JPWO2019065135A1 - バッグ把持用クリップ、容器及び撹拌方法 - Google Patents

バッグ把持用クリップ、容器及び撹拌方法 Download PDF

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Abstract

バッグ把持用クリップは、第１のフィルムと第１のフィルムと対向する第２のフィルムとの間に収容空間を形成するバッグを把持した場合に、第１のフィルムと第２のフィルムを部分的に密着させる押圧力をバッグに加え、収容空間を、連通部を介して互いに連通した複数の空間に分割する隔壁を形成する。

Description

開示の技術は、バッグ把持用クリップ、容器及び撹拌方法に関する。
細胞培養バッグに関する技術として、以下の技術が知られている。例えば、特開２０１１−２３９７３４号公報には、培養容器を仕切部材により培養部と拡大可能部の二室に分け、細胞数の増加に合わせて仕切部材の位置を移動させ、培養部の容積を拡大することが記載されている。
細胞を培地内に浮遊させた状態で培養する浮遊培養においては、細胞増殖に必要な栄養分及び気体を全ての細胞に行き渡らせる必要がある。このため、細胞は、培地内に均一に分散していることが好ましい。
細胞を培地内に均一に分散させる方法として、撹拌翼を用いて細胞懸濁液を撹拌する方法が知られている。しかしながら、細胞は脆弱であり、撹拌翼による物理的ストレスによってダメージを受け、細胞の生存率が低下するおそれがある。
細胞を培地内に均一に分散させる他の方法として、細胞を培地とともに収容したバッグを揺動させる揺動撹拌が知られている。揺動撹拌による撹拌方式は、撹拌翼を用いた撹拌に比べて細胞懸濁液の流動状態の変化が激しく、操作条件の確立が困難である。
また、細胞を培地内に均一に分散させる他の方法として、バッグ内に収容された細胞懸濁液に圧力を印加することによって、バッグ内の細胞懸濁液を流動させて撹拌する方法も考えられる。しかしながら、この場合、バッグ内において圧力差を形成することを可能とする隔壁等の構造物をバッグ内に設ける必要がある。バッグ内に構造物を設けると、細胞をバッグの外部に排出する際に、構造物が排出の妨げとなり、細胞がバッグ内に残留し、細胞の回収率が低下するおそれがある。
本発明の一つの実施形態は、細胞懸濁液の撹拌処理において、細胞の回収率の低下を抑制する。
開示の技術に係るバッグ把持用クリップは、第１のフィルムと第１のフィルムと対向する第２のフィルムとの間に収容空間を形成するバッグを把持した場合に、第１のフィルムと第２のフィルムを部分的に密着させる押圧力をバッグに加え、収容空間を、連通部を介して互いに連通した複数の空間に分割する隔壁を形成する。
隔壁は、バッグの第１の辺と、第１の辺と対向する第２の辺との間に、第１の辺及び第２の辺と交差する方向に伸びていてもよく、連通部が、隔壁の伸びる経路上に設けられていてもよい。
連通部が、隔壁と第１の辺との間または隔壁と第２の辺との間に設けられていてもよい。
開示の技術に係るバッグ把持用クリップは、バッグに対して着脱可能であることが好ましい。
隔壁は、収容空間を、第１の空間と、第１の空間の鉛直方向下側に配置された第２の空間とに分割するものであってもよい。
隔壁は、第１の空間の底部に下り方向の傾斜を形成し、底部の最下位置に一端が接続され、第２の空間の内部に伸びた連通部を形成するものであってもよい。
開示の技術に係るバッグ把持用クリップは、バッグに当接される、弾性体を含む当接部を備えていてもよく、当接部を支持する支持部材を更に備えていてもよい。
第１のフィルムと第２のフィルムを部分的に密着させる押圧力は、磁力によって付与されてもよい。
開示の技術に係るバッグ把持用クリップは、第１のフィルムに当接される第１の当接部と、第１のフィルムの、第１の当接部が当接される部分とは異なる部分に当接される第２の当接部と、第２のフィルムに当接され、第１の当接部との間にバッグを挟むことで、第１の空間と第２の空間とを隔てる隔壁の一部及び連通部を形成する隔壁の一部を形成する第３の当接部と、第２のフィルムに当接され、第２の当接部との間にバッグを挟むことで、第１の空間と第２の空間とを隔てる隔壁の他の一部及び連通部を形成する隔壁の他の一部を形成する第４の当接部と、を含んでいてもよい。
開示の技術に係るバッグ把持用クリップは、第１の当接部と第２の当接部との相対的な位置を固定する第１の固定部と、第３の当接部と第４の当接部との相対的な位置を固定する第２の固定部と、を更に含んでいてもよい。
開示の技術に係るバッグ把持用クリップは、第１の当接部と第２の当接部との少なくとも一方をスライドさせることにより第１の当接部と第２の当接部との相対的な位置を変化させる第１のスライド機構と、第３の当接部と第４の当接部との少なくとも一方をスライドさせることにより第１の当接部と第２の当接部との相対的な位置を変化させる第１のスライド機構と、を更に含んでいてもよい。
開示の技術に係る容器は、上記のバッグ把持用クリップと、バッグ把持用クリップによって把持されたバッグと、を含む。
開示の技術に係る容器は、複数の空間の各々に接続された通気ポートを更に含んでいてもよい。
開示の技術に係る撹拌方法は、第１のフィルムと第１のフィルムと対向する第２のフィルムとの間に収容空間を形成するバッグを把持した場合に、第１のフィルムと第２のフィルムを部分的に密着させる押圧力をバッグに加え、収容空間を、連通部を介して互いに連通した第１の空間と第２の空間とに分割する隔壁を形成するバッグ把持用クリップと、バッグ把持用クリップによって把持されたバッグと、を含む容器を用いて細胞懸濁液を撹拌する撹拌方法であって、バッグ把持用クリップでバッグを把持する第１のステップと、第１のステップの後に、第２の空間に細胞懸濁液を収容する第２のステップと、第１の空間と第２の空間との間に気圧差を形成して、第２の空間に収容された細胞懸濁液を、連通部を経由して第１の空間に移送する第３のステップと、を含む。
