JPWO2014080640A1 - エリスロポエチン発現増強剤 - Google Patents

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Abstract

本発明は、エリスロポエチン産生の抑制を解除することやエリスロポエチン産生を促進することができる、エリスロポエチン発現増強剤や、かかるエリスロポエチン発現増強剤を含む、貧血の治療・予防薬、肝機能改善剤、虚血障害改善剤、腎保護剤、及びインスリン分泌促進剤を提供する。以下の一般式（Ｉ）、一般式（II）、及び、一般式（III）で表される化合物、並びに、Ｒ３がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含むものを、エリスロポエチン発現増強剤とする。【化１】

Description

本発明は、エリスロポエチン発現増強剤やエリスロポエチン発現増強剤を含む、貧血の治療・予防薬、肝機能改善剤、虚血障害改善剤、腎保護剤、インスリン分泌促進剤等に関する。
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、赤血球系幹細胞の分化誘導を刺激し、赤血球の産生を促進する糖タンパク質（ホルモン）であり、その約９割が腎臓で産生される。
エリスロポエチン遺伝子の転写を促進する因子として、低酸素誘導因子（Hypoxia inducible factor；ＨＩＦ）が知られている。ＨＩＦは、酸素調節αサブユニット（ＨＩＦ−α）と構成的に発現するβサブユニット（ＨＩＦ−β）を有するヘテロダイマーからなるタンパク質である。他方、エリスロポエチン遺伝子の転写を抑制する因子として、ＧＡＴＡ２、３などのＧＡＴＡ因子が知られている。ＧＡＴＡ因子は、エリスロポエチン遺伝子の上流に存在するＧＡＴＡ配列に結合するタンパク質である。通常の酸素存在下では、プロリン水酸化酵素（Proline hydroxylase；ＰＨＤ）によってＨＩＦ−αのプロリンが水酸化され、von Hippel-Lindau（ＶＨＬ）と結合することによりユビキチン化により分解されるため、ＧＡＴＡ３が有意に作用しエリスロポエチン遺伝子の転写が抑制されるが、低酸素下では、ＰＨＤの基質となる酸素が不足するため、ＨＩＦ−αはＰＨＤによる水酸化を受けず、分解されないため、ＨＩＦが有意に作用しエリスロポエチン遺伝子の転写が促進される。
エリスロポエチン遺伝子の転写は、膠原病（慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等）や慢性感染症（結核、感染性心内膜炎、肝膿瘍等）などの慢性炎症において抑制されることが知られている。具体的には、慢性炎症によりinterleukin-1β（ＩＬ１β）やtumor necrosis factor-α（ＴＮＦα）などの炎症性サイトカインが放出されると、炎症性サイトカインが直接赤血球産生を抑制するとともに、エリスロポエチン遺伝子の上流に結合するＧＡＴＡ因子の結合活性を増加させるため、エリスロポエチン産生が抑制される。その結果、赤血球産生が低下し、貧血症状を呈する。また、慢性腎不全や甲状腺機能低下症などの疾患においても同様に、エリスロポエチン産生が低下することが知られている。このような疾患における貧血を治療することや、疾患の症状を改善するために、通常、遺伝子組換えヒトエリスロポエチンの投与による補充療法が用いられる。しかし、エリスロポエチン製剤は高価で、頻回の注射が必要であるなどの問題があった。
最近、ＰＨＤの阻害作用を有するトリアゾロピリジン化合物や、かかるトリアゾロピリジン化合物によりエリスロポエチン産生が誘導されることが報告されている（特許文献１）。
また、本発明者らは、尿毒症物質のひとつであるインドキシル硫酸（ＩＳ；Indoxyl Sulfate）が、ＧＡＴＡ３の発現を促進することや、ＩＳを活性炭（クレメジン）で吸着・排除すると内因性エリスロポエチンの発現が増強することを報告している（特許文献２）。
特開２０１２−１４４５７１号公報 特開２０１２−８２１８１号公報
本発明の課題は、［１］エリスロポエチン産生の抑制を解除することやエリスロポエチン産生を促進することができる、エリスロポエチン発現増強剤や、かかるエリスロポエチン発現増強剤を含む、貧血の治療・予防薬、肝機能改善剤、虚血障害改善剤、腎保護剤、及びインスリン分泌促進剤や、ミトコンドリア病の治療剤を提供することにある。また、本発明の別の課題は、［２］ＡＴＰ産生を促進することができる、ＡＴＰ産生促進剤を提供することにある。
本発明者らは、上記課題［１］を解決すべく鋭意研究を続けている。その過程において、オーキシンと呼ばれる植物ホルモンの一種であるインドール−３−酢酸（indole-3-acetic acid；ＩＡＡ）や１−ナフタレン酢酸（1-Naphthylacetic Acid；ＮＡＡ）が、オーキシン応答遺伝子の転写抑制因子ＡＵＸ／ＩＡＡのユビキチン化を誘導し、ＡＵＸ／ＩＡＡが分解されることにより、転写活性化因子ＡＲＦによるオーキシン応答遺伝子の発現が解除・促進されるメカニズム（オーキシン遺伝子発現制御機構）と、エリスロポエチン遺伝子の転写抑制因子ＧＡＴＡ３がユビキチン化され、ＧＡＴＡ３が分解されることにより、転写活性化因子ＨＩＦによるエリスロポエチン遺伝子の発現が解除・促進されるメカニズム（エリスロポエチン遺伝子発現制御機構）との共通点に着目した。そして、エリスロポエチン遺伝子の発現解除・促進させる化合物が、インドール酢酸誘導体やナフタレン酢酸誘導体の中に存在するのではないかと考え、インドール酢酸誘導体やナフタレン酢酸誘導体の中から長年の経験や勘に頼りながら４１種類の化合物を選定・合成し、かかる化合物を用いてエリスロポエチン発現増強作用、すなわちＴＮＦαによるエリスロポエチン産生抑制の解除作用や、エリスロポエチン産生促進作用やエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進作用について検討したところ、１１種類の化合物（実施例で後述する化合物＃２１〜２５、及び３３〜３８）がＴＮＦαによるエリスロポエチン産生抑制の解除効果を有することを見いだした。また、９種類の化合物（実施例で後述する化合物＃２、４、１３〜１５、及び１７〜２０）が高いエリスロポエチン産生促進効果を有することを確認した。また、５種類の化合物（実施例で後述する化合物＃２、４、５、１８、及び２１）が高いエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進効果を有することが確かめられた。また、エリスロポエチン発現増強効果が特に高かった化合物＃４を用いて詳細に解析を行ったところ、化合物＃４がさらに肝機能改善効果、脳虚血障害改善効果、腎保護効果、及びインスリン分泌促進効果を有することも見いだした。さらに、５種類の化合物（実施例で後述する化合物＃２、４、５、２１及び３５）がミトコンドリア病患者の酸化ストレスによる細胞死を抑制できることも見いだした。本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
エリスロポエチンは、腎臓、脳などの臓器における虚血障害に対して保護作用を有することが知られている。また、脳虚血部位では、ＡＴＰ濃度が低下することも知られている。本発明者らは、上記課題［２］を解決すべく鋭意研究する中で、エリスロポエチンによる虚血臓器障害に対する保護作用機序において、細胞内のＡＴＰ濃度が上昇するのではないかと考え、エリスロポエチン発現増強剤のスクリーニングに用いた上記４１種類の化合物を、ＡＴＰ産生促進剤のスクリーニングに用いて検討したところ、３６種類の化合物（実施例で後述する化合物＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３９）が高いＡＴＰ産生促進効果を有することを見いだし、発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、（１）以下の一般式（Ｉ）；
［式中、Ｒ１はベンゼン環が非置換若しくは炭素数１〜７のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基、非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基、又はフェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンを表し、前記フェニル基はさらに１以上のフェニル基で置換されていてもよく、Ｒ２はインドールの４，５，６及び／又は７位に置換する水素、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素、塩素からなる群から選択され、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
一般式（II）の化合物；
［式中、Ｒ６は水素又はメチル基であり、Ｘは炭素数４〜６のアルキレン基、若しくは炭素数４のエーテル基であり、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
、及び、一般式（III）；
［式中、Ａはインドール若しくはナフタレンを表し、Ａがインドールのとき、インドールの３位及びに５位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ａがナフタレンのとき、ナフタレンの１位及び７位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ｒ７は炭素数１〜５のアルキル基又はベンジル基を表し、該ベンジル基のベンゼン環は１又は２以上の炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されていてもよく、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
で表される化合物、並びに、Ｒ３がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群（以下、これらを総称して「本件化合物群１」ということがある）から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、エリスロポエチン発現増強剤に関する。
また本発明は、（２）炎症性サイトカインによるエリスロポエチン発現抑制の解除作用、及び／又は、エリスロポエチン発現促進作用を有することを特徴とする上記（１）に記載のエリスロポエチン発現増強剤や、（３）炎症性サイトカインがＴＮＦαであることを特徴とする上記（２）に記載のエリスロポエチン発現増強剤や、（４）化合物が、以下の式（Ｉ−１）、（Ｉ−２）又は（III−１）で表される化合物（それぞれ実施例で後述する化合物＃４、２１、３５）若しくはそれらの医薬的に許容される塩であることを特徴とする上記（１）〜（３）のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤に関する。
式（Ｉ−１）；
式（Ｉ−２）；
式（III−１）；
また本発明は、（５）上記（１）〜（４）のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする貧血の治療・予防薬に関する。
また本発明は、（６）上記（１）〜（４）のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする肝機能改善剤に関する。
また本発明は、（７）上記（１）〜（４）のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする虚血障害改善剤に関する。
また本発明は、（８）上記（１）〜（４）のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする腎保護剤に関する。
また本発明は、（９）上記（１）〜（４）のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とするインスリン分泌促進剤に関する。
また本発明は、（１０）本件化合物群１から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、ミトコンドリア病の治療剤や、（１１）化合物が、以下の式（Ｉ−１）、（Ｉ−１’’’）、（Ｉ−１’’’’）、（Ｉ−２）又は（III−１）で表される化合物若しくはそれらの医薬的に許容される塩であることを特徴とする上記（１０）に記載のミトコンドリア病の治療剤に関する。
式（Ｉ−１）（実施例で後述する化合物＃４）；
式（Ｉ−１’’’）（実施例で後述する化合物＃２）；
式（Ｉ−１’’’’）（実施例で後述する化合物＃５）；
式（Ｉ−２）（実施例で後述する化合物＃２１）；
式（III−１）（実施例で後述する化合物＃３５）；
また本発明は、（１２）以下の式（Ｉ−１’）、（Ｉ−１’’）、（Ｉ−２）、（Ｉ−２’）、（Ｉ−２’’）、（Ｉ−２’’’）、（Ｉ−３）、（Ｉ−３’）、（II−２）、（III−１）、又は（IV−１）で表される化合物若しくはそれらの医薬的に許容される塩に関する。
式（Ｉ−１’）（実施例で後述する化合物＃１）；
式（Ｉ−１’’）（実施例で後述する化合物＃７）；
式（Ｉ−２）（実施例で後述する化合物＃２１）；
式（Ｉ−２’）（実施例で後述する化合物＃１７）；
式（Ｉ−２’’）（実施例で後述する化合物＃１８）；
式（Ｉ−２’’’）（実施例で後述する化合物＃１９）；
式（Ｉ−３）（実施例で後述する化合物＃２２）；
式（Ｉ−３’）（実施例で後述する化合物＃９）；
式（II−２）（実施例で後述する化合物＃１３）；
式（III−１）（実施例で後述する化合物＃３５）；
式（IV−１）（実施例で後述する化合物＃３０）；
また本発明の実施の他の形態として、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を、エリスロポエチン発現の増強を必要とする患者に投与することにより、エリスロポエチン発現低下やエリスロポエチン反応性低下に起因する貧血などの疾患を治療する方法や、エリスロポエチン発現増強剤として使用するための本件化合物群１や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を製造するための本件化合物群１の使用を挙げることができる。
また本発明の実施の他の形態として、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を、肝機能改善を必要とする患者に投与することにより、肝機能低下や肝機能障害を治療する方法や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含む肝機能改善剤として使用するための本件化合物群１や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含む肝機能改善剤を製造するための本件化合物群１の使用を挙げることができる。
また本発明の実施の他の形態として、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を、虚血障害の改善（抑制）を必要とする患者に投与することにより、虚血障害を治療・予防する方法や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含む虚血障害改善剤として使用するための本件化合物群１や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含む虚血障害改善剤を製造するための本件化合物群１の使用を挙げることができる。
また本発明の実施の他の形態として、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を、腎機能保護を必要とする患者に投与することにより、腎障害を治療・予防する方法や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含む腎保護剤として使用するための本件化合物群１や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含む腎保護剤を製造するための本件化合物群１の使用を挙げることができる。
また本発明の実施の他の形態として、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を、インスリン分泌促進を必要とする患者に投与することにより、インスリン分泌低下やインスリン感受性低下に起因する疾患を治療する方法や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含むインスリン分泌促進剤として使用するための本件化合物群１や、上記本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含むインスリン分泌促進剤を製造するための本件化合物群１の使用を挙げることができる。
また本発明の実施の他の形態として、上記本発明のミトコンドリア病の治療剤を、ミトコンドリア病の治療を必要とする患者に投与することにより、ミトコンドリア病を治療する方法や、上記本発明のミトコンドリア病の治療剤として使用するための本件化合物群１や、上記本発明のミトコンドリア病の治療剤を製造するための本件化合物群１の使用を挙げることができる。
さらに本発明の実施の他の形態として、［１］以下の一般式（ｉ）；
［式中、Ｒ８はベンゼン環が非置換若しくは炭素数１〜７のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基、非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基、又は４−Ｎ−アセチルピペリジニル基、フェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンを表し、前記フェニル基はさらに１以上のフェニル基で置換されていてもよく、Ｒ９は水素、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシル基、フッ素、塩素からなる群から選択され、Ｒ１０は水素若しくは鎖状又は分枝状の炭素数１〜３のアルキル基を表し、Ｒ１１はＯＨ、ＯＲ１２、ＮＨＲ１２及びＮＲ１２Ｒ１３のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ１２及びＲ１３は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
、一般式（ii）；
［式中、Ｒ１４は水素又はメチル基であり、Ｘは炭素数４〜６のアルキレン基、若しくは炭素数４のエーテル基であり、Ｒ１５はｔｅｒｔ−ブトキシ基又は２−Ｎ−アセチルピロリジニルオキシ基を表し、Ｒ１１はＯＨ、ＯＲ１２、ＮＨＲ１２及びＮＲ１２Ｒ１３のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ１２及びＲ１３は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
、一般式（iii）；
［式中、Ａはインドール若しくはナフタレンを表し、Ａがインドールのとき、インドールの３位及びに５位に、それぞれ酢酸基及びＲ１６Ｏが置換されており、Ａがナフタレンのとき、ナフタレンの１位及び７位に、それぞれ酢酸基及びＲ１６Ｏが置換されており、Ｒ１６は鎖状又は分枝状の炭素数１〜７のアルキル基又はベンジル基を表し、該ベンジル基のベンゼン環は１又は２以上の炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されていてもよく、Ｒ１１はＯＨ、ＯＲ１２、ＮＨＲ１２及びＮＲ１２Ｒ１３のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ１２及びＲ１３は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
、一般式（iv）；
［式中、Ｒ１７は直鎖状の炭素数１〜７のアルキル基を表し、Ｒ１１はＯＨ、ＯＲ１２、ＮＨＲ１２及びＮＲ１２Ｒ１３のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ１２及びＲ１３は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
、一般式（ｖ）；
［式中、Ｒ１１はＯＨ、ＯＲ１２、ＮＨＲ１２及びＮＲ１２Ｒ１３のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ１２及びＲ１３は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
、及び、式（vi）（実施例で後述する化合物＃３）；
で表される化合物、並びに、Ｒ１１がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群（以下、これらを総称して「本件化合物群２」ということがある。）から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、ＡＴＰ発現促進剤を挙げることができる。
さらにまた、本発明の実施の他の形態として、上記本発明のＡＴＰ産生促進剤を、ＡＴＰ産生を必要とする患者に投与することにより、ＡＴＰ産生低下に起因する疾患を治療する方法や、ＡＴＰ産生促進剤として使用するための本件化合物群２や、ＡＴＰ産生促進剤を製造するための本件化合物群２の使用を挙げることができる。
本発明のエリスロポエチン発現増強剤によると、腎臓、肝臓などの生体組織で産生されるエリスロポエチン量の抑制を解除することや、かかる生体組織で産生されるエリスロポエチン量を増強することができ、エリスロポエチンの産生低下や反応性低下に起因する、疾患に伴う貧血を治療・予防することができる他、肝機能低下を改善したり、虚血障害を改善したり、腎障害を改善したり、インスリン分泌を促進することができる。また、本発明のミトコンドリア病の治療剤によると、Ｌｅｉｇｈ脳症等のミトコンドリア病患者の酸化ストレスによる細胞死を抑制し、ミトコンドリア病を治療することができる。また、本発明の実施の他の形態のＡＴＰ産生促進剤によると、腎臓、肝臓などの生体組織で産生されるＡＴＰ量を増強することができ、高アンモニア血症等のＡＴＰの産生低下に起因する疾患を治療・予防することができる。
エリスロポエチン産生ヒト肝細胞株Ｈｅｐ３Ｂにおいて、本発明の化合物＃２１〜２５、及び３３〜３８がＴＮＦαによるエリスロポエチン産生抑制を解除することを示す図である。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株において、本発明の化合物＃２、４、１３〜１５、及び１７〜２０がエリスロポエチン産生量を増強することを示す図である。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株において、本発明の化合物＃２、４、５、１８、及び２１がエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性を促進することを示す図である。縦軸は、「２０％Ｏ２／ＤＭＳＯ」の結果（エリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性）を１とした場合の相対比で示す。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株において、本発明の化合物＃２、４、５、及び２１がエリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現を増強することを示す図である。縦軸は、「２０％Ｏ２／ＤＭＳＯ」の結果（エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量）を１とした場合の相対比で示す。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株において、本発明の化合物＃４、２１、及び３５がＨＩＦ−α産生量を増強することを示す図である。縦軸は、「Control」の結果（ＨＩＦ−α濃度）を１００とした場合の相対比で示す。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株において、化合物＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３８がＡＴＰ産生量を増強することを示す図である。縦軸は、「ＤＭＳＯ」の結果（ＡＴＰ濃度）を１とした場合の相対比で示す。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株において、化合物＃１〜１５、１７〜２２、２６〜３１、及び３４〜３９がＡＴＰ産生量を増強することを示す図である。縦軸は、「ＤＭＳＯ」の結果（ＡＴＰ濃度）を１とした場合の相対比で示す。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株において、化合物＃１２〜１５、１８〜２２、２７、２９、３０及び３８がＡＴＰ産生量を増強することを示す図である。縦軸は、「ＤＭＳＯ」の結果（ＡＴＰ濃度）を１とした場合の相対比で示す。 Ｈｅｐ３Ｂ細胞株に本発明の化合物＃４を添加し、細胞毒性を調べた結果を示す図である。図中の「＃４」は、化合物＃４を示す。縦軸は、各化合物（化合物＃４、ジメチルオキサリルグリシン（ＤＭＯＧ）、及びシクロピロックス［Ciclopirox］）において、０．５μＭの濃度での細胞生存率を１００とした場合の相対比で示す。 マウスにおいて、本発明の化合物＃４が体内吸収されることを示す図である。図１０の上段は、分析カラムを用いて分離した血漿中の化合物＃４を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによりＭＳスペクトルピークとして検出した結果を示し、また、図１０の下段は、かかるピークを基に血漿中の化合物＃４の濃度を算出した結果を示す図である。 図１１Ａは、マウスにおいて、本発明の化合物＃４、５、２１、及び３５がエリスロポエチン産生量を増強することを示す図である。図１１Ｂは、マウスにおいて、本発明の化合物＃４が血液中の赤血球濃度を増加することを示す図である。左図は、血液中の血球成分の全血に対する容積比（％ＰＣＶ［packed cell volume］）、すなわちヘマトクリット（Ｈｃｔ）値を測定した結果を示す（平均値±標準偏差、［ｎ＝３］）。右図は、血液中のヘモグロビン濃度（ｇ／ｄＬ）を測定した結果を示す（平均値±標準偏差、［ｎ＝３］）。図中の「＃４」は化合物＃４投与群を示し、「ＣＭＣ」はコントロールのＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）投与群を示す。 マウスにおいて、本発明の化合物＃４が肝臓の機能を改善することを示す図である。図中の「ＤＭＳＯ」はＤＭＳＯ投与群を示し、「Ｌ」は低濃度（５μｇ／ｍｌ）化合物（＃４）投与群を示し、「Ｈ」は高濃度（１５μｇ／ｍｌ）化合物（＃４）投与群を示す。縦軸「ＧＯＴ」及び「ＧＰＴ」は、それぞれ活性単位（Karmen単位［ＫＵ］）で表す。 マウスにおいて、本発明の化合物＃４及び３５が脳虚血障害を改善することを示す図である。図は上から順に、ＤＭＳＯ投与グループ、化合物＃４投与グループ、化合物＃３５投与グループを示す。各グループにおいて、大脳冠状切片（５枚）を2,3, 5-triphenyltetrazolium chloride（ＴＴＣ）染色した写真を示す。また図中の矢印は、脳梗塞巣を示す。 ヒト腎臓由来細胞株ＨＫ−２において、本発明の化合物＃４がシスプラチンなどの薬物による腎毒性を解除することを示す図である。縦軸は、「シスプラチン＋」の結果（生細胞の割合）を１とした場合の相対比で示す。 ヒト腎臓由来細胞株ＨＫ−２において、本発明の化合物＃４による前培養（preincubation）処理によりシスプラチンなどの薬物による腎毒性を解除する効果が高まることを示す図である。縦軸は、ＯＤ４５０ｍｍの吸光度の測定値で表す。図中の各サンプルにおいて、右側のグラフが「前処理−」を示し、左側のグラフが「前処理＋」を示す。 ラットランゲルハンス氏島（ラ氏島、膵島）由来細胞株ＩＳＮ−１ｅにおいて、本発明の化合物＃４がＡＴＰ産生量を増強する（インスリン分泌を刺激する）ことを示す図である。縦軸は、「ＤＭＳＯ」の結果（ＡＴＰ濃度）を１とした場合の相対比で示す。 グルタチオン合成阻害剤ＢＳＯ（L-Buthionine sulphoximine）で処理したＬｅｉｇｈ脳症患者由来の皮膚線維芽細胞（Ｌｅｉｇｈ細胞）を、化合物＃２、４、５、２１及び３５存在下で培養し、細胞生存率を解析した結果を示す図である。縦軸は、コントロールとして化合物及びＢＳＯ非存在で培養したＬｅｉｇｈ細胞の細胞生存率を１００とした場合の相対比で示す。
本発明のエリスロポエチン発現増強剤は、腎臓や肝臓などのエリスロポエチンを分泌する組織において、エリスロポエチンの発現（産生）を増強する作用を有する。エリスロポエチン発現を増強作用としては、炎症性サイトカインによるエリスロポエチン発現抑制を解除する作用や、エリスロポエチン発現を促進する作用が好ましく、ここでエリスロポエチン発現が促進するとは、少なくとも通常の酸素（１８〜２２％Ｏ２）条件下において、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの転写やエリスロポエチンタンパク質の発現が促進（増加）することをいう。また、炎症性サイトカインによりエリスロポエチン発現が抑制されるとは、通常低酸素（０〜１０％Ｏ２）条件下ではエリスロポエチン産生が促進されるが、炎症性サイトカインの作用によりかかる促進効果が抑制されることをいう。本発明のエリスロポエチン発現増強剤の効果により、上記促進効果が抑制されることを解除し、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの転写やエリスロポエチンタンパク質の発現を増強（増加）することができる。
上記エリスロポエチン発現抑制の解除やエリスロポエチン発現の促進における作用機序としては、ＧＡＴＡ２、３等のＧＡＴＡ因子の発現抑制、ＧＡＴＡ因子のエリスロポエチン遺伝子に存在するＧＡＴＡ配列への結合阻害等によりエリスロポエチン産生の抑制が解除され、エリスロポエチン発現が増強される作用機序や、ＨＩＦ−αの分解阻害、ＨＩＦ産生促進等によりエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性が促進され、エリスロポエチン発現が増強される作用機序を挙げることができる。
上記炎症性サイトカインとしては、エリスロポエチン発現抑制作用を有するものであれば特に制限されず、具体的にはinterleukin-1（ＩＬ１）、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１２、ＩＬ１８、tumor necrosis factor-α（ＴＮＦα）、Interferon-γ（ＩＦＮγ）を挙げることでき、これらの中でもＴＮＦαが好ましい。
本発明のミトコンドリア病の治療剤は、ミトコンドリア病患者の酸化ストレスによる細胞死を抑制する作用を有するため、とりわけミトコンドリア病の酸化ストレス抑制剤が好ましい。ミトコンドリア病としては、細胞核ＤＮＡやミトコンドリアＤＮＡにおける遺伝子変異等により、ＡＴＰ産生、アポトーシスの調節、カルシウムイオンや鉄の細胞内濃度の調節等のミトコンドリア機能が低下することが原因の症状であればよく、具体的にはＣＰＥＯ（慢性進行性外眼麻痺症候群）、ＭＥＬＡＳ（メラス：脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様症候群）、ＭＥＲＲＦ（マーフ：赤色ぼろ線維・ミオクローヌスてんかん症候群）、Ｌｅｉｇｈ脳症（リー脳症：亜急性壊死性脳脊髄症）、Ｌｅｂｅｒ病（レーバー病）、Ｐｅａｒｓｏｎ病（ピアソン病）、フリードライヒ失調症（ＦＲＤＡ）を挙げることができ、これらの中でもＬｅｉｇｈ脳症が好ましい。
上記他の形態のＡＴＰ産生促進剤は、腎臓、肝臓などの生体組織において、ＡＴＰ産生（発現）を促進（増強）する作用を有する。ＡＴＰ産生の促進作用には、トリオースリン酸イソメラーゼ、エノラーゼ、ホスホグルコムターゼ、ヘキソキナーゼ等の解糖系で作用する酵素や、ＡＴＰ合成酵素（ATP synthase）、シトクロムｃオキシダーゼ、フランビンタンパク質等の電子伝達系で作用する酵素などの産生（発現）が促進（増強）される作用が含まれる。
本発明のエリスロポエチン発現増強剤やミトコンドリア病の治療剤としては、本件化合物群１から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有するものであれば特に制限されるものではなく、本件化合物群１に含まれる化合物の詳細な説明は以下に示す。
