KR100414140B1

KR100414140B1 - 건강조성물

Info

Publication number: KR100414140B1
Application number: KR1019960707262A
Authority: KR
Inventors: 나오끼 다께또모; 아끼노부 쓰노오; 히로유끼 이또오
Original assignee: 메이지 데어리즈 코포레이션
Priority date: 1994-06-30
Filing date: 1995-06-29
Publication date: 2004-05-03
Also published as: DE69531782T2; JP3960393B2; EP0768089B1; EP0768089A1; CN1151699A; CN1157221C; DE69531782D1; EP0768089A4; HK1009241A1; US6007813A; US5948404A; WO1996000580A1; KR970703779A

Abstract

본 발명은코디셉스 시넨시스의 배양 균사체의 열수 추출물을 포함하는 건강 조성물이다.

본 발명의 건강 조성물은 우수한 강심 작용, 혈압 강하 작용, 진해 작용 및 피로 방지 효과를 갖는 매우 안전한 경구용 건강 조성물이다.

Description

건강 조성물

영양 생장기 동충하초 (wasps, 식물 균) 는 완전 시대 및 불완전 시대를 모두 진행하는아스코마이코타 (Ascomycota), 피레노마이세타 (Pyrenomycetes), 클라비시피탈레스 (Clavicipitales), 클라비시피타세아 (Clavicipitaceae), 코디셉스 (Cordyceps)에 속하는 미생물이다.

그 자실체는 고대로 부터 불로 장수의 묘약 또는 자양강장의 묘약으로서 평가 받았다. 지금까지 한방약으로서 극히 가치있는 것으로 생각되는 영양 생장기의 동충하초의 자실체는 일반적으로 분말로 투여되었다.

본 발명에 따라서, 특정의 영양 생장기의 동충하초의 균사체를 배양하고, 그 배양된 균사체를 열수로 추출한다. 그러한, 균사체로 부터의 그 결과 생성의 추출물이 강심 작용 및 피로방지 효과를 갖는다는 사실은 지금까지 알려져 있지 않았다.

발명이 해결하려고 하는 과제

본 발명은 우수한 강심 효과, 혈압 강하, 진해 작용 및 피로 방지 효과를 갖는 의약, 또는 그러한 효과를 갖는 식음료의 새로운 개발, 및 그 안전성에 대한 심각한 고려에서 장기간의 투여를 보장할 수 있는 천연 물질을 개발하기 위한 목적으로 만들어졌다.

발명을 해결하기 위한 수단

상기 언급한 목적을 달성하기 위하여, 다양한 조사를 수행하여, 본 발명자들은 한방약 및 영양 생장기의 동충하초, 특별히코디셉스 시넨시스에 특별히 주목하였고, 그것을 더욱 연구하여 그 결과로, 그를 배양하여 얻어지는 균사체, 특별히 그 배양 균사체를 열수로 추출하여 얻어지는 산물이 온화한 강심 효과 및 피로 방지 효과를 갖는다는 것을 발견하였다. 이러한 발견을 기초로 우리는 더 연구를 수행하여, 마침내 본 발명을 달성하였다. 본 발명은 하기에서 자세하게 설명된다.

본 발명은 우수한 약리 및 건강보전효과를 갖는 조성물로, 더욱 분명하게는코디셉스 시넨시스 (Cordyceps sinensis)유래의 의약류 및/또는 식음료류 조성물에 관한 것이다.

도 1 은 쥐의 우심방 근수축력에 대한코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물의 효과를 나타낸다.

도 2 는 쥐의 우심방 수축 간격 시간에 대한코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물의 효과를 나타낸다.

도 3 은코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물이 투여된 쥐의 위선에 형성된 궤양의 궤양 지수(cm) 를 나타낸다.

도 4a 은 쥐의 1차 배양 간세포에서의³H-티미딘의 흡수를 나타내며; 도 4b는 동일한 경우에서의¹⁴C-발린의 흡수를 나타낸다.

도 5 는 쥐에서의코디셉스 시넨시스MF-20008 의 균사체의 열수 추출물의 위산 분비 억제 효과를 나타낸다.

본 발명을 수행하기 위하여,코디셉스 시넨시스의 영양생장기 동충하초의 균사체를 배양하고, 그 배양된 균사체를 모으는 것이 필요하다.코디셉스 시넨시스의 모든 미생물은 본 발명에 사용될 수 있으며, 이러한 것들이 본 발명의 미생물로 인용될 수 있다. 예를 들면코디셉스 시넨시스MF-20008 이 유용한 데, 이 균주는 독립행정법인 산업기술종합연구소 특허생물기탁센터에 FERM BP-5149 로 기탁되었다.

