KR101132545B1 - 산후 포유류의 태반, 이의 용도 및 태반 줄기세포 - Google Patents

산후 포유류의 태반, 이의 용도 및 태반 줄기세포 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 방혈된 인간 태반으로부터 만능성(pluripotent) 또는 다능성(multipotent) 줄기세포를 포함하나 이들로써 제한되는 것은 아닌 태아-유사 줄기세포를 추출 및 회수하는 방법을 제공한다. 태반은 방혈된 태반을, 바람직하게는 항응고제 용액으로 관류시켜 잔류 세포를 플러슁시킴으로써 잔류 제대혈을 이동시키도록 처리된다. 방혈된 태반으로부터의 상기 잔류 세포 및 관류액은 수거되고, 상기 태아-유사 줄기세포는 잔류 세포 및 관류액으로부터 분리된다. 또한, 본 발명은 태아-유사 줄기세포를 포함하나 이들로써 한정되는 것은 아닌 외인성 세포를 증식시키는 바이오리액터(bioreactor)로서 격리 및 관류된 태반을 사용하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 태반 바이오리액터에서 외인성 세포를 증식시키고, 증식된 외인성 세포 및 이들로부터의 바이오액티브 분자를 수거하는 방법을 제공한다.
포유류, 태반, 줄기세포

Description

산후 포유류의 태반, 이의 용도 및 태반 줄기세포{POST-PARTUM MAMMALIAN PLACENTA, ITS USE AND PLACENTAL STEM CELLS THEREFROM}
1. 머리말
본 발명은 자궁으로부터의 만출 후, 예를 들어 출산 후 태반을 방혈 및 관류시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 격리된 태반을 상기 태반 및 외인성 공급원으로부터 유래하는 태아-유사 줄기세포의 증식을 위해 처리 및 배양하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 바이오리액터(bioreactor)로서 생체 물질 또는 배양 세포, 조직 및 유기관(organoid)을 생산하기 위한 배양된 태반의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은, 줄기세포의 수거와 증식, 특히 태반으로부터의 태아-유사 줄기세포 및 기타 다능성(multipotent) 줄기세포의 수거에 관한 것이다. 본 발명은 산후 태반으로부터 유래하는 태아-유사 줄기세포에 관한 것이다.
2. 발명의 배경
인간 줄기세포의 동정, 격리 및 발생에 대한 관심이 크다. 인간 줄기세포는 다양한 성인 세포 계통을 발생시킬 수 있는 전능성(totipotential) 또는 만능 성(pluripotential) 전구체 세포이다. 이 능력은 기관 및 조직 발달에 필요한 세포의 분화와 특수화를 위한 기초로서 작용한다.
최근, 이러한 줄기세포 이식이 성공함에 따라, 질환, 독성 화학물질 및/또는 방사선으로의 노출로 인한 골융해(myeloablation) 이후 골수를 재구성하고/하거나 보충하는 신규한 임상 도구가 제공되었다. 줄기세포가 다수의 조직을 모두는 아니지만 재증식시키고 생리학적 및 해부학적 기능을 회복시키는데 사용될 수 있음을 입증하는 추가의 증거가 존재한다. 또한, 조직 엔지니어링, 유전자 치료 분만 및 세포 치료제에서의 줄기세포의 적용이 급속도로 진행되고 있다.
다수의 상이한 유형의 포유류 줄기세포가 특성화되어 있다. 예를 들면, 태아 줄기세포, 태아 생식세포, 성장한 줄기세포 또는 다른 수임(committed) 줄기세포 또는 유래(progenitor) 줄기세포가 알려져 있다. 특정한 줄기세포는 격리되어 특성화되었을 뿐만 아니라 분화가 허용되는 조건하에 제한된 범위에서 배양되어 왔다. 그러나, 모든 유형의 세포로 분화할 수 있는 충분한 양 및 군집의 인간 줄기세포를 수득하는 것이 거의 불가능하다는 기본적인 문제점이 남아있다. 줄기세포의 공급은 크게 부족하다. 이들은 악성, 신진대사의 선천이상, 혈색소병증 및 면역결핍을 비롯한 다양한 장애의 치료에 중요하다. 더욱 많은 태아 줄기세포의 공급원을 갖는 것이 더욱 유리하다.
충분한 수의 인간 줄기세포의 수득은 몇몇 이유로 인해 문제가 되어 왔다. 우선, 혈액 또는 조직내에서 성장한 조직에서의 줄기세포의 자연발생적 군집의 격리는 부분적으로 매우 제한된 양만이 발견되기 때문에 기술적인 어려움이 있으며 비용이 많이 든다. 둘째로, 낙태아를 비롯한 태아 또는 태아 조직으로부터의 이들 세포의 조달은 종교적으로나 윤리적인 논쟁을 불러 일으켜 왔다. 인간 태아 및 태아가 독립적인 생명체라는 보편적인 믿음으로 인해, 의학적 연구를 비롯한 모든 목적으로서의 상기 공급원 사용에 대한 정부 차원의 제약을 고무시켜 왔다. 따라서, 줄기세포를 임상적으로 사용하는데 있어서 태아 또는 태아 조직으로부터 조달된 세포를 사용할 필요가 없는 다른 공급원은 추가적 진행에 필수적이다. 그러나, 줄기세포, 특히 인간 줄기세포의 다른 생존가능한 공급원이 거의 없기 때문에 공급이 제한된다. 더욱이, 다른 공급원으로부터 치료와 연구 목적에 충분한 양으로 줄기세포를 채취하는 것, 예를 들어 제공자 또는 환자로부터 세포 또는 조직을 채취하고, 생체외에서 세포를 배양하고/하거나 증식시키고, 절개 등을 실시하는 것을 포함하는 과정은 일반적으로 고된 작업이다.
예를 들면, 카플란(Caplan) 등의 문헌(1996년 1월 23일자로 허여된 "인간 중간엽 줄기세포(Human mesenchymal stem cells)"라는 제목의 미국특허 제 5,486,359 호)에서는 골수로부터 유도되어 중간엽세포 계통의 유래세포로서 작용하는 인간 중간엽 줄기세포(human mesenchymal stem cell, hMSC)를 개시하고 있다. 카플란 등은 hMSC가 단핵 항체로 동정되는 특수한 세포 표면 표지(marker)에 의해 동정된다. 동종 hMSC 조성물은, 조혈 세포 또는 분화 중간엽 세포와 연관된 표지가 없는 점착성 골수 또는 골막 세포의 포지티브 선택에 의해 수득된다. 이들 격리된 중간엽 세포 군집은 중간엽 줄기세포와 연관된 항원결정성(epitopic characteristic)을 나타내고, 배양중 분화없이 재생능력을 갖고, 손상된 조직 부위에서 생체외에서 유도 되거나 생체내에 위치되는 경우 특정 중간엽 계통으로 분화시키는 능력을 갖는다. 그러나, 이러한 방법의 단점은 이들이 MSC가 후속적으로 격리되어야 하는 제공자로부터의 골수 또는 골막 세포의 채취를 필요로 한다는 것이다.
후(Hu) 등의 문헌(2000년 12월 7일자로 공개된 "인간 양막 표피 세포의 격리 방법, 냉동보존 및 치료적 용도(Methods of isolation, cryopreservation, and therapeutic use of human amniotic epithelial cells)"라는 제목의 국제특허 공개공보 제 WO 00/73421 호)에서는, 분만시 태반으로부터 유도되어 향후 사용하기 위해 격리되고 배양되고 냉동보존되거나 또는 분화 유도되는 인간 양막 표피 세포를 개시하고 있다. 후 등에 따르면, 태반은 분만 즉시 채취되며, 양막은 융모막으로부터, 예를 들어 절개에 의해 분리된다. 양막 표피 세포는 표준 세포 격리 기술에 따라 양막으로부터 격리된다. 상기 개시된 세포는 다양한 매질내에서 배양되거나, 배양액중에서 팽창되거나, 냉동보존되거나, 분화 유도될 수 있다. 후 등은 양막 표피 세포가 다능성이고(가능하다면 만능성), 각막 표피 또는 질 표피와 같은 표피 조직으로 분화할 수 있음에 대해 개시하고 있다. 그러나, 이러한 방법의 단점은 이들이 노동집약적이며, 줄기세포의 수율이 매우 낮다는 것이다. 예를 들면, 전형적인 치료 또는 연구 목적을 위한 충분한 수의 줄기세포를 수득하기 위해, 양막 표피 세포는 우선 절개 및 세포 분리 기술에 의해 융모막으로부터 격리시킨 후, 배양하고, 생체외에서 팽창시켜야 한다.
제대혈은 조혈 유래 줄기세포의 공지된 다른 공급원이다. 제대혈로부터의 줄기세포는 통상적으로 조혈 재구성, 골수내에 사용되는 광범위하게 사용하는 치료 절차 및 다른 관련 이식에서 사용하기 위해 냉동보존된다(예를 들어, "혈액의 태아 및 신생아의 조혈 줄기세포 및 유래 세포의 보존(Preservation of Fetal and Neonatal Hematopoietin Stem and Progenitor Cells of the Blood)"라는 제목을 갖는 보이세(Boyse) 등의 미국특허 제 5,004,681 호, "혈액의 태아 및 신생아의 조혈 줄기세포 및 유래세포의 격리 및 보존, 및 치료용 사용방법(Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use)"라는 제목을 갖는 보이세 등의 미국특허 제 5,192,553 호(1993년 3월 9일 허여됨) 참조). 제대혈의 수거를 위한 통상적인 기술은 니들 또는 캐뉼라의 사용에 기초하며, 이는 중력의 도움으로 태반으로부터 제대혈을 배출(즉, 방혈)하는데 사용된다(1993년 3월 9일자로 허여된 보이세 등의 미국특허 제 5,192,553 호, 1991년 4월 2일자로 허여된 보이세 등의 미국특허 제 5,004,681 호, "태반 혈액 수거를 위한 방법 및 장치(Method and apparatus for placental blood collection)"이라는 제목으로 1994년 12월 13일자로 허여된 안데르센(Anthersen)의 미국특허 제 5,372,581 호, "제대를 죄고 절단하고 혈액을 수거하는 장치 및 그의 방법(Umbilical cord clamping, cutting, and blood collecting device and method)"이라는 제목으로 1995년 5월 16일자로 허여된 헤셀(Hessel) 등의 미국특허 제 5,415,665 호). 니들 및 캐뉼라는 통상적으로 제대 정맥내에 위치하며, 태반은 상기 태반으로부터 제대혈이 배출되는 것을 돕도록 부드럽게 마사지해 준다. 그러나, 이후에는 배출된 태반은 더이상 필요가 없는 것으로 여겨지며, 전형적으로 폐기되어 왔다. 더욱이, 제대혈로부터 줄기세포의 조달은 빈번히 불충 분한 양의 제대혈이 수득되고 이로 인해 이식 후 골수의 효과적인 재구성에서의 세포수가 불충분해진다는 한계사항이 존재한다.
노톤(Naughton) 등의 문헌("3차원 간질 조직 배양(Three-dimensional stromal tissue cultures)"이라는 제목으로 1999년 10월 5일자로 허여된 미국특허 제 5,962,325 호)에서는, 섬유아-유사 세포 및 연골세포-유래를 비롯한 태아 세포가 제대 또는 태반 조직 또는 제대혈로부터 수득될 수 있음을 개시하고 있다. 노톤 등의 문헌(미국특허 제 5,962,325 호)에서는, 이러한 태아 간질 세포가 "일반적인" 간질 또는 연골 조직을 제조하는데 사용될 수 있음을 개시하고 있다. 또한, 노톤 등은, "특정한" 간질 조직이 이후에 상기 개시된 방법에 따라 배양액중에서 성장된 세포 및/또는 조직을 수용하는 특정 개인으로부터 유도된 섬유아 세포로 3차원 세포간질을 접종함으로써 제조될 수 있음을 개시하고 있다. 그러나, 이러한 접근에서의 단점은 노동집약적이라는 것이다. 노톤 등에 개시된 방법에 따라, 제대 또는 태반으로부터 태아 간질 세포를 회수하기 위해서는 이들 조직을 절개하며, 상기 조직을 조각으로 잘게 절개하고, 분해시키는 것이 필요하다. 더욱이, 충분한 양의 태아 간질 세포를 제대 및 태반 뿐만 아니라 제대혈로부터 수득하기 위해서는 생체외에서 추가로 팽창시킬 필요가 있다.
세포 군집의 생체외 팽창을 위한 현재의 허용가능한 방법도 또한 노동집약적이다. 예를 들면, 에머손(Emerson) 등의 문헌("줄기세포의 생체외 복제를 위해, 조혈 유래 세포 배약액을 최적화시키기 위해, 및 인간 간질 세포의 대사, GM-CSF 분비 및/또는 IL-6 분비를 증가시키기 위한 방법 및 조성물(Methods and compositions for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells)"이라는 제목으로 2001년 12월 4일자로 에머손 등에게 허여된 미국특허 제 6,326,198 호)에서는, 인간 줄기세포 분열의 생체외 배양을 위한 방법 및 배지 조건 및/또는 조혈 유래 줄기세포의 최적화를 개시하고 있다. 상기 개시된 방법에 따르면, 골수로부터 유도된 인간 줄기세포 또는 유래 세포는, 약 23 내지 약 48시간 마다 배양액 1㎖당 1㎖의 매질의 속도로 연속적으로 또는 주기적으로 대체되는, 바람직하게는 살포되는 액체 배지중에서 배양된다. 배양액이 생리학적으로 허용가능한 조건하에서 유지되지만, 대사 생성물은 제거되며, 고갈된 영양분이 보충된다.
크라우스(Kraus) 등의 문헌("표적 세포 군집의 선택적 팽창(Selective expansion of target cell populations)"이라는 제목으로 2002년 1월 15일자로 허여된 크라우스 등의 미국특허 제 6,338,942 호)에서는, 세포의 소정의 표적 군집이 세포의 출발 샘플을 제대혈 또는 골막 혈액으로부터 성장 매질내로 유입시켜 상기 표적 세포 군집의 세포를 분할시키고, 세포의 소정의 군집(예를 들어, CD34 세포)을 위한 특정 친화력을 갖는 결합 분자(예를 들어, CD34를 위한 단핵성 항체)를 포함하는 선택 요소와 상기 세포를 성장 매질중에서 접촉시켜서, 소정 표적 군집의 세포를 성장 매질중에서 다른 세포중에서 선택함으로써 선택적으로 팽창될 수 있음을 개시하고 있다.
로저스(Rodgers) 등의 문헌("조혈 및 중간엽 세포 증식 및 분화를 촉진시키 는 방법(Method for promoting hematopoietic and mesenchymal cell proliferation and differentiation)"라는 제목으로 2002년 1월 1일자로 허여된 미국특허 제 6,335,195 호)에서는, 안지오텐시노겐(angiotensiogen), 안지오텐신(angiotensin) I(AI), AI 동종체, AI 절편 및 그의 동종체, 안지오텐신 II(AII), AII 동종체, AII 절편 및 그의 동종체, 또는 AII AT2 유형 2 수용체 작용물질이 단독적으로 또는 다른 성장 인자 및 사이토킨과의 혼합물의 존재하에서의 성장에 의해, 계통-특이적 세포 증식 및 분화의 유도, 및 조혈 및 중간엽 줄기세포의 생체외 배양을 위한 방법이 개시되어 있다. 줄기세포는 골수, 골막 혈액 또는 제대혈로부터 유도된다. 그러나, 이러한 방법의 단점은 줄기세포의 증식 및 분화를 유도하기 위한 이러한 생체외 방법은 전술된 바와 같이 시간 소모적이며, 또한 줄기세포의 낮은 수율을 나타낸다.
노톤 등의 문헌("생체외에서 생산된 이자 중간엽 세포-배양된 살아있는 간질 조직의 3차원 배양(Three-dimensional culture of pancreatic parenchymal cells cultured living stromal tissue prepared in vitro)"라는 제목으로 2000년 2월 8일자로 허여된 미국특허 제 6,022,743 호)에서는, 줄기세포 또는 유래 세포(예를 들어, 제대 세포, 태반 세포, 중간엽 줄기세포 또는 태아 세포로부터 유도된 것과 같은 간질 세포)가 예를 들어 배양 용기(예: 플라스크 또는 디쉬)내에 2차원적 단층이 아닌 3차원적 지지체상에서 증식시키는 조직 배양 시스템에 관하여 개시하고 있다.
줄기세포의 수거 및 사용에 대한 제약, 및 전형적으로 불충분한 수의 세포가 제대혈로부터 수거되기 때문에, 줄기세포의 공급이 매우 적다. 줄기세포는 악성, 신진대사의 선천이상, 혈색소병증 및 면역결핍을 비롯한 매우 다양한 장애의 치료에 사용될 수 있는 잠재력을 갖는다. 다양한 치료 목적 및 다른 의학-관련 목적을 위해 다수의 인간 줄기세포의 손쉽게 입수가능한 공급원이 절실히 요구된다. 본 발명은 이러한 요구 및 다른 요구에 관한 것이다.
3. 발명의 요약
본 발명은 포유류의 태반, 바람직하게는 인간의 태반에 관한 것으로, 이는 자궁으로부터의 만출 후, 처리 및 배양되어 다능성 줄기세포(예를 들어, 수임 유래 세포), 태아-유사 줄기세포 및 다른 생체 물질을 생성한다. 특히, 본 발명은 산후 태반을 관류 및 방혈시키는 방법을 제공한다. 본 발명은 자궁으로부터 태반이 만출된지 적어도 2시간에서부터 48시간 초과 동안 멸균 조건하에서 태반을 방혈 및 관류시키는 방법을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 태반은 방혈을 향상시키는 인자, 예를 들어 성장 인자를 함유하는 용액으로 관류된다. 다른 실시양태에서, 태반은 멸균 조건을 향상시키는 인자, 예를 들어 항미생물제 및 항바이러스제를 함유하는 용액으로 관류된다. 바람직한 실시양태에서, 태반은 성장 인자를 함유하는 용액으로 관류된다. 성장 인자 및 다른 배양 성분을 함유하지만 항응집제를 함유하지 않는 이러한 용액은 배양 용액으로 지칭된다.
본 발명의 다른 바람직한 실시양태에서, 태반은 혈액, 잔류 세포, 단백질 및 임의의 다른 잔류 물질을 제거하기 위해 관류된다. 태반은 추가로 가공되어 물질 파편을 제거할 수 있다. 관류는 보통 2시간 이상 내지 24시간 초과의 시간 동안 적절한 관류액(perfusate)으로 연속 실시된다. 본 발명의 몇몇 추가 실시양태에서, 태반은 줄기세포의 수거 전에 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 및 22시간 이상 동안 관류된다. 또한, 이들 시간 동안 임의의 지점으로부터 수거된 관류액은 태아-유사 줄기세포의 공급원을 제공할 수 있다. 태반으로부터 혈액의 제 1 수거는 제대혈로서 지칭되며, 이는 주로 CD34+ 및 CD38+ 조혈 유래세포를 함유하는 것으로 이해된다. 산후 관류의 첫째 24시간 이내에 CD34+ 및 CD38- 조혈 유래세포가 CD34+ 및 CD38- 세포와 함께 태반으로부터 격리될 수 있다. 관류 약 24시간 후, CD34+ 및 CD38- 세포는 전술된 세포와 함께 태반으로부터 격리될 수 있다.
본 발명은 멸균 조건하에서 방혈 및 관류된 격리 태반에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 방혈 및 관류되어 모든 잔류 세포를 제거하고 2 내지 24시간 동안 배양한 후 자궁으로부터 만출된 격리 태반을 제공한다. 본 발명은 또한 처리 및 배양되어 태아-유사 줄기세포, 유래 세포 및 다른 생체 물질을 생성시킬 수 있는 생존 기관을 나타내는 격리된 태반을 제공한다.
본 발명은, 방혈 및 관류된 산후 포유류 태반; 상기 태반을 항온처리 또는 배양하는 수단; 줄기세포를 검출하는 수단을 포함하는 줄기세포 생성장치에 관한 것이다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 상기 장치는 수거장치 및/또는 상기 수거된 세포의 분리수단을 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 장치는 세포의 배양 조건 및 수거를 감시 및 조정하는 수단을 추가로 포함한다.
또한, 본 발명은 태반으로부터 유래된 태아-유사 줄기세포를 제조할 수 있도록 적절한 조건하에서 격리된 방혈 태반을 항온처리 및 배양하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따라, 태아-유사 줄기세포는 자궁으로부터 만출된 태반으로부터 수득된다. 태반은 2 내지 24시간 이상 동안 방혈 및 관류되어 모든 잔류 세포를 제거한다. 그 다음, 방혈된 태반은 태반으로부터 유래된 내인성 줄기세포(이는 태아-유사 줄기세포 및 만능성 또는 다능성 줄기세포를 포함하나 이로써 한정되는 것은 아니다)를 제조할 수 있도록 적절한 조건하에서 배양된다. 바람직한 실시양태에서, 방혈된 태반은 성장 인자(예: PDGF 및 EGF)의 존재하에서 배양된다.