本発明の一態様において、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１は、ベンゼン環が非置換若しくは炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基である。かかるベンゾイルメチル基のベンゼン環は、置換されていてもよく、置換されたものとしては、ベンゼン環上に１〜５の炭素数１〜７のアルキル基、１〜５の炭素数１〜７のアルコキシル基、１〜５のフッ素原子、又は１〜５の塩素原子、若しくは炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシル基、フッ素原子及び塩素原子を合わせて１〜５有するベンゾイルメチル基等を挙げることができる。ここで、炭素数１〜７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、ｎ−ヘプチル基、１−メチルヘキシル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、４−メチルヘキシル基、５−メチルヘキシル基、１−エチルペンチル基、２−エチルペンチル基、３−エチルペンチル基、４，４−ジメチルペンチル基、１−プロピルブチル基等を挙げることができる。
上記炭素数１〜７のアルコキシル基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、３−メチルブトキシ基、１−エチルプロポキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、２，２−ジメチルプロポキシル基、ｎ−ヘキシルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、４−メチルペンチルオキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１−エチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１−エチル−１−メチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基、ｎ−ヘプチルオキシ基、１−メチルヘキシルオキシ基、２−メチルヘキシルオキシ基、３−メチルヘキシルオキシ基、４−メチルヘキシルオキシ基、５−メチルヘキシルオキシ基、１−エチルペンチルオキシ基、２−エチルペンチルオキシ基、３−エチルペンチルオキシ基、４，４−ジメルペンチルオキシ基、１−プロピルブトキシ基等を挙げることができる。
本発明の他の態様において、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１は、非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基である。非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基としては、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基及びこれらのフッ素化体を挙げることができ、好ましくは１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、５−メチルペンチル基、３，３，４，４，４−ペンタフルオロブチル基、４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル基、５，５，６，６，６−ペンタフルオロヘキシル基であり、より好ましくは２−エチルブチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、及び４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル基であり、最も好ましくは４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル基である。
本発明の他の態様において、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１は、フェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンであり、前記フェニル基はさらに１又は２以上のフェニル基で置換されていてもよい。フェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンとは、ベンジル基、２−フェネチル基、シクロペンチルメチル基又は２−シクロペンチルエチル基である。１又は２以上のフェニル基が置換したベンジル基又は２−フェネチル基としては、３−フェニルベンジル基、４−フェニルベンジル基、３，５−ジフェニルベンジル基、２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−エチル基、２−（１，１’−ビフェニル−４−イル）−エチル基、及び２−（３，５−ジフェニルフェニル）−エチル基を挙げることができる。上記一般式（Ｉ）におけるＲ１としては、２−フェネエチル基、シクロペンチルメチル基、２−シクロペンチルエチル基及び２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−エチル基を好適に例示することができる。
上記一般式（Ｉ）におけるＲ２は、インドール骨格の４，５，６，７位に置換していてもよい基であり、それぞれの置換位置に一つ又は複数置換していてもよい。Ｒ２としては、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素、塩素を挙げることができる。炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基を挙げることができ、炭素数１〜７のアルコキシル基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、３−メチルブトキシ基、１−エチルプロポキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、２，２−ジメチルプロポキシル基、ｎ−ヘキシルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、４−メチルペンチルオキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１−エチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１−エチル−１−メチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基、ｎ−ヘプチルオキシ基、１−メチルヘキシルオキシ基、２−メチルヘキシルオキシ基、３−メチルヘキシルオキシ基、４−メチルヘキシルオキシ基、５−メチルヘキシルオキシ基、１−エチルペンチルオキシ基、２−エチルペンチルオキシ基、３−エチルペンチルオキシ基、４，４−ジメルペンチルオキシ基、１−プロピルブトキシ基等を挙げることができ、好ましくは水素、エトキシ基、フッ素、塩素である。
上記一般式（Ｉ）におけるＲ４及びＲ５は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｒ４とＲ５が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２−メトキシエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくは、メチル基及びエチル基である。
上記一般式（Ｉ）におけるＲ１が４−ジフルオロベンゾイルメチル基であり、Ｒ２が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（Ｉ）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃４を表し、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１が４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル基であり、Ｒ２が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（Ｉ）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃２１を表し、上記一般式（Ｉ）におけるＲ１が２−シクロペンチルエチル基であり、Ｒ２が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（Ｉ）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃２４を表す。これら化合物の他、一般式（Ｉ）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃２、４、５、及び２０や、実施例で後述する化合物＃１７〜１９や、実施例で後述する化合物＃２２及び２３や、実施例で後述する化合物＃２５を挙げることができる。
上記一般式（II）におけるＸは、炭素数４〜６の直鎖のアルキレン基、即ちブチレン−（ＣＨ２）４−、ペンチレン−（ＣＨ２）５−、ヘキシレン−（ＣＨ２）６−、又は炭素数４のエーテル基であり、炭素数４のエーテル基としては、メチレン−Ｏ−プロピレン基、エチレン−Ｏ−エチレン基、プロピレン−Ｏ−メチレン基を挙げることができ、ブチレン、ヘキシレン及びエチレン−Ｏ−エチレン基が好ましい。
上記一般式（II）におけるＲ４及びＲ５は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｒ４とＲ５が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２，２，２−トリクロロメチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくはメチル基及びエチル基である。
上記一般式（II）におけるＸがブチレンであり、Ｒ６が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（II）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃１５を表す。化合物＃１５の他、一般式（Ｉ）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃１３や、実施例で後述する化合物＃１４を挙げることができる。
上記一般式（III）におけるＲ７は、炭素数１〜５のアルキル基又はベンジル基である。鎖状又は分枝状の炭素数１〜５のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、及び２，２−ジメチルプロピル基を挙げることができる。また、前記ベンジル基のベンゼン間は１又は２以上の炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されていてもよい。炭素数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、及びイソプロピル基を挙げることができ、炭素数１〜３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、及びイソプロポキシ基を挙げることができる。上記一般式（III）におけるＲ７は、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、及び３，５−ジメトキシベンジル基であり、より好ましくは３，５−ジメトキシベンジル基である。
上記一般式（III）においてＲ４及びＲ５は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｒ４とＲ５が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２，２，２−トリクロロメチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくはメチル基及びエチル基である。
上記一般式（III）におけるＡがインドールであり、Ｒ７が３，５−ジメトキシベンジル基であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（III）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃３５を表す。化合物＃３５の他、一般式（Ｉ）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃３６〜３８や、実施例で後述する化合物＃３３及び３４を挙げることができる。
本件化合物群１から選択される化合物が不斉炭素原子及び軸不斉に係わる不斉点をもつとき、かかる化合物は、考えられ得るすべての光学異性体を含み、それら光学異性体は任意の比で使用することができる。例えば、ある光学活性化合物は、エナンチオマーでもラセミでも任意の割合のエナンチオマー混合物でも使用することができ、不斉点が複数存在するときは、任意の割合のジアステレオマー混合物で使用してもよい。
本件化合物群１における医薬的に許容される塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から生成された金属塩や、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リジン、プロカイン等から生成された有機塩などが含まれる。
本件化合物群１から選択される化合物の合成方法は、以下に例示することができるが、これらの方法に限られず、一般的に知られている合成法を用いることができる。また、以下に示す化合物は、シグマ−アルドリッチ社、東京化成工業、和光純薬、関東化学等から入手することができる。また、反応溶媒、反応温度に関して、特に記載のない場合は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。反応は、通常、アルゴン又は窒素雰囲気下で行われる。保護基は、Green&Wuts, “PROTECTIVE GROUPS in ORGANIC SYNTHESIS” 3rded.John Wiley&Sons, Inc.を参照し、用いることできる。
上記一般式（Ｉ）で示される化合物は、置換若しくは非置換のベンゼンと置換若しくは非置換のインドールを出発物質として合成することができる。まず、置換若しくは非置換のベンゼンと無水マレイン酸とを、フリーデル−クラフツ反応を用いて、４−アリール−４−オキソ−２−ブテン酸を合成する。このフリーデル−クラフツ反応は、ルイス酸、リン酸、ポリリン酸等を触媒として作用させることで行い、触媒として好適には塩化アルミニウムが用いられる。反応溶媒としては、塩素系の溶媒が好ましいが、出発物質の置換若しくは非置換のベンゼンを溶媒として用いることもできる。こうして得られた４−アリール−４−オキソ−２−ブテン酸と置換若しくは非置換のインドールとをマイケル反応させることにより、インドール酢酸のα位に置換若しくは非置換のベンゾイルオキシ基が置換した化合物を得て、一般式（Ｉ）で示される化合物の基本骨格を構築することができる。このマイケル反応において、４−アリール−４−オキソ−２−ブテン酸のカルボキシル基は保護されていても保護されていなくてもよく、通常は保護する必要はないが、保護する場合、用いられる保護基としては、メチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、２，２，２−トリクロロエチルエステル及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエステル等を挙げることができる。一方、インドールの窒素原子も保護されていても保護されていなくてもよく、保護する場合はベンジル系の保護基が好ましく、アミド系の保護基は反応性を下げてしまうため好ましくない。また、マイケル反応は、反応系を加熱することで進行することもできるし、ルイス酸等の触媒を用いることもできる。一般式（Ｉ）で示される化合物の骨格を得た後に、必要であれば保護基を除去することで、一般式（Ｉ）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、フルオロベンゼン、無水マレイン酸及びインドールから実施例で後述する化合物＃４を合成することができる。
上記一般式（Ｉ）で示される化合物の合成方法の他の態様としては、アルコールとインドール酢酸の保護体を出発原料として合成する方法を挙げることができる。アルコールの水酸基は、直接若しくは二段階の反応で、ヨウ素又は臭素へと変換することができる。直接変換する方法としては、これらに限られないが、アルコールに、トリフェニルホスフィン、イミダゾール及びヨウ素（Ｉ２）を作用させてヨウ素（Ｉ・）を置換させる方法、又はトリフェニルホスフィンと四臭化炭素を作用させて臭素を置換させる方法を挙げることができる。複数工程を経て合成する方法としては、アルコールをメタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸等のスルホン酸エステルに誘導した後に、アルカリ金属のヨウ化物塩又はアルカリ金属の臭化物塩を反応させる方法を挙げることができる。こうして得られたハロゲン体にインドール酢酸の保護体から生じたα位のエノラートを求核反応させることで、一般式（Ｉ）で示される化合物の基本骨格を得ることができる。インドール酢酸の保護基としては、カルボキシル基の保護としてメチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、２，２，２−トリクロロエチルエステル及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエステル等へ誘導化する方法が挙げられる。一方、インドール酢酸のアミン部位は、炭酸アミドとして保護することが好ましく、保護基としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル等を挙げることができる。こうして得られたインドール酢酸の保護体に塩基を作用させることでエノラートへと誘導し、生じたエノラートとハロゲン体とを求核反応させることで、一般式（Ｉ）で示される化合物の基本骨格を得ることができる。この求核反応で用いることのできる塩基としては、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等のアルカリ金属の炭酸塩、メチルリチウム、ｎ−ブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラザン、ナトリウムヘキサメチルジシラザン、カリウムヘキサメチルジシラザン等のアルカリ金属アミドなどを挙げることができる。用いる塩基によって、使用できる溶媒は異なるが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）やテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。また、ヘキサメチルリン酸トリアミド等の添加は反応を促進する効果がある。こうして得られた保護体から保護基を除去することで、目的の化合物を得ることができる。この後に、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又はその医薬的に許容される塩とすることができる。具体的には、次式に示すように、４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンタノールと１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを出発物質として実施例で後述する化合物＃２１が合成できる。
上述の一般式（Ｉ）で示される化合物の合成方法は、一般式（II）で示される化合物を合成するために用いることもできる。すなわち、一般式（II）で示される化合物は、上述の一般式（Ｉ）で示される化合物の合成方法において、出発原料として用いられるアルコールやインドール酢酸の保護体の代わりに、アミノ基がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルで保護された直鎖のアミノアルコール又は鎖中に酸素を有する直鎖のアミノアルコールや、α位にメチル基が置換したインドール酢酸の保護体を出発原料として用い、同様の方法で合成することができる。直鎖のアミノアルコール及び鎖中に酸素を有する直鎖のアミノアルコールのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミドへの変換は、定法により行うことができるが、通常炭酸ジｔｅｒｔ−ブチルを用いる。α位にメチル基が置換したインドール酢酸の保護体は、上記の一般式（Ｉ）で示される化合物の合成方法において、ハロゲン体をヨウ化メチルとしたときに得られる中間体であることは、当業者には容易に理解される。こうして調製した出発原料を用い、一般式（Ｉ）で示される化合物の合成方法と同様の方法で、一般式（II）で示される化合物を合成することができる。具体的には、次式に示すように、４−アミノブタノールと１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを出発物質として実施例で後述する化合物＃１５が合成できる。
上記一般式（III）で示される化合物は、Ａがインドール又はナフタレンであるときに共通して、５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステル又はα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸エステルを出発原料として、合成することができる。５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステル及びα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸エステルは、対応するカルボン酸をエステル化することによって得ることができるが、５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸は活性プロトンを３つ、α−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸は活性プロトンを２つ有し、反応の選択性が問題となる。このため、これら化合物のアルコール部分を保護し、エステル化を行った後に、保護基を除去し、出発原料を得ることもできる。また、E.Tsuda et. al.,“Alkoxy-auxins are selective inhibitors of auxin transport mediated by PIN, ABCB, and AUX1 transporters” Journal of Biological Chemistry, 286(3), 2354-2364; 2011.に記載の方法に従って、α−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルを合成することもできる。その他にも、５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステルの合成法として、乾燥させたアルコール中で酸性条件下反応を行うことにより、良好な選択性で、溶媒として用いたアルコールとのエステルを合成できる。前記エステル化の反応条件としては、市販の塩酸／メタノールや、脱水したアルコールに乾燥した塩酸を吹き込む方法を挙げることができるが、予備乾燥したアルコールに酸クロライドを滴下し、系中で酸を発生させる方法が好ましい。この後に、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又はその医薬的に許容される塩とすることができる。こうして準備した出発原料とヨウ化アルキル又は臭化アルキルとを反応させることで、一般式（III）で示される化合物の基本骨格を構築できる。これら５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステル、又は７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル酢酸エステルとヨウ化アルキル又は臭化アルキルとの反応に用いられる塩基としては、水素化ナトリウムや、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムといったアルカリ金属の炭酸塩が挙げられる。反応溶媒としては、ＤＭＦやＴＨＦ等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。こうして、一般式（III）で示される化合物の骨格を得た後に、必要であれば保護基を除去することで、一般式（III）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、出発物質として１−ヨードブタンとα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルを用いて実施例で後述する化合物＃３４を合成できる。
同様に、出発物質として３，５−ジメトキシ臭化ベンジルと７−ヒドロキシ−３−インドール酢酸を用いて実施例で後述する化合物＃３５を合成できる。
本件化合物群１に含まれる化合物のうち、エリスロポエチンの発現（産生）を増強する作用を有する具体的なものとしては、２１種類の化合物（実施例で後述する化合物［＃２、４、５、１３〜１５、１７〜２５、及び３３〜３８］）を挙げることができ、この中で上記炎症性サイトカインによるエリスロポエチン発現抑制の解除作用を有するものとしては、１１種類の化合物（＃２１〜２５、及び３３〜３８）を挙げることができ、また、上記エリスロポエチン発現促進作用を有するものとしては、１１種類の化合物（＃２、４、５、１３〜１５、及び１７〜２１］）を挙げることができ、これらの中でも３種類の化合物（＃４、２１、及び３５）を好適に例示することができる。
本発明のミトコンドリア病の治療剤における本件化合物群１としては、本願明細書の実施例において、その効果が具体的に示されている５種類の化合物（化合物［＃２、４、５、２１、及び３５］）が好ましい。
上記他の形態のＡＴＰ産生促進剤としては、本件化合物群２から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有するものであれば特に制限されるものではなく、本件化合物群２に含まれる化合物の詳細な説明は以下に示す。
上記一般式（ｉ）におけるＲ８は、ベンゼン環が非置換若しくは炭素数１〜７のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基である。かかるベンゾイルメチル基のベンゼン環は、置換されていてもよく、置換されたものとしては、ベンゼン環上に１〜５の炭素数１〜７のアルキル基、１〜５の炭素数１〜７のアルコキシル基、１〜５のフッ素原子、又は１〜５の塩素原子、若しくは炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシル基、フッ素原子及び塩素原子を合わせて１〜５有するベンゾイルメチル基等を挙げることができる。ここで、炭素数１〜７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、ｎ−ヘプチル基、１−メチルヘキシル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、４−メチルヘキシル基、５−メチルヘキシル基、１−エチルペンチル基、２−エチルペンチル基、３−エチルペンチル基、４，４−ジメチルペンチル基、１−プロピルブチル基等を挙げることができる。
上記炭素数１〜７のアルコキシル基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、３−メチルブトキシ基、１−エチルプロポキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、２，２−ジメチルプロポキシル基、ｎ−ヘキシルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、４−メチルペンチルオキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１−エチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１−エチル−１−メチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基、ｎ−ヘプチルオキシ基、１−メチルヘキシルオキシ基、２−メチルヘキシルオキシ基、３−メチルヘキシルオキシ基、４−メチルヘキシルオキシ基、５−メチルヘキシルオキシ基、１−エチルペンチルオキシ基、２−エチルペンチルオキシ基、３−エチルペンチルオキシ基、４，４−ジメルペンチルオキシ基、１−プロピルブトキシ基等を挙げることができる。
本発明の他の態様において、上記一般式（ｉ）におけるＲ８は、非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基である。非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基としては、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、２，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基及びこれらのフッ素化体を挙げることができ、好ましくは１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、５−メチルペンチル基、３，３，４，４，４−ペンタフルオロブチル基、４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル基、５，５，６，６，６−ペンタフルオロヘキシル基であり、より好ましくは２−エチルブチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、及び４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル基である。
本発明の他の態様において、上記一般式（ｉ）におけるＲ８は、４−Ｎ−アセチルピペリジニル基、フェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンであり、前記フェニル基はさらに１又は２以上のフェニル基で置換されていてもよい。４−Ｎ−アセチルピペリジニル基、フェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンとは、４−Ｎ−アセチルピペリジニルメチル基、２−（４−Ｎ−アセチルピペリジニル）エチル基、ベンジル基、２−フェネチル基、シクロペンチルメチル基又は２−シクロペンチルエチル基である。１又は２以上のフェニル基が置換したベンジル基又は２−フェネチル基としては、３−フェニルベンジル基、４−フェニルベンジル基、３，５−ジフェニルベンジル基、２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−エチル基、２−（１，１’−ビフェニル−４−イル）−エチル基、２−（３，５−ジフェニルフェニル）−エチル基を挙げることができる。上記一般式（ｉ）におけるＲ８としては、４−Ｎ−アセチルピペリジニルメチル基、２−（４−Ｎ−アセチルピペリジニル）エチル基、２−フェニルエチル基、２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−エチル基、シクロペンチルメチル基、２−シクロペンチルエチル基を好適に例示することができる。