본 발명에 따라,코디셉스 시넨시스의 균사체가 배양된다.

말트 추출물, 효모 추출물, 펩톤, 감자 브로쓰, 글루코스, 비타민, 아미노산, 핵산, 단백질, 및 선택적으로 곤충 등과 같은 숙주 요소를 포함하는 배지에서 액체 또는 고체 배양으로 이들을 배양하면 균사체는 완전히 증식된다.

액체 배양, 특별히 통기를 통한 교반 배양이 대량의 균사체를 배양하기 위하여 바람직하며, 이는 4 내지 7 의 pH, 및 15 내지 32 ℃ 에서, 바람직하게는 20 내지 30 ℃ 에서, 대략 50 내지 500 rpm, 바람직하게는 100 내지 300 rpm 으로 3 내지 10 일동안 배지를 부드럽게 교반하면서 수행한다.

배양 후에, 그 배양된 균사체를 열수로 추출한다. 열수 추출은 균사체에 물을 첨가하고, 필요시 이를 분쇄한 후에 60 내지 100 ℃, 바람직하게는 85 내지 100℃, 더욱 바람직하게는 90 내지 95 ℃ 로 가열하여, 그 열수로 추출하고, 필요시 교반한다. 첨가되는 물의 양은 특별히 제한되지 않지만, 건조 균사체 1 g 당 1 ml 내지 1 리터가 바람직하다.

그 수득된 열수 추출물로부터 잔류 물질을 제거하고, 그 결과의 액체 추출물을 본 발명의 유효 성분으로서 직접, 또는 더 가공한 후 사용한다. 액체 추출물을 가공한 후에 수득되는 산물은 폭넓게는 액체 추출물의 농축 산물, 페이스트 산물, 건조 산물 및/또는 희석 산물이 포함된다. 그 경우, 그로부터 잔류물질을 제거하지 않고 열수 추출물 또는 그의 가공 산물이 식음료로서 직접 사용될 수 있다.

균사체의 열수 추출물 (그 가공 산물 포함)은 온화한 강심 작용, 혈압 강하 작용, 진해 작용 및 피로 방지 효과를 가져, 그를 함유하는 본 발명의 조성물은 이러한 효과를 갖는 식음료, 특정 보건용 식음료, 건강 음료, 건강 식품, 영양 식품 등의 각종의 다른 식음료로 사용될 수 있으며, 또한 강심제, 혈압강하제, 진해제 또는 피로 방지제 등과 같은 의약으로 사용될 수 있다.

식음료류의 조성물의 경우, 열수 추출물의 유효 성분 (또는 그의 가공산물) 은 직접, 또는 일반적인 방법에 의한 다른 식품 또는 식품 성분과의 배합물로 사용될 수 있다. 유효 성분을 함유하는 본 발명의 조성물은 고형(분말, 과립 등), 페이스트, 액체 및 현탁액의 임의의 형태일 수 있으며, 감미제, 산미제, 비타민 및 일반적인 음료용의 다른 각종의 첨가제와 함께 건강 음료로 적절히 제형될 수 있다.

의약류 조성물의 경우, 유효 성분은 각종의 형태로 투여될 수 있다. 그 형태로, 예를 들면 정제, 캡슐, 과립, 분말, 시립 등을 포함하는 각종의 경구용 조성물이 언급될 수 있다. 이러한 각종의 제형은 의약을 제형하는 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 공지된 보조 첨가제, 예를 들면 부형제, 결합제, 붕괴제, 윤활제, 향미제, 용해 보조제, 현탁제, 도포제 등을 사용하는 일반적인 방법으로 제형될 수 있다. 투여되는 유효 성분의 투여량은 투여할 대상의 조건, 연령 및 중량뿐만 아니라 투여 경로 및 제형의 형태에 따라 달라지지만, 그러나 일반적으로 1 회 0.1 mg/성인 내지 1,000 mg/성인 이다.

