KR100774230B1

KR100774230B1 - 항암 활성을 가진 피리미도［4,5－ｄ］피리미딘 유도체

Info

Publication number: KR100774230B1
Application number: KR1020077016286A
Authority: KR
Inventors: 아포스톨로스 더마타키스; 마렉 미칼 카뱃; 킨-천 룩; 파멜라 로린 로스만; 성-사우 소
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2002-11-04
Filing date: 2003-10-27
Publication date: 2007-11-07
Also published as: US20040110773A1; WO2004041821A1; EP1560832B1; ES2298622T3; AR041738A1; DE60318888D1; AR041739A1; DE60319260T2; EP1560829B1; AU2003274086B2; ES2300609T3; RU2005117341A; CN1711264A; US7112676B2; ATE384725T1; DE60318888T2; BR0316001A; EP1560829A1; KR20050074534A; US20050075272A1

Abstract

KDR 및 FGFR 키나아제 모두의 선택적 저해제이며, LCK 에 대하여 선택적인 화학식 Ⅰ의 신규한 피리미도 화합물 (식에서, R¹ 내지 R⁹ 는 명세서에 정의된 바와 같다) 을 개시하고 있다. 상기 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염은 고형 종양, 특히 유방, 결장, 폐 및 전립선 종양의 치료 또는 제어에 유용한 증식억제제이다. 또한, 상기 화합물을 함유한 약학적 조성물 및 암 치료를 위한 용도를 개시하고 있다.

피리미도［4,5－Ｄ］피리미딘 유도체

Description

항암 활성을 가진 피리미도［4,5－Ｄ］피리미딘 유도체 {PYRIMIDO[4,5-D]PYRIMIDINE DERIVATIVES WITH ANTICANCER ACTIVITY}

본 발명은 하기 화학식의 신규한 피리미도 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:

[식 중,

R¹ 은 하기 기에서 선택되고:

수소,

C₁ _-10 알킬,

아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개이하의 기로 치환된 C₁ _-10 알킬 (이때, 아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클기들은 각각 독립적으로 NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, S0₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환될 수 있다),

아릴,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 N0₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 아릴,

헤테로아릴,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 헤테로아릴,

헤테로사이클,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 헤테로사이클,

C₃ _-10 시클로알킬,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 C₃ _-10 시클로알킬,

C₂ _-10 알케닐,

NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알케닐, 및

NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알키닐이고;

R², R³ 및 R⁴ 는 하기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고:

수소,

할로겐,

COR¹³,

CO₂R¹³,

CONR¹³R¹⁴,

SO₂NR¹³R¹⁴,

SOR¹³,

SO₂R¹³,

CN, 및

N0₂;

R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 하기 기에서 독립적으로 선택되고:

수소,

저급 알킬,

히드록시 또는 알콕시로 치환된 저급 알킬,

NR¹⁵R¹⁶,

OH,

OR¹⁷,

SR¹⁷,

할로겐,

COR¹⁷,

CO₂R¹⁷,

CONR¹⁷R¹⁸,

SO₂NR¹⁷R¹⁸,

SOR¹⁷,

SO₂R¹⁷, 및

CN;

R⁹ 는 하기 기에서 선택되고:

수소,

, 및

COR¹⁷;

R¹⁰ 및 R¹¹ 은 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소,

COR¹³,

CO₂R¹³,

CONR¹³R¹⁴,

S0₂R¹³,

SO₂NR¹³R¹⁴,

저급 알킬,

히드록시, 알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 저급 알킬,

시클로알킬,

히드록시, 알콕시, 저급 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 시클로알킬,

헤테로사이클, 및

히드록시, 알콕시, 저급 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 헤테로사이클,

또는, 다르게는, NR¹⁰R¹¹ 은 원자수가 3 내지 7 인 고리를 형성할 수 있고, 이때 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가 헤테로원자를 포함하고, 하나 이상의 저급 알킬, OR¹², COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, 및 SO₂NR¹³R¹⁴ 로 이루어진 기로 임의 치환되고;

R¹² 는 하기 기에서 선택되고:

수소,

저급 알킬,

COR¹³,

CONR¹³R¹⁴,

히드록시, 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₂ _-6 알킬, 시클로알킬,

헤테로사이클, 및

히드록시, 알콕시, 저급 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 헤테로사이클;

R¹³ 및 R¹⁴ 는 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소,

저급 알킬,

히드록시, 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₂ _-6 알킬,

시클로알킬,

헤테로사이클, 및

또는, 다르게는, NR¹³R¹⁴ 는 원자수가 3 내지 7 인 고리를 형성할 수 있고, 이때 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가 헤테로 원자를 포함하고, 하나 이상의 저급 알킬, OR¹⁷, COR¹⁷, C0₂R¹⁷, CONR¹⁷R¹⁸, SO₂R¹⁷, 및 SO₂NR¹⁷R¹⁸ 로 이루어진 기로 임의 치환되고;

R¹⁵ 는 하기 기에서 선택되고:

수소,

저급 알킬,

COR¹⁷, 및

CO₂R¹⁷; 및

R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸ 은 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소, 및

저급 알킬,

또는, 다르게는, NR¹⁵R¹⁶ 및 NR¹⁷R¹⁸ 은 각각 독립적으로 원자수가 3 내지 7 인 고리를 형성할 수 있고, 이때 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가 헤테로 원자를 포함하고;

R¹⁹ 및 R²⁰ 은 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소, 및

저급 알킬; 및

R²¹ 은 하기로부터 선택된다:

저급 알킬, 및

히드록시, 알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₂ _-6 알킬].

이들 화합물들은 KDR (키나아제 삽입 도메인-포함 수용체) 및 FGFR (섬유아세포 성장인자 수용체) 키나아제들을 저해하고, LCK (T-세포 티로신 키나아제 p56 ^lck ) 에 대하여 선택적이다. 이들 화합물들 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염은 증식억제 활성을 가지며, 암, 특히 고형 종양의 치료 또는 제어에 유용하다. 또한, 이들 화합물들은 유리한 생체이용 (bioavailability) 프로필 (profile) 을 가지고 있다. 본 발명은 또한 이러한 화합물을 함유한 약학적 조성물 및 암의 치료 또는 제어 방법, 가장 특히는 유방, 폐, 결장 및 전립선 종양의 치료 또는 제어 방법에 관한 것이다.

단백질 키나아제는 다양한 세포 기능을 조절하는 단백질(효소) 집단이다. 이는 단백질 기질 상의 특정한 아미노산을 인산화하여 상기 기질 단백질에 형태적 변이를 일으킴으로써 완성된다. 상기 형태적 변화가 기질의 활성 또는 다른 결합 파트너와의 상호작용 능력을 조절한다. 단백질 키나아제의 효소 활성은 상 기 키나아제가 인산기를 기질에 첨가시키는 속도로 나타낸다. 이는, 예컨대 시간의 함수로서 생성물로 전환되는 기질의 양을 결정함으로써 측정할 수 있다. 기질의 인산화는 단백질 키나아제의 활성부위에서 일어난다.

티로신 키나아제는 아데노신 트리포스페이트(ATP)의 말단 인산의 단백질 기질 상 티로신 잔기로의 이동을 촉매하는 단백질 키나아제의 하위집합이다. 상기 키나아제는 세포 증식, 분화 및 이동을 유도하는 성장 인자 신호전달의 전파에 있어서 주요한 역할을 담당한다.

예를 들어, 섬유모세포 성장인자 (FGF) 및 혈관내피 성장인자 (VEGP) 는 종양에 의해 촉진된 혈관형성의 주요한 매개체로서 인지되어 있다. VEGF 는 두 가지 고친화성(high affinity) 수용체 (그 중 하나는 키나아제 삽입 도메인-함유 수용체(KDR)임) 를 통해 신호전달함으로써 내피세포를 활성화시킨다. [Hennequin L. F. 등, J. Med. Chem. 2002, 45 (6), ppl300] 참조. FGF 는 FGF 수용체 (FGFR) 를 통해 신호전달함으로써 내피세포를 활성화시킨다. 고형 종양은 성장하는 새 혈관의 형성(혈관형성)에 의존한다. 따라서, 성장 신호의 전달을 방해함으로써 혈관형성을 억제 또는 방지하는, 수용체 FGFR 및 KDR 의 저해제는 고형 종양의 예방 및 치료에 유용한 제제이다. [Klohs W. E. 등, Current Opinion in Biotechnology 1999, 10, p. 544] 참조.

단백질 키나아제 촉매적 활성의 소분자 저해제로서 여러 예가 존재한다. 특히, 소분자 저해제는 전형적으로 단백질 키나아제 ATP 결합부위 (또는 "활성부위") 와 강하게 결합함으로써 기질의 인산화를 방해한다. WO 98/24432 및 [Hennequin L. F. 등, J. Med. Chem. 2002, 45 (6), ppl300] 참조. 몇몇 상기 화합물은 다중 목표물을 억제한다. 예컨대, W0 99/61444 (Warner-Lambert) 는 하기 화학식의 2환 피리미딘 및 2환 3,4-디히드로피리미딘을 개시하고 있는 바, 이는 사이클린(cyclin) 의존적 키나아제 Cdk1, Cdk2 및 Cdk4 뿐만 아니라 성장 인자 수용체 티로신 키나아제 효소 PDGFR 및 FGFR 을 억제한다고 주장되고 있다:

미국 특허 제 6,150,373 호 (Hoffmann-La Roche Inc.) 는 하기 화학식의 2환 질소 헤테로사이클을 개시하고 있는 바, 이는 T-세포 티로신 키나아제 p56^lck 를 억제한다고 주장되고 있다:

*

WO 01/29041 A1 및 WO 01/29042 (F. Hoffmann-La Roche AG) 는 하기 화학식의 알킬아미노 치환된 2환 질소 헤테로사이클을 개시하고 있는 바, 이는 p38 매개 세포 기능을 억제하고 따라서 세포 증식 저해제로 언급된다:

WO 01/64679 A1 (SmithKline Beecham) 은 하기 화학식의 1,5-이치환(disubstituted)-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-D]피리미딘-2-온 화합물을 개시하고 있는 바, 이는 CSBP/P38 키나아제 매개 질환의 치료에 유용한 것으로 언급되고 있다:

하나 이상의 유형의 고형 종양의 치료를 위한, 단백질 키나아제의 촉매적 활성 억제에 유효한 쉽게 합성되는 소분자 화합물, 특히 FGFR 및 KDR 키나아제에 대한 필요성은 상존한다. FGFR 및 KDR 에 대하여 선택적인 소분자 저해제를 제공하는 것이 바람직하다. 이는 다수의 표적들을 저해하는데 따를 수 있는 잠재적인 부수적 독성 및 다른 바람직하지 않은 합병증 때문에 바람직하다. 상기 소분자 억제제가 또한 유리한 생체이용률 프로필을 갖는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 목적은 상기 화합물 및 상기 화합물을 함유한 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 KDR 및 FGFR 의 활성을 선택적으로 저해할 수 있는 신규한 피리미도 화합물에 관한 것이다. 이들 화합물들은 암의 치료 또는 제어, 특히 고형 종양의 치료 또는 제어에 유용하다. 특히 본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:

[식 중, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ 및 R⁹ 는 이하에 정의된 것과 같다].

본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I 의 화합물을 치료상 유효량 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명은, 화학식 I 의 화합물 및/또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 치료를 요하는 인간 환자에 투여함으로써, 고형 종양을 치료 또는 제어하는 방법, 특히 유방, 폐, 결장 및 전립선 종양, 가장 특히는 유방 또는 결장 종양의 치료 또는 제어 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 화학식 I 의 화합물의 제조에 유용한 신규한 중간체 화합물에 관한 것이다.

본원에서 사용된 하기의 용어는 다음과 같은 의미를 지닌다.

"알케닐" 은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 지닌 직쇄 또는 분지쇄 지방족 탄화수소, 예컨대 비닐, 2-부테닐, 및 3-메틸-2-부테닐을 나타낸다.

"알키닐" 은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 지닌 직쇄 또는 분지쇄 지방족 탄화수소, 예컨대 에티닐, 및 2-부티닐을 나타낸다.

"알킬" 은 탄소수 1 내지 10, 바람직하게는 1 내지 6, 더욱 바람직하게는 1 내지 4 의 직쇄 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 나타낸다. 탄소수 1 내지 6 의 알킬기를 또한 본원에서 "저급 알킬" 로 지칭한다. 전형적인 저급 알킬기에는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, t-부틸, 2-부틸, 펜틸 및 헥실이 포함된다. 본원에서 사용되는 샘플 명칭인 C₁ _-4 알킬은 탄소수 1 내지 4 의 알킬을 의미한다.

"알콕시" 는 산소(RO-)에 의해 분자의 나머지 부분에 결합되어 있는 알킬 라디칼, 예컨대 메톡시, 에톡시를 의미한다.

"아릴" 은 방향족 탄소환상(carbocyclic) 라디칼, 예컨대 6-10 원 방향족 또는 부분적 방향족 고리 시스템을 의미한다. 바람직한 아릴기에는, 페닐, 나프틸, 톨릴 및 자일릴이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.

"시클로알킬" 은 3 내지 8 개의 원자를 함유한 비방향족, 부분 또는 완전 포화된 시클릭 지방족 탄화수소 기를 의미한다. 시클로알킬기의 예로는 시클로프로필, 시클로펜틸 및 시클로헥실이 포함된다.

"유효량" 또는 "치료적 유효량" 이란 종양 세포의 증식을 상당히 억제하는, 하나 이상의 화학식 Ⅰ의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 양을 의미한다.

"할로겐" 은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드, 바람직하게는 염소, 불소 또는 브롬을 의미한다.