본 발명은 태반으로부터 유래된 내인성 줄기세포의 증식을 위해 바이오리액터로서 사용하기 위한 격리된 태반을 처리 및 배양하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명은 외인성 세포 및 생체 물질, 예를 들어 항체, 단백질, 올리고뉴클레오타이드, 호르몬, 바이러스, 사이토킨 및 효소의 증식을 위해 바이오리액터로서 사용하기 위한 격리된 태반을 처리 및 배양하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 태반으로부터 태아-줄기세포 및 다른 만능성 및 다능성 줄기세포의 증식 및 수거를 제공한다. 배양된 태반은 바이오리액터로서 반복적으로 사용될 수 있고, 수일, 수개월 및 더욱이 수년에 걸쳐서도 배양될 수 있다. 배양된 태반은 배지 또는 관류 유체의 일부(이는 시스템내로 유입되며, 증식된 세포 또는 제조된 생체 물질이 회 수될 수 있으며, 새로운 매질 또는 관류액 액체와 교체된다)를 주기적으로 또는 연속적으로 제거함으로써 유지될 수 있다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 태아-유사 줄기세포, 유래 세포, 만능성 세포 및 다능성 세포를 포함하지만 이에 국한되지 않는 내인성 세포를 증식시키는 바이오리액터로서 격리 및 관류된 태반을 이용하는 방법을 제공한다. 태반 바이오리액터내에서 증식된 내인성 세포는 수거되고/되거나, 바이오액티브 분자는 관류액인 배지 또는 태반 세포 자체로부터 회수된다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 외인성 세포를 증식시키는 바이오리액터로서 격리 및 관류된 태반을 이용하는 방법을 제공한다. 이 실시양태에 따라, 본 발명은 태반으로부터 유도되지 않은 세포를 함유하는 격리된 태반에 관한 것으로, 여기서 상기 세포를 태반내에 생착(engraftment)시키는 것이 태반을 자극하여 태아-유사 줄기세포를 생성시키거나, 또는 생착된 세포는 신호(예: 사이토킨 및 성장 인자)를 생성시키며, 이는 태반을 자극하여 줄기세포를 생성시킬 수 있다. 이 실시양태에 따라, 태반은 상기 태반과 연관된 소아로부터 수득되는 세포(이는 태반에 유래되지 않음)로 접합될 수 있다. 다른 실시양태에서, 태반은 상기 태반과 연관된 소아의 부모 또는 형제자매로부터 수득되는 세포(이는 태반에 유래되지 않음)로 접합될 수 있다. 태반 바이오리액터내에서 증식된 외인성 세포는 수거될 수 있고/있거나 바이오액티브 분자는 관류액인 배지 또는 태반 세포 자체로부터 회수될 수 있다.
본 발명은 태반으로부터 유래하는 태아-유사 줄기세포를 제공한다. 본 발명 의 태아-유사 줄기세포는 유동 세포측정 및 면역세포화학과 같은 기술을 사용하여 형태 및 세포 표면 표지에서의 변화를 측정하고 PCR과 같은 기술을 사용하여 유전자 발현에서의 변화를 측정함으로써 특성화할 수 있다. 본 발명의 한 실시양태에서, 이러한 태아-유사 줄기세포는 하기 세포 표면 표지의 존재에 의해 특성화할 수 있다: CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+ 및 ABC-p+. 바람직한 실시양태에서, 이러한 태아-유사 줄기세포는 세포 표면 표지 OCT-4+ 및 APC-p+의 존재로 특성화될 수 있다. 태반으로부터 유래하는 태아-유사 줄기세포는 태아 줄기세포의 특징을 갖지만 태아로부터 유도되지는 않는다. 즉, 본 발명은 산후 관류된 태반으로부터 격리된 분화되지 않은 줄기세포인 OCT-4+ 및 ABC-p+ 세포를 포함한다. 이러한 세포는 인간 태아 줄기세포로서 다기능적이다(예를 들어, 다능성이다). 전술된 바와 같이, 다수의 상이한 만능성 또는 다능성 줄기세포는 상이한 시간에 관류된 태반으로부터 격리될 수 있으며, 그 예로는 CD34+/CD38+, CD34+/CD38- 및 CD34-/CD38- 조혈 세포가 있다. 본 발명에 따라, 인간 태반은 태아-유사 줄기세포의 공급원으로서 산후에 사용된다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 방혈된 태반의 추출물 또는 관류액으로부터 다른 태아-유사 및/또는 다잠재성 또는 다능성 줄기세포를 격리시키는 방법을 제공한다.
본 발명은 본 발명의 태아-유사 줄기세포를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 모든 세포 유형으로 분화시키는 잠재력을 갖는 인간 태반 줄기세포의 격리된 균질한 군집에 관한 것이다. 또한, CD34+/CD38- 세포 및 CD34-/CD38- 세포를 포함하나 이로써 한정되는 것은 아닌 고농도의(또는 큰 군집의) 균질한 조혈 줄기세포를 갖는 약학 조성물에 관한 것이다. 이들 세포 군집중 하나 이상은 제대혈 조혈 세포, 즉, 이식용 및 다른 용도의 CD34+/CD38+ 조혈 세포와 함께 또는 그와의 혼합물로서 사용될 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 수득된 줄기세포는 질환의 치료 또는 예방을 위해 이식시 다수의 용도를 갖는다. 본 발명의 한 실시양태에서, 이들은 조직 및 기관을 회복 및 재군집화시키며, 이로써 감염된 조직, 기관 또는 그의 부분을 대체 또는 복구하는데 사용된다.
3.1. 정의
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "바이오리액터"는 세포를 증식시키고, 생체 물질을 생산 또는 발현시키고, 세포 조직, 유기관, 바이러스, 단백질, 폴리뉴클레오타이드 및 미생물을 성장 또는 배양시키기 위한 생체외 시스템을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "태아 줄기세포"는 (예를 들어 4 내지 5살의 인간 태아의) 포배낭(blastocyst)의 내부 세포 덩어리로부터 유도된 세포를 지칭하며 만능성이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "태아-유사 줄기세포"는 포배낭의 내부 세포 덩어리로부터 유도되지 않은 세포를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "태아-유사 줄기세포"는 또는 "태반 줄기세포"로서 지칭될 수 있다. 태아-유사 줄기세포는 만능성인 것이 바람직하다. 그런, 태반으로부터 수득될 수 있는 줄기세 포는 태아-유사 줄기세포, 다잠재성 세포 및 수임 유래 세포를 포함한다. 본 발명의 방법에 따라, 태반으로부터 유도된 태아-유사 줄기세포는, 일단 잔류 세포를 제거하는데 충분한 시간 동안 방혈 및 관류된다면, 격리된 태반으로부터 수거될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "방혈된" 또는 "방혈"는 태반에 대해 사용되는 경우 태반으로부터의 실질적으로 모든 제대혈을 제거 및/또는 배출시키는 것을 지칭한다. 본 발명에 따라, 태반의 방혈은 예를 들어 배출, 중력-유도된 유출, 마사지, 스퀴징(squeezing), 펌핑 등에 의해(이로써 한정되는 것은 아님) 달성될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 태반의 방혈은 또한 항응집제와 같은 제제를 함유하거나 함유하지 않아 태반의 방혈에 도움이 되는 유체로 태반을 관류시키거나 헹구거나 플러슁시킴으로써 달성될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "관류하다" 또는 "관류"는 기관 또는 조직상에 또는 그를 통해 유체를 붓거나 통과시키는 행위, 바람직하게는 기관 또는 조직을 통해 유체를 임의의 잔류 세포, 예를 들어 기관 또는 조직으로부터 부착되지 않은 세포를 제거하는데 충분한 힘 또는 압력으로 통과시키는 행위를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "관류액"은 기관 또는 조직을 통과시킨 후 수거된 유체를 지칭한다. 바람직한 실시양태에서, 관류액은 하나 이상의 항응집제를 함유한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "외인성 세포"는 "외계" 세포, 즉 이종성 세포(즉, 태반 제공자 이외의 공급자로부터 유도된 "비-자가(non-self)" 세포) 또 는 동종성 세포(즉, 태반 제공자로부터 유도된 "자가" 세포)를 지칭하며 태반 이외의 기관 또는 조직으로부터 유도된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "유기관"는 포유류 신체, 바람직하게는 인간 신체의 임의의 기관 또는 선(腺)으로서 인조 외형으로 또는 실제 구조로 조립된 하나 이상의 세포 유형의 응집물을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "다능성 세포"는 포유류 신체의 약 260개 세포 유형의 임의의 하위세트로의 성장능력을 갖는 세포를 지칭한다. 만능성 세포와 달리, 다능성 세포는 모든 세포 유형을 형성하려는 능력을 갖지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "만능성 세포"는 완벽한 분화 다기능성, 즉 임의의 포유류 신체의 약 260개 세포 유형으로의 성장능력을 갖는 세포를 지칭한다. 만능성 세포는 자가-교체할 수 있으며, 조직내에서 잠복적인 또는 비활성적인 상태로 남아있을 수 있다. 전능성 세포(예를 들어, 수정된 이배체 난세포)와 달리, 태아 줄기세포는 통상적으로 새로운 포배낭을 형성할 수 없다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "유래세포"는 특정 유형의 세포로 분화되거나 특정 유형의 조직을 형성하도록 된 세포를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "줄기세포"는 조직 및 기관의 특수화된 세포를 형성하도록 비제한적으로 재생할 수 있는 마스터 세포를 지칭한다. 줄기세포는 발달가능한 만능성 또는 다능성 세포이다. 줄기세포는 2개의 딸줄기세포, 또는 하나의 딸줄기세포와 하나의 유래("전이(transit)") 세포로 분열될 수 있으며, 이후에 조직의 성숙하고 완전한 형태의 세포로 증식된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "전능성 세포"는 완벽한 태아(예: 포배낭)를 형성할 수 있는 세포를 지칭한다.
4. 발명의 상세한 설명
본 출원인은 예기치않게도 산후 태반이 출산 후에 적절히 가공된다면 활성화될 수 있는 비활성적 세포를 함유하고 있음을 밝혀냈다. 예를 들면, 자궁으로부터 만출 후, 태반은 가능한 한 신속하게 방혈시켜 세포자멸(apoptosis)을 방지하거나 최소화시킨다. 후속적으로, 방혈 후 가능한 한 곧바로 태반을 관류시켜 혈액, 잔류 세포, 단백질, 인자 및 기타 기관내에 존재하는 임의의 물질을 제거한다. 물질 파편은 또한 태반으로부터 제거될 수 있다. 관류는 통상적으로 적어도 2 내지 24시간 이상 동안 적절한 관류액으로 연속적으로 실시된다. 몇몇 추가 실시양태에서, 태반은 적어도 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 및 22시간 동안 관류된다. 즉, 본 발명은 적어도 부분적으로는 산후 태반의 세포가 충분한 시간 동안 방혈 및 관류에 의해 활성화될 수 있다는 발견에 기초를 둔다. 따라서, 태반은 태아-유사 줄기세포의 풍부하고 풍족한 공급원으로서 사용되기 용이할 수 있으며, 상기 세포는 약물 발견, 질환의 치료 및 예방, 특히 이식 수술 또는 치료를 비롯한 연구, 및 수임 세포, 조직 및 유기관의 생성을 위해 사용될 수 있다.
또한, 놀랍고 예기치 않게도, 방혈, 관류 및/또는 배양된 태반에 의해 생성된 인간 태반 줄기세포는 임의의 목적하는 세포 유형으로 쉽게 분화될 수 있는 만능성 줄기세포이다.
본 발명은 태반 또는 외인성 공급원으로부터 유래하는 태아-유사 줄기세포의 생산 및 증식을 위해 바이오리액터로서 사용하기 위한 격리된 태반을 처리하고 배양하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 항체, 호르몬, 사이토킨, 성장 인자 및 바이러스를 포함하나 이로써 한정되는 것은 아닌 생체 물질을 생산하기 위한 바이오리액터로서의 배양된 태반의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 배양된 태반으로부터 줄기세포 및 생체 물질을 수거 및 격리시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 격리된 태반을 일단 자궁으로부터 제거되면 관류 및 방혈시켜 모든 잔류 세포를 제거하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 적절한 조건하에서 격리 및 방혈된 태반을 배양하여 태아-유사 줄기세포를 생산 및 증식시키는 것에 관한 것이다.
본 발명은 태아-유사 줄기세포(이는 만능성 또는 다능성 줄기세포를 포함하나 이로써 한정되는 것은 아님)를 방혈된 인간 태반으로부터 추출 및 회수하는 방법을 제공한다. 태아-유사 줄기세포는 태아-줄기세포의 특징을 갖지만 태아로부터 유도되지는 않는다. 이러한 세포는 인간 태아 줄기세포로서 다기능적이다(예를 들어, 플루리포텐드이다). 본 발명의 방법에 따라, 인간 태반은 태아-유사 줄기세포의 공급원으로서 산후에 사용된다.
본 발명에 따라, 태아-유사 줄기세포는 배출된 태반으로부터 제대 정맥과 제대 동맥중 하나 또는 모두를 이용하는 관류 기술을 사용하여 추출된다. 태반은 잔류 혈액(예를 들어, 잔류 제대혈)의 방혈 및 수거에 의해 배출시키는 것이 바람직하다. 그 다음, 배출된 태반은, 실질(parenchyma) 공간 및 혈관외 공간내의 잔류 태아-유사 줄기세포가 보충되는 생체외 천연 바이오리액터 환경을 달성하는 방식으 로 가공된다. 태아-유사 줄기세포는 본 발명에 따라 바람직하게는 관류에 의해 수거 용기내로 세척함으로써 수거되는 경우 배출된 빈공간의 미세순환내로 이동된다.
4.1. 태반의 격리 및 순환 방법
4.1.1. 태반의 예비처리
본 발명의 방법에 따라, 인간 태반은 산후 만출 후 신속하게 회수되며, 특정 실시양태에서는 태반내의 제대혈이 회수된다. 특정 실시양태에서, 태반은 통상의 제대혈 회수 공정을 가한다. 이러한 제대혈 회수는 시판중이며, 예를 들어 라이프뱅크 인코포레이티드(LifeBank Inc.), 세다 놀스(Cedar Knolls), 엔제이(N.J.), 비아코드(ViaCord), 코드 블러드 레지스트리(Cord Blood Registry) 및 크라이오셀(Cryocell)로부터 구입가능하다. 제대혈은 태반의 만출 후 즉시 배출될 수 있다.
산후 태반은 제대혈이 배출된다. 태반은 멸균 조건하에서 실온 또는 5 내지 25℃에서 저장될 수 있다. 태반은 상기 태반을 관류시켜 임의의 잔류 제대혈을 제거하기 전 48시간 초과, 바람직하게는 4 내지 24시간 동안 저장될 수 있다.
전형적으로, 태반은 제대혈의 회수 및/또는 배출 및 관류를 위해 분만실 또는 출산실로부터 다른 위치(예: 실험실)로 이송된다. 태반은 도 2a 내지 2e에 도시된 바와 같이 (20 내지 28℃의 태반 온도를 유지시키는) 멸균의 절연된 이송 장치내로 예를 들어 태반을 인접한 제대로 죄어 멸균 집-락(zip-lock) 비닐봉지내에 넣은 후, 폐쇄 용기내에 위치시켜 이송되는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 태반은 분만실에서 4 내지 24시간 후 실험실로 전달된다.
태반은 무균 조건하에서 만출 후 회수되고 5 내지 25℃의 온도에서 항응집성 용액내에 저장하는 것이 바람직하다. 적합한 항응집제 용액은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들면, 헤파린 또는 와파린(warfarin) 나트륨의 용액이 사용될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항응집제 용액은 헤파린 용액(1:1000 용액중 1% w/w)을 포함한다. 배출된 태반은 태아-유사 줄기세포가 수거되기 전 36시간 이하의 시간 동안 저장하는 것이 바람직하다. 태반을 관류시켜 잔류 세포를 제거하는데 사용되는 용액은 줄기세포의 회수를 위해 태반을 관류 및 배양시키는데 사용된 동일한 용액일 수 있다. 이들 임의의 관류액은 수거되며 태아-유사 줄기세포의 공급원으로서 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 인접한 제대는 제대혈 회수 전에 바람직하게는 태반 원반내로 4 내지 5㎝이내에서 죈다. 다른 실시양태에서, 인접한 제대는 제대혈 회수 후이지만 태반을 추가로 가공하기 전에 죈다.
제대혈의 수거를 위한 통상적인 기술이 사용될 수 있다. 전형적으로, 니들 또는 캐뉼라가 중력의 도움으로 사용되어 태반으로부터 (방혈시켜) 제대혈을 배출시킨다(1993년 3월 9일자로 허여된 보이세 등의 미국특허 제 5,192,553 호, 1991년 4월 2일자로 허여된 보이세 등의 미국특허 제 5,004,681 호, "태반 혈액 수거를 위한 방법 및 장치"라는 제목으로 1994년 12월 13일자로 허여된 안데르센의 미국특허 제 5,372,581 호, "제대를 죄고 절단하고 혈액을 수거하는 장치 및 그의 방법"이라는 제목으로 1995년 5월 16일자로 허여된 헤셀 등의 미국특허 제 5,415,665 호). 니들 및 캐뉼라는 통상적으로 제대 정맥내에 위치하며, 태반은 상기 태반으로부터 제대혈이 배출되는 것을 돕도록 부드럽게 마사지해 준다.
바람직한 실시양태에서, 태반은 통지된 동의서, 및 임신 전, 임신 기간 동안 및 임신 후에도 취해지며 태반과 연관된 환자의 완벽한 의료 이력에 의해 환자로부터 회수된다. 이들 의료 기록은 태반 또는 이로부터 채취된 줄기세포의 연속적인 사용을 협력하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 그 다음에 인간 태반 줄기세포는 해당 소아, 부모, 형제자매 또는 다른 친척에 관한 개별화된 의료를 위해 쉽게 사용될 수 있다. 사실상, 인간 태반 줄기세포는 제대혈보다 다기능적이다. 그러나, 본 발명이 방혈, 관류 및/또는 배양된 태반에 의해 제조된 인간 태반 줄기세포를 동일하거나 상이한 태반 및 제대로부터의 제대혈에 첨가함을 포함함을 유의해야 한다. 생성된 제대혈은 증가된 농도/군집의 인간 줄기세포를 가질 것이므로 이식, 예를 들어 골수 이식에 더욱 유용할 것이다.
4.1.2. 태반의 방혈 및 잔류 세포의 제거
본 발명은, 방혈된 태반, 즉 산후 잔류하는 제대혈의 완벽한 배출 및/또는 통상적인 제대혈의 회수 절차를 통해 방혈된 태반으로부터 줄기세포 또는 유래 세포(이는 태아-유사 줄기세포를 포함하지만 이에 국한되지 않음)를 회수하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따라, 태반은 적합한 수성 관류 유체, 예를 들어 항응집제(예: 헤파린, 와파린 나트륨)가 용해된 수성 등장성 유체로 방혈 및 관류된다. 관류를 위한 이러한 수성 등장성 유체는 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 0.9N 염화나트륨 용액을 포함한다. 관류 유체는 어떠한 잔류 제대혈의 혈병 형성을 막기에 충분한 농도로 항응집제(예: 헤파린 또는 와파린 소듐)를 포함하는 것이 바람직하 다. 특정 실시양태에서, 1 내지 100유닛 농도의 헤파린을 사용하며, 바람직하게는 ㎖당 1 내지 10유닛 농도의 헤파린이 사용된다. 한 실시양태에서, 자유 라디칼 스캐빈저, 특히 산소 자유 라디칼 스캐빈저와 같은 세포사멸 억제제가 방혈 기간 동안 및 방혈 후 즉시 사용한 후, 이들 제제는 태반으로부터 세척될 수 있다. 본 발명의 이 실시양태에 따라, 격리된 태반은 세포사멸을 방지 또는 억제하기 위해 조건하에서 저장될 수 있다.
본 발명의 방법에 따라, 태반은 제대 동맥 및 제대 정맥중 하나 또는 모두를 통한 관류 유체를 통해 방혈된다. 태반은 제대 동맥 및 제대 정맥이 태반의 가장 높은 지점에 위치하는 방식으로 배향되는(즉, 매달리는) 것이 바람직하다. 바람직한 실시양태에서, 제대 동맥 및 제대 정맥은 도 1에 도시된 바와 같이 가요성 커넥터를 통해 관류 유체의 저장기에 연결된 피펫에 동시에 연결된다. 관류 유체는 제대 정맥 및 동맥내로 통과하며, 회임 기간 동안 모체의 자궁에 부착된 태반의 표면으로부터 적합한 개방 용기내에 수거된다. 관류 유체는 또한 제대 개구부를 통해 유입되어 모체 자궁벽을 향하는 태반의 벽내의 개구부 밖으로 유동 또는 퍼큘레이트하게 한다(perculate).
바람직한 실시양태에서, 인접한 제대는 관류 동안 죄고, 더욱 바람직하게는 태반 원반내로의 제대 삽입 4 내지 5㎝내에서 죈다.
한 실시양태에서, 모든 잔류 제대혈이 제거되어 태반 세포(이는 제대혈의 제거 후 태반내에 남아 있는 태아-유사 줄기세포 및 유래 세포를 포함하지만 이에 국한되지 않는다)의 후속적인 수거 또는 회수가 되도록 충분량의 관류 유체가 사용된 다.
관류 유체가 우선 방혈 과정 동안 태반으로부터 수거되는 경우, 상기 유체가 제대혈의 잔류 적혈구 세포로 착색되어 있음을 관찰하였다. 관류 유체는 관류됨에 따라 더욱 맑아지는 경향을 가지며, 잔류 제대혈 세포는 태반으로부터 씻겨 나간다. 일반적으로, 관류 유체 30 내지 100㎖는 태반을 방혈시키고 태반으로부터 태아-유사 세포의 초기 군집을 회수하는데 충분하지만, 다소 관류 유체는 관찰된 결과에 따라 달리 사용될 수 있다.
4.1.3. 태반 배양
태반을 방혈시키고 충분한 시간 동안 관류시킨 후, 태아-유사 줄기세포는, 본 발명의 방법에 따라 바람직하게는 관류에 의해 수거 용기내로 세척됨으로써 수거되는 경우, 태반의 방혈 및 관류된 미세순환내로 이동하는 것으로 관찰된다. 격리된 태반을 관류시키는 것은 잔류 제대혈을 제거할 뿐만 아니라 산소를 비롯한 적절한 영양분이 태반에 제공된다. 태반은 잔류 제대혈 세포를 제거하는데 사용되는 유사 용액으로 바람직하게는 항응집제의 첨가없이 배양 및 관류시킨다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 배출된 방혈 태반은 바이오리액터로서, 즉 세포를 증식시키거나 생체 물질을 생산하기 위한 생체외 시스템으로서 배양된다. 태반 바이오리액터내에 증식된 세포의 갯수 또는 생성된 생체 물질의 수준은, 태반 바이오리액터내로 유입되는 배지 또는 관류 유체의 일부를 주기적으로 또는 연속적으로 제거함으로써 연속 상태의 균형된 성장을 유지시키며, 이로부터 상기 증식된 세포 또는 생성된 생체 물질이 회수될 수 있다. 새로운 매질 또는 관류 유체는 동 일한 속도 또는 동일한 양으로 유입된다.