본 발명의 유효 성분은 오랫동안 한방약으로서 사용되었던 천연 원료로부터 유래되며, 이는 완전히 비독성, 또는 아주 미약한 독성이다. 그러므로, 이것은 안전하다. 쥐에 대하여 500 mg/일 의 투여량으로 경구 투여시 어떠한 급성 독성도 초래하지 않았다. 그러므로, 식음료류 조성물에 존재하는 유효 성분의 양은 임의의 질환 예방 용도, 건강 보존 및 일반적인 용도의 경우 특별히 제한되지 않는다. 의약의 경우, 그 유효 성분의 양은 환자에 따라 상기 언급된 범위내에서 결정될 수 있다. 본 발명의 유효 성분은 다량으로 섭취되었을 때 조차도 독성을 나타내지 않기 때문에 투여되는 투여량은 소망된다면, 아무런 문제 없이 상기 언급된 범위를 넘을 수 있다.

이하 본 발명은 하기 제조예 및 실시예를 사용하여 자세히 설명된다.

제조예

1 리터의 M20Y2 배지 (1 리터에 20 g 의 말트 추출물 (옥소이드) 및 2 g 의 효모 추출물 (딥코) 를 함유하며, pH 는 5.5) 를 3 리터의 엘렌마이어 플라스크 46 개 각각에 붓고, 오토클레이브에서 121 ℃ 로 15 분 동안 멸균한다.

M20Y2 한천 슬랜트 배지에서 예비 배양한코디셉스 시넨시스MF-20008(Sanming Mycological Institute, Fujian, 중국으로부터 수득) FERM BP-5149 균사체의 백금 루프를 각각의 멸균된 배지에 접종하고, 25 ℃에서 180 rpm으로 5 일동안 진탕 배양하였다. 그렇게 해서 46 리터의 배양물이 이러한 46 플라스크에서 얻어졌다.

46 리터의 배양물을 원심분리하여 균사체를 분리하고, 동결 건조하여 323.6 g 의 건조 균사체를 얻었다. 건조 균사체를 스테인레스 용기에 담고, 7 리터의 물을 첨가하고, 이를 폴리토론으로 분쇄하고, 90 내지 95 ℃ 로 2 시간 동안 교반하면서 가열 추출한다. 추출 후, 여과에 의하여 잔류 물질을 제거하고, 그 결과의 여과물을 동결 건조하여 130 g 의 담황색의 분말을 수득하였다.

제조예 2

제조예 1 에서와 동일한 방법으로, 150 ml 의 M20Y2 배지를 500 ml 의 엘렌마이어 플라스크에 붓고 오토클레이브로 멸균하고, 1 ml 의 동결 건조된코디셉스 시넨시스MF-20008 을 접종하여 25 ℃ 에서 180 rpm 으로 5 일동안 진탕 배양한다. 이를 종자 배양물로 사용하여 하기 언급되는 방법으로 150 리터의 하기 배지에서 배양한다.

150 리터의 D 배지 (1 리터에 40.0 g 의 수크로스, 4.0 g 의 K₂HPO₄, 0.5 g 의 아스파라긴, 2.0 g 의 (NH₄)₂HPO₄, 2.0 g 의 MgSO₄· 7H₂O, 0.25 g 의 CaCO₃, 0.1 g 의 CaCl₂및 4.0 g 의 효모 추출물 B-2 를 함유하며, pH 는 5.6) 를 멸균하고, 여과한 후에, 150 리터의 발효기에 붓고, 150 ml 의 상기 언급한 종자 배양물을 거기에 접종하여 25 ℃, pH 5.5 및 50 % DO 의 조절된 조건에서 157 rpm 으로 교반하면서, 3 일 동안 배양한다. 실리콘 소포제를 발효기에 첨가하여, 배양시 형성된 거품을 제거한다. 그렇게 수득된 150 리터의 배양물을 정화기를 사용하여 처리하여 균사체를 분리한다. 그렇게 균사체의 수성의 현탁액을 수득한다. 이것을 90 내지 95 ℃ 로 2 시간 동안 가열하여 추출한다. 그런 후, 정화기를 사용하여 상층액을 분리한다. 이것을 0.45 ㎛ 및 0.22 ㎛ 의 멸균 필터를 통하여 여과하여 80 리터의 담황색의 열수 추출물을 수득한다. (고형 함량의 건조 중량 : 800 g).

실시예 1

제조예 1 에서 제조된코디셉스 시넨시스MF-20008 의 배양 균사체 (건조 균사체) 및 그의 열수 추출물 (담황색 분말) 이 경구 투여된 생쥐를 사용하여 수영 피로도 실험을 수행하였다.

실험 동물은 수컷 ICR 생쥐 (5 내지 7 주령) 이며, 이를 3 군으로 하여 하기 언급된 조건에서 피로도 실험을 수행하였다.

