EA015333B1 - Композиции, содержащие конъюгаты, способы их получения и применение - Google Patents

Композиции, содержащие конъюгаты, способы их получения и применение Download PDF

Info

Publication number
EA015333B1
EA015333B1 EA200601167A EA200601167A EA015333B1 EA 015333 B1 EA015333 B1 EA 015333B1 EA 200601167 A EA200601167 A EA 200601167A EA 200601167 A EA200601167 A EA 200601167A EA 015333 B1 EA015333 B1 EA 015333B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
molecular weight
conjugate
low molecular
oligomer
drug substance
Prior art date
Application number
EA200601167A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200601167A1 (ru
Inventor
Майкл Д. Бентли
Тэси Кс. Виегас
Ричард Р. Гудин
Лин Ченг
Ксуан Жао
Original Assignee
Нектар Терапьютикс
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34700098&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA015333(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Нектар Терапьютикс filed Critical Нектар Терапьютикс
Publication of EA200601167A1 publication Critical patent/EA200601167A1/ru
Publication of EA015333B1 publication Critical patent/EA015333B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/337—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing other elements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/78—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/36—Opioid-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/04—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers only
    • C08G65/06—Cyclic ethers having no atoms other than carbon and hydrogen outside the ring
    • C08G65/08—Saturated oxiranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/331—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen
    • C08G65/332—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing carboxyl groups, or halides, or esters thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/333—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen
    • C08G65/33303—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen containing amino group
    • C08G65/33317—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen containing amino group heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/333—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen
    • C08G65/33396—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen having oxygen in addition to nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2203/00—Applications
    • C08L2203/02—Applications for biomedical use

Abstract

Данное изобретение относится к низкомолекулярным лекарственным веществам, химически модифицированным путем ковалентного связывания с водорастворимым олигомером, полученным из монодисперсной или бимодальной композиции водорастворимых олигомеров. Конъюгат согласно настоящему изобретению при введении любым из ряда способов демонстрирует пониженную скорость проникновения через биологические мембраны по сравнению со скоростью проникновения через биологические мембраны низкомолекулярных лекарственных веществ, не связанных с водорастворимым олигомером.

