JP5366820B2 - 細胞培養に効果的な装置および方法 - Google Patents
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Description
本出願は、本明細書において参照として援用される米国特許仮出願第60/873,347号明細書(出願日:2006年12月7日)の利益を主張するものである。
本発明は、米国政府支援の下、国立衛生研究所の小企業革新技術研究(National Institutes of Health Small Business Innovative Research)の助成DK0659865「Islet culure, shipping, and infusion device」の一部としてなされた。米国政府は、本発明に権利を有する。
細胞培養は、バイオ技術の中心要素である。組織培養フラスコは、内部で接着細胞と非接着細胞の培養を可能とし、使い捨て可能であり、媒質をかん流するための機器を必要とせず静止モードで機能可能であるため、一般に細胞培養に用いられる装置である。従来型フラスコは、一つの培養区画を備える。従来型フラスコの設計では、培養時の気体交換のために装置内に気液界面が必要である。また、細胞への酸素供給が妨げられないように、培養基(培養媒質)は非常に低い位置になければならない。組織培養フラスコで推奨される媒質の高さは、2mm〜3mmである。しかし、フラスコ本体は、気体を保持し、かつ一般にピペットを用いて行われる媒質へのアクセスを可能にする、十分な大きさでなくてはならない。このため、フラスコ装置の容積は、保持する媒質の体積に比べて大きい。たとえば、一般のT−175フラスコの本体は、長さ約23cm、幅約11cm、高さ約3.7cmの設置面積を有し、約936cm3の空間を占める。しかし、一般には約50mlの媒質で動作する。フラスコ本体が占めるスペース(936cm3)に対してフラスコ本体内に媒質(50ml)が存在するということは、媒質がフラスコ容積のわずか約5%であることを表している。また、フラスコ本体が占める空間容積(936cm3)をフラスコに存在する(reside)細胞の表面積(175cm2)で割ると、フラスコが占
める空間容積は、細胞が存在し得る表面積の5倍を超えることを表している。フラスコは、細胞が存在し得る表面積をさまざまな大きさ(一般に25cm2から225cm2)にして製造されるため、培養能力はほんのわずかである。培養スケールの拡大時に用いるフラスコ数が増加するにつれ、わずかな媒質量に対してフラスコが占める空間の全容積と、フラスコの培養表面積に限りがあることとにより、空間使用が本質的に非効率的である。これは、輸送、滅菌、保管、培養装置のスペース、廃棄などに関係して過剰な経費を要し、培養処理の負荷となっている。この問題は、作業量およびコンタミネーションリスクを大幅に増すものである。
Fluoroseal(VueLife(商標)Culture Bag System、特許文献8および特許文献9に記載)により市販されている。気体透過性カートリッジは、側壁が硬いことを除き、バッグと同様に動作する装置である。市販の気体透過性カートリッジは、Laboratories MABIO−International(登録商標)が提供するCLINIcell(登録商標)Culture Cassettesと、BioChrystal Ltd.が提供するOpticell(登録商標)気体透過性カートリッジ(特許文献10および特許文献11)とがある。細胞が存在し得る表面積をより大きくするためには、バッグと同様に、これらの装置も水平方向に長くする必要がある。特許文献12において、Opticell(登録商標)の発明者は、複数の
気体透過性の区画を提案している。あいにくこの提案は、単に水平方向に培養区画を増加しただけである。これらの装置の培養能力を高めるには、培養区画数に関係なく、装置を水平方向に大きくする必要がある。上記の気体透過性の装置のうち、垂直方向で拡大可能なものはない。
ホールドは、培養区画内に保持された媒質が気体によって転移されないように構成されてもよい。また/あるいはマニホールドは、処理時に培養区画内に細胞を保持するように構成されてもよい。また/あるいはマニホールドは、培養区画内に媒質と気体を保持するように構成されてもよい。