上記一般式（ｉ）におけるＲ９は、インドール骨格の４，５，６，７位に置換していてもよい基であり、それぞれの置換位置に一つ若しくは複数置換していてもよい。Ｒ２としては、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素、塩素を挙げることができる。炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基を挙げることができ、炭素数１〜７のアルコキシル基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、３−メチルブトキシ基、１−エチルプロポキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、２，２−ジメチルプロポキシル基、ｎ−ヘキシルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、４−メチルペンチルオキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１−エチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１−エチル−１−メチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基、ｎ−ヘプチルオキシ基、１−メチルヘキシルオキシ基、２−メチルヘキシルオキシ基、３−メチルヘキシルオキシ基、４−メチルヘキシルオキシ基、５−メチルヘキシルオキシ基、１−エチルペンチルオキシ基、２−エチルペンチルオキシ基、３−エチルペンチルオキシ基、４，４−ジメルペンチルオキシ基、１−プロピルブトキシ基等を挙げることができ、好ましくは、水素、エトキシ基、フッ素、塩素である。
上記一般式（ｉ）におけるＲ１０は、水素若しくは鎖状又は分枝状の炭素数１〜３のアルキル基であり、かかるＲ１０としては、具体的に水素の他、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基を挙げることができ、これらの中でも、水素やプロピル基を好適に例示することができる。
上記一般式（ｉ）におけるＲ１２及びＲ１３は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｒ１２とＲ１３が窒素と一緒になったピロリジン、及びこれらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２−メトキシエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくはメチル基及びエチル基である。
上記一般式（ｉ）におけるＲ８が２，４−ジメチルベンゾイルメチル基であり、Ｒ９がインドールの５位に置換した塩素であり、Ｒ１０がｎ−プロピル基であり、かつＲ１１がＯＨのとき、一般式（ｉ）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃６を表し、上記一般式（ｉ）におけるＲ８が４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチル基であり、Ｒ９が水素であり、Ｒ１０が水素であり、かつＲ１１がＯＨのとき、一般式（ｉ）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃２１を表し、上記一般式（ｉ）におけるＲ８が２−（４−Ｎ−アセチルピペリジニル）エチル基であり、Ｒ９が水素であり、Ｒ１０が水素であり、かつＲ１１がＯＨのとき、一般式（ｉ）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃８を表す。これら化合物の他、一般式（ｉ）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃１、２、４、５〜７、及び２０や、実施例で後述する化合物＃１７〜１９や、実施例で後述する化合物＃２２及び２３や、実施例で後述する化合物＃２４及び２５や、実施例で後述する化合物＃９を挙げることができる。
上記一般式（ii）におけるＸは、炭素数４〜６の直鎖のアルキレン基、即ちブチレン−（ＣＨ２）４−、ペンチレン−（ＣＨ２）５−、ヘキシレン−（ＣＨ２）６−、又は炭素数４のエーテル基であり、炭素数４のエーテル基としては、メチレン−Ｏ−プロピレン基、エチレン−Ｏ−エチレン基、プロピレン−Ｏ−メチレン基を挙げることができ、好ましくはブチレン−（ＣＨ２）４−、ヘキシレン−（ＣＨ２）６−及びエチレン−Ｏ−エチレン基であり、より好ましくはエチレン−Ｏ−エチレン基である。
上記一般式（ii）におけるＲ１２及びＲ１３は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｒ１２とＲ１３が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２−メトキシエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくはメチル基及びエチル基である。
上記一般式（ii）におけるＸがエチレン−Ｏ−エチレン基であり、Ｒ１４が水素であり、Ｒ１５がｔｅｒｔ−ブトキシ基であり、Ｒ１１がＯＨとき、一般式（ii）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃１４を表す。化合物＃１４の他、一般式（ii）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃１０及び１１や、実施例で後述する化合物＃１３や、実施例で後述する化合物＃１５を挙げることができる。
上記一般式（iii）におけるＲ１６は、鎖状又は分枝状の炭素数１〜７のアルキル基又はベンジル基である。鎖状又は分枝状の炭素数１〜７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、ｎ−ヘプチル基、１−メチルヘキシル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、４−メチルヘキシル基、５−メチルヘキシル基、１−エチルペンチル基、２−エチルペンチル基、３−エチルペンチル基、４，４−ジメチルペンチル基、１−プロピルブチル基等を挙げることができる。また、前記ベンジル基のベンゼン間は１又は２以上の炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されていてもよい。炭素数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基を挙げることができ、炭素数１〜３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基を挙げることができる。これらのうち、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、３，５−ジメトキシベンジル基であり、より好ましくは、３，５−ジメトキシベンジル基である。
上記一般式（iii）におけるＲ１２及びＲ１３は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｒ１２とＲ１３が窒素と一緒になったピロリジン、及びこれらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２−メトキシエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくはメチル基及びエチル基である。
上記一般式（iii）におけるＡがインドールであり、Ｒ１６がメチル基であり、かつＲ１１がＯＨとき、一般式（iii）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃３６を表す。化合物＃３６の他、一般式（iii）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃３７〜３９や、実施例で後述する化合物＃３４及び＃３５を挙げることができる。
上記一般式（iv）におけるＲ１７は、直鎖状の炭素数１〜７のアルキル基であり、直鎖状の炭素数１〜７のアルキル基としては、具体的にメチル基、エチル基、プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、及びｎ−ヘプチル基を挙げることができる。
上記一般式（iv）及び（v）におけるＲ１２及びＲ１３は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｒ３とＲ４が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２−メトキシエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、１−フェニルエチル基、２−フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくは、メチル基及びエチル基である。
上記一般式（iv）におけるＲ１７がブチル基であり、かつＲ１１がＯＨとき、一般式（iv）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃２９を表す。化合物＃２９の他、一般式（iv）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃２６〜２８、３０、及び３１を挙げることができる。また、上記一般式（ｖ）におけるＲ１１がＯＨとき、一般式（ｖ）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃１２を表す。
本件化合物群２から選択される化合物が不斉炭素原子及び軸不斉に係わる不斉点を持つとき、かかる化合物は、考えられ得るすべての光学異性体を含み、それら光学異性体は任意の比で使用できる。例えば、ある光学活性化合物は、エナンチオマーでもラセミでも任意の割合のエナンチオマー混合物でも使用することができ、仮に不斉点が複数存在するときは、任意の割合のジアステレオマー混合物で使用してもよい。
本件化合物群２における医薬的に許容される塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から生成された金属塩や、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リジン、プロカイン等から生成された有機塩などが含まれる。
本件化合物群２から選択される化合物の合成方法は、以下に例示することができるが、これらの方法に限られず、一般的に知られている合成法を用いることができる。また、以下に示す化合物は、シグマ−アルドリッチ社、東京化成工業、和光純薬、関東化学等から入手することができる。また、反応溶媒、反応温度に関しては、特に記載のない場は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。反応は、通常、アルゴン又は窒素雰囲気下で行われる、保護基は、Ｇｒｅｅｎ＆Ｗｕｔｓ，“ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ ＧＲＯＵＰＳ ｉｎ ＯＲＧＡＮＩＣ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ” ３ｒｄ ｅｄ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．を参照し、用いることできる。
上記一般式（ｉ）で示される化合物は、置換若しくは非置換のベンゼンと置換若しくは非置換のインドールを出発物質として合成することができる。まず、置換若しくは非置換のベンゼンと無水マレイン酸とを、フリーデル−クラフツ反応を用いて、４−アリール−４−オキソ−２−ブテン酸を合成する。このフリーデル−クラフツ反応は、ルイス酸、リン酸、ポリリン酸等を触媒として作用させることで行い、触媒として好適には塩化アルミニウムが用いられる。反応溶媒としては、塩素系の溶媒が好ましいが、出発物質の置換若しくは非置換のベンゼンを溶媒として用いることもできる。こうして得られた４−アリール−４−オキソ−２−ブテン酸と置換若しくは非置換のインドールとをマイケル反応させることにより、インドール酢酸のα位に置換若しくは非置換のベンゾイルオキシ基が置換した化合物を得て、一般式（ｉ）で示される化合物の基本骨格を構築することができる。このマイケル反応において、４−アリール−４−オキソ−２−ブテン酸のカルボキシル基は保護されていても保護されていなくてもよく、通常は保護する必要はないが、保護する場合、用いられる保護基としては、メチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、２，２，２−トリクロロエチルエステル及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエステル等を挙げることができる。一方、インドールの窒素原子は保護されていても保護されていなくてもよいが、一般式（ｉ）で示される化合物がインドールの窒素上に鎖状又は分枝状の炭素数１〜３のアルキル基を有する場合は、マイケル反応に先立って、該アルキル基が導入されていることが好ましい。インドールへの前記アルキル基の導入は、対応するハロゲン化アルキルを、ＤＭＦやＴＨＦ等の非プロトン性極性溶媒中で塩基を作用することで行われる。また、ヘキサメチレンリン酸トリアミド等を添加することで反応を促進することもできる。ここで用いることのできる塩基としては、水素化ナトリウム等のアルカリ金属水素化物、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の金属炭酸塩を挙げることができる。マイケル反応は、反応系を加熱することで進行することもできるし、ルイス酸等の触媒を用いることもできる。一般式（ｉ）で示される化合物の骨格を得た後に、必要であれば保護基を除去することで、一般式（ｉ）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、ｍ−キシレン、無水マレイン酸及びＮ−プロピルインドールから実施例で後述する化合物＃６を合成することができる。
上記一般式（ｉ）で示される化合物の合成方法の他の態様としては、アルコールとインドール酢酸の保護体を出発原料として合成する方法を挙げることができる。アルコールの水酸基は、直接若しくは二段階の反応で、ヨウ素又は臭素へと変換することができる。直接変換する方法としては、これらに限られないが、アルコールに、トリフェニルホスフィン、イミダゾール及びヨウ素（Ｉ２）を作用させてヨウ素（Ｉ・）を置換させる方法、又はトリフェニルホスフィンと四臭化炭素を作用させて臭素を置換させる方法を挙げることができる。複数工程を経て合成する方法としては、アルコールをメタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸等のスルホン酸エステルに誘導した後に、アルカリ金属のヨウ化物塩又はアルカリ金属の臭化物塩を反応させる方法を挙げることができる。こうして得られたハロゲン体にインドール酢酸の保護体から生じたα位のエノラートを求核反応させることで、一般式（ｉ）で示される化合物の基本骨格を得ることができる。インドール酢酸の保護基としては、カルボキシル基の保護としてメチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、２，２，２−トリクロロエチルエステル及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエステル等へ誘導化する方法を挙げることができる。一方、インドール酢酸のアミン部位は、炭酸アミドとして保護することが好ましく、保護基としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル等を挙げることができる。こうして得られたインドール酢酸の保護体に塩基を作用させることでエノラートへと誘導し、生じたエノラートとハロゲン体とを求核反応させることで、一般式（ｉ）で示される化合物の基本骨格を得ることができる。この求核反応で用いることのできる塩基としては、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等のアルカリ金属の炭酸塩、メチルリチウム、ｎ−ブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラザン、ナトリウムヘキサメチルジシラザン、カリウムヘキサメチルジシラザン等のアルカリ金属アミド等を挙げることができる。用いる塩基によって、使用できる溶媒は異なるが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）やテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。また、ヘキサメチルリン酸トリアミド等の添加は反応を促進する効果がある。こうして得られた保護体から保護基を除去することで、目的の化合物を得ることができる。この後に、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又はその医薬的に許容される塩とすることができる。具体的には、次式に示すように、２−（４−ピペリジニル）エタノールと１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを出発物質として実施例で後述する化合物＃８が合成できる。
上記の一般式（ｉ）で示される化合物の合成方法は、一般式（ii）で示される化合物の合成にも利用できる。すなわち、一般式（ii）で示される化合物は、上述の一般式（ｉ）で示される化合物の合成方法において、出発原料として用いられるアルコールやインドール酢酸の保護体の代わりに、アミノ基がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルで保護された直鎖のアミノアルコール又は鎖中に酸素を有する直鎖のアミノアルコールや、α位にメチル基が置換したインドール酢酸の保護体を出発原料として用い、同様の方法で合成することができる。直鎖のアミノアルコール及び鎖中に酸素を有する直鎖のアミノアルコールのｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミドへの変換は、定法により行うことができるが、通常炭酸ジｔｅｒｔ−ブチルを用いる。α位にメチル基が置換したインドール酢酸の保護体は、上記の一般式（ｉ）で示される化合物の合成方法において、ハロゲン体をヨウ化メチルとしたときに得られる中間体であることは、当業者には容易に理解される。こうして調製した出発原料を用い、一般式（ｉ）で示される化合物の合成方法と同様の方法で、一般式（ii）で示される化合物の合成が達成される。具体的には、次式に示すように、２−（２−アミノエトキシ）−エタノール及び１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルから実施例で後述する化合物＃１４を合成することができる。
上記一般式（iii）で示される化合物は、Ａがインドール又はナフタレンであるときに共通して、５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステル又はα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸エステルを出発原料として、合成することができる。５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステル及びα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸エステルは、対応するカルボン酸をエステル化することによって得ることができるが、５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸は活性プロトンを３つ、α−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸は活性プロトンを２つ有し、反応の選択性が問題となる。このため、これら化合物のアルコール部分を保護し、エステル化を行った後に、保護基を除去し、出発原料を得ることもできる。また、E.Tsuda et. al.,“Alkoxy-auxins are selective inhibitors of auxin transport mediated by PIN, ABCB, and AUX1 transporters” Journal of Biological Chemistry, 286(3), 2354-2364; 2011.に記載の方法に従って、α−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルを合成することもできる。その他にも、５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステルの合成法として、乾燥させたアルコール中で酸性条件下反応を行うことにより、良好な選択性で、溶媒として用いたアルコールとのエステルを合成できる。前記エステル化の反応条件としては、市販の塩酸／メタノールや、脱水したアルコールに乾燥した塩酸を吹き込む方法を挙げることができるが、予備乾燥したアルコールに酸クロライドを滴下し、系中で酸を発生させる方法が好ましい。この後に、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又はその医薬的に許容される塩とすることができる。こうして準備した出発原料とヨウ化アルキル又は臭化アルキルとを反応させることで、一般式（iii）で示される化合物の基本骨格を構築できる。これら５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸エステル、又は７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル酢酸エステルとヨウ化アルキル又は臭化アルキルとの反応に用いられる塩基としては、水素化ナトリウムや、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等のアルカリ金属の炭酸塩を挙げることができる。反応溶媒としては、ＤＭＦやＴＨＦ等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。こうして、一般式（iii）で示される化合物の骨格を得た後に、必要であれば保護基を除去することで、一般式（iii）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、ヨードメタン及び−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステルから実施例で後述する化合物＃３６を合成することができる。
同様に、出発物質として１−ヨードブタンとα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルを用いて実施例で後述する化合物＃３４を合成できる。
上記一般式（iv）で示される化合物は、カルボキシル基が保護されたインドール酢酸とハロゲン化アルキルを出発原料として合成することができる。インドール酢酸はメチルエステル、エチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、２，２，２−トリクロロエチルエステル及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエステル等のへ誘導化することで保護できる。ハロゲン化アルキルのインドール酢酸保護体への導入としては、ハロゲン化アルキルを、ＤＭＦやＴＨＦ等の非プロトン性極性溶媒中で塩基を作用することで行われる。また、ヘキサメチレンリン酸トリアミド等を添加することで反応を促進することもできる。ここで用いることのできる塩基としては、水素化ナトリウム等のアルカリ金属水素化物、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の金属炭酸塩を挙げることができる。アルキル基の導入後、保護基を適宜除去することで、一般式（iv）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、ヨウ化ブチル及び３−インドール酢酸メチルエステルから実施例で後述する化合物＃２９を合成することができる。
一般式（ｖ）で示される化合物は、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノールとα−（１−ナフタレニル）−酢酸エステルを出発原料として合成することができる。Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノールは６−アミノヘキサノールと炭酸ジｔｅｒｔ−ブチルとを塩基存在下で反応させることで合成することができる。得られたＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノールは、一般式（Ｉ）及び一般式（ｉ）で示される化合物の合成方法に記載されている方法で、水酸基をヨウ素若しくは臭素に変換できる。この１−ハロゲン化 Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサンを、一般式（Ｉ）及び一般式（ｉ）で示される化合物の合成方法に記載されている方法と同様にα−（１−ナフタレニル）−酢酸エステルから生じたエノラートと反応させることで、一般式（ｖ）で示される化合物の基本骨格を得ることができる。得られた化合物のエステル部位を加水分解し、一般式（ｉ）で示される化合物が合成できる。エステルの加水分解方法としては、アルコールを含む溶媒中で、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の金属水酸化物、ナトリウムメトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド等の金属アルコキシドを用いることができる。必要に応じて、反応系に過酸化水素水を加えることで、反応速度を向上させることもできる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、６−アミノヘキサノール及びα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルから化合物＃１２を合成することができる。
式（vi）で示される化合物は、次式に示すように、Sayed，G. H. et al，“Synthesis and reactions of some β-aroyl-α-（indol-3-yl）propionic acids” Journal of the Chemical Society of Pakistan，7（4），263-72； 1985に記載の方法に従って、ｔｒａｎｓ−１−フェニル−２−ブテン−１−オン及びインドールから実施例で後述する化合物＃３を合成することができる。
本件化合物群２に含まれる化合物のうち、ＡＴＰ産生（発現）を促進（増強）する作用を有する具体的なものとしては、３６種類の化合物（実施例で後述する化合物［＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３９］）を挙げることができ、この中で細胞におけるＡＴＰ濃度を少なくとも３時間で通常より２倍以上増加させるものとしては、２３種類の化合物（＃３〜７、９〜１５、１８〜２２、２７〜３０、３４及び３６）を挙げることができ、また、細胞におけるＡＴＰ濃度を少なくとも６時間で通常より５倍以上増加させるものとしては、８種類の化合物（＃１〜８）を挙げることができ、また、細胞におけるＡＴＰ濃度を少なくとも２４時間で通常より１．５倍以上増加させるものとしては、１３種類の化合物（＃１２〜１５、１８〜２２、２７、２９、３０、及び３８）を挙げることができる。
また、本発明のエリスロポエチン発現増強剤やミトコンドリア病の治療剤や、上記他の形態のＡＴＰ産生促進剤は、必要に応じて、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分がさらに添加されたものを例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
合成した化合物が、エリスロポエチン発現を増強する作用を有することは、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現や、かかるｍＲＮＡから翻訳されたタンパク質（エリスロポエチン）の発現を、公知の分子生物学的手法を用いて解析することにより確認することができる。エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現を解析する方法としては、例えば、定量ＲＴ−ＰＣＲ（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）法、ＲＴ−ＰＣＲ法、サザンブロティング法などの方法を具体的に挙げることができ、また、エリスロポエチンタンパク質の発現を解析する方法としては、例えば、ウエスタンブロッティング法、エリスロポエチン遺伝子プロモーターの下流にＧＦＰ（Green Fluorescent Protein）遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子等のレポーター遺伝子が挿入されたプラスミドを用いたレポーターアッセイ法、質量分析法などの方法を具体的に挙げることができる。
合成した化合物が、ＡＴＰ産生を促進する作用を有することは、ＡＴＰ濃度を測定できる市販のキットや装置等を用いて確認することができる。例えば、ＡＴＰ濃度は、ＡＤＰ／ＡＴＰ関連アッセイキットシリーズ（BioAssay Systems社製）、『細胞の』ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製）などの市販のキットを用いてAB-2300 ルミネッセンサーJNRII（アトー社製）、GloMa 96 Microplate Luminometer（Promega社製）等のルミノメーターを用いて測定することができる。
本発明の貧血の治療・予防薬により治療及び／又は予防できる貧血としては、エリスロポエチン発現（産生）低下やエリスロポエチン反応性低下に起因する疾患に伴う貧血であれば特に制限されず、具体的には、膠原病（慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等）、慢性感染症（結核、感染性心内膜炎、肝膿瘍等）、アレルギー性疾患（アトピー性皮膚炎、乾癬等）、自己免疫疾患（リウマチ、多発性硬化症等）、腫瘍（卵巣腫瘍、黒色腫等）、慢性腎不全、甲状腺機能低下症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、上記ミトコンドリア病などの疾患に伴う貧血を挙げることができる。
本発明の肝機能改善剤は、アルコールの過剰摂取、ウイルス感染、肝がん、喫煙、ストレスなどにより引き起こされる肝機能低下（肝機能障害）を改善（抑制）する作用を有する。
本発明の虚血障害改善剤は、虚血時に生体組織に起こる虚血障害や虚血後の再灌流時に起こる虚血障害（虚血再灌流障害）を改善（抑制）する作用を有する。かかる虚血障害や虚血再灌流障害としては、心臓障害（虚血性心疾患、心筋梗塞等）、脳血管障害（ミトコンドリア脳症、脳血栓症、脳梗寒など）、脊髄血管障害（脊髄梗塞等）、腎臓障害（腎炎、腎不全等）、肝臓障害（劇症肝炎等）、肺障害（急性肺損傷、成人呼吸窮迫症候群［ＡＲＤＳ］等）、膵臓障害（膵炎等）などを挙げることができる。
本発明の腎保護剤は、シスプラチン、ストレプトマイシン、５−ＦＵ、インドメタシン、クロロサイアザイド、フェノバルビタールなどの薬剤の副作用によって生じる腎障害や、慢性腎不全、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、免疫複合体腎炎、急性腎不全、尿毒症などの各種疾患によって生じる腎障害を改善（抑制）し、腎機能を保護する作用を有する。
本発明のインスリン分泌促進剤は、肥満、高脂血症、２型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマなどにより引き起こされるインスリン分泌低下を改善（抑制）する作用を有する。かかる本発明のインスリン分泌促進剤を用いると、インスリン分泌を正常に調節することができる。
本発明の貧血の治療・予防薬や肝機能改善剤や虚血障害改善剤や腎保護剤やインスリン分泌促進剤としては、本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含有するものであれば特に制限されず、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分がさらに添加されたものを例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