증식된 세포의 갯수 및 유형은 유동 세포측정, 세포 분류, 면역세포화학(예를 들어, 조직 특이성 또는 세포-표지 특이적 항체로 염색시킴), 형광 활성화 세포 분류(fluorescence activated cell sorting, FACS), 자기 활성화 세포 분류(magnetic activated cell sorting, MACS)와 같은 표준 세포 검출 기술을 사용하는 형태 및 세포의 표면 표지에서의 변화를 측정하건, 광학 현미경 또는 공초점(confocal) 현미경을 사용하여 세포의 형태를 검사하거나, 또는 PCR 및 유전자 발현 프로파일링(profiling)과 같이 당해 분야에 잘 공지된 기술을 사용하여 유전자 발현에서의 변화를 측정함으로써 쉽게 모니터링될 수 있다.
한 실시양태에서, 세포는 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 분류될 수 있다. 형광 활성화 세포 분류(FACS)는 세포를 비롯한 입자를 분리시키기 위한 공지된 방법(이는 입자의 형광 특성을 기초로 한다)이다(카마츠(Kamarch)의 문헌 "1987, Methods Enzymol, 151:150-165"). 개별 입자내의 형광 잔기의 레이저 여기화는 혼합물로부터 양(+)의 입자와 음(-)의 입자를 전자기적으로 구별하는 작은 전하를 나타낸다. 한 실시양태에서, 세포 표면 표지-특이적 항체 또는 리간드는 분명한 형광 라벨로 표지된다. 세포는 세포 분류기를 통해 처리되어 그들의 사용된 항체에 대한 결합 능력에 기초하여 세포가 분리된다. FACS-분류된 입자는 96웰 또는 384웰 플레이트의 개별 웰내에 직접 침착되어 분리 및 클로닝을 촉진시킬 수 있다.
다른 실시양태에서, 자기 비이드가 세포를 분리하는데 사용될 수 있다. 세 포는 자기 활성화 세포 분류(MACS) 기술, 자기 비이드(0.5 내지 100㎛ 직경)에 대한 결합 능력에 기초한 입자 분리 방법을 사용하여 분류될 수 있다. 세포-고체상 표면 분자 또는 헵텐을 특별히 인식하는 항체의 공유 첨가를 비롯한 유용한 다양한 변형방법이 자기 미세구에 대해 실시될 수 있다. 그 다음, 선택된 비이드를 물리적으로 조작하기 위해 자기장이 적용된다. 그 다음, 상기 비이드를 세포와 혼합하여 결합시킨다. 이어, 세포를 자기장을 통과시켜 세포 표면 표지를 갖는 세포를 분리해낸다. 이들 세포를 격리시키고, 추가 세포 표면 표지에 대한 항체와 커플링된 자기 비이드와 재혼합시킬 수 있다. 상기 세포를 다시 자기장을 통과시켜 항체 모두에 결합된 세포를 격리시킨다. 이러한 세포는 클로닝 격리를 위한 미세적정 디쉬와 같은 분리 디쉬내로 희석될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 바이오리액터로서 사용되는 태반은 응집된 임의의 점착성 및 비점착성 세포 오염물이 제거되도록 멸균 조건하에서 방혈 및 세척된다. 그 다음, 태반은 무균 조건하에서 콘테이너 또는 다른 적합한 용기내에서 배양되고, 항응집제(예: 헤파린, 와파린 소듐, 쿠마린, 비스하이드록시쿠마린)을 사용하거나 사용하지 않고/않거나, 항미생물제(예: β-머캅토에탄올(0.1mM); 스트렙토마이신(예를 들어, 40 내지 100㎍/㎖로), 페니실린(예를 들어, 40U/㎖로), 암포테리신 B(예를 들어 0.5㎍/㎖로)와 같은 항생제를 사용하거나 사용하지 않고서, 관류액 용액(예를 들어, 포스페이트-완충된 염수("PBS")와 같은 보통 염수 용액)으로 관류된다.
유출 관류액은 순환된 관류액(이는 태반 순환을 통해 유동된다) 및 방혈된 관류액(이는 혈관벽으로부터 삼출되어 이를 통해 태반의 주위 조직내로 통과한다) 모두를 포함한다. 유출 관류액은 수거되며, 바람직하게는 순환 및 방혈된 관류액 모두가 바람직하게는 멸균 저장소내에서 수거된다. 태반이 유지되는 조건에서의 변형 및 관류액의 속성은 유출 관류액의 부피 및 조성을 조절하도록 될 수 있다.
그 다음, 세포 유형은 당해 분야의 숙련자에게 공지된 기술, 예를 들어 비제한적인 밀도 구배 원심분리, 자기 세포 분리, 유동 세포측정, 친화성 세포 분리 또는 차동 점착 기술을 사용하여 수거된 관류액으로부터 격리된다.
한 실시양태에서, 태반을 멸균 배지에 위치시키고, 포스페이트-완충 생리 식염수 500㎖로 세척한다. 이어서, 세척액을 제거한다. 이어서, 배꼽 정맥을 캐뉼라, 예를 들어 테프론(TEFLON(등록상표)) 또는 가요성 캐뉼라로 캐뉼레이팅(cannulating)시키며, 이를 멸균 연결 장치, 예를 들어 멸균 튜브와 연결시킨다. 멸균 연결 장치를 도 3에 도시된 바와 같이 관류 다기관과 연결시킨다. 태반을 함유하는 용기를 덮고, 상기 태반을 실온(20 내지 25℃)에서 목적하는 시간 동안, 바람직하게는 2 내지 24시간 동안 유지시키며 이 때 48 시간 미만으로 유지시키는 것이 바람직하다. 태반은 지속적으로 관류될 수 있으며, 동일한 부피의 관류액을 도입시키고, 방출되는 관류액을 제거하거나 수거할 수 있다. 다르게는, 태반은 동일한 부피의 관류액, 예를 들어 100㎖의 관류액(1000 μ/ℓ 헤파린 및/또는 EDTA 및/또는 CPDA(크레아틴 포스페이트 덱스트로스)로 또는 이들 없이 보충된 멸균 생리 식염수)으로 주기적으로, 예를 들어 2시간 마다 또는 4, 8, 12 및 24 시간 마다 관류될 수 있다. 주기적 관류의 경우, 바람직하게는 동일한 부피의 관류액을 도입시 키고 태반의 배양 환경으로부터 제거하여 고정된 부피의 관류액이 항상 태반을 침지시킨다.
예를 들어 태반의 반대측 표면에서, 태반을 벗어나는 방출된 관류액을 수거하고 처리하여 배아-유사 줄기세포, 유래세포 또는 다른 중요한 세포들을 단리시킨다.
다양한 매질이 태반의 배양 또는 증식을 위한 관류 유체, 예를 들어 우태혈청(FBS), 전 인간혈청(WHS), 또는 태반의 이송시 수거된 인간 제대 혈청으로 보충된, DMEM, F-12, M199, RPMI, 피셔(Fisher's), 이스코어(Iscore's), 맥코이(McCoy's) 및 그의 조합물이 사용될 수 있다. 태반의 잔여 제대혈을 방혈시키는데 사용된 동일한 관류 유체는 혈액응고 방지제의 첨가 없이 태반을 배양시키거나 증식시키는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 배아-유사 줄기세포는 영양, 호르몬, 비타민, 성장 인자, 또는 이들의 임의의 조합물을 도입함으로써 태반 바이오리액터에서 증식시키도록 유도된다. 혈청 및 다른 성장 인자가 증식 관류 용액 또는 매질에 첨가될 수 있다. 성장 인자는 통상적으로는 단백질이며, 사이토킨, 림포킨, 인터페론, 군체 자극 인자(CSF), 인터페론, 케모킨 및 인터루킨을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 사용될 수 있는 다른 성장 인자에는, 리간드, 줄기세포 인자, 트롬보포이에틴(TPO), 과립구 군체-자극 인자(G-CSF), 백혈병 억제 인자, 염기성 섬유아세포 성장 인자, 태반-유도된 성장 인자 및 상피 성장 인자를 포함하는 재조합 인간 조혈 성장 인자를 포함한다.
관류 용액으로 도입된 성장 인자는 미분화된 배아-유사 줄기세포, 위탁된 유래세포, 또는 분화된 세포(예를 들어 분화된 조혈세포)의 증식을 자극시킬 수 있다. 성장 인자는, 앞서 기술된 면역 글로불린 항체, 호르몬, 효소 또는 성장 인자를 포함하지만 이에 한정되지 않는 생물학적 물질 및 생활성 분자의 생성을 자극시킬 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 태반은, 다양한 종류의 만능 및/또는 전능 배아-유사 줄기세포 및 림프구를 포함하지만 이에 한정되지 않는 내생 세포(즉, 태반으로부터 발생된 세포)를 증식시키기 위한 바이오리액터로서 사용될 수 있다. 태반을 바이오리액터로서 사용하기 위해, 태반은 본원에 개시된 관류 용액으로 관류시킴으로써 멸균 조건하에서 다양한 기간 동안 배양될 수 있다. 특정 실시양태에서, 태반은 12, 24, 36 또는 48시간 이상 동안, 또는 3 내지 5일, 6 내지 10일 동안, 또는 1 내지 2주 동안 배양된다. 바람직한 실시양태에서, 태반은 48시간 동안 배양된다. 배양된 태반은, 사용된 매질을 제거하고, 배출된 세포를 감소시키고, 새로운 매질을 첨가시키도록 주기적으로 "공급"되어야 한다. 배양된 태반은, 오염 가능성을 감소시키기 위해 멸균 조건하에 저장되어야 하며, 태반의 세포에 충분한 영양 공급을 유지시키는 조건을 만들도록 간헐 및 주기적인 가압하에 유지되어야 한다. 태반의 관류 및 배양은 효율성 및 증가된 용량에 대해 자동화 및 전산화가 모두 이뤄질 수 있음이 인지되어야 한다.
또다른 실시양태에서, 태반은 모든 내생 증식 세포, 예를 들어 배아-유사 줄 기세포를 제거하도록 처리되며, 외부(즉, 외생) 세포가 관류된 태반의 환경에서 도입되어 증식될 수 있도록 처리된다. 본 발명은, 배아-유사 줄기세포, 간엽 줄기세포, 간질 세포, 내피 세포, 간세포, 피부세포를 포함하지만 이에 한정되지 않는 태반 생물배양기에서 배양될 수 있는 다양한 줄기세포 또는 유래세포, 및 신경, 미엘린, 근육, 혈액, 골수, 피부, 심장, 결합 조직, 폐, 신장, 간 및 췌장(즉, 췌장 도세포)를 포함하지만 이에 한정되지 않는 특정 세포 유형, 조직 또는 기관에 대한 줄기세포 또는 유래세포를 고려하고 있다.
간엽 줄기세포의 공급원은 골수, 배아 난황낭, 태반, 제대, 태아 피부 및 청년기 피부 및 혈액을 포함한다. 골수 세포는 장골능, 대퇴, 정강이뼈, 척추, 늑골 또는 다른 골수 공간으로부터 수득될 수 있다.
조직 또는 기관으로부터 세포를 증식시키거나 또는 빠르게 분할시키는 것을 선택적으로 파괴, 절삭 또는 제거하는 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있으며, 예를 들면 암 또는 종양 치료방법이 있다. 예를 들어, 관류된 태반은 전자기적 UV, X-레이, 감마- 또는 베타-방사선으로 조사되어 모든 잔존하는 생존가능한 내생 세포를 근절시킬 수 있다. 증식되는 외부 세포를 상기 조사된 태반 바이오리액터로, 예를 들어 관류에 의해 도입시킨다.
4.2. 태반으로부터의 세포의 수거
앞서 개시된 바와 같이, 태반의 방혈 및 관류 후, 배아-유사 줄기세포는 배수시킨 빈 미세순환기로 이동하는데, 여기서 이들은 본 발명의 방법에 따라, 바람직하게는 수거 용기에 배출된 관류액을 수거함으로써 수거된다.
바람직한 실시양태에서, 태반에서 배양된 세포는 당해 분야에 공지된 기법, 예를 들어 밀도 구배 원심분리, 자석 세포 분리, 유세포분석기, 또는 다른 세포 분리법을 사용하여, 또는 당해 분야에 공지된 분류 방법을 사용하여 예를 들어 도 4에 도시된 도안에 따라 분류된다.
특정 실시양태에서, 태반으로부터 수거된 세포는 실온에서 15분 동안 5000×g으로 원심분리에 의해 배출된 관류액으로부터 회수되며, 이는 오염된 잔해 및 소판으로부터 세포를 분리한다. 세포 펠렛을 2U/㎖의 헤파린 및 2mM의 EDTA(GibcoBRL, NY)을 함유하는 IMDM 혈청-부재 매질중에 재현탁된다. 총 단핵 세포 분획을 제조자에 의해 추천된 절차에 따라 Lymphoprep(Nycomed Pharma, Oslo, Norway)을 사용하여 단리시키고, 단핵 세포 분획을 재현탁시켰다. 세포는 혈구계산기를 사용하여 계산한다. 생존력은 트라이판 블루 배제법(trypan blue exclusion)에 의해 평가하였다. 세포의 단리는 0.2% EDTA(Sigma, St.Louis MO)화의 0.05% 트립신 용액을 사용하여 "분리성 트립신화(differential trypsinization)"에 의해 달성된다. 분화적 트립신화는, 다른 점착성 개체군이 20 내지 30분 이상의 항온처리를 요구하는 반면 섬유아세포는 약 5분내에 가요성 표면으로부터 탈착하기 때문에 가능하였다. 탈착된 섬유아세포는 트립신 중화 용액(TNS, BioWhittacker)을 사용하는 트립신화 및 트립신 중화에 이어 획득되었다. 세포를 H.DMEM중에서 세척하고 MSCGM중에 재현탁시켰다.
또다른 실시양태에서, 단리된 태반 관류액의 수거없이 일정 기간 동안 관류되어 상기 태반이 관류액이 수거되기 전 2, 4, 6, 8, 10, 12, 20 및 24시간 동안 또는 수일 동안 관류될 수 있게 한다.
또다른 실시양태에서, 태반 바이오리액터에서 배양된 세포는 태반으로부터 세포를 물리적으로 절개함으로써 태반으로부터 단리된다.
또다른 실시양태에서, 태반 바이오리액터에서 배양된 세포는 태반의 조직 또는 그의 일부를 분리하고 배양된 세포를 당해 분야의 세포 분리 또는 분류 방법, 예를 들어 밀도 구배 원심분리, 자석 세포 분리, 유세포분석기 등에 의해 회수함으로써 태반으로부터 단리된다.
바람직한 실시양태에서, 태반의 관류 및 배출된 관류액의 수거는, 재생된 핵형성된 세포의 수가 100 세포/㎖ 이하로 떨어질 때까지 태반의 배양 과정에서 1회 또는 2회 반복된다. 관류액은 합쳐져 가벼운 원심분리가 실시되어 소판, 잔해 및 핵형성되지 않은 세포 막을 제거한다. 이어서, 핵형성된 세포를 피콜-하이파큐(Ficoll-Hypaque) 밀도 구배 원심분리에 의해 단리시키고, 세척한 후 H.DMEM중에 재현탁시킨다. 점착성 세포의 단리를 위해, 5 내지 10×106 세포의 분취량을 각각의 수개의 T-75 플라스크중에 위치시키고, 바이오휘트에이커(BioWhittaker)로부터 수득한 상업적으로 입수가능한 간엽 줄기세포 성장 매질(Mesenchymal Stem Cell Growth Medium, MSCGM)로 배양시키고, 조직 배양 항온조(37℃, 5% CO2)에 위치시킨다. 10 내지 15일 후, 비-점착성 세포를 플라스크로부터 PBS로 세척하여 제거시킨다. 이어서, PBS를 MSCGM으로 대체한다. 바람직하게는, 플라스크를 다양한 점착성 세포 유형의 존재를 위해, 특히 섬유아세포의 군집의 규명 및 확장을 위해 매일 검사한다.
다른 실시양태에서, 태반으로부터 수거한 세포는 이후 시간에 사용하기 위해 냉동보존한다. 세포, 예를 들어 줄기세포의 냉동보존 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있으며, 예를 들면 보이제(Boyse) 등의 방법(1993년 3월 9일자로 허여된 미국특허 제 5,192,553 호) 및 후(Hu) 등의 방법(2000년 12월 7일자로 공개된 WO 00/73421 호)을 사용하는 냉동보존법이 있다.
4.3 태반으로부터 수득되거나 태반에서 배양된 세포 개체군
본 발명의 방법에 따라 수득된 배아-유사 줄기세포는 만능 세포, 즉 완벽한 분화 다재 다능성을 갖는 세포를 포함하며, 이는 자가-갱신적(self-renewing)이고 조직내에 잠복한 상태이거나 무활동상태로 남아 있을 수 있다. 태반으로부터 수득될 수 있는 줄기세포는 배아-유사 줄기세포, 다능 세포, 위탁된 유래세포 및 섬유아세포를 포함한다.
태반으로부터의 혈액의 첫 번째 수거는 CD34+ 및 CD38+ 조혈 유래세포를 지배적으로 함유하는 제대혈과 관련된다. 첫 번째 24시간의 산후 관류내에서, 고농도의 CD34+ 및 CD38- 조혈 유래세포를 고농도의 CD34- 및 CD38+ 조혈 유래세포와 함께 태반으로부터 단리할 수 있다. 약 24시간의 관류 후, 고농도의 CD34- 및 CD38- 세포를 전술된 세포와 함께 단리할 수 있다. 본 발명의 단리된 관류된 태반은 CD34+ 및 CD38- 줄기세포, 및 CD34- 및 CD38+ 줄기세포가 풍부한 대량의 줄기세포 공급원을 제공한다. 단리된 태반을 24시간 동안 관류시키거나 또는 CD34- 및 CD38- 줄기세포가 풍부한 대량의 줄기세포의 공급원을 추가로 제공한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 방법에 의해 수득된 배아-유사 줄기세포는, 전기간 인간 태반내에 존재하고 후속의 성공적인 출산 및 태반 구축을 회수할 수 있는 생존가능하고 무활동성인 만능 줄기세포이며, 십억개의 핵생성된 세포를 회수시키며 50만 내지 100만개의 다능 및 만능 줄기세포를 수득한다.
태반에 의해 제공된 인간 태반 세포는 놀랍게도 배아-유사성이며, 예를 들어 하기 세포 표면 표지는 이들 세포에 대해 규명되었다: SSEA3-, SSEA-4, OCT-4+ 및 ABC-p+. 바람직하게는, 본 발명의 배아-유사 세포는 OCT-4+ 및 ABC-p+ 세포 표면 표지의 존재에 의해 특징화된다. 따라서, 본 발명은 배아 공급원으로부터 단리되지 않거나 또는 그렇지 않으면 수득되지 않지만 하기 표지에 의해 규명될 수 있는 줄기세포를 포함한다: SSAE3-, SSAE4-, OCT-4+ 및 ABC-p+. 한 실시양태에서, 인간 태반 줄기세포 MHC 2군 항원으로 발현하지 않는다.
태반으로부터 단리된 줄기세포는 균질하고 멸균성이다. 또한, 줄기세포는 인간에게 투여되기 적합한 형태(즉, 약학적 등급)로 용이하게 수득된다.
본 발명의 방법에 의해 수득된 바람직한 배아-유사 세포는 하기 세포 표면 표지의 존재에 의해 규명될 수 있다: OCT-4+ 및 ABC-pt. 또한, 본 발명은 하기 표지를 갖는 배아 줄기세포를 포함한다: CD10+, CD38-, CD29+, CD34-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+ 및 ABC-p+. 이러한 세포 표면 표지는 당해 분야에 익히 공지된 방법에 따라, 예를 들어 유세포분석기에 의해 일괄적으로 측정된 후 세척하고, 항-세포 표면 표지 항체로 착색된다. 예를 들어, CD-34 또는 CD-38의 존재를 결정하기 위해, 세포들은 PBS중에서 세척된 후, 항-CD34 피코에리트린 및 항-CD38 형광 이소티오시아네이트(Becton Dickinson, Mountain View, CA)로 이중-착색된다.
또다른 실시양태에서, 태반 바이오리액터에서 배양된 세포는, 당해 분야에 통상적으로 공지되어 있는 메센 컬트(Mesen Cult, 상표명) 매질(stem cell Technologies, Inc., Vancouver British Columbia)과 같은 군체-형성 단위 검정에 의해 규명되고 특징화된다.
본 발명의 방법에 의해 수득된 배아-유사 줄기세포는 지방세포분화, 연골세포 분화, 골아세포 분화, 조혈, 근세포 분화, 혈관세포 분화, 신경세포 분화, 간세포 분화를 비롯한, 특정 세포 계통을 따라 분화하도록 유도될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에 따라 수득된 배아-유사 줄기세포는 이식 및 생체외 처리 프로토콜에서의 사용을 위해 분화하도록 유도된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에 따라 수득된 배아-유사 줄기세포는 특정 세포 유형으로 분화하도록 유도되고 치유 유전자 생성물을 제공하도록 유전자적으로 설계된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 방법에 의해 수득된 배아-유사 줄기세포는 분화되도록 유도되는 생체외 화합물과 함께 항온처리된 후 분화된 세포는 실험대상으로 직접 이식된다. 따라서, 본 발명은 표준 배양 매질을 사용하여 인간 태반 줄기세포를 분화시키는 방법을 포함한다. 또한, 본 발명은 조혈세포, 신경세포, 섬유아세포, 가닥 세포, 간엽 세포 및 간 세포를 포함한다.