本発明の別の態様において、培養区画の高さは可変である。
本発明の別の態様において、培養区画は連続して接続される。
本発明の別の態様において、周囲の気体と気体透過可能な多段装置の気体空間との接触は、選択的に終了、制限、または開放される。
本発明の別の態様において、培養区画の最底部の培養表面に細胞が存在するように気体透過可能な多段培養装置を配向する場合、顕微鏡による評価を容易にするために、一つの培養区画の少なくとも一部分はその真上に培養区画を備えない。
本発明の別の態様において、気体透過可能な多段装置は、不均一な培養状態の問題を解決する一方、市販の従来型多段フラスコの特徴を保持するように構成されてもよい。
1Aは、側壁を取り除いて培養区画20の内部を露出した斜視図である。図1Bは、気体透過可能な多段装置1の断面図である。培養区画20は、第1の壁110と、対向する第2の壁120とから構成される。第1の壁110、第2の壁120、あるいは第1の壁110と第2の壁120との両方は、気体透過性材料から構成されてもよい。従来の細胞培養バッグと同様に、第1の壁110と第2の壁120は、側壁の必要なく固定されてもよい。側壁は、培養区画全体において、培養区画の第1の壁と第2の壁との距離を一様にするものであることが望ましい。また、選択した壁および側壁が気体透過性材料からなる場合、気体透過可能な多段装置は、第1の壁、第2の壁、または側面のいずれかが下になるなど、さまざまな位置で機能するように配向されてもよい。これによって、どの壁の付近でも細胞が存在可能となる。培養区画の長さ、高さ、および幅が異なる場合、気体透過可能な多段培養装置は、植菌時および/または培養時の位置を変えることによって、細胞上の媒質の高さを特異なものとし、また/あるいは表面積に対する媒質の比を特異なものとすることができる。植菌時の配向によっては、細胞は培養区画内のどの表面に対して引き寄せられてもよい。たとえば、図1Bに示す位置の場合、細胞は第2の壁120に対して引き寄せられる。細胞が接触する表面は、単に培養区画の壁の内表面であってもよい。しかし、細胞の存在する材料の所望の組成と形状は、培養区画の壁の内表面で見られるものではない場合もある。この場合、構成要素、挿入物、マトリクス、または所望の材料および形状であるものを、気体透過可能な多段装置に組み込んでもよい。このため、培養表面130は、単にある培養区画の壁の内表面であってもよい。あるいは、構成要素、挿入物、マトリクスや、培養区画内に存在するものであってもよい。本出願においては、発明の範囲を限定するのではなく単に便宜上、培養表面130を装置の壁の内表面として示す。
ってもよい。あるいは、フィブロネクチン、またはコラーゲンマトリクスの挿入物などのように、壁に貼り付いていてもよく、貼りついていなくてもよい。細胞培養と組織培養の技術分野における当業者に周知のものであるかぎり、どのような培養表面を用いてもよい。
益な場合がある。この最適な距離は、培養の代謝要求と、所望の媒質交換頻度とに依存する。
場合がある。形状または容積を変えるようにマニホールドを構成する場合、コンタミネーションを生じないようにすべきである。これは、柔軟壁によって、またはガスケットもしくはOリングの使用などによって可能である。たとえば、共通のマニホールドで複数の培養区画に細胞を供給し、培養区画から培養区画への、またはある培養区画からマニホールドへの細胞の移動を防ぐことが好ましい場合がある。培養区画から細胞が不意に抜け出るような位置に培養区画が配向されるよう装置を操作する場合、培養区画の一つまたは複数の開口部を閉じるとこのような細胞の移動を防ぐことができる。別の例として、培養区画内に細胞が付着しており、供給頻度を最小にするためにより多くの媒質量が有用な場合などは、使用時のある時点で、マニホールド内の媒質量を変更することが助けとなる場合がある。この場合、マニホールドは容積が増加するように構成されてもよい。他の用途において、たとえば媒質量に対する培養表面の所望比が、培養区画より低い位置での媒質の存在を表す場合など、培養区画全体を媒質で充填させないことが利点となる場合もある。