本発明のエリスロポエチン発現増強剤や貧血の治療・予防薬や肝機能改善剤や虚血障害改善剤や腎保護剤やインスリン分泌促進剤やミトコンドリア病の治療剤や、上記他の形態のＡＴＰ産生促進剤の投与形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で投与する経口投与や、溶液、乳剤、懸濁液等の剤型を注射、又はスプレー剤の型で鼻孔内投与する非経口投与を挙げることができる。
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
［化合物の合成］
以下に示す化合物の合成方法に用いる合成原料、反応試薬等は一般的な市販品である。また、反応溶媒、反応温度に関して特に記載のない場合は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。また、反応は、アルゴン若しくは乾燥させた窒素雰囲気下で行われる。
［化合物＃１の合成］
４−フェニル−２−（４−クロロ−１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン（化合物＃１）は、インドールの代わりに４−クロロインドールを用いて、後述する化合物＃２０の合成方法により合成した。
［化合物＃２及び化合物＃３の合成］
４−（４−クロロフェニル）−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸（化合物＃２）及び３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソ−１−フェニル−ブタン（化合物＃３）は、Sayed,G. H. et al, “Synthesis and reactions of some β-aroyl-α-（indol-3-yl）propionic acids” Journal of the Chemical Society of Pakistan,7（4), 263-72； 1985の記載の方法に従って合成した。
［化合物＃４の合成］
トランス−４−（４−フルオロフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸
５０ｍＬ丸底フラスコに窒素充填下でフルオロベンゼン（０．５０ｇ，５．２１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）で溶解させ、無水マレイン酸（０．５１ｇ，５．２０ｍｍｏｌ）と塩化アルミニウム（１．４０ｇ，１０．４９ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。反応液に１Ｎ塩酸（１０ｍＬ）を加えｐＨ１にして酢酸エチル（４０ｍＬ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、再結晶（ベンゼン）により精製を行いトランス−４−（４−フルオロフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸を得た。（０．５７ｇ，収率５６％）：融点１１４．８−１１９．６℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ８．０６（ｍ，２Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｍ，２Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １８７．５，１７０．７，１６６．３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２５５．５Ｈｚ），１３８．０，１３２．８（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝３．２Ｈｚ），１３１．７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝９．９Ｈｚ），１３１．６，１１６．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２．１Ｈｚ）；ＩＲ（ｎｅａｔ）：２９７２，１７０５，１６６５ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ １９５（Ｃ１１Ｈ１０Ｏ３），ｆｏｕｎｄ １９５．
４−（４−フルオロフェニル）−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸（化合物＃４）
３０ｍＬ丸底フラスコにトランス−４−（４−フルオロフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸（０．２１ｇ，１．０８ｍｍｏｌ）をベンゼン（１０ｍＬ）で溶解させ、インドール（０．２６ｇ，２．１９ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で８時間撹拌し、室温になるまで攪拌した。反応液を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２０：１）を用いて精製を行い４−（４−フルオロフェニル）−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸（化合物＃４）を得た。（０．１５ｇ，収率４７％）：融点１６１．６−１６６．６℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ８．１３（ｍ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，４Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｄｄ，Ｊ＝１８．１，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｄｄ，Ｊ＝１８．１，３．９Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ １９７．９６，１７５．６１，１６６．００（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２５０．０Ｈｚ），１３７．１６，１３４．１１，１３１．９３（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１０．０Ｈｚ），１２７．１５，１２４．１６，１２２．０７，１１９．９７，１１９．５３，１１６．６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２２．０Ｈｚ），１１２．７９，１１２．４２，４２．０３，３８．５７；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１９，２９２５，１６７９ｃｍ−１；ＨＲＦＡＢ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ３１２．１０３６（Ｃ１９Ｈ１７ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ ３１２．１０２８．
［化合物＃５の合成］
トランス−４−（２，４−ジフルオロフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸
５０ｍＬ丸底フラスコに窒素充填下で１，３−ジフルオロベンゼン（０．５１ｇ，４．４７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させ、無水マレイン酸（０．４３ｇ，４．４６ｍｍｏｌ）と塩化アルミニウム（１．２０ｇ，９．０１ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌し、室温になるまで攪拌した。反応液に１Ｎ塩酸（１０ｍＬ）を加えｐＨ１にして酢酸エチル（４０ｍＬ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、ベンゼンで再結晶で精製を行いトランス−４−（２，４−ジフルオロフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸を得た。（０．５７ｇ，収率５６％）：融点１１４．８−１１９．６℃；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：δ ７．９８（ｍ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，ＪＨ−Ｆ＝１５．６，３．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｍ，２Ｈ），６．７５（ｄｄ，ＪＨ−Ｆ＝１５．６，１．２Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：δ １８７．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２．６Ｈｚ），１６６．９（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝２５４．５，１２．３Ｈｚ），１６６．４，１６３．４（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝２５４．５，１２．９Ｈｚ），１４０．０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６．１Ｈｚ），１３４．０（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝１０．９，３．６Ｈｚ），１３３．０（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝１．６Ｈｚ），１２３．３（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝１２．４，３．６Ｈｚ），１１３．４（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１．５，３．６Ｈｚ），１０５．８（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝２７．３，２６．３Ｈｚ）；ＩＲ（ｎｅａｔ）：２９１７，１６９７，１６６１ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ＋］ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２１３（Ｃ１１Ｈ１０Ｏ３），ｆｏｕｎｄ
２１３．
４−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸（化合物＃５）
３０ｍＬ丸底フラスコにトランス−４−（２，４−ジフルオロフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸（０．３９ｇ，１．８４ｍｍｏｌ）をベンゼン（１０ｍＬ）で溶解させ、インドール（０．４３ｇ，２．１９ｍｍｏｌ）加えて、８０℃で８時間撹拌し、室温になるまで攪拌した。反応液を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２０：１）を用いて精製を行い４−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸を得た。（０．１５ｇ，収率５１％）：融点１８０．２−１８４．６℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ７．９８（ｍ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，３．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｄｄｄ，ＪＨ−Ｆ＝１８．５，１０．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｄｄｄ，ＪＨ−Ｆ＝１８．５，６．１，３．５Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ １９５．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝４．１Ｈｚ），１７４．８，１６５．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２５３．０，１３．４Ｈｚ），１６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２５５．５，１３．４Ｈｚ），１３６．４，１３２．７（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝１０．８，４．１Ｈｚ），１２６．３，１２３．３，１２２．２（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝１２．３，３．６Ｈｚ），１２１．４，１１９．１，１１８．８，１１２．６（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝２１．１，３．６Ｈｚ），１１１．９，１１１．８，１０５．４（ｄｄ，ＪＣ−Ｆ＝２６．１Ｈｚ），４５．６（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝６．３Ｈｚ），３７．９；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３８２，２９１９，１６７８ｃｍ−１；ＨＲＦＡＢ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ３３２．１０３６（Ｃ１９Ｈ１７ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ ３１２．１０２８．
［化合物＃６の合成］
トランス−４−（２，４−ジメチルフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸
５０ｍＬ丸底フラスコに窒素充填下でｍ−キシレン（１．００ｇ，９．４２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解させ、無水マレイン酸（０．９３ｇ，９．４２ｍｍｏｌ）と塩化アルミニウム（２．５１ｇ，１８．８４ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。反応液に１Ｎ塩酸（１０ｍＬ）を加えｐＨ１にして酢酸エチル（４０ｍＬ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、再結晶（ベンゼン）により精製を行いトランス−４−（２，４−ジメチルフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸を得た。（１．４９ｇ，収率７７％）：融点８５．４−８８．８℃；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ７．７５（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １９２．５，１７０．９，１４３．１，１４１．７，１３９．５，１３３．６，１３３．０，１３０．９，１３０．０，１２６．４，２１．５，２１．２；ＩＲ（ｎｅａｔ）：２９８６，１７０３，１６６７ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２０５（Ｃ１２Ｈ１２Ｏ３），ｆｏｕｎｄ ２０５．
４−（２，４−ジメチルフェニル）−２−（１−プロピル−１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸（化合物＃６）
３０ｍＬ丸底フラスコにトランス−４−（２，４−ジメチルフェニル）−４−オキソ−２−ブテン酸（０．５０ｇ，２．４５ｍｍｏｌ）をベンゼン（１０ｍＬ）で溶解させ、Ｎ−プロピルインドール（０．８５ｇ，４．９０ｍｍｏｌ）加えて、８０℃で８時間撹拌し、室温になるまで攪拌した。反応液を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：アセトン＝５：１）を用いて精製を行い４−（２，４−ジメチルフェニル）−２−（１−プロピル−１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸を得た。（０．９８ｇ，収率６７％）：融点１３９−１４１℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．７０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｍ，２Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），４．５６（ｄｄ，Ｊ＝６．０，４．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｍ，２Ｈ），３．９２（ｍ，１Ｈ），３．２８（ｄｄ，Ｊ＝１７．８，４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｍ、２Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝１４．７，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ２００.９，１７９.７，１４２.３，１３８.９，１３６.３，１３４.１，１３２.８，１２９.１，１２６.７，１２６.２，１２６.１，１２１.７，１１９.４，１１９.２，１１０.６，１０９.５，４８.０，４４.０，３８.０，２３.４，２１.５，２１.３，１１.５；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４２８，２９２３，１７０７ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ３２２．１４４３（Ｃ１９Ｈ１７ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ ３６４．
４−フェニル−２−（１Ｈ−５−エトキシインドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸（化合物＃７）は、インドールの代わりに５−エトキシインドールを用いて、化合物＃２０と同様の方法で合成した。
化合物＃８、１３〜１５、１７〜１９、及び２１〜２５はＮ−メトキシカルボニルインドール酢酸メチルを鍵中間体として合成した。
１−メトキシカルボニルインドール−３−酢酸 メチルエステル
インドール−３−酢酸 メチルエステル
インドール−３−酢酸（２．００ｇ，１１．４２ｍｍｏｌ）をメタノール（４０ｍｌ）に溶かし、そこに塩化アセチル（０．５ｍｌ，６．６８８ｍｍｏｌ）を一滴ずつ滴下し、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、飽和重曹水溶液を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、インドール−３−酢酸 メチルエステルを得た。（２．１４ｇ，収率９９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１３（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１０−７．１９（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．３，１３６．０，１２７．１，１２３．２，１２２．０，１１９．５，１１８．６，１１１．２，１０８．０，５１．９，３１．０；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１０，１７３０，１４５８，１４３５，１３３７，１１６４，１０９５，１０１１ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ １８９．
１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
インドール−３−酢酸メチル（２．００ｇ，１０．５７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）に溶かし、そこにヨウ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＩ，３０．０ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ）、３０％水酸化ナトリウム水溶液（２４ｍｌ）を加え、０℃に冷却した。反応液に塩化ギ酸メチル（１．９６ｇ，２０．７３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、反応を停止させた。水（５０ｍｌ）を加え、クロロホルム（５０ｍｌ）で３回抽出し、有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、Ｎ−メトキシカルボニルインドール−３−酢酸メチルを得た。（２．２６ｇ，収率８７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７１．１，１５１．１，１３５．２，１２９．９，１２４．６，１２３．８，１２２．８，１１８．９，１１５．０，１１３．８，５３．５，５１．９，３０．６；ＩＲ（ｎｅａｔ）：１７４６，１４５５，１３８２，１２５８，１１６４，１０８９，１０１８ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２４７．
化合物＃８及び９は、国際公開公報２０１０／０４５４５１号パンフレットに記載の方法に従って合成した。
［化合物＃８の合成］
２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニル）エタノール
２−（４−ピペリジニル）エタノール（１．０ｇ，７．７ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍｌ）に溶かし、そこに炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（２．０ｇ，９．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：アセトン＝９：１）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−（４−ピペリジニル）エタノールを得た。（１．６８ｇ，収率９５％）
２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニル）−１−ヨウ化エタン
トリフェニルホスフィン（２．５６ｇ，９．７６０ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．６６ｇ，９．６９４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（２．４７ｇ，９．７３２ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこにＮ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−（４−ピペリジニル）エタノール（１．４９ｇ，６．４９７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍｌ）溶液を滴下し、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−（４−ピペリジニル）−１−ヨウ化エタンを得た。（２．１３ｇ，収率９６％）
α−［２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニル）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（５００ｍｇ，２．０２２ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，１．８１ｇ，１０．１１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の１．５Ｍシクロヘキサン溶液（２．１６ｍｌ，１．６ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニル）−１−ヨウ化エタン（６８６ｍｇ，２．０２２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（１５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（１５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、α−２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニル）−エチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（６２６ｍｇ，収率６８％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１９（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．３０（ｍ，１Ｈ），３．７９−４．１５（ｍ，５Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），２．６５（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｍ，２Ｈ），１．６５（ｍ，２Ｈ），１．２５−１．５０（ｍ，１２Ｈ），１．０５−１．１９（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．９，１６８．０，１５４．８，１３５．４，１２９．３，１２４．８，１２３．１，１２２．９，１１９．２，１１９．２，１１５．２，７９．１，５３．７，５３．０，５２．１，４８．９，４３．７，４２．７，３５．９，３４．３，３２．０，２９．５，２８．４；ＦＡＢ―ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４５９．
α−[２−（１−アセチル−４−ピペリジニル）−エチル]−1−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸メチルエステル
α−［２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニル）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸メチルエステル（１００ｍｇ，０．２１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２ｍｌに溶かし、トリフルオロ酢酸（１．０ｍｌ，１３．０７ｍｍｏｌ）を加え、室温で５分間撹拌した。反応液を１０％炭酸ナトリウム水溶液１０ｍLに滴下し、反応を停止させた。この溶液を酢酸エチル（１０ｍL）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水１０ｍLで2回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去し、α−[２−（４−ピペリジニル）−エチル]−1−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸メチルエステル（７４．１ｍｇ）を得た。この（７４．１ｍｇ，０．２０７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン３ｍＬに溶かし、トリエチルアミン（０．２ｍＬ)と塩化アセチル（１０ｍｇ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液１０ｍＬを加えて反応を停止させ、酢酸エチル（１０ｍL）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水１０ｍＬで2回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム:アセトン=９：１)で精製し、α−[２−（１−アセチル−４−ピペリジニル）−エチル]−1−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸メチルエステルを得た。（５３．９ｍｇ, 収率６５％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ)，７．６１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．２８（ｍ，１Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．７３−３．７９（ｍ，２Ｈ)，３．６８（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｔ，Ｊ=１２．６Ｈｚ，１Ｈ），１．９１−２．１９（ｍ，５Ｈ），１．７３（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｍ，１Ｈ），１．２６−１．３２（ｍ，２Ｈ），１．０５−１．１２（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７３．８，１６８．７，１５１．２，１３５．４，１２９．３，１２４．８，１２２．９，１１９．２，１１9.１，１１５．２，５３．７，５２．１，４６．６，４２．７，４１．７，３５．９，３４．２,３２．５，３１．６，２９．２，２１．４；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４０１．
α−２−（１−アセチル−４−ピペリジニル）−エチル−３−インドール酢酸（化合物＃８）
α−２−（１−アセチル−４−ピペリジニル）−エチル−N−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（４８．０ｍｇ，０．１２０ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：アセトン＝３：２）で精製し、α−２−（１−アセチル−４−ピペリジニル）−エチル−３−インドール酢酸（化合物＃８）を得た。（２５．５ｍｇ，収率６５％：1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．５４（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．１１（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｔ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ），１．８６−２．１７（ｍ，５Ｈ），１．６２（ｔ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，２Ｈ），１．４１（ｍ，１Ｈ），1．２
２-１．２８（ｍ，２Ｈ），０．９３−１．０１（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７８．８，１６９．３，１３６．２，１２６．５，１２２．３，１２２．０，１１９．５，１１９．１，１１３．３，１１１．４，４６．７，４３．１，４２．０，３５．７，３４．２，３２．５，３１．６，２９．７，２１．３；ＩＲ （ｎｅａｔ）：３４１０，１６９９，１４５４，１２７１ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３２９．
α−２−（１−アセチル−４−ピペリジニル）−メチル−３−インドール酢酸（化合物＃９）は、２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニル）エタノールの代わりにＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリジニルメタノールを用いて、化合物＃８と同様の手法で合成した。