또한, 배아-유사 줄기세포는, 배아-유사 줄기세포의 지속적인 장기간 배양을 달성하기 위해 당해 분야에 익히 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어 배아-유사 줄 기세포와 같은 태반으로부터 또는 다른 인간 또는 인간이 아닌 공급원으로부터 수득된 조사된 섬유아세포와 같은 피더 세포(feeder cell) 상에서 배양하거나, 또는 이러한 피더 세포의 배양으로부터 수득된 조절된 매질중에서 배양한 후 태반으로부터 수거한 후 추가로 배양할 수 있다. 배아-유사 줄기세포는 또한 태반 바이오리액터로부터의 수거 전 태반내에서 또는 태반으로부터의 회수 후 생체외에서 확장된다. 특정 실시양태에서, 전개되는 배아-유사 줄기세포는 노출되거나 또는 세포 분화를 억제하는 제재의 존재하에 배양된다. 이러한 제재는 당해 분야에 익히 공지되어 있으며, 인간 델타-1 및 인간 세레이트-1 폴리펩타이드["Differentiation-suppressive polypeptide"라는 제목으로 2002년 1월 8일자로 허여된 사카노(Sakano) 등의 미국특허 제 6,337,387 호를 참조함], 백혈병 억제 인자(LIF) 및 줄기세포 인자를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 또한, 세포 개체군을 확장시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다[예를 들어, "Methods and compositions for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells"라는 제목으로 2001년 12월 4일자로 허여된 에멀손(Emerson) 등의 미국특허 제 6,326,198 호; 및 "Selective expansion of target cell populations"라는 제목으로 2002년 1월 15일자로 허여된 크라우스(Kraus) 등의 미국특허 제 6,338,942 호를 참조함].
배아-유사 줄기세포는 당해 분야에 공지된 표준 기법, 예를 들어 트라이판 블루 배제 검정, 형광 디아세테이트 흡수 검정, 프로피디윰 요오다이드 흡수 검정 (생존력 평가를 위해); 및 티미딘 흡수 검정, MTT 세포 증식 검정(증식력 평가를 위해)을 사용하여 생존력, 증식 잠재력, 및 수명에 관해 평가될 수 있다. 수명은 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들어 증대된 배양중에서 개체군 배가 최대 수를 측정함으로써 측정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 방혈되고/되거나 관류되고/되거나 배양된 태반에서 증식된 줄기세포 또는 유래세포의 분화는 태반으로부터 수거된 세포의 분화를 억제하고/하거나 조정하고/하거나 조절하기에 충분한 효과를 발휘하기 위해, 단일 또는 다중 투여에 효과적인 투여량을 포함하는 제재 또는 약학 조성물을 사용하여 조정된다.
줄기세포 또는 유래세포 분화를 유도할 수 있는 제재는 당해 분야에 익히 공지되어 있으며, Ca2+, EGF, aFGF, bFGF, PDGF, 피부세포 성장 인자(KGF), TGF-β, 사이토킨(예: IL-1α, IL-1β, IFN-γ, TFN), 레티노산, 트랜스페린, 호르몬(예: 안드로겐, 에스트로겐, 인슐린, 프로락틴, 트리요오도티로닌, 하이드로코르티손, 덱사메타손), 소듐 부티레이트, TPA, DMSO, NMF, DMF, 매트릭스 요소(예를 들어, 콜라겐, 라미닌, 헤파란 설페이트, 마트리겔(Matrigel, 상표명), 또는 그의 조합물을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
세포 분화를 억제시키는 제재는 또한 당해 분야에 공지되어 있으며, 인간 델타-1 및 인간 세레이트-1 폴리펩타이드["Differentiation-suppressive polypeptide"라는 제목으로 2002년 1월 8일자로 허여된 사카노 등의 미국특허 제 6,337,387 호를 참조함], 백혈병 억제 인자(LIF) 및 줄기세포 인자를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
분화를 조절하는데 사용되는 제재는 태반 바이오리액터내 도입되어 태반에서 배양되어지는 세포의 분화를 유도할 수 있다. 다르게는, 상기 제재는 세포가 태반으로부터 수거되거나 제거된 후 생체외에서 분화를 조절하는데 사용될 수 있다.
줄기세포가 특정 세포 유형으로 분화되는 측정은 당해 분야에 익히 공지된 방법에 의해 수행될 수 있으며, 예를 들어 유세포분석 또는 면역세포화학과 같은 기법을 사용하여 세포 표면 표지(예를 들어 조직-특이적 또는 세포-표지 특이적 항체로 세포를 염색함) 및 형태의 변화를 측정하면서, 광학 현미경 또는 공초점 현미경을 사용하여 세포의 형태를 조사함으로써, 또는 PCR 및 유전자-발현 프로파일과 같은 당해 분야에 익히 공지된 기법을 사용하여 유전자 발현상의 변화를 측정함으로써 수행될 수 있다.
또다른 실시양태에서, 태반에서 배양된 세포는 면역 글로불린, 호르몬, 효소와 같은 생활성 분자를 생성시키도록 자극된다.
또다른 실시양태에서, 태반에서 배양된 세포는, 에리스로포이에틴, 사이토킨, 림포킨, 인터페론, 군체 자극 인자(CSF), 인터페론, 케모킨, 인터루킨, 리간드를 비롯한 재조합 인간 조혈 성장 인자, 줄기세포 인자, 트롬보포이에틴(TPO), 인터루킨, 및 과립구 군체-자극 인자(G-CSF) 또는 다른 성장 인자에 의해 증식되도록 자극된다.
또다른 실시양태에서, 태반에서 배양된 세포는 예를 들어 아데노바이러스 또는 레트로바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터를 사용하여 태반으로부터의 수거 전 또는 수거 후 유전자적으로 설계되거나, 또는 리포솜 또는 화학물질-매개된 DNA의 흡수와 같은 기계적 수단을 사용함으로써 유전자적으로 설계된다.
트랜스진(transgene)을 함유하는 벡터는 당해 분야에 익히 공지된 방법, 예를 들어 세포 감염, 형질 전환, 형질 도입, 일렉트로포레이션(electroporation), 감염, 미세감염, 세포 융합, DEAE 덱스트란, 칼슘 포스페이트 침전, 리포솜, 리포펙틴(LIPOFECTIN, 상표명), 리소좀 융합, 합성 음이온성 지질, 유전자총 또는 DNA 벡터 수송자의 사용에 의해 중요한 세포내로 도입되어, 상기 트랜스진은 딸 세포, 예를 들어 배아-유사 줄기세포의 분할에 의해 생성된 배아-유사 줄기세포 또는 유래세포로 보내진다. 포유류 세포의 형질 전환 또는 세포 감염을 위한 다양한 기법에 관해서는, 케오운(Keown) 등의 문헌 "1990, Methods Enzymol. 185:527-37" 및 삼브룩(Sambrook) 등의 문헌 "2001, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y"를 참조한다.
바람직하게는, 트랜스진은 세포의 핵막 또는 다른 존재하는 세포 또는 유전자적 구조에 유해하지 않는 한 임의의 기법을 사용하여 도입된다. 특정 실시양태에서, 트랜스진은 미세감염에 의해 핵 유전적 물질내로 삽입된다. 세포 및 세포 구조의 미세감염은 당해 분야에 통상적으로 공지되어 있으며 실행되고 있다.
배양된 포유류 세포, 예를 들어 태반에서 배양된 세포의 안정한 세포 감염을 위해, 단지 작은 분획의 세포만이 외부 DNA를 그들의 게놈내로 통합할 수 있다. 통합 효율성은 사용된 세포 감염 기법 및 벡터에 따라 달라진다. 구성 성분을 규명하고 선택하기 위해, 선택가능한 표지를 기호화한 유전자(예를 들어 항생물질에 대한 내성을 위해)는 중요한 유전자 서열과 함께 호스트 배아-유사 줄기세포내로 일반적으로 도입된다. 바람직한 선택가능한 표지는 G418, 하이그로마이신 및 메토트렉세이트와 같은 약품에 대한 내성을 수여하는 것들을 포함한다. 도입된 핵산으로 안정하게 세포 감염된 세포들은 약품 선택에 의해 규명될 수 있다(예를 들어, 다른 세포들이 죽는 반면, 선택가능한 표지 유전자를 혼입한 세포는 생존할 것이다). 이러한 방법은 실험대상 또는 환자내로 재조합 세포의 도입 또는 이식 이전에 포유류 세포에서 동종의 재조합과 관련된 방법에 있어 특히 유용하다.
수 많은 선택 시스템이 형질 변형된 호스트 배아-유사 세포를 선택하는데 사용될 수 있다. 구체적으로는, 벡터는 특정 검출가능하거나 선택가능한 표지를 함유할 수 있다. 다른 선택 방법은 하기와 같은 또다른 표지 선택을 포함하지만 이에 한정되지 않는다: 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제(Wigler 등, 1997, Cell 11:223), 하이포크산틴-구아닌 포스포리보실트란스퍼라제(Szybalska 및 Szybalski, 1962, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48: 2026), 및 아데닌 포스포리보실트란스퍼라제(Lowy 등, 1980, Cell 22: 817) 유전자가 tk-, hgprt- 또는 aprt-세포에 각각 사용될 수 있다. 또한, 대사길항 내성 물질이 하기 유전자의 선택에 기초하여 사용될 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한 dhfr(Wigler 등, 1980, Proc. Natl. Acd. Sci. USA 77:3367; O'Hare 등, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527); 마이코페놀산에 대한 내성을 부여한 gpt(Mulligan 및 Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072); 아미노글리코사이드 G-418에 대한 내성을 부여한 n대(Colberre-Garpin 등, 1981, J. Mol. Biol. 150:1); 및 하이드로마이신에 대한 내성을 부여한 hygro(Santerre 등, 1984, Gene 30:147).
트랜스진은 중요한 세포의 게놈내로 바람직하게는 랜덤 통합에 의해 통합될 수 있다. 다른 실시양태에서는, 트랜스진은 지적된 방법에 의해, 예를 들어 동종 재조합(즉, 중요한 세포의 게놈에서 중요한 유전자의 "녹-인(knock-in)" 또는 "녹-아웃(knock-out)")에 의해 통합할 수 있다[차펠(Chappel)의 미국특허 제 5,272,071 호; 1991년 5월 16일자로 공개된 PCT 공개 공보 WO 91/06667 호; 1995년 11월 7일자로 허여된 카페치(Capecchi) 등의 미국특허 제 5,464,764 호; 1997년 5월 6일자로 허여된 카페치 등의 미국특허 5,627,059 호; 1996년 1월 30일자로 허여된 카페치 등의 미국특허 제 5,487,992 호].
동종 재조합을 통한 표적된 유전자 변형을 갖는 세포를 생성시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 구조물은 목적하는 유전자 변형과 관련된 유전자의 적어도 일부를 포함할 것이며, 표적 자리와 동종인 영역, 즉 호스트 게놈에서 표적된 유전자의 내생 모방부를 포함할 것이다. 랜덤 통합을 위한 DNA 구조물은, 동종 재조합에 사용되는 것과 반대로, 재조합을 매개시키는 동종의 영역을 포함할 필요가 없다. 표지들은 트랜스진의 삽입을 위한 긍정적 및 부정적 선택을 수행하기 위해 표적하는 구조물 또는 랜덤 구조물에 포함될 수 있다.
동종 재조합 세포, 예를 들어 동종 재조합 배아-유사 줄기세포, 태반에서 배양된 내생 태반 세포 또는 외생 세포를 생성시키기 위해, 동종 재조합 벡터는 중요한 유전자가 표적된 세포의 게놈에 내생인 유전자 서열에 의해 5' 및 3' 말단에서 측면에 위치하는 곳에서 제조되어 동종 재조합이 표적된 세포의 게놈에서의 내생 유전자 및 벡터에 의해 운반된 중요한 유전자들 사이에서 발생하게 된다. 추가의 측면 위치하는 핵산 서열은 표적된 세포의 게놈에서 내생 유전자와의 성공적인 동종 재조합을 위해 충분히 길다. 전형적으로, 측면 위치하는 DNA(5' 및 3' 말단에서 모두)의 수 킬로베이스가 벡터에 포함된다. 재조합 줄기세포로부터의 동종 재조합 동물 및 동종 재조합 벡터를 구성하기 위한 방법은 통상적으로 당해 분야에 공지되어 있다[예를 들어, 토마스(Thomas) 및 카페치의 문헌 "Cell 51;503"; 브랜들레이(Brandley)의 문헌 "1991, Curr. Opin. Bio/Technol. 2:823-29; 및 PCT 공개 번호 WO 90/11354 호, WO 91/01140 호 및 WO 93/04169 호를 참조함].
한 실시양태에서, 본 발명의 방법에 따라 태반에서 배양된 외생 세포의 게놈은 동종 재조합을 경유하여 또는 랜덤 통합을 경유하여 표적하는 유전자의 표적이 된다.
특정 실시양태에서, 보나디오(Bonadio) 등의 방법("Methods and compositions for multiple gene transfer into bone cells"라는 제목으로 1999년 8월 24일자로 허여된 미국특허 제 5,942,496 호; 및 "Methods and compositions for stimulating bone cells"라는 제목으로 1995년 8월 24일자로 공개된 WO 95/22611 호)은 중요한 세포, 예를 들어 줄기세포, 유래세포 또는 태반에서 배양된 외생 세포(예: 골 유래세포)내로 핵산을 도입하는데 사용된다.
4.4. 바이오리액터로서의 배양된 태반의 사용
방혈되고/되거나 배양된 태반 세포는 세포, 조직 및 기관의 증식을 위한 바이오리액터로서 사용될 수 있다. 태반 중배엽은 풍부한 작은 분자 및 증식 인자, 기관발생 및 조직 신생에 필요한 리포폴리사카라이드, 및 세포외 기질 단백질을 포함하는 이상적인 기질 환경을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 외생 세포의 증식을 위한 바이오리액터로서 단리된 관류된 태반의 사용방법을 제공한다. 이 실시양태에 따르면, 본 발명은 태반으로부터 유도되지 않은 세포를 함유하는 단리된 태반에 관한 것이며, 여기서 상기 세포의 태반으로의 접목은 태반을 자극하여 배아-유사 줄기세포를 생성시킬 수 있거나, 상기 접목된 세포는 신호, 예를 들어 사이토킨 및 성장 인자를 생성시키며, 이는 태반을 자극하여 줄기세포를 생성시킨다. 태반은 태반과 관련된 유아의 부모, 자손 또는 다른 혈족으로부터 유래하는 태반이 아닌 세포와 접목될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 단리된 태반은 유아가 아니거나 유아와 관련되지도 않은 개인으로부터 유래하는 태반이 아닌 세포와 접목될 수 있다. 이와 같이, 태반에서 증식되거나 배양되는 세포, 조직, 기관양 및 기관은 유아의 태반, 부모, 자손 또는 혈족과 관련된 유아내로 이식될 수 있거나 또는 유아와 관련되지 않은 개인에게로 이식될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 태반에는 임의의 특정 세포 유형이 위치할 수 있으며 세포, 조직 또는 기관의 배양을 위한 생체외 바이오리액터로서 사용될 수 있다. 이러한 세포, 조직 또는 기관 배양은 이식 및 생체외 처리 프로토콜에 수확되고 사용될 수 있다. 이 실시양태에서, 태반은 모든 내생 세포를 제거하고 외부(즉, 외생) 세포가 관류된 태반의 환경에서 도입되고 증식되도록 처리된다. 내생 세포를 제거시키는 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있다. 예를 들어, 관류된 태반은 전자기적 UV, X-레이, 감마-, 또는 베타-방사선으로 조사되어 모든 잔존하는 생존가능한 내생 세포를 박멸시킨다. 한 실시양태에서, 치사량에 가까운 방사선 노출, 즉 500 내지 1500 CGγ가 태반을 보호하지만 목적하는 세포를 근절시키는데 사용된다. 치사 대 비치사 이온화 방사에 대한 국제적 기준에 대해서는 "United States Department of Defense"로부터의 "Biophysical and Biological Effects of Ionizing Radiation"의 chap.5를 참조한다. 이어서, 조사된 태반 바이오리액터에서 증식되는 중요한 외부 세포가 예를 들어 혈관 관류 또는 말초내 주입에 의해 도입된다.
또다른 실시양태에서, 바이오리액터는 신규한 키메라 세포, 조직 또는 기관을 생성시키고 증식시키는데 사용된다. 이러한 키메라는 바이오리액터에서 출발 물질로서 태반 세포 및 하나 이상의 추가의 세포 유형을 사용하면서 생성될 수 있다. 상이한 세포 유형간의 상호작용, 또는 "교차 대화"는 출발 세포 유형중 하나로부터 구분된 발현 패턴을 유도할 수 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어 자가 키메라는 바이오리액터에서 환자의 자가 태반 세포를 동일한 환자로부터 유도된 또다른 세포 유형과 함께 증식시킴으로써 생성된다. 또다른 실시양태에서, 예를 들어 이종 키메라는 환자의 세포, 즉 혈액 세포를 이종 태반 세포를 갖는 바이오리액터에 첨가시킴으로써생성될 수 있다. 추가로 또다른 실시양태에서, 태반 세포는 환자로부터 유래될 수 있으며, 제 2 세포 유형은 제 2 환자로부터 유래될 수 있다. 이어서, 키메라 세포는 출발 세포중 하나와 상이한 표현형 및/또는 유전성 특징을 가지면서 재생된다. 특정 실시양태에서, 이종 세포는 동일한 일배체형이며, 키메 라 세포는 환자내로 재도입된다.
다른 실시양태에서, 바이오리액터는 근원이 천연 또는 합성이던 간에 특정 세포 유형의 성장을 증강시키거나 또는 세포-유형 특정 생성물의 생성을 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 태반 바이오리액터는 인슐린을 생성시키는 췌장 도세포를 자극시키는데 사용된다. 바이오리액터는 치유 포유류 단백질의 생성에 있어 특히 유익하며, 그의 치유 효능은 적절한 번역후 변형에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 바이오리액터는 치유 단백질, 성장 인자, 사이토킨, 및 기타 천연 또는 재조합 치유 분자(예로는 에리스로포이에틴, 인터루킨 및 인터페론이 있으나 이에 한정되지는 않음)의 생성에 유용하다.
또다른 실시양태에서, 바이오리액터는 치유 유전자 생성물을 제공하도록 유전자적으로 설계된 세포를 증식시키는데 사용될 수 있고, 또한 재조합 생성물의 대량 생산을 위해 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어 반응기는 항체 생성을 향상시키는데 사용될 수 있다. 태반은 특정 단일세포에서 유래되는 항체를 생성시키는 항체-생성 세포, 예를 들어 하이브리도마와 함께 위치하며, 이는 특정 항원에 대한 항체의 동종 개체군이다. 하이브리도마는 쾰러(Kohler) 및 밀스테인(Milstein)(1975, Nature 256, 495-497; 및 미국특허 제 4,376,110 호)의 하이브리도마 기법, 인간 B-세포 하이브리도마 기법(코스보(Kosbor) 등의 문헌 "1983, Immunology Today 4, 72"; 콜(Cole) 등의 문헌 "1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 2026-2030"), 및 EBV-하이브리도마 기법(콜 등의 문헌 "1985, Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp.77-96")을 포함하지만 이 에 한정되지 않는 임의의 기법에 의해 수득될 수 있다. mAb-생성 하이브리도마는 고역가 mAb의 바이오리액터에서 증식될 수 있다.
다르게는, 항원이 미확인된 경우, 바이오리액터는 특정 세포-유형에 대한 특이적 항체를 생성시키는데 사용될 수 있으며, 이는 이후 미확인된 항원을 규명하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체는 바이오리액터에서 세포를 증대시키면서 세포를 암 환자로부터 전체 혈액 시편을 배양시킴으로써 암 환자에게서 미확인 종양-특이적 항원에 대해 생성될 수 있으며, 이어 환자의 종양 세포에 대해 특별히 반응하는 항체에 대해 차단된다.
또다른 실시양태에서, 바이오리액터는 배양액에서 바이러스를 생성시키고 배양액에서 항바이러스 제재를 차단시키는데 사용될 수 있다. 이 방법은 상기 바이러스, 예를 들어 파르보바이러스 및 인간 면역결핍 바이러스에 대해 특히 중요하며, 이러한 바이러스는 세포 배양 조건에서 증식하기 어렵다.
또한, 바이오리액터는 특정 세포 유형의 활성, 예를 들어 중요한 유전자 생성물의 활성 또는 발현, 또는 신호 형질 도입 경로의 활성을 조정하는 치유 분자를 차단시키는 지지체로서 사용될 수 있다. 이 실시양태에서, 중요한 세포 유형은 바이오리액터에서 배양되고 증대될 수 있다. 상기 세포는 자연 발생 세포일 수 있거나, 재조합 유전자 생성물을 발현시키도록 설계된 세포일 수 있다. 이어서, 바이오리액터는 후보 치유 분자, 예를 들어 작은 분자, 비펩타이드, 항체 등, 또는 이러한 후보 치유 분자의 화합물군과 접촉된다. 이어서, 세포는 후보 치유 분자의 존재 또는 부재하에 목적하는 활성면에서의 변화에 대해 측정된다. 예를 들면, 이 러한 목적하는 활성은 성장 속도면에서의 증가 또는 감소, 및 유전자 발현에서의 변화 또는 후보 치유 분자의 결합 또는 흡수에서의 변화일 수 있다.