Description

Данное изобретение предлагает композиции, содержащие конъюгаты, состоящие из фрагмента низкомолекулярного лекарственного вещества, связанного с водорастворимым олигомером, и соответствующие способы их получения и применение. Такие композиции обладают определенными преимуществами перед лекарственными веществами, не связанными с водорастворимым олигомером, и в соответствии с настоящим изобретением относятся и/или находят применение в сферах исследования лекарственных препаратов, фармакотерапии, физиологии, органической химии, химии полимеров и других.
Уровень техники
В последние годы использование белков в качестве активных агентов значительно расширилось благодаря нескольким факторам: усовершенствованию технологий идентификации, выделения, очистки и/или рекомбинантного продуцирования; углублению понимания роли белков ίη νΐνο благодаря появлению протеономики; улучшению композиций, средств доставки и подходов к химической модификации белков, усиливающей их фармакокинетические или фармакодинамические свойства.
Говоря о новых подходах к химической модификации белков, следует отметить применение ковалентного связывания полимеров, таких как поли(этиленгликоль) или ПЭГ, с белком с целью улучшения его показателя полужизни в циркуляции, уменьшения иммуногенности и/или сокращения протеолитической деградации. Такой способ ковалентного связывания ПЭГ с белком или другим активным агентом широко известен как ПЭГилирование. Белки для инъекции, которые были модифицированы ковалентным связыванием с ПЭГ, обычно подвергаются связыванию с относительно высокомолекулярными ПЭГполимерами, обладающими молекулярной массой в диапазоне от около 5000 до около 40000 Да.
В то время как модификация относительно больших белков с целью усовершенствования их фармацевтических свойств является, возможно, одним из наиболее распространенных примеров применения ПЭГилирования, эта технология также использовалась, хотя и в ограниченной степени, для повышения биодоступности и облегчения формулирования низкомолекулярных лекарственных веществ, имеющих низкий уровень водорастворимости. К примеру, водорастворимые полимеры, такие как ПЭГ, ковалентно связывались с артилиновой кислотой, чтобы улучшить ее растворимость в воде (патент США № 6461603). Подобным образом ПЭГ ковалентно связывали с соединениями на основе триазина, такими как тримеламол, для улучшения их растворимости в воде и повышения их химической стабильности (АО 02/043772). Ковалентное связывание ПЭГ с бисиндолилмалеимидами использовалось для повышения низкой биодоступности подобных соединений, вызванной их малой растворимостью в воде (АО 03/037384). Цепочки ПЭГ, связанные с низкомолекулярными лекарственными средствами с целью повышения их водорастворимости, обычно имеют размер от примерно 500 до примерно 5000 Да, в зависимости от молекулярной массы низкомолекулярных лекарственных веществ.
Активный агент может вводиться любым из множества способов, включая инъекционное введение, пероральное, ингаляционное, назальное и трансдермальное. Одним из наиболее предпочтительных способов введения, благодаря его простоте, является пероральный. Пероральный прием, наиболее часто применимый для низкомолекулярных препаратов (т.е., препаратов не на основе белка), удобен и часто приводит к более тщательному соблюдению режима и схемы лечения со стороны пациентов по сравнению с другими способами введения. К сожалению, многие низкомолекулярные препараты обладают такими качествами (к примеру, низким уровнем биодоступности при пероральном введении), которые делают пероральный прием непрактичным. Часто качества низкомолекулярных лекарственных веществ, необходимые для растворения и селективной диффузии через различные биологические мембраны, непосредственно вступают в конфликт с качествами, необходимыми для оптимального целевого сродства и введения. Первичные биологические мембраны, которые ограничивают проникновение низкомолекулярных лекарственных веществ в определенные органы или ткани, связаны с определенными физиологическими барьерами, например гематоэнцефалическим барьером, гематоплацентарным барьером и гематотестикулярным барьером.
Гематоэнцефалический барьер защищает мозг от большинства токсичных веществ. Специализированные клетки - астроциты - имеют множество ответвлений, формирующих барьер между капиллярным эндотелием и нейронами мозга. Липиды клеточных оболочек астроцитов и очень плотные соединения между соседними эндотелиальными клетками ограничивают прохождение водорастворимых молекул. Хотя гематоэнцефалический барьер обеспечивает прохождение необходимых питательных веществ, он эффективен для предупреждения проникновения некоторых инородных субстанций и может ограничить уровень попадания других веществ в ткани мозга.
Плацентарный барьер защищает развивающийся и уязвимый плод от многих токсичных веществ, которые могут присутствовать в материнском кровотоке. Этот барьер состоит из нескольких клеточных слоев между материнскими и фетальными кровеносными сосудами в плаценте. Липиды в клеточных мембранах ограничивают диффузию водорастворимых токсинов. Другие вещества, такие как питательные вещества, газы и продукты обмена веществ развивающегося плода могут, тем не менее, преодолевать плацентарный барьер. Как и в случае с гематоэнцефалическим барьером, плацентарный барьер не полностью непроницаем, но эффективно замедляет диффузию большинства токсинов от матери к плоду в процессе развития.
- 1 015333
Для большинства препаратов, принимаемых перорально, проникновение через определенные биологические мембраны, такие как гематоэнцефалический барьер и гематоплацентарный барьер, является крайне нежелательным и может привести к серьезным побочным эффектам, таким как нейротоксичность, бессонница, головная боль, спутанность сознания, ночные кошмары и тератогенность. Этих побочных эффектов, в тяжелых случаях, достаточно, чтобы прекратить разработку лекарственных препаратов, демонстрирующих подобное нежелательное накопление в мозге или плаценте. Таким образом, существует потребность в новых способах эффективной доставки препаратов, в частности низкомолекулярных, в организм пациента, одновременно снижая опасные, а нередко и токсичные побочные эффекты низкомолекулярных лекарственных веществ. Особенно, существует потребность в усовершенствовании способов доставки лекарственных веществ, обладающих оптимальным балансом между хорошей биодоступностью при пероральном введении, биологической активностью и фармакокинетическим профилем. Данное изобретение отвечает этому и другим требованиям.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей конъюгаты причем каждый конъюгат состоит из фрагмента, полученного из низкомолекулярного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой, имеющим от 2 до 30 мономерных звеньев, причем конъюгат имеет пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером.
Олигомер, предпочтительно, получают из монодисперсной (т.е. мономолекулярной) или бимодальной, или даже тримодальной или тетрамодальной композиции. Конъюгаты, приготовленные из монодисперсной олигомерной композиции, называются монодисперсными конъюгатами; конъюгаты, полученные из бимодальной олигомерной композиции - бимодальными конъюгатами, и так далее.
Преимущество изобретения состоит в том, что водорастворимый олигомер, связанный с низкомолекулярным лекарственным веществом, эффективно снижает способность полученного конъюгата преодолевать определенные биологические мембраны, такие как связанные с гематоэнцефалитическим или гематоплацентарным барьером. В одном или нескольких вариантах осуществления изобретения предлагается конъюгат, который демонстрирует пониженную скорость преодоления биологических мембран по сравнению со скоростью преодоления биологических мембран низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером.
Этот конъюгат в общем может быть описан как имеющий структуру Ο-Χ-Ό, где О - водорастворимый олигомер, X - стабильная связь, а Ό - часть, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества.
В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит: (1) конъюгаты, причем каждый конъюгат состоит из фрагмента, полученного из низкомолекулярного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой, имеющим от 2 до 30 мономерных звеньев, причем конъюгат имеет пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером; и (и) фармацевтически приемлемый наполнитель.
В одном или нескольких вариантах осуществления изобретения низкомолекулярное лекарственное вещество и конъюгат являются биодоступными при пероральном введении. В таких случаях предпочтительно, чтобы конъюгат обладал биодоступностью при пероральном введении, составляющей по меньшей мере 10% от биодоступности при пероральном введении низкомолекулярного лекарственного вещества в неконъюгированном виде. Примерные процентные соотношения биодоступности при пероральном применении, наблюдаемые в конъюгате по сравнению с низкомолекулярным лекарственным веществом в неконъюгированном виде, включают следующие: по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80% и по меньшей мере приблизительно 90%.
Другим аспектом изобретения является способ введения композиции. Способ включает этап введения композиции из монодисперсных или бимодальных конъюгатов, причем каждый конъюгат включает часть молекулы, полученную из низкомолекулярного лекарственного вещества, ковалентно связанную при помощи стабильной связи с водорастворимым олигомером, где конъюгат демонстрирует пониженную скорость проникновения через биологические мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологических мембран низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером. При этом способ введения композиции может быть выбран из группы, состоящей из перорального введения, трансдермального введения, буккального введения, трансмукозального введения (введение через слизистые оболочки), внутривагинального введения, ректального введения, паренте
- 2 015333 рального введения и пульмонарного введения.
Водорастворимые олигомеры для приготовления конъюгатов могут варьироваться, и настоящее изобретение не имеет специальных ограничений на этот счет. Типичные олигомеры включают в себя олигомеры, составленные из мономеров, выбранных из группы, содержащей алкиленоксид, спирт олефинового ряда, винилпирролидон, гидроксиалкилметакриламид, гидроксиалкилметакрилат, сахарид, αгидроксикислоту, фосфазен, оксазолин, аминокислоты, моносахариды и Ν-акрилоилморфолин. В одном или нескольких предпочтительных вариантах осуществления изобретения водорастворимый олигомер составлен из мономеров этиленоксида.
Доля олигомера в конъюгатах согласно настоящему изобретению составлена из отдельных мономеров, связанных последовательно. Типичные олигомеры могут содержать ряд последовательно повторяющихся мономеров при количестве мономеров, отвечающем одному или нескольким из следующих диапазонов: 2-25; 2-20; 2-15; 2-12: 2-10 и 2-9. Олигомер может содержать число мономеров, отвечающее любой из следующих величин: 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9; 10; 11 и 12.
Доля олигомера в конъюгатах согласно настоящему изобретению может обладать различной геометрией, структурой и характеристиками. Неограничивающие примеры включают прямые и разветвленные олигомерные структуры.
В одном или нескольких вариантах осуществления изобретения каждый конъюгат согласно настоящему изобретению содержит один водорастворимый олигомер, ковалентно связанный с одной частью молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества. Т.е. соотношение олигомера и части молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества, составляет 1:1. В одном или нескольких дополнительных вариантах осуществления изобретения тем не менее конъюгат может содержать 1, 2 или 3 олигомера, ковалентно связанных с частью молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества.
Связь между водорастворимым олигомером и частью молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества, может представлять собой любую ковалентную связь (через один или несколько атомов), например, без ограничения, эфирные, амидные, уретановые, аминовые, тиоэфирные и углерод-углеродные связи.
Композиции согласно настоящему изобретению могут включать только один вид конъюгата, или же они могут включать два, три, четыре или более различных видов конъюгатов. Например, композиция может включать только один вид конъюгата так, что другие виды конъюгатов (например, виды конъюгатов, отличающиеся по молекулярной массе, молекулярной структуре и так далее), по существу, отсутствуют. К тому же, композиции согласно настоящему изобретению могут содержать, например, два различных вида конъюгатов, смешанных вместе, где (а) одна и та же часть молекулы, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества, присутствует во всех конъюгатах композиции; (Ь) размер олигомера одного вида конъюгата отличается от размера олигомера другого вида конъюгата. Для тех композиций, которые содержат смеси разных видов конъюгатов, каждый вид будет представлен в композиции в определенном и известном количестве. Хотя виды конъюгатов в любой из предложенных композиций могут варьироваться по размеру олигомера, как описано выше, различия видов конъюгатов могут также основываться на типе олигомера, части молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества, стереоизомере конъюгата и так далее.
Таким образом, изобретение также предлагает способ оптимизации селективного прохождения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом с молекулярным весом менее чем 1000 Да, который включает этап конъюгирования водорастворимого олигомера с монодисперсной молекулярной массой, имеющим от 2 до 30 мономерных звеньев, с низкомолекулярным лекарственным веществом посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи для образования конъюгата, имеющего пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом до конъюгирования.
В одном из вариантов способ оптимизации прохождения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом включает стадии: (а) приготовления серии конъюгатов, где каждый конъюгат серии состоит из фрагмента, полученного из низкомолекулярного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой, где каждый конъюгат в серии отличается только количеством мономерных звеньев в олигомере, в диапазоне от 2 до 30; (Ь) определения для каждого конъюгата серии, приготовленной на стадии (а), степени, в которой конъюгат не пересекает биологическую мембрану; и (с) основываясь на результатах, полученных на стадии (Ь), определение из серии конъюгатов, полученных на стадии (а) конъюгата, который обладает оптимальным снижением скорости пересечения биологической мембраны.
Данное изобретение также предлагает способ приготовления конъюгата, стадию ковалентного связывания водорастворимого олигомера с монодисперсной молекулярной массой, имеющего от 2 до 30 мономерных звеньев, с низкомолекулярным лекарственным веществом с молекулярным весом менее 1000 Да для получения конъюгата, который содержит гидролитически и ферментативно стабильную связь, соединяющую олигомер и фрагмент, полученный из низкомолекулярного лекарственного вещест
- 3 015333 ва. Примерный подход к получению конъюгата включает этап реакции, состоящий из одной или нескольких стадий синтеза, водорастворимого олигомера из монодисперсной или полимодальной олигомерной композиции, где олигомер обладает реакционноспособной группой А, с низкомолекулярным лекарственным веществом, содержащим реакционноспособную группу В, подходящую для реакции с А, при условиях, эффективных для формирования гидролитически стабильной связи в результате реакции А и В, для получения, таким образом, конъюгата водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества.
В той мере, в какой способ приготовления конъюгата приводит к получению смеси изомеров (или других видов конъюгатов), может быть осуществлен дополнительный этап разделения изомеров (или других видов конъюгатов) для получения одиночного изомера конъюгата (или других видов конъюгатов). По выбору, для любых двух или более композиций согласно настоящему изобретению, где каждая композиция содержит одиночный изомер конъюгата (или другие виды конъюгата) может быть выполнен этап комбинирования двух или нескольких отдельных композиций с целью получения композиции, содержащей определенное и известное количество каждого изомера конъюгата (или видов конъюгатов).
Данное изобретение также предлагает способ получения олигоэтиленгликоля с монодисперсной молекулярной массой, включающий стадию взаимодействия олиго(этиленгликоля) с концевыми галогруппами, имеющего (т) мономерных звеньев, с олиго(этиленгликолем) с концевыми гидроксильными группами, имеющим (п) мономерных звеньев, при условиях, эффективных для замещения галогруппы с образованием олиго(этиленгликоля), имеющего (т)+(п) мономерных звеньев (ОЕСт+п), где (т) и (п) каждый независимо находятся в диапазоне от 1 до 10. Предпочтительно, хотя и не необязательно, (т) варьируется от 2 до 6 (более предпочтительно - 1-3), а (п) варьируется от 2 до 6.
Способ приготовления монодисперсных водорастворимоых олигомеров, в целом, осуществляется в присутствии сильного основания, такого как натрий, калий, гидрид натрия, гидрид калия, метоксид натрия, метоксид калия, трет-бутоксид натрия или трет-бутоксид калия, подходящего для превращения гидроксильной группы олиго(этиленгликоля) с концевой гидроксильной группой в соответствующий алкоксид.
Что касается галогруппы (или галогеновой группы), находящейся в олиго(этиленоксиде) с концевой галогруппой (или другом олигомере с концевой галогруппой), она обычно выбирается из группы, состоящей из хлора, брома и йода. К тому же, олиго(этиленоксид) с концевой галогруппой обычно замыкается, например, метильной или этильной группой для получения, соответственно, метиловоэфирной или этиловоэфирной концевой группы. Предпочтительным олиго(этиленоксидом) с концевой галогруппой является Н3СО-(СН2СН2О)т-Вг, где (т) определяется, как указано выше.
Что касается олиго(этиленоксида) с концевой гидроксильной группой, такие олиго(этиленоксиды) с концевыми гидроксильными группами соответствуют структуре НО-(СН2СН2О)п-Н, где (п) определяется, как указано выше.
Этот способ приготовления монодисперсных водорастворимых олигомеров может также включать этап превращения концевой гидроксильной группы ОЕСт+п в галогруппу с образованием ОЕСт+п-Х, где X соответствует галогруппе. За этим может следовать реакция ОЕСт+п-Х с олиго (этиленоксидом) с концевой гидроксильной группой, имеющим (п) мономеров, при условиях, эффективных для замещения галогруппы с образованием олиго(этиленоксида), имеющего (т) + 2(п) мономерных подгрупп (ОЕСт+2п), где (т) и (п) определяются, как указано выше. По выбору упомянутые этапы могут повторяться, пока не будет получен монодисперсный олиго(этиленоксид), имеющий необходимое, дискретное число мономеров.
В одном из вариантов способ дополнительно включает стадию взаимодействия ОЕСт+2п-Х с третьим олиго(этиленгликолем) с концевой гидроксильной группой и (п) мономерными звеньями при условиях, эффективных для замещения галогруппы с образованием олиго(этиленгликоля) с т+3п мономерными звеньями (ОЕСт+3п), где значения (т) и (п) каждое независимо находятся в диапазоне от 1 до 10.
Монодисперсные олигомеры этиленоксида, как описано выше, могут быть использованы для связывания с любым количеством активных агентов и поверхностями. Предпочтительные биологически активные агенты для сочетания с монодисперсным олиго(этиленоксидом), приготовленным вышеупомянутым способом, включают низкомолекулярные лекарственные препараты, диагностические средства, красители, визуализирующие вещества, препараты, направленные на определенные мишени, поверхностно-активные вещества, косметические препараты, космецевтические препараты, нейтрицевтики и тому подобное.
Изобретение также предлагает способ снижения метаболизма активного вещества, заключающийся во введении пациенту конъюгатов, каждый из которых состоит из фрагмента, полученного из низкомолекуляного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой и количеством меномерных звеньев от 2 до 30, где конъюгат демонстрирует пониженную скорость метаболизма по сравнению со скоростью метаболизма низкомолекулярного лекарственного вещества, не связанного с водорастворимым олигомером.
- 4 015333
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведен график зависимости концентрации в плазме от времени для 13-цис-ретиноевой кислоты (13-цис-ЯЛ) и ее типичных низкомолекулярных ПЭГ-конъюгатов (РЕО3-13-цис-ретинамид, РЕО3-13-цис-ЯА; РЕО5-13-цис-ретинамид, РЕО5-13-цис-ЯА; РЕО7-13-цис ретинамид, РЕО7-13-цисЯА; И РЕОц-13-цис-ретинамид, РЕОц-13-цис-ЯА), которые вводились крысам линии §ргадие Оа\\'1еу. как подробно описано в примере 7.
На фиг. 2 представлен график зависимости концентрации в плазме от времени для 6-налоксола и типичных низкомолекулярных ПЭГ-конъюгатов (3-мер, 5-мер, 7-мер), введенных крысам линии §ргадие Оа\\'1еу. как подробно описано в примере 7.
На фиг. 3 приведен график влияния длины цепочки ПЭГ на желудочно-кишечный перенос (как показатель биодоступности при пероральном введении) различных конъюгатов ПЭГ-13-цис-ЯА и 13-цисЯА у крыс линии §ргадие Оа\\'1еу На фиг. 4 изображен график, демонстрирующий влияние ковалентного связывания ПЭГ-меров разного размера на пересечение гематоэнцефалитического барьера конъюгатами 13-цис-ЯА и ПЭГ-13-цис-ЯА.
На фиг. 5 представлен график влияния ковалентного связывания ПЭГ-меров разного размера на желудочно-кишечный перенос (как показатель биодоступности при пероральном введении) налоксона и РЕ6П-Ыа1.
На фиг. 6 представлен график, изображающий влияние ковалентного связывания ПЭГ-меров разного размера на пересечение гематоэнцефалитического барьера налоксоном и РЕОп-Ыа1.
На фиг. 7 изображен график, отображающий фармакокинетику налоксона и РЕОп-Ыа1 у крыс после введения через желудочный зонд.
На фиг. 8 и 9 представлены графики, которые демонстрируют влияние ковалентного связывания ПЭГ-меров разного размера на уровень метаболитов налоксона и метаболитов РЕОп-Ыа1.
На фиг. 10 представлен масс-спектр метокси-ПЭГ-350, полученного из коммерческого источника (компания 8щта-А1бпе11) Как можно видеть из анализа, хотя реагент продается как метокси-ПЭГ с молекулярной массой 350, реагент, в действительности, представляет собой смесь 9 отдельных ПЭГолигомеров, обладающих количеством мономерных подгрупп в диапазоне от приблизительно 7 до приблизительно 15.
Подробное описание изобретения
Следует отметить, что используемое в настоящем описании указание на единственное число предполагает указание на множественное число, если контекст четко не указывает на обратное. В описании и формуле изобретения будет использована следующая терминология в соответствии с определениями, приведенными ниже.
Водорастворимый, как в водорастворимом олигомере, указывает на олигомер, который по меньшей мере на 35% (по массе) растворим, а предпочтительно более, чем на 95%, растворим в воде при комнатной температуре. Обычно нефильтрованный водный препарат водорастворимого олигомера пропускает по меньшей мере 75%, предпочтительнее по меньшей мере 95% света, пропускаемого через этот же раствор после фильтрации. С точки зрения массы водорастворимый олигомер предпочтительно по меньшей мере на 35% (по массе) растворим в воде, предпочтительнее по меньшей мере на 50% (по массе) растворим в воде, еще предпочтительнее по меньшей мере на 70% (по массе) растворим в воде и еще предпочтительнее по меньшей мере на 85% (по массе) растворим в воде. Самым предпочтительным, тем не менее, является, чтобы водорастворимый олигомер по меньшей мере на 95% (по массе) был растворим в воде или полностью растворим в воде.
Термины мономер, мономерная подгруппа и мономерная группа используются здесь взаимозаменяемо и относятся к одной из базисных структурных единиц полимера или олигомера. В случае гомо-олигомера, термин определяется как структурная повторяющаяся единица олигомера. В случае коолигомера, мономерную единицу следует определять как остаток мономера, который был подвергнут олигомеризации для получения олигомера, так как повторяющаяся структурная единица может включать более одного типа мономерных единиц. Предпочтение в данном изобретении отдается гомо-олигомерам.
Олигомер - это молекула, включающая от приблизительно 1 до приблизительно 30 мономеров. Архитектура олигомера может варьироваться. Конкретные олигомеры для использования в данном изобретении включают олигомеры различных геометрических форм, такие как линейные, разветвленные или вилкообразные, более подробное описание которых последует ниже.
ПЭГ или полиэтиленгликоль в данном контексте подразумевает любой водорастворимый поли(этиленоксид). Если нет указаний на обратное, ПЭГ-олигомер или олигоэтиленгликоль представляет собой такой олигомер, в котором все мономерные подгруппы являются подгруппами этиленоксида. Как правило, практически все, или все мономерные подгруппы являются подгруппами этиленоксида, хотя олигомер может содержать отдельные замыкающие части молекулы или функциональные группы, например, для конъюгации. Как правило, ПЭГ-олигомеры, используемые в данном изобретении, будут представлять одну из двух следующих структур: -(СН2СН2О)П- или -(СН2СН2О)П.1СН2СН2-, в зависимости от того, был ли замещен концевой кислород или нет, например, в процессе синтетической трансформации. Как указано выше, для ПЭГ -олигомеров данного изобретения могут различаться величины (п)
- 5 015333 в диапазоне от 1 до 30, концевые группы и архитектура всего ПЭГ. Если ПЭГ также включает функциональную группу А, для связывания к ней, например, низкомолекулярного лекарственного вещества, эта функциональная группа, в случае ковалентного связывания с ПЭГ -олигомером, не приводит к образованию (ί) кислород-кислородной связи (-О-О-, пероксидное соединение), или (ίί) азотно-кислородной связи (N-0, Ο-Ν).
Замыкающая группа, в целом, представляет собой нереакционноспособную группу, содержащую углерод, связанную с концевым кислородом ПЭГ-олигомера. Для целей настоящего изобретения предпочтение отдается замыкающим группам, имеющим относительно низкие молекулярные массы, как метил или этил. Замыкающая группа может включать меченый атом. Такие атомы включают, без ограничений, люминофоры, хемилюминесцеры, части, используемые для мечения ферментов, колориметрические метки (например, красители), ионы металла, радиоактивные части.
Разветвленный по отношению к геометрической форме или общей структуре олигомера относится к олигомеру, имеющему два или несколько полимерных ответвлений, отходящих из точки разветвления.
Вилкообразный по отношению к геометрической форме или общей структуре олигомера относится к олигомеру, имеющему две или более функциональных групп (обычно, через один или несколько атомов), расходящихся из точки разветвления.
Точка разветвления означает точку бифуркации, включающую один или несколько атомов, в которой ветви или вилки олигомера от линейной структуры расходятся в одну или несколько дополнительных ветвей.
Термин реакционноспособный или активированный относится к функциональной группе, которая легко вступает в реакцию или вступает в реакцию с практически значимой скоростью при заданных условиях органического синтеза. Это противоположность группам, которые либо не вступают в реакцию, либо требуют присутствия сильных катализаторов или нереальных для практики условий реакции (т.е. нереакционноспособная или инертная группа).
Плохо вступающие в реакцию функциональные группы присутствуют в молекуле в реакционной смеси - группы, которые остаются в значительной степени неизменными при условиях, эффективных для выполнения желаемой реакции в реакционной смеси.
Защитная группа является частью молекулы, которая предотвращает или блокирует реакцию определенной химически реакционно-способной функциональной группы в молекуле при определенных условиях реакции. Защитная группа будет меняться в зависимости от типа защищаемой химически реакционно-способной группы, а также от условий реакции, которые используются, и наличия дополнительных реакционно-способных или защитных групп в молекуле. Функциональные группы, которые могут подвергаться защите, включают, для примера, группы карбоновых кислот, аминогруппы, гидроксильные группы, тиологруппы, карбонильные группы и им подобные. Репрезентативные защитные группы для карбоновых кислот включают сложные эфиры (такие как р-метоксибензольный эфир), амиды и гидразиды; для аминогрупп - карбаматы (такие как трет-бутоксикарбонил) и амиды; для гидроксильных групп простые и сложные эфиры; для тиологрупп - простые и сложные тиоэфиры; для карбонильных групп ацетали и кетали; и так далее. Такие защитные группы хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области и описаны, например, в Т.А. Сгеепе апб С.М. АнА Рго1ес1шд Сгоирк ίη Отдаше 8уп111С515. ТЫтб ЕбШоп, Айеу, Νον Уотк, 1999, и приведенных там ссылках.
Функциональная группа в защищенной форме - это функциональная группа, имеющая защитную группу. Термин функциональная группа, используемый здесь, или любой его синоним охватывает и защищенные формы.
Физиологически расщепляемая или гидролизуемая или разрушающаяся связь является сравнительно изменчивой связью, которая вступает в реакцию с водой (т.е гидролизируется) в физиологических условиях. Тенденция связи к гидролизу в воде будет зависеть не только от общего типа связи, соединяющей два центральных атома, но и от замещающих атомов, связанных с этими центральными атомами. Соответствующие гидролитически нестабильные или слабые связи включают, но не ограничены перечисленным, сложный карбоксилатный эфир, сложный эфир фосфорной кислоты, ангидриды, ацетали, кетали, ацилоксиалкильный эфир, имины, ортоэфиры, пептиды, олигонуклеотиды, тиоэфиры, эфиры тиоловой кислоты и карбонаты.
Ферментативно разлагаемая связь - это связь, которая разлагается одним или более ферментами.
Гидролитически стабильная связь относится к химической связи, как правило, ковалентной, которая, по существу, стабильна в воде, что означает, что она не подвержена гидролизу при физиологических условиях в ощутимой степени в течение продолжительного периода времени. Примеры гидролитически стабильных связей включают, но не ограничиваются следующими: углерод-углеродные связи (например, в алифатических цепочках), эфиры, амиды, уретаны, амины и им подобные. Обычно, гидролитически стабильная связь является одной из тех связей, которые характеризуются уровнем гидролиза менее чем около 1-2% в день при физиологических условиях. Скорости гидролиза репрезентативных химических связей можно найти в обычных учебниках по химии.
В значительной степени или по существу означает приблизительно полностью или целиком,
- 6 015333 например, 95% или более предпочтительнее 97%, или еще более предпочтительнее 98%, или еще более предпочтительнее 99%, или еще более предпочтительно 99,9%, или более и самым предпочтительным вариантом 99,99% или более от некоторого указанного количества.
Монодисперсный относится к олигомерной композиции, в которой, по существу, все олигомеры имеют точно определенную одинаковую молекулярную массу и определенное количество мономеров, определяемое с помощью хроматографии или масс-спектрометрии. Композиции монодисперсного олигомера, с одной стороны, чистые, что означает, что у них преобладает один или известное количество (в целом) мономеров, а не большое их разнообразие. Композиция монодисперсного олигомера согласно настоящему изобретению обладает значением М\\7Мп 1,0005 или менее и предпочтительнее значением М\\7Мп 1,0000. В широком смысле, композиция, охватывающая монодисперсные конъюгаты, означает, что все олигомеры всех конъюгатов в композиции обладают одним или определенным количеством (в целом) мономеров, а не большим распределением, и имеют значение М\\7Мп 1,0005 или более предпочтительно значение М\\7Мп 1,0000, если олигомер не связан с частью молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества. Композиция, включающая в себя монодисперсные конъюгаты, однако, может включать один или несколько неконъюгатных веществ, таких как растворители, реагенты, наполнители и так далее.
Бимодальная по отношению к олигомерной композиции означает, что в ней, по существу, все олигомеры имеют одно из двух определенных и различных чисел (целые числа) мономеров, а не большое распределение, и распределение молекулярных масс, представленное на графике зависимости дроби от молекулярной массы, выглядит как две отдельные различимые вершины. Предпочтительно, чтобы для бимодальной олигомерной композиции, соответствующей данному описанию, каждый пик был симметричен относительно его середины, хотя размеры двух пиков могут отличаться. В идеале показатель полидисперсности каждого пика в бимодальном распределении - М\\7Мп составляет 1,01 или менее, предпочтительнее 1,001 или менее, еще предпочтительнее 1,0005 или менее, и наиболее предпочтительное значение М\\7Мп составляет 1,0000. В более широком смысле композиция, состоящая из бимодальных конъюгатов, означает, что практически все олигомеры всех конъюгатов композиции имеют одно из двух определенных и разных чисел (целые числа) мономеров, а не широкое распределение, и будут обладать значением М\\7Мп 1,01 или менее, предпочтительнее 1,001 или менее, еще предпочтительнее 1,0005 или менее, и наиболее предпочтительное значение М\\7Мп составляет 1,0000, если олигомеры не были прикреплены к части молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества. Композиция, состоящая из бимодальных конъюгатов, может, однако, включать одно или несколько неконъюгированньгх веществ, таких как растворители, реагенты, наполнители и так далее.
Термин низкомолекулярное лекарственное вещество используется в описании настоящего изобретения в широком смысле и означает органическое, неорганическое или органометаллическое соединение, обычно имеющее молекулярный вес менее 1000. Низкомолекулярные лекарственные вещества данного изобретения включают олигопептиды и другие биомолекулы с молекулярным весом менее чем приблизительно 1000.
Термины часть молекулы, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества и часть низкомолекулярного лекарственного вещества используются в настоящем документе взаимозаменяемо по отношению к части или остатку исходного низкомолекулярного лекарственного вещества, вплоть до ковалентной связи, образующейся в результате ковалентного связывания лекарственного вещества (или его активированной или химически модифицированной формы) с олигомером настоящего изобретения.
Под биологической мембраной подразумевается любая мембрана, обычно состоящая из специализированных клеток и тканей, которая служит барьером для, по меньшей мере, некоторых ксенобиотиков или других нежелательных веществ. В настоящем описании биологическая мембрана включает те мембраны, которые ассоциируются с физиологическими защитными барьерами, включающими, например, гематоэнцефалический барьер, гематоликворный барьер, гематоплацентарный барьер, гематотестикулярный барьер, гематомолочный барьер и барьеры слизистых оболочек, включающие вагинальную слизистую, слизистую уретры, анальную слизистую, буккальную слизистую, подъязычную слизистую, ректальную слизистую и так далее. В случае, если из контекста с очевидностью не следует обратное, термин биологическая мембрана не включает те мембраны, которые связаны со средним желудочнокишечным трактом (например, желудок и тонкий кишечник).
Скорость пересечения биологической мембраны в данном описании является мерой способности соединения пересекать биологический барьер, к примеру, гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Для оценивания пересечения молекулой любой из упомянутых мембран могут быть использованы различные способы. Способы определения скорости пересечения биологических мембран, связанных с любым из упомянутых биологических барьеров (например, гематоликворный барьер, гематоплацентарный барьер, гематомолочный барьер, кишечный барьер и так далее), известны, описаны в данном документе и/или в соответствующей литературе, и/или могут быть определены специалистом, обладающим обычными познаниями в данной области.
Соединение, которое пересекает гематоэнцефалитический барьер в соответствии с изобретением, является таким соединением, которое пересекает ГЭБ с большей скоростью, чем атенолол, при использо
- 7 015333 вании описанных здесь способов.
Пониженная скорость метаболизма в контексте данного изобретения относится к измеряемому снижению скорости метаболизма конъюгата водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества по сравнению со скоростью метаболизма низкомолекулярного лекарственного вещества, не связанного с водорастворимым олигомером (к примеру, низкомолекулярного лекарственного вещества в чистом виде), или стандартного вещества для сравнения. В особом случае снижения скорости пресистемного метаболизма применяется та же пониженная скорость метаболизма, за исключением того, что низкомолекулярное лекарственное вещество (или стандартное вещество для сравнения) и соответствующий конъюгат вводятся перорально. Перорально вводимые лекарственные препараты абсорбируются из желудочно-кишечного тракта в кровообращение в системе воротной вены и должны пройти через печень, прежде чем достигнут кровообращения большого круга. Поскольку печень является первичным пунктом метаболизма или биотрансформации лекарственных препаратов, существенное количество лекарственного препарата может быть метаболизировано даже до того, как оно достигнет кровообращения большого круга. Степень пресистемного метаболизма и, таким образом, любого его снижения может быть измерена согласно нескольким подходам. К примеру, образцы крови животных могут быть собраны через определенные интервалы времени, и плазма или сыворотка проанализирована при помощи жидкостной хроматографии или масс-спектрометрии для определения уровней метаболитов. Другие способы измерения пониженной скорости метаболизма, связанной с пресистемным метаболизмом или другими метаболическими процессами, известны, описаны здесь и/или в соответствующей литературе, и/или могут быть определены специалистом, обладающим обычными познаниями в данной области техники. Предпочтительно, чтобы конъюгат согласно изобретению мог обеспечивать пониженную скорость метаболизма, причем это снижение должно удовлетворять, по меньшей мере, одному из следующих значений: по меньшей мере приблизительно 5%; по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%; по меньшей мере приблизительно 20%; по меньшей мере приблизительно 25%; по меньшей мере приблизительно 30%; по меньшей мере приблизительно 40%; по меньшей мере приблизительно 50%; по меньшей мере приблизительно 60%; по меньшей мере приблизительно 70%; по меньшей мере приблизительно 80% и по меньшей мере приблизительно 90%.
Соединение (такое как низкомолекулярное лекарственное вещество или его конъюгат), которое является биодоступным при пероральном введении, является соединением, обладающим биодоступностью при пероральном приеме, более чем 1% и предпочтительно более чем 10%, где биодоступность соединения составляет часть введенного лекарственного вещества, которое достигает кровообращения большого круга в неметаболизированной форме.
Алкил относится к углеводородной цепочке, обычно имеющей длину от 1 до 20 атомов. Такие углеводородные цепочки предпочтительно, но не обязательно, являются насыщенными и могут представлять собой разветвленную или неразветвленную цепочку, хотя обычно неразветвленная цепочка является предпочтительной. Типичные алкильные группы включают метил, этил, пропил, бутил, пентил, 1метилбутил, 1-этилпропил, 3-метилпентил и тому подобное. Используемый здесь термин алкил включает циклоалкил с предпочтительно тремя или более атомами углерода.
Низший алкил относится к алкильной группе, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, и может представлять собой неразветвленную или разветвленную цепочку, к примеру, метил, этил, η-бутил, 1бутил, 1-бутил.
Неинтерферирующие заместители - это группы, которые если они присутствуют в молекуле, обычно не вступают в реакцию с другими функциональными группами в составе этой молекулы.
Алкокси относится к -О-В группе, где В - алкил или замещенный алкил, предпочтительно, С£-С20 алкил (например, метокси, этокси, пропилокси, бензил и т. д.), предпочтительно, С1-С7.
Электрофил относится к иону, атому или ионному либо нейтральному скоплению атомов, имеющему электрофильный центр, т.е. центр, к которому стремится электрон, способный вступать в реакцию с нуклеофилом.
Нуклеофил относится к иону, атому или ионному либо нейтральному скоплению атомов, имеющему нуклеофильный центр, т.е. центр, к которому стремится электрофильный центр, способный вступать в реакцию с электрофилом.
Термин лекарственный препарат, используемый в данном описании, включает любой агент, соединение, композицию веществ или смесь, которые обеспечивают некоторый фармакологический, часто положительный, эффект, который может быть продемонстирован ίη νίνο или ίη νίΐτο. Сюда относятся продукты питания, пищевые добавки, питательные вещества, нутрицевтики, лекарства, вакцины, антитела, витамины и другие полезные агенты. В данном контексте эти термины включают также любые физиологически или фармакологически активные вещества, производящие локальное или системное воздействие на пациента.
Фармацевтически приемлемый наполнитель или фармацевтически приемлемый носитель соответствует наполнителю, который может быть включен в композиции настоящего изобретения и который не оказывает значимого неблагоприятного токсикологического воздействия на пациента.