開示の技術に係る撹拌方法は、第３のステップの後に、第１の空間に収容された細胞懸濁液を、連通部を経由して第２の空間に移送する第４のステップを更に含んでいてもよい。また、第３のステップ及び第４のステップを交互に繰り返し実施してもよい。
開示の技術に係る撹拌方法は、バッグの内部に細胞懸濁液を収容した状態で、バッグ把持用クリップをバッグから取り外す第５のステップと、第５のステップの後に、バッグの内部に収容された細胞懸濁液をバッグの外部に排出する第６のステップと、を更に含んでいてもよい。
開示の技術に係る容器は、互いに対向する第１のフィルムと第２のフィルムを部分的に密着させる開閉可能なジップ機構を内部に有する容器であって、ジップ機構を閉状態とすることによって、容器の内部の収容空間を、連通部を介して互いに連通した複数の空間に分割する隔壁が形成される。
本発明の一つの実施形態によれば、細胞懸濁液の撹拌処理において、細胞の回収率の低下を抑制することができる。
開示の技術の実施形態に係るバッグ把持用クリップの構成の一例を概略的に示す斜視図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌容器の構成の一例を示す正面図である。 図２における３−３線に沿った断面図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌容器の内部構成の一例を示す図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌容器の構成の一例を示す断面図である。 開示の技術の実施形態に係る撹拌容器の構成の一例を示す断面図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌容器の構成の一例を示す断面図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌容器の内部構成の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌方法の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌容器の内部構成の一例を示す図である。 開示の技術の他の実施形態に係る撹拌容器の構成の一例を示す正面図である。 図１１Ａにおける１１Ｂ−１１Ｂ線に沿った断面図である。 開示の技術の実施形態に係るジップ機構の構成の一例を示す断面図である。
以下、開示の技術の実施形態について図面を参照しつつ説明する。尚、各図面において、実質的に同一又は等価な構成要素又は部分には同一の参照符号を付している。
［第１の実施形態］
図１は、開示の技術の実施形態に係るバッグ把持用クリップ１の構成の一例を概略的に示す斜視図である。図２は、バッグ把持用クリップ１と、バッグ把持用クリップ１によって把持されたバッグ２とを含んで構成される、開示の技術の実施形態に係る撹拌容器３の構成の一例を示す正面図である。図３は、図２における３−３線に沿った断面図である。
バッグ２は、例えば、細胞培養の用途で用いることができ、それぞれ可撓性およびガス透過性を有する第１のフィルムＦ１及び第２のフィルムＦ２を、ヒートシール（熱圧着）などの手法により貼り合せることにより構成される。なお、バッグ２は、１枚のフィルムを折り返して構成されるものであってもよく、この場合においても、フィルムの互いに対向する部分を、それぞれ、第１のフィルムＦ１及び第２のフィルムＦ２とする。
第１のフィルムＦ１及び第２のフィルムＦ２を構成する材料として、例えば、ポリエチレンやポリプロピレンなどのプラスチックを好適に用いることができる。バッグ２は、第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２との間に細胞を培地とともに収容するための収容空間を形成する。
バッグ把持用クリップ１は、第１のフィルムＦ１側に配置される第１の部分１０Ａと、第２のフィルムＦ２側に配置される第２の部分１０Ｂとを含んで構成されており、第１の部分１０Ａと第２の部分１０Ｂとの間に、バッグ２を挟み込むことでバッグ２を把持する。すなわち、バッグ把持用クリップ１は、バッグ２の第１のフィルムＦ１側及び第２のフィルムＦ２側からそれぞれ他方の側に押圧力を加えることでバッグ２を把持する。バッグ把持用クリップ１は、バッグ２に対して着脱可能である。
バッグ把持用クリップ１の第１の部分１０Ａは、第１のフィルムＦ１に当接される線状の第１の当接部１１Ａと、第１のフィルムＦ１の第１の当接部１１Ａが当接される部分とは異なる部分に当接される線状の第２の当接部１２Ａと、第１の当接部１１Ａ及び第２の当接部１２Ａを支持する支持部材を構成する支持板１３Ａとを有する。第１の当接部１１Ａ及び第２の当接部１２Ａは、支持板１３Ａの、バッグ２が配置される側の面である把持面Ｓａ（図３参照）に取り付けられている。
同様に、バッグ把持用クリップ１の第２の部分１０Ｂは、第２のフィルムＦ２に当接される線状の第３の当接部１１Ｂと、第２のフィルムＦ２の第３の当接部１１Ｂが当接される部分とは異なる部分に当接される第４の当接部１２Ｂと、第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂを支持する支持部材を構成する支持板１３Ｂとを有する。第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂは、支持板１３Ｂの、バッグ２が配置される側の面である把持面Ｓｂ（図３参照）に取り付けられている。
