CN110859250A

CN110859250A - 南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂

Info

Publication number: CN110859250A
Application number: CN201911297518.5A
Authority: CN
Inventors: 胡庭俊; 朱萌; 谢小东; 韦英益; 施君
Original assignee: Guangxi University
Current assignee: Guangxi University
Priority date: 2019-12-17
Filing date: 2019-12-17
Publication date: 2020-03-06

Abstract

本发明公开了一种南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂，由螺旋藻水提醇沉提取物与辅料混合而成。试验证明，对南美白对虾投喂含本发明的螺旋藻提取物饲料预混剂以后，可有效提高对虾机体免疫力和抗应激能力，此外，该产品来源于纯天然药物，具有低残留、低耐药、无毒副作用、作用效果良好等优点。

Description

南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂

技术领域

本发明属于水产养殖饲料技术领域，尤其涉及一种南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂。

背景技术

南美白对虾是目前世界上三大养殖对虾中单产量最高的优良品种，也是世界上最重要的经济虾类之一，其肉质鲜美，营养丰富，具有很高的经济价值。自20世纪90年代开始，南美白对虾逐渐成为我国最重要的对虾养殖品种，其养殖量占我国对虾养殖量的70％以上。

实际生产过程中，由于养殖密度较大、饵料投放不合理等因素，非常容易导致水体氨氮浓度升高。氨氮是养殖水体中最主要的危害因子之一，以NH₃和NH₄ ⁺两种形式存在，其中NH₃是主要的毒性物质。南美白对虾长期生活在含NH₃量超标的水体中，体内氮废物的排泄会发生障碍。如若NH₃从水中渗入组织液内，会造成对虾血氨升高，甚至中毒，从而带来一系列负面效应。南美白对虾在遭受不同水平的氨氮应激后，体内酚氧化酶(PO)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等的活性明显降低，即会造成对虾免疫力下降，并减弱其对副溶血弧菌的抵抗能力，增加了对虾患弧菌病的风险。

随着南美白对虾养殖规模的扩大，对其病害的防治和抗应激能力的研究也日益引起人们的重视。对虾是以非特异性免疫反应为主,抗微生物因子主要是血淋巴中的各种酶,目前，抗应激的有效措施之一是增强对虾自身的免疫力，提高其抵抗能力，因此调动或激活虾自身的免疫系统，提高虾的防御能力则是防治病害的关键之一，内服免疫增强剂则是增强对虾非特异性免疫力和抗应激能力较为有效的方法。

螺旋藻含有丰富的氨基酸、维生素、矿物质及多种生物活性物质，具有高效的药用价值和极大的研究开发前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种纯天然提取、低残留、低耐药、无毒副作用、作用效果良好的，能提高南美白对虾免疫力，并具有抗应激能力的南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂，由螺旋藻水提醇沉提取物与辅料混合制备而成。

上述南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂，由以下重量份的原料和辅料制成：螺旋藻提取物2～4份、二氧化硅1～3份。

上述南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂的制备方法，按照配方称取螺旋藻提取物、水溶性二氧化硅，混匀，加适当乙醇溶解，烘干，粉碎。

螺旋藻提取物采用酶解辅助水提法提取，再采用沸水浴的方法将其浓缩，醇沉。

酶解辅助水提法提取按以下操作进行：将螺旋藻粉碎(50目)，按质量体积比1:15加入蒸馏水，按螺旋藻干粉质量5％加入木瓜蛋白酶，充分混匀，52℃～60℃水浴1h后，100℃水浴0.5h～1.5h，再80℃水浴2～4h；8层纱网(200目)过滤，将上清液沸水浴浓缩到密度为1.2-1.3g/mL，加入5倍量的95％食品级乙醇，混匀，4℃静置24h；3000r/min离心20min，收集螺旋藻提取物沉淀备用。

上述南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂的使用方法，螺旋藻提取物饲料预混剂与基础饲料按1～4g/kg饲料拌入基础饲料中。

针对南美白对虾用免疫增强剂缺乏安全有效药物的问题，发明人研制了一种南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂，由螺旋藻水提醇沉提取物与辅料混合制做而成。该产品呈粉状，非常便于使用，且由于辅料的添加，工艺的优化，可以有效的解决多糖等有效成分在生产过程中不易冷冻干燥，设备要求高等特点，减少生产过程中不必要的消耗，降低生产门槛。