여러 유형의 방법은 시험 제제를 차단시키는데 특히 편리하고/하거나 유용한 것으로 보인다. 이들은 화합물의 결합을 측정하는 방법, 항체 또는 리간드와 상호작용하는 세포의 능력의 변화를 측정하는 방법, 및 "정보제공" 단백질, 즉 효소 또는 다른 검출가능하거나 선택가능한 단백질(이는 중요한 조절 영역을 조절하면서 위치한다)의 활성 또는 발현을 측정하는 방법을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 따라서, 바람직한 실시양태에서, 자연 발생 및/또는 합성 화합물(예를 들어 작은 분자 또는 펩타이드의 화합물군) 모두는 치유 활성을 차단시킬 수 있다. 세포-유형 특이적 활성을 조정하는 유기 비-단백질 분자 및 펩타이드를 포함하는 화합물 및 조성물을 규명하는데 차단 검정이 사용될 수 있다. 재조합된 합성, 및 그렇지 않으면 외생 화합물은 결합력을 가질 수 있고 그러므로 약학 제제의 후보 물질일 수 있다. 다르게는, 단백질 및 화합물은 규명된 유전자 및 프로테인과 생체내에서 상호작용하는 내생성 세포 성분을 포함한다. 이러한 내생 성분은 약학적 및 치유학적 발명의 새로운 표적을 제공할 것이다.
본 발명의 또다른 실시양태에서, 태반은 다양한 종류의 만능 및/또는 전능 배아-유사 줄기세포 및 림프구를 포함하지만 이에 한정되지 않는 내생 세포(즉, 태반으로부터 유래되는 세포)를 증식시키는 바이오리액터로서 사용된다. 한 실시양태에서, 태반은 본원에 개시된 바와 같은 관류 용액으로 다양한 시간 동안 항온처리된다. 이러한 태반 유래의 내생 세포는 형질 변형되어 중요한 유전자를 재조합 적으로 발현시키고, 돌연변이를 발현시키고/시키거나, "녹-아웃"기술을 사용하여 유전자적 자리를 제거하도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 내생 표적 유전자는 표적된 동종 재조합을 사용하여 표적 유전자 또는 그의 프로모터를 비활성화 또는 "녹-아웃"시킴으로써 제거될 수 있다[예를 들어, 스미티즈(Smithies) 등의 문헌 "1985, Nature 317, 230-234; 토마스(Thomas) 및 카페치의 문헌 "1987, Cell 51, 503-512"' 톰슨(Thompson) 등의 문헌 "1989, Cell 5, 313-321"을 참조하며, 이들 각각은 본원에 그 전체가 참고로 인용되고 있다). 예를 들어, 내생 표적 유전자(표적 유전자의 부호화 영역 또는 규정 영역)와 동종인 DNA에 의해 측면에 위치하는 돌연변이 비작용성 표적 유전자(또는 완전히 관련되지 않은 DNA 서열)가 선택가능한 표지 및/또는 부정적인 선택가한 표지와 함께 또는 없이 사용되어 생체내에서 표적 유전자를 발현시키는 세포를 감염시킨다. 표적된 동종 재조합을 경유하는 DNA 구조물의 삽입에 의해 표적 유전자의 비활성을 발생시킨다. 이러한 접근은 세포, 조직 및/또는 기관의 중요한 유전자 발현을 제거하거나, 교체하거나 변화시키는데 사용될 수 있다. 이러한 접근은 세포, 조직 또는 기관의 표현형을 변화시키는데 사용되며, 이는 이후 인간 실험대상내로 도입될 수 있다.
다른 실시양태에서, 태반 세포는 생체외 또는 생체내에서 특정한 유형의 세포로 분화되도록 유도될 수 있다. 예를 들어, 만능성 태아-유사 줄기세포는 생체내 기관 신합성 및 손상의 치료를 위해 손상된 기관에 주입될 수 있다. 이러한 손상은 심근경색, 발작성 장애, 다발성 경화증, 심장마비, 저혈압, 심정지, 허혈, 염증, 노화로 인한 인지능력 상실, 방사선 손상, 뇌성마비, 신경퇴행성 질환, 알츠하 이머병, 파킨슨씨병, 라이병, 후천성 면역결핍증성 치매, 기억감퇴, 근위축성 측삭 경화증, 허혈성 신장질환, 뇌 또는 척수 외상, 심폐 우회로, 녹내장, 망막 허혈 또는 망막 외상 등을 포함하나 이들로써 한정되는 것은 아닌 신체 이상 또는 질환에 기인할 수 있다.
특정 실시양태에서, 태반으로부터 격리된 상기 태아-유사 줄기세포는, 예를 들어 테이-삭스병, 니만-피크병, 파브리병, 고쉐병, 헌터병, 헐러 증후군, 및 기타 갱글리오시드증, 뮤코다당질축적증 및 당원축적증과 같은 리소솜성 축적병을 포함하나, 이들로써 한정되는 것은 아닌 특정 질병 또는 이상을 치료하기 위한 자가 또는 이종 효소 대체치료에 사용될 수 있다.
다른 실시양태에서, 상기 세포는 선천성 대사장애, 부신백질이영양증, 낭포성 섬유증, 글리코겐 축적증, 갑상선기능저하증, 겸상 적혈구 빈혈증, 피어슨 증후군, 폼페병, 페닐케톤 요증(PKU), 포르피린증, 단풍 시럽뇨 질환, 호모시스틴뇨증, 뮤코다당질축적증, 만성육아종병 및 티로신혈증, 및 테이-삭스병을 치료하거나, 암, 종양 또는 기타 병리학적 이상을 치료하기 위한 유전자 치료에서의 자가 또는 이종 전이유전자 캐리어로서 사용될 수 있다.
다른 실시양태에서, 상기 세포는 각막상피 결함, 연골 치료, 안면 박리, 점막, 고막, 창자 내층, 신경학적 구조(예를 들어, 망막, 기저막의 청각성 뉴론, 후각 상피의 후각성 뉴론), 피부의 외상손상에서 화상 및 부상 치료를 포함하나, 이들로써 한정되는 것은 아닌 자가 또는 이종 조직 재생 또는 대체 치료 또는 프로토콜, 또는 두피(모발) 이식, 또는 기타 손상 및 병에 걸린 기관 또는 조직의 재구성 에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법을 사용하여 수득된 많은 수의 태아-유사 줄기세포 및/또는 유래세포는 많은 골수 공여에 대한 필요성을 감소시킨다. 골수 이식에서의 생착을 위해서는 환자중량(kg)당 약 1×108 내지 2×108의 골수 단클론성 세포가 주입되어야 한다(즉, 70kg의 공여자의 경우 약 70㎖의 골수). 70㎖를 수득하기 위해서는 상기 공여 과정에서 과도한 공여 및 상당량의 혈액 손실이 불가피하다. 특정 실시양태에서, 소량의 골수 공여(예를 들어, 7 내지 10㎖)로부터의 세포는 수혜자에게 주입되기 전 태반 생물반응로에서의 증식에 의해 팽창될 수 있다.
또한, 소수의 줄기세포 및 유래세포는 통상적으로 혈류중에서 순환한다. 또다른 실시양태에서, 예를 들어 외인성 줄기세포 또는 외인성 유래세포는, 혈액이 배출되고, 하나 이상의 성분이 선택적으로 제거되며, 잔류하는 혈액이 공여자로 재주입되는 과정인 채집술에 의해 수거된다. 채집술에 의해 회수된 상기 외인성 세포는 태반 바이오리액터에서의 증식에 의해 팽창되고, 이로써 골수 공여에 대한 필요성을 완전히 제거한다.
또다른 실시양태에서, 태반 바이오리액터에서의 외인성 세포의 팽창은 화학요법 이외의 추가 처리로서 사용된다. 암 세포를 표적으로 하여 파괴하는데 사용되는 대부분의 화학요법제는 모든 증식세포, 즉 세포 증식이 행해지는 세포를 죽임으로써 작용한다. 골수는 신체중에서 가장 활동적인 증식 조직중 하나이므로, 조 혈 줄기세포는 화학요법제에 의해 빈번히 손상 또는 파괴되며, 결과적으로 혈액세포 생성이 축소 또는 중단된다. 화학요법은 주기적으로 종결되어, 화학요법의 재개 전 환자의 조혈계가 상기 혈액 세포 공급을 보충하도록 해야 한다. 정지 줄기세포에서 화학요법이 재시작될 수 있도록(재시작되면, 상기 골수가 파괴된다) 허용가능한 수준으로 백혈구 세포를 증식 및 증가시키는데에는 한달 이상이 소요될 수 있다.
백혈구 세포는 화학요법 처리 도중 재생되는 반면, 암은 시간에 따라 성장하고 자연선택으로 인해 화학요법 약물에 대한 저항성이 커질 수 있다. 따라서, 보다 장기간의 화학요법이 행해지고 처리사이의 간격은 보다 짧아질수록, 암을 성공적으로 죽일 가능성이 커진다. 화학요법 처리사이의 간격을 단축시키기 위해, 본 발명에 따라 수거된 태아-유사 줄기세포 또는 유래세포를 환자에게 투여할 수 있다. 이러한 처리는, 환자가 낮은 혈액세포 수를 나타내어 화학요법 처리의 보다 빠른 재개를 허용하게 하는 시간을 감축시킬 것이다.
본 발명의 방법에 따라 태반으로부터 수득된 태아-유사 줄기세포, 유래세포, 외부 세포 또는 개량된 세포는 생체내에서의 조직 또는 기관의 제조에 사용될 수 있다. 본 발명의 방법은 태반으로부터 수득된 세포, 예를 들어 태아-유사 줄기세포, 유래세포, 또는 외부 세포 또는 유래세포를 사용하여 기질에 파종하고 적절한 조건하에서 배양하여 세포가 분화되고 상기 기질에 거주하게 하는 것을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 수득된 조직 및 기관은 연구 및 치료의 목적을 포함하는 다양한 목적으로 사용될 수 있다.
4.5. 태아-유사 줄기세포의 용도
본 발명의 태아-유사 줄기세포는, 신체의 조직 또는 기관이 목적하는 세포 군집, 예를 들어 줄기세포 또는 유래세포 군집의 생착, 이식 또는 주입에 의해 강화, 치료 또는 대체되는 다양한 종류의 치료 프로토콜에 사용될 수 있다. 상기 본 발명의 태아-유사 줄기세포는 존재하는 조직을 대체 또는 강화시켜, 새롭거나 변화된 조직이 되게 하거나 생물학적 조직 또는 구조와 결합시킬 수 있다. 또한, 전형적으로 배아 줄기세포가 사용되는 치료 프로토콜에서 배아 줄기세포는 본 발명의 태아-유사 줄기세포로 대체될 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, 태반으로부터의 태아-유사 줄기세포 및 기타 줄기세포는 적합 및 부적합 HLA형 조혈 이식을 포함하는, 자가 및 동종 조혈 이식에 사용될 수 있다. 동종 조혈 이식에 태아-유사 줄기세포를 사용하는 경우, 예를 들어 1998년 9월 1일자로 허여된 미국특허 제 5,800,539 호; 및 1998년 9월 15일자로 허여된 미국특허 제 5,806,529 호(모두 본원의 참조문헌으로서 인용됨)에 기술된 바와 같이 공여자 세포의 면역 거부를 감소시키기 위한 호스트 처리가 요구될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 태아-유사 줄기세포는 치료학적 이식 프로토콜, 예를 들어 간, 췌장, 신장, 폐, 신경계, 근육계, 뼈, 골수, 흉선, 비장, 점막밑 조직, 생식선 또는 모발의 줄기세포 또는 유래세포를 강화 또는 대체시키는데 사용될 수 있다.
태아-유사 줄기세포는, 전형적으로 유래세포가 사용되는 치료 또는 연구 프 로토콜에서 특정한 부류의 유래세포(예를 들어, 연골세포, 줄기세포, 조혈세포, 췌장 실질세포, 신경줄기세포 및 근육 유래세포 등) 대신 사용될 수 있다.
본 발명의 태아-유사 줄기세포는 연골, 건 또는 인대의 강화, 치료 또는 대체에 사용될 수 있다. 예를 들어, 특정 실시양태에서는, 인공보철물(예를 들어, 둔부 인공보철물)이 본 발명의 태아-유사 줄기세포로부터 성장한 대체 연골조직 구조물로 피복된다. 다른 실시양태에서는, 관절(예를 들어, 무릎)이 태아-유사 줄기세포로부터 성장한 연골조직 구조물로 재구성된다. 또한, 연골조직 구조물은 주로 상이한 유형의 관절의 재구성 수술에 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Resnick, D., and Niwayama, G., eds., 1988, Diagnosis of Bone and Joint Disorders, 2d ed., W. B. Saunders Co.]에서의 프로토콜).
본 발명의 태아-유사 줄기세포는 질병으로부터 야기된 조직 및 기관의 손상을 복구하는데 사용될 수 있다. 이러한 실시양태에서는, 환자에게 태아-유사 줄기세포가 투여되어 질병의 결과로서 손상된 조직 또는 기관을 재생 또는 회복시킬 수 있다(예를 들어, 화학요법 또는 방사선 이후의 면역계를 향상시키고, 심근경색 이후의 심장조직을 복구한다).
본 발명의 태아-유사 줄기세포는 골수 이식에서의 골수 세포를 강화 또는 대체하는데 사용될 수 있다. 현재, 인간 자가 및 동종 골수 이식은 백혈병, 림프종 및 기타 생명위협 질병과 같은 질환을 치료하는데 사용되고 있다. 그러나, 상기 방법은 생착을 위한 충분한 세포가 존재하기 위해서 공여자 골수의 상당부분이 제거되어야 하는 결점을 갖는다.
본 발명의 방법에 따라 수거된 태아-유사 줄기세포는 많은 골수를 공여해야 할 필요성을 감소시키는 줄기세포 및 유래세포를 제공할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법에 따라 적은 골수 공여가 가능해지고, 이로 인해 수혜자에게 주입 또는 이식하기 전 태반에서 배양 및 팽창하는 줄기세포 및 유래세포의 수가 팽창된다.
특정 실시양태에서, 태반으로부터 격리된 상기 태아-유사 줄기세포는, 예를 들어 테이-삭스병, 니만-피크병, 파브리병, 고쉐병, 헌터병, 헐러 증후군, 및 갱글리오시드증, 뮤코다당질축적증 및 당원축적증과 같은 리소솜성 축적병을 포함하나, 이들로써 한정되는 것은 아닌 특정 질병 또는 이상을 치료하기 위한 자가 또는 이종 효소 대체치료에 사용될 수 있다.
다른 실시양태에서, 상기 세포는 부신백질이영양증, 낭포성 섬유증, 글리코겐 축적증, 갑상선기능저하증, 겸상 적혈구 빈혈증, 피어슨 증후군, 폼페병, 페닐케톤 요증(PKU), 및 테이-삭스병, 포르피린증, 단풍 시럽뇨 질환, 호모시스틴뇨증, 뮤코다당질축적증, 만성육아종병 및 티로신혈증과 같은 선천성 대사장애를 치료하거나, 암, 종양 또는 기타 병리학적 이상을 치료하기 위한 유전자 치료에서의 자가 또는 이종 전이유전자 캐리어로서 사용될 수 있다.
다른 실시양태에서, 상기 세포는 각막상피 결함, 연골 치료, 안면 박리, 점막, 고막, 창자 내층, 신경학적 구조(예를 들어, 망막, 기저막의 청각성 뉴론, 후각 상피의 후각성 뉴론), 피부의 외상손상에서의 화상 및 부상 치료, 두피(모발) 이식, 또는 기타 손상 및 병에 걸린 기관 또는 조직의 재구성을 포함하나, 이들로써 한정되는 것은 아닌 자가 또는 이종 조직 재생 또는 대체 치료 또는 프로토콜에 서 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 방법을 사용하여 수득된 많은 수의 태아-유사 줄기세포 및/또는 유래세포는 많은 골수 공여에 대한 필요성을 감소시킨다. 골수 이식에서의 생착을 위해서는 환자중량(kg)당 약 1×108 내지 2×108의 골수 단클론성 세포가 주입되어야 한다(즉, 70kg의 공여자의 경우 약 70㎖의 골수). 70㎖를 수득하기 위해서는 상기 공여 과정에서 과도한 공여 및 상당량의 혈액 손실이 불가피하다. 특정 실시양태에서, 소량의 골수 공여(예를 들어, 7 내지 10㎖)로부터의 세포는 수혜자에게 주입하기 전 태반 생물반응로에서의 증식에 의해 팽창될 수 있다.
또다른 실시양태에서, 태아-유사 줄기세포는 화학요법 이외의 추가적인 처리에 사용될 수 있다. 암세포를 표적으로 하여 파괴하는데 사용되는 대부분의 화학요법은 모든 증식세포, 즉, 세포 분열이 일어나는 세포를 죽임으로써 수행된다. 골수는 신체중에서 가장 활동적으로 증식하는 조직중 하나이므로, 조혈줄기세포는 화학요법제에 의해 가장 빈번히 손상 또는 파괴되어, 결과적으로 혈액 세포 생성이 축소 또는 중단된다. 화학요법은 주기적으로 종결되어 화학요법의 재시작 전에 환자의 조혈계가 혈액세포 공급을 보충하도록 해야 한다. 정지 줄기세포에서 화학요법이 재시작할 수 있도록 허용가능한 수준으로 백혈구 세포를 증식 및 증가시키는데에는 한달 이상이 소요될 수 있다(재시작되면, 상기 골수줄기세포는 파괴된다).
백혈구 세포는 화학요법 처리 도중 재생되는 반면, 암은 시간에 따라 성장하 고 자연선택으로 인해 화학요법 약물에 대한 저항성이 커질 수 있다. 따라서, 보다 장기간의 화학요법이 행해지고 처리사이의 간격이 짧아질수록, 암을 성공적으로 죽일 가능성이 커진다. 화학요법 처리사이의 간격을 단축시키기 위해, 본 발명에 따라 수거된 태아-유사 줄기세포 또는 유래세포를 환자에게 투여할 수 있다. 이러한 처리는, 환자가 낮은 혈액세포 수를 나타내어 화학요법 처리의 보다 빠른 재개를 허용하게 하는 시간을 감축시킬 것이다.
또다른 실시양태에서, 인간 태반 줄기세포는 만성 육아종병과 같은 유전성 질환을 치료 또는 예방할 수 있다.
4.6. 약학 조성물
본 발명은, 조건화되거나 조건화되지 않은 인간 유래 줄기세포의 이식 전 또는 후에 단일 또는 복수 투여에 효과적인 1회 분량 및/또는 수회 분량을 포함하고; 태반 유래의 인간 만능성 및 다능성 유래 줄기세포가 중배엽성 및/또는 조혈성 계열 세포로 분화되는 것을 억제, 조절 및/또는 조정하는데 충분한 효과를 발휘하는, 약학 조성물을 포함한다.
본 실시양태에 따라, 본 발명의 태아-유사 줄기세포는 주사가능물질(예를 들어, 본원의 참조문헌으로 인용되는 국제특허 공개공보 제 WO 96/39101 호)로서 제형화될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 세포 및 조직은 미국특허 제 5,709,854 호; 제 5,516,532 호; 제 5,654,381 호(모두 본원의 참조문헌으로 인용됨)에 기술된 바와 같은 중합성 또는 가교성 하이드로겔을 사용하여 제형화될 수 있다.
5. 실시예
5.1. 실시예 1: 배수된 태반의 관류액으로부터 회수된 세포 유형 분석
본 실시예는 본 발명의 방법에 따라 배양된 태반의 유출 관류액으로부터 회수된 세포 유형의 분석을 기술한다.
포스페이트 완충 염류 용액(PBS) 20㎖을 관류액에 첨가하고 이중 10㎖를 수거하여 3000rpm(분당 회전수)으로 원심분리시켰다. 유출물을 4개의 튜브로 나누고 얼음 배쓰에 배치하였다. PBS 중의 1% 소 태아혈청(FCS) 용액 2.5㎖를 첨가하고 상기 튜브를 원심분리시켰다(140분×10g(중력으로 인한 가속화)). 상기 펠릿을 1% FCS 5㎖에 재현탁시킨 다음, 2개의 튜브를 혼합하였다. 총 림프구의 수와 총 단구의 수를 더한 다음, 세포의 총 현탁부피를 곱하여 총 단핵세포수를 계산하였다.
하기 표 1는 전술한 방법에 따라 배양된 태반의 관류에 의해 수득된 세포의 유형을 개시한다.
WBC
1000/㎖		 Lym% MID% GRA% 총 부피 세포수
CB(제대혈) 10.5 43.2 8 48.8 60㎖ 6.3×108
PP
(태반 관류액, 실온)		 12.0 62.9 18.2 18.9 15㎖ 1.8×108
PP2
(태반 관류액, 37℃)		 11.7 56.0 19.2 24.8 30㎖ 3.5×108
PP의 샘플은 피콜(Ficoll) 이후이었다.
피콜 이후의 PP의 총 세포수는 5.3×108이었고, 처리 이전의 CB 수는 6.3×108이다. Lym%는 림프구의 %를 의미하고; NID%는 중간 백혈구세포의 %를 의미하며; GRA%는 과립구의 %를 의미한다.
5.2. 실시예 2: 태반의 관류 및 항온처리에 의해 수득된 세포의 분석
하기 실시예는 본 발명의 방법에 따른 관류 및 항온처리에 의해 수득된 세포의 분석을 기술한다.
5.2.1. 재료 및 방법
제대혈 은행 프로그램 명부에 기록되어 있고 회수된 태반이 연구의 목적으로 사용되는 것에 대해 동의한 임산부들 중에서 태반 공여자를 모집하였다. 공여자에 대한 데이터는 비공개일 수 있다. 또한, 상기 공여자는 냉동 보존에서의 제대혈 표본의 통상적인 처리로부터 발생된 데이터의 사용을 수락하였다. 이를 통해, 하기 실험방법을 사용하여 수거된 제대혈 및 회수된 유출 관류액의 조성물을 비교할 수 있었다.