図7Aと図7Bは、これらの目的がどのように達成され得るかを示す。図7Aにおいて、気体透過可能な多段装置4のマニホールド壁62が、第1の位置にある。第1の位置において、細胞と媒質はアクセスポート70を介し、マニホールド60を経由して培養区画20に導入される。図7Bは、第2の位置にあるマニホールドを示す。第2の位置において、マニホールド60は狭まり培養区画20の開口部を閉じ、細胞または媒質が培養区画20から出るのを防いでいる。培養区画20は、媒質と気体が培養区画20に存在するように、媒質で部分的に充填されてもよい。また、媒質がマニホールド60に逃げないように、マニホールド壁62は図7Bに示す位置に移動されてもよい。しかしながら、本実施形態によると、マニホールド壁62を移動させる必要なく、気体透過可能な多段装置4全体を媒質で充填させることもできる。
により、第2の壁120への損傷を防ぐことができる。脚部135はどの実施形態に設けられてもよく、ある装置を別の装置の上に連結できるように装置の上壁を改変してもよい。
ために、培養区画支持体は培養区画の壁と接触している。接触点の数、接触点間の距離、および培養区画支持体と直接接触する気体透過性材料の表面積の大きさは、考慮すべき設計事項である。実施例1と実施例2において、補足説明を行う。
たは壁110から突き出た隆起である例を示している。内部スペーサは、さまざまな方法で構成されることを当業者には理解されたい。ただし、媒質が培養区画に出入りするのを妨げない方法に限る。
置内の細胞数または組織数を考慮すべきである。
するものであることが好ましい。また、コンタミネーションおよびpH値を目視確認できるように光透過性を備えたものが望ましい。倒立顕微鏡で観測する表面の場合、SPE2またはそれ以上の表面を形成することが好ましい。
s(米国特許第5,503,741号明細書)を、好ましい構造を備えた培養装置として使用することも可能である。ここで好ましい構造とは、透析膜の一方もしくは両方と接触する気体空間を含む構造であり、気体空間に連通する、滅菌フィルタで覆われた気体空間連絡開口部を用いる構造である。
きる。このため、モジュール式の装置設計が可能な統合型培養区画となる。フランジ21は、別のシリコーン表面に接着されてもよく、あるいはどの表面に固定されてもよく、一連の培養区画がマニホールド壁へ取り付け可能な状態となる。あるいは、一連の培養区画をマニホールド壁へ取り付ける場合、剛性板をフランジの前部、フランジの後部に配置し、両方の剛性板を取り付け、これらの部分的に組み立てたものをマニホールド壁へ連結することによって組み付け可能な状態としてもよい。組み付け前に、いずれの代替培養表面を培養区画内に配置してもよい。統合型培養区画は、一つの培養区画に限られなくてもよい。複数の培養区画を統合体として成形し、モジュール式の組み付けが可能な統合型培養区画を形成してもよい。気体透過が所望される領域の厚さは、約0.5588mm(約0.022インチ)以下であることが好ましい。より好ましくは0.254mm(0.010インチ)、高度な培養が望まれる場合、最も好ましくは約0.2032mm(約0.008インチ)未満である。しかし、細胞が高い酸素量を必要としないとき、より厚くても有用である。シリコーンの断面が厚いと作製し易く、一般にシリコーンの厚さが大きいほどより作製しやすい。しかし、上壁と下壁の厚さを約0.1777mm(約0.007インチ)とする、ジメチルシリコーンの統合型培養区画を作製することが可能であった。また、側壁の厚さを約0.1016mm(約0.004インチ)とする、ジメチルシリコーンの統合型培養区画を作製することも可能であった。図には複数のフランジを示しているが、統合型培養区画は複数のフランジを備えていなくてもよい。このため、一つのマニホールドが所望される場合、容器は袋小路型であってもよい。
であるが、もしこの表面がシリコーンのみからなるものであれば、本来よりも細胞培養区画への気体移動が妨げられる。このため、細胞が存在するように意図される(一つまたは複数の)培養表面は、気体移動が十分可能となるよう薄くなくてはならない。細胞が存在するポリスチレンの領域は、厚さが約0.0762mm(約0.003インチ)であることが好ましい。このアプローチにより、接合部の数や漏れの可能性を減らし、かつどのような用途にも適切な培養表面を形成することができる。