투여 :

코디셉스 시넨시스MF-20008 의 균사체의 열수 추출물 또는 그 균사체 자체를 각각 2.5 % 또는 5 % 의 비율로 분말성 CRF-1 먹이와 혼합하고, 그 결과의 분말 먹이 혼합물을 16 일동안 내내 쥐에 투여하였다.

생쥐 군 : 각각의 군은 20 마리의 생쥐로 이루어진다.

(1) 대조군 : 분말성 CRF-1 먹이만 섭식

(2) 열수 추출물 투여군 : 2.5 % 의 열수 추출물을 함유하는 먹이 혼합물 섭식.

(3) 균사체 투여군 : 5 % 의 건조 균사체를 함유하는 먹이 혼합물 섭식.

실험 일정 :

투여를 시작한지 15 일째에, 생쥐로 강제 수영 실험을 수행하였다. 16 일 째에 각각의 생쥐로부터 혈액 모두를 모아 전체 혈액 분석 및 혈청 분석을 수행하였다.

(1) 수영 피로 실험은 다음과 같다 : 36 리터의 수영 탱크 (49 cm x 33.5 cm x 22 cm (깊이))에 17 ℃ 의 물을 채우고, 10 ml 의 중성 세정제를 거기에 첨가한다. 생쥐를 아무런 부하 없이 탱크에서 강제로 수영을 하게 하고, 생쥐의 코가 5 초간 물속으로 가라앉은 시점에서 각각의 생쥐에서의 수영 실험을 중지하였다. 얻어진 결과는 하기 표 1 에 나타난다.

상기 언급된 결과는 아스핀 웰히 유의도 검정에 의하여 분석하였다. 유의도 검정 수준이 1 % 일 때, 제 1 군과 2 군 사이의 유의도 차이가 없는 것으로 인정하였다. 그러나, 제 1 군과 3 군의 경우는 유의도 수준이 5% 일 때 유의도 차가 없는 것으로 인정하였다.

수영 피로도 실험은 일반적으로 실험 동물의 전체 반응에 대한 변화를 기준으로 한 실험 물질의 피로 방지 효과를 평가하는 목적에 사용되는 실험이다. 그러므로, 상기 언급된 결과는 본 발명의 유효 성분이 운동 능력의 유지 및 우수한 피로 방지 효과를 증가시키는데 매우 효과적이라는 것을 과학적으로 확인하는 것이다.

(2) 투여 시작 후 16 일 째에, 상기 언급된 수영 피로도 실험을 수행한 생쥐로부터 전체 혈액을 모아, 혈소판의 수 (x 10,000/㎣), 헤모글로빈의 양 (g/dl), 적혈구의 수 (x 10,000/㎣), 백혈구의 수 (/㎣), 및 적혈구 용적 (%) 의 면에서 분석하였다.

전체 혈액 분석의 결과는 하기 표 2 에 나타난다. 이러한 결과로 분명해지는 것처럼, 실험의 유의도 수준이 5 % 일 때, 모든 실험 항목에서 실험군과 대조군 사이에서의 유의도 차이는 없는 것으로 인정되었다 (전체 혈액을 분석하기 위하여, 스튜던트 t-검정을 수행하였다. 그러나, 제 3 군에서의 혈소판의 수를 측정하기 위하여 아스핀 웰히 검정을 사용하였다.)

(3) 각 실험 생쥐의 체중을 실험 기간 동안 측정하고, 실험 쥐의 평균 체중 (g) 의 변화를 하기 표 3 에 나타내었다(강제 수영 실험에 의해 실험된 생쥐의 체중 변화).

실시예 2

제조예 1 에서 제조된코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물을 쓰노오 등의 방법 (참조, Kurokawa M. and Tsunoo A., J. Physiol., 407, 135-153, 1988; Tsunoo A. et al., J. Physiol., 433, 163-181, 1991) 에 따라, SD 쥐로부터 적출된 우심방, 우심실 유두근, 대동맥, 기관지에 대한 그의 효과를 실험하고, 그 추출물의 효과를 평가하였다.

(1) 심근 표본 :

수컷의 SD 쥐 심근의 표본에 열수 추출물을 적용하여, 우심방 심근의 수축력 및 그의 수축 간격 시간을 측정하였다.