且由于螺旋藻含丰富的蛋白质和多种维生素，还含有丰富的矿物质和微量元素、叶绿素、叶黄素、类胰岛素、γ-亚麻酸等不饱和脂肪酸，以及藻蓝蛋白、免疫多糖、肌醇、甘露、葡萄糖、核酸、半乳糖、褐藻胶、藻多糖、活性小肽和酶等特殊生物活性物质，具有调节免疫系统、抗辐射、抗病毒、抗炎、抗菌、抑制肿瘤细胞生长与复制、抗氧化等作用。而采用本发明的制备方法，能有效保留活性物质和有效成分。试验证明，对南美白对虾投喂含本发明的螺旋藻提取物饲料预混剂，可有效提高对虾机体免疫力和抗应激能力，此外，该产品来源于纯天然药物，具有低残留、低耐药、无毒副作用、作用效果良好等优点。

具体实施方式

实施例1南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂的制备

表1南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂配方

参考表1制备配方一至五的免疫增强剂，按照配方称螺旋藻提取物、水溶性二氧化硅(上海凯茵化工有限公司、10kg/包、A200)，混匀，可加适当乙醇溶解，烘干，粉碎，过5号筛，分装密封备用。

其中，螺旋藻提取物按照以下方式提取：

将螺旋藻粉碎(50目)，按质量体积比1:15加入蒸馏水，按螺旋藻干粉质量5％加入木瓜蛋白酶，充分混匀，52℃～60℃水浴1h后，100℃水浴0.5h～1.5h，再80℃水浴2～4h；8层纱网(200目)过滤，将上清液沸水浴浓缩到密度为1.2-1.3g/mL，加入5倍量的95％食品级乙醇，混匀，4℃静置24h；3000r/min离心20min，收集螺旋藻提取物沉淀备用。

实施例2螺旋藻提取物饲料预混剂对南美白对虾免疫调节作用的研究

1材料与方法

1.1试验药物

螺旋藻提取物饲料预混剂，由广西大学动物科学技术学院药理实验室按前述实施例1制备。将基础饲料经粉碎后按试验分组剂量配比加入不同剂量的螺旋藻提取物干粉制成颗粒状饲料预混剂，备用。

黄芪多糖，由北京生泰尔生物技术有限公司馈赠。将基础饲料经粉碎后按剂量配比加入黄芪多糖制成颗粒状饲料预混剂，备用。

1.2试验动物

本试验所使用的南美白对虾由广西钦州虾苗养殖基地提供，平均体长8.00±1.00cm，健康状况良好。将试验虾饲养于塑料箱内，试验前适应性养殖一周，期间全部投喂对虾基础饲料。

1.3试验试剂

SOD、PO、ACP、AKP、GOT试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.4试验分组

将试验虾随机分为5个组，即螺旋藻提取物高剂量组(4.0g/kg)、中剂量组(2.0g/kg)、低剂量组(1.0g/kg)、黄芪多糖阳性对照组(2.0g/kg)、空白对照组,空白对照组投喂基础饲料。每组设3个重复，每个重复放50尾虾苗。试验期间24小时不间断通气，每天7:00、12:00、18:00、23：00投喂饲料，每两天换1次水，换水量为1/3，试验喂养28d。

1.5样品采集

试验的第7天、14天、21天、28天,每组随机抽取对虾10尾,用2ml注射器从对虾头胸甲后缘与第一腹节的连接处取血淋巴液,血淋巴液置于加入0.2mL抗凝剂的Ep管中,在4℃冷藏，使用冷冻离心机3000r/min离心10min,取上清液作为待测血清。

1.6免疫相关酶活力的测定

测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、酚氧化酶(PO)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性、碱性磷酸酶(AKP)活性、谷草转氨酶(GOT)活性等指标。

1.7氨应激试验及样品采集

生长实验结束24h后，每组剩余的虾进行氨应激实验。分为3个试验药物组(螺旋藻提取物剂量分别为4.0g/kg、2.0g/kg、1.0g/kg)、黄芪多糖阳性对照组(2.0g/kg)、氨应激阳性对照组(投喂基础饲料)、空白对照组(投喂基础饲料且不进行氨应激)，每组3个重复。每个箱子里放入22cm高的海水，保持充气维持溶氧，试验期间，盐度5‰，水温28℃，氨氮浓度设计为100mg·L^-1，用氯化铵NH₄CL(分析纯)调节氨氮浓度，每24h换一次水，重新调配氨氮浓度，试验持续72h。每天记录每个组虾的死亡情况，计算72h内累积死亡率。72h后随机从每个重复里抽取对虾4尾，采集血淋巴和肝胰腺。