"헤테로 원자" 는 N, O 및 S 에서 선택된 원자, 바람직하게는 N 을 의미한다. 헤테로 원자가 N 인 경우, 이는 -NH- 또는 -N-저급 알킬-로서 존재할 수 있다. 헤테로 원자가 S 인 경우, 이는 S, SO 또는 SO₂ 로서 존재할 수 있다.

"헤테로아릴" 은 2 개 이하의 고리를 함유한 방향족 헤테로시클릭 고리 시스템을 의미한다. 바람직한 헤테로아릴 기에는, 티에닐, 푸릴, 인돌릴, 피롤릴, 피리디닐, 피라지닐, 옥사졸릴, 티아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸 및 테트라졸릴이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.

"헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릴" 은 질소, 산소 또는 황 또는 이의 조합에서 선택된 1 내지 3 개의 헤테로 원자를 함유하는 3-내지 10-원 포화 또는 부분적 불포화 비방향족 1가의 환형 라디칼을 의미한다. 바람직한 헤테로사이클의 예로는 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 및 모르폴린이 있다.

"히드록시" 는 1가 OH 기를 나타내는 접두사이다.

"IC₅₀" 은 측정된 특이적 활성(specific measured activity)의 50% 를 억제하는 데 필요한 본 발명의 특정 화합물의 농도를 말한다. IC₅₀ 은, 특히 하기의 실시예 22 에 상술한 바와 같이 측정된다.

"약학적으로 허용가능한 염" 은 화학식 Ⅰ의 화합물의 생물학적 효능 및 특성을 보유하며, 적절한 비독성의 유기 또는 무기 산 또는 유기 또는 무기 염기로부터 형성되는 종래의 산부가 염 또는 염기부가 염을 말한다. 샘플 산부가 염에는 무기산에서 유래된 것, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 술팜산(sulfamic acid), 인산 및 질산, 및 유기산에서 유래된 것, 예컨대 p-톨루엔술폰산, 살리실산, 메탄술폰산, 옥살산, 숙신산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산 등이 포함된다. 샘플 염기부가 염에는 암모늄, 포타슘, 소디움 및, 4차 암모늄 히드록시드, 예컨대 테트라메틸암모늄 히드록시드가 포함된다. 약학적 화합물(즉, 약물)을 염으로 화학적 개질시키는 기술은 화합물의 개선된 물리적, 화학적 안정성, 흡습성, 유동성 및 가용성을 얻기 위한 것으로서 약제학 분야의 화학자에게 공지되어 있다. 예를 들어, [H. Ansel 등, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995) at pp. 196 및 1456-1457] 참조.

약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 등과 같은 "약학적으로 허용가능한" 물질이란 상기 특정 화합물이 투여된 대상자에 대하여 약리학적으로 허용가능하며 실질적으로 무독성임을 의미한다.

치환된 알킬에서와 같은 "치환된" 은 치환이 하나 이상의 위치에서 일어날 수 있으며, 다르게 명시하지 않는 한, 각 치환 부위의 치환기가 상술한 선택 사항으로부터 독립적으로 선택됨을 의미한다.

한가지 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:

[식 중, R¹ 은 하기 기에서 선택되고:

*수소,

C₁ _-10 알킬,

아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 C₁ _-10 알킬 (이때, 상기 아릴, 시클로알킬, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클기는 각각 독립적으로 NR¹⁰R¹¹, OR¹²SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환될 수 있다),

아릴,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, 또는 OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, SO₂R¹³, CN 및 N0₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 아릴,

헤테로아릴,

헤테로사이클,

C₃ _-10 시클로알킬,

저급 알킬, NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 C₃ _-10 시클로알킬,

C₂ _-10 알케닐,

NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알케닐, 및

NR¹⁰R¹¹, OR¹², SR¹², 할로겐, COR¹³, CO₂R¹³, CONR¹³R¹⁴, SO₂NR¹³R¹⁴, SOR¹³, S0₂R¹³, CN 및 NO₂ 로부터 선택되는 3 개 이하의 기로 치환된 C₂ _-10 알키닐;

수소,

할로겐,

COR¹³,

CO₂R¹³,

CONR¹³R¹⁴,

SO₂NR¹³R¹⁴,

SOR¹³,

SO₂R¹³,

CN, 및

N0₂;

R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 하기 기에서 독립적으로 선택되고:

수소,

저급 알킬,

히드록시 또는 알콕시로 치환된 저급 알킬,

NR¹⁵R¹⁶,

OH,

OR¹⁷,

SR¹⁷,

할로겐,

COR¹⁷,

CO₂R¹⁷,

CONR¹⁷R¹⁸,

SO₂NR¹⁷R¹⁸,

SOR¹⁷,

SO₂R¹⁷, 및

CN;

R⁹ 는 하기 기에서 선택되고:

수소,

, 및

COR¹⁷;

R¹⁰ 및 R¹¹ 은 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소,

COR¹³,

CO₂R¹³,

CONR¹³R¹⁴,

S0₂R¹³,

SO₂NR¹³R¹⁴,

저급 알킬,

히드록시, 알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 저급 알킬,

시클로알킬,

헤테로사이클, 및

R¹² 는 하기 기에서 선택되고:

수소,

저급 알킬,

COR¹³,

CONR¹³R¹⁴,

헤테로사이클, 및

R¹³ 및 R¹⁴ 는 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소,

저급 알킬,

히드록시, 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₂ _-6 알킬,

시클로알킬,

헤테로사이클, 및

R¹⁵ 는 하기 기에서 선택되고:

수소,

저급 알킬,

COR¹⁷, 및

CO₂R¹⁷; 및

R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸ 은 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소, 및

저급 알킬,

R¹⁹ 및 R²⁰ 은 독립적으로 하기 기에서 선택되고:

수소, 및

저급 알킬; 및

R²¹ 은 하기로부터 선택된다:

저급 알킬, 및

히드록시, 알콕시 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₂ _-6 알킬].

본원에 개시된 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물은 호변이성 (tautomerism) 또는 구조적 이성질현상 (structural isomerism) 을 나타낼 수 있다. 본 발명은 이들 화합물의 임의의 호변이성체 또는 구조적 이성질체 또는 이러한 형태들의 혼합물 (예컨대, 라세미 혼합물) 을 포괄하며, 상기 화학식 I 로 나타난 임의의 한 가지 호변이성체 또는 구조적 이성질체에 제한되지 않는 것을 의도한다.

화학식 I 의 화합물이 구조적 이성질현상을 나타낼 경우, 바람직한 광학 이성질체는 하기 화학식 Ia 로 표시된다:

바람직한 구현예에서, 본 발명은, R¹ 이 아릴 및, OR¹² 또는 CONR¹³R¹⁴ 로 치환된 아릴로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물에 관한 것이다. 특히 바람직한 것은 아릴이 페닐인 화합물들이다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R¹ 은 저급 알킬 및 OR¹² 또는 CONR¹³R¹⁴ 로 치환된 C₂ _-6 알킬로부터 선택된다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R² 는 수소이다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R² 및 R³ 은 수소이다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R², R³ 및 R⁴ 는 수소이다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R³ 는 할로겐, 바람직하게는 F 이다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R⁵, R⁶ 및 R⁸ 는 수소이고, R⁷ 은 O-저급 알킬, 바람직하게는 O-CH₃ 이다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R⁵ 는 할로겐, 바람직하게는 F 이다.

화학식 I 의 화합물의 또 다른 바람직한 구현예에서, R⁹ 는 수소이다.

하기 화합물들이 본 발명에 따른 바람직한 구현예들이다:

(±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 1g);

3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 2);

3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 3);

(±)-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 4b);

(±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (실시예 5b);

(±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드 (실시예 6);

(±)-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 8d) ;

(±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (실시예 9b);

(±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드 (실시예 10);

(±)-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 12c);

1-(2-히드록시-1-(S)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 13d);

1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 14f);

1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 15b);

3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-1-[1-(S)-페닐-에틸]-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 18);

(±)-N-[6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-8-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일]-N-페닐-아세트아미드 (실시예 19);

(±)-1-(트랜스-4-히드록시-시클로헥실)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 20b);

1-[(1R,3R)-3-히드록시-시클로펜틸]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21a);

1-[(1S,3S)-3-히드록시-시클로펜틸]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21b);

7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-[(1R,3R)-3-히드록시-시클로펜틸)]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21c);

7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-[(1S,3S)-3-히드록시-시클로펜틸)]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21d);

7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21e);

3-(4-클로로-페닐)-7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21f);

3-(4-클로로-2-플루오로-페닐)-7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21g);

3-(4-클로로-페닐)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21h);

3-(4-클로로-2-플루오로-페닐)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21i);

3-(4-클로로-페닐)-1-(3-히드록시-2-(S)-메틸-프로필)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21j); 및

3-(4-클로로-2-플루오로-페닐)-1-(3-히드록시-2-(S)-메틸-프로필)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 21k).

본 발명의 화합물들은 FGF 및 KDR 키나아제들에 대하여 선택적이다. 이들 화합물은 암, 특히 고형 종양, 특히 유방, 폐, 결장 및 전립선 종양의 치료 또는 제어에 유용하다. 이들 화합물들은 세포막에 대한 투과성이 높고, 따라서, 경구적 생체이용율 향상 등 유리한 생체이용 프로필을 갖는다.

대안적인 구현예에서, 본 발명은 화학식 I 의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이의 에스테르 하나 이상을 함유한 약학적 조성물에 관한 것이다.

이들 약학적 조성물들은, 예를 들어 정제, 피복된 정제, 드라제(dragee), 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 에멀션 또는 현탁액의 형태로, 경구적으로 투여 될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어, 좌약의 형태로 직장으로, 또는 예를 들어 주사 용액의 형태로 비경구적으로 투여될 수 있다.

화학식 I 의 화합물, 및/또는 이의 염을 함유한 본 발명의 약학적 조성물은 당업계에 공지된 방식으로, 예컨대 통상적인 혼합법, 캡슐화법, 용해법, 과립화법, 에멀션화법, 포괄법 (entrapping), 드라제-제조법, 또는 동결건조법으로 제조할 수 있다. 이들 약학적 조제물들은 치료상 불활성이거나 무기 또는 유기 담체들과 함께 제형화될 수 있다. 락토오스, 옥수수 전분 또는 이의 유도체, 탈크, 스테아르산 또는 이의 염을, 정제, 피복된 정제, 드라제 및 경질 젤라틴 캡슐용 담체로 사용할 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐용으로 적합한 담체로는, 식물성유, 왁스 및 지방이 있다. 상기 활성 물질의 성질에 따라, 연질 젤라틴 캡슐의 경우에 일반적으로 어떠한 담체도 필요하지 않다. 용액 및 시럽 제조용으로 적당한 담체는 물, 폴리올, 자당, 전화당 (invert sugar) 및 글루코스이다. 주사용으로 적당한 담체는 물, 알콜, 폴리올, 글리세린, 식물성유, 인지질 및 계면활성제이다. 좌약용으로 적당한 담체는 천연유 또는 경화유, 왁스, 지방 및 반액체 폴리올이다.

상기 약학적 조제물들은 또한 보존제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 에멀션화제, 감미제, 착색제, 향신제, 삼투압을 다양화시키는 염, 완충제, 피복제 또는 항산화제를 포함할 수 있다. 이들은 또한, 화학식 I 의 화합물 외의 부가 활성 성분을 포함한, 다른 치료상으로 가치있는 물질들을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한, 화학식 I 의 화합물 및/또는 이의 염의 유효량을 치료를 요하는 인간 환자에 투여함으로써 암, 특히 유방, 결장, 폐 및 전립선 암을 치료하기 위한, 화학식 I 의 화합물의 용도에 관한 것이다.

상기 언급한 바와 같이, 화학식 I 의 화합물을 포함하여 본 발명의 화합물들은 세포증식장애, 특히 종양학적 장애의 치료 또는 제어에 유용하다. 이들 화합물들 및 이 화합물들을 포함한 제형물은, 예를 들어, 유방, 결장, 폐 및 전립선 종양 등의 고형 종양의 치료 또는 제어에 특히 유용하다. 따라서, 본 발명은 또한 화학식 I 의 화합물 및/또는 이의 염의 유효량을 치료를 요하는 인간 환자에 투여함으로써 이러한 고형 종양을 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명에 따르는 화합물의 치료상 유효량은 질병을 예방하거나, 질병의 증상을 완화 또는 개선하거나 상기 치료되는 대상의 생존을 연장시키는데 효과적인 화합물의 양을 의미한다. 치료상 유효량의 결정은 당업계의 기술내에 있다.

본 발명에 따른 화합물의 치료상 유효량 또는 투여량은 다양한 제한범위내에서 다양할 수 있고, 당업계에 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 이러한 투여량은 투여되는 특정 화합물(들), 투여 경로, 치료되는 질병, 및 치료되는 환자를 포함하여, 각 특정 경우에 개별적인 필요에 맞게 조절될 것이다. 일반적으로, 체중이 약 70 ㎏ 인 성인에 대한 경구 또는 비경구 투여의 경우, 일일 투여량이 약 10 ㎎ 내지 약 10,000 ㎎, 바람직하게는 약 200 ㎎ 내지 약 1,000 ㎎ 인 것이 적당할 것이나, 상기 상한선은 지시되는 경우 초과될 수 있다. 일일 투여량은 단일 투여로 또는 분할 투여로 또는 비경구 투여로 투여될 수 있으며, 이는 연속 주입으로 제공될 수 있다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 청구항 1 의 화학식 I 의 화합물의 제조 방 법에 관한 것이며, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:

a) 하기 화학식의 화합물

[식 중, R¹, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 청구항 1 에 정의된 바와 같다] 을 하기 화학식의 아닐린 유도체

[식 중, R², R³ 및 R⁴ 는 청구항 1 에 정의된 바와 같다] 와 반응시켜 하기 화학식의 화합물

[식 중, R⁹ 는 수소이다] 을 수득하는 단계, 및 원할 경우,

b) 화학식 Ib 의 화합물을 산 할로겐화물 또는 무수물과 반응시켜 화학식 I 의 화합물 (식 중, R⁹ 는

또는 COR¹⁷ 이고, R¹⁷, R¹⁹, R²⁰ 및 R²¹ 은 청구항 1 에 정의된 바와 같다) 을 수득하는 단계,

및/또는 c) 원할 경우, 화학식 I 의 화합물을 약학적으로 허용가능한 염으로 전환시키는 단계.