수컷 SD 쥐 (380 g 내지 450 g)로부터 박동원을 적용하면서 우심방을 적출하였다. 우심방의 표본을 0.8 ml 부피의 수평의 관류 용기에 고정하고, 그 수축력을 등척성으로 기록하였다. 관류액으로서, 95 % 산소 및 5 % 이산화탄소로 평형된 크렙스 용액, 또는 140 mM 의 염화나트륨, 5 mM 의 염화칼륨, 2.6 mM의 염화칼슘, 1.3 mM의 염화마그네슘, 10 mM 의 글루코스 및 5 mM 의 HEPES 를 함유하는 통기된염 용액을 사용한다. 관류액은 36 내지 37 ℃ 및 3 내지 4 ml/분 의 유동 속도를 유지한다.

그 결과로, 균사체의 열수 추출물 (50 내지 100 ㎍/ml) 은 대조군에 비하여 우심방의 심근 수축력을 9±3%(평균 ± 표준 편차, n = 5) 증가시킨다. 박동원에 의한 자연적인 수축 간격 시간은 대조군에 비하여 14 ± 10 % 연장된다(n = 4). 도 1 및 도 2 는 각각 시간에 따라 증가되는 우심방 심근의 수축력 및 수축 간격 시간의 시간에 따른 지연을 나타낸다.

도 1 및 도 2 에서, 두꺼운 실선으로 나타나는 시간 동안 실험계에 추출 용액 (60 ㎍/ml) 을 적용한다. 수직 축은 대조군의 표준 값 (추출 용액 투여 전) 1에 대한 수축력의 상대값을 가리킨다. 가로 축에서 0 은 추출 용액을 실험계에 적용한 시간을 의미하며, - 값은 적용전의 시간을 의미한다.

상기로부터 분명히, 우심방의 자연 수축에 대한 열수 추출물의 효과가 설명된 자료에 의하여 확인된다. 덧붙여서, 우심실의 유두근을 쥐로부터 적출하고, 상기와 동일한 방법으로 관류 용기에 고정하고, 백금 와이어를 통하여 전기 자극(2 Hz) 을 주고, 자연적인 수축이 아닌 전기 자극에 의하여 유도되는 우심실의 유두근의 수축에 대한 추출물의 효과를 조사한다. 그 결과로, 추출물 (30 내지 100 ㎍/ml) 은 전기 자극에 의하여 야기되는 우심실의 유두근의 장력을 대조군에 비하여 13±1%(n = 3)로 증가시킨다.

(2) 대동맥 표본

수컷 SD 쥐의 대동맥의 표본에 열수 추출물을 적용하여, 대동맥에 대한 열수추출물의 효과, 및 50 mM 의 칼륨에 의하여 야기되는 대동맥의 수축 유지를 억제하는 효과를 조사하였다.

수컷 SD 쥐로부터 대동맥을 적출하고, 나선상 단면 표본을 제조한다. 그 표본을 상기와 동일한 조건에서 관류 용기에 고정한다. 표본을 자극하기 위하여 사용되는 50 mM 의 칼륨 용액을 용기에서 염화나트륨 대신에 염화칼륨으로 대체하여 제조한다.

그 결과로, 균사체의 열수 추출물 (50 내지 100 ㎍/ml) 은 안정된 조건의 대동맥에 대하여 유의한 효과를 나타내지 않았다. 그러나, 이것은 50 mM 칼륨에 의하여 야기되는 대동맥의 수축 유지를 완화시켰다. 50 mM 칼륨에 의하여 야기되는 대동맥의 수축 장력을 100 % 로 간주하였을 때, 추출물은 2 내지 12 % (n = 5) 장력을 감소시켰다.

(3) 기관지 표본

수컷 SD 쥐의 기관지의 표본에 열수 추출물을 적용하여, 전기 자극 또는 50 mM 칼륨에 의하여 야기되는 기관지 수축의 억제에 대한 추출물의 효과를 조사하였다.

수컷 SD 쥐로부터 기관지를 적출하고, 나선상 표본을 제조한다. 그 표본을 상기와 동일한 조건에서 관류 용기에 고정한다. 표본을 자극하기 위하여 사용되는 50 mM 칼륨 용액을 상기와 동일한 방법으로 제조한다. 전기 자극을 관류 용기의 백금 와이어 세트를 통하여 30 초 간격으로 표본에 적용한다.