Фармакологически эффективное количество, физиологически эффективное количество и тера
- 8 015333 певтически эффективное количество используются здесь взаимозаменяемо для обозначения количества конъюгата водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества, присутствующего в композиции, которое необходимо для обеспечения желаемого уровня активного агента и/или конъюгата в кровотоке или в ткани-мишени. Точное количество будет зависеть от множества факторов, например от конкретного активного агента, компонентов и физических характеристик композиции, предполагаемого контингента пациентов, их характеристик и так далее, и легко может быть определено специалистом, обладающим обычными знаниями в данной отрасли техники, на основе информации, предложенной в данном описании и доступной из соответствующей литературы.
Дифункциональным называется олигомер, имеющий в составе две функциональные группы, обычно на концах. Если функциональные группы идентичны, олигомер называется гомофункциональным. Если функциональные группы различны, олигомер называется гетерофункциональным.
Основный или кислотный реагент в данном описании включает также нейтральные, заряженные или любые другие соответствующие формы его солей.
Термин пациент относится к живому организму, страдающему или склонному к заболеванию, которое может быть предотвращено или излечено путем приема описанного здесь конъюгата, как правило, но не обязательно, в виде конъюгата водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества, и охватывает как людей, так и животных.
Необязательные или необязательно обозначает, что описанное далее обстоятельство может иметь место, а может и не иметь, так что описание включает и случаи, когда обстоятельство имеет место, и случаи, когда оно места не имеет.
Настоящее изобретение направлено (кроме прочего) на композиции низкомолекулярных лекарственных веществ, химически модифицированных ковалентным связыванием с водорастворимым олигомерома, полученным из монодисперсной или бимодальной композиции водорастворимых олигомеров. Поскольку водорастворимый олигомер получен из монодисперсной или бимодальной композиции водорастворимых олигомеров, получаемые согласно настоящему изобретению композиции низкомолекулярного лекарственного вещества и олигомера в высшей степени беспримесны и четко определены с точки зрения структуры.
Преимуществом описанных здесь конъюгатов является их способность демонстрировать пониженную скорость пересечения биологических мембран по сравнению с соответствующим активным агентом в неконъюгированной форме. Не привязываясь к теории, тем не менее, существует убеждение, что размер молекулы является важным фактором определения того, может ли, и в какой степени, любая данная молекула пройти или пересечь биологическую мембрану. К примеру, большинство, если не все, защитные барьеры хотя бы частично полагаются на плотно расположенные клетки, которые формируют мембрану и имеют тесные связи, которые могут быть преодолены только очень мелкими молекулами. Таким образом, для данного низкомолекулярного лекарственного вещества связывание с водорастворимым полимером низкомолекулярного лекарственного вещества дает в результате конъюгат, который оказывается обязательно большим, и потому можно ожидать, что он либо не сможет преодолеть биологическую мембрану, либо преодолеет ее с меньшей скоростью, чем низкомолекулярное лекарственное вещество в неконъюгированной форме.
Как детальнее будет показано ниже и в экспериментальной части, снижение скорости преодоления биологической мембраны путем увеличения размера молекулы при помощи конъюгирования водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества не в каждом случае дает в результате полностью удовлетворительный конъюгат. В идеале конъюгат будет представлен в виде композиции, состоящей из монодисперсных или бимодальных конъюгатов. И вновь, не привязываясь к теории, тем не менее, существует убеждение, что даже малейшие различия между конъюгатами в количестве мономеров могут привести к относительно большим различиям в их свойствах, таких как фармакологическая активность, метаболизм, биодоступность при пероральном введении, скорость пересечения биологической мембраны, растворимость и т.д.
Далее, как подтверждено масс-спектральным анализом, результаты которого представлены на фиг. 10, коммерчески доступные олигомерные композиции, такие как ПЭГ-350, на самом деле, относительно неоднородны с точки зрения размеров олигомеров, присутствующих в композиции. Таким образом, использование подобных относительно неоднородных олигомерных композиций (без дальнейшей очистки) в синтезе конъюгатов приведет к широкому диапазону молекулярных масс конъюгатов (в результате широкого диапазона молекулярных масс в композиции, использованной для получения конъюгатов). Как следствие, полученная композиция конъюгатов будет включать множество видов конъюгатов, где каждый конъюгат, как предполагается, будет обладать различными свойствами. С регулятивной и медицинской точки зрения, композиций, включающих соединения, имеющие ярко выраженные отличия в свойствах, следует, в идеале, избегать.
Итак, настоящее изобретение предлагает конъюгаты, которые не только относительно велики (по сравнению с неконъюгированным низкомолекулярным лекарственным веществом), что приводит к снижению скорости пересечения биологической мембраны (вновь, по сравнению с соответствующей неконъюгированной формой низкомолекулярного лекарственного вещества), но также, по существу, бес
- 9 015333 примесны, что обеспечивает полноценную запланированную активность и другие характеристики композиции. Таким образом, предлагается композиция, включающая монодисперсные или бимодальные конъюгаты, каждый из которых включает часть молекулы, полученную из низкомолекулярного лекарственного вещества, ковалентно связанную при помощи стабильной связи с водорастворимым олигомером, причем указанный конъюгат демонстрирует пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером.
Как было указано выше, использование дискретных олигомеров из четко определенной композиции олигомеров для получения конъюгатов, может изменить в лучшую сторону определенные качества, связанные с соответствующим низкомолекулярным лекарственным веществом. Например, конъюгат согласно настоящему изобретению в случае приема любым из известных путей введения, таких как парентеральный, пероральный, трансдермальный, буккальный, пульмонарный или назальный, демонстрирует пониженное проникновение через биологическую мембрану (такую как биологические мембраны, связанные с гематоэнцефалическим и гематоплацентарным барьерами). Предпочтительно, чтобы конъюгаты демонстрировали замедленное, минимальное или практически отсутствующее преодоление биологической мембраны (такой как биологические мембраны, связанные с гематоэнцефалическим и гематоплацентарным барьерами), но проникали через стенки желудочно-кишеного тракта в кровообращение большого круга в случае перорального приема. Если предполагается пульмонарное введение, введенный конъюгат, предпочтительно, не проникнет в кровообращение большого круга или будет иметь пониженную скорость преодоления барьера между легочной тканью и кровью, с тем, чтобы поддерживать уровень в легких для локального фармакологического действия на них. Более того, конъюгаты данного изобретения сохраняют степень биоактивности и биодоступности в конъюгированной форме.
Относительно гематоэнцефалитического барьера (ГЭБ) следует отметить, что он ограничивает перенос лекарственных веществ из крови в мозг. Этот барьер состоит из непрерывного слоя уникальных эндотелиальных клеток, связанных плотными соединениями. Церебральные капилляры, составляющие более 95% общей поверхности ГЭБ, представляют основной путь попадания большинства растворов и лекарственных веществ в центральную нервную систему.
Хотя для некоторых соединений может быть желательным достижение требуемой концентрации в тканях мозга для соответствующего фармакологического воздействия, многие другие соединения, не имеющие полезного фармакологического влияния на ткани головного мозга, могут, в конечном счете, достичь тканей центральной нервной системы. Путем снижения уровня поступления этих нецентрализованно действующих соединений в центральную нервную систему риск побочных эффектов в центральной нервной системе снижается, а терапевтический эффект может даже усилиться.
Для соединений, чья способность преодоления гематоэнцефалитического барьера в настоящее время не известна, ее можно определить путем использования подходящей животной модели, такой как, к примеру, перфузия мозга крыс ίη кйи (ПМК), как описано здесь. Вкратце, техника ПМК предполагает канюлирование сонной артерии, после чего проводится перфузия раствором соединения в контролируемых условиях. Затем следует фаза промывки для удаления соединения из сосудов. (Такой анализ может, к примеру, проводиться подрядными исследовательскими организациями, такими как ЛЬкотрбоп 8ук1ешк, Экстон, Пенсильвания) Конкретнее, в модели ПМК, канюля помещается в левую сонную артерию, а боковые ответвления завязываются. Физиологический буферный раствор, содержащий соединение (5 микромоль), впрыскивается со скоростью 10 мл/мин за один эксперимент. Через 30 с перфузия прекращается, и содержимое сосудов мозга вымывается буфером без соединения еще в течение 30 с. Ткани мозга после этого извлекаются и анализируются на предмет концентрации соединения при помощи жидкостной хроматографии с одновременным определением масс-спектра (ЖХ/МС/МС). В альтернативном варианте, проницаемость гематоэнцефалического барьера может быть установлена на основе вычисления площади молекулярной полярной поверхности соединения (МПП), которая определяется как сумма вкладов полярных атомов (как правило, кислорода, азота и связанного водорода) в поверхность молекулы. Было показано, что МПП коррелируется со свойствами переноса соединения, например, через гематоэнцефалический барьер. Информацию о М1П1 можно найти в Ей1, Р., и соавт, 1 Меб Сйеш 2000, 43, 3714-3717; и Ке1бег, 1., и соавт., Рйатш Век 1999, 16, 1514-1519.
Гематоликворный барьер сходен с гематоэнцефалическим. Гематоликворный барьер создает преграду или иным образом снижает количество токсических или нежелательных веществ, попадающих в спинномозговую жидкость. Он в основном расположен в вентрикулярной системе и субарахноидальном пространстве. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное пациенту, преодолеть гематоликворный барьер, определенное количество соединения может быть введено мышам путем инъекции. В последующие несколько дней после введения соединения образцы спинномозговой жидкости мышей могут быть проанализированы на предмет присутствия и количества соединения.
Гематоплацентарный барьер защищает развивающийся плод от большинства токсинов, присутствующих в кровообращении матери. Этот барьер состоит из нескольких клеточных слоев между кровеносными сосудами матери и плода в плаценте. Как в случае с гематоэнцефалическим барьером, плацен
- 10 015333 тарный барьер не является абсолютно непроницаемым, но эффективно замедляет диффузию большинства токсинов. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное беременной самке млекопитающего, преодолеть гематоплацентарный барьер, определенное количество соединения может быть введено беременным мышам путем инъекции. В последующие несколько дней после введения соединения образцы эмбриональной ткани мышей могут быть проанализированы на предмет присутствия и количества соединения.
Гематомолочный барьер сходен с гематоэнцефалическим в том, что биологическая мембрана отделяет и ограничивает проникновение определенных веществ из кровообращения большого круга. В случае с гематомолочным барьером биологическая мембрана предотвращает попадание определенных веществ в молочные железы. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное кормящей самке млекопитающего, преодолеть гематомолочный барьер, определенное количество соединения может быть введено кормящим мышам путем инъекции В последующие несколько дней после введения соединения образцы молока из молочных желез мышей могут быть проанализированы на предмет присутствия и количества соединения.
Гематотестикулярный барьер объединяет поддерживающие клетки (клетки Сертоли), которые выстилают мужские половые пути и плотно связаны между собой. Для определения того, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат), введенное самцу млекопитающего, преодолеть гематотестикулярный барьер, определенное количество соединения может быть введено самцам мыши путем инъекции. В последующие несколько дней после введения соединения яички мышей могут быть удалены и проанализированы на предмет присутствия и количества соединения.
Барьеры слизистых оболочек представляют еще одну биологическую мембрану, которая, как правило, блокирует или уменьшает попадание нежелательных субстанций в кровообращение большого круга. Введение препарата в определенную область исследуемой слизистой и последующий анализ образцов крови на предмет присутствия и количества соединения позволяет определить, может ли и в какой степени соединение (например, низкомолекулярное лекарственное вещество или конъюгат) преодолеть область данной слизистой оболочки.
Говоря о любой биологической мембране, конъюгат водорастворимого олигомера и низкомолекулярного лекарственного вещества демонстрирует скорость пересечения биологической мембраны, пониженную по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером. К примеру, снижение скорости пересечения биологической мембраны включает случаи снижения по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90% в сравнении со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером. Предпочтительное снижение скорости пересечения биологической мембраны для конъюгата составляет по меньшей мере приблизительно 20%. В некоторых случаях, является предпочтительным, чтобы низкомолекулярное лекарственное вещество само по себе проникало через одну или несколько из вышеупомянутых мембран.
Конъюгаты, демонстрирующие пониженную скорость пересечения биологической мембраны, обычно имеют структуру где О - водорастворимый олигомер, X - стабильная связь, ϋ - часть, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества.
Часть, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества, с одной стороны, отличается от исходного низкомолекулярного лекарственного вещества тем, что она соединена, как правило, ковалентной связью, с атомом, который не связан с исходным низкомолекулярным лекарственным веществом. Кроме отличия в связи с другим атомом, тем не менее, часть, полученная из низкомолекулярного лекарственного вещества, по существу, аналогична низкомолекулярному лекарственному веществу и имеет такой же фармакологический механизм действия. Таким образом, говоря о низкомолекулярном лекарственном веществе, допустимо иметь в виду и часть, полученную из низкомолекулярного лекарственного вещества.
Активные агенты, используемые в конъюгатах, представляют собой низкомолекулярные лекарственные вещества, то есть фармакологически активные соединения, имеющие молекулярную массу менее приблизительно 1000 Да. Низкомолекулярные лекарственные вещества для целей данного изобретения включают олигопептиды, олигонуклеотиды и другие биомолекулы, имеющие молекулярную массу менее приблизительно 1000 Да. Термин низкомолекулярное лекарственное вещество охватывает любой фрагмент пептида, белка или антитела, включая нативные последовательности и варианты, попадающие в указанный выше диапазон молекулярной массы.
Примерная молекулярная масса низкомолекулярных лекарственных веществ включает следующие
- 11 015333 молекулярные массы: менее приблизительно 950, менее приблизительно 900, менее приблизительно 850, менее приблизительно 800, менее приблизительно 750, менее приблизительно 700, менее приблизительно 650, менее приблизительно 600, менее приблизительно 550, менее приблизительно 500, менее приблизительно 450, менее приблизительно 400, менее приблизительно 350 и менее приблизительно 300.
Если низкомолекулярное лекарственное вещество, используемое в целях данного изобретения, является хиральным, оно может быть получено из рацемической смеси или оптически активной формы, к примеру, единичного оптически активного энантиомера или любой комбинации либо пропорции энантиомеров. Кроме того, низкомолекулярное лекарственное вещество может иметь один или два геометрических изомеров. Что касается геометрических изомеров, композиция может состоять только из одного геометрического изомера или смеси двух либо большего числа геометрических изомеров. Низкомолекулярное лекарственное вещество для использования в данном изобретении может быть активным само по себе или может обладать некоторой степенью модификации. К примеру, низкомолекулярное лекарственное вещество может иметь целевой агент, фрагмент или транспортировщик, связанные с ним до или после ковалентного связывания с олигомером. В ином случае низкомолекулярное лекарственное вещество может иметь присоединенную к нему липофильную часть, такую как фосфолипид (например, дистеароилфосфатидилэтаноламин или ДСФЭ, дипалмитоилфосфатидилэтаноламин или ДПФЭ и так далее.), или низкомолекулярная жирная кислота. В некоторых случаях, тем не менее, предпочтительно, чтобы часть низкомолекулярного лекарственного вещества не имела присоединенной липофильной части.
Малая молекула для использования в связывании с олигомером согласно настоящему изобретению может быть любой из следующих. Подходящие агенты могут быть выбраны, например, из легочных лекарств, противосудорожных средств, миорелаксантов, противовоспалительных средств, средств, подавляющих аппетит, препаратов против мигрени, миоконтрактантов, противоинфекционных (антибиотики, антивирусные, противогрибковые, вакцины) средств, средств против артрита, противомалярийных, противорвотных, бронхорасширяющих, антитромботических агентов, антигипертензивных, сердечнососудистых препаратов, антиаритмических, антиоксидантов, противоастматических агентов, диуретиков, липидорегулирующих агентов, антиандрогенных агентов, антипаразитических средств, антикоагулянтов, неопластиков, антинеопластиков, гипогликемических, пищевых веществ и добавок, стимуляторов роста, противоэнтеритных, вакцин, антител, диагностических агентов и контрастных агентов.
В более частном случае активный агент может быть одним из ряда структурных классов, включающих, но не ограничивающихся малыми молекулами, олигопептидами, полипептидами или миметиками белков, фрагментами или аналогами, стероидами, нуклеотидами, олигонуклеотидами, электролитами и тому подобное. Предпочтительно, чтобы активный агент связывания с олигомером согласно настоящему изобретению содержал свободную карбоксильную, гидроксильную, тио, аминогруппу или подобное (т.е., средство), подходящую для связывания с олигомером. В ином случае лекарственное вещество модифицируется путем добавления подходящего средства предпочтительно путем преобразования одной из имеющихся функциональных групп в функциональную группу, подходящую для формирования устойчивой ковалентной связи между олигомером и лекарственным веществом. Оба подхода проиллюстрированы в экспериментальной части.
Конкретные примеры активных агентов, которые подходят для ковалентного связывания с олигомером согласно настоящему изобретению, включают низкомолекулярные миметики и активные фрагменты (включая варианты) следующего: аспаригиназа, амдоксовир (ΌΆΡΌ), антид, бекаплермин, кальцитонины, циановирин, денилейкин дифтитокс, эритропоэтин (ЕРО), агонисты эритропоэтина (например, пептиды длиной примерно 10-40 аминокислот, включающие особую сердцевинную последовательность, как описано в \УО 96/40749), дорназа альфа, белок, стимулирующий эритропоэз (ΝΕ8Ρ), факторы коагуляции, такие как Фактор V, Фактор VII, Фактор МПа, Фактор VIII, Фактор IX, Фактор X, Фактор XII, Фактор XIII, Фактор фон Виллебранда; цередаза, церезим, альфа-глюкозидаза, коллаген, циклоспорин, альфа дифензины, бета дифензины, экседин-4, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (ГКСФ), тромбопоэтин (ТРО), альфа-1 ингибитор протеиназы, элкатонин, гранулоцитарный макрофагоцитарный колониестимулирующий фактор (ГМКСФ), фибриноген, филграстим, гормоны роста: гормон роста человека (гРЧ), гормон, высвобождающий гормон роста (ГВГР), СКО-бета, СКО-бета антитело, костные морфогенетические белки, такие как костный морфогенетический белок-2, костный морфогенетический белок-6, ОР-1, кислотный фактор роста фибробластов, основный фактор роста фибробластов, ί.Ό-40 лиганд, гепарин, человеческий сывороточный альбумин, низкомолекулярный гепарин (НМГ), интерфероны, такие как интерферон альфа, интерферон бета, интерферон гамма, интерферон омега, интерферон тау, консенсус-интерферон; интерлейкины и рецепторы интерлейкинов, такие как рецептор интерлейкина-1, белки слияния интерлейкина-2, интерлейкин-2, рецептор антагониста интерлейкина-1, интерлейкин-3, интерлейкин-4, рецептор интерлейкина-4, интерлейкин-6, интерлейкин-8, интерлейкин-12, рецептор интерлейкина-13, рецептор интерлейкина-17; лактоферрин и фрагменты лактоферрина, люлиберин (рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона-РФЛГ), инсулин, про-инсулин, аналоги инсулина (например, моноацилированный инсулин, описанный в патенте США № 5922675), амилин, С-пептид, соматостатин, аналоги соматостатина включая окреотид, вазопрессин (адиуретин), фоллитропин (фолликулостимулирующий гормон - ФСГ), вакцину гриппа, инсулиноподобный фактор роста (ИФР), инсулин
- 12 015333 тропин, макрофагально-колониестимулирующий фактор (М-КСФ), активаторы плазминогена, такие как альтеплаза, урокиназа, ретеплаза, стрептокиназа, памитеплаза, ланотеплаза и тенетеплаза; фактор роста нервов (ФРН), остеопротегерин, тромбоцитарный фактор роста, факторы роста ткани, трансформирующий фактор роста-1, васкулярно-эндотелиальный фактор роста, лейкемия-ингибитирующий фактор, кератиноцитарный фактор роста (КФР), глиоцитарный фактор роста (ГФР), Т-клеточные рецепторы, 0Ό молекулы/антигены, фактор некроза опухоли (ФНО), моноцит хемоаттрактантный белок-1, эндотелиальные факторы роста, паратириоидный гормон/гормон околощитовидной железы (ПТГ), глюкагоноподобный пептид, соматропин/соматропный гормон, ингибитор тимозин альфа 1, тимозин альфа 1 11/111а, тимозин бета 10, тимозин бета 9, тимозин бета 4, альфа-1 антитрипсин, фосфодиэстеразные (ФДЭ) соединения, УЬА-4 (очень поздний антиген-4), ингибиторы УЪА-4, бифосфонаты, антитело респираторносинцитиального вируса, трансмембранный регулятор гена кистозного фиброза (ТРГКФ), дизоксирибонуклеаза (Опаке), бактерицидный белок, увеличивающий проницаемость клеточной мембраны (ΒΡΙ), и анти-ЦМВ антитело. Типичные моноклональные антитела включают этанерцепт (димерный слитый белок, состоящий из внеклеточного лиганд-связывающего фрагмента человеческого 75 кД ФНО рецептора, связанного с Ре-фрагментом 1дС1), абциксимаб, афелиомомаб, басиликсимаб, даклизумаб, инфликсимаб, ибритумомаб тиуэксетан, митумомаб, муромонаб-СО3, конъюгат йода 131 и тоситумомаб, олизумаб, ритуксимаб и трастузумаб (герцептин).
Вспомогательные агенты, подходящие для ковалентного связывания с олигомером согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются перечисленным: амифостин, амиодарон, аминокапрокислоту, натрия амминогиппурат, аминоглутетемид, аминолевулиновую кислоту, аминосалициловую кислоту, амсакрин, анагрелид, анастразол, аспарагиназу, антрациклины, бексаротен, бикалутамид, блеомицин, бусерелин, бусульфан, каберголин, капецитабин, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцин, натрия циластин, цисплатин, кладрибин, клодронат, циклофосфамид, ципротерон, цитарабин, камптотецины, 13-цис ретиноевую кислоту, все транс-ретиноевые кислоты; дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин, дефероксамин, дексаметазон, диклофенак, диэтилстилбестрол, доцетаксел, доксорубицин, эпирубицин, эстрамустин, этопозид, экземестан, фексофенадин, флударабин, флудрокортизон, фторурацил, флуоксиместерон, флутамид, гемцитабин, эпинефрин, Ь-дегидроксифенилаламин, оксимочевину, идарубицин, ифосфамид, иматиниб, иринотекан, итраконазол, гозерелин, летрозол, лейковорин, левамизол, лизиноприл, ловотироксин натрия, ломустин, мехлорэтамин, медпроксипрогестерон, мегестрол, мелфалан, меркаптопурин, метараминол битартрат, метотрексат, метоклопрамид, мексилэтин, митомицин, митотан, митоксантрон, налоксон, никотин, нилутамид, окреотид, оксалишгатин, памидронат, пентостатин, пилкамицин, порфимер, преднизон, прокарбазин, прохлорперазин, ондасетрон, ралтитрексед, сиролимус, стрептозоцин, такролимус, тамоксифен, темозоломид, тенипозид, тестостерон, тетрагидроканнабинол, талидомид, тиогуанин, тиотепу, топотекан, третиноин, валрубицин, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин, долазетрон, гранизетрон; формотерол, флутиказон, лейпролид, мидазолам, алпразолам, амфотерицин В, подофилотоксины, нуклеозидные противовирусные препараты, ароил гидрозины, суматриптан; макролиды, такие как эритромицин, олеандомицин, тролеандомицин, рокситромицин, кларитромицин, даверцин, азитромицин, флуритромицин, диритромицин, джосамицин, спиромицин, мидекамицин, лейкомицин, миокамицин, рокитамицин, андазитромицин и свинолид А; фторхинолоны, такие как ципрофлоксацин, офлоксацин, левофлоксацин, тровафлоксацин, алатрофлоксацин, моксифлоксицин, норфлоксацин, эноксацин, грепафлоксацин, гатифлоксацин, ломефлоксацин, спарфлоксацин, темафлоксацин, перфлоксацин, амифлоксацин, флероксацин, тозуфлоксацин, прулифлоксацин, ирлоксацин, пазуфлоксацин, клинафлоксацин и ситафлоксацин; аминогликозиды, такие как гентамицин, нетилмицин, парамецин, тобрамицин, амикацин, канамицин, неомицин и стрептомицин, ванкомицин, тейкопланин, рамполанин, мидепланин, колистин, даптомицин, грамицидин, колистиметат; полимиксины, такие как полимиксин В, капреомицин, бацитрацин, пенемы; пенициллины, включающие пеницилиназачувствительные агенты, такие как пенициллин С, пенициллин V; пеницилиназастойкие агенты, такие как метициллин, оксациллин, клоксациллин, диклоксациллин, флоксациллин, нафциллин, активные вещества против грамотрицательных микроорганизмов, такие как ампициллин, амоксициллин и гетациллин, циллин и галампициллин, антисинегнойные пенициллины, такие как карбенициллин, тикарциллин, азлоциллин, мезлоциллин и пиперациллин, цефалоспорины, такие как цефподоксим, цефпрозил, цефтбутен, цефтизоксим, цефтриаксон, цефалотин, цефапирин, цефалексин, цефрадрин, цефокситин, цефамандол, цефазолин, цефалоридин, цефаклор, цефадроксил, цефалоглицин, цефуроксим, цефоранид, цефотакксим, цефатризин, цефацетрил, цефепим, цефиксим, цефоницид, цефоперазон, цефотетан, цефметазол, цефтазидим, лоракарбеф и моксалактам, монобласты, такие как азтреонам, и карбопенемы, такие как имипинем, меропенем, пентамидин изетионат, альбутерол сульфат, лидокаин, метапротеренол сульфат, беклометазон дипрепионат, триамцинолон ацетамид, будезонид ацетонид, флутиказон, ипратропий бромид, флунисолид, кромолин натрия и эрготамин тартрат, таксаны, такие как паклитаксел, §N-38 и тирфостины.
Вышеперечисленные примеры лекарственных веществ включают, где возможно, их аналоги, агонисты, антагонисты, ингибиторы, изомеры, полиморфы и фармацевтически приемлемые соли. Таким образом, например, в случае, если вышеупомянутое лекарственное вещество относительно высокомолеку
- 13 015333 лярно и не может быть классифицировано как низкомолекулярное лекарственное вещество, пример лекарственного вещества все равно приводится в перечне, поскольку возможно использование его аналога, имеющего такое же воздействие, но малый размер молекулы.
Низкомолекулярные лекарственные вещества, особенно подходящие для данного изобретения, включают такие, которые могут в определенной степени пересекать биологическую мембрану. Низкомолекулярные лекарственные вещества, способные проходить через кожный барьер, также принимаются во внимание. В некоторых случаях низкомолекулярное лекарственное вещество, вводимое перорально или даже парентерально, нежелательно преодолевает биологический барьер в значительной степени. Например, низкомолекулярным лекарственным веществом, нежелательно преодолевающим гематоэнцефалический барьер, называют такое, которое показывает уровень накопления в мозге, больший, чем у атенолола С учетом этого, низкомолекулярные лекарственные вещества, имеющие уровень накопления в мозге (БИК), измеренный как здесь описано, более 15 пмоль/г мозг/с представляют собой неограничивающие примеры низкомолекулярных лекарственных веществ, которые нежелательно преодолевают гематоэнцефалический барьер.
Таким образом, с учетом гематоэнцефалического барьера, низкомолекулярные лекарственные вещества, не предназначенные для центральной нервной системы, но все же преодолевающие гематоэнцефалический барьер, могут быть предпочтительными, поскольку конъюгация этих веществ дает в результате молекулу, имеющую меньше побочных эффектов на центральную нервную систему. К примеру, структурно связанные нуклеотиды и нуклеозиды (например, 8-азагуанин, 6-меркаптупурин, азатиопрен, тиоинозинат, 6-метилтиоинозинат, 6-тиоуриновая кислота, 6-тиогуанин, видарабин, кладрибин, анцитабин, азацитидин, эритро-9-(2-гидрокси-3-нонил)аденин, флюдарабин, гемцитабин и так далее) являются предпочтительными.
Низкомолекулярное лекарственное вещество флюдарабин имеет около 70% биодоступности при пероральном введении и используется при лечении хронической лимфоцитной лейкемии, а также при лечении лейкемии волосковых клеток, нехожскинской лимфомы и грибовидного микоза. Флюдарабин также демонстрирует побочные эффекты, связанные с центральной нервной системой, с тяжелыми нейрологическими последствиями, включая слепоту, кому и даже летальный исход. Исследования на крысах и кроликах показали, что это лекарственное вещество может также быть тератогенным. Таким образом, предполагается, что конъюгат флюдарабина будет эффективным с точки зрения блокирования пересечения лекарством гематоэнцефалического барьера и/или плацентарного барьера, или, по меньшей мере, с точки зрения снижения скорости пересечения этих барьеров, благодаря чему нежелательные побочные эффекты флюдарабина будут снижены.
Еще один класс низкомолекулярных лекарственных веществ имеет общие побочные эффекты, связанные с центральной нервной системой, хотя он обычно используется для периферийного воздействия. Это класс низкомолекулярных веществ антигистаминов. Структурно антигистамины, как класс, соотносятся с аминоалкилэфирами. Эти низкомолекулярные лекарственные вещества включают дифенгидрамин, бромодифенгидрамин, доксиламин, карбиноксамин, клемастин, дименгидринат, трипеленнамин, пириламин, метапирилен, тонзиламин, фенирамин, хлорфенирамин, дексхлорфенирамин, бромофенирамин, дексбромофенирамин, пирробутамин, трипролидин, прометазин, тримепразин, метдилазин, циклизин, хлорциклизин, дифенилпиралин, фениндамин, диметинден, меклизин, буклизин, антазолин, ципрогептадин, азатадин, терфенадин, фексофенадин, астемизол, цетиризин, азеластин, лоратадин и дезлоратадин.
Еще один класс низкомолекулярных лекарственных веществ, в котором желательным является снижение скорости пересечения гематоэнцефалического барьера, представлен опиодными антагонистами. Опиодные антагонисты включают налоксон, Ν-метилналоксон, 6-амино-14-гидрокси-17-аллилнордезоморфин, налтрендол, налтрексон, Ν-метилналтрексон, налбуфин, буторфанол, циклазоцин, пентазоцин, налмефен, налтрендол, налтриндол, нор-биналторфимин, оксилорфан, 6-амино-6-дезоксо-налоксон, пентазоцин, леваллорфанметилналтрексон, бупренорфин, циклорфан, левалорфан и налорфин, а также описанные в Патентах США № 5159081, 5250542, 5270328 и 5434171 и в Кпарр и соавт. ТНе рНаппасо1оду о£ Орюб Рерббек Ь.Е. Ткепд Еб., с.15, Наггеооб Асабетю РиЬШНега, 1995. Однако, как правило, любое вещество из химического класса оксиморфонов (включая и вышеуказанные опиоидные антагонисты, а также оксиморфон, кодеин, оксикодон, морфин, этилморфин, диацетилморфин, гидроморфон, дигидрокодеин, дигидроморфин и метилдигидроморфин).
Другой класс низкомолекулярных лекарственных веществ - это препараты на основе комплексов с платиновой координацией. Они включают, например, цис-платин, гидроплатин, карбоплатин и оксалиплатин.
Еще один класс низкомолекулярных лекарственных веществ, которые особенно хорошо подходят для конъюгирования - класс стероидов. Предпочтительные стероиды имеют гидроксильную группу в своей молекулярной структуре (или ацильную группу, которую можно восстановить до гидроксильной группы). Неограничивающие примеры стероидов включают альдостерон, дезоксикортикостерон, флудрокортизон, кортизон, гидрокортизон, преднизолон, преднизон, медризон, мепреднизон, алклометазон, беклометазон, бетаметазон, дексаметазон, дифлоразон, флюметазон, метилпреднизолон, параметазон,
- 14 015333 амцинонид, дезонид, флюцинолон, флунизолид, флурандренолид, триамцинолон, клобетазол, хальцинонид, мометазон, клокортолон и дезоксиметазон.
Фторхинолоны и родственные низкомолекулярные лекарственные вещества в этом классе могут быть использованы для создания конъюгатов. Типичные фторхинолоны включают: ципрофлоксацин, офлоксацин, левофлоксацин, тровафлоксацин, алатрофлоксацин, моксифлоксацин, норфлоксацин, эноксацин, грепафлоксацин, гатифлоксацин, ломефлоксацин, спарфлоксацин, темафлоксацин, пефлоксацин, амифлоксацин, флероксацин, тосуфлоксацин, прулифлоксацин, ирлоксацин, пазуфлоксацин, клинафлоксацин и ситафлоксацин.
И еще один класс лекарственных веществ, использующихся для периферических показаний, некоторые представители которого известны как тератогенные, - это класс ретиноидных низкомолекулярных лекарственных веществ. Структурно родственный класс ретиноидов включает, без ограничений: ретинол, ретинал, 3-дегидроретинол, α-каротин, β-каротин, γ-каротин, δ-каротин, критоксантин, третиноин, изотретиноин, этретинат и эритин. Ввиду способности к тератогенности у этого класса низкомолекулярных лекарственных веществ (или любого другого класса, вызывающего тератогенность), желательно снизить потенциальный вред, наносимый плоду, путем полного устранения или снижения скорости пересечения гематоплацентарного барьера тератогенами.
Дополнительные низкомолекулярные лекарственные вещества, используемые как часть описанных здесь конъюгатов, включают фенотиазины, дибензо-диазепины, стимуляторы лактации, такие как метоклопрамид и тиазиды. Примеры фенотиазинов включают прохлорперазин, перфеназин, трифторперазин и флуфеназин. Примеры дибензо-диазепинов включают клозапин, оланзапин и кветиапин. Другие низкомолекулярные лекарственные вещества включают амлодипин, нифедипин, нимодепин, 5-гидрокситриптофан, ретиноевую кислоту и изотретиноин. Другое предпочтительное лекарственное вещество - это невирапин, который легко пересекает плацентарный барьер.
Дополнительные низкомолекулярные лекарственные вещества, подходящие для использования в данном изобретении, можно найти, к примеру, в Т11С Мегск 1пбех, 13-е издание, Мегск & СО., 1пс. (2001), Т11е ΆΗΕ8 Эгид НапбЬоок, 2-е издание, Лшепсап 8ос1е1у оГ НеаИй §у81еш РйатшасШз апб Ырршсоб, ^1Шаш8 апб ХУбкпъ: Тйе Рйуышапк Эе^к ВеГегепсе, Тйошкоп НеаИйсате 1пс., 2003; и Ксшшд1оп Тйе 8с1епсе апб Ртасбсе оГ Рйатшасу, 19-е издание, 1995.
Путем модифицирования низкомолекулярного лекарственного вещества, как указано выше, путем ковалентной связи с водорастворимым олигомером, полученным из монодисперсной или бимодальной олигомерной композиции, можно получить значительные изменения в переносе низкомолекулярного лекарственного вещества и фармакологических свойствах. Использование водорастворимого олигомера, полученного из монодисперсной или бимодальной олигомерной композиции, позволяет получить четко определенные свойства лекарства, так как полученные конъюгаты составляют четко определенную композицию, а не распределение из множества видов конъюгатов низкомолекулярного лекарственного вещества и олигомеров, имеющий целый спектр мономерных подгрупп (и, следовательно, молекулярных масс). Как уже было сказано, добавление или изъятие даже одного мономера может оказывать значительное влияние на характеристики итогового конъюгата. В течение разумного времени можно провести просеивание матрицы дискретных олигомеров различного размера (от 1 до 30 мономерных подгрупп) и, таким образом, получить необходимые конъюгаты с необходимыми свойствами.
Олигомеры, связанные с низкомолекулярным препаратом, обеспечивают отличие в свойствах по сравнению с исходным низкомолекулярным лекарственным веществом Использование малых олигомеров (по сравнению с 5К-60К полимерными цепочками, которые обычно присоединяются к белкам) также увеличивает вероятность сохранения биоактивности лекарства хотя бы в малой степени или, предпочтительно, в значительной мере. Эта характеристика продемонстрирована в табл. VI (пример 10), предлагающей данные о биологической активности (ЕС50) для примеров конъюгатов согласно настоящему изобретению. Иллюстрационные конъюгаты ПЭГ-олигомера-налоксона/налоксола обладают биологической активностью в диапазоне от 5 до приблизительно 35% немодифицированного исходного лекарственного вещества, демонстрируя и другие положительные характеристики соединений настоящего изобретения.
Олигомеры обычно включают два или более мономеров, последовательно связанных с образованием цепочки мономеров. Олигомер может быть сформирован из мономеров одного типа (гомо-олигомер) или двух либо трех типов мономера (ко-олигомер) Предпочтительно, чтобы каждый олигомер был коолигомером из двух мономеров или предпочтительнее гомо-олигомером В результате мономеры образуют водорастворимый олигомер, как определено выше, т.е. с растворимостью в воде >95%, предпочтительно >99% растворимостью в воде при комнатной температуре и физиологическом уровне кислотности (рН 7,2-7,6).
Соответственно, каждый олигомер состоит из, максимум, трех различных типов мономеров, выбираемых из группы, состоящей из алкиленоксида, такого как этиленоксид или пропиленоксид, олефинового спирта, такого как виниловый спирт, 1-пропенол или 2-пропенол; винилпирролидона; гидроксиалкилметакриламида или гидроксиалкилметакрилата, где алкил предпочтительно является метилом, αгидроксикислоты, такой как молочная кислота или гликолевая кислота; фосфазена, оксазолина, амино
- 15 015333 кислот, углеводов, таких как моносахариды, сахарид или маннит; и Ν-акрилоилморфолина. Предпочтительные типы мономеров включают алкиленоксид, олефиновый спирт, гидроксиалкилметакриламид или метакрилат, Ν-акрилоилморфолин и α-гидроксикислоту. Предпочтительно, чтобы каждый олигомер независимо являлся ко-олигомером двух типов мономеров, выбранных из данной группы, или, предпочтительнее, гомо-олигомером одного типа мономера, выбранного из приведенной группы.
Два типа мономеров в ко-олигомере могут быть одного типа мономеров, к примеру, два алкиленоксида, как этиленоксид и пропиленоксид. Предпочтительно, чтобы олигомер был гомо-олигомером этиленоксида. Обычно, хотя и не необходимо, конец (концы) олигомера, которые не связаны ковалентно с малой молекулой, замыкались для того, чтобы сделать их нереакционноспособными. В ином случае, на конце может находиться реакционноспособная группа. Если на конце находится реакционноспособная группа, она выбирается таким образом, чтобы она либо была нереакционноспособной в условиях формирования конечного олигомера, либо во время ковалентного связывания олигомера с низкомолекулярным препаратом, либо по необходимости защищается. Распространенной концевой функциональной группой является гидроксил или -ОН, в частности, для олигоэтиленоксидов.
Водорастворимый олигомер (О в формуле конъюгата О-Х-Э) может иметь любое количество различных геометрических форм. Например, О (в формуле О-Х-Э) может быть линейным, разветвленным или вилкообразным. Как правило, водорастворимый олигомер линеен или разветвлен, например, обладает одной точкой разветвления. Хотя многое из того, о чем здесь шла речь, сфокусировано на поли(этиленоксиде), как на показательном олигомере, представленные доводы и структуры могут с успехом распространяться и включать любые растворимые в воде олигомеры, описанные выше.
Молекулярная масса водорастворимого олигомера, исключая связующую часть, обычно относительно низка. Примеры значений молекулярной массы водорастворимого олигомера включают: меньше чем приблизительно 1500, меньше чем приблизительно 1400, меньше чем приблизительно 1300, меньше чем приблизительно 1200, меньше чем приблизительно 1100, меньше чем приблизительно 1000, меньше чем приблизительно 900, меньше чем приблизительно 800, меньше чем приблизительно 700, меньше чем приблизительно 600, меньше чем приблизительно 500, меньше чем приблизительно 400, меньше чем приблизительно 300, меньше чем приблизительно 200 и меньше чем приблизительно 100 Да.
Примерный диапазон молекулярных масс для водорастворимого олигомера (исключая связь) включает от приблизительно 100 до приблизительно 1400 Да; от приблизительно 100 до приблизительно 1200 Да; от приблизительно 100 до примерно 800 Да; от приблизительно 100 до приблизительно 500 Да; от приблизительно 100 до приблизительно 400 Да; от приблизительно 200 до приблизительно 500 Да; от приблизительно 200 до приблизительно 400 Да; от приблизительно 75 до приблизительно 1000 Да; от приблизительно 75 до приблизительно 750 Да.