본 발명은 또한 화학식 I 의 화합물의 합성에 유용한 하기 신규한 중간체들에 관한 것이다:

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민 (실시예 1d);

(±)-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 1e);

(±)-{2-클로로-5-[1-(4-메톡시-페닐아미노)-에틸]-피리미딘-4-일}-(4-메톡시-페닐)-아민 (실시예 1f);

(±)-7-클로로-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 4a);

(±)-3-[7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (실시예 5a);

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-아민 (실시예 8b);

(+)-7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 8c);

(±)-3-[7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (실시예 9a);

(±)-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-아민 (실시예 12a);

(±)-7-클로로-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 12b);

1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(S)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 13c);

3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(R)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아 (실시예 14c);

3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(S)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아 (실시예 14d);

1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 14e) ;

1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 15a) ;

1-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시-페닐)-3-[1-(S)-페닐-에틸]-우레아 (실시예 16); 및

7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-[1-(S)-페닐-에틸)-3,4-디히드로-IH-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (실시예 17).

본 발명의 화합물들은 임의의 통상적인 방법으로 제조될 수 있다. 이 화합물들을 합성하는 적당한 방법은 하기 실시예들에 제시되어 있다. 통상, 화학식 I 의 화합물들은 하기 기술된 합성 경로에 따라 제조할 수 있다.

반응식 1

반응식 2

반응식 3

반응식 4

실시예

하기 실시예들은 본 발명의 화합물 및 제형물을 합성하는 바람직한 방법을 설명한다.

실시예 1

실시예 1a

(±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올

문헌 [Ple, N.; Turck, A.; Martin, P.; Barbey, S.; Queguiner, G. Tet . Lett, 1993 (34), 1605-1608] 의 절차에 따라 2,4-디클로로피리미딘 (Aldrich 사) 으로부터 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올을 합성하였다.

실시예 1b

(±)-2,4-디클로로-5-(1-클로로에틸)-피리미딘

0 ℃ 의 포스포러스 옥시클로라이드 (5.0 ㎖, 53.11 mmol) (Aldrich 사) 중의 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올 (1.27 g, 6.60 mmol) (상기 실시예 1a 로부터) 용액에 디이소프로필에틸-아민 (2.60 ㎖, 14.78 mmol) (Aldrich 사) 을 첨가하였다. 반응물을 0 ℃ 에서 5 분간, 주위 온도에서 15 분간 및 그 후 115 ℃ 에서 3 시간동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, 톨루엔 (10 ㎖) 으로 희석한 후, 혼합물을 얼음 (15 g) 에 부었다. 10 분간 교반한 후, 층들을 분리하고, 수성 추출물을 톨루엔으로 역세척하였다. 결합된 유기 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40M, 10:90 내지 15:85 에틸 아세테이트-헥산 구배) 에 의한 정제로써 (±)-2,4-디클로로-5-(1-클로로에틸)-피리미딘을 오일로서 수득하였다. (수율 1.233 g; 88.3%).

실시예 1c

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘

디브로모메탄 (0.35 ㎖) 중의 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에탄올 (0.50 g; 2.60 mmol) (상기 실시예 1a 로부터) 및 디이소프로필에틸아민 (1.10 ㎖; 6.25 mmol) (Aldrich 사) 의 용액을 15 ℃ 로 냉각시켰다. 포스포러스 옥시브로마이드 (0.73 g; 2.83 mmol) 를 일부에 첨가하였다. 냉각조를 제거하고, 반 응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 20 분 후에, 반응물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기상을 염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하여 조 (crude) (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘 (0.61 g; 91.4%) 을 수득하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40M, 10:90 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제함으로써 순수한 (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘을 오일로서 수득하였는데, 냉장고에서 보관시 이는 고형화되었다.

대안적으로, (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘을 하기와 같이 제조하였다.

에틸 2-포르밀부티레이트

테트라히드로푸란 (370 ㎖) 중의 디이소프로필아민 (120.6 ㎖, 0.86 mol) (Aldrich 사) 용액을 -30 ℃ 로 냉각하였다. 반응 혼합물 온도가 -30 내지 0 ℃ 로 유지되도록 하는 비율로 n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M, 344.2 ㎖, 0.86 mol) (Aldrich 사) 을 적가하였다. 그 후, 상기 반응 혼합물을 드라이아이스-아세톤조에서 -75 ℃ 로 냉각시켰다. 반응 온도를 -75 내지 -70 ℃ 로 유지하면서 테트라히드로푸란 (170 ㎖) 중의 에틸 부티레이트 (100 g, 0.86 mol) (Aldrich 사) 용액을 28 분에 걸쳐 적가하였다. 상기 혼합물을 동일 온도에서 30 분간 더 교 반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 -75 내지 -70 ℃ 로 유지하면서 상기 혼합물에 에틸 포르메이트 (125 ㎖, 1.55 mol) (Aldrich 사) 를 25 분간에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 승온되게 한 후, 실온에서 3 시간동안 교반하였다. 냉수로 외부적으로 냉각시켜 반응 온도를 30 ℃ 이하로 유지되게 하면서, 아세트산 (98.55 ㎖, 1.72 mol), 그 후 물 (430 ㎖) 및 디클로로메탄 (200 ㎖) 을 첨가하였다. 층들을 분리시킨 후, 유기층을 물 (300 ㎖) 로 세척하였다. 결합된 수층을 디클로로메탄 (200 ㎖) 으로 추출하였다. 결합된 유기층을 수성 중탄산나트륨 용액 (200 ㎖) 으로 세척하였다. 염기성 수용액을 디클로로메탄 (100 ㎖) 으로 추출하였다. 그 후, 모든 유기층을 수합하고, 황산나트륨 상에서 하룻밤 건조시킨 후, 여과 및 증류하여 용매 약 180 ㎖ 를 제거시켰다. (생성물 일부를 테트라히드로푸란과 함께 증류시켰다.) 잔류물을 65 내지 81 ℃ 에서 증류시켰다 (23 ㎜Hg). 70 내지 81 ℃ (23 ㎜Hg) 에서 증류한 분획으로 에틸 2-포르밀부티레이트를 수득하였다. (수율 68.35 g, 55.1 %).

5-에틸 우라실

우레아 (19.39 g, 0.32 mol) (J. T. Baker) 를, 반응 온도를 8 내지 15 ℃ 로 유지되게 하는 얼음물조에서 냉각하면서, 발연황산 (fuming sulfuric acid) (26 내지 29.5 % 의 유리 S0₃, 135 ㎖, 2.65 mol) (Aldrich 사) 에 첨가하였다. 30 분간 더 교반한 후에, 반응을 동일 온도로 유지하면서, 에틸 2-포르밀부티레이트 (46.55 g, 0.32 mol) (상기 실시예 1c 로부터) 를 18 분간에 걸쳐 첨가하였다. 30 분간 더 교반하면서, 두번째 부분의 우레아 (15.07 g, 0.25 mol) 를 동일 온도에서 10 분간에 걸쳐 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 실온에서 65 시간동안 교반한 후, 90 내지 100 ℃ 에서 2 시간동안 교반하였다(기체 발생이 관찰되었고, 반응은, 반응 온도를 110 ℃ 까지 상승시키면서, 발열적이었다). 혼합물을 얼음-물조로 30 ℃ 로 냉각시켰다. 얼음 (270 g) 을 서서히 가하여 반응을 35 ℃ 이하로 유지시켰다. 그 후, 혼합물을 5 ℃ 까지 냉각시키고, 20 분간 교반하였다. 형성된 고형물을 여과로 수집하고, 냉수, 헥산 및 디에틸 에테르로 세척한 후, 흡입 (suction) 으로 건조시켜 5-에틸 우라실을 수득하였다. (수율 38.85 g, 85.9 %).

2,4-디클로로-5-에틸피리미딘

5-에틸 우라실 (52.3 g, 0.37 mol) (상기 실시예 1c 로부터) 및 포스포러스 옥시클로라이드 (150 ㎖, 1.61 mol) (Aldrich 사) 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (195 ㎖, 0.86 mol) (Aldrich 사) 을, 냉수조에서 외부적으로 냉각하면서, 서서히 가하였다. 혼합물을 3.8 시간동안 환류하에 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 그후 얼음 (300 g) 에 부었다. 에틸 아세테이트 (100 ㎖) 를 첨가하고, 혼합물을 얼음-물조에서 냉각시키면서 20 ℃ 에서 30 분간 교반하였다. 생성된 혼합물을 Celite

로 여과하고, 여과액을 에틸 아세테이트-헥산 (1:1, 3 X 300 ㎖) 으로 추출하였다. 수합된 유기층을 물 (250 ㎖) 로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과 및 농축하여 건조시켰다. 이 잔류물을 에틸 아세테이트-헥산 (1: 1) 에 용해시키고, TLC 등급 실리카겔 (TLC grade 실리카겔) 로 여과한 후, 동일 용매로 용리하였다. 여과액을 농축하여 건조시켜 2,4-디클로로-5-에틸-피리미딘을 수득하였다. (수율 56.3 g, 85.2 %).

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘

N-브로모숙신이미드 (64.2 g, 0.35 mol) (Aldrich 사) 및 2,2'-아조-비스-이소부티로-니트릴 (AIBN, 1.78 g) (Aldrich 사) 을, 사염화탄소 (400 ㎖) 중의 2,4-디클로로-5-에틸-피리미딘 (56.3 g, 0.32 mol) 용액에 첨가하였다. 혼합물을 환류하에 1.5 시간동안 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 TLC 등급 실리카겔로 여과하고, 에틸 아세테이트-헥산 (1:8) 으로 용리시켰다. 여과액을 농축하여 건조시켜 (±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘을 수득하였다. (수율 81.3 g, 100 %).

실시예 1d

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘 (1.97 g; 7.70 mmol) (상기 실시예 1c 로부터) 을 아세토니트릴 (21 ㎖) 에 용해시켰다. p-아니시딘 (0.95 g; 7.70 mmol) (Aldrich 사), 탄산칼륨 (1.17 g; 8.48 mmol) 및 요오드화칼륨 (0.32 g; 1.93 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 16 시간 후, 혼합물을 에틸 아세테이트와 물로 분할하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M, 20:80 내지 25:75 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민을 수득하였다. (수율 1.82 g; 76.3 %).

실시예 1e

(±)-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

톨루엔(1 ㎖) 중의 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민 (0.14 g; 0.46 mmol) (상기 실시예 1c 로부터) 용액에 페닐 이소시아네이트 (50 ㎕; 0.46 mmol) (Aldrich 사) 를 첨가하였다. 용액을 110 ℃ 의 오일조에서 가열하였다. 1 시간 후, 소량의 출발 피리미딘이 남아있었다. 추가적인 분량의 페닐 이소시아네이트 (7.5 ㎕; 0.07 mmol) 을 첨가한 후, 혼합물을 15 분간 더 가열하였다. 실온으로 냉각하면서, 반응물을 농축하였다. 잔류물을 헥산으로 분쇄 (trituration) 한 후, 고 진공하에서 잠깐동안 건조시켰다.

이 고형 잔류물 (중간체 우레아) 을 새로 증류된 테트라히드로푸란 (1 ㎖) 에 용해시키고, -3 ℃ 로 냉각시킨 후, 포타슘 tert-부톡시드(테트라히드로푸란 중 1.0 M; 0.5 ㎖; 0.5 mmol) (Aldrich 사) 로 처리하였다. 냉각 상태에서 15 분 후, 반응 혼합물을 실리카겔 패드 (2.9 g 실리카) 로 여과하고, 1:1 에틸 아세테이트-헥산 및 그 후 에틸 아세테이트로 세척하였다. 질산염을 수합하고 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40S, 35:65 내지 50:50 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐- 3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 고체로서 수득하였다. (수율 0.14 g; 77.7 %).

실시예 1f

(±)-{2-클로로-5-[1-(4-메톡시-페닐아미노)-에틸]-피리미딘-4-일}-(4-메톡시-페닐)-아민

(±)-2,4-디클로로-5-(1-클로로에틸)-피리미딘 (0.41 g; 1.94 mmol) (상기 실시예 1b 로부터) 을 아세토니트릴 (2 ㎖) 에 용해시켰다. p-아니시딘 (0.25 g; 2.03 mmol) (Aldrich 사), 탄산칼륨 (0.30 g; 2.19 mmol) 및 요오드화칼륨 (0.04 g; 0.23 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 40 시간 후, 혼합물을 에틸 아세테이트와 물로 분할하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M, 20:80 내지 50:50 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-{2-클로로-5-[1-(4-메톡시-페닐아미노)-에틸]-피리미딘-4-일}-(4-메톡시-페닐)-아민을 수득하였다. (수율 0.19 g; 25.9 %).