그 결과로, 균사체의 열수 추출물 (50 내지 100 ㎍/ml) 은 전기 자극에 의하여 야기되는 일시적인 기관지의 수축을 대조군에 비하여 23 내지 65 %(n = 3) 억제한다. 이것은 또한 50 mM 칼륨에 의하여 야기되는 기관지의 수축 유지를 완화한다. 50 mM 칼륨에 의하여 야기되는 기관지의 수축 장력을 100 % 로 간주하였을 때, 그 추출물은 9 내지 13 % (n = 3) 로 장력을 감소시킨다. 이것은 테오필린 (50 μM) 의 완화 효과 이상이다.

상기 언급된 (1) 내지 (3) 의 결과로부터 분명해지는 것은 균사체의 열수 추출물이 ① 심근의 수축력 유지를 촉진하고, 심근의 수축 간격 시간을 연장하는 온화한 효과를 가지며, ② 전신 혈액 흐름을 증가시키면서, 혈관 확장 작용을 가지며, ③ 추출물이 일시적인 기관지의 수축 유지를 억제하기 때문에, 기도 저항을 저하시키고, 폐 호흡을 증가시킨다고 믿게 되었다. 따라서, 이러한 과학적 자료로부터, 본 발명의 조성물이 강심 효과, 혈압 강하 효과 및 진해 작용을 갖는 것을 확인하였다.

실시예 3

추출물의 스트레스 방지 효과를 조사하기 위하여, 제조예 1 에서 제조한코디셉스 시넨시스MF-20008 의 균사체의 열수 추출물을 사용하여, 쥐를 사용한 수 침지, 구속 스트레스 궤양 실험을 수행하였다.

실험 동물 :

5 주령, 수컷의 스프라그 다웰리 쥐를 일본 챨스 리버로부터 구입하여, 약 1 주간 예비 사육 하였다. 그 사육된 6 주령의 쥐를 실험 동물로 사용하였다.

투여 :

코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물을 주사제용으로 50 mg/ml 의 농도로 증류수에 용해하고, 이를 각각 1 일 투여량으로 여러 부분으로 나누었다. 이것을 얼려, -20 ℃ 로 보관하였다. 사용전에, 실온에서 녹인다. 대조군의 쥐에는 주사제용 증류수만 투여한다. 추출물 또는 증류수 용액을 쥐용 금속 위 탐식기를 사용하여 쥐에 경구 투여한다. 유효 성분의 투여량, 용액 (또는 증류수) 의 투여량 및 투여 일정은 하기 표 4 에 나타난다. 용액 (또는 증류수) 의 투여량은 각각의 쥐의 최근의 체중을 기준으로 계산하고, 원칙적으로 오전 9 내지 12 시에 투여를 수행한다.

(1) 4 ml/kg/일 의 주사용 증류수를 대조군의 각각의 쥐에 투여하였다.

(2) 투여가 시작된 날을 0 으로 간주하였다.

수 침치, 구속 스트레스, 궤양 실험 (스트레스를 10 내지 11 일 동안 밤새 적용하였다.) :

수 침지, 구속 스트레스 실험 적용 약 12 시간 전에, 섭식을 중지하였다. 이후, 이 쥐들을 스트레스 게이지에 두고, 그 검상 돌기 방법으로 물에 침지한다. 수 침지 구속시간은 15 시간이다. 스트레스의 적용 후에, 쥐를 마취하여 죽이고, 위의 분문부 상부와 십이지장부를 결찰하여, 위를 적출한다. 생리 식염수를 위에 주입하고, 위를 포르말린 용액에 침지한다. 15 분 후에, 위를 개방하고, 위선에 형성된 궤양의 길이를 측정한다. 측정 후, 위를 포르말린으로 고정하고, 병리 해부학적 고찰을 수행하고, 형성된 궤양을 하기 기준에 따라 평가한다.

0 : 궤양이 생성되지 않음.

1 : 점막 상부에 궤양 생성.

2 : 점막 고유층에 궤양 생성.

3 : 점막 근판에 궤양 생성.

4 : 위의 장막에 궤양 생성.

그 결과는 도 3 및 표 5 에 나타난다.

실시예 4

코디셉스 시넨시스의 배양 균사체의 열수 추출물의 피로 방지 효과의 한 지수로서, 쥐의 1 차 배양 간 세포에서 DNA 합성 및 단백질 합성의 촉진에 대한 추출물의 활성을 조사하였다.