Предпочтительно, чтобы количество мономеров в водорастворимом олигомере попадало в один или несколько из следующих пределов: между приблизительно 1 и приблизительно 30 (включительно); между примерно 1 и приблизительно 25; между приблизительно 1 и приблизительно 20; между приблизительно 1 и приблизительно 15; между приблизительно 1 и приблизительно 12; между приблизительно 1 и приблизительно 10. В определенных случаях количество мономеров в последовательности в олигомере (и соответствующем конъюгате) соответствует 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8. В некоторых вариантах осуществления изобретения олигомер (и соответствующий конъюгат) содержит 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 мономеров в последовательности. В других вариантах осуществления изобретения олигомер (и соответствующий конъюгат) обладает 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 мономерами в последовательности.
Когда водорастворимый олигомер имеет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мономеров, эти значения соответствуют метоксизамкнутому олиго(этиленоксиду), имеющему молекулярную массу 75, 119, 163, 207, 251, 295, 339, 383, 427 и 471 Да, соответственно. Если олигомер имеет 11, 12, 13, 14 или 15 мономеров, эти значения соответствуют метоксизамкнутому олиго(этиленоксиду), имеющему молекулярную массу, соответственно, 515, 559, 603, 647 и 691 Да.
В тех случаях, когда используется бимодальный олигомер, он может обладать бимодальным распределением, концентрирующимся вокруг любых двух чисел мономеров, указанных выше. В идеале, индекс полидисперсности каждого пика бимодального распределения М\т/Мп составляет 1,01 или менее, предпочтительно 1,001 или менее и предпочтительнее 1,0005 или менее. Наиболее предпочтительно, чтобы каждый пик обладал значением М\т/Мп 1,0000. К примеру, бимодальный олигомер может иметь одно из следующих примерных сочетаний мономерных субъединиц: 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 110 и так далее; 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2-10 и так далее; 3-4, 3-5, 3-6, 3-7, 3-8, 3-9, 3-10 и так далее; 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4-10 и так далее; 5-6, 5-7, 5-8, 5-9, 5-10 и так далее; 6-7, 6-8, 6-9, 6-10 и так далее; 78, 7-9, 7-10 и так далее; 8-9, 8-10 и так далее.
Кроме того, олигомер согласно настоящему изобретению может быть тримодальным или даже тетрамодальным, обладающим диапазоном мономерных единиц, как описано выше. Композиции олигомеров, обладающие четко определенной смесью олигомеров (например, бимодальных, тримодальных, тетрамодальных и так далее), могут быть приготовлены путем смешивания очищенных монодисперсных олигомеров для получения желаемого профиля олигомеров (смесь двух олигомеров, отличающихся
- 16 015333 только количеством мономеров, бимодальна; смесь трех олигомеров, отличающихся только количеством мономеров, тримодальна; смесь четырех олигомеров, отличающихся только количеством мономеров, тетрамодальна), или, по-другому, могут быть получены путем хроматографии полидисперсного олигомера на колонке для восстановления центрального сечения и для получения смеси олигомеров в определенном желаемом молекулярном диапазоне. Как можно увидеть из фиг. 10, коммерчески доступные ПЭГ обычно представляют собой полидисперсные смеси, даже для материалов с низкой молекулярной массой. Представленный образец метокси-ПЭГ был проанализирован при помощи масс-спектрометрии, и, хотя на ярлыке он обозначен, как метокси-ПЭГ-350, был обнаружен реагент, содержащий 9 разных ПЭГ олигомерных компонентов, каждый из которых отличался количеством мономерных субъединиц. В целях настоящего изобретения, точнее, для приготовления конъюгатов, имеющих указанные выше характеристики, полидисперсные полимеры не особо предпочтительны, поскольку, как было обнаружено, небольшие изменения в количестве мономеров оказывают значительное влияние на свойства конечных конъюгатов. Эти воздействия были бы приглушены или даже неопределимы в смесях конъюгатов из полидисперсных олигомеров. Более того, коммерческие партии полидисперсных полимеров (или олигомеров) часто чрезмерно различаются по составу, и по этой причине, не являются предпочтительными для данного применения, где единообразие от партии к партии является желательной характеристикой описанного выше олигомера.
Как описано выше, водорастворимый олигомер получается из композиции, которая предпочтительно является мономолекулярной или монодисперсной. То есть, олигомеры в данной композиции обладают одинаковыми дискретными значениями молекулярного веса, а не характеризуются его распределением. Некоторые монодисперсные олигомеры можно приобрести из коммерческих источников, например, предлагаемых компанией Зщта-А1бпск. или наоборот, могут быть произведены непосредственно из доступного на рынке исходного сырья, такого как сырье компании §1дта-А1бт1ск. Например, олигоэтиленгликоли согласно настоящему изобретению могут быть получены способом, описанным, например, в Скеп Υ., Вакег, С.Ь., 1. Огд. Скет., 6870-6873 (1999) или в АО 02/098949 А1. В ином случае, такие олигомеры могут быть получены, как описано здесь в примере 9.
Как описано выше, одним из аспектов изобретения является усовершенствованный способ получения монодисперсных олигомеров, таких как олиго(этиленоксид). Эти олигомеры могут использоваться в самых разнообразных сферах применения, включая, но не ограничиваясь только получением конъюгата низкомолекулярного лекарственного вещества и водорастворимого олигомера, обладающего вышеупомянутыми положительными свойствами.
Для приготовления искомых монодисперсных олигомеров был использован новый подход. Было обнаружено, что олигомерные реагенты с концевыми галогруппами являются более химически активными и обеспечивают более высокий выход монофункциональных продуктов по сравнению с реагентами, описанными ранее.
Таким образом, настоящее изобретение также включает способ получения композиций монодисперсных олигомеров. Способ включает взаимодействие олигомера с концевыми галогруппами, такого как олиго(этиленоксид), имеющего (т) мономеров, с олиго(этиленоксидом) с концевыми гидроксигруппами, имеющего (п) мономеров. В общем случае, галогеновая группа на олигоэтиленгликоле с концевой галогруппой является хлоро-, бромо- или йодогруппой. Однако предпочтительно, чтобы галогеновая группа была бромогруппой. Реакция проводится в условиях, эффективных настолько, чтобы произошло замещение галогеновой группы из олигомера с концевой галогруппой, чтобы, таким образом, образовался олиго(этиленоксид), имеющий (т)+(п) мономерных подгрупп (ОЕСт+п), где (т) и (п) каждое независимо варьируется в диапазоне от 1 до 10. То есть каждое из (т) и (п) независимо имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Предпочтительно, чтобы (т) и (п) калждое независимо имело значение от 1 до приблизительно 6. В некоторых вариантах осуществления изобретения (т) имеет значение 1, 2 или 3, а (п) находится в диапазоне от 1 до 6. В других случаях, (т) составляет 1, 2 или 3, а значение (п) варьируется от 2 до 6. Типично, реакция проводится в присутствии сильного основания, эффективного настолько, чтобы превратить гидроксильную группу олигоэтиленоксида с концевыми гидроксигруппами в соответствующие алкоксидные продукты. Подходящие основания включают натрий, калий, гидрид натрия, гидрид калия, метоксид натрия, метоксид калия, трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия. В предпочтительном варианте осуществления изобретения олигоэтиленгликоль с концевой галогруппой имеет замыкающую группу, такую как метоксильная или этоксильная.
Характерные олиго(этиленгликоли) с концевыми гидроксигруппами соответствуют структуре НО(СН2СН2О)п-Н, где (п) описано выше. Затем, способ предпочтительно включает этап превращения концевой гидроксильной группы ОЕСт+п в галогеновую группу -X, с образованием ОЕСт+п-Х. Вышеупомянутые этапы затем повторяются до получения мономолекулярного олигомера, имеющего требуемое количество подгрупп.
Иллюстративная схема реакции:
- 17 015333
Сильное основание 1 <ΈΓΌαΗ2θΗλμ<Χ + ЖЧаъСНгО^Н - » СТзО-ССНгСН^^-Й х=€1,эи
2. С^АЮНсОШ^Н —-->.
Сильное основание + ЖЦСВлСНА)в-Н —** СН^О-СЯгСНг^-а 4г СНАССП-СХ^Ай^-Н --р» оадо-ст^ак)щЛ^
Сильное основание
СШСО^Н-СНа^^-Х + НОЧСНзСП^О^-Н -----С^ОчСН^А^-Н
Как показано, способ включает соединение двух видов мономолекулярных олигомеров с помощью реакции замещения, в которой галид на одном олигомере, предпочтительно олигомерном этиленоксиде, и даже более предпочтительно, галоген-производной диметилового эфира олигоэтиленоксида, вступает в реакцию с олигоэтиленгликоль-алкоксидом, чтобы получить соответствующий олигомер (см. реакцию 1 выше).
Обычно алкоксид образуется из соответствующего олигоэтиленоксида путем превращения концевой гидроксильной группы в соответствующий алкоксид в присутствии сильного основания. Обычно реакция проводится в органическом растворителе, таком как тетрагидрофуран (ТГФ) при температуре в диапазоне от приблизительно 0°С до приблизительно 80°С. Продолжительность реакций обычно составляет от приблизительно 10 мин до приблизительно 48 ч. Продукт реакции в приведенной выше иллюстративной реакции - замкнутый олигоэтиленоксид - содержит сумму числа мономеров галогенпроизводного олигомера и числа мономеров в олигоэтиленгликольалкоксиде [(т)+(п)]. Выход продуктов, как правило, составляет от приблизительно 25% до приблизительно 75% для очищенного объединенного продукта, при этом выход продуктов в большинстве случаев составляет от приблизительно 30 до приблизительно 60%.
В приведенном выше примере концевая гидроксильная группа в продукте реакции 1 затем активируется, если необходимо, для связывания с малой молекулой. В ином случае при желании, концевая гидроксильная группа в иллюстративном продукте, показанном выше (в вышеприведенном примере с (т)+(п) подгруппами), затем превращается в галид, предпочтительно бромид. Превращение спирта в алкилгалид можно осуществить непосредственно или через промежуточное соединение, такое как сульфонат или галоформиат. Условия и реагенты, подходящие для осуществления данного превращения, можно найти, к примеру в Ьагоск, В., С'отргсНспЖ'С Огдашс ТгапМогтайощ. УСН, 1994, стр. 353-363.
Одним из предпочтительных способов является способ, изложенный в примере 11. Поэтапное добавление олигоэтиленоксидгалида к олигоэтиленоксиду затем повторяется, как описано выше, чтобы получить олигоэтиленоксид с (т)+2(п) мономерами и т. д. Таким же образом дискретные подгруппы олигоэтиленоксида затем добавляются контролируемым, поэтапным способом к существующему мономерному (мономолекулярному) олигомерному продукту этиленоксида, чтобы обеспечить приготовление четко определенного олигомера с точным количеством подгрупп.
Широко доступными являются мономолекулярные олигоэтиленгликоли с примерно 1-3 мономерными подгруппами (81дта-А1бг1сй). Использование галогензамещенного олигомерного этиленгликольного реагента представляет усовершенствование по сравнению с существующими способами, например, использование мезилата, так как в результате использования описанного здесь подхода получается больший выход продукта, сокращает время реакции и допускает более мягкие ее условия благодаря более высокой химической активности галида, и, в частности, бромозамещенного олигоэтиленгликолевого реагента. Полученные таким образом олигомеры обычно очищаются перед дальнейшим использованием, например, одним или несколькими из следующих способов: хроматография, такая как высокоэффективная жидкостная хроматография, ионообменная хроматография, колоночная хроматография, осаждение или перекристаллизация. Затем чистота подтверждается с помощью одного из множества аналитических методов, таких как ЯМР, ГПХ и ФИКС. Образованные таким образом продукты подходят для дальнейшего использования.
Линкером или связью согласно настоящему изобретению может быть единственный атом, такой как кислород или сера, два атома или несколько атомов. Линкер обычно, но не обязательно, линеен по
- 18 015333 своей природе. Связь X (в формуле О-Х-Э), является гидролитически стабильной, и предпочтительно также ферментно стабильной. Предпочтительно связь X является связью, имеющей длину цепочки менее чем примерно 12 атомов и предпочтительно менее чем примерно 10 атомов, и еще более предпочтительно менее чем примерно 8 атомов или еще более предпочтительно менее, чем примерно 5 атомов, где длина означает количество атомов в единственной цепи, не считая заместителей. Например, связи мочевины такие как,
К олимер>-ΝΗ-(Ο==Ο)-ΝΗ-Κ' лекарственное вещество, считаются имеющими длину цепочки в три атома (-ΝΗΟ(Ο)-ΝΗ-). В выбранных вариантах осуществления изобретения связь не включает в себя дальнейшие спейсерные группы. Предпочтение отдается малым связям, и они соответствуют природе настоящего изобретения, так как малые связи, такие как эти, менее вероятно будут преобладать или затмевать эффект добавления одной или небольшого количества подгрупп мономеров на разницу в транспортных свойствах конъюгатов согласно настоящему изобретению.
В некоторых случаях линкер X является гидролитически устойчивым и содержит эфир, амид, уретан, амин, тиоэфир, мочевину или углерод-углеродную связь. Функциональные группы, такие как те, что обсуждаются ниже и иллюстрируются в рабочих примерах, обычно используются для образования связей. Менее предпочтительная связь может также включать (или граничить с или быть окруженной) спейсерные группы, как далее описывается ниже. Спейсеры являются наиболее полезными в тех случаях, когда биоактивность конъюгата значительно ограничивается из-за расположения олигомера на исходном лекарственном веществе.
Более конкретно, в выбранных вариантах осуществления изобретения, линкер согласно настоящему изобретению Ь, может выглядеть любым образом из перечисленных: -О-, -ΝΗ-, -8-, -С(О)-, ϋ(Ο)-ΝΗ, ΝΗ-0(Ο)-ΝΗ, Ο-0(Ο)-ΝΗ, -С(8)-, <Η2-, -СП-СИ.-. -СН2-СН2-СН2-, -СИ-СИ-СИ-СИ-. -О-СН2-, -СН2О-, -О-СН2-СН2-, -СН2-О-СН2-, -СН2-СН2-О-, -О-СН2-СН2-СН2-, -СН2-О-СН2-СН2-, -СН2-СН2-О-СН2-, -СН2-СН2-СН2-О-, -О-СН2-СИ2-СН2-СН2-, -СН2-О-СН2-СН2-СН2-, -СН2-СН2-О-СН2-СН2-, -СН2-СН2-СН2О-СН2-, -СН2-СН2-СН2-СН2-О-, <(Ο)-ΝΗ-^2-, ^(Ο)-ΝΗ^Η2^Η2-, ^Η2-^Ο)-ΝΗ-ΟΗ2-, -си2-си2^Ο)-ΝΗ-, -С^-ЫИ-СЩ-СЩ-СЩ-, -ζΉ2-^Ο)-ΝΗ<Η2<Η2-, -ζΉ2<Η2<(Ο)-ΝΗ-^2-, -СЩ-СЩ-СЩ^Ο)-ΝΗ-, <(Ο)-ΝΗ<Η;ΧΉ2<Η2<Η2-, ^Η2-^Ο)-ΝΗ^Η2^Η2^Η2-, <Η2<ΗΧΧΟ)-ΝΗ<Η2<Η2-, <Η2-№2<Η2<(Ο)-ΝΗ<Η2-, <Η2-№2<Η2<(Ο)-ΝΗ<Η2<Η2-, -№2<Η2<Η2-№2<(Ο)-ΝΗ-, -ΝΗ^Ο)<Η2-, -^2-ΝΗ<(Ο)<Η2-, <Η2<Η2-ΝΗ-^Ο)<Η2-, -ΝΗ-^Ο)<Η2-^2-, <Η2-ΝΗ<(Ο)<Η2<Η2, <Η2-^2-ΝΗ<(Ο)-^2<Η2, <(Ο)-ΝΗ<Η2-, <(Ο)-ΝΗ<Η2<Η2-, -Ο<(Ο)-ΝΗ-^2-, -Ο<(Ο)-ΝΗ<Η2СЫ2-, -ΝΗ-СЩ-, -ΝΗ-СЩ-СЩ-, <Η2-ΝΗ-№2-, <Η2-№2-ΝΗ<Η2-, <(Ο)<Η2-, -С^-СЩ-СЩ-, -СЫ2^Ο)<Η2-, -СЩ-СЩ-С^-СЩ-, <Η2<Η2-^Ο)<Η2<Η2-, -СЩ-СЩ-С^)-, <Η2-^2<Η2<(Ο)-ΝΗСЩ-СЩ-ΝΗ-, ^Η2^Η2-ΟΗ2-^Ο)-ΝΗ^Η2-ΟΗ2-ΝΗ-^Ο)-, ^Η2-ΟΗ2^Η2-^Ο)-ΝΗ^Η2^Η2-ΝΗ-^Ο)СЫ2-, двухвалентная циклоалкильная группа, -Ν(Κ6)-, К6 - это Н или органический радикал, выбранный из группы, состоящей из алкила, замещенного алкила, алкенила, замещенного алкенила, алкинила, замещенного алкинила, арила и замещенного арила.
Однако для целей настоящего изобретения серия атомов не считается связью, если она непосредственно примыкает к олигомерному сегменту, и серия атомов является ни чем иным как другим мономером, таким что предложенная связь будет представлять не более, чем расширение олигомерной цепочки.
Связь X между олигомером и малой молекулой как правило образуется путем реакции функциональной группы на конце олигомера с соответствующей функциональной группой в низкомолекулярном лекарственном веществе. Иллюстративные реакции кратко описаны ниже. Например, аминогруппа олигомера О, может реагировать с карбоновой кислотой или активированным производным карбоновой кислоты на малой молекуле, или наоборот, с образованием амидной связи. В другом случае реакция амина на олигомере с активированным карбонатом (например, сукцинимидом или бензотриазилкарбонатом) на лекарственном веществе, или наоборот, формирует карбаматную связь. Реакция амина на олигомере с изоцианатом (Κ-Ν^=Ο) на лекарственном веществе, или наоборот, формирует мочевинную связь (Ρ-ΝΗ-(ί'=Ο)-ΝΗ-Ρ') Далее, реакция спиртовой группы (алкоксида) на олигомере с алкилгалидом или галидной группой внутри лекарственного вещества, или наоборот, образует эфирную связь. Еще в одном подходе к соединению малая молекула с альдегидной функциональной группой соединяется с аминогруппой олигомера путем восстановительного аминирования, что приводит к образованию вторичной аминной связи между олигомером и малой молекулой.
Особенно предпочтительным олигомером является олигомер, имеющий альдегидную функциональную группу. Такой, олигомер будет иметь следующую структуру. СНзО-(СН2-СН2-Ο)η-(СН2)рС(О)Н, где значение (η) - одно из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10, а значение (р) - одно из 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7. Предпочтительные значения (η) включают 3, 5 и 7, а предпочтительные значения (р) - 2, 3 и 4. Кроме этого, атом углерода, альфа к части -С(О)Н, необязательно может замещаться алкилом.
Олигомерный реагент предпочтительно обеспечивается как монодисперсная композиция.
Типично, конец олигомера, не имеющий функциональной группы, замыкается, чтобы сделать его нереакционноспособным. Если олигомер действительно включает другую функциональную группу на конце, отличную от той, которая предназначена для образования конъюгата, эта группа или выбирается таким образом, чтобы она была нереакционноспособной в условиях образования связи X, или она за
- 19 015333 щищается во время образования связи X.
Как указано выше, олигомер включает функциональную группу для образования низкомолекулярного конъюгата, обладающего описанными здесь свойствами. Функциональная группа обычно содержит электрофильную или нуклеофильную группу для ковалентного связывания с малой молекулой, в зависимости от реакционно-способной группы, которая содержится в малой молекуле или вводится в нее. Примеры нуклеофильных групп, которые могут присутствовать либо в олигомере, либо в малой молекуле, включают гидроксил, амин, гидразин (-ΝΗΝΗ2), гидразид (-0(0)ΝΗΝΗ2) и тиол. Предпочтительные нуклеофилы включают амин, гидразин, гидразид и тиол, особенно амин. Большинство низкомолекулярных лекарственных веществ для ковалентного связывания с олигомером будут обладать свободной гидроксильной, аминной, тио-, альдегидной, кетоновой или карбоксильной группой.
Примеры электрофильных функциональных групп, которые могут присутствовать либо в олигомере, либо в малой молекуле, включают карбоновую кислоту, эфир карбоновой кислоты, особенно эфиры имида, ортоэфир, карбонат, изоцианат, изотиоцианат, альдегид, кетон, тион, алкенил, акрилат, метилакрилат, акриламид, сульфон, малеимид, дисульфид, иодо, эпокси, сульфонат, тиосульфонат, силан, алкоксисилан та галосилан. Более подробные примеры этих групп включают сукцинимидиловый эфир или карбонат, имидазоиловый эфир или карбонат, бензотриазоловый эфир или карбонат, винилсульфон, хлорэтилсульфон, винилпиридин, пиридилдисульфид, иодоацетамид, глиоксаль, дион, мезилат, тозилат и трезилат (2,2,2-трифторэтансульфонат).
Также включены серные аналоги нескольких из этих групп, такие как тион, тионгидрат, тиокеталь, и т. д., а также гидраты или защищенные производные каких-либо из вышеуказанных компонентов (например, альдегидгидрат, гемиацеталь, ацеталь, кетонгидрат, гемикеталь, кеталь, тиокеталь, тиоацеталь). Другим полезным реагентом конъюгации является 2-тиазолидинтион.
Как указано выше, активированное производное карбоновой кислоты означает производное карбоновой кислоты, которое быстро вступает в реакцию с нуклеофилами, в основном намного быстрее, чем непроизводная карбоновая кислота. Активированные карбоновые кислоты включают, например, галоидангидриды (такие как хлорангидриды), ангидриды, карбонаты и сложные эфиры. Такие сложные эфиры включают имидоэфиры в общей форме -(00)0-Ν[(00)-]2; например, Ν-гидроксисукцинимидил (ΝΗ8) эфиры или Ν-гидроксифталимидил эфиры. Также предпочтение отдается имидазолилэфирам и бензотриазолэфирам Особенное предпочтение отдается активированным сложным эфирам пропионовой кислоты или бутановой кислоты, как описано в патенте США № 5672662, который находится в совместном владении. Они включают группы в форме -(СН2)2-3С(=О)О-Р, где О -предпочтительно выбирается из Νсукцинимида, Ν-сульфосукцинимида, Ν-фталимида, Ν-глутаримида, Ν-тетрагидрофталимида, Νнорборнен-2,3-дикарбоксимида, бензотриазола, 7-азабензотриазола и имидазола.
Другие предпочтительные электрофильные группы включают сукцинимидилкарбонат, малеинимид, бензотриазолкарбонат, глицидиловый эфир, имидазоил карбонат, р-нитрофенилкарбонат, акрилат, трезилат, альдегид и ортопиридил дисульфид.
Эти электрофильные группы подвергаются реакции с нуклеофилами, например, гидрокси-, тио- или аминогруппами, с получением разнообразных видов связей. В настоящем изобретении предпочтение отдается реакциям, которые благоприятствуют образованию гидролитически стабильной связи. Например, карбоновые кислоты и их активированные производные, которые включают ортоэфиры, сукцинимидилэфиры, имидазолилэфиры и бензотриазолэфиры, вступают в реакцию с вышеуказанными видами нуклеофилов с образованием сложных эфиров, тиоэфиров и амидов, соответственно, из которых амиды являются наиболее гидролитически стабильными. Как указано выше, наиболее предпочтительными являются конъюгаты, имеющие гидролитически стабильную связь между олигомером и лекарственным веществом. Карбонаты, включая сукцинимидил, имидазолил и бензотриазолкарбонаты, вступают в реакцию с аминогруппами с образованием карбаматов. Изоцианаты (Κ-Ν=0=0) вступают в реакцию с гидроксильными или аминогруппами с образованием, соответственно, карбаматных (ΚΝΗ-0(0)-0Κ') или мочевинных (ΚΝΗ-0(0)-ΝΗΚ') связей. Альдегиды, кетоны, глиоксали, дионы или их гидраты или спиртовые аддукты (т.е. альдегидгидрат, гемиацеталь, ацеталь, кетонгидрат, гемикеталь и кеталь) предпочтительно вступают в реакцию с аминами, за которой следует восстановление полученного имина, по желанию, с получением аминной связи (восстановительное аминирование).
Некоторые из электрофильных функциональньж групп включают электрофильные двойные связи, к которым могут быть добавлены нуклеофильные группы, такие как тиолы, для образования, например, тиоэфирных связей. Эти группы включают малеимиды, винилсульфоны, винилпиридин, акрилаты, метакрилаты и акриламиды. Другие группы содержат уходящие группы, которые могут быть замещены нуклеофилом; они включают хлорэтилсульфон, пиридилдисульфиды (которые включают расщепляемую 8-8 связь), иодоацетамид, мезилат, тозилат, тиосульфонат и трезилат. Эпоксиды вступают в реакцию путем размыкания кольца, которое осуществляет нуклеофил, с образованием, например, сложноэфирной или аминной связи. Реакции, включающие комплементарные реакционноспособные группы, такие как те, что были отмечены выше, на олигомере и малой молекуле, используются для приготовления конъюгатов данного изобретения.
Например, получение иллюстративного олигомерного конъюгата ретиноевой кислоты подробно
- 20 015333 описано в примере 1. Вкратце, малая молекула - ретиноевая кислота - которая содержит реакционноспособную карбоксильную группу, соединяется с аминоактивированным олигомерным этиленгликолем, чтобы получить конъюгат, имеющий амидную группу, ковалентно связывающую малую молекулу с олигомером. Описывается ковалентное связывание ПЭГ 3-мера (что означает олигомерный этиленгликоль, имеющий 3 мономерных подгруппы этиленгликоля), ПЭГ 7-мера и ПЭГ 11-мера с ретиноевой кислотой.
Далее, приготовление олигомер-конъюгата налоксона описывается в примере 4. В этом показательном синтезе, вслед за защитой ароматической гидроксильной группы, кетогруппа в налоксоне восстанавливается до соответствующего гидроксила, который затем присоединяется к олигомерному этиленгликольгалиду с образованием конъюгата малой молекулы с эфирной (-О-) связью. Любопытно, что в данном примере восстановление гидроксильной группы в налоксоне привело к образованию двух стереоизомеров, отличающихся ориентацией гидроксильной группы. Соответствующие олигомерные конъюгаты были приготовлены и выделены, и было продемонстрировано, что они обладают в некоторой степени отличными характеристиками, которые будут обсуждаться более подробно ниже. Это представляет другую особенность данного изобретения, а именно: приготовление/выделение отдельных изомеров конъюгатов олигомеров-малых молекул и способы их использования.
Конъюгаты настоящего изобретения демонстрируют пониженную скорость пересечения биологического барьера, как было описано ранее. Более того, конъюгаты сохраняют, по меньшей мере, приблизительно 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70% или более биоактивности немодифицированного исходного низкомолекулярного лекарственного вещества. Для определенного низкомолекулярного лекарственного вещества, имеющего более одного реакционно-способного места, подходящего для модификации, может возникнуть необходимость в выполнении молекулярного моделирования или ίη νΐνο или ίη νίΐΓΟ количественном определении биологической активности, чтобы оценить биологическую активность полученного конъюгата и определить место, наиболее подходящее для ковалентного связывания с олигомером. См. пример иллюстративных данных по биоактивности в табл. VI, в которой приведены различные олигомерные конъюгаты налоксона или производного налоксона, 6-ИН2-налоксона и 6-ОН-налоксола. В данном исследовании, переменные включали место химической модификации на исходном лекарственном веществе, вид ковалентной связи, стереохимию и размер олигомера, ковалентно связанного с функциональной группой лекарственной части. Как можно увидеть из данных, биоактивность конъюгатов варьировалась от приблизительно 5% до приблизительно 35% биоактивности исходного лекарственного вещества.
Было открыто, что стабильное ковалентное связывание малых водорастворимых олигомеров с перорально биодоступными низкомолекулярным лекарственным веществами способно в значительной степени изменить свойства этих молекул, делая их, таким образом, более клинически эффективными. Конкретнее, ковалентное связывание монодисперсных олигомеров, таких как олигоэтиленоксид, является эффективным для снижения или, в некоторых случаях, устранения переноса лекарственного вещества через гематоэнцифалический барьер, что затем выражается в значительном снижении побочных эффектов, связанных с центральной нервной системой. Выбор олигомера оптимального размера обычно выполняется, как описано ниже.
Во-первых, олигомер, полученный из монодисперсного или бимодального водорастворимого олигомера, конъюгируется с низкомолекулярным лекарственным веществом. Предпочтительно, лекарственное вещество является биодоступным при пероральном введении и само по себе демонстрирует некоторую скорость пересечения биологической мембраны. Далее, способность конъюгата пересекать биологическую мембрану определяется с использованием подходящей модели и сравнивается с моделью немодифицированного исходного лекарственного вещества. Если результаты оказываются подходящими, а именно, если, например, скорость пересечения существенно снижается, то далее оценивается биоактивность конъюгата. Хороший конъюгат в соответствии с данным изобретением является биоактивным, так как связь является гидролитически стабильной и не приводит к высвобождению немодифицированного лекарства после его введения. Таким образом, лекарство в конъюгированной форме должно быть биоактивным и предпочтительно сохранять значительную степень биоактивности по сравнению с исходным лекарственным веществом, т.е. больше чем приблизительно 30% биоактивности исходного лекарства, или даже более предпочтительно более чем приблизительно 50% биоактивности исходного лекарства.
Затем вышеперечисленные этапы повторяются с использованием олигомеров того же самого мономерного типа, но обладающих различным количеством подгрупп.
Так как желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) ограничивает перенос пищи и лекарств из пищеварительной полости в кровь и лимфу, он представляет еще один барьер, в отношении которого должен быть испытан конъюгат. Однако барьер ЖКТ является таким барьером, который не должен препятствовать конъюгату, если тот предназначен для перорального приема и системной доставки. Барьер ЖКТ состоит из непрерывных слоев клеток кишечника, плотно соединенных в кишечном эпителии.
Для каждого конъюгата, чья способность пересекать биологическую мембрану снижается по сравнению с неконъгированным низкомолекулярным лекарственным веществом, впоследствии оценивается пероральная биодоступность. Основываясь на этих результатах, то есть, основываясь на последовательном добавлении увеличивающегося количества дискретных мономеров к некоторой малой молекуле в
- 21 015333 определенном положении или расположении на малой молекуле, возможно определить размер олигомера, который наиболее эффективен для получения конъюгата, обладающего оптимальным балансом между снижением пересечения биологической мембраны, биодоступностью при пероральном введении и биоактивностью. Малый размер олигомеров делает такой скрининг возможным и позволяет исследователю эффективно получить нужные свойства конечного конъюгата. Производя небольшие поэтапные изменения размера олигомера и применяя подход экспериментального проектирования, исследователь может эффективно определить конъюгат, обладающий благоприятным балансом между снижением скорости пересечения биологической мембраны, биоактивностью и биодоступностью при пероральном введении. В некоторых случаях, связывание олигомера, как описано здесь, является эффективным, чтобы действительно повысить биодоступность лекарственного вещества при пероральном введении.
Например, специалист, обладающий обычными знаниями в данной области техники, с использованием стандартного экспериментирования может определить наиболее подходящий размер молекулы и вид связи для улучшения биодоступности при пероральном введении, вначале приготовив серию олигомеров с различным весом и функциональными группами, а затем получая необходимые профили клиренса путем введения конъюгатов пациенту и периодического отбора образцов крови и/или мочи. Как только будет получена серия профилей клиренса для каждого исследуемого конъюгата, может быть определен подходящий конъюгат.
Для изучения переноса перорального вводимого лекарственного вещества также могут использоваться экспериментальные модели на животных (грызунах или собаках). Кроме этого, методы, которые не относятся к методам ίη νίνο, включают иссеченную ткань вывернутого пищеварительного канала грызуна и модели культур из монослоя ткани клеток Сасо-2. Эти модели полезны в прогнозировании биодоступности пероральных препаратов.
Настоящее изобретение также включает фармацевтические препараты, включающие конъюгат согласно настоящему изобретению в сочетании с фармацевтическим наполнителем. Вообще, конъюгат сам по себе будет в твердой форме (например, как осадок), который может смешиваться с подходящим фармацевтическим наполнителем, который может быть либо в твердой, либо в жидкой форме.
Иллюстративные наполнители включают, без ограничения, те наполнители, которые были выбраны из группы, состоящей из углеводов, неорганических солей, противомикробных веществ, антиоксидантов, ПАВ, буферов, кислот, оснований и их комбинаций.
Углеводы, такие как сахар, производный сахар, такой как альдит, альдоновая кислота, эстерифицированный сахар и/или сахарный полимер, могут присутствовать в качестве наполнителей. Конкретные углеводные наполнители включают, например: моносахариды, такие как фруктоза, мальтоза, галактоза, глюкоза, Ό-манноза, сорбоза и т.п.; дисахариды, такие как лактоза, сахароза, трегалоза, целлобиоза и т.п.; полисахариды, такие как рафиноза, мелезитоза, мальтодекстрины, декстраны, крахмалы и т.п.,; и альдиты, такие как маннит, ксилит, мальтит, лактит, ксилит, сорбит (глюцитол), пиранозил сорбит, миоинозитол и т.п.
Наполнитель также может включать неорганическую соль или буфер, такие как лимонная кислота, хлорид натрия, хлорид калия, сульфат натрия, нитрат калия, фосфат натрия одноосновный, фосфат натрия двухосновный и их сочетания.
Также препарат может включать противомикробные вещества для профилактики или ограничения роста микроорганизмов. Неограничивающие примеры противомикробных веществ, подходящих для настоящего изобретения включают бензалкония хлорид, бензетония хлорид, бензиловый спирт, цетилпиридиния хлорид, хлорбутанол, фенол, фенилэтиловый спирт, фенилмеркурнитрат, тимерсол и их сочетания.
Также в препарате может быть представлен антиоксидант. Антиоксиданты используются для предотвращения окисления, препятствуя, таким образом, порче конъюгата или других компонентов препарата. Подходящие антиоксиданты для использования в настоящем изобретении включают, например, аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, гипофосфорную кислоту, монотиоглицерин, пропилгаллат, бисульфит натрия, натрия формальдегид сульфоксилат, пиросульфит натрия и их сочетания.
В качестве наполнителя могут присутствовать ПАВ. Примерные ПАВ включают: полисорбаты, такие как Твин 20 и Твин 80, и плуроники, такие как Е68 и Е88 (оба вида которых производит компания ВАЗЕ, Маунт Олив, штат Нью-Джерси, США); эфиры сорбитана; липиды, такие как фосфолипиды, такие как лецитин и другие фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины (однако предпочтительно не в липосомной форме), жирные кислоты; стероиды, такие как холестерин; и хелатообразующие вещества, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота, цинк и другие подходящие катионы.
Кислоты или основания могут присутствовать в препарате как наполнители. Неограничивающие примеры кислот, которые можно использовать, включают выбранные из группы, состоящей из соляной кислоты, уксусной кислоты, фосфорной кислоты, лимонной кислоты, яблочной кислоты, молочной кислоты, муравьиной кислоты, трихлоруксусной кислоты, азотной кислоты, хлорной кислоты, ортофосфорной кислоты, серной кислоты, фумаровой кислоты и их сочетаний. Примеры подходящих оснований включают, без ограничения, основания, выбранные из группы, состоящей из гидроксида натрия, ацетата
- 22 015333 натрия, гидроксида аммония, гидроксида калия, ацетата аммония, ацетата калия, фосфата натрия, фосфата калия, цитрата натрия, формиата натрия, сульфата натрия, сульфата калия, фумерата калия и их сочетания.
Количество конъюгата в композиции будет варьироваться в зависимости от нескольких факторов, но оптимальной будет терапевтически эффективная доза в случае, когда композиция будет храниться в упаковке с единичной дозой. Терапевтически эффективная доза может быть определена экспериментальным путем посредством повторных приемов повышающихся доз конъюгата, чтобы определить, какое количество приводит к желаемому клиническому результату.
Количество каждого отдельного наполнителя в композиции будет зависеть от активности наполнителя и конкретных требований к композиции. Обычно оптимальное количество какого-либо отдельного наполнителя определяется посредством стандартного экспериментирования, т.е., с помощью приготовления смесей, содержащих разное количество наполнителя (которое варьируется от низкого до высокого), изучения стабильности и других показателей, а затем определения диапазона, в котором достигаются оптимальные характеристики без выраженных отрицательных эффектов.
В целом, однако, наполнитель будет присутствовать в композиции в количестве примерно от 1 до примерно 99 вес.%, предпочтительно от приблизительно 5 до 98 вес.%, более предпочтительно от примерно 15 до 95 вес.% наполнителя, наиболее предпочтительно в концентрациях мене чем 30 вес.%.
Вышеупомянутые фармацевтические наполнители наряду с другими наполнителями описаны в Яеттд1оп: ТНе 8с1епсе & Ргасйсе о£ Рйагтасу, 19-е изд., А1Шат8 & А1Шат8, (1995), РйуЦщап'к Эе^к ЯеГегепсе, 52-е изд., Меб1са1 Есопоткк, Моп1уа1е, N1 (1998), и К1ЬЬе, А.Н., НанбЬоок о£ Ркагтасеийса1 Ехс1р1епк, 3-е издание, Атепсап Ркагтасеийса1 А^оаайоп, АаЛипдЮп, Ό.Ο., 2000.
Фармацевтическая композиция может производиться в любой форме, и изобретение в этом отношении не ограничено. Типичные препараты наиболее предпочтительны в форме, удобной для перорального приема, такой как таблетка, каплета, капсула, гелевая капсула, пастилка, дисперсия, суспензия, раствор, эликсир, сироп, лепешка, трансдермальный пластырь, спрей, суппозиторий и порошок.
Пероральные дозировочные формы являются предпочтительными для тех конъюгатов, которые активны при пероральном введении, и включают таблетки, каплеты, капсулы, гелевые капсулы, суспензии, растворы, эликсиры и сиропы, а также могут содержать большое количество гранул, горошин, порошков или властинок, которые необязательно заключаются в капсулу. Такие дозировочные формы приготовляются с использованием стандартных методов, хорошо известных специалистам, работающим в сфере технологии приготовления фармацевтических композиций, и описаны в соответствующей литературе.
Например, таблетки и каплеты могут производиться с соблюдением стандартных процедур технологии фармацевтического производства и на обычном оборудовании. Методы прямого прессования и грануляция предпочтительны при производстве таблеток или каплет, которые содержат описанные здесь конъюгаты. Кроме конъюгата таблетки и каплеты обычно будут содержать инертные, фармацевтически приемлемые носители, такие как связующие вещества, смазочные вещества, вещества, вызывающие дезинтеграцию, наполнители, стабилизаторы, ПАВы, красители и т.п. Связующие вещества используются, чтобы придать таблетке связующие свойства и гарантировать, таким образом, что таблетка останется неповрежденной. Подходящие связующие вещества включают, но не ограничиваются перечисленным: крахмал (включая кукурузный крахмал и прежелатинизированный крахмал), желатин, сахар (включая сахарозу, глюкозу, декстрозу и лактозу), полиэтиленгликоль, воск и природные или синтетические камеди, например, акациевый альгинат натрия, поливинилпирролидон, полимеры на основе целлюлозы (включая гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, этилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу и т.п.) и вигум. Смазочные вещества используются для того, чтобы облегчить промышленное производство таблеток, способствуя текучести порошка и предупреждая разрушение частиц (т. е., дробление частиц) при прессовании. Полезными смазывающими веществами являются стеарат магния, стеарат кальция и стеариновая кислота. Вещества, вызывающие дезинтеграцию, используются для того, чтобы ускорить разрушение таблетки, и обычно это крахмалы, глины, целлюлозы, альгины, камеди или сшитые полимеры. Наполнители включают, например, такие вещества, как диоксид кремния, диоксид титана, окись алюминия, тальк, каолин, порошкообразная целлюлоза и микрокристаллическая целлюлоза, а также растворимые вещества, такие как маннит, мочевина, сахароза, декстроза, хлорид натрия и сорбит. Стабилизаторы, как хорошо известно специалистам, используются, чтобы подавить или замедлить реакции распада в лекарственном веществе, которые включают, к примеру, окислительные реакции.
Капсулы также являются предпочтительными пероральными дозировочными формами, и в этом случае композиция, содержащая конъюгат, может быть заключена в капсулу в виде жидкости или геля (например, в случае с желатиновыми капсулами), или твердого вещества (включая такие твердые частицы, как гранулы, горошины, порошки или пеллеты). Подходящими видами капсул являются твердые и мягкие капсулы, которые обычно делают из желатина, крахмала или целлюлозных материалов. Твердые желатиновые капсулы, состоящие из двух частей, предпочтительно запечатываются, например, с помощью желатиновых полосок или подобным образом.
Сюда же включаются формы для парентерального введения, главным образом, в сухом виде (обыч
- 23 015333 но, как лиофилизат или осадок, который может быть в форме порошка или брикета), а также формы, приготовленные для инъекционного введения, которые обычно являются жидкостями и требуют этапа восстановления из сухой формы исходного препарата. Примеры подходящих разбавителей для восстановления твердых форм до введения включают бактериостатическую воду для инъекций, 5%-й раствор декстрозы в воде, физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера, раствор хлорида натрия, стерильную воду, деионизированную воду и их сочетания.
В некоторых случаях композиции, предназначенные для парентерального введения, могут производиться в форме неводных растворов, суспензий или эмульсий, при этом каждая форма обычно является стерильной. Примерами неводных растворителей или разбавителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое и кукурузное масло, желатин и инъекционные органические эфиры, такие как этилолеат.
Описанные здесь исходные формы также могут содержать вспомогательные средства, такие как консерванты, увлажняющие, эмульгирующие и диспергирующие вещества. Форма становится стерильной благодаря включению стерилизующего вещества, фильтрации через фильтры, удерживающие бактерии, облучению или нагреванию.
Также конъюгат может вводиться через кожу с помощью обычного трансдермального пластыря или другой системы трансдермального введения лекарственного вещества, где конъюгат содержится внутри слоистой структуры, которая служит прикрепляемым к коже средством введения лекарства. В такой структуре конъюгат находится в слое или резервуаре, который находится под верхним защитным слоем. Слоистая структура может содержать один резервуар или множество.
Также изобретение предлагает способ приема конъюгата, как описано здесь, пациентом, страдающим состоянием, которое реагирует на лечение с использованием данного конъюгата. Способ содержит введение, обычно пероральное, терапевтически эффективной дозы конъюгата (предпочтительно предусмотренную как часть фармацевтического препарата). Рассматриваются также и другие способы введения, такие как пульмонарный, назальный, буккальный, ректальный, сублингвальный, трансдермалъный и парентеральный. Для целей настоящего изобретения термин парентеральный включает подкожное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшное, внутрисердечное, интратекальное и внутримышечное введение.