실시예 1g

(±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(±)-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.13 g; 0.33 mmol) (상기 실시예 1e 로부터) 을 아닐린 (100 ㎕; 1.10 mmol) (Aldrich 사)으로 수합하였다. 혼합물을 110 ℃ 까지 가열하였다. 가열하여 맑은 용액을 수득하고, 새로운 고체를 상기 용액에서 침전시켰다. 45 분 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 잔류물을 헥산으로 분쇄한 후, 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40M, 40:60 내지 50:50 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 에틸 아세테이트-헥산으로 결정화시킨 후, (±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 오프-화이트 (off-white) 색의 고체로서 수득하였다. (수율 21.6 ㎎; 14.8 %). 상당한 양의 (±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온이 상기 실리카에 부착되어 있었고, 이를 50:50 에틸 아세테이트-메탄올로 용리하였다. (수율 88 ㎎; 60 %). 융점: 222 내지 234 ℃.

HR-MS(ES⁺) m/z C₂₆H₂₃N₅0₂ [(M+H)⁺] 에 대한 계산치: 438.1925.

실측치: 438.1927

실시예 2

3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

라세미 화합물 (±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (상기 실시예 1g 로부터) 을 Chiracel OD 컬럼 (1.0 x 25 ㎝) 상에서 다중 흐름으로 분석하였다. 첫번째 용리 피크에서 3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. 융점:218 내지 233 ℃.

실시예 3

3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

라세미 화합물 (±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디 히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (상기 실시예 1g 로부터) 를 Chiracel OD 컬럼 (1.0 x 25 ㎝) 상에서 다중 흐름으로 분석하였다. 두번째 용리 피크에서 3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. 융점: 223-236 ℃.

실시예 4a

(±)-7-클로로-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

디클로로메탄 (1.5 ㎖) 중의 (±)-{2-클로로-5-[1-(4-메톡시-페닐아미노)-에틸]-피리미딘-4- yl}-(4-메톡시-페닐)-아민 (49.4 ㎎; 0.13 mmol) (상기 실시예 1f 로부터) 용액을 얼음-물조에서 냉각시켰다. 이 용액에 트리에틸아민 (0.18 ㎖; 1.29 mmol) (Aldrich 사), 및 그 후 포스겐 용액 (1.89 M, 0.34 ㎖; 0.64 mmol) (Fluka) 을 첨가하였다. 냉각 상태에서 2 시간 후, 반응을 추가적인 디클로로메탄으로 희석하고, 물, 묽은 수성 염산, 묽은 수성 중탄산나트륨 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 유기층을 그 후 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 12M, 용매로서 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 (±)-7-클로로-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메 틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 42.6 ㎎; 79.2 %).

실시예 4b

(±)-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(±)-7-클로로-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.30 g; 0.72 mmol) (상기 실시예 4a 로부터) 및 아닐린 (0.20 ㎖; 2.16 mmol) (Aldrich 사) 혼합물을 100 ℃ 에서 40 분간 가열하였다. 그 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 헥산으로 분쇄하였다. 생성된 고체를 디클로로메탄에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 농축하였다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 12S, 디클로로메탄, 그 후 30:70 내지 50:50 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 0.303 g; 90.1 %).

크로마토그래피로 정제된 물질을 또 다른 실험으로부터의 비교 물질과 수합 하였다. 수합된 덩어리를 디클로로메탄-에틸 아세테이트-헥산으로부터 재결정화하여 (±)-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 오프-화이트색 고체로 수득하였다. (수율 0.39 g; 91 %). 융점: 228 내지 234 ℃.

HR-MS(ES⁺) m/z C₂₇H₂₅N₅O₃ [(M+H)⁺] 에 대한 계산치: 468.2030.

실측치: 468.2032.

실시예 5a

(±)-3-[7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴

톨루엔(1 ㎖) 중의 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민 (0.10 g; 0.34 mmol) (상기 실시예 1d 로부터) 용액에 3-시아노페닐 이소시아네이트 (66.6 ㎎; 0.46 mmol) (Aldrich 사) 를 첨가하였다. 혼합물을 110 ℃ 의 오일조에서 2 시간동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 헥산으로 분쇄한 후, 잠깐동안 건조시켰다. 고체 잔류물 (중간체 우레아) 을 새로 증류된 테트라히드로푸란 (1.5 ㎖) 중에 서 취하여, 얼음-염수조에서 냉각시키고, 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 370 ㎕; 0.37 mmol) (Aldrich 사) 로 처리하였다. 냉각상태에서 15 분 후, 반응물을 TLC 분석으로 완성하고, 실리카겔 패드 (0.5 g) 로 여과한 후, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 농축하고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 12M, 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 (±)-3-[7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴을 고체로서 수득하였다. (수율 0.13 g; 85.6 %).

실시예 5b

(±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴

(±)-3-[7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (0.49 g; 1.21 mmol) (상기 실시예 5a 로부터) 및 아닐린 (0.50 ㎖; 5.49 mmol) (Aldrich 사) 혼합물을 1 시간 동안 110 ℃ 까지 가열하였다. 메탄올 was added to the hot mixture 및 상기 용액을 then cooled. The solid that precipitated out of solution was collected 및 recrystallized from 메탄올 to yield(±)- 3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소- 7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 백색 고체로서 수득하였다. (수율 0.35 g; 62.2%). 융점: 224 내지 228 ℃.

HR-MS(ES⁺) m/z C₂₇H₂₂N₆0₂ ([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 463.1877; 실측치: 463.1883

실시예 6

(±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드

디메틸 술폭시드 (1.5 ㎖) 중의 (±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (0.11 g; 0.22 mmol) (상기 실시예 5b 로부터) 용액을 얼음-물조에서 냉각시켰다. 수성 수산화나트륨 (1.0 M; 0.38 ㎖; 0.38 mmol) 을 첨가한 후, 이어서 수성 과산화수소 (30% 용액; 70 ㎕; 0.69 mmol) 를 첨가하였다. 상기 첨가 후, 냉각조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 3 시간동안 교반하였다. 고형물을 수집하고, 물 및 뜨거운 디클로로메탄으로 세척하였다. 이 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (Biotage; 12M; 99:1 내지 80:20 에틸 아세테이트-메탄올 구배) 로 정제하고, 순수 한 생성물을 농축시켜 용액으로부터 결정화하여 (±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드를 백색 고체로서 수득하였다. (수율 64.6 ㎎; 57.9 %). 융점: 268 내지 273 ℃ (용융시 퇴색됨).

HR-MS (EI) m/z C₂₇H₂₄N₆0₃[M⁺] 에 대한 계산치: 480.1910; 실측치: 480.1912.

실시예 7a

(±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-프로판-1-올

디이소프로필아민 (1.10 ㎖; 7.85 mmol) (Aldrich 사) 을 새로 증류된 테트라히드로푸란 (15 ㎖) 에 용해시키고, -78 ℃ 로 냉각시켰다. n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M, 3.10 ㎖; 7.75 mmol) (Aldrich 사) 을 적가하고 연속하여 30 분간 교반하여 LDA 용액을 수득하였다. 이 새로 제조된 LDA 용액에, 테트라히드로푸란 (3 ㎖) 중의 2,4-디클로로피리미딘 (0.50 g; 3.36 mmol) (Aldrich 사) 을 12 분간에 걸쳐 가하였다. 30 분 후, -78 ℃ 에서 교반하고, 프로피온알데히드 (0.48 ㎖; 6.65 mmol) (Aldrich 사) 를 6 분간에 걸쳐 가하고, 연속적인 추가적인 35 분동안 교반하였다. 25 % 염화암모늄 수용액 (15 ㎖) 을 첨가하여 반응을 중지시킨 후, 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기상을 두번째 부분의 염화암 모늄 용액 및 그 후 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 농축하였다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage; 40M; 15:85 내지 25:75 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-프로판-1-올을 수득하였다. (수율 0.260g; 37 %).

실시예 7b

(±)-5-(1-브로모프로필)-2,4-디클로로-피리미딘

디이소프로필에틸아민 (0.55 ㎖; 3.13 mmol) (Aldrich 사) 중의 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-프로판-1-올 (0.26 g; 1.26 mmol) (상기 실시예 7a 로부터) 용액을 약간 냉각시켜 (18 ℃) 반응의 발열성이 상쇄되는 것을 도왔다. 순수한 포스포러스 옥시브로마이드 (0.35 g; 1.36 mmol) (Aldrich 사) 를 한 부분 첨가하였다. 상기 냉각조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 15 분 후, 상기 반응 혼합물을 얼음 및 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M; 5:95 에틸 아세테이트-헥산) 으로 정제하여 조 (±)-5-(1-브로모프로필)-2,4-디클로로-피리미딘을 수득하고 이를 추가적인 정제없이 이후의 단계들에서 사용하였다. (수율 0.23 g). 상기 물질은 그의 NMR 스펙트럼 내의 피리미딘 고리 양자에 대하여 3 개의 피크를 보였는데, 이는 상 기 고리의 염소 일부가 브롬으로 치환된 것을 가리킨다.

실시예 7c

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-프로필]-(4-메톡시-페닐)-아민

(±)-5-(1-브로모프로필)-2,4-디클로로-피리미딘 (0.26 g; 0.96 mmol) (상기 실시예 7b 로부터) 을 아세토니트릴 (2.5 ㎖) 에 용해시켰다. p-아니시딘 (0.12 g; 0.96 mmol) (Aldrich 사), 탄산칼륨 (0.15 g; 1.05 mmol) 및 요오드화칼륨 (0.04 g; 0.24 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 16 시간 후, 혼합물을 에틸 아세테이트와 물로 분할하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40S, 15:85 내지 20:80 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 조 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-프로필]-(4-메톡시-페닐)-아민을 수득하였다. (수율 0.19 g; 64.3 %). 이 물질 또한 상기 출발물질에서 나타난 바와 같은 비로 피리미딘 고리 양자에 대하여 3 개의 피크를 보였다. 이 물질을 추가적인 정제없이 사용하였다.

실시예 7d

(±)-7-클로로-4-에틸-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

톨루엔 (2 ㎖) 중의 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-프로필]-(4-메톡시-페닐)-아민 (0.19 g; 0.59 mmol) (상기 실시예 7c 로부터) 용액에 페닐 이소시아네이트 (83 ㎕; 0.76 mmol) (Aldrich 사) 를 첨가하였다. 용액을 110 ℃ 의 오일조에서 1 시간동안 가열하였다. 실온으로 냉각시켜, 반응물을 농축하였다. 잔류물을 헥산으로 분쇄한 후, 고 진공하에서 잠깐동안 건조시켰다. 고체 잔류물 (중간체 우레아) 을 새로 증류된 테트라히드로푸란 (2 ㎖) 에 용해시키고, -3 ℃ 로 냉각시킨 후, 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 0.65 ㎖; 0.65 mmol) (Aldrich 사) 로 처리하였다. 냉각상태에서 15 분 후, 반응 혼합물을 실리카겔 패드 (1 g) 로 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 농축하고, 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40S, 20:80 내지 40:60 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-7-클로로-4-에틸-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 고체로서 수득하였다. (수율 0.14g ; 60.2 %). 이 물질의 NMR 은 피리미딘 양자에 대하여 2 개의 단일선만을 보였는데, 이는 상기 희망하는 생성물 및 대응 7-브로모 화합물의 혼합물을 가리킨다.

실시예 7e

(±)-4-에틸-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5d]피리미딘-2-온

(±)-7-클로로-4-에틸-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.13 g; 0.34 mmol) (상기 실시예 7d 로부터) 및 아닐린 (250KtL ; 2.74 mmol) (Aldrich 사) 혼합물을 30 분간 110 ℃ 까지 가열하였다. 혼합물을 냉각시킨 후, 분쇄하고, 생성된 고체를 디클로로메탄에 용해시킨 후, 물 및 염수로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 상기 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 12M; 35:65 내지 50:50 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제한 후, 에틸 아세테이트-헥산으로부터 결정화하여 (±)-4-에틸-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5d]피리미딘-2-온을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 0.11 g; 73.6 %).

융점: 172-176 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₇H₂₅N₅O₂([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 452.2081; 실측치: 452.2083.

실시예 8a

2-플루오로-4-메톡시아닐린

3-플루오로-4-니트로페놀 (10.17 g, 64.7 mmol) (Aldrich 사) 을 디메틸포름아미드 (210 ㎖) 에 용해시켰다. 탄산칼륨 (45 g, 323 mmol) 및 메틸 요오디드 (5 ㎖, 77.64 mmol) (Aldrich 사) 를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. (박층 (thin layer) 크로마토그래피: 헥산 중 20 % 에틸 아세테이트 는 완전한 전환을 보였다). 반응 혼합물을 Celite

면으로 여과하고, 감압하에서 농축하였다. 상기 조 물질을 에테르로 분쇄하고, 불용성 물질은 여과로 제거하였다. 여과액을 감압하에 농축하여 오렌지색 고체를 수득하였다. 이 물질 (11.43 g) 을 메탄올 (150 ㎖) 에 용해시키고, 탄소 상의 10 % 팔라듐 (1.5 g) (Aldrich 사) 의 존재하에서, 50 psi 의 Parr 기구에서 1.5 시간동안 수소화시켰다. (박층 크로마토그래피: 헥산 중의 20 % 에틸 아세테이트는 완전한 전환을 보였다). 반응 혼합물을 Celite

로 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척한 후, 감압하에서 농축하여 2-플루오로-4-메톡시아닐린을 고체로서 수득하였다. (수율 3.81 g, 26.99 mmol).

실시예 8b

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-아민

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘 (0.20 g; 0.79 mmol) (상기 실시예 1c 로부터), N,N-디이소프로필에틸-아민 (140 ㎕; 0.80 mmol) (Aldrich 사) 및 2-플루오로-4-메톡시아닐린 (0.11 g; 0.78 mmol) (상기 실시예 16a 로부터) 혼합물을 아세토니트릴 (3 ㎖) 중에서 수합하고 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응은 불완전한 것으로 나타났으며, 그 후 40 내지 50 ℃ 의 오일조에서 하룻밤 가열하였다. 반응물을 냉각시킨 후, 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40S; 10:90 내지 20:80 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-아민을 수득하였다. (수율 0.12 g; 49.1 %).