소태아 소장 상피 점막 유래의 간세포 생장 인자를 함유하는 추출물의 제조 및 그 추출물의 특성 :

소태아 소장 상피 점막의 메탄올 가용성 추출물은 기본적으로, 겔 투과 크로마토그래피로 측정된 저분자 물질로 이루어지며, 그는 저분자량 분획(LMW) 으로 간주한다. 한편, 소 태아 소장 상피점막을 메탄올로 추출하고, 그 결과의 잔류물을 PBS로 더 추출하여 수득되는 추출물은 기본적으로 단백질성 고분자량 물질로 이루어지며, 이는 고분자량 분획 (HMW)으로 간주된다.

LMW 가 쥐의 1 차 배양 간세포에 첨가될 때, 세포에서 인슐린의 존재하에서 DNA 및 단백질 합성을 촉진한다. LMW 및 HMW 의 배합물이 거기에 첨가될 때, DNA 및 단백질 합성은 HMW 의 기본 활성에 비하여, 부가적으로 가속된다. 즉, LMW 는 이러한 분석계에서 필수 활성을 나타내며, HMW 는 부가적인 활성을 갖는다.코디셉스 시넨시스의 열수 추출물은 추출방법을 기준으로 하는 저분자량 분획을 포함한다. 그 추출물을 1 % HMW 및 1 x 10^-7M 의 인슐린의 존재하에서, 쥐의 1차 배양 간세포에 첨가하고, 이러한 세포에서 DNA 및 단백질 합성의 촉진 효과를 세포내³H-티미딘 및¹⁴C-발린의 흡수를 근거로 하여 조사한다.

결과 :

코디셉스 시넨시스균사체의 열수 추출물을 인슐린 및 HMW 의 존재하에서 쥐의 1 차 배양 간세포에 첨가하였을 때, 세포내 DNA 및 단백질의 합성은 분명히 촉진되었다. 그 결과는 도 4a 내지 도 4b 에서 나타난다. 그러나, 인슐린 및 HMW 의 부재하에서는 추출물의 어떠한 유의한 활성도 감지되지 않았다. 인슐린만 존재할 때에도 추출물의 활성은 또한 감지되지 않았다. 이로 부터, 추출물은 인슐린 및 HMW 의 존재하에서 세포에서의 DNA 및 단백질 합성을 촉진한다고 생각된다.

실시예 5

제조예 1 에서 제조된코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물을 쥐에 투여하고, 쥐에서의 위산 분비의 지연에 대한 추출물의 효과를 조사하였다.

이러한 실험에서, 건강한 수컷의 SD 쥐 (일본 챠알스 리버 사) 를 사용하였고, 5 주된 쥐를 구입하여 4 일동안 예비 사육하여 실험에 사용하였다.

쥐를 각각 4 마리로 하여 두 군, 실험군과 대조군으로 나눈다. 실험군의 쥐에코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물을 투여한다.

코디셉스 시넨시스MF-20008 균사체의 열수 추출물을 100 mg/ml 의 농도로 정제수 (롯트 번호 YLE9566, 와꼬 퓨어 케미칼사) 에 용해하여, 쥐에 투여할 실험 재료를 제조하고, 이를 얼려 보관한다.

지정된 농도의 실험 재료 및 정제수를 금속의 위 탐식기를 통하여 매일 오전 9 시에 경구적으로 쥐에 투여한다. 12 일 째, 유문을 결찰한 후에 십이지장에 그를주입한다.

위산 즙의 분비는 하기 기재된 방법에 따라 측정하였다.

17 시간 동안 쥐의 섭식을 중지하였다. 이후, 그를 마취하고, 복부를 개방하여, 유문부를 결찰하였다. 4 시간 후에, 그 쥐를 경추이탈로 도살하고, 그 위를 적출하여 그 잔류 위즙을 모은다. 그 수득된 위 즙을 5 분 동안 3,000 rpm 으로 원심분리한다. 위 즙의 부피 (ml/쥐), 위즙의 산도 (mEq/리터) 및 그의 pH 를 측정한다. 그 산도는 0.01 N NaOH 를 사용하여 pH 7.0 으로 적정한다. 측정된 위 즙의 부피 및 그 산도로부터, 시간당 방출된 산의 양 (μEq/시간) 을 계산한다. 유문을 결찰한 뒤 즉시 실험물질을 십이지장에 주입한다.

그 결과는 도 5 에 나타난다.

실시예 6

제조예 1 에서 수득한 열수 추출물의 100 g 의 분말, 150 g 의 사카리드, 15 g 의 꿀, 1 g 의 아스코르브산, 0.5 g 의 시트르산 및 적당한 양의 방향제에 물을 첨가하여 전체를 1 kg 으로 만든다. 이를 95 ℃ 에서 20 분간 멸균하고, 각각 무균 조건하에서 100 ml 씩 병에 채운다. 그렇게, 식음료류 건강 음료를 제조한다.