В тех случаях, когда используется парентеральное введение, может быть необходимо применение олигомеров несколько большего размера, чем описанные ранее, с молекулярным весом от 500 до 30 кДа (например, с молекулярным весом приблизительно 500, 1000, 2000, 2500, 3000, 5000, 7500, 10000, 15000, 20000, 25000, 30000 или даже больше).
Способ введения может использоваться для лечения любого состояния, которое может быть предотвращено или излечено благодаря приему конкретного конъюгата. Специалистам, обладающим обычными знаниями в данной области техники, будет понятно, какие состояния конкретный конъюгат может эффективно лечить. Фактическая доза, которая должна вводиться, зависит от возраста, массы тела и общего состояния пациента, а также от тяжести состояния, которое лечится, решения врача и вводимого конъюгата. Терапевтически эффективные количества известны специалистам в данной отрасли и/или описываются в соответствующей справочной литературе. В целом, терапевтически эффективная доза будет варьироваться от приблизительно 0,001 мг до 100 мг, предпочтительно в дозах от 0,01 мг/день до 75 мг/день и более предпочтительно в дозах от 0,10 мг/день до 50 мг/день.
Разовая дозировка определенного конъюгата (снова предпочтительно предусмотренная как часть фармацевтического препарата) может вводиться в самых разных схемах дозирования, в зависимости от решения лечащего врача, потребностей пациента и т.д. Конкретные планы дозирования будут известны специалистам, обладающим обычными познаниями в данной области техники, или могут быть определены экспериментально с использованием стандартных методов. Типичные схемы дозирования включают, без ограничения, прием пять раз в день, четыре раза в день, три раза в день, два раза в день, один раз в день, три раза в неделю, два раза в неделю, раз в неделю, два раза в месяц, один раз в месяц и любые их сочетания. Как только будет достигнут клинический результат, введение композиции прекращается.
Одним из преимуществ приема конъюгатов, описанных в данном изобретении, является то, что может быть достигнуто снижение пресистемного метаболизма по сравнению с исходным лекарственным веществом. См., например, подтверждающие этот факт результаты, приведенные в примере 8. Подобный результат является благоприятным для многих лекарств, принимаемых перорально, которые в значительной степени метаболизируются при прохождении через пищеварительный канал. Таким образом, клиренс конъюгата может модулироваться с помощью отбора молекулярного размера олигомера, связи и расположения ковалентного связывания, обеспечивая желаемые свойства клиренса. Специалист, обладающий обычными познаниями в данной области техники, сможет определить идеальный молекулярный размер олигомера, основываясь на изложенной здесь информации. Предпочитаемые снижения пресистемного метаболизма для конъюгата по сравнению с соответствующим неконъюгированным низкомолекулярным лекарственным вещемством включают: по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 30; по меньшей мере приблизительно 40; по меньшей мере приблизительно 50%; по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере при
- 24 015333 близительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80% и по меньшей мере приблизительно 90%.
Таким образом, изобретение предлагает способ снижения метаболизма активного вещества. Способ включает следующие этапы: предоставление монодисперсных или бимодальных конъюгатов, каждый из которых состоит из части молекулы, полученной из низкомолекулярного лекарственного вещества, ковалентно связанной посредством стабильной связи с водорастворимым олигомером, причем данный конъюгат демонстрирует пониженную скорость метаболизма по сравнению со скоростью метаболизма низкомолекулярного лекарственного вещества, не связанного с водорастворимым олигомером; и введение конъюгата пациенту. Обычно, введение осуществляется посредством одного вида введения, выбранного их группы, состоящей из перорального введения, трансдермального введения, буквального введения, введения через слизистую оболочку, внутривагинального введения, ректального введения, парентерального введения и пульмонального введения.
Будучи полезны в снижении многих видов метаболизма (включая и метаболизм фазы I и фазы II), конъюгаты особенно полезны в ситуациях, когда низкомолекулярные лекарственные вещества метаболизируются ферментами печени (например, одним или несколькими изоформами цитохрома Р450) и/или одним или несколькими ферментами кишечника.
Экспериментальная часть
Необходимо понять, что хотя данное изобретение было описано в связи с предпочтительными и конкретными вариантами его осуществления, вышеизложенные описания, а также примеры, которые следуют после них, предназначены для того, чтобы проиллюстрировать, но не ограничить объем притязаний изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации в рамках объема притязаний изобретения будут очевидны для специалистов, обладающих знаниями в той области техники, к которой относится данное изобретение.
Все химические реагенты, которые упоминаются в прилагаемых примерах, являются коммерчески доступными, если не оговорено иное. Приготовление иллюстративных мономолекулярных ПЭГ-меров описано в примере 9. Олиго(этиленгликоль)метиловые эфиры, использованные в примерах ниже, были монодисперсными и хроматографически чистыми, как было определено с помощью обращеннофазной хроматографии.
Все данные, полученные с помощью 'ЯМР (ядерно-магнитного резонанса), были получены на ЯМР-спектрометре с частотой 300 МГц производства компании Вгикег. Список конкретных соединений, а также источников этих соединений, приведен ниже.
2-Бромоэтил диметиловый эфир, 92%, А1бпс11;
1-бромо-2-(2-метоксиэтокси)этан, 90%, А1бпс11;
СН3(ОСН2СН2)3Вт был получен из СН ;(ОСН;СН;);ОН; три(этиленгликоль) монометиловый эфир, 95%, Л1бпс11; ди(этиленгликоль), 99%, Л1бпс11;
три(этиленгликоль), 99%, Л1бпс11; тетра(этиленгликоль), 99%, Л1бпс1т пента(этиленгликоль), 98%, А1бпс11; гекса(этиленгликоль), 97%, А1бпс11;
гидрид натрия, 95% сухой порошок, Л1бпс11;
метансульфонил хлорид, 99%, АСЕ; тетрабутиламмонийбромид, 81дта.
Пример 1. Синтез СН3(ОСН2СН2)3-ИН-13-цис-ретинамида (ПЭГ3-13-цис-ВА).
Получали ПЭГ3-13-цис-КА. Схема синтеза приведена ниже.
0,1085 г СН3(ОСН2СН2)3-ИН2 (0,6656 ммоль), 0,044 г 1-гидроксибензилтриазола (ТОБТ, 0,3328 ммоль) и 0,200 г 13-цис-ретиноевой кислоты (13-цис-КА, 0,6656 ммоль) растворяли в 10 мл бензола. К этому раствору добавляли 0,192 г 1,3-дициклогексилкарбодиимида (ДЦК, 0,9318 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали, а растворитель удаляли с использованием ротационного выпаривания. Неочищенный продукт далее высушивали под вакуумом, растворяли в 20 мл дихлорметана и органическую фазу дважды промывали с использованием 15 мл деионизированной воды. Органическую фазу высушивали над Ыа28О4, фильтровали, а растворитель удаляли с помощью ротационного выпаривания. К извлеченному продукту добавляли 2 капли дихлорметана, содержащие 50 промиль бутилированного гидрокситолуола, и продукт вы
- 25 015333 сушивали под вакуумом. Выход 0,335 г. 1 Н-ЯМР (диметилсульфоксид): δ 1,02 (синглет, 2 СН3), 1,67 (синглет, СН3), 3,5 (широкий мультиплет, ПЭГ), 6,20 (т, 3Н).
Пример 2. Синтез СН3(ОСН2СН2)7-NΗ-13-цис-ретинамида (ПЭГ7-13-цис-КА).
0,2257 г СН3(ОСН2СН2)7-NΗ2 (0,6656 ммоль), 0,044 г 1-гидроксибензилтриазола (0,3328 ммоль) и 0,200 г 13-цис-ретиноевой кислоты (0,6656 ммоль) растворяли в 10 мл бензола. К этому раствору добавляли 0,192 г 1,3-дициклогексилкарбодиимида (0,9318 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали, а растворитель удаляли с использованием ротационного выпаривания, продукт высушивали в вакууме. Продукт растворяли в 20 мл дихлорметана, и раствор дважды промывали 15 мл деионизированной воды. Органическую фазу высушивали над №-ь8О4. фильтровали, а растворитель удаляли с помощью ротационного выпаривания. К извлеченному продукту добавляли 2 капли дихломертана, содержащего 50 промиль бутилированного гидрокситолуола, и продукт высушивали в вакууме. Выход 0,426 г. 1Н-ЯМР (ДМСО): δ 1,01 (8, 2 СН3), 1,68 (8, СН3), 3,5 (Ьг т, ПЭГ), 6,20 (т, 3Н).
СН3-(ОСН2СН2)5-NΗ-13-цис-ретинамид (ПЭГ5-13-цис-К) получали аналогично с использованием данной процедуры, за исключением того, что СН3(ОСН2СН2)5-NΗ2 (т ПЭГ5-NΗ2) использовали вместо С11;(ОС11;С11;) -ΝΙΡ.
Пример 3. Синтез СН3-(ОСН2СН2)11-NΗ-13-цис-ретинамида (ПЭГп-13-цис-КА).
0,349 г СΗ3(ΟСΗ2СΗ2)11-NΗ2 (0,6789 ммоль), 0,044 г 1-гидроксибензилтриазола (0,3328 ммоль) и 0,204 г 13-цис-ретиноевой кислоты (0,6789 ммоль) растворяли в 10 мл бензола. К этому раствору добавляли 0,192 г 1,3-дициклогексилкарбодиимида (0,9318 ммоль) и реакционную смесь перемешивали ночь при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали, а растворитель отгоняли с использованием ротационного выпаривания. Продукт высушивали в вакууме и растворяли в 20 мл дихлорметана. Раствор дважды промывали 15 мл деионизированной воды, а органическую фазу высушивали над №28О4. Раствор фильтровали, а растворитель отгоняли с использованием ротационного выпаривания. К извлеченному продукту добавляли 2 капли дихлорметана, содержащего 50 промиль бутилированного гидрокситолуола, продукт высушивали в вакууме. Выход 0,541 г. 1Н-ЯМР (ДМСО): δ 1,01 (8, 2 СН3), 1,68 (8, СН3), 3,5 (Ьг т, ПЭГ), 6,20 (т, 3Н).
Пример 4. Синтез ПЭГ3-3-налоксола.
Структурная формула налоксола, иллюстративного низкомолекулярного лекарственного вещества, показана ниже.
Данная молекула была получена (с защищенной гидроксильной группой) в рамках большей схемы синтеза, описанной в примере 5.
Пример 5. Синтез а,в-6-СН3-(ОСН2СН2)1-налоксола (а,в-ПЭГ1^а1).
Получали а,3-ПЭГ1-налоксол. Схема данного синтеза представлена ниже.
'РЕЭ<п а эпимер 4) β эпимер
5. А. Синтез 3-МЕМ-налоксона.
- 26 015333
Диизопропилэтиламин (390 мг, 3,0 ммоль) был добавлен к раствору налоксона -НС1-2Н2О (200 мг, 0,50 ммоль) в СН2С12 (10 мл) при перемешивании. Метоксиэтилхлорид (МЕМС1, 250 мг, 2,0 ммоль) был затем добавлен по каплям к вышеупомянутому раствору. Раствор перемешивали при комнатной температуре под Ν2 в течение ночи.
Неочищенный продукт анализировали с помощью ВЭЖХ, которая показала, что 3-МЕМ-Оналоксон (1) образовался с 97% выходом. Растворители удаляли с помощью ротационного выпаривания с получением липкого масла.
5.В. Синтез смеси α и β эпимеров 3-МЕМ-налоксола (2).
мл 0,2 Ν ΝαΟΗ добавляли к раствору 3-МЕМ-налоксона (1) (полученного в 5.А. выше, и использованного без дальнейшей очистки) в 5 мл этанола. К этому добавляли раствор ΝαΒΗ4 (76 мг, 2,0 ммоль) в воде (1 мл) по каплям. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Этанол удаляли ротационным выпариванием, за которым следовало добавление раствора 0,1 N НС1, чтобы удалить избыток ΝαΒΗ4 и довести значение рН до 1. Раствор промывали СНС13, чтобы удалить избыток метоксиэтилхлорида и его производных (3x50 мл), затем добавляли К2СО3, чтобы поднять значение рН раствора до 8,0. Продукт экстрагировали СНС13 (3x50 мл) и сушили над Να2§Ο4. Растворитель удаляли с помощью выпаривания с получением бесцветного липкого твердого вещества (192 мг, 0,46 ммоль, выход 92% выделенного продукта на основе налоксона -НС1-2Н2О).
ВЭЖХ показала, что данный продукт являлся смесью α и β эпимеров 3-МЕМ-налоксола (2).
5.С. Синтез смеси α и β эпимеров 6-СН3-ОСН2СН2-О-3-МЕМ-налоксола (3а).
№1Н (60% в минеральном масле, 55 мг, 1,38 ммоль) добавляли в раствор 6-гидроксил-3-МЕМналоксола (2) (192 мг, 0,46 ммоль) в диметилформамиде (ДМФ, 6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре под Ν2 в течение 15 мин, после чего добавляли 2-бромоэтил метиловый эфир (320 мг, 2,30 ммоль) в ДМФ (1 мл). Затем раствор перемешивали при комнатной температуре под Ν2 в течение 3 ч.
Анализ методом ВЭЖХ выявил образование смеси α- и в-6-СН3-ОСН2СН2-О-3-МЕМ-налоксола (3) с примерно 88% выхода. ДМФ удаляли с помощью ротационного выпаривания до получения белого липкого твердого вещества. Данный продукт использовался для последующих превращений без дальнейшей очистки.
5. Ό. Синтез смеси α и β эпимеров 6-СН3-ОСН2-СН2-налоксола (4).
Неочищенный α- и β-6-СН3-ОСН2СН2-О-3-МЕМ-налоксол (3) растворяли в 5 мл СН2С12 с образованием непрозрачного раствора, к которому добавляли 5 мл трифторуксусной кислоты (ТФК). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Окончание реакции определялось на основании анализа с помощью ВЭЖХ. СН2С12 удаляли ротационным выпариванием, после чего добавляли 10 мл воды. К данному раствору добавляли достаточное количество К2СО3, чтобы удалить избыток ТФК и довести значение рН до 8. Затем раствор был экстрагирован СНС13 (3x50 мл), а экстракты объединены и далее экстрагировались 0,1 Ν НС1 раствором (3x50 мл). Значение рН полученной водной фазы было доведено до 8 добавлением К2СО3, после чего последовало дальнейшее экстрагирование СНС13 (3x50 мл). Объединенный органический слой затем высушивали Να2§Ο4. Растворители удаляли с получением бесцветного липкого твердого вещества.
Это твердое вещество было очищено посредством двукратного прохождения через колонку с силикагелем (2x30 см) с использованием СНС13/СН3ОН (30:1) в качестве элюента с образованием липкого твердого вещества. Очищенный продукт определяли посредством 1 Н-ЯМР как смесь α- и β-эпимеров 6СН3-ОСН2СН2-налоксола (4), содержащую приблизительно 30% а эпимера и приблизительно 70% β эпимера [100 мг, 0,26 ммоль, 56% выход выделенного на основе 6-гидроксил-3-МЕМ-налоксола (2)].
1Н-ЯМР (δ, промиль, СЭС13): 6,50-6,73 (2 Н, мультиплет, ароматический протон налоксола), 5,78 (1 Н, мультиплет, олефиновый протон налоксона), 5,17 (2 Н, мультиплет, олефиновые протоны налоксола), 4,73 (1 Н, дублет, С5 протон α налоксола), 4,57 (1 Н, дублет, С5 протон β налоксола), 3,91 (1Н, мультиплет, С6 протон α налоксола), 3,51-3,75 (4 Н, мультиплет, ПЭГ), 3,39 (3 Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ, α эпимер), 3,36 (3 Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ, β эпимер), 3,23 (1 Н, мультиплет, С6 протон β налоксола), 1,46-3,22 (14 Н, мультиплет, протоны налоксола).
Пример 6. Синтез 6-СН3-(ОСН2СН2)3-налоксола (оф-ПЭГз^аГ).
6. А. Синтез смеси α и β эпимеров 6-СН3-(ОСН2СН2)3-О-3-МЕМ-налоксола.
№1Н (60% в минеральном масле, 38 мг, 0,94 ммоль) добавляли к раствору 3-МЕМ-налоксола [98 мг, 0,24 ммоль из примера 5, показанный на схеме как (2)] в диметилформамиде (ДМФ, 8 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в атмосфере Ν2 в течение 15 мин, затем добавляли раствор СН3(ОСН2СН2)3Вг (320 мг, 1,41 ммоль) в ДМФ (1 мл). Полученный раствор нагревали под Ν2 в масляной бане в течение 2 ч.
Анализ методом ВЭЖХ выявил, что необходимый продукт, смесь α- и β-6-СН3-(ОСН2СН2)3-О-3МЕМ-налоксола, был образован приблизительно с 95% выходом. ДМФ удаляли ротационным выпариванием для получения липкого белого твердого вещества. Неочищенный продукт использовали без даль
- 27 015333 нейшей очистки.
6.В. Синтез смеси α и β эпимеров 6-СН3-(ОСН2СН2)3-О-налоксола (а,в-ПЭГ3-№1).
Неочищенная смесь α- и в-6-СН3-(ОСН2СН2)3-О-3-МЕМ-налоксола из п.6.А выше была растворена в 3 мл СН2С12 с образованием мутного раствора, к которому добавляли 4 мл трифторуксусной кислоты (ТФК). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Анализ методом ВЭЖХ выявил, что реакция завершилась. Растворитель СН2С12 удаляли ротационным выпариванием. К оставшемуся раствору добавляли 5 мл воды, а затем К2СО3, чтобы устранить избыток ТФК и довести значение рН до 8. Затем раствор экстрагировали СНС13 (3x50 мл). Экстракты СНС13 объединяли и экстрагировали 0,1 N НС1 раствором (3x50 мл). Значение рН оставшейся водяной фазы было снова доведено до 8 посредством добавления К2СО3, за чем последовало экстрагирование СНС13 (3x50 мл). Объединенные органические экстракты затем были высушены над №28О4. После удаления растворителей было получено бесцветное липкое твердое вещество.
Это твердое вещество было очищено посредством двукратного прохождения через колонку с силикагелем (2x30 см) с использованием СНС13/СН3ОН (30:1) в качестве элюента. Очищенный продукт, смесь α и β эпимеров 6-СН3-(ОСН2СН2)3-О-налоксола, содержащую приблизительно равные количества α и β эпимеров, была охарактеризована с помощью ЯМР. (46 мг, 0,097 ммоль, 41% выхода выделенного продукта на основе 6-гидроксил-3-МЕМ-О-налоксона). 'Н-ЯМР (δ, промиль, СИС13): 6,49-6,72 (2 Н, мультиплет, ароматический протон налоксола), 5,79 (1 Н, мультиплет, олефиновый протон налоксола), 5,17 (2 Н, мультиплет, олефиновые протоны налоксола), 4,71 (1 Н, дублет, С5 протон а налоксола), 4,52 (1 Н, дублет, С5 протон β налоксола), 3,89 (1Н, мультиплет, С6 протон налоксола), 3,56-3,80 (12 Н, мультиплет, ПЭГ), 3,39 (3 Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ, α эпимер), 3,38 (3 Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ, β эпимера), 3,22 (1 Н, мультиплет, С6 протон β налоксола), 1,14-3,12 (14 Н, мультиплет, протоны налоксола).
6.С. Разделение α-6-СН3-(ОСН2СН2)3-О-налоксола и β-6-СН3-(ОСН2СН2)3-О-налоксола.
Приблизительно 80 мг неочищенной смеси α и β эпимеров ПЭГ3-№11 растворяли в минимальном количестве СНС13 и загружали в колонну с силикагелем (2x30 см), приготовленную с использованием СНС13. Колонну осторожно элюировали смесью СНС13/СН3ОН (60:1). Чистый α-ПЭГ3-Nа1 был первым элюированным веществом (26 мг, 33% выделенный выход), за которым последовал чистый β-ПЭГ3-Nа1 (30 мг, 38% выделенный выход). Оба соединения были бесцветными липкими твердыми веществами. αПЭГ3^а1, 1 Н-ЯМР (δ, промиль, СИС13): 6,49-6,73 (2 Н, двойной дублет, ароматический протон налоксола), 5,79 (1 Н, мультиплет, олефиновый протон налоксола), 5,17 (2 Н, триплет, олефиновые протоны налоксола), 4,71 (1 Н, дублет, С5 протон налоксола), 3,81 (1Н, мультиплет, С6 протон налоксола), 3,57-3,80 (12 Н, мультиплет, ПЭГ), 3,40 (3 Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ), 1,13-3,12 (14 Н, мультиплет, протоны налоксона). β-ПЭГ3-Nа1, 1 Н-ЯМР (δ, промиль, СИС13): 6,54-6,72 (2 Н, двойной дублет, ароматический протон налоксола), 5,77 (1Н, мультиплет, олефиновый протон налоксола), 5,15 (2Н, триплет, олефиновые протоны налоксола), 4,51 (1Н, дублет, С5 протон налоксола), 3,58-3,78 (12 Н, мультиплет, ПЭГ), 3,39 (3Н, синглет, метоксильные протоны ПЭГ), 3,20 (1 Н, мультиплет, С6 протон налоксола), 1,30-3,12 (13 Н, мультиплет, протоны налоксола).
α, β-6-СН3-(ОСН2СН2)5-О-налоксол (α, β-РЕ65-Nа1) и α,β-6-СН3-(ОСН2СН2)7-О-налоксол (α,βРЕС--№11) были приготовлены аналогичным способом, и их отдельные изомеры были разделены и выделены.
Пример 7. Биодоступность при пероральном введении ПЭГ-меров цис-ретиноевой кислоты и налоксола.
Самки крыс линии 8ргадие Оа\\'1еу® (весом 150-200 г) были получены из лаборатории Наг1ап ЬаЬ§. В наружные яремные вены крыс были введены канюли, а затем животным дали возможность акклиматизироваться в течение 72 ч до того, как начнется исследование. Ночью животных не кормили (день -1), но воду они могли пить свободно.
Утром того дня, в который начиналось введение препарата (день 0), каждую крысу взвесили и в канюли ввели гепарин (1000 ед/мл). После этого с помощью питательной трубки животным перорально ввели (через желудочный зонд) водные составы, которые содержали либо ПЭГ-илированное либо чистое лекарственное вещество. Доза определялась в мг/кг в зависимости от веса крысы. Общий объем дозы не превышал 10 мл/кг. Через определенные промежутки времени (1, 2 и 4 ч) через канюлю отбирались анализы крови (приблизительно 1,0 мл), помещались в пробирки для центрифуги объемом 1,5 мл, в которых уже находилось 14 мкл гепарина, содержимое размешивалось и центрифугировалось, чтобы отделить плазму крови. Образцы плазмы замораживали (<-70°С) до проведения количественного анализа. Образцы плазмы очищали с использованием осадительного метода и анализируемое вещество экстрагировали и подвергали количественному анализу с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ЖХ) с масс-селективным детектором (МСД). Стандартные образцы были приготовлены таким же образом, чтобы построить калибровочную кривую, из которой концентрация неизвестных образцов могла бы быть экстраполирована (см. результаты в табл. II) Если это было целесообразно, в анализе исполь
- 28 015333 зовался внутренний стандарт.
Избранные свойства исследуемых соединений (такие как молекулярный вес и растворимость) подытожены в табл. I. Ферментсвязывающая активность ίπ-νίίτο некоторых исследуемых соединений также приводится как значения 1С50 в табл. 1.
Таблица I. Некоторые свойства исследуемых соединений
Лекарственное вещество Молекулярный вес Растворимость (мкМ) 1С50 (нМ)*
13-цис-ретиноевая кислота (исходный препарат) 300,45 0,47
ПЭГ3-13- цис -КА 445,64 3,13 -
ПЭГ5-13- цис -КА 549,45 растворим -
ПЭГ7-13- цис -КА 621,45 58,3 -
ПЭГц-13-цис-КА 797,45 растворим -
Налоксон ЦаГ (исходный препарат) 327,37 растворим как соль НС1 6,8
а изомер ПЭГ3-Яа1 475,6 растворим 7,3
β изомер ПЭГ3-Ν31 475,6 растворим 31,7
а изомер Π3Γ;-Ν&1 563,0 растворим 31,5
β изомер ПЭГ5-йа1 563,0 растворим 43,3
а изомер ПЭГ;-Иа1 652,0 растворим 40,6
β изомер ПЭГу-ГШ 652,0 растворим 93,9
а изомер ПЭГо-ГЫ 740,0 растворим 64,4
β изомер ПЭГ<;--\'а1 740,0 растворим 205,0
Гидроксизин Нуй (исходный препарат) 374,91 растворим как соль НС1 48,8
ПЭГгНуб 433,0 растворим 70,3
ПЭГ;·,-Нуб 521,0 растворим 105,0
ПЭГ;-Нуб 609,0 растворим 76,7
Лекарственное вещество Молекулярный вес Растворимость (мкМ) 1С50 (нМ)*
Цетиризин Се! (исходный препарат) 388,89 расгворим как соль НС1 77,1
ПЭГ,-Се1 446,0 растворим 61,0
ПЭГ3-Се1 534,0 растворим 86,4
ПЭГ5-Се! 622,0 растворим 128,0
* Связывающая активность мю-опиатных рецепторов для серии соединений налоксона. Связывающая активность Н-1 гистамина для серии соединений гидроксизина и цетиризина.
Были рассчитаны показатели биодоступности при пероральном введении серии соединений ретиноевой кислоты и результаты предоставлены в табл. II. Все данные были нормированы к дозе 6 мг/кг. Профили концентрации в плазме в зависимости от времени для данных соединений приведены на фиг. 1.
- 29 015333
Таблица II
Значения биодоступности серии соединений ретиноевой кислоты при пероральном введении
Лекарственное вещество 13-иис-ретиноевая кислота Средняя концентрация в плазме (нг/мл) ±Стандартное отклонение Кол-во (крыс) 3
1 час 43,3 ± 24,0 2 часа 23,3 ± 14,8
ПЭГз-13-цис-ВА 131,8 ±55,0 158,0±133,0 7
ПЭГ5-13-цис-КД 77,7 ±31,6 61,6 ± 57,1 4
ПЭГ7-13-цис-КА 44,0 ± 13,0 38,7± 4,2 3
ПЭГ и -13-цис-КА 21,8± 7,1 58,2± 43,5 4
Была рассчитана биодоступность каждого изомера в серии соединений налоксона при пероральном введении и приведена в табл. III. Доза для перорального приема налоксона составляла 5 или 10 мг/кг, а дозы для ПЭГ-илированных соединений были нормированы к дозе 1 мг/кг Профили концентрации в плазме в зависимости от времени для данных соединений приведены на фиг 2.
Таблица III
Значения биодоступности серии соединений налоксона
Лекарственное вещество Средняя концентрация в плазме (нг/мл) ±Стандартное отклонение N (крысы)
1 час 2 часа
Налоксон 3,67 ± 1,05 3,11 ±0,46 4
а-ПЭГэ-Иа! 37,28 ± 4,99 14,92 ± 5,27 5
р-ПЭГз-Ш 53,79 ±5,19 22,47 ± 8,78 5
α-Π3Γ5-Νπ1 27,37 ± 10,82 15,38 ±6,65 6
р-ПЭГз-Ш 69,34 ±15,03 36,92 ± 15,84 5
а-ПЭГ7-Па1 40,08 ± 16,61 39,51 ± 9,57 4
3-ПЭГ'7-№1 50,41 ± 36,44 50,08 ± 25,28 4
Вышеуказанные результаты показывают, что ПЭГ-илирование малых, липофильных соединений, таких как ретиноевая кислота и налоксон (свободная основная форма), повышает их растворяемость и биодоступность при пероральном введении. С другой стороны, связывание олигомерных ПЭГ также повышает молекулярный вес исходного соединения (более, чем приблизительно 500 Да), что, в свою очередь, может ограничивать проникновение при пероральном приеме очень водорастворимых соединений, в частности, с повышением длины ПЭГ-мера, как видно, к примеру, в случае ПЭГ7-13-цис-ВА и ПЭГп13-цис-ВА.
Пример 8. Перенос через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) ПЭГ-меров цис-ретиноевой кислоты и налоксона.
Для данных экспериментов использовалась техника перфузии нетронутого головного мозга крысы ίη δίΐιι. чтобы (ΐ) определить проникновение лекарственного вещества через ГЭБ в обычных физиологических условиях, и (ίί) изучить механизмы переноса, такие как пассивная диффузия в сравнении с опосредованным носителем переносом.
Перфузия выполнялась с использованием метода одного момента времени. Вкратце, перфузионная жидкость (перфузат), содержащая исследуемое соединение (соединения) вливалась в крыс через левую внешнюю сонную артерию с постоянной скоростью с помощью инфузионного насоса (20 мл/мин). Скорость перфузионного потока была установлена так, чтобы полностью доставить поток жидкости до мозга при нормальном физиологическом давлении (80-120 мм рт.ст.). Продолжительность перфузии составляла 30 с. Сразу же после перфузии проводили перфузию сосудов мозга на протяжении дополнительных 30 с перфузатом без лекарственного вещества, чтобы удалить остатки лекарства. Насос останавливали и мозг немедленно удаляли из черепа. Образцы левого полушария каждой крысы сначала взвешивались, а затем гомогенизировались на гомогенизаторе Ροϊγίτοη. Четыре (4) мл 20%-го метанола добавляли к каждому
- 30 015333 мозгу крыс для гомогенизации. После гомогенизации измеряли и регистрировали общий объем гомогената.
Измеряемое количество гомогената было разведено органическим растворителем и позднее центрифугировано. Была удалена надосадочная жидкость, выпарена в потоке азота, восстановлена и проанализирована с помощью ЖХ/МС/МС. Определение уровня концентраций лекарственного вещества в гомогенате мозга было выполнено по отношению к калибровочной кривой, построенной с помощью впрыскивания лекарственных веществ в чистый (т. е. без присутствия в нем лекарственных средств) гомогенат мозга. Анализ уровней концентрации в гомогенатах мозга проводили три раза, а значения использовались для расчета скорости накопления в мозге в пмоль на грамм мозга крысы за секунду перфузии.
В каждом перфузионном растворе присутствовал атенолол (целевая концентрация, 50 мкМ), антипирин (целевая концентрация, 5 мкМ) и исследуемое соединение (13-цис-ретиноевая кислота, ПЭГп-13дис-ретиноевая кислота, налоксон или РЕСм-№1) в целевой концентрации 20 мкМ.
Накопление через ГЭБ каждого исследуемого соединения было рассчитано, нормировано и зарегистрировано в табл. IV. Все данные были нормированы к 5 мкМ вводимого раствора при скорости перфузии 20 мл/мин в течение 30 с.
ТаблицаIV
Накопление через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) исследуемых соединений
Лекарственное вещество Нормированная скорость поглощения мозгом в пмоль/г мозг/сек (среднее+стандартное отклонение) Кол-во (крыс)
Атенолол (низкий стандарт) 0,7+0,9 4
Антипирин (высокий стандарт) 17,4 ±5,7 4
13-цис-ретиноевая кислота 102,54+37,31 4
ПЭГз-13-цис-КА 79,65+20,91 4
ПЭГ5-13-цис-КА 58,49+13,44 3
ПЭГ7-1З-ЦИС-ВА 24,15+1,49 3
ПЭГ 11-13 -цис-КА 17,77+1,68 3
Налоксон 15,64+3,54 3
ПЭГз-ΝβΙ 4,67+3,57 3
ПЭГ5-Ыа1 0,96±0,36 3
ПЭГ7-Иа1 (а изомер) 0,94+0,32 3
ПЭГ-.-На! (β изомер) 0,70+0,19 3
Гидроксизин 355,89+59,02 3
ПЭГз-Нуй 131,60+15,84 3
ПЭГ7 П А 12,01+2,97 3
Цетризин 1,37+0,37 3
ПЭГз-Сй 4,32+0,26 3
ПЭГ--СА 1,13+0,05 3
Вышеприведенные результаты показывают, что ПЭГ-илирование липофильного соединения, такого как 13-цис-ретиноевая кислота, может значительно снизить интенсивность поглощения мозгом (ИПМ), например, в четыре раза в случае ПЭГ7-13-цис-КА, и в пять раз в случае ПЭГц-13-цис-КА по сравнению с исходным препаратом 13-цис-ретиноевой кислоты. В случае налоксона, снижение ИПМ в 16 раз было отмечено для ПЭГ5-Ыа1 и ПЭГ7-Ыа1 В отношении гидроксизина, ИПМ была снижена в 29 раз при введении в виде ПЭГ7-Нуб. Относительно минимальное пересечение цетиризином гематоэнцефалического барьера существенно не изменилось при введении в виде ПЭГ 7-Се1.
Таким образом, в целом, неожиданно было открыто, что посредством связывания малых водорастворимых полимеров с низкомолекулярными лекарственными веществами, таким как указанные, можно оптимизировать профиль доставки лекарства посредством модифицирования его способности пересекать биологические мембраны, такие как мембраны, связанные с барьером желудочно-кишечного тракта, гематоэнцефалическим барьером, плацентарным барьером и т. п. Более важным открытием является то, что в случае с лекарствами, которые принимаются перорально, связывание одного или нескольких неболь
- 31 015333 ших водорастворимых полимеров является эффективным для существенного снижения скорости переноса таких препаратов через биологический барьер, например гематоэнцефалический. В идеале, на перенос таких модифицированных препаратов через желудочно-кишечный тракт не оказывается негативного воздействия в значительной степени, хотя перенос через биологический барьер, такой как гематоэнцефалический барьер, в значительной степени подавляется, а биодоступность модифицированного препарата при пероральном введении остается на клинически эффективном уровне.
Данные, полученные в примере 7 и 8, были изображены в виде графика, чтобы сравнить влияние размера ПЭГ на относительную биодоступность при пероральном введении и перенос через ГЭБ 13-цисретиноевой кислоты и налоксона, соответственно. См. фиг. 3-7. На фиг. 3 исследуется воздействие связывания ПЭГ 3-мера, ПЭГ 5-мера, ПЭГ 7-мера и ПЭГ 11-мера с 13-цис-ретиноевой кислотой на ее биодоступность при пероральном введении. На фиг. 4 исследуется воздействие ковалентного связывания этих разных ПЭГ-меров на перенос через гематоэнцефалический барьер 13-цис-ретиноевой кислоты. На фиг. 5 изучается влияние ковалентного связывания ПЭГ 3-мера, ПЭГ 5-мера и ПЭГ 7-мера на биодоступность налоксона при пероральном введении. На фиг. 6 показано влияние ковалентного связывания подобных ПЭГ-меров на пересечение гематоэнцефалического барьера налоксоном. На фиг. 7 показано, что соединения ПЭГ η-Να1 обладали более высокой биодоступностью при пероральном введении, чем налоксон. Как можно увидеть из данных графиков, с повышением размера ПЭГ олигомера, значительно снижается интенсивность поглощения через ГЭБ, тогда как биодоступность при пероральном введении возрастает по сравнению с исходной молекулой.
Разница в биодоступности при пероральном введении между α и β изомерами налоксона может иметь место благодаря различиям в их физико-химических свойствах. Один изомер немного более липофильный, чем другой, что, таким образом, приводит к небольшим отличиям в биодоступности при пероральном введении.
Пример 9. Метаболизм ПЭГ-налоксола Ιη-νίΐΓΟ.
Для изучения влияния ПЭГ-илирования на Фазу II метаболизма (глюкуронидацию) налоксона был разработан метод ίη νίίτο. Процедура предусматривала приготовление раствора НАДФН воспроизводящей системы (НВС). Раствор НВС готовится путем растворения бикарбоната натрия (22,5 мг) в 1 мл деионизированной воды. В данный раствор добавляли В-никотинамидадениндинуклеотидфосфата натриевую соль или НАДФ (1,6 мг), глюкозо-6-фосфат (7,85 мг), глюкозо-6-фосфат дегидрогеназу (3 мкл), уридин 5-дифосфоглукороновой кислоты тринатриевую соль или УДФГК (2,17 мг), 3-фосфоаденозин-5 фосфосульфат литиевую соль или ФАФС (0,52 мг) и 1 М раствора хлорида магния (10 мкл). После того как растворялись все твердые вещества, раствор хранили на ледяной бане.
мМ исходного раствора исследуемого вещества готовили путем растворения навесок налоксона НС1, 6-тПЭГ3-О-налоксона, а-6-тПЭГ5-О-налоксона и а-тПЭГ7-О-налоксона в 1 мл деионизированной воды.
Микросомы самцов крыс линии 8ргадие ба\у1су (0,5 мл при концентрации 20 мг/мл; М00001, полученные от компании Ιη-νίίτο Тсс11по1о81С5. Балтимор, штат Мэриленд) были удалены из морозильной камеры и разморожены на ледяной бане. Сорок мкл микросом печени разводили до 100 мкл 60 мкл деионизированной воды в пробирке. В пробирку добавляли трис-буфер, рН 7,4 (640 мкл) и запас исследуемого образца (10 мкл), чтобы получился объем 750 мкл.
Каждая пробирка и раствор НВС были отдельно помещены на водяную баню с температурой 37°С на 5 мин. В каждую пробирку добавляли раствор НВС (250 мкл). При добавлении НВС в первую пробирку был запущен таймер реакции. Каждый образец (200 мкл) собирали, а затем добавляли перхлорную кислоту (20 мкл) для завершения реакции. Образцы были собраны в следующие моменты времени: 0-2, 20, 40 и 60 мин. Все пробирки закрытыми хранились на ледяной бане.
В каждую пробирку добавляли ацетонитрил (100 мкл), затем пробирки центрифугировались при 3000/д в течение 5 мин. Надосадочную жидкость (230 мкл) отбрасывали, а затем 10 мкл исследуемого раствора подвергали количественному анализу с использованием метода ЖХ/МС. Концентрация исследуемого вещества в каждом образце была измерена и зафиксирована в каждый момент времени.
В табл. V перечислено процентное содержание активного остатка после инкубации с микросомами печени.
Таблица V
Процентное содержание активного остатка после инкубации с микросомами печени
Время (мин) Налоксон а-ПЭГ3-№1 β-ПЭГз- а- ПЭГ5-Ыа1 α-Π3Γ7-Να1
0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
20 47,1 64,8 83,9 84,1 87,4
40 27,6 51,7 75,2 75,6 81,6
60 15,6 45,7 69,6 69,2 76,9
- 32 015333
Принимая во внимание результаты, приведенные в табл. V, можно сделать вывод, что ПЭГилирование олигомером снижает скорость глукоронидации малой молекулы, такой как налоксол. Более того, с увеличением цепочки ПЭГ олигомера, скорость глукоронидации снижается. Кроме этого, сравнение α-изомеров и β-изомеров ПЭГ3-налоксола показывает, что β-изомер является плохим субстратом для цитохромных изоферментов Р450 в выделенных микросомах печени крыс. Данное наблюдение подтверждает данные ίη-νίνο, проиллюстрированные на фиг. 7
Возвращаясь к данным на фиг. 8 и 9, оказывается, что связывание малых ПЭГ может быть эффективным для снижении скорости метаболизма лекарственного вещества (на что указывает образование глукоронида в случае налоксона). Причиной более высоких уровней β-изомера в крови по сравнению с α-изомером, скорее всего, является значительное предупреждение эффекта первого прохождения, т.е. значительное предотвращение объема пресистемного метаболизма (фиг. 7), что является результатом ковалентного связывания олигомерной ПЭГ молекулы. Молекула ПЭГ может создавать стерические препятствия и/или создавать гидрофильные или гидрофобные эффекты, которые при связывании ПЭГ с формой β-изомера, изменяют сродство конъюгата β-изомера с цитохромными изоферментами Р450 в более значительной степени, чем в случае, когда ПЭГ присоединяется к форме α-изомера. Уровни метаболита β-изомера ниже по сравнению с метаболитом α-изомера и неПЭГ-илированным налоксоном.
Пример 10. Влияние разных опиоидных антагонистов на мю-опиатные рецепторы.
В отдельных сериях экспериментов биоактивность налоксона, других опиоидных антагонистов и различных конъюгатов в отношении мю-опиатных рецепторов определялась ίη νΐίτο Результаты сведены в табл. VI
Таблица VI
Активность налоксона и конъюгатов РЕСп-6-налоксола в отношении мю-опиатных рецепторов ίη-νίίτο
Соединение Молекулярный вес ЕС5о (нМ)
Налоксон 327,4 6,8
3- ПЭГ3-0-налоксон 474 2910,0
6--ΝΙ12-налоксон 601 29,2
ПЭГ55о-6-ЫН-налоксон (амид ПЭГ н) 951 210,0
α-6-налоксол 329 2,0
|3-б-налоксол 329 10,8
а-ПЭГ3-№1 475,6 7,3
β-Π3Γ3-Να1 475,6 31,7
α-Π3Γ5-Να1 563 31,5
β-Π3Γ;-6-Ν<ϋ 563 43,3
α-Π3Γ7-ό-Ν&1 652 40,6
β-Π9Γ--6-'ΓΜ 652 93,9
В вышеприведенной таблице для каждого соединения биоактивность приводится как мера относительной биоактивности каждого из различных конъюгатов ПЭГ в сравнении с исходным лекарственным веществом. ЕС50 - это концентрация агониста, которая вызывает реакцию на полпути между базовым уровнем и максимальной реакцией на стандартной кривой зависимости доза-эффект. Как можно заметить из вышеприведенных данных, каждый из конъюгатов ПЭГ,-Ναΐ является биоактивным и, фактически, все конъюгаты 6-налоксона или налоксола сохраняли степень биоактивности, которая составляет по меньшей мере 5% или более биоактивности исходного лекарственного вещества, при этом уровень биоактивности варьируется от приблизительно 5 до приблизительно 35% от биоактивности немодифицированного исходного соединения В понятиях биоактивности, ПЭГ550-6-NΗ-налоксон обладает приблизительно 13% биоактивности исходного соединения (6-NН2-налоксон), а-ПЭГ3-№11 обладает приблизительно 30% биоактивности исходного соединения (α-6-ОН-налоксол) и β-ПЭГ3-Nа1 обладает приблизительно 35% биоактивности исходного соединения (α-6-ОН-налоксол).
Пример 11. Метод получения олиго(этиленгликоль) метиловых эфиров, по существу, с мономолекулярным весом и их производных.
Мономолекулярные (монодисперсные) ПЭГ настоящего изобретения были получены как подробно изложено ниже. Данные мономолекулярные ПЭГ были особенно полезными в обеспечении модифицированных активных веществ данного изобретения и в придании желаемой модификации свойств переноса через барьеры активных веществ, о которых идет речь. Метод, показанный ниже, представляет собой
- 33 015333 еще один аспект настоящего изобретения, т. е. метод получения монодисперсных олиго(этиленоксид) метиловых эфиров из монодисперсных олиго(этиленгликолей) с низким молекулярным весом, используя галоген-производное (например, бромопроизводное) олиго(этиленоксида). Также здесь предусмотрен, в другом аспекте изобретения, метод связывания олиго(этилеоксид) метилового эфира (из соединения с мономолекулярным весом) с активным веществом с использованием галогенпроизводного олиго(этиленоксид) метилового эфира.
Схематически, реакция может быть представлена следующим образом:
(а) СН5-ϊ'-οαι^-ΐς-Βι а НО—СНгСНгО^-Н —— СЛзО-гСКзСМзО-н--я * ” τη — п
ί т=1Л, 3;л^2.1<5,б}
10.А. Синтез СНэО-(СН2СН2О)з-Н с СН3ОСН2ОСН2СН2ВГ НО—^СНгСН2От“Н КОСВи г. МеО-^СНгС^О^Н 4 СН^ЖН,.СНгВг 3
Тетра(этиленгликоль) (55 ммоль, 10,7 г) растворяли в 100 мл тетрагидрофурана (ТГФ) и к этому раствору добавляли КО1В1.1 (55 мл, 1,0 М в ТГФ) при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего следовало капельное добавление СН3ОСН2СН2Вг (55 ммоль, 5,17 мл в 50 мл ТГФ). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего проводили экстракцию Н2О (300 мл)/СН2С12 (3x300 мл). Органические экстракты объединяли и затем сушили над безводным Ыа28О4. После отфильтровывания твердого осушителя и удаления растворителя путем выпаривания восстановленный неочищенный осадок очищали колоночной хроматографией с использованием колонки с силикагелем (СН2С12: СН3ОН = 60:1 ~ 40:1), чтобы получить чистый пента(этиленгликоль) монометиловый эфир (выход 35%). 'Н-ЯМР (СЭС13) δ 3,75-3,42 (т, 20 Н, ОСН2СН2О), 3,39 (§, 3Н, МеО).
10.В. Синтез СН3О-(СН2СН2О)7-Н с использованием МеОСН2СН2Вг.
К раствору гекса(этиленгликоля) (10 г, 35 ммоль) и 2-бромоэтилметилового эфира (4,9 г, 35 ммоль) в ТГФ (100 мл) медленно добавляли гидрид натрия (2,55 г, 106 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. ВЭЖХ показала, что тПЭГ7-ОН был образован приблизительно с 54% выходом. Затем реакция была остановлена добавлением разбавленной соляной кислоты, чтобы разрушить избыток гидрида натрия. Все растворители были удалены с использованием ротационного выпаривания с получением липкой жидкости коричневого цвета. Чистый тПЭГ7-ОН получали в виде бесцветной жидкости (4,9 г, 41% выделенного выхода) с помощью полупрепаративной ВЭЖХ (20x4 см, С18 колонна, ацетонитрил и вода в качестве подвижных фаз). 'Н-ЯМР (СЭС13): 2,57 промиль (триплет, 1 Н, ОН); 3,38 промиль (синглет, 3Н, СН3О); 3,62 промиль (мультиплет, 30 Н, ОСН2СН2).
10.С. Синтез СН3О-(СН2СН2О)5-Вг.
Триэтиламин (5,7 мл, 40 ммоль) добавляли к СН3О-(СН2СН2О)5-ОН (5,0 г, 20 ммоль) при перемешивании. Раствор охлаждали на ледяной бане под Ν2 и по каплям добавляли 2,5 мл метансульфохлорида (32 ммоль) в течение 30 мин. Затем раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси была добавлена вода (40 мл) и раствор экстрагировали СН2С12 (3x150 мл), а органическую фазу промывали 0,1Ν НС1 (3x80 мл) и водой (2x80 мл). После высушивания №28О4 и удаления растворителя была получена светло-коричневая жидкость. Данный продукт и Вн.^Вг (12,80 г, 39,7 ммоль) растворяли в СН3С№ (50 мл), а полученный раствор перемешивали под Ν2 и при 50°С в течение 15 ч. После охлаждения до комнатной температуры Ο4^Ν удаляли посредством ротационного выпари
- 34 015333 вания до получения жидкости красного цвета, которую растворяли в 150 мл воды и экстрагировали ЕЮАс (2x200 мл). Органическую фазу объединяли, промывали водой и сушили над Να28Ο4. После удаления растворителя была получена жидкость красного цвета (4,83 г, 77,4%). 1Н-ЯМР (300 Гц, СИС13): δ 3,82 (1, 2Н), 3,67 (т, 14Н), 3,51 (т, 2Н), 3,40 (8, 3Н).
Пример 11. Синтез тПЭГ3 Ν-мефлохина.
К метанольному раствору (5 мл) НС1 соли мефлохина (200 мг, 0,48 ммоль) и тПЭГ3-бутиальдегида (280 мг, 1,20 ммоль) добавляли водный раствор (1 мл) цианоборогидрида натрия (60 мг, 0,96 ммоль). Полученный раствор нагревали под азотом, перемешивая на масляной бане при температуре 50°С в течение 16 ч.
ВЭЖХ показала, что реакция завершилась. Затем все растворители были удалены ротационным выпариванием с получением неочищенного продукта. После очистки с помощью препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой получали чистый конъюгат тПЭГ3-№мефлохина в виде бесцветной липкой жидкости (160 мг, 0,27 ммоль, 56% выхода выделенного) !Н-ЯМР(СОС13, промиль): 8,15 (мультиплет, 3 Н, ароматическое кольцо), 7,73 (триплет, 1 Н, ароматическое кольцо), 5,86 (дублет, 1Н, СН); 3,67 (мультиплет, 14 Н, ПЭГ остов); 3,52 (синглет, 3Н, ПЭГ-ОСН3); 3,18 (мультиплет, 2Н, ПЭГ-СН2); 0,52-2,74 (мультиплет, 13 Н, ПЭГ и протоны циклогексила).