図３に示すように、バッグ把持用クリップ１が、バッグ２を把持した状態において、第１の当接部１１Ａと第３の当接部１１Ｂとが重なり合い、第２の当接部１２Ａと第４の当接部１２Ｂとが重なり合う。すなわち、第１の当接部１１Ａと第３の当接部１１Ｂとの間、及び第２の当接部１２Ａと第４の当接部１２Ｂとの間にバッグ２が挟み込まれる。第１の当接部１１Ａと第３の当接部１１Ｂとの間にバッグ２が挟み込まれることにより、第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とが、第１の当接部１１Ａ及び第３の当接部１１Ｂの形状に応じて部分的（線状）に密着し、これにより、バッグ２の内部に線状の隔壁が形成される。同様に、第２の当接部１２Ａと第４の当接部１２Ｂとの間にバッグ２が挟み込まれることにより、第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とが、第２の当接部１２Ａ及び第４の当接部１２Ｂの形状に応じて部分的（線状）に密着し、これにより、バッグ２の内部に線状の隔壁が形成される。第１の当接部１１Ａ、第２の当接部１２Ａ、第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂを、それぞれ、ゴムなどの弾性体で構成してもよい。この構成により、バッグ把持用クリップ１でバッグ２を把持した場合に、各当接部が当接される部位において、第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２との密着性を高めることができ、隔壁としての機能が有効に発揮される。
図３に示すように、第１の当接部１１Ａ及び第２の当接部１２Ａは、それぞれ、スペーサ１４Ａを介して支持板１３Ａに取り付けられ、第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂ、は、それぞれ、スペーサ１４Ｂを介して支持板１３Ｂに取り付けられている。スペーサ１４Ａ及び１４Ｂを設けることで、支持板１３Ａと支持板１３Ｂとの間に、細胞を培地とともに収容した状態のバッグ２を配置するのに十分なスペースを確保することが可能となる。
支持板１３Ａ及び支持板１３Ｂを貫通する複数のネジ１５により、バッグ把持用クリップ１の第１の部分１０Ａ及び第２の部分１０Ｂの相対位置が固定される。また、複数のネジ１５によりバッグ２の各当接部が当接される部位において、第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とを部分的（線状）に密着させる押圧力が付与される。すなわち、複数のネジ１５によって作用する引っ張り弾性力によって、第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とを部分的（線状）に密着させる押圧力が付与される。なお、第１の部分１０Ａ及び第２の部分１０Ｂの相対位置の位置決めを行うための凹凸構造が、支持板１３Ａ及び支持板１３Ｂの、ネジ１５の近傍に設けられていてもよい。
図４は、バッグ把持用クリップ１でバッグ２を把持することにより、バッグ２の内部に形成される隔壁３０の形態の一例を示す正面図であり、撹拌容器３の内部構成の一例を示す図である。隔壁３０は、バッグ把持用クリップ１によって把持されたバッグ２の第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とが密着する部分に形成される。
隔壁３０によって、バッグ２の内部の収容空間は、第１の空間３１と第２の空間３２とに分割される。バッグ把持用クリップ１とバッグ２とを含んで構成される撹拌容器３を用いて、培地中に細胞を分散させた細胞懸濁液の撹拌を行う場合、第２の空間３２は、第１の空間３１の鉛直方向下方側に配置される。また、隔壁３０によって、第１の空間３１と第２の空間３２とを連通させる連通部３３が形成される。すなわち、隔壁３０は、正面視矩形状であるバッグ２の端部となる辺Ａ１と、辺Ａ１と対向するバッグ２の他方側の端部となる辺Ａ２との間に、辺Ａ１及び辺Ａ２と交差する交差方向に伸びる部分を有し、連通部３３が、隔壁３０の上記交差方向に伸びる部分の延長線上に設けられている。より具体的には、隔壁３０は、第１の空間３１の底部に下り方向の傾斜を形成し、且つ第１の空間３１の傾斜した底部の最下位置に一端が接続され、第２の空間３２の内部に伸びた連通部３３を形成している。第１の空間３１の傾斜した底部の最下位置は、バッグ２の辺Ａ１と辺Ａ２との間の水平方向中央に配置され、従って、連通部３３も、辺Ａ１と辺Ａ２との間の水平方向中央に配置されている。
バッグ２は、第１の空間３１に接続された通気ポート４１及び第２の空間３２に接続された通気ポート４２を備えている。バッグ２の外部から通気ポート４１及び４２を介してバッグ２の内部に気体を導入することが可能である。また、第２の空間３２の底部には、送液ポート４３が設けられており、送液ポート４３を介して、バッグ２の内部から細胞懸濁液を排出したり、バッグ２の内部に細胞懸濁液を注入したりすることが可能である。なお、バッグ２は、バッグ２の内部への細胞懸濁液の注入を行うための注入専用の送液ポートと、バッグ２の内部からの細胞懸濁液の排出を行うための排出専用の送液ポートとを含む複数の送液ポートを備えていてもよい。