［化合物＃１０の合成］
α−４−アミノブチル−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１５０ｍｇ，０．３５８ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸（０．４ｍｌ，５．２２７ｍｍｏｌ）を加え、室温で撹拌した。５分後に反応液を飽和重曹水に滴下し、反応を停止させた。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去し、α−４−アミノブチル−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。
α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
α−４−アミノブチル−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１５０ｍｇ，０．４９３ｍｍol）をテトラヒドロフラン（３ｍｌ）に溶かし、そこにＮ−アセチル−Ｌ−プロリン（１１６ｍｇ，０．７３８ｍｍol）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（８５．０ｍｇ，０．７３９ｍｍol）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（１５２ｍｇ，０．７３７ｍｍol）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（７２．０ｍｇ，０．５８９ｍｍol）を加え、室温で７時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：アセトン＝７：３）で精製し、α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１０７ｍｇ，収率４９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．３６-３．５８（ｍ，２Ｈ），３．１０-３．２６（ｍ，２Ｈ），１．７６-２．４０（ｍ，９Ｈ），１．４９-１．５６（ｍ，２Ｈ），１．３３-１．３８（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．８，１７１．０，１７０．８，１５１．１，１３５．３，１２９．２，１２４．６，１２２．９，１２２．８，１１９．２，１１９．１，１１５．０，５９．４，５３．６，５１．９，４８．１，４２．３，３８．９，３１．５，２９．０，２７．２，２４．８，２４．７，２２．３；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４５８．
α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−３−インドール酢酸（化合物＃１０）
α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（８０．０ｍｇ，０．１７５ｍｍol）をメタノール２ｍｌに溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−３−インドール酢酸（化合物＃１０）を得た。（６３．６ｍｇ，収率９４％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン-ｄ６）：δ １０．２１（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５３（ｍ，１Ｈ），３．４０-３．４６（ｍ，１Ｈ），３．２３（ｍ，１Ｈ），３．１０-３．１７（ｍ，１Ｈ），１．８５-２．１４（ｍ，９Ｈ），１．３６-１．５０（ｍ，４Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）：δ １７５．８，１７２．１，１７０．３，１３７．３，１２７．５，１２３．３，１２１．９，１１９．７，１１９．３，１１４．１，１１２．０，６０．５，４８．３，４３．３，３９．２，３２．９，３２．５，２５．４，２５．１，２２．２；ＩＲ（Ｎｅａｔ）：３３００，１６３４，１４５６，１２４５cｍ-１； ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８６．
［化合物＃１１の合成］
α−［２−（２−アミノエトキシ）−エチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
α−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−アミノエトキシエチル）］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１４０ｍｇ，０．３２２ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸（０．３ｍｌ，３．９２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で撹拌した。５分後に反応液を飽和重曹水に滴下し、反応を停止させた。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去し、α−［２−（２−アミノエトキシ）−エチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（８０．０ｍｇ，収率７４％）
α−｛Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−［２−（２−アミノエトキシ）−エチル］｝−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
α−［２−（２−アミノエトキシ）−エチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（８０．０ｍｇ，０．２３９ｍｍol）をテトラヒドロフラン（３ｍｌ）に溶かし、そこにＮ−アセチル−Ｌ−プロリン（５６．４ｍｇ，０．３５９ｍｍol）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（４１．２ｍｇ，０．３５８ｍｍol）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（７４．０ｍｇ，０．３５９ｍｍol）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３５．０ｍｇ，０．２８６ｍｍol）を加え、室温で７時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：アセトン＝７：３）で精製し、α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（７６．１ｍｇ，収率６７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５７−７．６６（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．２８（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３２-３．５２（ｍ，７Ｈ），２．３６−２．４８（ｍ，２Ｈ），１．８４-２．１８（ｍ，７Ｈ），１．４９-１．５６（ｍ，２Ｈ），１．３３-１．３８（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１７４．２，１７１．５，１７０．８，１５１．１，１３５．５，１２９．３，１２４．８，１２３．１，１２３．０，１１９．４，１１８．９，１１５．２，6９．４，６８．４，５９．２，５３．８，５２．２，４８．２，３９．５，３９．２，３２．２，２７．８，２５．０，２２．５；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４７４．
α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−３−インドール酢酸（化合物＃１１）
α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−Ｎ−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（６０．０ｍｇ，０．１２７ｍｍol）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、α−［Ｎ−（１−アセチルピロリジン−２−カルボニル）−４−アミノブチル］−３−インドール酢酸（化合物＃１１）を得た。（３６．６ｍｇ，収率７２％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン-ｄ６）：δ ８．４８（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０９−７．２１（ｍ，３Ｈ），４．６７（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４０-４．１１（ｍ，１Ｈ），３．１８-３．７６（ｍ，８Ｈ），２．４６-２．６７（ｍ，４Ｈ），１．８６-２．２２（ｍ，７Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）：δ １７８．０，１７１．６，１７１．２，１３６．１，１２６．５，１２２．３，１２２．０，１１９．４，１１８．９，１１３．７，１１１．２，６９．３，６８．６，６０．０，４８．５，４１．２，３９．９，３３．７，２９．１，２４．８，２２．３；ＩＲ（Ｎｅａｔ）：３３１７，１６３４，１４５６，１２４７，１１１９cｍ-１； ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４０２．
［化合物＃１２の合成］
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−（１−ナフチル）−酢酸 メチルエステル
α−（１−ナフチル）−酢酸 メチルエステル（１５０ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランに溶解し、ヘキサメチルホスホラミド（ＨＭＰＡ，６７１ｍｇ，３．７５ｍｍｏｌ）を加えて−７８℃に冷却した。この溶液にリチウムジイソプロピルアミド（１．５Ｍシクロヘキサン溶液，０．７５ｍｌ，１ｍｍｏｌ）を滴下し、−７８℃で３０分間攪拌した後、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヨードヘキサン（２７０ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２ｍＬ）を滴下し、−７８℃で１時間攪拌した。反応液の温度を１５分間かけて０℃まで上昇させた後、溶液に５０ｍＬの水を加えて、５０ｍＬの酢酸エチルで、２回抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム溶液（２０ｍＬ）、続いて食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した後、硫酸ナトリウムで脱水処理して減圧乾固した。反応物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−（１−ナフチル）−酢酸 メチルエステルを得た。（２７１ｍｇ，収率９１％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１１（ｄ，Ｊ=８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ=８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ=８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４０−７．５４（ｍ，４Ｈ），４．７１（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｔ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｍ，２Ｈ），１．２４−１．４８（ｍ，１７Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７４．７，１５５．９，１３５．３，１３３．８，１３１．３，１２８．８，１２７．５，１２６．１，１２５．４，１２５．３，１２４．６，１２２．８，７８．７，５１．８，４６．５，４０．３，３２．９，２９．７，２８．９，２８．２，２７．６，２６．３；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４００．
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−（１−ナフチル）−酢酸（化合物＃１２）
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−（１−ナフチル）−酢酸 メチルエステル（１００ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）をメタノールと水酸化ナトリウム水溶液の混合溶液（２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液：メタノール＝１：４，５ｍＬ）に溶解し、５０℃で１時間加熱した。反応溶液を６Ｎ塩酸でｐＨ３．５に調整し、減圧蒸留で、メタノールを除去した。この溶液に、水（１５ｍＬ）を加えて、酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム溶液（２０ｍＬ）、続いて食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した後、硫酸ナトリウムで脱水処理して減圧乾固した。反応物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−（１−ナフチル）−酢酸（化合物＃１２）を得た。（９０ｍｇ，収率９３％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１３（ｄ，Ｊ=８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ=８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４１−７．５３（ｍ，４Ｈ），４．５６（ｓ，１Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ=７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．０３（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｍ，２Ｈ），１．２２−１．４６（ｍ，１７Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７９．０，１５６．０，１３５．１，１３３．９，１３１．６，１２８．９，１２７．７，１２６．２，１２５．５，１２５．４，１２４．９，１２３．１，７９．０，４６．６，４０．４，３２．７，２９．８，２９．０，２８．３，２７．７，２６．４；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１７，１７０５，１４５７，１２６８，１０９９ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８６．
［化合物＃１３の合成］
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキサノール
６−アミノ−１−ヘキサノール（１．０ｇ，８．５３３ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶かし、そこに炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（１．８６ｇ，８．５２２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：アセトン＝９：１）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノールを得た。（１．８０ｇ，収率９７％）
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヨードへキサン
トリフェニルホスフィン（２．３５ｇ，８．９６ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．６１ｇ，８．９６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（２．２８ｇ，８．９８ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこにＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノール（１．３ｇ，５．９８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍｌ）溶液を滴下し、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヨードへキサンを得た。（１．６７ｇ，収率８６％）
α−メチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルはKatayama M, Kato Y, Marumo S. “Synthesis，absolute configuration and biological activity of both enantiomers of 2-（5,6-dichloro-3-indolyl）propionic acid： new dichloroindole auxins” Bioscience，Biotechnology，and Biochemistry，65（2），270-276； 2001.に記載の方法に従って合成した。
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−メチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、α−メチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（８３．８ｍｇ，０．３２１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これをリチウム ビストリメチルシリルアミド（ＬＨＭＤＳ）の１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液（０．６９ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液にＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヨードへキサン（１０５ｍｇ，０．３２１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−メチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（６８．６ｍｇ，収率４６％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１９（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｍ，２Ｈ），２．０４−２．１２（ｍ，２Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），１．１７−１．４３（ｍ，１７Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７６．３，１５５．９，１５１．３，１３５．８，１２８．６，１２４．９，１２４．５，１２２．８，１２２．０，１２０．０，１１５．２，７８．９，５３．７，５２．１，４５．５，４０．４，３７．２，２９．９，２９．５，２８．３，２６．５，２４．２，２２．５；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ４６０．
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−メチル−３−インドール酢酸（化合物＃１３）
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル），α−メチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（６０．０ｍｇ，０．１３０ｍｍｏｌ）をメタノール（４．６ｍｌ）に溶かした。そこに水（０．４ｍｌ）、水酸化カリウム（１．６８g，３０ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：アセトン＝８５：１５）で精製し、α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノ−１−ヘキシル）−α−メチル−３−インドール酢酸（化合物＃１３）を得た。（４０．０ｍｇ，収率７９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．２６（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），４．５２（ｓ，１Ｈ），３．０３（ｍ，２Ｈ），２．０８−２．１７（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．２３−１．４８（ｍ，１７Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １８１．７，１５６．１，１３６．７，１２５．５，１２１．４，１２０．４，１１９．２，１１８．８，１１１．３，７９．１，４５．７，４０．５，３７．５，２９．７，２８．５，２６．５，２４．２，２２．６；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１５，３３３９，１６９９，１５１９，１４６０，１３６９，１２４９，１１７０ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８９．
［化合物＃１４の合成］
２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−エタノール
２−（２−アミノエトキシ）−エタノール（１．０ｇ，９．５１１ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶かし、そこに炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（２．０７ｇ，９．４８５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：アセトン＝３：２）で精製し、２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−エタノールを得た。（１．７８ｇ，収率９１％）
２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−ヨードエタン
トリフェニルホスフィン（２．８７ｇ，１０．９４ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．７５ｇ，１１．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（２．７８ｇ，１０．９５ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−エタノール（１．５ｇ，７．３０８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍｌ）溶液を滴下し、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５）で精製し、２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−ヨードエタンを得た。（２．１９ｇ，収率９５％）
α−［２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（５００ｍｇ，２．０２２ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，１．８１ｇ，１０．１１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の１．５Ｍシクロヘキサン溶液（２．０２ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−ヨードエタン（６３７ｍｇ，２．０２２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（１５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（１５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、α−［２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（６４５ｍｇ，収率７９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Hz，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．７Hz，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｓ，１Ｈ），４．０２−４．０６（ｍ，４Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．４３−３．５１（ｍ，４Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ），２．２９（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．８，１５５．９，１５１．２，１３５．４，１２４．８，１２３．１，１２２．９，１１９．２，１１８．８，１１５．２，７９．１，６９．８，６８．３，５２．７，５２．１，４０．３，３９．３，３２．２，２８．３；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３５．
α−［２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−エチル］−３−インドール酢酸（化合物＃１４）
α−［２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（８０．０ｍｇ，０．１８４ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、α−［２−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−２−アミノエトキシ）−１−エチル］−３−インドール酢酸（化合物＃１４）を得た。（７０．２ｍｇ，収率８７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．４０（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．３０−３．４６（ｍ，４Ｈ），３．２３（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７９．２，１５６．２，１３６．２，１２６．４，１２２．６，１２２．１，１１９．５，１１９．１，１１２．６，１１１．３，７９．４，６９．７，６８．５，４０．３，３９．７，３２．３，２８．４；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４０６，３３３２，１６９９，１５２０，１４５８，１３６７，１２５２，１１６９，１１１９ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ３８５．
［化合物＃１５の合成］
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブタノール
４−アミノ−１−ブタノール（１．０ｇ，１１．２２ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶かし、そこに炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（２．５３ｇ，１１．５８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：アセトン＝９：１）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブタノールを得た。（１．８８ｇ，収率８９％）
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ヨードブタン
トリフェニルホスフィン（３．３ｇ，１２．５８ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．８６ｇ，１２．６３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（３．２ｇ，１２．６１ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこにＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブタノール（１．６ｇ，８．４５４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍｌ）溶液を滴下し、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ヨードブタンを得た。（１．８３ｇ，収率７２％）
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（４００ｍｇ，１．６１８ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，１．４５ｇ，８．０８６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の１．５Ｍシクロヘキサン溶液（１．６２ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液にＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ヨードブタン（４８４ｍｇ，１．６１８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（１５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（１５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（３７３ｍｇ，収率５５％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５９（ｓ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．０９（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｍ，２Ｈ），１．２５−１．５３（ｍ，１３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．９，１５５．９，１５１．２，１３５．５，１２９．３，１２４．８，１２３．０，１２２．９，１１９．２，１１５．２，７８．９，５３．６，５２．０，４２．５，４０．２，３１．７，２９．８，２８．３，２４．８；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４１９．