실시예 8c

(±)-7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(+)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-아민 (0.45 g; 1.41 mmol) (상기 실시예 16b 로부터) 및 페닐 이소시아네이트(165RL ; 1.52 mmol) (Aldrich 사) 를 톨루엔 (5 ㎖) 중에서 수합하고, 오일조에서 110 내지 120 ℃ 에서 2.5 시간동안 가열한 후, 130 ℃ 에서 2.5 시간동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시킨 후, 농축하고, 헥산으로 분쇄하였다. 고체 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40S; 30:70 에틸 아세테이트-헥산) 으로 정제하여 중간체 (±)-1-[1-(2-클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-1-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-3-페닐-우레아를 수득하였다. (수율 0.27 g; 43.2 %).

이 우레아를 새로 증류된 테트라히드로푸란 (3 ㎖) 에 현탁시키고, 얼음-염수조에서 냉각시켰다. 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 0.64 ㎖; 0.64 mmol) (Aldrich 사) 를 상기 현탁액에 5 분간에 걸쳐 적가하였다. 상기 고체는 포타슘 tert-부톡시드를 첨가할 때 용액으로 변하였다. 냉각 상태에서 15 분간 더 교반한 후, 반응 혼합물을 실리카겔 (1.75 g) 면으로 여과하고, 1:1 에틸 아세테이트-헥산 및 그 후 에틸 아세테이트로 용리하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40S; 40:60 내지 50:50 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 (±)-7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 0.22 g; 두 단계에 대하여 전반적으로 38 %).

실시예 8d

(±)-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드 로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(±)-7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.21 g; 0.53 mmol) (상기 실시예 16c 로부터) 및 아닐린(450 1L ; 4.94 mmol) (Aldrich 사) 을 수합하고, 110 ℃ 에서 1 시간동안 가열하였다. 상기 혼합물을 냉각시킨 후, 헥산으로 분쇄하였다. 고체 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M; 40:60 내지 50:50 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제한 후, 디클로로메탄-에테르로부터 결정화하여 (±)-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 0.20 g; 81.4 %).

융점: 242-250 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₆H₂₂FN₅0₂ ([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 456.1831; 실측치: 456.1832.

실시예 9a

(±)-3-[7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드 로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-아민 (1.15 g; 3.63 mmol) (상기 실시예 16b 로부터) 을 톨루엔 (10 ㎖) 중의 3-시아노페닐 이소시아네이트 (0.55 g; 3.81 mmol) (Aldrich 사) 로 수합하고, 오일조에서 110 내지 115 ℃ 로 2 시간동안 가열하고, 그 후, 다음 3 시간동안 128 ℃ 로 가열하였다. 상기 반응물을 실온으로 냉각시켜, 농축하고, 헥산으로 분쇄하였다. 상기 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40M; 50:50 에틸 아세테이트-헥산) 으로 정제하여 중간체 (±)-1-[1-(2-클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-3-(3-시아노-pheny)-1-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-우레아를 수득하였다. (수율 1.20 g; 71.8 %).

이 우레아를 새로 증류된 테트라히드로푸란 (10 ㎖) 에 현탁시키고, 얼음-염수조에서 냉각시켰다. 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 2.70 ㎖; 2.70 mmol) (Aldrich 사) 를 상기 현탁액에 8 분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 냉각 상태에서 추가적인 15 분간 교반하고, 그 후 실리카겔 (7 내지 8 g) 면으로 여과하고, 1:1 에틸 아세테이트-헥산 및, 그 후 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M; 40:60 내지 50:50 에틸 아세 테이트-헥산) 로 정제하여 (±)-3-[7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 1.11 g; 두 단계에 대하여 전체적으로 66.8 %).

실시예 9b

(±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴

(±)-3-[7-클로로-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (1.03 g; 2.42 mmol) (상기 실시예 17a 로부터) 을 아닐린 (1.00 ㎖; 10.97 mmol) (Aldrich 사) 으로 수합하고, 110 ℃ 에서 1 시간동안 가열하였다. 이 시점에서, 상기 반응 혼합물은 고체 덩어리였다. 메탄올 (75 ㎖) 을 첨가한 후, 혼합물을 격렬히 교반하면서 110 ℃ 에서 20 분간 가열하였다(고체는 불용성으로 잔존하였다). 냉각 후, 상기 고체를 수거하고, 메탄올 및 그 후 에테르로 세척하고, 고 진공하에서 건조시켜 (±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴을 수득하였다. (수율 1.00 g; 85.6 %). 특성화 및 검사를 위하여 이 물질의 일부를 디클로로메탄-에테르-페 트롤륨 에테르로 재결정화하였다. (수율 0.22 g).

융점: 223-228 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₇H₂₁FN₆0₂ ([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 481.1783; 실측치: 481.1788.

실시예 10

(±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드

(±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴 (0.80 g; 1.67 mmol) (상기 실시예 17b 로부터) 을 디메틸 술폭시드 (25 ㎖) 에 용해시켰다. 상기 물질 대부분이 용액으로 변하였다. 실온에서 수성 수산화나트륨 (1.0 N; 3.34 ㎖; 3.34 mmol) 을 첨가한 후, 과산화수소 (물 중 30 %; 0.51 ㎖, 4.99 mmol) 를 첨가하였다. 45 분간 교반한 후, 물을 첨가하여, 용액에서 백색 고체를 침전시켰다. 고체를 수거하고, 물로 세척한 후, 건조시켰다. 상기 고체를 용해시키기 위하여는 상당한 부피의 디클로로메탄-메탄올-아세토니트릴이 필요하였다. 그 후, 상기 용매 혼합물을, 고체가 용액으로부터 결정화되기 시작할 때까지 증류 시켰다. 냉각 및 여과하여 (±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드를 백색 고체로서 수득하였다. (수율 0.56 g; 67.6 %).

융점: 282-286 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₇H₂₃FN₆0₃ ([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 499.1889; 실측치: 499.1894.

실시예 11a

(±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-2-메틸-프로판-1-올

디이소프로필아민 (1.1 ㎖; 7.85 mmol) (Aldrich 사) 과 새로 증류된 테트라히드로푸란 (15 ㎖) 의 용액을 -78 ℃ 로 냉각시켰다. n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M; 3.1 ㎖; 7.75 mmol) (Aldrich 사) 을 적가하고, 40 분간 연속적으로 교반하여 LDA 용액을 제조하였다. 그 후, 이 새로 제조된 LDA 용액에 테트라히드로푸란 (3 ㎖) 중의 2,4-디클로로피리미딘 (0.50 g; 3.37 mmol) (Aldrich 사) 을 15 분간에 걸쳐 적가하였다. 40 분간 교반한 후, 이소부티르알데히드 (0.61 ㎖; 6.72 mmol) (Aldrich 사) 를 6 분간에 걸쳐 첨가하고, 추가로 30 분간 더 연속적으로 교반하였다. 25 % 염화암모늄 수용액 (20 ㎖) 을 첨가하여 반응을 중지시키고, 그 후, 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기상을 두번째 부분의 염 화암모늄 수용액으로 세척하고, 그 후 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40S; 10:90 내지 15:85 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-2-메틸-프로판-1-올을 수득하였다. (수율 0.25 g; 33.4 %).

실시예 11b

(±)-5-(1-브로모-2-메틸-프로필)-2,4-디클로로-피리미딘

(±)-1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-2-메틸-프로판-1-올 (0.18 g; 0.83 mmol) (상기 실시예 19a 로부터) 을 N,N-디이소프로필-에틸아민 (0.37 ㎖; 2.10 mmol) (Aldrich 사) 및 소량의 디브로모메탄 (50 ㎕) (Aldrich 사) 로 수합하여 상기 혼합물의 가용화를 도왔다. 단지 소량의 물질만이 불용성으로 잔존하였다. 순수한 포스포러스 옥시브로마이드 (0.22 g ; 0.85 mmol) (Aldrich 사) 를 일부 첨가하였다. 반응 혼합물을 10 분간 교반한 후, 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M) 로 정제하여 (±)-5-(1-브로모-2-메틸-프로필)-2,4-디클로로-피리미딘을 무색의 오일로서 수득하였다. (수율 79.5 ㎎; 33.7 %).

실시예 11c

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-2-메틸-프로필]-(4-메톡시-페닐)-아민

326.23

(±)-5-(1-브로모-2-메틸-프로필)-2,4-디클로로-피리미딘 (88.7 ㎎; 0.312 mmol) (상기 실시예 19b 로부터) 을 탄산칼륨 (47.4 ㎎ ; 0.34 mmol), 요오드화칼륨 (14.9 ㎎; 0.09 mmol) 및 p-아니시딘 (38.7 ㎎; 0.31 mmol) (Aldrich 사) 으로 수합하고, 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 그 후 염수로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M; 10:90 내지 30:70 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 [1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-2-메틸-프로필]-(4-메톡시-페닐)-아민을 수득하였다. (수율 17.6 ㎎; 17.3 %).

실시예 11d

(±)-7-클로로-4-이소프로필-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-2-메틸-프로필]-(4-메톡시-페닐)-아민 (35.0 ㎎; 0.107 mmol) (상기 실시예 19c 로부터) 및 페닐 이소시아네이트 (12.8LL ; 0.12 mmol) (Aldrich 사) 을 톨루엔 (0.6 ㎖) 중에서 수합하고, 밀봉한 후, 마이크로파 반응기 (SmithCreator, 최대 146 ℃ 로 160 초, 그 후 160 ℃ 에서 800 초, 및 마지막으로 l80 ℃ 에서 600 초) 에서 가열하였다. 반응은 불완전하였으며, 상기 혼합물을 농축하고, 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M; 20:80 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 중간체 (±)-1-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-2-메틸-프로필]-1-(4-메톡시-페닐)-3-페닐-우레아를 수득하였다. (수율 24.0 ㎎).

이 중간체 우레아를 새로 증류된 테트라히드로푸란 (0.4 ㎖) 에 용해시키고, 생성된 용액을 얼음-염수조에서 냉각시켰다. 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 60 AL ; 0.06 mmol) (Aldrich 사) 를 첨가하였다. 상기 혼합물을 냉각 상태에서 15 분간 교반하고, 상기 조를 제거한 후, 추가로 5 분간 더 연속 교반하였다. 혼합물을 실리카겔 면으로 여과한 후, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 농축하고, 건조시켜 (±)-7-클로로-4-이소프로필-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 21.5 ㎎; 두 단계에 대하여 전체적으로 49 %).

실시예 11e

(±)-4-이소프로필-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(±)-7-클로로-4-이소프로필-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (22.0 ㎎; 0.054 mmol) (상기 실시예 19d 로부터) 및 아닐린 (50 ㎕; 0.55 mmol) (Aldrich 사) 을 수합하고 오일조에서 100 ℃ 에서 1 시간동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 잔류물을 헥산으로 분쇄한 후, 상청액을 기울여 따라내었다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 물 및 그 후 염수로 세척하였다. 유기상을 실리카겔과 혼합하고, 농축한 후, 이어서 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M; 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하고 디클로로메탄-에테르-페트롤륨 에테르로부터 결정화하여 (±)-4-이소프로필-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 14.8 ㎎; 59.1 %). 융점: 229-235 ℃

HR-MS(ES⁺) m/z C₂₈H₂₇N₅0₂ ([M+H]⁺): 466.2238; 실측치: 466.2243.

m/z C₂₈H₂₇N₅0₂([M+Na]⁺): 488.2057 ; 실측치: 488.2059.

실시예 12a

(±)-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-아민

(±)-2,4-디클로로-5-(1-브로모에틸)-피리미딘 (0.20 g; 0.79 mmol) (상기 실시예 1c 로부터), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.40 ㎖; 2.27 mmol) (Aldrich 사) 및 2-클로로-5-메톡시아닐린 히드로클로라이드 (0.15 g; 0.77 mmol) (Aldrich 사) 를 (순수하게) 수합하고, 오일조에서 90 ℃ 에서 16 시간동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 혼합물을 에틸 아세테이트에 담그고, 물 및 그 후 염수로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M; 5: 95 to 15:85 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제하여 (±)-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-아민을 수득하였다. (수율 0.12 g; 45.9 %).

실시예 12b

(±)-7-클로로-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(±)-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-아민 (70 ㎎; 0.21 mmol) (상기 실시예 20a 로부터) 을 페닐 이소시아네이트 (60 SiL ; 0.55 mmol) (Aldrich 사) 로 수합하고 (순수한 상태로) 150 ℃ 에서 65 분간 가열하였다. 박층 크로마토그래피 분석으로 일부 미반응 출발 물질이 잔존해 있다는 것이 나타났다. 추가적인 이소시아네이트 (20 ㎕; 0.18 mmol) 를 첨가하고, 혼합물을 150 ℃ 에서 추가적으로 30 분간 가열하였다. 냉각시킨 후, 헥산을 첨가하였다. 교반한 후, 상기 상청액을 기울여 따라버리고, 잔류물을 건조시켜 중간체 (±)-1-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-1-[1-(2-클로로피리미딘-5-일)-에틸] -3-페닐-우레아를 수득하였으며, HPLC 로 검사한 결과 이는 출발 물질을 약 20 % 함유하였다.

이 중간체 우레아 혼합물을 테트라히드로푸란 (0.5 ㎖) 에 용해시키고, 얼음-염수조에서 냉각시켰다. 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M ; 200 ㎕; 0.20 mmol) 을 적가하였다. 상기 혼합물을 냉각 상태에서 15 분간 교반하고, 상기 조를 제거한 후, 추가적으로 5 분간 연속 교반하였다. 혼합물을 실리카겔 (~ 1 g) 면으로 여과하고 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 또 다른 반응에서의 물질과 수합하고, 농축한 후, 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M; 20:80 내지 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 으로 정제하여 (±)-7-클로로-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 45.8 ㎎; 두 실험에 있어서 전체적으로 40 %).