제대 및 태반으로터 제대혈의 방혈은, 전술한 방법에 따라 실온에서 저장되며 4 내지 24시간 이내에 실험실로 이송되고, 상기 태반은 멸균상태의 폐쇄 용기안에서 실온으로 보관되며 출산후 4시간 이내에 실험실로 이송된다. 기관의 분쇄 및 제혈관의 만출과 같은 물리적 손상이 명백한 감염시에는 태반을 폐기하였다. 태반을 멸균 용기에서 2 내지 20시간 동안 실온(23±2℃)으로 유지하거나 냉장(4℃)시켰다. 주기적으로, 상기 태반을 25±3℃의 멸균식염수에 침지시켜 육안으로 보이는 표면 혈액 또는 잔류 세포를 제거하였다.
상기 제대를 태반으로 삽입된 부분으로부터 약 5cm 절개하고 멸균 유액 통로에 연결된 테플론(TETLON(등록상표)) 또는 폴리프로필렌 카테터를 사용하여 캐뉼레이팅시켜 태반의 양방통행 관류 및 유출액의 회수를 가능하게 하였다. 전술한 방법에서는 모든 양태의 태반 조건화가 가능하고, 주변온도 조건의 제어, 및 혈관내 압력 및 유속, 제대 및 관류액 온도 및 회수된 유출액 부피의 실시간 감시하에서 관류 및 유출액 수거가 수행될 수 있다. 프로토콜을 조건화시키는 범위를 산후 24시간 동안 평가하였으며, 상기 유출액의 세포 조성을 유세포검사, 광 현미경 및 개체군 형성단위 평가를 통해 분석하였다.
5.2.2. 태반 조건화
상기 공여자 태반을 분만후 12 내지 24시간 이내에 실온에서 처리하였다. 처리 전, 세포막을 제거하고 모체 부위를 세척하여 잔여 혈액을 제거하였다. 혈액 샘플의 수거를 위해, 20 게이지 버터플라이(Buteerfly) 니들로 제조된 카테터를 사용하여 상기 제혈관을 캐뉼레이팅시켰다.
상기 공여자 태반을, 다양한 조건하에서, 예를 들어 5 내지 37℃, 5% CO2, pH 7.2 내지 7.5(바람직하게는 pH 7.45)를 유지시켜 잔여 태아-유사 줄기세포의 증식 및 보충을 위한 생리학적 상용성의 환경으로 모의하고 지속시켰다. 캐뉼라를, 헤파린(제조사: 엘킨스-신(Elkins-Sinn), 뉴저지 소재) 2U/㎖를 함유하는 IMDM 무혈청 매질(제조사: 깁코비알엘(GibcoBRL), 뉴욕 소재)로 플러슁하였다. 상기 태반을 분당 50㎖의 숙도로 관류시켜 관류액이 약 150㎖가 될 때까지 수거하였다. 상기 부피의 관류액을 "초기 분율"라 라벨링하였다. 동일한 속도로 태반의 관류를 유지시켜 약 150㎖의 제 2 분율을 수거하고 "후기 분율"이라 라벨링하였다. 이러한 과정 도중, 관류 공정 및 세포 물질의 회수를 보조하기 위해 태반을 부드럽게 마사지하였다. 동맥 캐뉼라를 통한 중력 배액 및 호흡을 통해 관류 순환으로부터 유출액을 수거하였다.
이어서, 헤파린화된(2U/㎖) 덜벡코(Dulbecco)의 개질된 이글 매질(Eagle Medium)(H.DMEM)을 사용하여 태반을 10분 동안 15㎖/분의 속도로 관류시키고 상기관류액을 1시간 이내에 모체 부위로부터 수거한 다음, 응집세포의 수를 계산하였다. 회수된 응집세포의 수가 100/㎖ 아래로 떨어질 때까지 상기 관류 및 수거 과정을 1회 또는 2회 반복하였다. 상기 관류액을 울혈시키고 가볍게 원심분리하여 혈소판, 잔류 세포 및 탈-응집된 세포막을 제거하였다. 이어서, 피콜-하이파크(Ficoll-Hypaque) 밀도 기울기 원심분리시켜 응집세포를 분리하고 세척후 H.DMEM 중에 재현탁시켰다. 유착성 세포를 분리시키기 위해, 5 내지 10×106개의 세포를 여러개의 T-75 플라스크에 각각 배치하고 시판중인 MSCGM(Mesenchymal Stem Cell Growth Medium)(제조사: 바이오 휘트에이커(Bio Whittaker))으로 배양하고, 조직 항온처리기(37℃, 5% CO2)에 배치하였다. 10 내지 15일 후, PBS로 세척하여 비유착성 세포를 제거한 다음, MSCGM으로 대체시켰다. 상기 플라스크에 대해, 다양한 유형의 유착성 세포의 존재, 특히 섬유아세포 클러스터의 확인 및 팽창을 매일 검사하였다.
5.2.3. 세포 회수 및 분리
실온에서 15분 동안 5000 ×g으로 원심분리시켜 관류액으로부터 세포를 회수하였다. 이러한 과정은 세포가 잔류 세포 및 혈소판으로부터 오염되는 것으로부터 분리시키는 역할을 한다. 상기 세포 펠릿을, 헤파린 2U/㎖ 및 EDTA 2mM(깁코비알엘)을 함유하는 IMDM 무혈청 매질중에 재현탁시켰다. 단핵 세포의 총분율을 림포프렙(제조사: 니콤드 파마(Nycomed Pharma), 노르웨이 오슬로 소재)을 사용하여 제조업자의 권고된 방법에 따라 분리시키고, 상기 단핵세포 분율을 재현탁시켰다. 혈구계측기를 사용하여 세포의 수를 세었다. 트립판 블루 배제를 통해 생존율을 평가하였다. 0.2% EDTA를 포함한 0.05% 트립신 용액(제조사: 시그마(Sigma), 미저리주 세인트 루이스 소재)을 사용한 "분리성 트립신화"를 통해 중간엽 세포를 분리하였다. 섬유아세포는 약 5분 이내에 가소성 표면으로부터 분리되는 반면, 기타 유착성 군집에서는 20 내지 30분의 항온처리가 더 요구되므로 섬유아세포분리성 트립신화가 가능하였다. 상기 격리된 섬유아세포를, 하기 트립신화, 및 트립신 중성화 용액(TNS, 제조사: 바이오 휘트에이커)을 사용한 트립신 중성화를 통해 채취하였다. 상기 세포를 H.DMEM에서 세척하고 MSCGM에서 재현탁시켰다.
벡톤-디킨슨 FACSCalibur 도구를 사용하여 유속 세포분석을 수행하였으며 골수-유도된 MSC(중간엽세포)에 대해 공지된 표지를 기준으로 선택된 FITC 및 FE 라벨링된 단클론성 항체(mAbs)를 B.D 및 칼텍 실험실(캘리포니아주 사우스 샌프란시스코 소재)로부터 구매하였으며, SH2, SH3 및 SH4 항체 생성 하이브리도마를 수득하였으며 배양된 상층액 중의 상기 mAbc의 반응성을 FITC 또는 PE 라벨링된 F(ab)'2 고트(goat) 항-마우스 항체로 검출하였다. 시판중인 유도 및 유지 배양 매질(바이오 휘트에이커)를 사용하여 제조업체의 지시에 따라 계열 분화를 수행하였다.
5.2.4. 태반 태아-유사 줄기세포의 분리
상기 배양 플라스크 중의 유착성 세포의 미세 조사를 통해 형태학적으로 상이한 세포 유형을 밝혔다. 방추형 세포, 대형핵 및 핵 주위에 다수의 소형 액포를 갖는 둥근 세포, 및 다수의 돌기를 갖는 별모양 세포(이들 별모양 세포중 하나를 상기 플라스크에 부착하였다)가 상기 배양 플라스크에 대해 유착하는 것을 관찰하였다. 상기 유착성 세포를 추가로 특정짓는 어떠한 시도도 하지 않았으나, 유사한 세포가 골수, 제대혈 및 말초혈의 배양액 중에서 관찰되었으며, 따라서 본질적으로 비-줄기세포형인 것으로 간주된다. MSC(중간엽세포)가 될 후보는 최종적으로 군집으로서 나타나는 섬유아세포이었으며, 이를 분리성 트립신화를 통해 분리시키고 2차 플라스크에서 2차배양시켰다. 트립신화 후, 상기 둥근 세포를 상 현미경으로 관찰한 결과, 상기 세포가 고과립화되었으며, 이는 바이오 휘트에이커로부터 구매하거나 실험실에서 제조된 골수-유도된 MSC와 구별할 수 없을 정도임이 밝혀졌다. 2차배양시, 태반-유도된 태아-유사 줄기세포는, 수시간 이내에 유착되는 이들의 초기상과는 대조적으로 특정한 섬유아세포 형상이고 기준물질인 골수-유도된 MSC와 동일한 성장 패턴을 형성하는 것으로 생각된다. 또한, 2차배양 및 재급식 도중, 느슨하게 결박된 단클론성 세포를 세척하고 상기 배양액을 균질하고 임의의 가시적 비-섬유아세포 오염물질이 없도록 유지시켰다.
5.2.5. 결과
초기 및 후기 분율 정제된 단핵세포에서 CD-34, CD-38 및 기타 줄기세포-결합된 표면 지표의 발현을 유속 세포분석계로 평가하였다. 회수, 저장된 세포를 PBS중에서 세척한 다음, 항-CD34 파이코에리트린 및 항-CD38 플루오레세인 이소티오시아네이트(벡톤 디킨슨, 캘리포니아주 마운틴뷰 소재)로 이중-착색시켰다.
자기 세포 분리, 예를 들어 오토 막스(밀테나이(Mitenyi))를 사용하여 세포를 분리시켰다. 바람직하게는, CD 34+ 세포분리를 우선 수행한다.
5.3. 실시예 3: 관류 매질
하기 실시예는 격리된 태반의 배양을 위해 바람직한 관류용액의 제형을 제공한다.
화합물 공급체 저장 농도 최종 농도 500㎖
DMEM-LG 깁코비알엘11885-084 300㎖
MCDB201 시그마 M-6770 H2O중에 용해됨 pH 7.2까지 여과 200㎖
FCS 하이클론
(Hyclone)		 100% 2% 10㎖
ITS 시그마 I-3146 또는 깁코비알엘41400-045 100x 1x 5㎖
펜 & 스트렙
(Pen & Strep) 		깁코비알엘15140-122 100x 1x 5㎖
LA+BSA 시그마+깁코비알엘 비에스에이 100x
(LA의 1㎍/㎖)		 LA 10ng/㎖ 5㎖
덱사메타손
(Dexamethasone)		 시그마 D-2915 H2O 중의 0.25mM 0.05μM 100㎕
L-아스코르브산 시그마 A-8960 1000x(100mM) 1x(0.1mM) 500㎕
PDGF(50㎍) 알&디(R&D) 220BD 4mM HCl+0.1% BSA 중의 10㎍/㎖ 10ng/㎖ 500㎕
EGF(200㎍) 시그마 E-9644 10mM HAc+0.1% BSA 중의 10㎍/㎖ 10ng/㎖ 500㎕
상기 조성물은 다양한 온도에서 태반을 관류시키는데 사용될 수 있는 관류액이다. 항생제, 항응고제 및 기타 성장인자와 같은 추가의 성분을 상기 관류액 또는 배양 매질에 사용할 수 있다.
본 발명은 본원에 기술된 특정 실시양태에 의해 그 범주가 제한되지 않는다. 실제로, 본원에 기술된 것 이외에도 본 발명의 다양한 개질이 수행될 수 있음이 당해 분야의 숙련자들에게 명백할 것이다. 이러한 개질은 첨부된 청구항의 범주에 포함되어야 한다.
본원에 인용된 모든 문헌은 모두 본원의 참조문헌으로서 인용되며, 표시된 각각의 개별 문헌, 특허 또는 특허원과 동일한 정도의 목적에 대해 본원의 참조문헌으로서 인용된다.
상기 인용문헌은 출원일 이전의 개시물로서, 본 발명이 종래 발명의 효과에 의한 상기 문헌을 선행하도록 권리가 부여되지 않는다는 승인으로서 해석되어서는 안된다.
6. 도면의 간단한 설명
도 1은 태반의 정맥 및 동맥을 캐뉼레이팅시킨 후, 관류액을 수거하는 것에 관한 단면도이다.
도 2a 내지 도 2e는 방혈 및 관류된 태반을 수거하고, 죄고, 관류시키고, 수거하고, 저장하는 것을 도시하는 개략도이다.
도 3은 바이오리액터로서 사용하기 위한 장치내의 관류된 태반의 단면도이다.
도 4는 관류된 태반으로부터 회수된 태아-유사 줄기세포를 비롯한 세포를 분류하기 위한 선택 도식이다.

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  60. MHC 2군-인 단리된 인간 태반 줄기 세포로서, 상기 세포는 제대혈로부터 수득한 것이 아닌 세포.
  61. 제60항에 있어서,
    상기 세포는 추가적으로 CD34- 및 CD38-인 세포.
  62. 제60항에 있어서,
    상기 세포는 추가적으로 OCT-4+ 및 ABC-p+인 세포.
  63. 제60항에 있어서,
    상기 세포는 추가적으로 SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+ 및 ABC-p+인 세포.
  64. 제60항에 있어서,
    상기 세포는 추가적으로 CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+ 및 ABC-p+인 세포.
  65. 제60항에 있어서,
    상기 세포는 추가적으로 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+ 및 ABC-p+인 세포.
  66. 제60항의 세포의 단리된 군집.
  67. 제61항의 세포의 단리된 군집.
  68. 제62항의 세포의 단리된 군집.
  69. 제63항의 세포의 단리된 군집.
  70. 제64항의 세포의 단리된 군집.
  71. 제65항의 세포의 단리된 군집.
  72. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 제대혈이 방혈되고 관류되어 잔류 혈액이 제거된 태반으로부터 수득한 것이고, 분리성 트립신화에 의해 단리된 것인 세포.
  73. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 태아에서 유래된 것인 세포.
  74. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 DMEM 또는 간엽 줄기 세포 성장 배지(Mesenchymal Stem Cell Growth Medium, MSCGM)를 포함하는 배양 배지에서 팽창되는 것인 세포.
  75. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 우태혈청(Fetal Bovine Serum, FBS)을 포함하는 배양 배지에서 팽창되는 것인 세포.
  76. 제75항에 있어서,
    상기 배양 배지는 β-머캅토에탄올을 포함하는 것인, 세포.
  77. 제75항에 있어서,
    상기 배양 배지는 항생제를 포함하는 것인, 세포.
  78. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 무혈청 배지에서 팽창되는 것인 세포.
  79. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 코팅되지 않은 표면에서 팽창되는 것인 세포.
  80. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항의 세포를 포함하는 세포 배양액.
  81. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 최초로 단리된 것인 세포.
  82. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 배양 중 적어도 두 배가 되는 것인 세포.
  83. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 골아세포의 표현형 또는 연골세포의 표현형을 갖는 세포로 분화될 수 있는 것인 세포.
  84. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 신경세포의 표현형을 갖는 세포로 분화될 수 있는 것인 세포.
  85. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항의 세포를 포함하는, 단리된 세포 군집.
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Families Citing this family (158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60043534D1 (de) * 1999-02-04 2010-01-28 Pluristem Ltd VERFAHREN UND VORRICHTUNG ZUR HALTUNG UND EXPANSION VON HEMATOPOIETISCHEN STAMMZELLEN UND/ODER VORLäUFERZELLEN
US7927587B2 (en) 1999-08-05 2011-04-19 Regents Of The University Of Minnesota MAPC administration for the treatment of lysosomal storage disorders
US8071740B2 (en) 2000-11-17 2011-12-06 Vascular Biogenics Ltd. Promoters exhibiting endothelial cell specificity and methods of using same for regulation of angiogenesis
EP2305795B1 (en) 2000-12-06 2019-07-03 Celularity, Inc. Method of collecting placental stem cells
US20080152629A1 (en) * 2000-12-06 2008-06-26 James Edinger Placental stem cell populations
US7311905B2 (en) * 2002-02-13 2007-12-25 Anthrogenesis Corporation Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells
EP1367892B1 (en) 2001-02-14 2013-10-30 Anthrogenesis Corporation Renovation and repopulation of decellularized tissues and cadaveric organs by stem cells
EP2336300B1 (en) * 2001-02-14 2015-07-08 Anthrogenesis Corporation Post-partum mammalian placenta, its use and placental stem cells therefrom
WO2002083710A2 (en) * 2001-04-13 2002-10-24 Wyeth Holdings Corporation Removal of bacterial endotoxin in a protein solution by immobilized metal affinity chromatography
EP2223932A1 (en) 2001-10-19 2010-09-01 Vascular Biogenics Ltd. Polynucleotide constructs, pharmaceutical compositions and methods for targeted downregulation of angiogenesis and anticancer therapy
WO2003042405A2 (en) * 2001-11-15 2003-05-22 Children's Medical Center Corporation Methods of isolation, expansion and differentiation of fetal stem cells from chorionic villus, amniotic fluid, and placenta and therapeutic uses thereof
AUPS112802A0 (en) * 2002-03-15 2002-04-18 Monash University Methods of inducing differentiation of stem cells into a specific cell lineage
ZA200408369B (en) * 2002-04-12 2006-11-29 Celgene Corp Methods for identification of modulators of angiogenesis, compounds discovered thereby, and methods of treatment using the compounds
US7498171B2 (en) * 2002-04-12 2009-03-03 Anthrogenesis Corporation Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
US20050118715A1 (en) * 2002-04-12 2005-06-02 Hariri Robert J. Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
US20060121607A1 (en) * 2002-08-08 2006-06-08 Thomas Schulz Compositions and methods for neural differentiation of embryonic stem cells
KR20050086780A (ko) * 2002-11-26 2005-08-30 안트로제네시스 코포레이션 세포요법제, 세포요법제 단위 및 이를 이용한 치료방법
DE10326746B4 (de) * 2003-06-13 2006-04-06 Gerlach, Jörg, Dr.med. Bioreaktor in Form einer Organkopie, Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendung zur Anzucht, zur Differenzierung, zum Erhalt und/oder zur Nutzung von Zellen
US8790637B2 (en) 2003-06-27 2014-07-29 DePuy Synthes Products, LLC Repair and regeneration of ocular tissue using postpartum-derived cells
US7875272B2 (en) * 2003-06-27 2011-01-25 Ethicon, Incorporated Treatment of stroke and other acute neuraldegenerative disorders using postpartum derived cells
US8518390B2 (en) 2003-06-27 2013-08-27 Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc Treatment of stroke and other acute neural degenerative disorders via intranasal administration of umbilical cord-derived cells
ES2564045T3 (es) 2003-06-27 2016-03-17 DePuy Synthes Products, Inc. Células derivadas del post-parto para su uso en el tratamiento de enfermedad del corazón y el sistema circulatorio
US8491883B2 (en) 2003-06-27 2013-07-23 Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc Treatment of amyotrophic lateral sclerosis using umbilical derived cells
US9592258B2 (en) 2003-06-27 2017-03-14 DePuy Synthes Products, Inc. Treatment of neurological injury by administration of human umbilical cord tissue-derived cells
US9572840B2 (en) 2003-06-27 2017-02-21 DePuy Synthes Products, Inc. Regeneration and repair of neural tissue using postpartum-derived cells
JP2007513188A (ja) 2003-12-04 2007-05-24 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ リソソーム蓄積症の処置のための組成物および方法
AU2005231680A1 (en) * 2004-03-26 2005-10-20 Celgene Corporation Systems and methods for providing a stem cell bank
KR100823090B1 (ko) * 2004-11-22 2008-04-18 한훈 제대혈 유래 줄기세포를 이용한 척수하반신 마비의 세포치료용 조성물
EP1835924B1 (en) * 2004-12-23 2013-08-21 Ethicon, Incorporated Treatment of parkinson's disease and related disorders using postpartum derived cells
PL1831356T3 (pl) 2004-12-23 2017-07-31 DePuy Synthes Products, Inc. Komórki poporodowe pochodzące z tkanki pępowinowej i sposoby ich wytwarzania i stosowania
US20100093066A1 (en) * 2005-08-26 2010-04-15 Regents Of The University Of Minnesota Decellularization and recellularization apparatuses and systems containing the same
SG170731A1 (en) 2005-08-26 2011-05-30 Univ Minnesota Decellularization and recellularization of organs and tissues
US20070059824A1 (en) * 2005-09-12 2007-03-15 Yong Zhao Human umbilical cord blood-derived pluripotent fibroblast-like-macrophages
ES2454021T3 (es) 2005-10-05 2014-04-09 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Células madre de tipo embrionario aisladas de sangre de cordón umbilical humano
US9388382B2 (en) * 2005-10-05 2016-07-12 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Isolation of CD14 negative, CD45 positive and CD117 positive embryonic-like stem cells free of monocytes from human umbilical cord blood mononuclear cells
NZ567335A (en) * 2005-10-13 2012-02-24 Anthrogenesis Corp Immunomodulation using placental stem cells
WO2007047465A1 (en) * 2005-10-13 2007-04-26 Anthrogenesis Corporation Production of oligodendrocytes from placenta-derived stem cells
EP1971681B1 (en) 2005-12-16 2017-08-23 DePuy Synthes Products, Inc. Compositions and methods for inhibiting adverse immune response in histocompatibility-mismatched transplantation
EP1976975B1 (en) 2005-12-19 2012-08-01 Ethicon, Inc. In vitro expansion of postpartum derived cells in roller bottles
US9125906B2 (en) 2005-12-28 2015-09-08 DePuy Synthes Products, Inc. Treatment of peripheral vascular disease using umbilical cord tissue-derived cells
AU2006332679A1 (en) 2005-12-29 2007-07-12 Anthrogenesis Corporation Co-culture of placental stem cells and stem cells from a second source
CN101374941A (zh) 2005-12-29 2009-02-25 人类起源公司 采集和保存胎盘干细胞的改良组合物及其使用方法
KR20180105266A (ko) 2005-12-29 2018-09-27 안트로제네시스 코포레이션 태반 줄기 세포 집단
US9944900B2 (en) * 2006-01-18 2018-04-17 Hemacell Perfusion Pulsatile perfusion extraction method for non-embryonic pluripotent stem cells
US20110171182A1 (en) * 2006-03-23 2011-07-14 Pluristem Ltd. Methods for cell expansion and uses of cells and conditioned media produced thereby for therapy
US20110293583A1 (en) * 2006-03-23 2011-12-01 Pluristem Ltd. Methods for cell expansion and uses of cells and conditioned media produced thereby for therapy
PT2626417E (pt) * 2006-03-23 2015-11-16 Pluristem Ltd Métodos para expansão celular e usos de células e de meios condicionados produzidos através deles para terapia
EP4094578A1 (en) * 2006-05-11 2022-11-30 Celularity Inc. Methods for collecting and using placenta cord blood stem cells
US7993918B2 (en) 2006-08-04 2011-08-09 Anthrogenesis Corporation Tumor suppression using placental stem cells
US8372437B2 (en) 2006-08-17 2013-02-12 Mimedx Group, Inc. Placental tissue grafts
CA2666789C (en) * 2006-10-18 2016-11-22 Yong Zhao Embryonic-like stem cells derived from adult human peripheral blood and methods of use
JP2010507392A (ja) * 2006-10-23 2010-03-11 アントフロゲネシス コーポレーション 胎盤細胞集団で骨欠損を治療するための方法及び組成物
CA2670497A1 (en) 2006-11-24 2008-05-29 Regents Of The University Of Minnesota Endodermal progenitor cells
EP2120977B1 (en) 2007-02-12 2013-05-15 Anthrogenesis Corporation Treatment of inflammatory diseases using placental stem cells
JP2010518812A (ja) 2007-02-12 2010-06-03 アンスロジェネシス コーポレーション 接着性胎盤幹細胞由来の肝細胞および軟骨細胞、ならびにｃｄ３４＋、ｃｄ４５−胎盤幹細胞の濃縮細胞集団
WO2008109816A1 (en) * 2007-03-08 2008-09-12 Hemacell Perfusion, Inc. Method for isolation of afterbirth derived cells
US8574567B2 (en) 2007-05-03 2013-11-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
EP2155860B1 (en) 2007-05-03 2014-08-27 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
US20100143477A1 (en) * 2007-07-27 2010-06-10 Immuneregen Biosciences, Inc. Methods and Compositions for Stimulating the Proliferation or Differentiation of Stem Cells with Substance Por an Analog Thereof
US9200253B1 (en) 2007-08-06 2015-12-01 Anthrogenesis Corporation Method of producing erythrocytes
EP2197270B8 (en) 2007-09-07 2020-03-04 Surgical Biologics, LLC Placental tissue grafts and improved methods of preparing and using the same
ES2392729T5 (es) * 2007-09-19 2015-08-28 Pluristem Ltd. Células adherentes de tejidos adiposos o de placenta y uso de las mismas en terapia
KR20160092062A (ko) * 2007-09-26 2016-08-03 안트로제네시스 코포레이션 인간 태반 관류액으로부터의 혈관형성 세포
PT2203176E (pt) 2007-09-28 2015-03-02 Anthrogenesis Corp Supressão de tumor utilizando perfusato placentário humano e células assassinas naturais intermédias derivadas de placenta humanas
CA2701435C (en) 2007-10-05 2017-06-20 Ethicon, Inc. Repair and regeneration of renal tissue using human umbilical cord tissue-derived cells
US20090099092A1 (en) * 2007-10-12 2009-04-16 Immuneregen Biosciences, Inc. Methods for stimulating fibroblast proliferation using substance p analogs
AU2008325142A1 (en) * 2007-11-07 2009-05-14 Anthrogenesis Corporation Use of umbilical cord blood in the treatment of premature birth complications
US8236538B2 (en) 2007-12-20 2012-08-07 Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc Methods for sterilizing materials containing biologically active agents
NZ601497A (en) 2008-08-20 2014-03-28 Anthrogenesis Corp Improved cell composition and methods of making the same
US8828376B2 (en) 2008-08-20 2014-09-09 Anthrogenesis Corporation Treatment of stroke using isolated placental cells
DK2331109T3 (da) 2008-08-22 2013-09-08 Anthrogenesis Corp Fremgangsmåder og sammensætninger til behandling af knogledefekter med placentale cellepopulationer
RU2539786C2 (ru) 2008-09-02 2015-01-27 Плуристем Лтд. Выращенные в прикрепленной к субстрату культуре клетки из ткани плаценты и их использование при лечении
US20100272694A1 (en) * 2008-10-17 2010-10-28 Affiliated Hospital Of Ningxia Medical University Clinic compliant method for banking human placental mesenchymal cells
CN107201337A (zh) 2008-11-19 2017-09-26 人类起源公司 羊膜来源的贴壁细胞
US9192695B2 (en) 2008-11-20 2015-11-24 Allosource Allografts combined with tissue derived stem cells for bone healing
MX2011005230A (es) * 2008-11-21 2011-06-16 Anthrogenesis Corp Tratamiento de enfermedades, desordenes o condiciones del pulmon usando celulas de placenta.