Claims (44)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Композиция, содержащая конъюгаты, причем каждый конъюгат состоит из фрагмента, полученного из низкомолекулярного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой, имеющим от 2 до 30 мономерных звеньев, причем конъюгат имеет пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером.
  2. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что конъюгат включает структуру О-Х-Э, где О - водорастворимый олигомер, X - стабильная связь, а Ό - фрагмент, полученный из низкомолекулярного лекарственного вещества.
  3. 3. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что биологическая мембрана связана с барьерами, выбранными из группы, состоящей из гематоэнцефалического барьера, гематоликворного барьера, гематоплацентарного барьера и гематомолочного барьера.
  4. 4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что биологическая мембрана связана с гематоэнцефалическим барьером.
  5. 5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что низкомолекулярное лекарственное вещество является биодоступным при пероральном введении.
  6. 6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что конъюгат обладает молекулярным весом в диапазоне от 300 до 1800 Да.
  7. 7. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что низкомолекулярное лекарственное вещество обладает молекулярным весом менее чем 750 Да.
  8. 8. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что низкомолекулярное лекарственное вещество является неопиоидным антагонистом.
  9. 9. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что водорастворимый олигомер включает мономерные звенья, выбранные из группы, состоящей из алкиленоксида, олефинового спирта, винилпирролидона, гидроксиалкилметакриламида, гидроксиалкилметакрилата, сахарида, α-гидроксикислоты, фосфазена, оксазолина, аминокислот и Ν-акрилоилморфолина.
  10. 10. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что водорастворимый олигомер состоит из этиленоксидных мономерных звеньев.
  11. 11. Композиция по любому из пп.9 и 10, отличающаяся тем, что олигомер имеет от 3 до 15 моно
    - 35 015333 мерных звеньев.
  12. 12. Композиция по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что стабильная связь выбрана из группы, состоящей из эфирной, амидной, уретановой, аминной, тиоэфирной, эфирной, мочевинной и углеродуглеродной связей.
  13. 13. Композиция по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что конъюгат содержит смесь стереоизомеров.
  14. 14. Композиция по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что конъюгат представляет собой один стереоизомер.
  15. 15. Фармацевтическая композиция, содержащая (ί) конъюгаты, причем каждый конъюгат состоит из фрагмента, полученного из низкомолекулярного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой, имеющим от 2 до 30 мономерных звеньев, причем конъюгат имеет пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, не связанным с водорастворимым олигомером; и (и) фармацевтически приемлемый наполнитель.
  16. 16. Фармацевтическая композиция по п.15 в дозировочной форме для перорального введения.
  17. 17. Способ введения композиции по п.1, характеризующийся тем, что введение выбрано из группы, состоящей из перорального введения, трансдермального введения, буккального введения, трансмукозального введения (введение через слизистые оболочки), внутривагинального введения, ректального введения, парентерального введения и пульмонарного введения.
  18. 18. Способ оптимизации селективного прохождения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом с молекулярным весом менее чем 1000 Да, который включает этап конъюгирования водорастворимого олигомера с монодисперсной молекулярной массой, имеющим от 2 до 30 мономерных звеньев, с низкомолекулярным лекарственным веществом посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи для образования конъюгата, имеющего пониженную скорость пересечения биологической мембраны по сравнению со скоростью пересечения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом до конъюгирования.
  19. 19. Способ оптимизации прохождения биологической мембраны низкомолекулярным лекарственным веществом, который включает стадии:
    (a) приготовления серии конъюгатов, где каждый конъюгат серии состоит из фрагмента, полученного из низкомолекулярного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой, где каждый конъюгат в серии отличается только количеством мономерных звеньев в олигомере в диапазоне от 2 до 30;
    (b) определения для каждого конъюгата серии, приготовленной на стадии (а), степени, в которой конъюгат не пересекает биологическую мембрану; и (c) основываясь на результатах, полученных на стадии (Ь), определение из серии конъюгатов, полученных на стадии (а), конъюгата, который обладает оптимальным снижением скорости пересечения биологической мембраны.
  20. 20. Способ по п.19, включающий стадию определения для каждого конъюгата серии, полученной на стадии (а), степени биодоступности при пероральном введении и определения конъюгата, который обладает оптимальным балансом между снижением скорости пересечения биологической мембраны и биодоступностью.
  21. 21. Способ по п.19, включающий этап определения для каждого конъюгата серии, полученной на стадии (а), степени биоактивности и определения конъюгата, который обладает оптимальным балансом между снижением скорости пересечения биологической мембраны и биодоступностью.
  22. 22. Способ получения конъюгата, включающий стадию ковалентного связывания водорастворимого олигомера с монодисперсной молекулярной массой, имеющего от 2 до 30 мономерных звеньев, с низкомолекулярным лекарственным веществом с молекулярным весом менее 1000 Да для получения конъюгата, который содержит гидролитически и ферментативно стабильную связь, соединяющую олигомер и фрагмент, полученный из низкомолекулярного лекарственного вещества.
  23. 23. Способ по п.22, отличающийся тем, что стадия связывания состоит из одного или нескольких этапов взаимодействия олигомера с реакционноспособной группой А с низкомолекулярным веществом, содержащим реакционноспособную группу В, подходящую для взаимодействия с группой А, при условиях, эффективных для образования стабильной связи в результате реакции А и В.
  24. 24. Способ по п.23, отличающийся тем, что конъюгат содержит смесь изомеров.
  25. 25. Способ по п.24, дополнительно включающий стадию разделения смеси изомеров с получением, по существу, чистой композиции одного изомера конъюгата.
  26. 26. Способ получения олигоэтиленгликоля с монодисперсной молекулярной массой, включающий стадию взаимодействия олиго(этиленгликоля) с концевыми галогруппами, имеющего (т) мономерных звеньев, с олиго(этиленгликолем) с концевыми гидроксильными группами, имеющим (п) мономерных звеньев, при условиях, эффективных для замещения галогруппы с образованием олиго(этиленгликоля),
    - 36 015333 имеющего (т)+(п) мономерных звеньев (ОЕСт+п), где (т) и (п), каждый независимо, находятся в диапазоне от 1 до 10.
  27. 27. Способ по п.26, отличающийся тем, что значение (т) находится в диапазоне от 1 до 3, а значение (п) находится в диапазоне от 2 до 6.
  28. 28. Способ по п.26, отличающийся тем, что стадию взаимодействия проводят в присутствии сильного основания.
  29. 29. Способ по любому из пп.26-28, отличающийся тем, что олиго(этиленгликоль) имеет концевую галогруппу.
  30. 30. Способ по п.26, отличающийся тем, что олиго(этиленгликоль) с концевой гидроксильной группой имеет структурную формулу НО-(СН2СН2О)п-Н.
  31. 31. Способ по п.30, дополнительно включающий стадию превращения концевой гидроксильной группы ОЕ6т+п в галогруппу -X с образованием ОЕ6т+п-Х.
  32. 32. Способ по п.31, дополнительно включающий стадию взаимодействия ОЕСт+п-Х со вторым олиго(этиленгликолем) с концевой гидроксильной группой с (п) мономерными звеньями при условиях, эффективных для замещения галогруппы с образованием олиго(этиленгликоля) с (т)+2(п) мономерными звеньями (ОЕСт+2п), где значения (т) и (п), каждое независимо, находятся в диапазоне от 1 до 10.
  33. 33. Способ по п.32, отличающийся тем, что второй олиго(этиленгликоль) с концевой гидроксильной группой имеет структурную формулу НО-(СН2СН2О)п-Н.
  34. 34. Способ по п.33, отличающийся тем, что (ОЕСт+2п) имеет структурную формулу СН3О(СН2СН2О)т+2пН и представляет часть монодисперсной композиции.
  35. 35. Способ по п.32, отличающийся тем, что ОЕСт+2п обладает первичной или вторичной гидроксильной группой.
  36. 36. Способ по п.35, дополнительно включающий стадию превращения первичной или вторичной гидроксильной группы в галогруппу -X с образованием ОЕ6т+2п-Х.
  37. 37. Способ по п.36, дополнительно включающий стадию взаимодействия ОЕСт+2п-Х с третьим олиго(этиленгликолем) с концевой гидроксильной группой и (п) мономерными звеньями при условиях, эффективных для замещения галогруппы с образованием олиго(этиленгликоля) с т+3п мономерными звеньями (ОЕСт+3п), где значения (т) и (п), каждое независимо, находятся в диапазоне от 1 до 10.
  38. 38. Способ по п.37, отличающийся тем, что (ОЕСт+3п) имеет структурную формулу СН3О(СН2СН2О)т+3пН и представляет монодисперсную композицию.
  39. 39. Способ снижения метаболизма активного вещества, заключающийся во введении пациенту конъюгатов, каждый из которых состоит из фрагмента, полученного из низкомолекулярного лекарственного вещества с молекулярным весом менее 1000 Да, ковалентно связанного посредством гидролитически и ферментативно стабильной связи с водорастворимым олигомером с монодисперсной молекулярной массой и количеством мономерных звеньев от 2 до 30, где конъюгат демонстрирует пониженную скорость метаболизма по сравнению со скоростью метаболизма низкомолекулярного лекарственного вещества, не связанного с водорастворимым олигомером.
  40. 40. Способ по п.39, отличающийся тем, что введение осуществляют посредством одного из путей введения, выбранного из группы, состоящей из перорального введения, трансдермального введения, буккального введения, трансмукозального введения, внутривагинального введения, ректального введения, парентерального введения и пульмонального введения.
  41. 41. Способ по п.40, отличающийся тем, что низкомолекулярное лекарственное вещество метаболизируется ферментами печени.
  42. 42. Способ по п.41, отличающийся тем, что ферменты печени включают один или несколько цитохромных изоформ Р450.
  43. 43. Способ по п.40, отличающийся тем, что введение осуществляют перорально.
  44. 44. Способ по п.43, отличающийся тем, что низкомолекулярное лекарственное вещество метаболизируется одним или несколькими кишечными ферментами.
EA200601167A 2003-12-16 2004-12-16 Композиции, содержащие конъюгаты, способы их получения и применение EA015333B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US53012203P 2003-12-16 2003-12-16
PCT/US2004/042661 WO2005058367A2 (en) 2003-12-16 2004-12-16 Pegylated small molecules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200601167A1 EA200601167A1 (ru) 2006-12-29
EA015333B1 true EA015333B1 (ru) 2011-06-30