は、図8Aと図8Bと同様に、本体全体を貫通する開口部であってもよい。また、気体空間251は装置全体を貫通する必要はなく、装置内で行き止まりになっていてもよい。また、気体空間251のいずれの壁が気体透過性を備えていてもよい。しかし、従来型多段フラスコの不均一な培養状態を克服するために、気体空間上壁210が気体透過性を備える必要はない。すなわち、気体空間251の他のいずれかの壁が気体透過性材料からなる場合は、気体空間上壁210は気体透過性を備えていなくてもよい。たとえば、気体空間251の他の壁のうち、少なくとも一つの壁が十分に気体を移動させる材料からなるかぎり、気体空間上壁210はポリスチレンであってもよく、十分に気体を移動させない厚さであってもよい。装置本体内の各場所に気体を均一に移動させることにより、気液交換を行う気液界面を用いて従来型細胞培養が可能となり、従来型多段フラスコに比べてより均一な気体環境で行える。気体透過可能な多段装置の動作は、従来型多段フラスコと同様である必要はない。気体空間上壁210が気体透過性材料からなる場合、気液界面から独立して気体搬送が可能となる。気体空間上壁210は、側壁225と結合されて細胞培養区画を形成してもよい。たとえば、供給頻度を最小にするために、または蒸発によるオスモル濃度の変化を遅らせるために媒質の高さを上げたい場合、Wilson等による814号明細書に記載のとおり培養区画側壁225の高さも上げられるならば、媒質をどの高さまで上げてもよい。
気体透過性の多段フラスコが、不均一な培養条件の存在する可能性を最小化しつつ、従来のフラスコによる輸送、滅菌、保管、インキュベータおよび廃棄空間の過度の使用を解決する容量を有することを定量的に実証するために、実施例1および実施例2によって培養区画支持体の相異なる形状について評価した。
酸素要求量の非常に高い培養物用の培養区画支持体構造
膵島培養物(酸素要求量が最も高い種類の培養物のうちの1つであると知られている)における改良を可能とする培養区画支持体の物理的な構造について、約0.183mm(約0.0072インチ)であると測定された平均厚と98cm2の表面積とを有する成型されたジメチルシリコーンシートで構成された下壁を有する試験装置を構成することによって実証した。ジメチルシリコーンゴムの気体透過率については、MOCON社(ミネソタ州、ミネアポリス)のOxtran 2/21装置を用いることによって、ASTM−1927に従い、37℃で約14,300mlO2/645cm2(100平方インチ)
/24時間と決定した。ジメチルシリコーンを支持する培養区画は、シリコーンに直接接触した厚さ0.048cm、開度46%のメッシュで構成した。この開放メッシュは、水平および垂直に約2.54cm(1インチ)あたり16本のストランドが存在するように垂直方向および水平方向に配置した、一連のポリプロピレンストランド(各々、約0.457〜0.508mm(0.018〜0.020インチ)厚の直径を有する)で構成した。このメッシュを、均一に分布した突起を有する厚さ0.19cmの成型されたポリカーボネートプラスチックシートによって、適所に保持した。この突起がシートの上にメッシュを持ち上げるので、膜の下に気体空間が存在した。各突起の形状は、それぞれの脚が120度離れて配向した均一な「Y」字形であった。各脚の長さは0.45cmであり、幅は0.127cmであった。したがって、メッシュを支持するために利用可能な各突起の表面積は約0.175cm2であった。cm2あたり約1.1個の突起が存在した。したがって、メッシュを支持するために利用可能な突起の累積表面積は約18.87cm2であった。各突起の高さはプラスチックシートから0.127cmであった。気体空間は、シリコーンの下部とプラスチックシートの上部との間に存在した。突起によって排除される気体の累積体積は2.4cm3であった。メッシュによって排除される気体の累積体積は2.54cm3であった。