PL2379088T3 (pl) 2008-12-19 2018-07-31 DePuy Synthes Products, Inc. Leczenie płuca oraz chorób i zaburzeń płucnych
US10179900B2 (en) 2008-12-19 2019-01-15 DePuy Synthes Products, Inc. Conditioned media and methods of making a conditioned media
PL2411504T3 (pl) 2009-03-26 2017-10-31 Depuy Synthes Products Inc Komórki ludzkiej tkanki pępowinowej jako terapia choroby Alzheimera
WO2010141654A1 (en) * 2009-06-05 2010-12-09 Anthrogenesis Corporation Improved method of collecting placental cells
CA2767014C (en) 2009-07-02 2022-01-25 Anthrogenesis Corporation Method of producing erythrocytes without feeder cells
WO2011005306A2 (en) * 2009-07-07 2011-01-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Production of and uses for decellularized lung tissue
US20090311785A1 (en) * 2009-08-20 2009-12-17 Luis Nunez Method for organizing and controlling cell growth and tissue regeneration
MX2012008636A (es) 2010-01-26 2012-10-15 Anthrogenesis Corp Tratamiento de canceres relacionados con el hueso utilizando celulas madre placenterias.
US20110212064A1 (en) 2010-02-18 2011-09-01 Timothy Jansen Therapeutic products comprising vitalized placental dispersions
NZ602808A (en) 2010-04-07 2014-10-31 Anthrogenesis Corp Angiogenesis using placental stem cells
WO2011127113A1 (en) 2010-04-08 2011-10-13 Anthrogenesis Corporation Treatment of sarcoidosis using placental stem cells
US10130736B1 (en) 2010-05-14 2018-11-20 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US8883210B1 (en) 2010-05-14 2014-11-11 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US9352003B1 (en) 2010-05-14 2016-05-31 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
EP3216444B1 (en) * 2010-07-02 2020-03-11 The University of North Carolina at Chapel Hill Biomatrix scaffolds for industrial scale dispersal
EP2593542B1 (en) 2010-07-13 2018-01-03 Anthrogenesis Corporation Methods of generating natural killer cells
US10233420B2 (en) 2010-09-01 2019-03-19 Regents Of The University Of Minnesota Methods of recellularizing a tissue or organ for improved transplantability
WO2012048298A2 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Caridianbct, Inc. Methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system with control conditions
WO2012092458A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Anthrogenesis Corporation Compositions comprising placental stem cells and platelet rich plasma, and methods of use thereof
US8969315B2 (en) 2010-12-31 2015-03-03 Anthrogenesis Corporation Enhancement of placental stem cell potency using modulatory RNA molecules
CA2826433C (en) 2011-02-14 2022-05-31 Brenda S. Morse Micronized placental tissue compositions and methods of making and using the same
AU2012217982B2 (en) 2011-02-14 2016-05-12 Mimedx Group Inc. Tissue grafts modified with a cross-linking agent and method of making and using the same
KR20120098202A (ko) * 2011-02-28 2012-09-05 (주)차바이오앤디오스텍 자하거 추출물 및 자하거 추출물 제조 방법
EP3260533B1 (en) 2011-03-22 2019-09-11 Pluristem Ltd. Methods for treating radiation or chemical injury
US8834928B1 (en) 2011-05-16 2014-09-16 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissugenic implants, and methods of fabricating and using same
WO2012166844A2 (en) 2011-06-01 2012-12-06 Anthrogenesis Corporation Treatment of pain using placental stem cells
WO2013055476A1 (en) 2011-09-09 2013-04-18 Anthrogenesis Corporation Treatment of amyotrophic lateral sclerosis using placental stem cells
US9162011B2 (en) 2011-12-19 2015-10-20 Allosource Flowable matrix compositions and methods
WO2013095830A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 Mimedx Group Inc. Cross-linked dehydrated placental tissue grafts and methods for making and using the same
CA2869681A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc Detection of human umbilical cord tissue-derived cells
CN104411318A (zh) * 2011-12-23 2015-03-11 人类起源公司 包含脱细胞并再群体化的胎盘血管支架的类器官
US9290738B2 (en) 2012-06-13 2016-03-22 Miromatrix Medical Inc. Methods of decellularizing bone
US10857266B2 (en) 2012-08-15 2020-12-08 Mimedx Group, Inc. Reinforced placental tissue grafts and methods of making and using the same
US11338063B2 (en) 2012-08-15 2022-05-24 Mimedx Group, Inc. Placental tissue grafts modified with a cross-linking agent and methods of making and using the same
US8904664B2 (en) 2012-08-15 2014-12-09 Mimedx Group, Inc. Dehydration device and methods for drying biological materials
US9943551B2 (en) 2012-08-15 2018-04-17 Mimedx Group, Inc. Tissue grafts composed of micronized placental tissue and methods of making and using the same
US9180145B2 (en) 2012-10-12 2015-11-10 Mimedx Group, Inc. Compositions and methods for recruiting and localizing stem cells
US9155799B2 (en) 2012-11-19 2015-10-13 Mimedx Group, Inc. Cross-linked collagen with at least one bound antimicrobial agent for in vivo release of the agent
US8946163B2 (en) 2012-11-19 2015-02-03 Mimedx Group, Inc. Cross-linked collagen comprising metallic anticancer agents
CN105283075A (zh) 2012-12-14 2016-01-27 人类起源公司 抗失巢凋亡胎盘干细胞及其应用
US10517931B2 (en) 2013-01-17 2019-12-31 Mimedx Group, Inc. Non-surgical, localized delivery of compositions for placental growth factors
US9655948B1 (en) 2013-01-17 2017-05-23 Mimedx Group, Inc. Non-surgical, localized delivery of compositions for placental growth factors
US9827293B2 (en) 2013-01-17 2017-11-28 Mimedx Group, Inc. Non-surgical, localized delivery of compositions for placental growth factors
JP6545102B2 (ja) 2013-01-18 2019-07-17 ミメディクス グループ インコーポレイテッド 心病態を治療する方法
US10206977B1 (en) 2013-01-18 2019-02-19 Mimedx Group, Inc. Isolated placental stem cell recruiting factors
CN105142651A (zh) 2013-02-05 2015-12-09 人类起源公司 来自胎盘的自然杀伤细胞
RU2522816C1 (ru) * 2013-02-12 2014-07-20 Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство промышленности и торговли Российской Федерации (Минпромторг России) Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей
JP2016512433A (ja) 2013-03-14 2016-04-28 アントフロゲネシス コーポレーション 増強胎盤幹細胞及びその使用
US10213525B2 (en) 2013-03-15 2019-02-26 Micromatrix Medical, Inc. Use of perfusion decellularized liver for islet cell recellularization
US10029030B2 (en) 2013-03-15 2018-07-24 Mimedx Group, Inc. Molded placental tissue compositions and methods of making and using the same
WO2014140921A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Larsson Marcus Kare Torleif Cells, methods and apparatuses for umbilical cord blood collection and isolation of cells
KR102312720B1 (ko) 2013-03-15 2021-10-13 알로소스 연조직 회복 및 재생을 위한 세포 재배치된 콜라겐 매트릭스
US9446142B2 (en) 2013-05-28 2016-09-20 Mimedx Group, Inc. Polymer chelator conjugates
CN105916521A (zh) * 2013-11-15 2016-08-31 人类起源公司 包含人胎盘灌注液细胞、其亚群的组合物及其用途
US9617506B2 (en) 2013-11-16 2017-04-11 Terumo Bct, Inc. Expanding cells in a bioreactor
JP7464348B2 (ja) 2014-01-17 2024-04-09 ミメディクス グループ インコーポレイテッド 血管新生を誘導する方法
US11008547B2 (en) 2014-03-25 2021-05-18 Terumo Bct, Inc. Passive replacement of media
WO2016033385A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Mimedx Group, Inc. Collagen reinforced tissue grafts
CN106715676A (zh) 2014-09-26 2017-05-24 泰尔茂比司特公司 按计划供养
CA2986702C (en) 2015-05-21 2023-04-04 David Wang Modified demineralized cortical bone fibers
WO2017004592A1 (en) 2015-07-02 2017-01-05 Terumo Bct, Inc. Cell growth with mechanical stimuli
MX2018003275A (es) 2015-09-15 2018-05-16 Celularity Inc Tratamiento de la neuropatia periferica diabetica utilizando celulas placentarias.
KR101733137B1 (ko) * 2015-12-30 2017-05-08 (주)엑셀세라퓨틱스 연골조직 제조를 위한 3차원 오가노이드 블록 제작 방법
WO2017154201A1 (ja) * 2016-03-11 2017-09-14 株式会社ニコン 評価装置、観察装置、及びプログラム
US11685883B2 (en) 2016-06-07 2023-06-27 Terumo Bct, Inc. Methods and systems for coating a cell growth surface
US11104874B2 (en) 2016-06-07 2021-08-31 Terumo Bct, Inc. Coating a bioreactor
AU2017316682B2 (en) 2016-08-24 2020-10-15 Arthrex, Inc. Tissue use for repair of injury
US11278643B2 (en) 2016-09-06 2022-03-22 Mayo Foundation For Medical Education And Research Use of resected liver serum for whole liver-engineering
WO2018073615A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Longboat Explorers Ab Methods and compositions for generating hematopoietic cells
EP3548051A1 (en) 2016-12-05 2019-10-09 Celularity, Inc. Treatment of lymphedema and related conditions using placental adherent cells
WO2018150945A1 (ja) 2017-02-20 2018-08-23 株式会社フジミインコーポレーテッド シリコン基板中間研磨用組成物およびシリコン基板研磨用組成物セット
US10767164B2 (en) 2017-03-30 2020-09-08 The Research Foundation For The State University Of New York Microenvironments for self-assembly of islet organoids from stem cells differentiation
CN110612344B (zh) 2017-03-31 2023-09-12 泰尔茂比司特公司 细胞扩增
US11624046B2 (en) 2017-03-31 2023-04-11 Terumo Bct, Inc. Cell expansion
US11602548B1 (en) 2018-02-26 2023-03-14 Convatec, Inc Fibrous birth tissue composition and method of use
US10849933B2 (en) 2018-05-18 2020-12-01 Mimedx Group, Inc. Placental tissue component compositions for treatment of skin defects and methods using same
CN109090102A (zh) * 2018-09-05 2018-12-28 成都汇欣生命科技有限公司 一种间充质干细胞通用无血清冻存液及其制备方法
KR20210072033A (ko) 2018-10-03 2021-06-16 스템바이오시스, 인크. 양수 세포-유래된 세포외 매트릭스 및 그의 용도
WO2020172589A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Stembiosys, Inc. Methods for the maturation of cardiomyocytes on amniotic fluid cell-derived ecm, cellular constructs, and uses for cardiotoxicity and proarrhythmic screening of drug compounds
US11511017B2 (en) 2019-03-12 2022-11-29 Arthrex, Inc. Ligament reconstruction
JP2022552573A (ja) 2019-10-18 2022-12-16 アムニオティクス・アーベー 羊水およびそれに由来する細胞から羊水間葉系幹細胞を得るためのプロセスならびに装置
WO2021226602A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 Celularity Inc. Placenta-derived adherent (pda) stem cell for the treatment of adults with sars-cov-2 related acute respiratory failure and ards (covid-19)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000073421A2 (en) * 1999-06-02 2000-12-07 Lifebank Services, L.L.C. Methods of isolation, cryopreservation, and therapeutic use of human amniotic epithelial cells

Family Cites Families (181)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US494201A (en) 1893-03-28 Thurston gordon hall
US4060081A (en) 1975-07-15 1977-11-29 Massachusetts Institute Of Technology Multilayer membrane useful as synthetic skin
US4458678A (en) 1981-10-26 1984-07-10 Massachusetts Institute Of Technology Cell-seeding procedures involving fibrous lattices
US4520821A (en) 1982-04-30 1985-06-04 The Regents Of The University Of California Growing of long-term biological tissue correction structures in vivo
US4485097A (en) 1982-05-26 1984-11-27 Massachusetts Institute Of Technology Bone-equivalent and method for preparation thereof
US5863531A (en) * 1986-04-18 1999-01-26 Advanced Tissue Sciences, Inc. In vitro preparation of tubular tissue structures by stromal cell culture on a three-dimensional framework
US5902741A (en) * 1986-04-18 1999-05-11 Advanced Tissue Sciences, Inc. Three-dimensional cartilage cultures
US5192553A (en) 1987-11-12 1993-03-09 Biocyte Corporation Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use
US4892538A (en) * 1987-11-17 1990-01-09 Brown University Research Foundation In vivo delivery of neurotransmitters by implanted, encapsulated cells
FR2646438B1 (fr) 1989-03-20 2007-11-02 Pasteur Institut Procede de remplacement specifique d'une copie d'un gene present dans le genome receveur par l'integration d'un gene different de celui ou se fait l'integration
US5437994A (en) 1989-06-15 1995-08-01 Regents Of The University Of Michigan Method for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells
US5635386A (en) 1989-06-15 1997-06-03 The Regents Of The University Of Michigan Methods for regulating the specific lineages of cells produced in a human hematopoietic cell culture
DE69034263D1 (de) 1989-07-25 2009-04-02 Cell Genesys Inc Homologe Rekombination für universelle Donorzellen und chimerische Säugetierzellen
US5464764A (en) 1989-08-22 1995-11-07 University Of Utah Research Foundation Positive-negative selection methods and vectors
EP0452484B2 (en) 1989-11-06 2004-07-28 Cell Genesys, Inc. Production of proteins using homologous recombination
US5272071A (en) 1989-12-22 1993-12-21 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Method for the modification of the expression characteristics of an endogenous gene of a given cell line
US5635387A (en) * 1990-04-23 1997-06-03 Cellpro, Inc. Methods and device for culturing human hematopoietic cells and their precursors
US6326198B1 (en) 1990-06-14 2001-12-04 Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells
US5226914A (en) 1990-11-16 1993-07-13 Caplan Arnold I Method for treating connective tissue disorders
US5733542A (en) 1990-11-16 1998-03-31 Haynesworth; Stephen E. Enhancing bone marrow engraftment using MSCS
US5811094A (en) * 1990-11-16 1998-09-22 Osiris Therapeutics, Inc. Connective tissue regeneration using human mesenchymal stem cell preparations
US5197985A (en) 1990-11-16 1993-03-30 Caplan Arnold I Method for enhancing the implantation and differentiation of marrow-derived mesenchymal cells
US6010696A (en) 1990-11-16 2000-01-04 Osiris Therapeutics, Inc. Enhancing hematopoietic progenitor cell engraftment using mesenchymal stem cells
US5486359A (en) 1990-11-16 1996-01-23 Osiris Therapeutics, Inc. Human mesenchymal stem cells
AU1531492A (en) * 1991-02-14 1992-09-15 Rockefeller University, The Method for controlling abnormal concentration tnf alpha in human tissues
US5192312A (en) 1991-03-05 1993-03-09 Colorado State University Research Foundation Treated tissue for implantation and methods of treatment and use
US5190556A (en) 1991-03-19 1993-03-02 O.B. Tech, Inc. Cord cutter sampler
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
US5372581A (en) 1993-07-21 1994-12-13 Minneapolis Children's Services Corporation Method and apparatus for placental blood collection
IL107483A0 (en) 1993-11-03 1994-02-27 Yeda Res & Dev Bone marrow transplantation
US5591625A (en) 1993-11-24 1997-01-07 Case Western Reserve University Transduced mesenchymal stem cells
US5942496A (en) 1994-02-18 1999-08-24 The Regent Of The University Of Michigan Methods and compositions for multiple gene transfer into bone cells
JPH09510108A (ja) * 1994-03-14 1997-10-14 クリオライフ，インコーポレイティド 移植用処理組織及び調製方法
WO1995033421A1 (en) 1994-06-06 1995-12-14 Case Western Reserve University Biomatrix for tissue regeneration
US6174333B1 (en) 1994-06-06 2001-01-16 Osiris Therapeutics, Inc. Biomatrix for soft tissue regeneration using mesenchymal stem cells
CA2198603C (en) * 1994-11-16 2000-06-27 Tatsutoshi Nakahata Use of stem cell factor and soluble interleukin-6 receptor for the ex vivo expansion of hematopoietic multipotential cells
US5736396A (en) 1995-01-24 1998-04-07 Case Western Reserve University Lineage-directed induction of human mesenchymal stem cell differentiation
US7410773B2 (en) * 1995-02-02 2008-08-12 Ghazi Jaswinder Dhoot Method of preparing an undifferentiated cell
EP0821573A4 (en) 1995-04-19 2000-08-09 St Jude Medical SUBSTRATE MATRICE FOR A PROSTHESIS CONSISTING OF BIOLOGICAL LIVING TISSUE AND METHOD FOR PRODUCING THIS MATRICE
US5677139A (en) 1995-04-21 1997-10-14 President And Fellows Of Harvard College In vitro differentiation of CD34+ progenitor cells into T lymphocytes
DE69601705T2 (de) 1995-04-27 1999-08-05 Procter & Gamble Trägersubstrat behandelt mit einer inversen emulsion mit hohem gehalt an diskontinuierlicher wasserphase, die mit einem polyoxyalkylenpolysiloxan-emulgator hergestellt wird
US5925567A (en) 1995-05-19 1999-07-20 T. Breeders, Inc. Selective expansion of target cell populations
US5830708A (en) 1995-06-06 1998-11-03 Advanced Tissue Sciences, Inc. Methods for production of a naturally secreted extracellular matrix
US5935576A (en) 1995-09-13 1999-08-10 Fordham University Compositions and methods for the treatment and prevention of neoplastic diseases using heat shock proteins complexed with exogenous antigens
CA2237890C (en) 1995-11-16 2011-03-29 Case Western Reserve University In vitro chondrogenic induction of human mesenchymal stem cells
ATE319827T1 (de) 1995-11-17 2006-03-15 Asahi Chemical Ind Polypeptid, das die differenzierung unterdrueckt
US5716794A (en) * 1996-03-29 1998-02-10 Xybernaut Corporation Celiac antigen
ES2329953T3 (es) 1996-04-19 2009-12-02 Osiris Therapeutics, Inc. Regeneracion e incremento de hueso utilizando celulas madre mesenquimales.