실시예 7

제조예 1 에서 수득한 열수 추출물 분말의 20 % 수용액 200 g, 5 g 의 토코페롤 아세테이트, 10 g 의 티아민 니트레이트, 20 g 의 니코틴산 아미드, 50 g 의 무수 카페인 및 적당한 양의 벤조에이트 및 방향제에 탈이온수를 첨가하여, 전체 30 리터로 만든다. 멸균 후, 각각 무균 조건하에서 30 ml 씩 병에 채운다. 그렇게, 의약류 건강 음료를 제조한다.

실시예 8

(1) 제조예 1 에서 제조한 물질 50 g

(2) 락토스 90 g

(3) 옥수수 전분 29 g

(4) 스테아르산 마그네슘 1 g

(1), (2) 및 (3) (17 g) 을 혼합하고, (3) 으로부터 생성된 페이스트 (7 g)와 함께 과립화한다. (3) (5 g) 및 (4) 를 그 수득된 과립에 첨가하고, 잘 혼합한 뒤, 그 결과의 혼합물을 압착 정제기를 사용하여 가압하에서 정제화하여, 각각 50 mg 의 유효 성분 (1) 을 함유하는 1000 개의 정제를 수득한다.

본 발명에 따라, 극히 안정하고, 온화한 강심 작용, 혈압 강하 작용, 진해 작용 및 피로 방지 효과를 갖는 천연 물질 유래의 조성물이 제공된다. 천연 물질 유래이긴 하지만, 안정적이고, 공업적으로 배양에 의해 조성물을 제공하는 것이 가능하다.

규칙 13-2 에 의한 기탁 미생물에 관한 언급

1. MF-20008

a. 본 미생물의 기탁 기관명 및 주소

명칭 : 일본 독립행정법인 산업기술종합연구소 특허생물기탁센터

주소 : 일본 이바라끼껭 쓰꾸바시 히가시 1쵸메 1방 1고 AIST 쓰꾸바 센트랄 6 (우편번호: 305-8566)

b. 기탁 기관에 기탁한 날짜 :

1994 년 6 월 29 일

c. 기관에 의해 부여받은 기탁 번호 :

FERM BP-5149

Claims

(1) 코디셉스 시넨시스 (Cordyceps sinensis) MF-20008 (FERM BP-5149) 의 균사체를 pH 4∼7 에서 및 15∼32 ℃ 의 온도에서 3∼10 일간 배양하는 단계; 및

(2) 상기 배양 균사체를 60∼100 ℃ 의 온도에서 열수 추출하는 단계를 포함하는 추출물의 제조 방법.
제 1 항에 있어서, 단계 (2) 에서의 온도가 85∼100 ℃ 인 방법.
(1) 코디셉스 시넨시스 (Cordyceps sinensis) MF-20008 (FERM BP-5149) 의 균사체를 pH 4∼7 에서 및 15∼32 ℃ 의 온도에서 3∼10 일간 배양하는 단계;

(2) 상기 배양 균사체를 60∼100 ℃ 의 온도에서 열수 추출하는 단계; 및

(3) 단계 (2) 에서 수득한 추출물에서 생성 추출 잔류물을 제거하는 단계를 포함하는 추출물의 제조 방법.
제 3 항에 있어서, 단계 (2) 에서의 온도가 85∼100 ℃ 인 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 따른 방법에 의해서 제조되는 추출물.
제 3 항 또는 제 4 항에 따른 방법에 의해서 제조되는 추출물.
제 1 항 또는 제 2 항에 따른 방법에 의해서 제조되는 추출물을 포함하는, 강심, 혈압 강하, 진해 또는 항궤양 활성을 갖는 의약.
제 3 항 또는 제 4 항에 따른 방법에 의해서 제조되는 추출물을 포함하는, 강심, 혈압 강하, 진해 또는 항궤양 활성을 갖는 의약.
제 1 항 또는 제 2 항에 따른 방법에 의해서 제조되는 추출물을 포함하는, 강심, 혈압 강하, 진해 또는 항궤양 활성을 갖는 식품.
제 3 항 또는 제 4 항에 따른 방법에 의해서 제조되는 추출물을 포함하는, 강심, 혈압 강하, 진해 또는 항궤양 활성을 갖는 식품.