したがって、シリコーン膜の下かつプラスチックシートの上に存在する気体は、約17.2mlであった。気体透過性膜の表面積に対するシリコーン膜の下かつプラスチックシートの上に存在する気体の比は、17.6%であった。プラスチックシートは気体連絡開口部として働く貫通孔を含み、各孔の断面は、受動拡散によって雰囲気気体が気体空間に連通することを可能とするために、プラスチックシートの面に対し垂直に配向された。均一に離間して配置された5つの貫通孔は、ジメチルシリコーンの98cm2の表面積の下に存在し、各々断面積0.29cm2および長さ約1.91mm(0.075インチ)を有する貫通孔によって、1.45cm2の累積断面積が得られた。したがって、シリコーン膜の断面積に対する貫通孔の断面積の比は、約1.45cm2/98cm2、すなわち、約1.48%であった。シリコーン膜とプラスチックシートの上面との間に存在する気体の体積に対する貫通孔の断面積の比は、したがって、1.45cm2/17.2ml、すなわち、約8.4%であった。脚部は、プラスチックシートの下部を0.51cm持ち上げた。したがって、シリコーン膜の下に存在する培養区画支持体の全高は、0.87cmであった。
フラスココントロール…酸素化を気液界面に依存した装置であり、0.2cmの最大溶媒深度を得るために、IEにより1000IE/mlの溶媒比まで最大200IE/cm2で接種を行った。このコントロールは、GP装置とフラスコにおける標準的な膵島培養法とを比較するために用いられる。
IE(膵島当量)…膵島の大きさの尺度であり、直径150μmの膵島の大きさに等しい。隔離したばかりの膵島は、その血管が崩壊するにつれ、体積が減少し、密度が増大する。したがって、IEの大きさは0日と2日とで同じでも、質量は同じでない。
手作業での集計によるIE…IEの数は、従来、手作業での集計によって測定されており、この集計では、膵島がどれほど均一であるかまたは密集しているかについては無視する。0日のDNAによるIEは、18のブタ膵島分離における手作業での集計によるIE(49〜93%)の63±12%だった。数は培養物における膵島の大きさが低下するにつれ通常収束するが、手作業での集計は誤りが生じ易いので、必ずしもそのようになるとは限らない。他に注記のない限り、「IE」は、従来のように手作業での集計によって測
定されるIEを指す。
膵島表面密度…所与の表面積において培養される膵島の大きさであり、IE/cm2として表される。直径150μmの膵島の融合性正方形アレイは、4444IE/cm2を有する。
非GP装置…GP装置と同一の形状に構成されているが、気体透過性の膜を備えていない制御装置(GP装置と同一の培養条件による実験のコントロールとして、気体透過性の膜の特徴の利益を定量するために用いられる)。
OCR…酸素消費速度であって、nmol/minで表される。生存可能な膵島の質量の尺度。
p値…報告されるp値は、両側の、対応のあるスチューデントのt検定におけるものである。
必要とされるIEに対する溶媒の体積の比を決定するために、ブタの膵島を用いて初期評価を行った。ブタの膵島を、200IE/cm2にて、18cm2のジメチルシリコーン表面積を有する小型のGP装置中、37℃で2日間培養し、1μl/IEおよび4μl/IEで溶媒稀釈を行ったところ、OCR/DNAによる評価では、膵島の生存可能性に統計的な差は見られなかった。5つのブタ分離物について、4μl/IEでのOCR/DNAは1μl/IEでOCR/DNAの97.5%〜102.4%であり、結合平均は101%であった。この知見に基づき、実施例1および実施例2に記載の評価の多くでは、1μl/IEの溶媒希釈比を用いた。
の培養区画支持体の対向する側に存在し、培養区画支持体に沿って、次いで細胞が存在する表面に対して垂直に、受動的に移動し、細胞が存在する気体透過性表面の下方で受動的に循環することを可能とし、従来の培養装置において可能であるのの7倍を超えて膵島を支持するのに充分な酸素を送るように構成されることが可能である。