AU2808397A (en) 1996-04-26 1997-11-19 Case Western Reserve University Skin regeneration using mesenchymal stem cells
US5827740A (en) 1996-07-30 1998-10-27 Osiris Therapeutics, Inc. Adipogenic differentiation of human mesenchymal stem cells
US6358737B1 (en) * 1996-07-31 2002-03-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Osteocyte cell lines
US5851984A (en) 1996-08-16 1998-12-22 Genentech, Inc. Method of enhancing proliferation or differentiation of hematopoietic stem cells using Wnt polypeptides
US5919702A (en) 1996-10-23 1999-07-06 Advanced Tissue Science, Inc. Production of cartilage tissue using cells isolated from Wharton's jelly
US6152142A (en) * 1997-02-28 2000-11-28 Tseng; Scheffer C. G. Grafts made from amniotic membrane; methods of separating, preserving, and using such grafts in surgeries
AU8476698A (en) 1997-07-03 1999-01-25 Osiris Therapeutics, Inc. Human mesenchymal stem cells from peripheral blood
US7514074B2 (en) 1997-07-14 2009-04-07 Osiris Therapeutics, Inc. Cardiac muscle regeneration using mesenchymal stem cells
DK1007631T4 (da) 1997-07-14 2009-04-27 Osiris Therapeutics Inc Hjertemuskelregeneration ved anvendelse af mesenkymale stamceller
WO1999011287A1 (en) 1997-09-04 1999-03-11 Osiris Therapeutics, Inc. Ligands that modulate differentiation of mesenchymal stem cells
WO1999020740A2 (en) * 1997-10-23 1999-04-29 Geron Corporation Methods and materials for the growth of primate-derived primordial stem cells
AU749675B2 (en) 1998-03-13 2002-07-04 Mesoblast International Sarl Uses for human non-autologous mesenchymal stem cells
WO1999047163A2 (en) 1998-03-18 1999-09-23 Osiris Therapeutics, Inc. Mesenchymal stem cells for prevention and treatment of immune responses in transplantation
US6368636B1 (en) 1998-03-18 2002-04-09 Osiris Therapeutics, Inc. Mesenchymal stem cells for prevention and treatment of immune responses in transplantation
WO1999049015A2 (en) * 1998-03-23 1999-09-30 Zymogenetics, Inc. Cardiac-derived stem cells
EP1066060B1 (en) 1998-04-03 2003-08-13 Osiris Therapeutics, Inc. Mesenchymal stem cells as immunosuppressants
US6835377B2 (en) 1998-05-13 2004-12-28 Osiris Therapeutics, Inc. Osteoarthritis cartilage regeneration
WO1999061588A1 (en) 1998-05-22 1999-12-02 Osiris Therapeutics, Inc. Production of megakaryocytes by co-culturing human mesenchymal stem cells with cd34+ cells
CA2328524A1 (en) 1998-05-29 1999-12-02 Osiris Therapeutics, Inc. Human cd45+ and/or fibroblast + mesenchymal stem cells
AU4336599A (en) 1998-06-08 1999-12-30 Osiris Therapeutics, Inc. (in vitro) maintenance of hematopoietic stem cells
ES2296413T3 (es) 1998-06-08 2008-04-16 Osiris Therapeutics, Inc. Regulacion de la diferenciacion de celulas madre hematopoyeticas por el uso de celulas madre mesenquimaticas humanas.
IL140265A0 (en) 1998-06-12 2002-02-10 Sinai School Medicine Methods and interferon deficient substrates for propagation of viruses
AU746973B2 (en) * 1998-06-19 2002-05-09 Lifecell Corporation Particulate acellular tissue matrix
US6713245B2 (en) 1998-07-06 2004-03-30 Diacrin, Inc. Methods for storing neural cells such that they are suitable for transplantation
DE69813908T2 (de) 1998-07-28 2004-02-05 Synthes Ag Chur, Chur Verwendung von kreatinsubstanzen zur behandlung von knochen- und knorpelzellen und geweben
US6630349B1 (en) 1998-09-23 2003-10-07 Mount Sinai Hospital Trophoblast cell preparations
US6875607B1 (en) * 1998-11-09 2005-04-05 Es Cell International Pte Ltd Embryonic stem cells
CA2351889A1 (en) 1998-11-12 2000-05-18 Cell Science Therapeutics, Inc. Lymphoid tissue-specific cell production from hematopoietic progenitor cells in three-dimensional devices
US6548299B1 (en) * 1999-11-12 2003-04-15 Mark J. Pykett Lymphoid tissue-specific cell production from hematopoietic progenitor cells in three-dimensional devices
US6102871A (en) 1998-11-23 2000-08-15 Coe; Rosemarie O. Blood collection funnel
EP1181032A4 (en) * 1999-04-14 2004-08-25 Breonics Inc SYSTEM FOR EXSANGUARY METABOLIC SUPPORT OF AN ORGAN OR TISSUE
US6328762B1 (en) * 1999-04-27 2001-12-11 Sulzer Biologics, Inc. Prosthetic grafts
US6287340B1 (en) * 1999-05-14 2001-09-11 Trustees Of Tufts College Bioengineered anterior cruciate ligament
US6233476B1 (en) * 1999-05-18 2001-05-15 Mediguide Ltd. Medical positioning system
US7015037B1 (en) 1999-08-05 2006-03-21 Regents Of The University Of Minnesota Multiponent adult stem cells and methods for isolation
US8075881B2 (en) 1999-08-05 2011-12-13 Regents Of The University Of Minnesota Use of multipotent adult stem cells in treatment of myocardial infarction and congestive heart failure
US8147824B2 (en) 1999-08-05 2012-04-03 Athersys, Inc. Immunomodulatory properties of multipotent adult progenitor cells and uses thereof
US6239157B1 (en) 1999-09-10 2001-05-29 Osiris Therapeutics, Inc. Inhibition of osteoclastogenesis
US6685936B2 (en) 1999-10-12 2004-02-03 Osiris Therapeutics, Inc. Suppressor cells induced by culture with mesenchymal stem cells for treatment of immune responses in transplantation
AU1778001A (en) * 1999-11-17 2001-05-30 University Of Rochester Human ex vivo immune system
US6376244B1 (en) * 1999-12-29 2002-04-23 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions for organ decellularization
US7455983B2 (en) * 2000-01-11 2008-11-25 Geron Corporation Medium for growing human embryonic stem cells
ATE332708T1 (de) 2000-06-06 2006-08-15 Glaxo Group Ltd Krebsbehandlung zusammensetzung, welche ein antineoplastisches mittel und pde4 inhibitor enthält
US7311905B2 (en) * 2002-02-13 2007-12-25 Anthrogenesis Corporation Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells
EP2305795B1 (en) 2000-12-06 2019-07-03 Celularity, Inc. Method of collecting placental stem cells
US20080152629A1 (en) 2000-12-06 2008-06-26 James Edinger Placental stem cell populations
EP1367892B1 (en) 2001-02-14 2013-10-30 Anthrogenesis Corporation Renovation and repopulation of decellularized tissues and cadaveric organs by stem cells
EP2336300B1 (en) 2001-02-14 2015-07-08 Anthrogenesis Corporation Post-partum mammalian placenta, its use and placental stem cells therefrom
EP1491093B1 (en) 2001-02-14 2013-07-31 ABT Holding Company Multipotent adult stem cells, sources thereof, methods of obtaining and maintaining same, methods of differentiation thereof, methods of use thereof and cells derived thereof
CA2396536A1 (en) 2001-08-10 2003-02-10 Saiko Uchida Human stem cells originated from human amniotic mesenchymal cell layer
US9969980B2 (en) 2001-09-21 2018-05-15 Garnet Biotherapeutics Cell populations which co-express CD49c and CD90
WO2003042405A2 (en) * 2001-11-15 2003-05-22 Children's Medical Center Corporation Methods of isolation, expansion and differentiation of fetal stem cells from chorionic villus, amniotic fluid, and placenta and therapeutic uses thereof
US7799324B2 (en) 2001-12-07 2010-09-21 Geron Corporation Using undifferentiated embryonic stem cells to control the immune system
JP3934539B2 (ja) 2001-12-12 2007-06-20 独立行政法人科学技術振興機構 胎盤等由来の成体又は生後組織の前駆細胞
DE60236016D1 (de) 2001-12-21 2010-05-27 Mount Sinai Hospital Corp Zelluläre zusammensetzungen und verfahren zur deren bereitung und verwendung
US20030161818A1 (en) 2002-02-25 2003-08-28 Kansas State University Research Foundation Cultures, products and methods using stem cells
US7736892B2 (en) 2002-02-25 2010-06-15 Kansas State University Research Foundation Cultures, products and methods using umbilical cord matrix cells
EP1499347A2 (en) 2002-03-15 2005-01-26 Department of Veterans Affairs, Rehabilitation R&D Service Methods and compositions using cellular asialodeterminants and glycoconjugates for targeting cells to tissues and organs
US20030187515A1 (en) 2002-03-26 2003-10-02 Hariri Robert J. Collagen biofabric and methods of preparing and using the collagen biofabric
US7498171B2 (en) 2002-04-12 2009-03-03 Anthrogenesis Corporation Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
US20050118715A1 (en) 2002-04-12 2005-06-02 Hariri Robert J. Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
ZA200408369B (en) 2002-04-12 2006-11-29 Celgene Corp Methods for identification of modulators of angiogenesis, compounds discovered thereby, and methods of treatment using the compounds
US20030235563A1 (en) 2002-04-19 2003-12-25 Strom Stephen C. Placental derived stem cells and uses thereof
US20040161419A1 (en) 2002-04-19 2004-08-19 Strom Stephen C. Placental stem cells and uses thereof
WO2003102151A2 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Celgene Corporation Modulating cell differentiation and treating myeloprolifertive disorders with jnk/mkk inhibitors
US7422736B2 (en) 2002-07-26 2008-09-09 Food Industry Research And Development Institute Somatic pluripotent cells
AU2003278212B2 (en) 2002-07-31 2009-07-09 Centre National De La Recherche Scientifique Stem cells derived from adipous tissue and differentiated cells derived from said cells
KR20050086780A (ko) 2002-11-26 2005-08-30 안트로제네시스 코포레이션 세포요법제, 세포요법제 단위 및 이를 이용한 치료방법
AU2004210891B2 (en) 2003-02-11 2008-09-25 Dolores Baksh Progenitor cells from Wharton's jelly of human umbilical cord
NZ542127A (en) 2003-02-13 2008-04-30 Anthrogenesis Corp Use of umbilical cord blood to treat individuals having a disease, disorder or condition
CN1548529A (zh) 2003-05-09 2004-11-24 中国人民解放军军事医学科学院基础医 一种人胎盘间充质干细胞的分离方法
ES2564045T3 (es) * 2003-06-27 2016-03-17 DePuy Synthes Products, Inc. Células derivadas del post-parto para su uso en el tratamiento de enfermedad del corazón y el sistema circulatorio
US7875272B2 (en) * 2003-06-27 2011-01-25 Ethicon, Incorporated Treatment of stroke and other acute neuraldegenerative disorders using postpartum derived cells
WO2005017117A2 (en) 2003-08-14 2005-02-24 Martin Haas Multipotent amniotic fetal stem cells (mafsc) and banking of same
US20050089513A1 (en) 2003-10-28 2005-04-28 Norio Sakuragawa Side population cells originated from human amnion and their uses
US20050186182A1 (en) 2003-11-10 2005-08-25 Theresa Deisher Methods of using G-CSF mobilized C-Kit+ cells in the production of embryoid body-like cell clusters for tissue repair and in the treatment of cardiac myopathy
JP2005151907A (ja) 2003-11-27 2005-06-16 Shigeo Saito 胎盤又は羊膜由来ヒト幹細胞及びその樹立方法並びに臓器への分化誘導方法
TWI338714B (en) * 2003-12-02 2011-03-11 Cathay General Hospital Method of isolation and enrichment of mesenchymal stem cells from amniotic fluid
WO2005055929A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Celgene Corporation Methods and compositions for the treatment and management of hemoglobinopathy and anemia
US20050176139A1 (en) 2004-01-12 2005-08-11 Yao-Chang Chen Placental stem cell and methods thereof
US20050266391A1 (en) 2004-01-15 2005-12-01 Bennett Brydon L Methods for preserving tissue
JP2007530543A (ja) 2004-03-22 2007-11-01 オシリス セラピューティクス，インコーポレイテッド 間葉幹細胞及びその使用法
AU2005231680A1 (en) 2004-03-26 2005-10-20 Celgene Corporation Systems and methods for providing a stem cell bank
WO2005105992A1 (en) 2004-04-21 2005-11-10 New York Eye & Ear Infirmary Chondrocyte culture formulations
US7244759B2 (en) 2004-07-28 2007-07-17 Celgene Corporation Isoindoline compounds and methods of making and using the same
WO2006015214A2 (en) 2004-07-29 2006-02-09 Steenblock Research Institute, Inc. Umbilical cord stem cell composition & method of treating neurological diseases
GB2432166B (en) * 2004-08-16 2008-01-02 Cellres Corp Pte Ltd Isolation of stem/progenitor cells from amniotic membrane of umbilical cord
US7909806B2 (en) 2004-09-23 2011-03-22 Anthrogenesis Corporation Cord blood and placenta collection kit
US7147626B2 (en) 2004-09-23 2006-12-12 Celgene Corporation Cord blood and placenta collection kit
US20060171930A1 (en) * 2004-12-21 2006-08-03 Agnieszka Seyda Postpartum cells derived from umbilical cord tissue, and methods of making, culturing, and using the same
WO2006083394A2 (en) * 2004-12-21 2006-08-10 Ethicon, Inc. Postpartum cells derived from placental tissue, and methods of making, culturing, and using the same
EP1835924B1 (en) * 2004-12-23 2013-08-21 Ethicon, Incorporated Treatment of parkinson's disease and related disorders using postpartum derived cells
US20070041943A1 (en) 2004-12-29 2007-02-22 Children's Hospital Research Expression of virus entry inhibitors and recombinant AAV thereof
US20060222634A1 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Clarke Diana L Amnion-derived cell compositions, methods of making and uses thereof
MX2007015541A (es) 2005-06-10 2008-03-06 Celgene Corp Composiciones de colageno de placenta humana proceso para su preparacion, metodos de uso y equipos que contienen las composiciones.
CA2613548A1 (en) 2005-06-30 2007-01-11 Anthrogenesis Corporation Repair of tympanic membrane using placenta derived collagen biofabric
WO2007009062A2 (en) 2005-07-13 2007-01-18 Anthrogenesis Corporation Treatment of leg ulcers using placenta derived collagen biofabric
WO2007009061A2 (en) 2005-07-13 2007-01-18 Anthrogenesis Corporation Ocular plug formed from placenta derived collagen biofabric
NZ567335A (en) 2005-10-13 2012-02-24 Anthrogenesis Corp Immunomodulation using placental stem cells
WO2007047465A1 (en) 2005-10-13 2007-04-26 Anthrogenesis Corporation Production of oligodendrocytes from placenta-derived stem cells
KR20180105266A (ko) 2005-12-29 2018-09-27 안트로제네시스 코포레이션 태반 줄기 세포 집단
AU2006332679A1 (en) 2005-12-29 2007-07-12 Anthrogenesis Corporation Co-culture of placental stem cells and stem cells from a second source
CN101374941A (zh) 2005-12-29 2009-02-25 人类起源公司 采集和保存胎盘干细胞的改良组合物及其使用方法
MX2008015645A (es) 2006-06-09 2009-02-06 Anthrogenesis Corp Nicho placentario y uso de este para cultivar celulas primordiales.
US7993918B2 (en) 2006-08-04 2011-08-09 Anthrogenesis Corporation Tumor suppression using placental stem cells
WO2008021391A1 (en) 2006-08-15 2008-02-21 Anthrogenesis Corporation Umbilical cord biomaterial for medical use
US20080131522A1 (en) 2006-10-03 2008-06-05 Qing Liu Use of placental biomaterial for ocular surgery
US8071135B2 (en) 2006-10-04 2011-12-06 Anthrogenesis Corporation Placental tissue compositions
CN104623642A (zh) 2006-10-06 2015-05-20 人类起源公司 天然(端肽)胎盘胶原组合物
JP2010507392A (ja) 2006-10-23 2010-03-11 アントフロゲネシス コーポレーション 胎盤細胞集団で骨欠損を治療するための方法及び組成物
JP2010518812A (ja) 2007-02-12 2010-06-03 アンスロジェネシス コーポレーション 接着性胎盤幹細胞由来の肝細胞および軟骨細胞、ならびにｃｄ３４＋、ｃｄ４５−胎盤幹細胞の濃縮細胞集団
EP2120977B1 (en) 2007-02-12 2013-05-15 Anthrogenesis Corporation Treatment of inflammatory diseases using placental stem cells
US20100172830A1 (en) 2007-03-29 2010-07-08 Cellx Inc. Extraembryonic Tissue cells and method of use thereof
KR20160092062A (ko) 2007-09-26 2016-08-03 안트로제네시스 코포레이션 인간 태반 관류액으로부터의 혈관형성 세포
PT2203176E (pt) 2007-09-28 2015-03-02 Anthrogenesis Corp Supressão de tumor utilizando perfusato placentário humano e células assassinas naturais intermédias derivadas de placenta humanas
AU2008325142A1 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Anthrogenesis Corporation Use of umbilical cord blood in the treatment of premature birth complications
US8828376B2 (en) 2008-08-20 2014-09-09 Anthrogenesis Corporation Treatment of stroke using isolated placental cells
NZ601497A (en) 2008-08-20 2014-03-28 Anthrogenesis Corp Improved cell composition and methods of making the same
DK2331109T3 (da) 2008-08-22 2013-09-08 Anthrogenesis Corp Fremgangsmåder og sammensætninger til behandling af knogledefekter med placentale cellepopulationer
CN107201337A (zh) 2008-11-19 2017-09-26 人类起源公司 羊膜来源的贴壁细胞
MX2011005230A (es) 2008-11-21 2011-06-16 Anthrogenesis Corp Tratamiento de enfermedades, desordenes o condiciones del pulmon usando celulas de placenta.
WO2010141654A1 (en) 2009-06-05 2010-12-09 Anthrogenesis Corporation Improved method of collecting placental cells
CA2767014C (en) * 2009-07-02 2022-01-25 Anthrogenesis Corporation Method of producing erythrocytes without feeder cells
MX2012008636A (es) 2010-01-26 2012-10-15 Anthrogenesis Corp Tratamiento de canceres relacionados con el hueso utilizando celulas madre placenterias.
US20110280849A1 (en) 2010-03-26 2011-11-17 Anthrogenesis Corporation Tumor suppression using human placenta-derived intermediate natural killer cells and immunomodulatory compounds
NZ602808A (en) 2010-04-07 2014-10-31 Anthrogenesis Corp Angiogenesis using placental stem cells
WO2011127113A1 (en) 2010-04-08 2011-10-13 Anthrogenesis Corporation Treatment of sarcoidosis using placental stem cells
EP2593542B1 (en) 2010-07-13 2018-01-03 Anthrogenesis Corporation Methods of generating natural killer cells
AR084752A1 (es) 2010-12-30 2013-06-05 Anthrogenesis Corp Metodos para crioconservar y encapsular celulas
WO2012092458A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Anthrogenesis Corporation Compositions comprising placental stem cells and platelet rich plasma, and methods of use thereof
AR084753A1 (es) 2010-12-30 2013-06-05 Anthrogenesis Corp Composiciones que comprenden celulas adherentes derivadas del saco amniotico (amdac) y plasma rico en plaquetas (prp)
US8969315B2 (en) 2010-12-31 2015-03-03 Anthrogenesis Corporation Enhancement of placental stem cell potency using modulatory RNA molecules
WO2012166844A2 (en) 2011-06-01 2012-12-06 Anthrogenesis Corporation Treatment of pain using placental stem cells

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000073421A2 (en) * 1999-06-02 2000-12-07 Lifebank Services, L.L.C. Methods of isolation, cryopreservation, and therapeutic use of human amniotic epithelial cells

Also Published As

Publication number Publication date
ES2558626T3 (es) 2016-02-05
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JP6180456B2 (ja) 2017-08-16
ES2549161T3 (es) 2015-10-23
US8435788B2 (en) 2013-05-07
KR20100010514A (ko) 2010-02-01
WO2002063962A1 (en) 2002-08-22

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