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１５）
α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１００ｍｇ，０．２３９ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノ−１−ブチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１５）を得た。（７１．８ｍｇ，収率８７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．３５（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），４．５７（ｓ，１Ｈ），３．８１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．０２（ｍ，２Ｈ），１．９７（ｍ，２Ｈ），１．２３−１．４８（ｍ，１３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７９．６，１５６．１，１３６．１，１２６．４，１２２．３，１２２．０，１１９．４，１１９．１，１１３．０，１１１．３，７９．３，４２．９，４０．３，３１．９，２９．７，２８．４，２４．７；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３７４７，１６９９，１５２０，１４５６，１３６７，１２５０，１１７０ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋３４７．
［化合物＃１７の合成］
２−エチル−１−ヨードブタン
トリフェニルホスフィン（１．９３ｇ，７．３５８ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．５ｇ，７．３４４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５．０ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（１．８６ｇ，７．３２８ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに２−エチル−１−ブタノール（０．５ｇ，５．６７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍｌ）溶液を滴下し、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、２−エチル−１−ヨードブタンを得た。（０．３５ｇ，収率３４％）
α−（２−エチル−１−ブチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１００ｍｇ，０．４０４ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，３６２ｍｇ，２．０２０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）の１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液（０．６１ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に２−エチル−１−ヨードブタン（８５．８ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製し、α−（２−エチル−１−ブチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１０４ｍｇ，収率７８％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ），１．２１−１．４１（ｍ，５Ｈ），０．８２−０．８８（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７４．３，１５１．３，１３５．５，１２９．５，１２４．７，１２２．９，１１９．７，１１９．３，１１５．２，５３．７，５２．０，４０．４，３８．０，３５．６，２５．１，２４．９，１０．４，１０．４；ＩＲ（ｎｅａｔ）：１７３８，１４５５，１３７７，１２５６，１１６４，１０８５ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３３１．
α−（２−エチル−１−ブチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１７）
α−（２−エチル−１−ブチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸（７０．０ｍｇ，０．２１１ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で２．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（２−エチル−１−ブチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１７）を得た。（５２．４ｍｇ，収率９６）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０２（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ），１．２３−１．３９（ｍ，５Ｈ），０．７８−０．８４（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １８１．１，１３６．１，１２６．６，１２２．２，１２２．２，１１９．７，１１９．３，１１３．７，１１１．２，４０．６，３７．８，３５．９，２５．０，２５．０，１０．４，１０．４；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１４，１７０３，１４５８，１２９３，１０９８ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２６０．
［化合物＃１８の合成］
３−メチル−１−ヨードペンタン
トリフェニルホスフィン（１．９３g，７．３５８ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．５
ｇ，７．３４４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５．０ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（１．８６ｇ，７．３２８ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに３−メチル−１−ペンタノール（０．５ｇ，５．６７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍｌ）溶液を滴下し、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９８：２）で精製し、３−メチル−１−ヨードペンタンを得た。（０．１２ｍｇ，収率１１％）
α−（３−メチル−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（５０．０ｍｇ，０．２０２ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，１８１ｍｇ，１．０１１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）の１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液（０．３０ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に３−メチル−１−ヨードペンタン（５１．５ｍｇ，０．２４３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１２：１）で精製し、α−（３−メチル−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（２５．８ｍｇ，収率３９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｍ，２Ｈ），１．１０−１．３９（ｍ，５Ｈ），０．８２−０．８７（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７４．２，１５１．３，１３５．５，１２９．５，１２４．８，１２２．９，１１９．４，１１９．３，１１５．２，５３．７，５２．０，４２．９，３４．４，３４．２，２９．８，２９．２，１９．１，１１．３；ＩＲ（ｎｅａｔ）：１７４１，１４５４，１３７８，１２５４，１０８４ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３３１．
α−（３−メチル−１−ペンチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１８）
α−（３−メチル−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（２０．０ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、７０℃で２．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（３−メチル−１−ペンチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１８）を得た。（１６．８ｍｇ，収率８９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０７（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１０−７．１３（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），１．９７（ｍ，２Ｈ），１．１０−１．３６（ｍ，５Ｈ），０．７９−０．８５（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １８０．４，１３６．１，１２６．６，１２２．２，１２２．２，１１９．７，１１９．３，１１３．７，１１１．２，４３．２，３４．５，３４．３，３０．１，２９．２，１９．１，１１．３；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１８，１７０４，１４５６，１２９４，１０９８ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２５９．
［化合物＃１９の合成］
２−メチル−１−ヨードペンタン
トリフェニルホスフィン（１．９３ｇ，７．３５８ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．５ｇ，７．３４４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５．０ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（１．８６ｇ，７．３２８ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに２−メチル−１−ペンタノール（０．５ｇ，５．６７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍｌ）溶液を滴下し、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、２−メチル−１−ヨードペンタンを得た。（０．５６ｇ，収率５４％）
α−（２−メチル−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１００ｍｇ，０．４０４ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，３６２ｍｇ，２．０２０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）の１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液（０．６１ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に２−メチル−１−ヨードペンタン（８５．８ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製し、α−（２−メチル−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１０１ｍｇ，収率７５％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．９１−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），１．５８−２．２４（ｍ，２Ｈ），１．１０−１．５０（ｍ，５Ｈ），０．８３−０．９７（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７４．４，１５１．２，１３５．４，１２９．４，１２４．７，１２２．９，１２２．８，１１９．９，１１９．４，１１５．２，５３．７，５２．０，４０．４，３９．６，３９．３，３０．７，１９．８，１９．４，１４．２；ＩＲ（ｎｅａｔ）：１７３９，１４５６，１３７３，１２１７，１０８７ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３３１．
α−（２−メチル−１−ペンチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１９）
α−（２−メチル−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（７０．０ｍｇ，０．２１１ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で２．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（２−メチル−１−ペンチル）−３−インドール酢酸（化合物＃１９）を得た。（５１．９ｍｇ，収率９５％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１２（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），３．９６−４．０２（ｍ，１Ｈ），１．６０−２．２２（ｍ，２Ｈ），１．１２−１．５１（ｍ，５Ｈ），０．７９−０．９４（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １８０．９，１３６．１，１２６．５，１２２．３，１２２．２，１１９．７，１１９．３，１１３．３，１１１．２，４０．７，３９．９，３９．２，３０．３，１９．８，１９．４，１４．３；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１７，１６９９，１４５７，１２９２，１０９９ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２５９．
［化合物＃２０の合成］
４−フェニル−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸
（化合物＃２０）
３０ｍＬ丸底フラスコにトランス−４−フェニル−４−オキソ−２−ブテン酸（１．０ｇ，５．６５ｍｍｏｌ）をベンゼン（２５ｍＬ）で溶解させ、インドール（０．７９ｇ，６．７７ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で５時間撹拌し、室温になるまで攪拌した。反応液を減圧留去し、ベンゼンから再結晶を行い、４−フェニル−２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−オキソ−ブタン酸（化合物＃２０）を得た。（１．２４ｇ，収率７５％）：融点１４９−１５０℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）：δ １０．１７（１Ｈ，ｂｒｓ，１Ｈ），８．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．５７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．５１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，７．８Ｈｚ），７．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．３７（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．０６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），４．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．１Ｈｚ），４．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．８，１１．０Ｈｚ），３．４１（１Ｈ，dｄ，Ｊ＝１７．８，４．１Ｈｚ），；
ＩＲ：（ｎｅａｔ）：３４００，３０５５，１７１１，１６７７，１４５３ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２９４．１１３０（Ｃ１８Ｈ１６ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ ２９４．１１４３［Ｍ＋Ｈ］＋．
［化合物＃２１の合成］
４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ヨードペンタン
トリフェニルホスフィン（１．１ｇ，４．２１１ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．２９ｇ，４．２１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５．０ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（１．０７ｇ，４．２１１ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ペンタノール（０．５ｇ，２．８０７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍｌ）溶液を滴下し、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ヨードペンタンを得た。（０．３６ｇ，収率４５％）
α−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（５０．０ｍｇ，０．２０２ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，１８１ｍｇ，１．０１１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）の１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液（０．３０ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ヨードペンタン（８１．４ｍｇ，０．２８３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５）で精製し、α−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（５９．８ｍｇ，収率７３％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），１．９８−２．２３（ｍ，４Ｈ），１．６２−１．６８（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．５，１５１．３，１３５．５，１２９．１，１２５．０，１２３．１，１２３．１，１１９．２，１１８．６，１１５．３，５３．８，５２．２，４２．３，３１．４，３０．６，３０．３，３０．１，１８．６；ＩＲ （ｎｅａｔ）：１７３９，１４５６，１３７８，１２５７，１１９８ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ４０７．
α−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ペンチル）−３−インドール酢酸（化合物＃２１）
α−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ペンチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（５５．５ｍｇ，０．１８３ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、７０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−１−ペンチル）−３−インドール酢酸（化合物＃２１）を得た。（４３．９ｍｇ，収率９７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０６（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），１．９５−２．２２（ｍ，４Ｈ），１．６０−１．６７（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７９．９，１３６．２，１２６．２，１２２．４，１２２．４，１１９．９，１１９．１，１１２．５，１１１．４，４２．７，３１．５，３０．６，３０．３，３０．１，１８．６；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１８，１７０４，１４５９，１１９８ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３３５．
［化合物＃２２の合成］
３−（２−ヒドロキシ−１−エチル）−１，１‘−ビフェニル
２−（３−ブロモフェニル）−１−エタノール（２００ｍｇ，０．９９５ｍｍｏｌ）をジメトキシエタン：エタノール（＝５：１）の混合溶媒（３．０ｍｌ）に溶かし、フェニルボロン酸（２４２ｍｇ，１．９８５ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（１．５ｍｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン） パラジウム（０）（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４，５６．０ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）を加え、加熱還流下４時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に塩酸を加えて中和し、酢酸エチル（１０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、３−（２−ヒドロキシ−１−エチル）−１，１’−ビフェニルを得た。（１７２ｍｇ，収率８７％）
３−（２−ヨード−１−エチル）−１，１’−ビフェニル
トリフェニルホスフィン（３２７ｍｇ，１．２４８ｍｍｏｌ）、イミダゾール（８５．０ｍｇ，１．２４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（３１７ｍｇ，１．２４８ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに３−（２−ヒドロキシ−１−エチル）−１，１’−ビフェニル（１６５ｍｇ，０．８３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．５ｍｌ）溶液を滴下し、室温で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９８：２）で精製し、３−（２−ヨード−１−エチル）−１，１’−ビフェニルを得た。（１８５ｍｇ，収率７２％）
α−［２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（８０ｍｇ，０．３２４ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，２９０ｍｇ，１．６１８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の１．５Ｍシクロヘキサン溶液（０．３２ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に３−（２−ヨード−１−エチル）−１，１’−ビフェニル（９９．７ｍｇ，０．３２４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５）で精製し、α−［２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１３２ｍｇ、収率９６％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５−７．５８（ｍ，４Ｈ），７．３１−７．４４（ｍ，７Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（Ｓ，３Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．２５−２．５８（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．８，１５１．２，１４１．４，１４１．３，１４１．１，１３５．５，１２９．３，１２８．８，１２８．６，１２７．３，１２７．２，１２７．１，１２４．９，１２４．８，１２３．１，１２２．９，１１９．３，１１８．９，１１５．２，５３．７，５２．１，４１．８，３３．７，３３．５；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ４２７．
α−［２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−１−エチル］−３−インドール酢酸（化合物＃２２）
α−［２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−１−エチル］−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（８０．０ｍｇ，０．１８７ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−［２−（１，１’−ビフェニル−３−イル）−１−エチル］−３−インドール酢酸（化合物＃２２）を得た。（６０．３ｍｇ，収率９１％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．０１（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５３−７．５５（ｍ，２Ｈ），７．２９−７．４１（ｍ，７Ｈ），７．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．１３（ｍ，３Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７１（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．３９（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １８０．３，１４１．８，１４１．３，１４１．２，１３６．１，１２８．８，１２８．７，１２７．４，１２７．４，１２７．２，１２６．４，１２４．９，１２２．４，１２２．３，１１９．８，１１９．３，１１２．９，１１１．３，４２．２，３３．８，３３．７；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４２０，１６９９，１４５６，１２１６，１０９７ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３５５．
［化合物＃２３の合成］
α−（２−フェニル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（３００ｍｇ，１．２１３ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，１．０９ｇ，６．０６７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の１．５Ｍシクロヘキサン溶液（１．２１ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に１−ブロモ−２−フェニルエタン（２９２ｍｇ，１．５７７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（１０ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（１０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で2回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン）で精製し、α−（２−フェニル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（２２８ｍｇ，収率５４％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．２６（ｍ，６Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．８，１５１．２，１４０．９，１３５．４，１２９．３，１２８．４，１２８．３，１２６．０，１２４．８，１２３．１，１２２．９，１１９．３，１１９．０，１１５．２，５３．７，５２．０，４１．８，３３．５；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３５１．
α−（２−フェニル−１−エチル）−３−インドール酢酸（化合物＃２３）
α−（２−フェニル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１５０ｍｇ，０．４２７ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（２−フェニル−１−エチル）−３−インドール酢酸（化合物＃２３）を得た。（８５．３ｍｇ，収率７２％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）：δ １０．１６（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０９−７．３２（ｍ，７Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）：δ １７５．４，１４２．４，１３７．２，１２８．８，１２８．７，１２７．２，１２６．２，１２３．２，１２１．８，１１９．４，１１９．２，１１３．６，１１１．８，４２．５，３４．９，３４．１；ＩＲ （ｎｅａｔ）：３４１６，１７００，１４５７，１２４６，１０９８ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２７９．
［化合物＃２４の合成］
２−シクロペンチル−１−ヨードエタン
