes and their conjugates
US20030143185A1 (en) 2001-10-29 2003-07-31 Shearwater Corporation Polymer conjugates of protein kinase C inhibitors
EP1453545B1 (en) * 2001-10-30 2007-04-18 Nektar Therapeutics Al, Corporation Water-soluble polymer conjugates of retinoic acid
EP1501352B1 (en) 2001-12-14 2015-02-18 The University Of Wyoming Controlled release of oxycodone
JP4625637B2 (ja) 2002-02-22 2011-02-02 シャイア エルエルシー 活性物質送達系及び活性物質を保護し投与する方法
WO2004043396A2 (en) 2002-11-09 2004-05-27 Nobex Corporation Modified carbamate-containing prodrugs and methods of synthesizing same
WO2004082620A2 (en) 2003-03-13 2004-09-30 Controlled Chemicals, Inc. Oxycodone conjugates with lower the abuse potential and extended duration of action
GB0317815D0 (en) * 2003-07-30 2003-09-03 Amersham Health As Imaging agents
AU2004264818B2 (en) 2003-08-01 2011-09-29 Biocon, Ltd Aryl carbamate oligomers for hydrolyzable prodrugs and prodrugs comprising same
KR20060120141A (ko) * 2003-11-24 2006-11-24 네오스 테크놀로지스, 인크. 글리코페질화 에리트로포이에틴
NZ583573A (en) 2003-12-16 2011-12-22 Nektar Therapeutics Pegylated naloxol
ES2629766T3 (es) * 2006-04-21 2017-08-14 Nektar Therapeutics Reducción estereoselectiva de una morfinona

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003032990A2 (en) * 2001-10-18 2003-04-24 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of opioid antagonists

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