以下に、撹拌容器３を用いて細胞懸濁液を撹拌する、開示の技術の実施形態に係る撹拌方法について、図５Ａ〜５Ｆを参照しつつ説明する。なお、図５Ｂ〜図５Ｅにおいては、バッグ把持用クリップ１でバッグ２を把持することにより、バッグ２の内部に形成される隔壁３０が示されており、バッグ把持用クリップ１の図示が省略されている。
初めに、細胞懸濁液を収容していない状態のバッグ２を用意する（図５Ａ）。次に、バッグ把持用クリップ１でバッグ２を把持する（図５Ｂ）。すなわち、バッグ把持用クリップ１の第１の部分１０Ａと第２の部分１０Ｂとの間にバッグ２を挟み、ネジ１５を締め込む。これにより、バッグ２の第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とを第１の当接部１１Ａ、第２の当接部１２Ａ、第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂによって部分的（線状）に密着させる押圧力が付与される。バッグ把持用クリップ１でバッグ２を把持することで、バッグ２の内部に隔壁３０が形成され、隔壁３０により、バッグ２の内部の収容空間は、連通部３３を介して互いに連通した第１の空間３１と第２の空間３２とに分割される。バッグ把持用クリップ１でバッグ２を把持することで、撹拌容器３が構成される。
次に、撹拌容器３の第２の空間３２が、第１の空間３１の鉛直方向下方に位置するように撹拌容器３の向きを固定し、送液ポート４３を介してバッグ２の内部に細胞懸濁液１００を注入する（図５Ｃ）。細胞懸濁液１００は、撹拌容器３の第２の空間３２に収容される。なお、第２の空間３２の全てが細胞懸濁液１００で満たされることのないように、バッグ２に注入する細胞懸濁液１００の液量は、第２の空間３２の容量よりも小さいことが好ましい。
次に、第１の空間３１に接続された通気ポート４１を開放状態としつつ、第２の空間３２に接続された通気ポート４２を介して第２の空間３２の内部に気体を導入する。これにより、第２の空間３２の内部の気圧が、第１の空間３１の内部の気圧よりも高くなる。その結果、第２の空間３２に収容された細胞懸濁液１００は、液面が加圧され、連通部３３を経由して第１の空間３１に移送される。細胞懸濁液１００を連通部３３を経由して第１の空間３１に移送することで、細胞懸濁液１００が撹拌される（図５Ｄ）。
なお、バッグ２の内部に導入する気体は、細胞が汚染されることのないように無菌状態であることが好ましい。バッグ２の内部に導入する気体として、酸素または空気などの細胞に対して無害な気体を使用することが好ましい。また、上記の説明では、細胞懸濁液１００の第２の空間３２から第１の空間３１への移送を、第２の空間３２の内部を加圧することによって行う場合を例示したが、この態様に限定されない。すなわち、細胞懸濁液１００の第２の空間３２から第１の空間３１への移送を、通気ポート４１を介して第１の空間３１の内部の気体を吸引する等して、第１の空間３１の内部を減圧することによって行ってもよい。
次に、第２の空間３２に接続された通気ポート４２を開放状態とする。これにより、第１の空間３１に収容された細胞懸濁液１００は、重力により連通部３３を経由して第２の空間３２に移送される（図５Ｅ）。隔壁３０により、第１の空間３１の底部に下り方向の傾斜を形成し、傾斜した底部の最下位置に連通部３３を形成することで、第１の空間３１に収容された細胞懸濁液１００を、重力によって連通部３３に導くことができる。細胞懸濁液１００を連通部３３を経由して第２の空間３２に移送することで、細胞懸濁液１００が撹拌される。なお、第１の空間３１に接続された通気ポート４１を介して第１の空間３１の内部に気体を導入することで、第１の空間３１から第２の空間３２への細胞懸濁液１００の移送を促進させてもよい。
その後、必要に応じて、第２の空間３２から第１の空間３１への細胞懸濁液１００の移送、及び第１の空間３１から第２の空間３２への細胞懸濁液１００の移送を、複数回に亘り繰り返し実施してもよい。細胞懸濁液１００の移送は、細胞が培地に略均一に分散するまで、繰り返し実施することが好ましい。
次に、バッグ把持用クリップ１をバッグ２から取り外す。これにより、第１の空間３１と第２の空間３２とを隔てる隔壁３０が除去される。その後、バッグ２の内部に収容された細胞懸濁液１００を、送液ポート４３からバッグ２の外部に排出する（図５Ｆ）。なお、バッグ把持用クリップ１をバッグ２から取り外した後、バッグ２内で細胞培養を行ってもよい。
以上のように、開示の技術の実施形態に係るバッグ把持用クリップ１は、バッグ２を把持した場合に、バッグ２の第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とを部分的（線状）に密着させる押圧力を加え、バッグ２の収容空間を、連通部３３を介して互いに連通した第１の空間３１と第２の空間３２とに分割する隔壁３０を形成する。また、開示の技術の実施形態に係る撹拌方法は、バッグ把持用クリップ１でバッグ２を把持した後にバッグ２内に細胞懸濁液を導入し、第１の空間３１と第２の空間３２との圧力差または重力を利用して、第１の空間３１と第２の空間３２との間で細胞懸濁液を流動させることで、細胞懸濁液の撹拌を行うものである。このように、圧力差または重力により細胞懸濁液を流動させて撹拌を行う方式によれば、撹拌翼を用いる方式と比較して、細胞へのダメージを小さくすることができる。なお、細胞へのダメージの付与をより確実に抑制するために、液面を加圧する圧力を、ポンプなどを用いて厳密に制御することが好ましい。
また、開示の技術の実施形態に係る撹拌方法によれば、撹拌翼を用いる方式と同様、細胞を培地中に均一に分散させることができる。また、撹拌処理後は、バッグ把持用クリップ１をバッグ２から取り外すことで、バッグ２の内部の隔壁３０が除去され、細胞懸濁液をバッグ２の外部に排出する際に、排出の妨げとなる構造物がなくなるので、バッグ２の内部における細胞の残留を抑制することができる。これにより、細胞の回収率の低下を抑制することができる。