실시예 12c

(±)-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

(±)-7-클로로-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.20 g; 0.49 mmol) (상기 실시예 20b 로부터) 을 아닐린 (150 ㎕; 1.65 mmol) (Aldrich 사) 으로 수합하고 오일조에서 100 ℃ 에서 약 70 분간 가열하였다. 냉각시킨 후, 잔류물을 헥산으로 분쇄한 후, 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 상기 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 사, 40M; 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 (±)-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리 미딘-2-온을 담황색 고체로서 수득하였다. (수율 0.15 g; 63.7 %).

HR-MS(ES⁺) m/z C₂₆H₂₂ClN₅0₂ ([M+H]⁺): 472.1535; 실측치: 472.1537.

실시예 13a

(S)-(+)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산

메틸(S)-(+)-3-히드록시-2-메틸프로피오네이트 (1.06 g; 8.99 mmol) (Aldrich 사) 를 디클로로메탄 (10 ㎖, 분자체 상에서 건조시킴) 에 용해시켰다. 이미다졸 (0.85 g; 12.41 mmol) (Aldrich 사) 및 tert-부틸-디페닐실릴 클로라이드 (2.30 ㎖; 8.85 mmol) (Aldrich 사) 를 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 3 시간동안 교반하였다. 반응물을 추가적인 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하여 메틸 (S)-(+)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸-프로피오네이트를 오일로서 수득하였다. (수율 3.17 g; 98.8 %).

이 실릴-에테르 (3.15 g; 8.85 mmol) 를 테트라히드로푸란-메탄올 (3:1) 에 용해시키고, 주위 온도에서 수성 수산화나트륨 (1.0 N; 10.0 ㎖; 10.0 mmol) 으로 하룻밤 검화(safonification)시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 분할하고, 0.5 N 염산으로 pH ~4 까지 산성화시켰다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M; 25:75 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 (S)-(+)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 2.06 g; 68.1 %).

실시예 13b

(S)-tert-부틸-2-이소시아나토-프로폭시디페닐실란

이 물질을 제자리에서 생성시켰다.

(S)-(+)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산 (0.44 g; 1.20 mmol) (상기 실시예 21a 로부터) 을 디클로로메탄 (3 ㎖, 분자체 상에서 건조시킴) 에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.36 ㎖; 2.58 mmol) (Aldrich 사) 을 첨가하고, 상기 용액을 얼음-물조에서 냉각시켰다. 에틸 클로로포르메이트 (0.16 ㎖; 1.63 mmol) (Aldrich 사) 를 적가하고, 혼합물을 냉각 상태에서 1 시간동안 교반하였다. 혼합물을 그 후 추가적인 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하여 (S)-(+)-3-(tert- 부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산 클로라이드를 수득하였다.

아세톤 (4 ㎖) 중의 상기 산 클로라이드 용액에, 물 (4 ㎖) 중의 소듐 아지드 (0.25 g; 3.85 mmol) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 10 분간 교반한 후, 디클로로메탄 및 물로 희석하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 및 농축하여 (S)-(+)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피오닐 아지드를 수득하였다.

이 아지드를 톨루엔 (2 ㎖) 에 용해시키고, 오일조에서 120 ℃ 에서 가열하여 쿠르티우스 전위 (Curtius rearrangement) 로 목적하는 (S)-tert-부틸-2-이소시아나토-프로폭시-디페닐실란을 생성시켰다.

실시예 13c

1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(S)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

뜨거운 톨루엔 (2 ㎖; 120 ℃) 중의 (S)-tert-부틸-2-이소시아나토-프로폭시-디페닐실란 (0.440g, 1.20 mmol, 의 (S)-(+)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산으로부터 제자리에서 생성됨) (상기 실시예 21b 로부터) 을 톨루엔 (2 ㎖) 중의 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민 (0.35 g; 1.10 mmol) (상기 실시예 1d 로부터) 용액으로 처리하였다. 생성된 용액을 120 ℃ 에서 30 분간 유지한 후, 실온으로 냉각시키고 농축시켰다. 잔류물을 무수 테트라히드로푸란 (4 ㎖) 에 용해시키고, 얼음-염수조에서 냉각시켰다. 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 1.2 ㎖; 1.20 mmol) (Aldrich 사) 를 적가하고, 냉각 상태에서 15 분간 연속 교반하였다. 혼합물을 실리카겔 면으로 여과하고, 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40 M; 25:75 에틸 아세테이트-헥산) 로 추가 정제하여 1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(S)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 부분입체 이성질체 (diastereomer) 혼합물로서 수득하였다. (수율 0. 31 g; 46 %). 이 시점에서 부분입체 이성질체들의 분리는 관찰되지 않았다.

실시예 13d

1-(2-히드록시-1-(S)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(S)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.286 g; 0.476 mmol) (상기 실시예 21c 로부터) 아닐린 (0.50 ㎖; 5.49 mmol) (Aldrich 사) 으로 수합하고, 오일조에서 90 ℃ 에서 3 시간동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40L; 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 실릴 보호된 생성물을 수득하였다. (수율 0.29 g; 92 %). 이 시점에서 부분입체 이성질체들의 부분적 분리가 관찰되었다.

상기 실릴 보호된 생성물 (80 ㎎; 0.12 mmol) 의 부분입체 이성질체 혼합물을 무수 테트라히드로푸란 (0.5 ㎖) 에 용해시키고, 실온에서 약 7 시간동안 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 0.45 ㎖; 0.45 mmol) (Aldrich 사) 로 처리하였다. 혼합물을 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 12M; 60:40 내지 75:25 에틸 아세테이트-헥산 구배) 로 정제한 후, 에틸 아세테이트-헥산으로부터 결정화하여 1-(2-히드록시-1-(S)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 부분입체 이성질체 혼합물로서 수득하였다. (수율 38.9 ㎎; 79.4 %).

융점: 165-180 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₃H₂₅N₅O₃([M+H]⁺): 420.2030; 실측치: 420.2034.

실시예 14a

(R)-(-)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산

메틸 (R)-(-)-3-히드록시-2-메틸프로피오네이트 (30.81 g; 260.8 mmol) (Aldrich 사) 를 디클로로메탄 (300 ㎖, 분자체 상에서 건조시킴) 에 용해시켰다. 이미다졸 (25.11 g; 365.1 mmol) (Aldrich 사) 및 tert-부틸-디페닐실릴 클로라이드 (68.00 ㎖; 261.5 mmol) (Aldrich 사) 를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 6 시간동안 교반하였다. 반응물을 추가적인 디클로로메탄 (300 ㎖) 으로 희석하고, 물 (2 x 150 ㎖) 및 염수 (1 x 150 ㎖) 로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하여 메틸 (R)-(-)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸-프로피오네이트를 오일로서 수득하였다. (수율 94.3 g).

이 조 실릴-에테르 (94.3 g) 를 테트라히드로푸란-메탄올 (3:1, 875 ㎖) 에 용해시키고, 실온에서 수성 수산화나트륨 (1.0 N; 300.0 ㎖; 300.0 mmol) 으로 46 시간동안 검화시켰다. 반응 혼합물을 감압하에서 농축하여 유기 용매 일부를 제거하고, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 얼음-물조에서 냉각시킨 후, 혼합물을 1 N 수성 염산 (300 ㎖) 으로 산성화시켰다. 층들을 분리하고, 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과 및 농축하여, 소량의 에틸 아세테이트를 함유한 조 (R)-(-)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산을 수득하였다. NMR 로 순도를 측정한 결과 95 % 였다. (수율 90.4 g; 96 %).

실시예 14b

(R)-tert-부틸-2-이소시아나토-프로폭시디페닐실란

이 물질을 제자리에서 생성시켰다.

(R)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산 (0.508 g; 1.48 mmol) (상기 실시예 22a 로부터) 을 디클로로메탄 (4 ㎖, 분자체 상에서 건조시킴) 에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.42 ㎖; 2.98 mmol) (Aldrich 사) 을 첨가하고, 상기 용액을 얼음-물조에서 냉각시켰다. 에틸 클로로포르메이트 (0.17 ㎖; 1.78 mmol) (Aldrich 사) 를 적가하고, 혼합물을 냉각 상태에서 50 분간 교반하였다. 반응 혼합물을 추가적인 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 그 후 염수로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 농축하였다.

아세톤 (5 ㎖) 중의 이 무수 중간체 용액에, 물 (5 ㎖) 중의 소듐 아지드 (0.29 g; 4.41 mmol) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10 분간 교반한 후, 추가적인 디클로로메탄 및 물로 희석하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 (R)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피오닐 아지드를 수득하였다.

이 아지드를 톨루엔 (~5 ㎖; 4A 분자체 상에서 건조시킴) 에 용해시키고, 오일조에서 120 ℃ 에서 가열하였다. 격렬한 질소 기체를 발생시키자, 쿠르티우스 전위로 곧 원하는 (R)-tert-부틸-2-이소시아나토-프로폭시-디페닐실란이 생성되었다. 이 물질을 정제하지 않고 사용하였다.

실시예 14c

3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(R)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아

뜨거운 톨루엔 (4 ㎖) 중의 (R)-tert-부틸-2-이소시아나토-프로폭시-디페닐실란 (1.00 g, 2.861 mmol 의 (R)-3-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-2-메틸프로피온산으로부터 제자리에서 생성됨) (상기 실시예 22b 로부터) 을, (2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민 (0.74 g; 2.38 mmol) (상기 실시예 1d 로부터) 의 톨루엔 용액으로 처리하였다. 상기 용액을 115 내지 120 ℃ 에서 3 시간동안 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 상기 조 반응 용액을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40L 컬럼들을 이용한 다중 흐름; 35:65 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하였는데, 이로써 두 부분입체 이성질체들이 성공적으로 분리되었다. 첫번째 용리된 부분입체 이성질체인, 3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(R)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아를 90 내지 95 % 의 e.e.로 수득하였다. (수율 0.47 g; 25.7 %).

실시예 14d

3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(S)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아

상기 두번째 용리된 부분입체 이성질체인 3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(S)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아 (상기 실시예 22c 로부터) 를 85 내지 90 % 의 e.e. 로 수득하였다. (수율 0.44 g; 24.1 %).

실시예 14e

1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡 시-페닐)-(R)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(R)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아 (0.46 g, 96 % 순도; 0.69 mmol) (상기 실시예 22c 로부터) 를 무수 테트라히드로푸란 (2 ㎖) 에 용해시키고, 얼음-염수조에서 냉각시켰다. 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 0.85 ㎖; 0.85 mmol) (Aldrich 사) 를 5 분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 냉각 상태에서 15 분간 교반한 후, 상기 조를 제거하고, 추가로 5 분간 더 연속 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔 면으로 여과하고, 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 이 조 생성물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M; 25:75 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-(R)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 0.32 g ; 77.6 %).

실시예 14f

1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

톨루엔 (0.25 ㎖, 분자체 상에서 건조시킴) 중의 1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-(R)-4-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.32 g; 0.51 mmol) (상기 실시예 22e 로부터) 및 아닐린 (0.12 ㎖; 1.32 mmol) (Aldrich 사) 용액을 110 ℃ 의 오일조에서 1.75 시간동안 가열하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 농축하였다. 상기 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40L; 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 0.30 g; 81.6 %). 이 물질은 ≥95% 의 e.e. 를 보였다.

이 중간체 (0.29 g; 0.41 mmol) 를 무수 테트라히드로푸란 (1.5 ㎖) 에 용해시키고, 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 1.3 ㎖; 1.30 mmol) (Aldrich 사) 로 50 ℃ 에서 2 시간동안 처리하였다. 반응물을실온으로 냉각시키고 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 담그고, 물 (2x) 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M; 70:30 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제한 후,에틸 아 세테이트-헥산으로부터 결정화하여 1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 0.14 g; 79.1 %). 융점 : 158-162 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₃H₂₅N₅0₃ ([M+H]⁺): 420.2030; 실측치: 420.2035

[α]= +53.3 (회전 = +0.256; 농도 = 4.8 ㎎/㎖ (MeOH); λ = 589 nm).

실시예 15a

1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

3-[2-tert-부틸-디페닐-실라닐옥시-1-(R)-메틸-에틸]-1-(S)-[1-(2,4-디클로로피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시페닐)-우레아 (0.44 g, 96 %; 66 mmol) (상기 실시예 22d 로부터) 를 무수 테트라히드로푸란 (1.5 ㎖) 에 용해시키고, 얼음-염수조에서 냉각시켰다. 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M; 0.80 ㎖; 0.80 mmol) (Aldrich 사) 를 5 분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 냉각 상태에서 15 분간 교반한 후, 상기 조를 제거하고, 추가로 5 분간 더 연속 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔 면으로 여과하고, 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 이 조 생성물을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M; 30:70 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 0.29 g ; 72.8 %).

실시예 15b

1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

톨루엔 (0.25 ㎖, 분자체 상에서 건조시킴) 중의 1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.28 g; 0.45 mmol) (상기 실시예 23a 로부터) 및 아닐린 (0.10 ㎖; 1.21 mmol) (Aldrich 사) 용액을 110 ℃ 의 오일조에서 2 시간동안 가열하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물 및 염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축하였다. 상기 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40L; 40:60 에틸 아세테이트-헥산) 로 정제하여 1-[2-(tert-부틸-디페닐-실라닐옥시)-1-(R)-메틸-에틸]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 0.23 g; 73.0 %). 이 물질은 ~95 % 의 e.e. 를 보였다.