実施例1とは異なる培養区画支持体の物理的構造について、別の膵島培養用途により検査した。この実施例において、試験装置の備える気体透過性材料は、実施例1のものと実質的に同一であった。ジメチルシリコーンを支持する培養区画は、シリコーンに直接接触した開放メッシュで構成し、機械加工したポリカーボネートプラスチックシートでメッシュをほぼ水平の位置に支持した。実施例1の培養区画支持体と異なり、メッシュはプラスチックシートの上面に直接存在していた。メッシュの形状および材料の組成は、実施例1のものと同一であった。シリコーン膜の表面積のcm2あたり、シリコーンの下面とプラスチック下部の上面との間の気体の体積は、メッシュによる排除の後、0.022mlであった。換言すると、気体透過性の膜の表面積に対するプラスチックシートと気体透過性の膜との間の気体体積の比は、2.2%であった。受動拡散によって雰囲気気体が気体空間と連通することを可能とするために、気体連絡開口部として働く貫通孔をプラスチックの下部に設けた。各貫通孔の断面はメッシュの平面に対し垂直に配向していた。各貫通孔の直径は約3.18mm(0.125インチ)であった。貫通孔は、各孔の中心間の距離が約9.53mm(0.375インチ)となるように、ジメチルシリコーンの下において格子状に均一に離間して配置した。各貫通孔の長さは約3.30mm(0.13インチ)であった。シリコーン膜の断面積に対する貫通孔の断面積の比は、膜表面の面積の約16%であった。プラスチックシートと気体透過性膜との間の気体体積に対する貫通孔の断面積の比は、273%であった。メッシュの高さは約0.483mm(約0.019インチ)であったので、ジメチルシリコーンとプラスチックの下部の下に存在する気体との間の累積的な距離は、約3.81mm(約0.15インチ)であった。8つの均一に分布した脚部は、プラスチックの下部の周囲の部分をそれが存在していた棚の表面から0.41cm持ち上げた。下部の周囲は23.94cmであった。プラスチックの下部の下側とそれが存在することによって雰囲気気体の移動に対し開放されている表面との間の断面積は、7.59cm2であった。気体移動に対する制限要因としての脚部を無視すると、気体透過性のジメチルシリコーンの位置への気体移動に対し開放された周囲の辺りの断面積は、9.85cm2であった。以上、培養区画支持体の高さは約1.27cm(約0.5インチ)であった。
的な気体移送を可能とする代替形状の培養区画支持体の性能について実証した。
図20の断面図に示すように、試験装置162を構成した。ジメチルシリコーンから試験サンプル165を作製し、部材167(COSTAR(登録商標)3516)として示す市販のポリスチレン組織処理した6穴プレートの本体の上部の上に配置した。次いで、6穴プレート167の上にポリスチレン蓋168を置いた。蓋の内面169および組織培養処理した表面166上のシリコーンの遊出をガンマ線照射前に試験サンプル165のプ
ラズマ処理を行うことによって最小化する性能について評価した。試験サンプル165は、組織培養処理した表面166から約1.78cmで、蓋の内面169から2mm未満の距離に存在した。1つの評価では、試験装置162内に配置する前に試験サンプル165をプラズマ処理に晒した。プラズマ電荷の存在は、水滴の接触角が96度であり、界面エネルギーが300μN(30ダイン)未満であることによって確認した。別の評価では、試験装置162内に配置する前に試験サンプル165をプラズマ放電に晒さなかった。いずれの評価においても、このアセンブリを続いてガンマ線照射に晒した。その後、化学分析用電子分光法(ESCA)によって様々な表面の元素組成の定量を行った。コントロールの6穴プレート(ガンマ線照射していないシリコーン試験サンプル165)の組織培養処理した表面と比較したシリコーン、酸素および炭素の存在について、組織培養処理した表面166を評価した。シリコーンの存在について蓋の内面169を評価した。結果をテーブル1にまとめる。