本実施形態に係る撹拌方法は、例えば、細胞を培地中に浮遊させた状態で静置する静置培養において、培養期間中の所定のタイミングで細胞と培地とを混合する目的で使用することも可能である。これにより、培地中に分散する細胞の分散状態が改善され、栄養分及び気体が全ての細胞に偏りなく行き渡る好ましい培養環境を形成することができる。
ここで、バッグ把持用クリップ１をバッグ２に取り付ける際に、連通部３３において、細胞懸濁液が流通する空間の形成を促進するために、以下の操作を行ってもよい。なお、以下の説明において参照する図６Ａ及び図６Ｂは、撹拌容器３の構成の一例を示す断面図であり、図３に示す断面に相当する断面が示されている。
図６Ａに示すように、バッグ把持用クリップ１の第１の部分１０Ａと第２の部分１０Ｂとの間にバッグ２を挟んだ状態で、ネジ１５を仮締めする。バッグ２は、第１の当接部１１Ａと第３の当接部１１Ｂとの間、第２の当接部１２Ａと第４の当接部１２Ｂとの間に挟まれる。
次に、第１の当接部１１Ａと第３の当接部１１Ｂとの間、第２の当接部１２Ａと第４の当接部１２Ｂとの間に、バッグ２を挟んだ状態で、第１の当接部１１Ａ及び第２の当接部１２Ａを、これらが互いに近づく方向にスライドさせるとともに、第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂを、これらが互いに近づく方向にスライドさせる。
これにより、図６Ｂに示すように、バッグ２は、第１の当接部１１Ａと第３の当接部１１Ｂとの間に挟まれた部分と、第２の当接部１２Ａと第４の当接部１２Ｂとの間に挟まれた部分との間の領域において、第１のフィルムＦ１及び第２のフィルムＦ２は、それぞれ、バッグ２の外側に膨らむように撓みを生じる。その結果、連通部３３において細胞懸濁液が流通する空間Ｂが形成される。なお、第１の当接部１１Ａ及び第２の当接部１２Ａのいずれか一方を他方に近づく方向にスライドさせて、第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂのうち、第１の当接部１１Ａ及び第２の当接部１２Ａのうちのスライドさせた方に対向する一方を、他方に近づく方向にスライドさせてもよい。
連通部３３に空間Ｂを形成した後、第１の当接部１１Ａ及び第２の当接部１２Ａのそれぞれの位置をネジ１６により固定する。これにより、第１の当接部１１Ａと第２の当接部１２Ａとの相対的な位置が固定される。同様に、第３の当接部１１Ｂ及び第４の当接部１２Ｂのそれぞれの位置をネジ１６により固定する。これにより、第３の当接部１１Ｂと第４の当接部１２Ｂとの相対的な位置が固定される。その後、ネジ１５を本締めする。
上記の要領で連通部３３に空間Ｂを形成する場合、バッグ把持用クリップ１は、第１の当接部１１Ａと第２の当接部１２Ａとの相対的な位置を変化させる第１のスライド機構と、第３の当接部１１Ｂと第４の当接部１２Ｂとの相対的な位置を変化させる第２のスライド機構と、第１の当接部１１Ａと第２の当接部１２Ａとの相対的な位置を固定する第１の固定部と、第３の当接部１１Ｂと第４の当接部１２Ｂとの相対的な位置を固定する第２の固定部と、を備える。なお、上記の第１及び第２のスライド機構は、それぞれ、各当接部が接合されたスペーサ１４Ａ、１４Ｂを、各当接部と一体的にスライドさせるように構成されていてもよい。また、上記の第１及び第２の固定部は、各当接部が接合されたスペーサ１４Ａ、１４Ｂを、それぞれ、支持板１３Ａ、１３Ｂに固定するネジ１６を含んで構成されていてもよい。
また、上記の要領で連通部３３に空間Ｂを形成する場合、空間Ｂの容積に相当する量の気体または液体が、バッグ２の内部に予め確保されているか、空間Ｂの形成時にバッグ２の外部から導入することが必要となる。例えば、空間Ｂの形成時に、通気ポート４１及び４２のいずれかを開放状態としておき、開放状態とされた通気ポートを介してバッグ２の内部に外気を導入してもよい。バッグ２の内部に導入される気体は、汚染防止の観点から無菌状態であることが好ましい。また、事前にバッグ２の洗浄を行う場合には、洗浄に用いられる洗浄液を、バッグ２の内部に残したままとしてもよい。
［第２の実施形態］
図７は、開示の技術の第２の実施形態に係るバッグ把持用クリップ１Ａと、バッグ把持用クリップ１Ａによって把持されたバッグ２とを含んで構成される、撹拌容器３Ａの構成の一例を示す断面図である。図７には、図３に示す断面に相当する断面が示されている。
上記した第１の実施形態に係るバッグ把持用クリップ１は、複数のネジ１５によって作用する引っ張り弾性力によって、バ第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とを部分的（線状）に密着させる押圧力を付与するものであった。これに対して、第２の実施形態に係るバッグ把持用クリップ１Ａは、支持板１３Ａに取り付けられた磁石４０Ａと、支持板１３Ｂに取り付けられた磁石４０Ｂとによって作用する磁力によって、第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とを部分的（線状）に密着させる押圧力を付与する。なお磁石４０Ａ及び４０Ｂは、永久磁石であってもよいし、電磁石であってもよい。