이 중간체 (0.23 g; 0.32 mmol) 를 무수 테트라히드로푸란 (1.0 ㎖) 에 용해시키고, 50 ℃ 에서 2 시간동안 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M ; 0.9 ㎖; 0.90 mmol) (Aldrich 사) 로 처리하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 담그고, 물 (2x) 및 염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축하였다. 플래시 크로마토그래피 (Biotage 40M; 1 % 메탄올을 함유한 7:11:2 에틸 아세테이트-디클로로메탄-헥산) 로 정제한 후, 에틸 아세테이트-헥산으로 결정화하여 1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 0.08 g; 59.3 %).

융점: 195-198 ℃. HR-MS(ES⁺) m/z C₂₃H₂₅N₅0₃ ([M+H]⁺): 420.2030; 실측치: 420.2032. [α] =-62.8°(회전 = -0.201; 농도 = 3.2 ㎎/㎖ (MeOH); λ = 589 nm).

실시예 16

1-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시-페닐)-3-[1-(5)-페닐-에틸]-우레아

톨루엔 (5 ㎖) 중의 [1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시-페닐)-아민 (378 ㎎, 1.27 mmol) (상기 실시예 1d 로부터) 및 (S)-(-)-α-메틸벤질 이소시아네이트 (205 ㎎, 1.39 mmol) (Aldrich 사) 혼합물을 100 ℃ 에서 16 시간동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 실리카겔을 통과시켜 정제하고, 헥산-에틸 아세테이트 (1:1) 로 용리하여 1-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시-페닐)-3-[1-(S)-페닐-에틸]-우레아를 두 개의 분리가능한 부분입체 이성질체로서 수득하였다. 덜 극성인 부분입체 이성질체 (헥산-에틸 아세테이트, 1:1 중에서 박층 크로마토그래피) (수율 270 ㎎, 47.8 %) 및 좀 더 극성인 부분입체 이성질체 (수율 284 ㎎, 50.3 %).

실시예 17

7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-[1-(S)-페닐-에틸)-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

5 ℃ 로 냉각시킨 테트라히드로푸란 (5 ㎖) 중의 1-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-1-(4-메톡시-페닐)-3-[1-(S)-페닐-에틸]-우레아 (덜 극성인 부분입체 이성질체, 250 ㎎, 0.56 mmol) (상기 실시예 24 로부터) 용액을 포타슘 tert-부톡시드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M 용액, 0.62 ㎖, 0.62 mmol) 로 처리하였다. 5 ℃ 에서 15 분간 교반하고, 실온에서 추가로 15 분간 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 ㎖) 로 희석하고, 물 (2 x 10 ㎖) 로 세척한 후, MgS0₄ 상에서 건조시켰다. 용매를 감압하에서 증발시켜 조 7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-[1-(S)-페닐-에틸)-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하고, 이를 이후의 단계에서 직접 사용하였다. (308 ㎎, 일부 용매를 포함함).

실시예 18

3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-1-[1-(S)-페닐-에틸]-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

아닐린 (0.195 ㎖) (Aldrich 사) 중의 조 7-클로로-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-[1-(S)-페닐-에틸)-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (308 ㎎, 0.56 mmol 로부터) (상기 실시예 25 로부터) 현탁액을 100 ℃ 에서 3 시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 그 후 실온으로 냉각하고, 톨루엔 (3 ㎖) 으로 희석시키고, 헥산-에틸 아세테이트 (1:1) 로 용리하는 컬럼 크로마토그래피 (실리카겔) 를 수행하여 3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-1-[1-(S)-페닐-에틸]-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 수득하였다. (수율 140 ㎎, 53.7 %).

실시예 19

(±)-N-[6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-8-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일]-N-페닐-아세트아미드

피리딘 (1 ㎖) (Fisher) 중의 (±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온 (500 ㎎, 1.14 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 현탁액에, 아세트산 무수물 (1.0 ㎖) 을 첨가하고, 그 후, 4-(디메틸아미노)피리딘 (25 ㎎) (Aldrich 사) 을 일부 첨가하였다. TLC 분석으로 출발 물질이 검출될 수 없을 때까지 반응 혼합물을 90 ℃ 까지 5 시간동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 중지시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 ㎖) 로 추출하였다. 수합된 유기 추출물을 물 (10 ㎖) 및 염수 (10 ㎖) 로 연속적으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 여과한 후, 감압하에서 농축하여 조 생성물을 수득하고, 이를 플래시 크로마토그래피로 정제하여 (±)-N-[6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-8-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일]-N-페닐-아세트아미드를 수득하였다. (수율 373 ㎎, 68.0 %).

실시예 20a

트랜스-4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-시클로헥실아민

디클로로메탄 (100 ㎖) 중의 트랜스-4-아미노시클로헥사놀 (5.0 g, 43.4 mmol) (TCI US) 용액에, 이미다졸 (14.78 g, 0.22 mol) (Aldrich 사) 및 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (19.63 g, 0.13 mol) (Avocardo Research Chemicals) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 일간 교반하였다. 이를 감압하에 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 ㎖) 및 물 (100 ㎖) 로 희석하였다. 유기층을 1N 수산화나트륨 용액, 물 및 염수로 세척한 후, 건조시키고(MgSO₄), 여과 및 농축하여 조 트랜스-4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-시클로헥실아민을 수득하고, 이를 추가적인 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. (수율 7.62 g, 76.5 %).

실시예 20b

(±)-1-(트랜스-4-히드록시-시클로헥실)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

디클로로메탄 (15 ㎖) 중의 트랜스-4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-시클로헥실아민 (500 ㎎, 2.20 mmol) (상기 실시예 28a 로부터) 및 트리에틸아민 (1.52 ㎖,10. 90 mmol) (Aldrich 사) 용액에, 0 ℃ 에서 톨루엔 용액 (3.2 ㎖, 6.50 mmol) (Fluka) 중의 20 % 포스겐을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15 분간 교반한 후, 여과하고, 여과액을 잔류물로 농축하고, 이를, Kugelrohr 기기를 사용하여 고 진공하에서 증류하여 트랜스-4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-시클로헥실 이소시아네이트 (485 ㎎) 를 무색의 액체로서 수득하였다.

이 중간체 이소시아네이트 (223 ㎎, 0.87 mmol) 를 무수 테트라히드로푸란 (약 3 ㎖) 에 용해시키고, 흡입봉 (cannula) 을 통해 무수 테트라히드로푸란 (15 ㎖ ) 중의 (±)-[1-(2,4-디클로로-피리미딘-5-일)-에틸]-(4-메톡시페닐)-아민 (204 ㎎, 0.67 mmol) (상기 실시예 1d 로부터) 및 n-부틸리튬 (헥산 중의 2.5 M 용액, 295 ㎕, 0.74 mmol) (Aldrich 사) 용액에 -78 ℃ 에서 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 교반하고, 2.25 시간내에 실온으로 덥힌 후, 에틸 아세테이트 및 물로 분할하였다. 에틸 아세테이트 층을 제거하고, 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과하고, 잔류물로 농축시키고, 이를 실리카겔 컬럼 및 헥산 중의 0 내지 40 % 에틸 아세테이트 구배를 이용한 크로마토그래피로 정제하여 갈색 발포체 (foam) 를 수득하였다. 이 중간체를 아닐린 (3 ㎖) (Aldrich 사) 에 용해시킨 후, 생성된 용액을 90 ℃ 에서 8 시간동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시킨 후, 실리카겔 컬럼에 직접 적용하고, 헥산 중의 0 내지 50 % 에틸 아세테이트 구배를 이용하는 크로마토그래피로 정제하였다. 이 정제된 중간체를, 0 ℃ 에서 디클로로 메탄 (5mL) 및 물 (300 ㎕) 중의 트리플루오로아세트산 20 % 용액에 용해시켰다. 30 분간 교반시킨 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 및 0.5N 수성 수산화나트륨 용액으로 분할하였다. 고체 수산화나트륨을 첨가하여 수성층의 pH 를 13 으로 조절하였다. 그 후, 유기상을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과 및 농축한 후, 생성된 잔류물을 헥산 중의 0 내지 100 % 에틸 아세테이트를 가진 실리카겔 컬럼 상에서 정제하였다. 이 정제된 생성물을 디클로로메탄에 용해시키고, 과량의 펜탄으로 침전시켜 (±)-1-(트랜스-4-히드록시-시클로헥실)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온을 백색 고체로서 수득하였다. (수율 121 ㎎, 9 %). HRMS m/z C₂₆H₂₉N₅0₃ ([M+H]⁺) 에 대한 계산치: 460.2343. 실측치: 460.2347.

실시예 21

하기 화합물들을 상기 본원에 개시한 바와 유사한 방법으로 제조할 수 있다:

실시예 21a

1-[(1R,3R)-3-히드록시-시클로펜틸]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21b

1-[(1S,3S)-3-히드록시-시클로펜틸]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21c

7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-[(1R,3R)-3-히드록시-시클로펜틸]]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21d

7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-[(1S,3S)-3-히드록시-시클로펜틸]-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21f

7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시페닐)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21g

3-(4-클로로-페닐)-7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸에틸)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21h

3-(4-클로로-2-플루오로-페닐)-7-(4-플루오로-페닐아미노)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-4-(S)-메틸-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21i

3-(4-클로로-페닐)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21j

3-(4-클로로-2-플루오로-페닐)-1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

실시예 21k

3-(4-클로로-페닐)-1-(3-히드록시-2-(S)-메틸-프로필)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온

증식억제 활성

본 발명의 화합물들의 증식억제 활성은 하기 실시예 22 및 23 에서 결정한 다. 이 활성은 본 발명의 화합물들이 암, 특히 고형 종양 예컨대 유방, 폐, 전립선 및 결장 종양, 더욱 바람직하게는 유방 및 결장 종양을 치료하는데 유용함을 나타낸다.

실시예 22

키나아제 분석

KDR, FGFR, EGFR, 및 PDGFR 활성의 저해를 결정하기 위하여, HTRF (균질 시간 분해 형광법, Homogeneous Time Resolved Fluorescence) 검정을 사용하여 키나아제 분석을 수행하였다. 이 검정은 문헌 [A.J. Kolb et. al., Drug Discovery Today, 1998, 3(7), p333] 에 기술되어 있다.

키나아제 반응에 앞서, 재조합 EEE-부착된 KDR 을 활성화 완충제 (50 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 10 % 글리세롤, 150 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 26 mM MgCl₂, 및 4 mM ATP) 의 존재하에서 활성화시켰다.

각 웰의 총 부피가 90 ㎕ 인 96-웰 폴리프로필렌 플레이트 (Falcon) 에서 키나아제 활성 분석을 수행하였다. 각 웰은 1 μM KDR 기질 (비오틴-EEEEYFELVAKKKK), 1 nM 의 활성화된 KDR, 및 100 μM 내지 128 μM (1:5 순차희석) 범위의 8 개의 분석 농도 중 하나인 시험 화합물을 포함하였다. 100 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 0.1 mM Na₂VO₄, 25 mM MgCl₂, 50 mM NaCl (KDR 보존용액으로부터), 1% DMSO (화합물로부터), 0.3 mM ATP (K_m 농도) 및 0.02 % BSA 의 존재하에서 키나아제 활성 분석을 수행하였다. 반응물을 37 ℃ 에서 30 분간 인큐베이션하 였다. KDR 반응을 중지시키기 위하여, 72 ㎕ 의 반응 혼합물을, 18 ㎕ 의 표시 (revelation) 완충액 (20 mM EDTA, 50 mM HEPES, pH 7.4, 0.02 % BSA, 10 nM Eu-표지된 항-pY 항체 (최종 농도 2 nM), 및 100 nM 스트렙타비딘 (최종 농도 20 nM)) 을 함유한 STOP 플레이트로 옮겼다. 혼합시킨 후, 35 ㎕ 의 용액을 384-웰 블랙 플레이트 (Costar) 의 이중 웰들로 옮기고, 월락 빅터 5 판독기 (Wallac Victor 5 reader) 로 615/665 nm 에서 측정하였다.

하기와 같은 차이점을 두면서 KDR 활성 분석에 대하여 상기 기술한 바와 같이 FGFR, EGFR 및 PDGFR 활성 분석을 수행하였다. GST-부착된 FGFR 효소를 하기 활성화 완충액에서 실온에서 1 시간동안 활성화시켰다: 100 mM HEPES, pH 7.4, 50 mM NaCl, 20 mM MgCl₂, 및 4 mM ATP. 총 부피 90 ㎕ 의 100 mM HEPES, 1 mM DTT, 0.4 mM MgCl₂, 0.4 mM MnCl₂, 50 mM NaCl, 1% DMSO, 10 μM ATP (FGFR 에 있어서 K_m = 8.5 μM), 0.1 mM Na₂V0₄, 및 0.02 % BSA 의 존재하에서 1 μM 기질 (비오틴-EEEEYFELV), 1.5 nM 활성화된 FGFR, 및 시험 화합물로 키나아제 활성 분석을 수행하였다. 상기 분석의 나머지를 KDR 분석과 동일한 방법으로 수행하였다.

1 μM 기질 (비오틴- EEEEYFELV), 1.5 nM EGFR, 시험 화합물, 100 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 5 mM MgCl₂, 2 mM MnCl₂, 1% DMSO, 0.5 μM ATP (EGFR 에 대한 K_m), 0.1 mM Na₂V0₄, 및 0.02 % BSA 로 EGFR 키나아제 활성 분석을 수행하였다. 상기 분석의 나머지는 상기 KDR 분석과 동일한 방법으로 수행하였다.