細胞培養装置を製造する単純化された方法が可能である。例えば、シリコーンの外筐体を成型し、細胞が存在する処理済みのポリスチレンシートを挿入することによって、普通のフラスコまたはOpticell(商標)の気体透過性カートリッジなど、単一の隔室装置を製造することが可能である。シリコーンの独特な伸び性能によって、開口部を、それによって通じて培養物表面が追加される挿入部品よりも小さくして、折り曲げて部品の挿入後にポート形状に戻すことが可能となる。成型されたシリコーンには隔壁が存在してもよく、他の型のアクセスポートが存在してもよい。普通のフラスコの場合、気体透過性シリコーンの使用によって酸素化への気液界面アプローチが除外されるので、フラスコの高さを充分に減少させることが可能である。図17Aを参照すると、第1の壁110が気体透過性シリコーンであり、培養物表面130は組織培養処理したポリスチレンなど付着性の表面であるとき、さらなる多目的性が得られる。この場合、上述のように、装置は第1の壁110を培養物懸濁液セルまで下るように配向させ、培養物表面130を培養物粘着セルまで、または培養物粘着セルおよび懸濁液セルまで下るように配向させる。粘着セルの共培養が所望される場合、第1の壁110に隣接して、極薄の気体透過性ポリスチレンなど、さらなる培養表面を挿入することが可能である。装置の高さは、培養を最適化するのに必要な、様々な表面積対溶媒体積の比を可能とするように増大されてよい。襞のある側壁を備えた装置を作製することによって、体積を使用者に必要であるように変化させることが可能となる。気体透過性の多段フラスコは、これらの利点を併せ持ってもよい。
Claims (10)
- 細胞増殖装置であって、
第1の壁と、該第1の壁に対向する第2の壁とを有する複数の培養区画を備え、
前記第2の壁は、少なくともその一部分が気体透過性材料から構成され、
前記複数の培養区画同士は気体空間によって少なくともその一部分が分離されるとともに、培養区画支持体が、前記気体空間に配置され、
前記複数の培養区画は互いに上下方向に配置されているとともに少なくとも一つのマニホールドによって接続され、
前記培養区画支持体は、前記第2の壁の下方に存在し、前記気体透過性材料と部分的に接触し、
前記培養区画支持体は、強制気体流動を必要とせずに受動拡散によって雰囲気気体が前記気体空間に連通することを可能とする気体連絡開口部としての貫通孔を含み、
前記気体空間は強制気体流動に適合せず、
前記少なくとも一つのマニホールドは、第1の位置に配置され得るとともに空間容積をふさぐマニホールド壁を有し、該第1の位置は、細胞および媒質が前記細胞増殖装置に導入され得る位置であり、
前記マニホールド壁は、前記空間容積が低下する第2の位置に移動可能である、
細胞増殖装置。 - 前記マニホールドは、該マニホールドの形状を選択的に変えられるように、少なくとも一つの柔軟壁、複数のガスケット、および複数のOリングのうちの少なくとも一つを備えている、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 前記複数の培養区画は、前記2つのマニホールド間に平行に接続されている、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 前記培養区画の高さを変更可能とする拡張可能な壁をさらに備えている、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 前記培養区画支持体は取り外し可能である、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 気体空間ハウジングをさらに備えている、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 気体交換制御リムをさらに備えている、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 少なくとも一つの前記培養区画は他の前記培養区画から位置がずれている、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 前記マニホールドにガストラップをさらに備えている、請求項1に記載の細胞増殖装置。
- 前記ガストラップの少なくとも一部は、最上部の前記培養区画の位置よりも高い、請求項9に記載の細胞増殖装置。
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