第２の実施形態に係るバッグ把持用クリップ１Ａによれば、第１の実施形態に係るバッグ把持用クリップ１と比較して、バッグ把持用クリップ１Ａをバッグ２に取り付ける際の作業負担が軽減される。また、磁石４０Ａ及び４０Ｂを電磁石で構成することで、磁力の発生を電気的に制御することが可能となる。例えば、バッグ把持用クリップ１Ａをバッグ２から取り外す際に、磁力の発生を停止させることで、バッグ把持用クリップ１Ａの取り外しが容易となる。なお、第１の当接部１１Ａ、第２の当接部１２Ａ、第３の当接部１１Ｂ、第４の当接部１２Ｂを、磁石で構成してもよい。また、スペーサ１４Ａ及び１４Ｂの各々を、磁石で構成してもよい。
［第３の実施形態］
図８は、バッグ把持用クリップ（図示せず）でバッグ２を把持することにより、バッグ２の内部に形成される隔壁３０の形態の他を示す平面図であり、開示の技術の第３の実施形態に係る撹拌容器３Ｂの内部構成の一例を示す図である。図示を省略した本実施形態に係るバッグ把持用クリップは、図８に示す隔壁３０が形成される部分においてバッグ２に当接される当接部と、上記当接部を支持する支持板とを含む。隔壁３０は、バッグ把持用クリップによって把持されたバッグ２の第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とが密着する部分に形成される。
隔壁３０によって、バッグ２の内部の収容空間は、第１の空間３１と第２の空間３２とに分割される。撹拌容器３Ｂを用いて細胞懸濁液の撹拌を行う場合、第１の空間３１と第２の空間３２とは、水平方向に並置される。また、隔壁３０によって、第１の空間３１と第２の空間３２とを連通させる連通部３３が形成される。すなわち、撹拌容器３Ｂにおいて、隔壁３０は、正面視視矩形状のバッグ２の端部となる辺Ａ３と、辺Ａ３と対向するバッグ２の他方側の端部となる辺Ａ４との間に、辺Ａ３及び辺Ａ４と交差する交差方向に伸びる部分を有し、連通部３３が、隔壁３０の上記交差方向に伸びる部分の延長線上に設けられている。より具体的には、隔壁３０は、辺Ａ３から辺Ａ４に向けて直線的に伸びる部分と、辺Ａ４から辺Ａ３に向けて直線的に伸びる部分とを有し、両部分の間隙が連通部３３を構成している。
バッグ２は、第１の空間３１に接続された通気ポート４１及び第２の空間３２に接続された通気ポート４２を備えている。バッグ２の外部から通気ポート４１及び４２を介してバッグ２の内部に気体を導入することが可能である。また、バッグ２の底部には、送液ポート４３が設けられており、送液ポート４３を介して、バッグ２の内部から細胞懸濁液を排出したり、バッグ２の内部に細胞懸濁液を注入したりすることが可能である。
以下に、撹拌容器３Ｂを用いて細胞懸濁液を撹拌する、開示の技術の実施形態に係る撹拌方法について、図９Ａ〜９Ｆを参照しつつ説明する。
初めに、細胞懸濁液を収容していない状態のバッグ２を用意する（図９Ａ）。次に、バッグ把持用クリップでバッグ２を把持する（図９Ｂ）。これにより、バッグ２の内部に隔壁３０が形成され、隔壁３０により、バッグ２の内部の収容空間は、連通部３３を介して互いに連通した第１の空間３１と第２の空間３２とに分割される。バッグ把持用クリップでバッグ２を把持することで、撹拌容器３Ｂが構成される。
次に、撹拌容器３Ｂの第１の空間３１と第２の空間３２とが、水平方向に並置されるように、撹拌容器３Ｂの向きを固定し、送液ポート４３を介して撹拌容器３Ｂの内部に細胞懸濁液１００を注入する（図９Ｃ）。細胞懸濁液１００は、第１の空間３１及び第２の空間３２に均等に分配される。
次に、第２の空間３２に接続された通気ポート４２を開放状態としつつ、第１の空間３１に接続された通気ポート４１を介して第１の空間３１の内部に気体を導入する。これにより、第１の空間３１の内部の気圧が第２の空間３２の内部の気圧よりも高くなる。その結果、第１の空間３１に収容された細胞懸濁液１００は、液面が加圧され、その一部が連通部３３を経由して第２の空間３２に移送される。細胞懸濁液１００を連通部３３を経由して第２の空間３２に移送することで、細胞懸濁液１００が撹拌される（図９Ｄ）。
次に、第１の空間３１に接続された通気ポート４１を開放状態としつつ、第２の空間３２に接続された通気ポート４２を介して第２の空間３２の内部に気体を導入する。これにより、第２の空間３２の内部の気圧が第１の空間３１の内部の気圧よりも高くなる。その結果、第２の空間３２に収容された細胞懸濁液１００は、液面が加圧され、その一部が連通部３３を経由して第１の空間３１に移送される。細胞懸濁液１００を連通部３３を経由して第１の空間３１に移送することで、細胞懸濁液１００が撹拌される（図９Ｅ）。
その後、必要に応じて、第１の空間３１から第２の空間３２への細胞懸濁液１００の移送、及び第２の空間３２から第１の空間３１への細胞懸濁液１００の移送を、複数回に亘り繰り返し実施してもよい。細胞懸濁液１００の移送は、細胞が培地に略均一に分散するまで、繰り返し実施することが好ましい。
次に、バッグ把持用クリップをバッグ２から取り外す。これにより、第１の空間３１と第２の空間３２とを隔てる隔壁３０が除去される。その後、バッグ２の内部に収容された細胞懸濁液１００を、送液ポート４３からバッグ２の外部に排出する。なお、バッグ把持用クリップをバッグ２から取り外した後、バッグ２内で細胞培養を行ってもよい。
以上のように、図８に示す隔壁３０の形態を有する撹拌容器３Ｂにおいても、第１の実施形態に係る撹拌容器３を用いた撹拌方法と同様の方法で細胞懸濁液の撹拌を行うことが可能である。従って、細胞懸濁液の撹拌処理において、細胞へのダメージを小さくでき、且つ細胞の回収率の低下を抑制することができる。
［第４の実施形態］