トリフェニルホスフィン（１．０３ｇ，３．９４２ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．２７ｇ，３．９３７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（１．０ｇ，３．９４０ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに２−シクロペンチル−１−エタノール（０．３ｇ，２．６２７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍｌ）溶液を滴下し、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で2回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、２−シクロペンチル−１−ヨードエタンを得た。（０．４６ｇ，収率８４％）
α−（２−シクロペンチル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１５０ｍｇ，０．６０７ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，５４４ｍｇ，３．０３６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の１．５Ｍシクロヘキサン溶液（０．６１ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液に２−シクロペンチル−１−ヨードエタン（１５３ｍｇ，０．７２８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１３：１）で精製し、α−（２−シクロペンチル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１５３ｍｇ，収率７６％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），２．０５（ｍ，２Ｈ），１．７６−１．７９（ｍ，３Ｈ），１．５９−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．４７−１．５０（ｍ，２Ｈ），１．１２−１．１７（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７４．１，１５１．１，１３５．４，１２９．４，１２４．６，１２２．８，１１９．４，１１９．２，１１５．１，５３．６，５１．９，４１．７，３８．５，３７．９，３２．５，３２．３，２４．９；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３２９．
α−（２−シクロペンチル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（化合物＃２４）
α−（２−シクロペンチル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１００ｍｇ，０．２９１ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で２．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−（２−シクロペンチル−１−エチル）−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（化合物＃２４）を得た。（７８．５ｍｇ，収率９９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１９（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．０１（ｍ，２Ｈ），１．７０−１．７５（ｍ，３Ｈ），１．４５−１．５５（ｍ，４Ｈ），１．３４−１．３７（ｍ，２Ｈ），０．９８−１．０３（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １８０．７，１３６．１，１２６．５，１２２．２，１２２．０，１１９．５，１１９．２，１１３．４，１１１．２，４３．１，３９．９，３４．１，３２．５，３１．６，２５．１；ＩＲ （ｎｅａｔ）：３４１５，１７０３，１４５７，１３３９，１０９８ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ２９４．
［化合物＃２５の合成］
シクロペンチルヨードメタン
トリフェニルホスフィン（１．１８ｇ，４．４９１ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．３１ｇ，４．４９５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（１．１４ｇ，４．４９２ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこにシクロペンチルメタノール（０．３ｇ，２．９９５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍｌ）溶液を滴下し、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、シクロペンチルヨードメタンを得た。（０．５３ｇ，収率８４％）
α−シクロペンチルメチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル
窒素雰囲気下、１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１５０ｍｇ，０．６０７ｍｍｏｌ），ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ，５４４ｍｇ，３．０３６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）に溶かし、−７８℃に冷却した。これにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の１．５Ｍシクロヘキサン溶液（０．６１ｍｌ，１．５ｅｑ）を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で０．５時間撹拌した。この反応液にシクロペンチルヨードメタン（１５３ｍｇ，０．７２８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後０℃にし、水（５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１３：１）で精製し、α−シクロペンチルメチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１５３ｍｇ，収率７６％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），２．０５（ｍ，２Ｈ），１．７６−１．７９（ｍ，３Ｈ），１．５９−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．４７−１．５０（ｍ，２Ｈ），１．１２−１．１７（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７４．１，１５１．１，１３５．４，１２９．４，１２４．６，１２２．８，１１９．４，１１９．２，１１５．１，５３．６，５１．９，４１．７，３８．５，３７．９，３２．５，３２．３，２４．９；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ３２９．
α−シクロペンチルメチル−３−インドール酢酸（化合物＃２５）
α−シクロペンチルメチル−１−メトキシカルボニル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１００ｍｇ，０．３０４ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、そこに２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．５ｍｌ）を加え、７０℃で２．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９５：５）で精製し、α−シクロペンチルメチル−３−インドール酢酸（化合物＃２５）を得た。（５８．３ｍｇ，収率７５％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）：δ １０．１３（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），２．０６（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．８３（ｍ，３Ｈ），１．４７−１．６１（ｍ，４Ｈ），１．１７−１．２０（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）：δ １７５．８，１３７．３，１２７．４，１２３．１，１２１．８，１１９．５，１１９．２，１１４．１，１１１．９，４２．４，３９．６，３８．７，３２．９，３２．９，２５．３，２５．３；ＩＲ （ｎｅａｔ）：３４１８，１６９９，１４５６，１３３９，１０９７ｃｍ−１；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２５７．
化合物＃２６〜３１は、Muro Fumihito et. al. “Discovery of trans-4-[1-[[2,5-Dichloro-4-(1-methyl-3-indolylcarboxamido)phenyl]acetyl]-(4S)-methoxy-(2S)-pyrrolidinylmeｔhoxy]cyclohexanecarboxylic Acid: An Orally Active, Selective Very Late Antigen-4 Antagonist” Journal of Medicinal Chemistry, 52(24), 7974-7992; 2009.に記載の方法に従って合成した。
［化合物＃２６の合成］
Ｎ−メチル−３−インドール酢酸 メチルエステル
３−インドール酢酸 メチルエステルを（２００ｍｇ，１．１ｍｍoｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化メチル（２２３ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製し、Ｎ−メチル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１４０ｍｇ，収率６５％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ=８．２，７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄｄ，Ｊ=８．２，７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１３６．９，１２７．７，１２１．７（２Ｃ），１１９．２６，１１８．９，１０９．３，１０６．８，５１．９，３２．７，３１．０．
Ｎ−メチル−３−インドール酢酸（化合物＃２６）
Ｎ−メチル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１２０ｍｇ，０．５９ｍｍoｌ）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ−メチル−３−インドール酢酸（化合物＃２６）を得た。（１０８ｍｇ，収率９６％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９（ｄ，Ｊ=８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ=８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ=７．０，６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ=８．１，６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．６，１３６．８，１２７．９，１２７．５，１２１．８，１１９．２，１１８．９，１０９．５，１０６．１，５３．７，３１．７．
［化合物＃２７の合成］
Ｎ−エチル−３−インドール酢酸 メチルエステル
３−インドール酢酸メチルエステルを（２００ｍｇ，１．１ｍｍoｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化エチル（２４６ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製し、Ｎ−エチル−３−インドール酢酸メチルエステルを得た。（１３３ｍｇ，収率５８％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ=８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ=８．３，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=８．３，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），４．１１（q，Ｊ=７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｔ，Ｊ=７．３，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１６０．８，１３５．９，１２７．８，１２５．９，１２１．６，１１９．０，１０９．３，５１．９，４０．８，３１．１，１５．４．
Ｎ−エチル−３−インドール酢酸（化合物＃２７）
Ｎ−メチル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１２０ｍｇ，０．５９ｍｍoｌ）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ−メチル−３−インドール酢酸（化合物＃２７）を得た。（１０８ｍｇ，収率９７％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄｄｄ，Ｊ=７．５，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄｄ，Ｊ=７．３，７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（q，Ｊ=７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ=７．３Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．３，１３６．８，１２９．０，１２７．１，１２２．０，１１９．８，１１９．４，１１０．１，１０８．１，４１．１，３１．９，１５．８．
［化合物＃２８の合成］
Ｎ−プロピル−３−インドール酢酸 メチルエステル
３−インドール酢酸 メチルエステルを（２００ｍｇ，１．１ｍｍoｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化プロピル（２６８ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ−プロピル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１３６ｍｇ，収率５６％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ=８．３Ｈｚ，１Ｈ）７．２１（ｄｄ，Ｊ=８．０，７．１Ｈｚ，１Ｈ）７．１１（ｄｄ，Ｊ=７．７，６．９Ｈｚ，１Ｈ）７．０８（ｓ，１Ｈ）４．０４（ｔ，Ｊ=７．１Ｈｚ，２Ｈ）３．７７（ｓ，２Ｈ）３．６９（ｓ，３Ｈ）１．８６（ｍ，２Ｈ）０．９３（ｔ，Ｊ=７．３Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１３６．２，１２７．７０，１２６．７，１２１．５，１１９．０，１１９．０，１０９．４，１０６．６，５１．９，４７．９，３１．１，２３．５，１１．５．
Ｎ−プロピル−３−インドール酢酸（化合物＃２８）
Ｎ−プロピル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１２０ｍｇ，０．５２ｍｍoｌ）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ−プロピル−３−インドール酢酸（化合物＃２８）を得た。（１０３ｍｇ，収率９８％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ=７．２，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=７．３，９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ=７．１，２Ｈ），３．７９（ｓ，２Ｈ），１．８５（ｍ，２Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ=７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．５，１３６．２，１２７．６，１２７．０，１２１．６，１１９．１，１１９．０，１０９．５，１０６．０，５３．７，３１．７，２３．５，１１．５．
［化合物＃２９の合成］
Ｎ−ブチル−３−インドール酢酸 メチルエステル
３−インドール酢酸 メチルエステルを（２００ｍｇ，１．１ｍｍoｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化ブチル（２９０ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ−ブチル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１３７ｍｇ，収率５３％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ=８．５，９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=９．７，７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ=７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｍ，２Ｈ），１．３４（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ=７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１３６．２，１２７．７，１２６．７，１２１．５，１１９．０，１１９．０，１０９．４，１０６．７，５１．９，４６．０，３２．３，３１．１，２０．２，１３．７．
Ｎ−ブチル−３−インドール酢酸（化合物＃２９）
Ｎ−ブチル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１２０ｍｇ，０．５２ｍｍoｌ）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ−ブチル−３−インドール酢酸（化合物＃２９）を得た。（１０４ｍｇ，収率９８％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ=７．１，７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=７．３，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ=７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｍ，２Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ=７．４，３Ｈ）;１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７８．０，１３６．１，１２７．６，１２６．９，１２１．６１１９．１０，１１９．０，１０９．５，１０６．０，５３．６，３１．７，２９．１，２０．２，１３．７．
［化合物＃３０の合成］
Ｎ−ヘキシル−３−インドール酢酸 メチルエステル
３−インドール酢酸 メチルエステルを（２００ｍｇ，１．１ｍｍoｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化ヘキシル（３３４ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ−ヘキシル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１４７ｍｇ，収率５１％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ）７．３１，（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ=８．６，５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄｄ，Ｊ=８．０，７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｓ，２Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ=７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ），１．３０（ｍ，６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ=６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１３６．１，１２７．７，１２６．７，１２１．５，１１９．０，１１９．０，１０９．４，１０６．６，５１．９，４６．３，３１．４，３１．１，３０．２，２２．６，２２．５，１４．０．
Ｎ−ヘキシル−３−インドール酢酸（化合物＃３０）
Ｎ−ヘキシル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１２０ｍｇ，０．５２ｍｍoｌ）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ−ヘキシル−３−インドール酢酸（化合物＃３０）を得た。（１０３ｍｇ，収率９６％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ=７．９，７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ=７．４，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（１Ｈ，ｓ，１Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ=７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ），１．３１（ｍ，６Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ=６．３Ｈｚ，３Ｈ）;１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７８．０，１３６．１，１２７．６，１２７．６，１２１．６，１１９．１，１１９．０，１０９．５，１０６．０，５３．７，３１．７，２９．２，２８．９，２７．０，２３．０，１４．０２．
［化合物＃３１の合成］
Ｎ−ヘプチル−３−インドール酢酸 メチルエステル
３−インドール酢酸 メチルエステルを（２００ｍｇ，１．１ｍｍoｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化ヘプチル（３５８ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ−ヘプチル−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１４８ｍｇ，収率４９％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ３．６９（３Ｈ，ｓ), ７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８）,７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.２）７．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，６．７），７．０８（１Ｈ，ｓ）,４．０６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１）,３．７７（２Ｈ，ｓ）３．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，６．７），１．８２（２Ｈ，ｍ），１．２９（８Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１）．；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．５７，１３６．１６，１２７．７０，１２６．６６，１２１．５４，１１８．９８，１１８．９８，１０９．４３，１０６．６４，５１．８９，４６．３１，３１．６７，３１．１１，３０．２４，２８．８９，２６．９６，２２．５５，１４．０２．
Ｎ−ヘプチル−３−インドール酢酸（化合物＃３１）
Ｎ−ヘプチル−３−インドール酢酸 メチルエステル（１２０ｍｇ，０．５２ｍｍoｌ）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ−ヘプチル−３−インドール酢酸（化合物＃３１）を得た。（１８０ｍｇ，収率９５％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９ （１Ｈ,ｄ,Ｊ＝７．９６）， ７．３１（１Ｈ,ｄ,Ｊ＝８．１７）， ７．２１ （１Ｈ,ｄｄｄ，Ｊ＝８．４９，６．７３），７．１１（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝７．２１，７．２９），７．０８（１Ｈ,Ｓ）， ４．０６（２Ｈ,ｔ,Ｊ＝７．２５）， ３．７９ （２Ｈ,ｓ） １．８１ （２Ｈ,ｍ ） １．２９（８Ｈ,ｍ ） ０．８７（３Ｈ,ｔ,Ｊ＝６．８３)；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．８１, １３６．１０, １２７．５５，１２６．８５，１２１．６２, １１９．１１, １１８．９４， １０９．４９，１０５．９１，５３．６３，４６．３２，３０．９９，２９．６８，２９．１６, ２６．６４,２２．４９, １３．９９．
化合物＃３３及び３４はα−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルを鍵中間体として合成した。α−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルはE.Tsuda et. al., “Alkoxy-auxins are selective inhibitors of auxin transport mediated by PIN, ABCB, and AUX1 transporters” Journal of Biological Chemistry, 286(3), 2354-2364; 2011.に記載の方法に従って合成した。
［化合物＃３３の合成］
α−（７−ブトキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステル
α−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステル（９０ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）に溶解し、この溶液に、１−ヨードブタン（１０７ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を滴下し、炭酸セシウム（１２７ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液に水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（１０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、α−（７−ブトキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルを無色オイルとして得た。（９２ｍｇ，収率８３％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．７１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝８．１，６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１４ （ｑ，Ｊ＝８．９，２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ），３．９７（ｓ、２Ｈ），１．８２（ｍ、２Ｈ），１．５３（ｍ、２Ｈ），１．１９（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７１．５、１５７．４，１３３．２，１３０．０，１２９．３，１２９．１，１２８．３，１２７．６，１２３．０，１１８．５，１０３．２，６７．６，６０．８，３９．５，３１．２，１９．２，１４．１，１３．８；ＩＲ（ｎｅａｔ）： ２９５８，１７３３，１５１０，１４５９，１２１０，１１５６ｃｍ−１；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋；ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２８６．１５６９（Ｃ１８Ｈ２２Ｏ３），ｆｏｕｎｄ，２８６．１５５６．
α−（７−ブトキシ−１−ナフタレニル）−酢酸（化合物＃３３）
α−（７−ブトキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステル（７５ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン：メタノール：２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液＝２：２：１の混合溶液（１．５ｍｌ）に溶かし、室温で1時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（１０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製しα−（７−ブトキシ−１−ナフタレニル）−酢酸（化合物＃３３）を得た。（６７ｍｇ，収率９８％）：融点１０２〜１０４℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．１，６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｑ，Ｊ＝８．９，２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ），１．５１（ｍ，２Ｈ），１．８０（ｍ，２Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．６，１５７．６，１３３．２，１３０．２，１２９．１，１２８．６，１２７．９（２Ｃ），１２３．０，１１８．７，１０３．１，６７．７，３９．２，３１．２，１９．３，１３．８；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３０２１，２９３１，１６９９，１４５７，１１３８ｃｍ−１；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２５８．１２５６（Ｃ１６Ｈ１８Ｏ３），ｆｏｕｎｄ ２５８．１２６８.