Family

ID=34700098

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200601167A EA015333B1 (ru) 2003-12-16 2004-12-16 Композиции, содержащие конъюгаты, способы их получения и применение
EA201000994A EA018427B1 (ru) 2003-12-16 2004-12-16 Химически модифицированный налоксон

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201000994A EA018427B1 (ru) 2003-12-16 2004-12-16 Химически модифицированный налоксон

Country Status (26)

Country Link
US (2) US7786133B2 (ru)
EP (3) EP1694363B1 (ru)
JP (1) JP4991312B2 (ru)
KR (1) KR101168620B1 (ru)
CN (3) CN101805343B (ru)
AU (2) AU2004299138B2 (ru)
CA (2) CA2549730C (ru)
CY (2) CY1114992T1 (ru)
DK (1) DK1694363T3 (ru)
EA (2) EA015333B1 (ru)
ES (3) ES2733764T3 (ru)
FR (1) FR15C0037I2 (ru)
HK (2) HK1146645A1 (ru)
HR (1) HRP20140361T1 (ru)
HU (1) HUS1500026I1 (ru)
IL (2) IL176317A (ru)
LT (1) LTC1694363I2 (ru)
LU (1) LU92702I2 (ru)
NL (1) NL300737I2 (ru)
NZ (3) NZ583573A (ru)
PL (1) PL1694363T3 (ru)
PT (1) PT1694363E (ru)
RS (1) RS53279B (ru)
SI (1) SI1694363T1 (ru)
WO (1) WO2005058367A2 (ru)
ZA (1) ZA200605763B (ru)