1.8数据处理

利用spss21.0对测得数据进行分析，试验结果以平均数±标准差(Mean±SD)表示，经单因素方差分析(One-Way ANOVA)后，进行多重比较，当p<0.05时表示数据间差异显著，p<0.01时表示差异极显著。

2实验结果

2.1螺旋藻提取物饲料预混剂对南美白对虾血淋巴液中免疫相关酶活力的影响

由表1可知，在连续28天饲喂螺旋藻提取物饲料预混剂后血淋巴中各免疫指标均有上升趋势，其中第7天，中剂量组的ACP、AKP和低剂量组的ACP、PO酶活性极显著高于空白对照组(P<0.01)；第14天，低剂量组的ACP，中剂量组的AKP极显著高于空白对照组(P<0.01)；在喂药后第21天，各组ACP含量极显著高于空白对照组(P<0.01)，中剂量AKP极限著高于空白对照组(P<0.01)，低剂量组AKP显著高于空白对照组(P<0.05)，中剂量组SOD显著高于空白对照组(P<0.05)、PO极显著高于空白对照组(P<0.01)，高剂量组的SOD、PO均极显著高于空白对照组(P<0.01)；在用药后第28天，低剂量组血淋巴中SOD、PO酶活性极显著高于空白对照组(P<0.01)。

表1螺旋藻提取物饲料预混剂对南美白对虾血淋巴液中免疫相关酶活性的影响(U/ML)

注：表中肩标“*”表示和空白组相比差异显著(P<0.05)，“**”表示和空白组相比差异极著(P<0.01)，不标则表示差异不显著(P>0.05)，下同。

2.2氨应激试验中螺旋藻提取物饲料预混剂对南美白对虾死亡率的影响

由表2可知，在喂养实验结束以后，进行的氨应激试验中，各喂药组的死亡率较阳性对照组低20％，表明饲喂螺旋藻提取物饲料预混剂后能降低急性氨应激诱导的死亡，对南美白对虾有保护作用。

表2氨应激试验虾死亡情况统计表

2.3氨应激试验中螺旋藻提取物饲料预混剂对南美白对虾血淋巴液中免疫相关酶活力的影响。

由表3可知，在连续饲喂南美白对虾螺旋藻提取物饲料预混剂28天后进行氨应激实验，在第72小时，高剂量血淋巴中SOD、PO酶活性显著高于空白对照组(P<0.05)，中剂量组血淋巴中ACP活性极显著高于空白对照组(P<0.01)，低剂量血淋巴中AKP、GOT含量极显著高于空白对照组(P<0.01)。

表3氨应激试验中螺旋藻提取物对南美白对虾血淋巴液中免疫相关酶活力的影响

注：与氨应激阳性对照组相比，*表示差异显著，P＜0.05；**表示差异极显著P＜0.01。

综上可知，投喂螺旋藻提取物饲料预混剂的试验组均有显著增强南美白对虾血清酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)活性，且氨应激试验显示，饲料中添加螺旋藻提取物可以显著降低对虾对氨应激的累积死亡率，其中，中剂量组死亡率最低。

3结论

本发明的螺旋藻提取物饲料预混剂可以提高南美白对虾的非特异性免疫力，且具有显著的抗应激作用，取得了预期成果，值得进一步开发利用。

Claims

1.一种南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂，其特征在于由螺旋藻水提醇沉提取物与辅料混合制备而成。

2.根据权利要求1所述南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂，其特征在于由以下重量份的原料和辅料制成：螺旋藻提取物2～4份、二氧化硅1～3份。

3.权利要求2所述南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂的制备方法，其特征在于按照配方称取螺旋藻提取物、水溶性二氧化硅，混匀，加适当乙醇溶解，烘干，粉碎。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述螺旋藻提取物采用酶解辅助水提法提取，再采用沸水浴的方法将其浓缩，醇沉。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述酶解辅助水提法提取按以下操作进行：将螺旋藻粉碎，按质量体积比1:15加入蒸馏水，按螺旋藻干粉质量5％加入木瓜蛋白酶，充分混匀，52℃～60℃水浴1h后，100℃水浴0.5h～1.5h，再80℃水浴2～4h；8层纱网过滤，将上清液沸水浴浓缩到密度为1.2-1.3g/mL，加入5倍量的95％食品级乙醇，混匀，4℃静置24h；3000r/min离心20min，收集螺旋藻提取物沉淀备用。

6.权利要求2所述南美白对虾用螺旋藻提取物饲料预混剂的使用方法，其特征在于：所述螺旋藻提取物饲料预混剂与基础饲料按1～4g/kg饲料拌入基础饲料中。