図１０は、バッグ把持用クリップ（図示せず）でバッグ２を把持することにより、バッグ２の内部に形成される隔壁３０の形態の他を示す平面図であり、開示の技術の第４の実施形態に係る撹拌容器３Ｃの内部構成の一例を示す図である。図示を省略した本実施形態に係るバッグ把持用クリップは、図１０に示す隔壁３０が形成される部分においてバッグ２に当接される当接部と、上記当接部を支持する支持板とを含む。隔壁３０は、バッグ把持用クリップ１によって把持されたバッグ２の第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とが密着する部分に形成される。
隔壁３０によって、バッグ２の内部の収容空間は、第１の空間３１と第２の空間３２とに分割される。撹拌容器３Ｃを用いて細胞懸濁液の撹拌を行う場合、第１の空間３１と第２の空間３２とは、水平方向に並置される。また、隔壁３０によって、第１の空間３１と第２の空間３２とを連通させる連通部３３が形成される。すなわち、撹拌容器３Ｃにおいて、隔壁３０は、正面視矩形状のバッグ２の端部となる辺Ａ３と、辺Ａ３と対向するバッグ２の他方側の端部となる辺Ａ４との間に、辺Ａ３及び辺Ａ４と交差する交差方向に伸びる部分を有し、連通部３３が、隔壁３０の上記交差方向に伸びる部分の延長線上に設けられている。より具体的には、隔壁３０は、辺Ａ３から辺Ａ４に向けて直線的に伸びる部分を有し、隔壁３０と辺Ａ４との間に連通部３３が設けられている。なお、隔壁３０は、辺Ａ４から辺Ａ３に向けて直線的に伸びる部分を有し、隔壁３０と辺Ａ３との間に連通部３３が設けられていてもよい。
バッグ２は、第１の空間３１に接続された通気ポート４１及び第２の空間３２に接続された通気ポート４２を備えている。バッグ２の外部から通気ポート４１及び４２を介してバッグ２の内部に気体を導入することが可能である。また、バッグ２の底部には、送液ポート４３が設けられており、送液ポート４３を介して、バッグ２の内部から細胞懸濁液を排出したり、バッグ２の内部に細胞懸濁液を注入したりすることが可能である。
撹拌容器３Ｃを用いて細胞懸濁液を撹拌する方法は、上記した第３の実施形態に係る撹拌容器３Ｂを用いる場合と同様であるので、説明は省略する。
［第５の実施形態］
図１１Ａは、開示の技術の第５の実施形態に係る撹拌容器３Ｄの構成の一例を示す正面図、図１１Ｂは、図１１Ａにおける１１Ｂ−１１Ｂ線に沿った断面図、図１２は、図１１Ｂに示す破線で囲んだ部分の拡大図であり、ジップ機構５０の構成の一例を示す断面図である。
図１１Ａに示すように、撹拌容器３Ｄは、第１の実施形態に係る撹拌容器３（図４参照）と同様の形態の隔壁３０を、撹拌容器３Ｄの内部に有する。第１の実施形態に係る撹拌容器３においては、隔壁３０は、バッグ２をバッグ把持用クリップ１で把持することによって形成されるものであった。これに対して、本実施形態に撹拌容器３Ｄは、互いに対向する第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２を線状に密着させる開閉可能なジップ機構５０を内部に有し、ジップ機構５０を閉状態とすることによって隔壁３０が形成される。隔壁３０によって、撹拌容器３Ｄの内部の収容空間は、第１の空間３１と第２の空間３２とに分割される。また、隔壁３０によって、第１の空間３１と第２の空間３２とを連通させる連通部３３が形成される。
図１２に示すように、ジップ機構５０は、第１のフィルムＦ１の内側面に形成された凸部５１と、第２のフィルムＦ２の内側面において凸部５１に対向して配置された凹部５２とを含んで構成されている。凸部５１を凹部５２に嵌合させることにより、ジップ機構５０が閉状態となり、ジップ機構５０の形成部位において第１のフィルムＦ１と第２のフィルムＦ２とが密着して撹拌容器３Ｄの内部に隔壁３０が形成される。また、凸部５１と凹部５２との嵌合を解除することにより、ジップ機構３０が開状態となり、撹拌容器３Ｄの内部から隔壁３０が除去される。
撹拌容器３Ｄは、第１の空間３１に接続された通気ポート４１及び第２の空間３２に接続された通気ポート４２を備えている。撹拌容器３Ｄの外部から通気ポート４１及び４２を介して撹拌容器３Ｄの内部に気体を導入することが可能である。また、第２の空間３２の底部には、送液ポート４３が設けられており、送液ポート４３を介して、撹拌容器３Ｄの内部から細胞懸濁液を排出したり、撹拌容器３Ｄの内部に細胞懸濁液を注入したりすることが可能である。
撹拌容器３Ｄを用いて細胞懸濁液を撹拌する方法は、上記した第１の実施形態に係る撹拌容器３を用いる場合と同様である。撹拌容器３Ｄによれば、撹拌処理後は、ジップ機構５０を開状態とすることで、撹拌容器３Ｄの内部の隔壁３０が除去され、細胞懸濁液を撹拌容器３Ｄの外部に排出する際に、排出の妨げとなる構造物がなくなるので、撹拌容器３Ｄの内部における細胞の残留を抑制することができる。これにより、細胞の回収率の低下を抑制することができる。
なお、撹拌容器３Ｄにおいて、隔壁３０の形態は、図８に示す撹拌容器３Ｂの隔壁３０の形態と同様であってもよく、図１０に示す撹拌容器３Ｃの隔壁３０の形態と同様であってもよい。
本出願は、２０１７年９月２６日出願の日本出願である特願２０１７−１８４９５２の優先権を主張するものであり、この出願の全内容は参照により本明細書に取り込まれる。また本明細書に記載された全ての文献、特許出願及び技術規格は、個々の文献、特許出願及び技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。
開示の技術に係るバッグ把持用クリップは、第１の当接部と第２の当接部との少なくとも一方をスライドさせることにより第１の当接部と第２の当接部との相対的な位置を変化させる第１のスライド機構と、第３の当接部と第４の当接部との少なくとも一方をスライドさせることにより第３の当接部と第４の当接部との相対的な位置を変化させる第２のスライド機構と、を更に含んでいてもよい。

Claims (19)