1 μM 기질 (비오틴- EEEEYFELV), 1.0 nM PDGFR, 시험 화합물, 100 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 5 mM MgCl₂, 2 mM MnCl₂, 1% DMSO, 2.3 μM ATP(PDGFR 에 대한 K_m), 0.1 mM Na₂VO₄, 및 0.02 % BSA 로 PDGFR 키나아제 활성 분석을 수행하였다. 상기 분석의 나머지는 상기 KDR 분석과 동일한 방법으로 수행하였다.

이중 세트의 데이터로부터 화합물 IC₅₀ 값을 결정하고, 엑셀 및 식 Y=[(a-b)/{1+(X/c)^d}+b 에 대한 적합 데이터 (fitting data) 를 이용하여 이를 계산하였는데, 식 중 a 및 b 는 각각 시험 저해 화합물의 부재하 및 막대한 양의 저해 시험 화합물의 존재하에서의 효소 활성이고, c 는 IC₅₀ 이고, d 는 상기 화합물 반응의 힐 상수 (hill constant) 이다. 상기 IC₅₀ 값은 상기 기술된 시험 조건하에서 효소 활성을 50 % 감소시키는 시험 화합물의 농도이다.

IC₅₀ 값을 포함한 상기한 시험관내 실험의 결과가 하기 표 1 에 나와 있다.

IC₅₀ (μM)- 효소 저해 분석

실시예 31

VEGF 및 FGF-자극된 HUVEC 증식 분석

BrdU 키트 (Roche Biochemicals 1-647-229) 를 사용하는 BrdU 검정으로 본 발명의 시험 화합물의 세포-기반 검정에서의 증식억제 활성을 평가하였다. 인간 제정맥 (umbilical vein) 내피 세포 (endothelial cell) (HUVEC, Clonetics CC-2519) 를 EGM-2 (Clonetics CC-3162) 배지에서 배양하고, 96-웰 평면 바닥 플레이트 (Costar 3595) 에서 EGM-2 (Clonetics CC-3162) 배지 200 ㎕ 부피로 웰당 10,000 세포로 하룻밤 접종하였다. 5 % CO₂ 와 함께 37 ℃ 에서 24 시간동안 배양한 후, 인큐베이션 배지를 흡인으로 서서히 제거하고, 1 ㎖ 당 50 ㎍ 의 겐타마이신 및 1 ㎖ 당 50 ng 의 암포테리신-B (Clonetics CC-4083) 를 함유한 300 ㎕ 의 예비-가온된 EBM-2 (Clonetics CC-3156) 로 각 웰의 내용물을 세척하였다. 이어서, 남아있는 배지를 다시 흡인하고, 웰당 160 ㎕ 의 혈청 부족 배지 (serum starvation media) (1 % 열 불활성화된 FBS (Clonetics CC-4102), 1 ㎖ 당 50 ㎍ 의 겐타마이신 및 1 ㎖ 당 50 ng 의 암포테리신-B (Clonetics CC-4083), 1 ㎖ 당 10 유닛 (unit) 의 Wyeth-Ayerst 헤파린 (NDC0641-0391-25), 및 2 mM L-글루타민 (GIBCO 25030-081) 이 보충된 EBM-2) 으로 대체하였다. 상기 세포들을 24 시간동안 혈청 단식 (serum starving) 시킨 후, 상기 적절한 웰들에, 2.5 % DMSO 를 함유한 혈청 부족 배지 중의 10X 시험 농도의 20 ㎕ 의 시험 화합물을 첨가하였다. 대조군 웰들은 2.5 % DMSO 를 함유한 20 ㎕ 의 혈청 부족 배지를 포함하였다. 플레이트들을 2 시간동안 인큐베이터로 복귀시켰다. 세포들을 상기 시험 화합물과 함께 2 시간동안 예비-인큐베이션한 후, 혈청 부족 배지로 희석된 10X 분석 농도의 20 ㎕ 의 성장인자들, 1 ㎖ 당 50 ng 의 FGF, 또는 1 ㎖ 당 200 ng 의 VEGF (R&D systems 293-VE) 를 첨가하였다. 상기 분석에서 FGF 의 최종 농도는 1 ㎖ 당 50 ng 이었고, 상기 분석에서 VEGF 의 최종 농도는 1 ㎖ 당 20 ng 이었다. 상기 성장인자 부재의 대조군 웰들은 성장인자들을 함유한 것들과 동일한 양의 BSA 를 함유한 혈청 부족 배지를 웰당 20 ㎕ 씩 가졌다. 상기 플레이트들을 추가적인 22 시간동안 상기 인큐베이터로 복귀시켰다.

BrdU ELISA

상기 시험 화합물에 24 시간 노출시킨 후, 혈청 부족 배지로 (1:100) 희석된 BrdU 라벨링 시약을 웰당 20 ㎕ 씩 첨가하여, 세포들을 BrdU (Roche Biochemicals 1-647-229) 로 라벨링시켰다. 그 후, 상기 플레이트들을 인큐베이터로 복귀시켜 4 시간동안 배양하였다. 상기 라벨링 배지를 종이수건 (paper towel) 상으로 배출시켜 상기 배지를 제거하였다. 각 웰에 고정/변성 용액 200 ㎕ 를 첨가하고 실온에서 45 분간 인큐베이션하여 상기 세포를 고정시키고 DNA 변성시켰다. 상기 고정/변성 용액을 종이수건 상으로 배출시키고, 각 웰에 100 ㎕ 의 항-BrdU-POD 를 첨가하고, 웰들을 실온에서 2 시간동안 인큐베이션하였다. 상기 항체 용액을 제거하고, 웰들을 각각 300 ㎕ 의 PBS 로 3 내지 4 회 세척하였다. 100 ㎕ 의 TMB 기질 용액을 각 웰에 첨가하고, 웰들을 실온에서 5 내지 8 분간 인큐베이션하였다. 그 후, 웰당 100 ㎕ 의 1 M 인산을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 플레이트들을 기준 파장 (reference wavelength) 을 650 nm 으로 하여 450 nm 에서 측정하였다. 모든 웰에서 공 (blank, 무세포) 웰의 흡광도를 감하고, 그 후 각 시험 이중물들의 평균 흡광도를 대조군들의 평균으로 나눈 값을 1 에서 감하여 각 시험 화합물에 대한 저해 백분율을 구하였다. 그 후, 최종 생성물을 100 으로 곱하였다 (저해 % = (1 - 시험 화합물의 평균 흡광도/대조군의 평균) 100). IC₅₀ 값은 BrdU 라벨링을 50 % 저해하는 시험 화합물의 농도이고, 이는 세포 증식 저해의 척도이다. IC₅₀ 은 농도 대 저해 백분율의 대수 좌표의 일차 회귀 분석 (linear regression) 으로부터 결정된다. 상기 IC₅₀ 값이 하기 표 2 에 나와있다.

실시예 24

제조 절차:

1. 항목 1, 2 및 3 을 적당한 혼합기에서 15 분간 혼합한다.

2. 단계 1 에서 혼합된 분말을 20 % 포비돈 K30 용액 (항목 4) 으로 과립화한다.

3. 단계 2 로부터의 과립화물을 50 ℃ 에서 건조시킨다.

4. 단계 3 으로부터의 과립화물을 적당한 밀링 (milling) 장치로 통과시킨다.

5. 상기 항목 5 를 단계 4 로부터의 밀링된 과립화물에 첨가하고, 3 분간 혼합한다.

6. 단계 5 로부터의 과립화물을 적당한 압착기로 압착한다.

실시예 25

캡슐 제형화

제조 절차:

1. 항목 1, 2 및 3 을 적당한 혼합기에서 15 분간 혼합한다.

2. 항목 4 및 5 를 첨가하고 3 분간 혼합한다.

3. 적당한 캡슐에 채워 넣는다.

실시예 26

주사 용액/에멀션 제조

제조 절차:

1. 항목 1 을 항목 2 에 용해시킨다.

2. 항목 3, 4 및 5 를 항목 6 에 첨가하고, 분산될 때까지 혼합한 후, 균질화한다.

3. 단계 1 로부터의 용액을 단계 2 로부터의 혼합물에 첨가하고, 상기 분산물이 반투명하게 될 때까지 균질화한다.

4. 0.2 ㎛ 필터를 통과시켜 멸균시키고 바이알에 채운다.

실시예 27

주사 용액/에멀션 제조

제조 절차:

1. 항목 1 을 항목 2 에 용해시킨다.

4. 0.2 ㎛ 필터를 통과시켜 멸균시키고 바이알에 채운다.

본 발명이 특정의 바람직한 구현예들을 참조하여 설명하였지만, 당업계의 숙련된 자들은 본 발명의 일상적인 실험 및 실습을 통하여 변형 및 변경을 가할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명은 상기한 기술에 제한되지 않고, 첨부된 청구항 및 이들의 등가물로 정의되는 것을 의도하였다.

본 발명은 KDR 및 FGFR 의 활성을 선택적으로 저해할 수 있는 신규한 피리미도 화합물에 관한 것이다. 이들 화합물들은 암의 치료 또는 제어, 특히 고형 종양의 치료 또는 제어에 유용하다.

Claims

하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물:

(±)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

(±)-1,3-비스-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

(±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴;

(±)-3-[3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드;

(±)-3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

(±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤조니트릴;

(±)-3-[3-(2-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-메틸-2-옥소-7-페닐아미노-3,4-디 히드로-2H-피리미도[4,5-d]피리미딘-1-일]-벤즈아미드;

(±)-3-(2-클로로-5-메톡시-페닐)-4-메틸-1-페닐-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

1-(2-히드록시-1-(S)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(R)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

1-(2-히드록시-1-(R)-메틸-에틸)-3-(4-메톡시-페닐)-4-(S)-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-1-[1-(S)-페닐-에틸]-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온;

(±)-N-[6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-7-옥소-8-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-일]-N-페닐-아세트아미드; 및

(±)-1-(트랜스-4-히드록시-시클로헥실)-3-(4-메톡시-페닐)-4-메틸-7-페닐아미노-3,4-디히드로-1H-피리미도[4,5-d]피리미딘-2-온.
하기 단계 a) 및 b) 를 포함하는, 화학식 1 의 화합물의 제조 방법:

[화학식 1]

[식 중,

R¹ 은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:

수소,

C₁ _-6 알킬,

C₆ _-10 아릴, OR¹², 또는 CONR¹³R¹⁴ 로 치환된 C₁ _-6 알킬,

C₆ _-10 아릴,

OR¹², CONR¹³R¹⁴, 또는 CN 으로 치환된 C₆ _-10 아릴,

C₃ _-10 시클로알킬, 및

OR¹² 로 치환된 C₃ _-10 시클로알킬;

R², R³ 및 R⁴ 는 하기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고:

수소, 및

할로겐;

R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 하기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고:

수소,

C₁ _-6 알킬,

히드록시 또는 C₁ _-4 알콕시로 치환된 C₁ _-6 알킬,

OR¹⁷, 및

할로겐;

R⁹ 는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:

수소, 및

COR¹⁷;

R¹² 는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:

수소,

C₁ _-6 알킬,

COR¹³,

CONR¹³R¹⁴,

히드록시, C₁ _-4 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₂ _-6 알킬,

C₃ _-8 시클로알킬,

히드록시, C₁ _-4 알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₃ _-8 시클로알킬,

N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클, 및

히드록시, C₁ _-4 알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된, N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클;

R¹³ 및 R¹⁴ 는 독립적으로 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:

수소,

C₁ _-6 알킬,

히드록시, C₁ _-4 알콕시, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₂ _-6 알킬,

C₃ _-8 시클로알킬,

히드록시, C₁ _-4 알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된 C₃ _-8 시클로알킬,

N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클, 및

히드록시, C₁ _-4 알콕시, C₁ _-6 알킬, 또는 NR¹⁵R¹⁶ 으로 치환된, N, O, S, 또는 이들의 조합에서 선택된 헤테로원자를 함유하는 3 내지 10원 고리인 헤테로사이클,

또는, NR¹³R¹⁴ 는 원자수가 3 내지 7 인 고리를 형성할 수 있고, 이때 상기 고리는 N, O, 또는 S 에서 선택되는 하나 이상의 부가 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 하나 이상의 C₁ _-6 알킬, OR¹⁷, COR¹⁷, C0₂R¹⁷, CONR¹⁷R¹⁸, SO₂R¹⁷, 및 SO₂NR¹⁷R¹⁸ 로 이루어진 기로 치환될 수 있고;

R¹⁵ 는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:

수소,

C₁ _-6 알킬,

COR¹⁷, 및

CO₂R¹⁷; 및

R¹⁶, R¹⁷ 및 R¹⁸ 은 하기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고:

수소, 및

C₁ _-6 알킬,

또는, NR¹⁵R¹⁶ 및 NR¹⁷R¹⁸ 은 각각 독립적으로 원자수가 3 내지 7 인 고리를 형 성할 수 있고, 이때 상기 고리는 N, O, 또는 S 에서 선택되는 하나 이상의 부가 헤테로 원자를 포함할 수 있다];

a) 하기 화학식 II 의 화합물

[식 중, R¹, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 은 상기에 정의된 바와 같다] 을 하기 화학식 III 의 아닐린 유도체

[식 중, R², R³ 및 R⁴ 는 상기에 정의된 바와 같다] 와 반응시켜 하기 화학식Ib 의 화합물

[식 중, R⁹ 는 수소이다] 을 수득하는 단계, 및

b) 상기 화학식 Ib 의 화합물을 산 할로겐화물 또는 무수물과 반응시켜 상기 화학식 1 의 화합물 (식 중, R⁹ 는 COR¹⁷ 이고, R¹⁷ 은 상기에 정의된 바와 같다) 을 수득하는 단계.
제 2 항에 있어서, c) 화학식 1 의 화합물을 약학적으로 허용가능한 염으로 전환시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.