Families Citing this family (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090143328A1 (en) * 2001-08-13 2009-06-04 Mcdonald George Method of Treating Cancer by Administration of Topical Active Corticosteroids
PT1436012T (pt) 2001-10-18 2018-03-27 Nektar Therapeutics Conjugados poliméricos de antagonistas de opióides
US20060182692A1 (en) * 2003-12-16 2006-08-17 Fishburn C S Chemically modified small molecules
WO2005058367A2 (en) 2003-12-16 2005-06-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Pegylated small molecules
EP2545933A3 (en) 2006-01-05 2013-04-24 University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to improving properties of pharmacological agents targeting nervous system
LT1988910T (lt) 2006-02-28 2018-01-10 Kodiak Sciences Inc. Akriloiloksietilfosforilcholiną turintys polimero konjugatai ir jų gavimo būdas
NZ572252A (en) * 2006-04-21 2011-09-30 Nektar Therapeutics Stereoselective reduction of a morphinone
CN101534827A (zh) * 2006-11-07 2009-09-16 尼克塔治疗亚拉巴马公司 阿片样物质激动剂和阿片样物质拮抗剂的剂型和联合给药
KR100829890B1 (ko) 2007-02-08 2008-05-16 주식회사 바이오폴리메드 신규한 레티놀 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는주름 개선용 화장료 조성물
AU2008226820A1 (en) * 2007-03-12 2008-09-18 Nektar Therapeutics De novo synthesis of conjugates
CA2679070C (en) * 2007-03-12 2016-04-26 Nektar Therapeutics Oligomer-antihistamine conjugates
US10512644B2 (en) 2007-03-12 2019-12-24 Inheris Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-opioid agonist conjugates
US8173666B2 (en) 2007-03-12 2012-05-08 Nektar Therapeutics Oligomer-opioid agonist conjugates
PT2134371E (pt) * 2007-03-12 2015-04-16 Nektar Therapeutics Conjugados agonistas de opióide-oligómero
WO2008112287A1 (en) 2007-03-12 2008-09-18 Nektar Therapeutics Oligomer-beta blocker conjugates
CN102816111B (zh) 2007-03-12 2014-08-06 尼克塔治疗公司 低聚物-蛋白酶抑制剂偶联物
US8389759B2 (en) * 2007-03-12 2013-03-05 Nektar Therapeutics Oligomer-anticholinergic agent conjugates
AU2014200906B2 (en) * 2007-03-12 2016-07-07 Nektar Therapeutics Oligomer-protease inhibitor conjugates
US8748648B2 (en) 2007-09-06 2014-06-10 Nektar Therapeutics Oligomer-calcium channel blocker conjugates
US8741858B2 (en) 2007-09-21 2014-06-03 Zhongxu Ren Oligomer-nucleoside phosphate conjugates
US8796248B2 (en) * 2007-10-05 2014-08-05 Nektar Therapeutics Oligomer-corticosteroid conjugates
WO2009054916A2 (en) * 2007-10-19 2009-04-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer conjugates of lidocaine and its derivatives
WO2009058387A2 (en) * 2007-11-02 2009-05-07 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-nitroimidazole anti-infective conjugates
WO2009067175A2 (en) * 2007-11-16 2009-05-28 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-dantrolene conjugates and related compounds
CA2704836C (en) * 2007-11-28 2015-12-29 Nektar Therapeutics Oligomer-tricyclic conjugates
US20110009446A1 (en) * 2008-01-11 2011-01-13 Nektar Therapeutics Oligomer-guanidine class conjugates
EP2249872B1 (en) * 2008-01-25 2017-03-22 Nektar Therapeutics Oligomer-diarylpiperazine conjugates
WO2009099670A2 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Nektar Therapeutics Al, Corporation Oligomer-cannabinoid conjugates
US8466276B2 (en) 2008-02-22 2013-06-18 Nektar Therapeutics Oligomer conjugates of heteropentacyclic nucleosides
WO2009114151A1 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Nektar Therapeutics Oligomer-amino acid and olgomer-atazanavir conjugates
WO2009114153A1 (en) * 2008-03-12 2009-09-17 Nektar Therapeutics Oligomer-foscarnet conjugates
US20110059921A1 (en) * 2008-03-27 2011-03-10 Ektar Therapeutics Oligomer-Nitrogenous Base Conjugates
US9233165B2 (en) * 2008-04-11 2016-01-12 Nektar Therapeutics Oligomer-aryloxy-substituted propanamine conjugates
US9095621B2 (en) 2008-04-25 2015-08-04 Nektar Therapeutics Oligome-bis-chromonyl compound conjugates
JP5769616B2 (ja) 2008-04-30 2015-08-26 イミュノジェン・インコーポレーテッド クロスリンカーおよびそれらの使用
KR20110004425A (ko) * 2008-05-07 2011-01-13 넥타르 테라퓨틱스 말초적 작용 오피오이드 길항제의 경구 투여
WO2009151590A2 (en) * 2008-06-09 2009-12-17 Nektar Therapeutics Methods of treating cyp2d6 alternative metabolizers
CA2734333A1 (en) * 2008-09-16 2010-03-25 Nektar Therapeutics Pegylated opioids with low potential for abuse
WO2010033226A1 (en) * 2008-09-17 2010-03-25 Nektar Therapeutics Oligomer-protease inhibitor conjugates
WO2010033219A2 (en) 2008-09-17 2010-03-25 Nektar Therapeutics Protease inhibitors having enhanced features
AU2010208274B2 (en) * 2009-01-28 2015-11-05 Nektar Therapeutics Oligomer-phenothiazine conjugates
US9192681B2 (en) 2009-02-24 2015-11-24 Nektar Therapeutics Oligomer-amino acid conjugates
US8530492B2 (en) 2009-04-17 2013-09-10 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
US8816077B2 (en) 2009-04-17 2014-08-26 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
MX2011012044A (es) 2009-05-13 2011-12-14 Nektar Therapeutics Compuestos de triazina aromatica sustituida que contienen oligomeros.
WO2010132693A2 (en) 2009-05-13 2010-11-18 Nektar Therapeutics Oligomer-containing pyrrolidine compounds
SG10201810743WA (en) 2009-06-03 2018-12-28 Immunogen Inc Conjugation methods
US20120108501A1 (en) 2009-06-12 2012-05-03 Nektar Therapeutics Protease Inhibitors
CN105503889B (zh) * 2009-07-21 2019-12-24 尼克塔治疗公司 低聚物-阿片样激动剂轭合物
KR101788886B1 (ko) 2009-07-21 2017-10-20 넥타르 테라퓨틱스 올리고머-오피오이드 효능제 컨주게이트
KR101828613B1 (ko) 2009-09-29 2018-02-12 넥타르 테라퓨틱스 올리고머-칼슘 모방체 컨쥬게이트 및 관련 화합물
US8722732B2 (en) 2009-09-29 2014-05-13 Nektar Therapeutics Oligomer-calcimimetic conjugates and related compounds
US8765432B2 (en) 2009-12-18 2014-07-01 Oligasis, Llc Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
WO2011088140A1 (en) 2010-01-12 2011-07-21 Nektar Therapeutics Pegylated opioids with low potential for abuse and side effects
WO2011091050A1 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Nektar Therapeutics Oligomer-tricyclic conjugates
WO2011103559A1 (en) * 2010-02-22 2011-08-25 Nektar Therapeutics Oligomer modified diaromatic substituted compounds
US20160015656A2 (en) * 2010-08-05 2016-01-21 Nitto Denko Corporation Composition for regenerating normal tissue from fibrotic tissue
DK2621496T4 (en) 2010-09-30 2019-03-18 Astrazeneca Ab Crystalline NALOXOL-PEG CONJUGATE
EP2627639B1 (en) 2010-10-15 2021-12-22 Nektar Therapeutics N-optionally substituted aryl-2-oligomer-3-alkoxypropionamides
US9090535B2 (en) 2010-12-10 2015-07-28 Nektar Therapeutics Hydroxylated tricyclic compounds
US9540330B2 (en) 2010-12-15 2017-01-10 Nektar Therapeutics Oligomer-containing hydantoin compounds
US20130324467A1 (en) * 2010-12-15 2013-12-05 Neuroadjuvants, Inc Neuropeptide analogs, compositions, and methods for treating pain
WO2012083153A1 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Nektar Therapeutics Oligomer-containing apremilast moiety compounds
US9943605B2 (en) 2010-12-23 2018-04-17 Nektar Therapeutics Polymer-semaxanib moiety conjugates
US10525054B2 (en) 2011-11-07 2020-01-07 Inheris Biopharma, Inc. Compositions, dosage forms, and co-administration of an opioid agonist compound and an analgesic compound
AU2012336030B2 (en) 2011-11-07 2017-09-14 Nektar Therapeutics Compositions, dosage forms, and coadministration of an opioid agonist compound and an analgesic compound
CN103289075B (zh) * 2012-02-22 2016-01-20 天津键凯科技有限公司 聚乙二醇与纳洛酮的结合物及其药物组合物和应用
EP2895457B1 (en) 2012-09-17 2020-05-20 Nektar Therapeutics Oligomer-containing benzamide-based compounds
ES2701076T3 (es) 2012-11-24 2019-02-20 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Enlazadores hidrofílicos y sus usos para la conjugación de fármacos a las moléculas que se unen a las células
US9789198B2 (en) * 2013-05-31 2017-10-17 Jenkem Technology Co., Ltd. (Tianjin) Low molecular weight polyethylene glycol drug conjugates having improved drug biological activity
CN104208715B (zh) * 2013-05-31 2016-12-28 天津键凯科技有限公司 具有提高的药物生物活性的低分子量聚乙二醇药物结合物
WO2014210436A2 (en) 2013-06-28 2014-12-31 Nektar Therapeutics Kappa opioid agonists and uses thereof
SI3041513T1 (sl) 2013-09-08 2020-11-30 Kodiak Sciences Inc. Zwitterionski polimerni konjugati faktorja VIII
WO2015079459A1 (en) 2013-11-27 2015-06-04 Nektar Therapeutics (India) Pvt.Ltd. Opioid agonists and uses thereof
CA2875384A1 (en) 2013-12-20 2015-06-20 AntiOP, Inc. Intranasal naloxone compositions and methods of making and using same
CN114262344A (zh) 2014-02-28 2022-04-01 杭州多禧生物科技有限公司 带电荷链接体及其在共轭反应上的应用
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
US10272158B2 (en) * 2014-07-03 2019-04-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Compounds for treating biofilm infection
WO2016061562A2 (en) 2014-10-17 2016-04-21 Kodiak Sciences Inc. Butyrylcholinesterase zwitterionic polymer conjugates
GB2545368B (en) * 2014-10-20 2021-04-21 Elysium Therapeutics Inc Diversion-resistant opioid formulations
CN104473927A (zh) * 2014-12-05 2015-04-01 北京键凯科技有限公司 一种聚乙二醇与药物分子结合物及其制备方法
WO2016106133A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Nektar Therapeutics N-methyl-n-(1-phenyl-2-(1-pyrrolidinyl)ethyl)-2-aminophenylacetamide derivatives agonists for the kappa opioid receptor
US10766864B2 (en) 2015-05-08 2020-09-08 Nektar Therapeutics Morphinan derivatives for the treatment of neuropathic pain
NZ739830A (en) 2015-07-12 2021-12-24 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Bridge linkers for conjugation of cell-binding molecules
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
WO2017117464A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
CN107033154B (zh) * 2016-02-02 2020-02-04 上海瀚迈生物医药科技有限公司 阿片受体拮抗剂缀合物及其应用
CN107033155B (zh) * 2016-02-04 2019-04-26 国药集团国瑞药业有限公司 一种吗啡酮类化合物的立体选择性还原方法
EP3228307A1 (en) 2016-04-05 2017-10-11 Sandoz Ag Solid dispersion comprising opioid antagonists
KR20220147721A (ko) 2016-11-14 2022-11-03 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용
US11077103B2 (en) 2016-11-23 2021-08-03 Aurobindo Pharma Ltd. Naloxegol oxalate and solid dispersion thereof
JP7022328B2 (ja) 2017-03-30 2022-02-18 日油株式会社 自壊性アセタールリンカーを有する親水性ポリマー誘導体及びそれを用いた複合体
CN110475802B (zh) 2017-03-30 2022-03-08 日油株式会社 异双官能性单分散聚乙二醇以及使用该异双官能性单分散聚乙二醇的缀合物
CN109134479A (zh) * 2017-06-27 2019-01-04 石家庄蒎格医药科技有限公司 结晶聚乙二醇纳洛酮草酸盐及制备方法
WO2019058387A1 (en) * 2017-09-19 2019-03-28 Msn Laboratories Private Limited, R&D Center IMPROVED PROCESS FOR THE PREPARATION OF (5Α, 6Α) -17-ALLYL-6- (2,5,8,11,14,17,20-HEPTAOXADOCOSAN-22-YLOXY) -4,5-EPOXYMORPHINANE-3,14-DIOL AND ITS PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALTS
JP7204078B2 (ja) 2018-03-13 2023-01-16 日油株式会社 主鎖および側鎖に単分散ポリエチレングリコールを有するヘテロ二官能性化合物
US20210338660A1 (en) * 2019-05-21 2021-11-04 Aurobindo Pharma Ltd Naloxegol Oxalate and Solid Dispersion thereof
WO2021060439A1 (ja) 2019-09-26 2021-04-01 日油株式会社 ペプチドリンカーを有するヘテロ二官能性単分散ポリエチレングリコール
AU2020364071A1 (en) 2019-10-10 2022-05-26 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
CN113827576B (zh) * 2021-11-17 2023-08-01 北京尚修堂医药科技有限公司 一种活性成分为草酸纳洛解的药物组合物及制备方法

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0995757A2 (en) * 1998-08-26 2000-04-26 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Bivalent inhibitors of the proteasome
WO2001019407A2 (en) * 1999-09-13 2001-03-22 Nobex Corporation Taxane prodrugs
WO2001047562A2 (en) * 1999-12-23 2001-07-05 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly(ethylene glycol)
WO2001062299A2 (en) * 2000-02-28 2001-08-30 Shearwater Corporation Water-soluble polymer conjugates of artelinic acid
WO2002065988A2 (en) * 2001-02-20 2002-08-29 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
WO2002089789A1 (en) * 2001-05-09 2002-11-14 Enzon, Inc. Trimethyl lock based tetrapartate prodrugs
US20020182172A1 (en) * 2000-11-30 2002-12-05 Shearwater Corporation Water-soluble polymer conjugates of triazine derivatives
US20030044402A1 (en) * 2001-09-05 2003-03-06 Nelson Deanna Jean Oligo(ethylene glycol)-terminated 1,2-dithiolanes and their conjugates useful for preparing self-assembled monolayers
WO2003032990A2 (en) * 2001-10-18 2003-04-24 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of opioid antagonists
WO2003037385A1 (en) * 2001-10-30 2003-05-08 Nektar Therapeutics Al, Corporation Water-soluble polymer conjugates of retinoic acid
WO2003037384A2 (en) * 2001-10-29 2003-05-08 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of protein kinase c inhibitors
US20030105275A1 (en) * 1999-12-22 2003-06-05 Shearwater Corporation Sterically hindered poly(ethylene glycol) alkanoic acids and derivatives thereof
US20040023852A1 (en) * 2001-10-18 2004-02-05 Roberts Michael J. Hydroxypatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers
WO2004082620A2 (en) * 2003-03-13 2004-09-30 Controlled Chemicals, Inc. Oxycodone conjugates with lower the abuse potential and extended duration of action

Family Cites Families (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4223163A (en) * 1976-12-10 1980-09-16 The Procter & Gamble Company Process for making ethoxylated fatty alcohols with narrow polyethoxy chain distribution
US4366159A (en) * 1981-09-08 1982-12-28 Michael Richard Magruder Nalbuphine-narcotic analgesic composition and method of producing analgesia
FR2514644A1 (fr) 1981-10-19 1983-04-22 Sanofi Sa Composition pharmaceutique a action antagoniste peripherique des opiaces
US4587046A (en) * 1982-05-18 1986-05-06 The Regents Of The University Of California Drug-carrier conjugates
EP0206448B1 (en) * 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4730048A (en) * 1985-12-12 1988-03-08 Regents Of The University Of Minnesota Gut-selective opiates
US4806556A (en) * 1985-12-12 1989-02-21 Regents Of The University Of Minnesota Gut-selective opiates
US4719215A (en) * 1986-03-07 1988-01-12 University Of Chicago Quaternary derivatives of noroxymorphone which relieve nausea and emesis
US4861781A (en) * 1986-03-07 1989-08-29 The University Of Chicago Quaternary derivatives of noroxymorphone which relieve nausea and emesis
US4801575A (en) * 1986-07-30 1989-01-31 The Regents Of The University Of California Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
US5080891A (en) * 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
JPH01207320A (ja) 1988-02-15 1989-08-21 Daicel Chem Ind Ltd 芳香族ポリエーテルの製造方法
IT1216687B (it) * 1988-04-01 1990-03-08 Boehringer Biochemia Srl Complessi di platino (ii), loro preparazione e impiego come antitumorali.
US5102887A (en) * 1989-02-17 1992-04-07 Arch Development Corporation Method for reducing emesis and nausea induced by the administration of an emesis causing agent
ATE154135T1 (de) * 1989-03-10 1997-06-15 Hoffmann La Roche Reagenzien zum nachweis von drogen
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5324844A (en) * 1989-04-19 1994-06-28 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
JPH0383914A (ja) * 1989-08-18 1991-04-09 W R Grace & Co ドラッグキャリアー
DE3937797A1 (de) * 1989-11-14 1991-05-16 Basf Ag Verfahren zur herstellung von polyetherglykolen
US5130126A (en) * 1990-07-09 1992-07-14 Nippon Oil & Fats Co., Ltd. Polymer-drug conjugate and a method of producing it
IE912365A1 (en) * 1990-07-23 1992-01-29 Zeneca Ltd Continuous release pharmaceutical compositions
JP2829794B2 (ja) * 1991-02-08 1998-12-02 エスエス製薬 株式会社 徐放性経口投与型プラノプロフェン製剤
US5250542A (en) 1991-03-29 1993-10-05 Eli Lilly And Company Peripherally selective piperidine carboxylate opioid antagonists
US5270328A (en) 1991-03-29 1993-12-14 Eli Lilly And Company Peripherally selective piperidine opioid antagonists
US5159081A (en) * 1991-03-29 1992-10-27 Eli Lilly And Company Intermediates of peripherally selective n-carbonyl-3,4,4-trisubstituted piperidine opioid antagonists
WO1993024476A1 (en) 1992-06-04 1993-12-09 Clover Consolidated, Limited Water-soluble polymeric carriers for drug delivery
GB9316895D0 (en) * 1993-08-13 1993-09-29 Guy S And St Thomas Hospitals Hepatoselective insulin analogues
EP0599303A3 (en) * 1992-11-27 1998-07-29 Takeda Chemical Industries, Ltd. Peptide conjugate
US5298643A (en) * 1992-12-22 1994-03-29 Enzon, Inc. Aryl imidate activated polyalkylene oxides
US5321095A (en) * 1993-02-02 1994-06-14 Enzon, Inc. Azlactone activated polyalkylene oxides
US5298410A (en) * 1993-02-25 1994-03-29 Sterling Winthrop Inc. Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life
ES2122261T3 (es) * 1993-03-17 1998-12-16 Minnesota Mining & Mfg Formulacion de aerosol que contiene un adyuvante de dispersion derivado de un ester, una amida o un mercaptoester.
AU7113594A (en) * 1993-06-21 1995-01-17 Enzon, Inc. Site specific synthesis of conjugated peptides
US5643575A (en) * 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5434171A (en) * 1993-12-08 1995-07-18 Eli Lilly And Company Preparation of 3,4,4-trisubstituted-piperidinyl-N-alkylcarboxylates and intermediates
US5693609A (en) * 1994-11-17 1997-12-02 Eli Lilly And Company Acylated insulin analogs
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5670477A (en) * 1995-04-20 1997-09-23 Joseph F. Poduslo Method to enhance permeability of the blood/brain blood/nerve bariers to therapeutic agents
HUP9901069A2 (hu) 1995-06-07 1999-07-28 Affymax Technologies, N.V. Az eritropoietin receptorhoz kötődő vegyületek és peptidek
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
EP0856026A1 (en) 1995-10-19 1998-08-05 Receptagen Corporation Discrete-length polyethylene glycols
US5639705A (en) * 1996-01-19 1997-06-17 Arco Chemical Technology, L.P. Double metal cyanide catalysts and methods for making them
PT914097E (pt) * 1996-03-12 2002-06-28 Alza Corp Composicao e forma de dosagem compreendendo antagonista de opioide
US5856369A (en) 1996-07-30 1999-01-05 Osi Specialties, Inc. Polyethers and polysiloxane copolymers manufactured with double metal cyanide catalysts
DE19632440A1 (de) 1996-08-12 1998-02-19 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von aus Polykationen aufgebauten, geformten Mischhydroxiden
US6214966B1 (en) * 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
DE19651551C2 (de) * 1996-12-11 2000-02-03 Klinge Co Chem Pharm Fab Opioidantagonisthaltige galenische Formulierung
US6011008A (en) * 1997-01-08 2000-01-04 Yissum Research Developement Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Conjugates of biologically active substances
GB9703044D0 (en) * 1997-02-14 1997-04-02 Glaxo Group Ltd Phenyl xanthine esters and amides
US6565885B1 (en) * 1997-09-29 2003-05-20 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Methods of spray drying pharmaceutical compositions
US5972954A (en) * 1997-11-03 1999-10-26 Arch Development Corporation Use of methylnaltrexone and related compounds
CA2312975C (en) * 1997-12-17 2012-08-21 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
AU2903899A (en) 1998-03-12 1999-09-27 Shearwater Polymers Inc. Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
EP1068181B1 (en) * 1998-03-30 2003-05-07 Lg Chemical Limited Polyethoxylated retinamide derivatives and process for preparing the same
US6703381B1 (en) * 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
US7060708B2 (en) 1999-03-10 2006-06-13 New River Pharmaceuticals Inc. Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
KR100345214B1 (ko) 1999-08-17 2002-07-25 이강춘 생체적합성 고분자가 수식된 펩타이드의 비점막 전달
US6541508B2 (en) * 1999-09-13 2003-04-01 Nobex Corporation Taxane prodrugs
US6713454B1 (en) * 1999-09-13 2004-03-30 Nobex Corporation Prodrugs of etoposide and etoposide analogs
US6451806B2 (en) * 1999-09-29 2002-09-17 Adolor Corporation Methods and compositions involving opioids and antagonists thereof
DK1223915T3 (da) * 1999-10-29 2006-03-06 Nektar Therapeutics Törpulverpræparater med forbedret dispersivitet
WO2001068080A2 (en) 2000-03-15 2001-09-20 Wolfgang Sadee Neutral antagonists and use thereof in treating drug abuse
DE60115465T2 (de) * 2000-08-29 2006-08-03 Nobex Corp. Immunoregulierende verbindungen, deren derivate und ihre verwendung
ES2270955T3 (es) * 2000-12-22 2007-04-16 Smithkline Beecham Plc Sal mesilato de 5-(4-(2-(n-metil-n-(2-piridil)amino)etoxi)bencil)tiazolidina-2,4-diona.
US20020169125A1 (en) * 2001-03-21 2002-11-14 Cell Therapeutics, Inc. Recombinant production of polyanionic polymers and uses thereof
US6713452B2 (en) * 2001-06-04 2004-03-30 Nobex Corporation Mixtures of calcitonin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6858580B2 (en) * 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6828305B2 (en) * 2001-06-04 2004-12-07 Nobex Corporation Mixtures of growth hormone drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6835802B2 (en) * 2001-06-04 2004-12-28 Nobex Corporation Methods of synthesizing substantially monodispersed mixtures of polymers having polyethylene glycol moieties
CA2822457C (en) 2001-12-14 2016-03-08 The University Of Wyoming Methods and compositions for controlled resease of drugs
IL163666A0 (en) 2002-02-22 2005-12-18 New River Pharmaceuticals Inc Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
AU2003285200A1 (en) 2002-11-09 2004-06-03 Nobex Corporation Modified carbamate-containing prodrugs and methods of synthesizing same
GB0317815D0 (en) * 2003-07-30 2003-09-03 Amersham Health As Imaging agents
AU2004264818B2 (en) 2003-08-01 2011-09-29 Biocon, Ltd Aryl carbamate oligomers for hydrolyzable prodrugs and prodrugs comprising same
US7405198B2 (en) * 2003-11-24 2008-07-29 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
WO2005058367A2 (en) 2003-12-16 2005-06-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Pegylated small molecules
NZ572252A (en) * 2006-04-21 2011-09-30 Nektar Therapeutics Stereoselective reduction of a morphinone

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0995757A2 (en) * 1998-08-26 2000-04-26 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Bivalent inhibitors of the proteasome
WO2001019407A2 (en) * 1999-09-13 2001-03-22 Nobex Corporation Taxane prodrugs
US20030105275A1 (en) * 1999-12-22 2003-06-05 Shearwater Corporation Sterically hindered poly(ethylene glycol) alkanoic acids and derivatives thereof
WO2001047562A2 (en) * 1999-12-23 2001-07-05 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly(ethylene glycol)
WO2001062299A2 (en) * 2000-02-28 2001-08-30 Shearwater Corporation Water-soluble polymer conjugates of artelinic acid
US20020182172A1 (en) * 2000-11-30 2002-12-05 Shearwater Corporation Water-soluble polymer conjugates of triazine derivatives
WO2002065988A2 (en) * 2001-02-20 2002-08-29 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
WO2002089789A1 (en) * 2001-05-09 2002-11-14 Enzon, Inc. Trimethyl lock based tetrapartate prodrugs
US20030044402A1 (en) * 2001-09-05 2003-03-06 Nelson Deanna Jean Oligo(ethylene glycol)-terminated 1,2-dithiolanes and their conjugates useful for preparing self-assembled monolayers
WO2003032990A2 (en) * 2001-10-18 2003-04-24 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of opioid antagonists
US20040023852A1 (en) * 2001-10-18 2004-02-05 Roberts Michael J. Hydroxypatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers
WO2003037384A2 (en) * 2001-10-29 2003-05-08 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of protein kinase c inhibitors
WO2003037385A1 (en) * 2001-10-30 2003-05-08 Nektar Therapeutics Al, Corporation Water-soluble polymer conjugates of retinoic acid
WO2004082620A2 (en) * 2003-03-13 2004-09-30 Controlled Chemicals, Inc. Oxycodone conjugates with lower the abuse potential and extended duration of action

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EREZ M. ET AL.: "Narcotic antagonistic potency of bivalent ligands which contain beta-naltrexamine. Evidence for bridging between proximal recognition sites." JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 25, no. 7, July 1982 (1982-07), pages 847-849, XP002334914 ISSN: 0022-2623 abstract page 847, right-hand column page 848; tables I,II *
YAMASHITA K. ET AL.: "Micelle/monomer control over the membrane-disrupting properties of an amphiphilic antibiotic" JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 117, no. 23, 1995, pages 6249-6253, XP002334915 ISSN: 0002-7863 abstract page 6251, left-hand column page 6252, right-hand column, line 1 - page 6253, right-hand column, last line; figure 3 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102895666B (zh) 2015-08-19
PL1694363T3 (pl) 2014-07-31
US8034825B2 (en) 2011-10-11
EP2905033A1 (en) 2015-08-12
DK1694363T3 (en) 2014-03-24
EP2604282A1 (en) 2013-06-19
NZ583573A (en) 2011-12-22
EP2905033B1 (en) 2020-09-02
ES2733764T3 (es) 2019-12-02
HUS1500026I1 (hu) 2017-10-30
KR101168620B1 (ko) 2012-08-03
CA2549730A1 (en) 2005-06-30
WO2005058367A2 (en) 2005-06-30
US20100305147A1 (en) 2010-12-02
WO2005058367A3 (en) 2006-03-30
AU2004299138B2 (en) 2010-03-25
NL300737I2 (ru) 2017-01-31
IL229509A (en) 2016-05-31
HK1146645A1 (en) 2011-06-24
AU2004299138A1 (en) 2005-06-30
ZA200605763B (en) 2007-04-25
LTC1694363I2 (lt) 2017-05-10
EA201000994A2 (ru) 2011-08-30
CY2015019I2 (el) 2016-12-14
CN102895666A (zh) 2013-01-30
CA2549730C (en) 2012-02-14
JP2007514761A (ja) 2007-06-07
CY1114992T1 (el) 2016-12-14
EP1694363B1 (en) 2014-01-22
US20050136031A1 (en) 2005-06-23
HK1210418A1 (en) 2016-04-22
FR15C0037I1 (ru) 2015-06-26
HRP20140361T1 (hr) 2014-05-23
CN101805343A (zh) 2010-08-18
IL176317A (en) 2014-01-30
ES2445585T3 (es) 2014-03-04
US7786133B2 (en) 2010-08-31
EA200601167A1 (ru) 2006-12-29
RS53279B (en) 2014-08-29
PT1694363E (pt) 2014-02-20
CN1925875A (zh) 2007-03-07
NZ594834A (en) 2013-03-28
CA2758460A1 (en) 2005-06-30
CY2015019I1 (el) 2016-12-14
IL176317A0 (en) 2006-10-05
CA2758460C (en) 2014-09-23
CN101805343B (zh) 2014-04-16
AU2010202277A1 (en) 2010-06-24
EP1694363A2 (en) 2006-08-30
EA018427B1 (ru) 2013-07-30
JP4991312B2 (ja) 2012-08-01
IL229509A0 (en) 2013-12-31
EA201000994A3 (ru) 2011-10-31
AU2010202277B2 (en) 2013-03-21
SI1694363T1 (sl) 2014-03-31
EP2604282B1 (en) 2019-06-19
NZ548529A (en) 2010-08-27
FR15C0037I2 (fr) 2016-09-30
LU92702I2 (fr) 2016-07-29
KR20060126714A (ko) 2006-12-08
ES2817799T3 (es) 2021-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA015333B1 (ru) Композиции, содержащие конъюгаты, способы их получения и применение
US11129794B2 (en) Chemically modified small molecules
JP5243041B2 (ja) 安定化ポリマーチオール試薬
JP4490413B2 (ja) チオール選択的水溶性ポリマー誘導体
AU2014280956B2 (en) Chemically modified small molecules
MXPA06006914A (en) Chemically modified small molecules
AU2012227249B2 (en) Chemically modified small molecules