  1. 第１のフィルムと前記第１のフィルムと対向する第２のフィルムとの間に収容空間を形成するバッグを把持した場合に、前記第１のフィルムと前記第２のフィルムを部分的に密着させる押圧力を前記バッグに加え、前記収容空間を、連通部を介して互いに連通した複数の空間に分割する隔壁を形成する
    バッグ把持用クリップ。
  2. 前記隔壁は、前記バッグの第１の辺と、前記第１の辺と対向する第２の辺との間に、前記第１の辺及び前記第２の辺と交差する交差方向に伸びる部分を有し、
    前記連通部が、前記隔壁の前記交差方向に伸びる部分の延長線上に設けられている
    請求項１に記載のバッグ把持用クリップ。
  3. 前記連通部が、前記隔壁と前記第１の辺との間または前記隔壁と前記第２の辺との間に設けられている
    請求項２に記載のバッグ把持用クリップ。
  4. 前記バッグに対して着脱可能である
    請求項１から請求項３のいずれか１項に記載のバッグ把持用クリップ。
  5. 前記隔壁は、前記収容空間を、第１の空間と、前記第１の空間の鉛直方向下側に配置された第２の空間とに分割する
    請求項１から請求項４のいずれか１項に記載のバッグ把持用クリップ。
  6. 前記隔壁は、前記第１の空間の底部に下り方向の傾斜を形成し、前記底部の最下位置に一端が接続され、前記第２の空間の内部に伸びた前記連通部を形成する
    請求項５に記載のバッグ把持用クリップ。
  7. 前記バッグに当接される、弾性体を含む当接部を備えた
    請求項１から請求項６のいずれか１項に記載のバッグ把持用クリップ。
  8. 前記当接部を支持する支持部材を更に備えた
    請求項７に記載のバッグ把持用クリップ。
  9. 前記押圧力は、磁力によって付与される
    請求項１から請求項８に記載のバッグ把持用クリップ。
  10. 前記第１のフィルムに当接される第１の当接部と、
    前記第１のフィルムの、前記第１の当接部が当接される部分とは異なる部分に当接される第２の当接部と、
    前記第２のフィルムに当接され、前記第１の当接部との間に前記バッグを挟むことで、前記第１の空間と前記第２の空間とを隔てる隔壁の一部及び前記連通部を形成する隔壁の一部を形成する第３の当接部と、
    前記第２のフィルムに当接され、前記第２の当接部との間に前記バッグを挟むことで、前記第１の空間と前記第２の空間とを隔てる隔壁の他の一部及び前記連通部を形成する隔壁の他の一部を形成する第４の当接部と、
    を含む請求項５または請求項６に記載のバッグ把持用クリップ。
  11. 前記第１の当接部と前記第２の当接部との相対的な位置を固定する第１の固定部と、
    前記第３の当接部と前記第４の当接部との相対的な位置を固定する第２の固定部と、
    を更に含む請求項１０に記載のバッグ把持用クリップ。
  12. 前記第１の当接部と前記第２の当接部との少なくとも一方をスライドさせることにより前記第１の当接部と前記第２の当接部との相対的な位置を変化させる第１のスライド機構と、
    前記第３の当接部と前記第４の当接部との少なくとも一方をスライドさせることにより前記第１の当接部と前記第２の当接部との相対的な位置を変化させる第１のスライド機構と、
    を更に含む請求項１１に記載のバッグ把持用クリップ。
  13. 請求項１から請求項１２のいずれか１項に記載のバッグ把持用クリップと、
    前記バッグ把持用クリップによって把持されたバッグと、
    を含む容器。
  14. 前記複数の空間の各々に接続された通気ポートを更に含む
    請求項１３に記載の容器。
  15. 第１のフィルムと前記第１のフィルムと対向する第２のフィルムとの間に収容空間を形成するバッグを把持した場合に、前記第１のフィルムと前記第２のフィルムを部分的に密着させる押圧力を前記バッグに加え、前記収容空間を、連通部を介して互いに連通した第１の空間と第２の空間とに分割する隔壁を形成するバッグ把持用クリップと、前記バッグ把持用クリップによって把持されたバッグと、を含む容器を用いて細胞懸濁液を撹拌する撹拌方法であって、
    前記バッグ把持用クリップで前記バッグを把持する第１のステップと、
    前記第１のステップの後に、前記第２の空間に細胞懸濁液を収容する第２のステップと、
    前記第１の空間と前記第２の空間との間に気圧差を形成して、前記第２の空間に収容された細胞懸濁液を、前記連通部を経由して前記第１の空間に移送する第３のステップと、
    を含む撹拌方法。
  16. 前記第３のステップの後に、前記第１の空間に収容された細胞懸濁液を、前記連通部を経由して前記第２の空間に移送する第４のステップを更に含む
    請求項１５に記載の撹拌方法。
  17. 前記第３のステップ及び前記第４のステップを交互に繰り返し実施する
    請求項１６に記載の撹拌方法。
  18. 前記バッグの内部に細胞懸濁液を収容した状態で、前記バッグ把持用クリップを前記バッグから取り外す第５のステップと、
    前記第５のステップの後に、前記バッグの内部に収容された細胞懸濁液を前記バッグの外部に排出する第６のステップと、
    を更に含む請求項１５から請求項１７のいずれか１項に記載の撹拌方法。
  19. 互いに対向する第１のフィルムと第２のフィルムを部分的に密着させる開閉可能なジップ機構を内部に有する容器であって、
    前記ジップ機構を閉状態とすることによって、前記容器の内部の収容空間を、連通部を介して互いに連通した複数の空間に分割する隔壁が形成される
    容器。
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