［化合物＃３４の合成］
α−（７−ペントキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステル
α−（７−ヒドロキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステル（９０ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）に溶解し、この溶液に、１−ヨードペンタン（１１６ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を滴下し、炭酸セシウム（１２７ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液に水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（１０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、α−（７−ペントキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステルを無色オイルとして得た。（１０３ｍｇ，収率８８％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １．００（ｔ，Ｊ=７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ=７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．４８（ｍ，２Ｈ），１．５５（ｍ，２Ｈ），１．９１（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｓ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ=６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．１９（ｑ，Ｊ=７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ=８．９，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７１．５，１５７．４，１３３．２，１３０．０，１２９．３，１２９．１，１２８．４，１２７．６，１２３．０，１１８．５，１０３．２，６７．８，６０．８，３９．６，２８．９，２８．２，２２．４，１４．１，１４．０；ＩＲ（ｎｅａｔ）：２９６９，１７３４，１５０９，１４５９，１１６０ｃｍ−１；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ３００．１７２５ （Ｃ１９Ｈ２４Ｏ３），ｆｏｕｎｄ，３００．１７２７.
α−（７−ペントキシ−１−ナフタレニル）−酢酸（化合物＃３４）
α−（７−ペントキシ−１−ナフタレニル）−酢酸 エチルエステル（９０ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン：メタノール：２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液＝２：２：１の混合溶液（１．５ｍｌ）に溶かし、室温で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（１０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝６：１）で精製しα−（７−ペントキシ−１−ナフタレニル）−酢酸（化合物＃３４）を得た。（７５ｍｇ，収率９２％）：融点１０４〜１０６℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．７１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝８．１，６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｍ，２Ｈ），１．３９（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．６，１５７．６，１３３．２，１３０．２，１２９．１，１２８．６，１２８．４，１２８．０，１２３．０，１１８．７，１０３．１，６８．０，３９．１，２８．９，２８．２，２２．５，1４．０；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３０１４，２９４５，１６８９，１４６３，１１６９ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２７２．１４１２ （Ｃ１７Ｈ２０Ｏ３），ｆｏｕｎｄ， ２７２．１３７８．
化合物＃３５〜３７は５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステルを鍵中間体として合成した。
５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル
５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸１．００ｇをメタノール（２５ｍｌ）に溶かし、塩化アセチル１．０ｍｌをゆっりと滴下し、室温で２時間攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、飽和重曹水溶液を加え反応を停止させ、溶媒を減圧留去した後、水（２０ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）で精製し、５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１．０５ｇ，収率９８％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２０（ｓ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１４９．６，１３１．４，１２７．９，１２４．２，１１２．１，１１１．９，１０３．４，１０７．８，５２．０，３１．２；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１１，３０００，２９５２，１７２８，１４５９，１４５９，１１５４ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２０５，１４６；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２０５．０７３９（Ｃ１１Ｈ１１ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ，２０５．０７６１．
［化合物＃３５の合成］
５−（３，５−ジメトキシベンジルオキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステル
５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル（４２．９ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶かし、そこに３，５−ジメトキシベンジルブロミド（８２．２ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）を滴下し、別容器に取り分けておいたヨウ化テトラＮ−ブチルアンモニウム（８３．０ｍｇ，２．００ｍｍｏｌ），炭酸セシウム（１３６．３７ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、飽和重曹水を加え反応を停止させ、酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）で精製し、５−（３，５−ジメトキシベンジルオキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（８１．５ｍｇ，収率９４％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．１７（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｓ，２Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝２．２，２Ｈ），６．４１（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．５，１６０．９（２Ｃ），１５３．２，１４０．０，１３１．４，１２４．０，１２７．５，１１３．０，１１１．９，１０７．９，１０５．２（２Ｃ），１０２．２，９９．８，７０．８，５５．３（２Ｃ），５１．９，３１．２；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３９６，２９４８，１７３４，１４４９，１１５９ｃｍ−１．
５−（３，５−ジメトキシベンジルオキシ）−３−インドール酢酸（化合物＃３５）
５−（３，５−ジメトキシベンジルオキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステル（８１．５ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、室温で０．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、５−（３，５−ジメトキシベンジルオキシ）−３−インドール酢酸（化合物＃３５）を得た。（５５．２ｍｇ，収率１００％）；融点１４６．１〜１４８．６℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．１９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，２Ｈ），６．４０（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（Ｓ，２Ｈ），３．７７（Ｓ，６Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．５，１６０．８（２Ｃ），１５３．３，１４０．０，１３１．４，１２７．５，１２４．１，１１３．１，１１２．０，１０７．４，１０５．３（２Ｃ），１０２．２，９９．９，７０．９，５５．３（２Ｃ），３１．１；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４０６，２９５７，２９２６，１７０２，１４５８，１１５５ｃｍ−１
［化合物＃３６の合成］
５−メトキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル
５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル（９９．３ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に溶かし、そこにヨードメタン（２０６．２ｍｇ，１．４５ｍｍｏｌ）を滴下し、別容器に取り分けておいた炭酸カリウム（２００．８ｍｇ，１．４５ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩攪拌し、続いて、８０℃で４時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、１０％重曹水２０ｍｌを加え、酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、５−メトキシ−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た（５８．６ｍｇ，収率５５．２％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２２（１Ｈ，ｄ．Ｊ＝８．８），７．１１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（s，３Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．５，１５４．２，１３１．２，１２７．６，１２３．８，１１２．５，１１１．９，１０８．１，１００．６，５５．９，５１．９，３１．２；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４０３，２９５１，１７２９，１４８６，１２１３，１１５４ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２１９，１６０；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２１９．０８９５（Ｃ１２Ｈ１３ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ，２１９．０８８６．
５−メトキシ−３−インドール酢酸（化合物＃３６）
［化合物＃５の合成］
５−メトキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル（６０．０ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、水酸化リチウム（１９．７ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、５−メトキシ−３−インドール酢酸（化合物＃３６）を得た。（１５．３ｍｇ，収率２７．２％）；融点１４７．０〜１４９．８℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．３，１５４．８，１３２．６，１２８．９，１２５．２，１１２．７，１１２．４，１０８．８，１０１．４，５５．８，３１．５；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３５９，２９９６，２８５１，１７０５，１４５６，１１３７ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２０５（７５％），１６０；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２０５．０７３９（Ｃ１１Ｈ１１ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ，２０５．０７３７．
［化合物＃３７の合成］
５−エトキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル
５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル（１０９．０ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に溶かし、そこにヨードエタン（２４８．７４ｍｇ，１．６０ｍｍｏｌ）を滴下し、別容器に取り分けておいた炭酸カリウム（２２０．５ｍｇ，１．６０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌し、８０度で４時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、１０％重曹水２０ｍｌを加え、酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後，シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、５−エトキシ−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１００．７ｍｇ，収率８１．２％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．８６（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），１．４５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．５，１５３．４，１３１．２，１２７．６，１２３．７，１１３．０，１１１．８，１０８．１，１０１．８，６４．２，５２．０，３１．２，１５．０；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４０４，２９７８，１７２９，１４７４，１２１１，１１５４ｃｍ−１；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２３３．１０５２（Ｃ１３Ｈ１５ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ，２３３．１０３４．
５−エトキシ−３−インドール酢酸（化合物＃３７）
５−エトキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル（９０．２ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）をメタノール（４ｍｌ）に溶かし、水酸化リチウム（１３．９ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を加え室温で一晩撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、５−エトキシ−３−インドール酢酸（化合物＃３７）を得た。（８３．８ｍｇ，収率９８．９％）；融点８６．０〜９２．７℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ．Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），１．４２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．４，１５３．５，１３１．２，１２７．５，１２４．０，１１３．２，１１１．９，１０７．７，１０１．７，６４．２，３１．１，１５．０；ＩＲ（neat）：３３５４，３０６６，２９３０，１６９５，１４５７，１１１２ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２１９，２０５（４０％），１９０，１７４，１６２（７０％），１６０（５０％）；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２１９．０８９５（Ｃ１２Ｈ１３ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ，２１９．０８８６．
［化合物＃３８の合成］
５−（１−プロポキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステル
５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル（１０８．４ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に溶かし、そこにヨードプロパンを滴下し、別容器に取り分けておいた炭酸カリウム（２１９．３ｍｇ，１．５９ｍｍｏｌ）を加え室温２時間撹拌し、８０℃で４時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、１０％重曹水２０ｍｌを加え、酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、５−（１−プロポキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（７８．６ｍｇ，収率６０．１％）；融点３８．６〜４１．０℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），１．０７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．５，１５３．６，１３１．２，１２７．６，１２３．７，１１３．０，１１１．８，１０８．０，１０１．７，７０．４，５２．０，３１．２，２２．８，１０．６；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３５５，３０６１，２９６１，１６９５，１４５７，１１２６ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２４７（７０％），１８８（３０％），１４９，１３１（７５％）；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２４７．１２０８（Ｃ１４Ｈ１７ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ，２４７．１２２５．
５−（１−プロポキシ）−３−インドール酢酸（化合物＃３８）
５−（１−プロポキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステル（６４．３ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、水酸化リチウム（９．３５ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、５−（１−プロポキシ）−３−インドール酢酸（化合物＃３８）を得た。（５９．３ｍｇ，収率９７．７％）；融点１３３．６〜１３６．８℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），１．０５（ｔ．Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．４，１５３．７，１３１．２，１２７．５，１２３．９，１１３．２，１１１．９，１０７．５，１０１．７，７０．４，３１．０，２２．８，１０．６，１０．６；ＩＲ（ｎｅａｔ）： ３４０７，２９５４，１７２８，１４５６，１２１３，１１６０ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２３３，１９１（５０％）；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２３３．１０５２（Ｃ１２Ｈ１５ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ ２３３．１０４３．
［化合物＃３９の合成］
５−（１−ブトキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステル
５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸 メチルエステル（１０８．４ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）に溶かし、そこにヨードブタンを滴下し、別容器に取り分けておいた炭酸カリウム（１８４．２ｍｇ，１．３３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で４時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、１０％重曹水（２０ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、５−（１−ブトキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１４０．２ｍｇ，収率８０．５％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｍ，２Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．５，１５３．６，１３１．２，１２７．６，１２３．７，１１３．０，１１１．８，１０８．０，１０１．７，６８．５，５１．９，３１．９，３１．２，１９．３，１３．９；ＩＲ（ｎｅａｔ）： ３３５５，２９５７，１６９４，１４５９，１１２７ｃｍ−１；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２６１．１３６５（Ｃ１５Ｈ１９ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ，２６１．１３７０．
５−（１−ブトキシ）−３−インドール酢酸（化合物＃３９）
５−（１−ブトキシ）−３−インドール酢酸 メチルエステル（９１．０ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、水酸化リチウム（１２．５ｍｇ，０．５２ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３〜４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、５−（１−ブトキシ）−３−インドール酢酸（化合物＃３９）を得た。（４３．８ｍｇ，収率５１．０％）；融点１３７．８〜１４１．１℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），１．７８（ｍ，２Ｈ），１．０５（ｔ．Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．３，１５３．８，１３１．２，１２３．９，１１３．２，１１１．６，１０７．５，１０１．６，３１．６，２９．７，１９．３，１３．９；ＩＲ（ｎｅａｔ）： ３４０７，２９５４，１７２８，１４５６，１２１３，１１６０ｃｍ−１；ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２４７，１９１（６０％）；ＨＲＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２４７．１２０８（Ｃ１４Ｈ１７ＮＯ３），ｆｏｕｎｄ ２４７．１１８９．
以下の実施例２〜７、及び参考例１において、エリスロポエチン産生ヒト肝臓癌細胞株Ｈｅｐ３Ｂ（ＡＴＣＣ［American Type Culture Collection］より入手）は、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（GIBCO社製）、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（GIBCO社製）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（GIBCO社製）を含むＲＰＭＩ１６４０（GIBCO社製）培養液（以下、「ＲＰＭＩ１６４０通常培養液１」という）中で５％ＣＯ２／２０％Ｏ２、３７℃条件下で培養・維持した。また、以下の実施例１５において、Ｌｅｉｇｈ脳症患者に皮膚生検を行って皮膚線維芽細胞を得た後、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（GIBCO社製）、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（GIBCO社製）、１％ＦＢＳ（GIBCO社製）を含むＤＭＥＭ低グルコース（GIBCO社製）培養液（以下、「ＤＭＥＭ低グルコース通常培養液」という）中で５％ＣＯ２／２０％Ｏ２、３７℃条件下で初代培養を行い、細胞（Ｌｅｉｇｈ細胞）を単離した。また、以下の実施例１３において、ヒト腎臓由来細胞株ＨＫ−２（ＡＴＣＣより入手）は、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（GIBCO社製）、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（GIBCO社製）、１０％ウシ胎児血清（GIBCO社製）を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（GIBCO社製）培養液（以下、「ＤＭＥＭ／Ｆ１２通常培養液」という）中で５％ＣＯ２／２０％Ｏ２、３７℃条件下で培養・維持した。また、以下の実施例１４において、ラットランゲルハンス氏島（ラ氏島、膵島）由来細胞株ＩＳＮ−１ｅ（日大医学部、石原寿光先生より供与）は、１０ｍＭＨＥＰＥＳ（Sigma-Aldrich社製）、２ｍＭグルタミン（Sigma-Aldrich社製）、５０μＭβ-メルカプトエタノール（Sigma-Aldrich社製）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（GIBCO社製）、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（GIBCO社製）、１０％ＦＢＳ（GIBCO社製）を含むＲＰＭＩ１６４０（GIBCO社製）培養液（以下、「ＲＰＭＩ１６４０通常培養液２」という）中で５％ＣＯ２／２０％Ｏ２、３７℃条件下で培養・維持した。
１．本発明の化合物がＴＮＦαによるエリスロポエチン産生抑制の解除効果を有することの確認
Ｈｅｐ３Ｂ細胞は、低酸素条件下でエリスロポエチン産生が促進されるが、ＴＮＦαが存在するとかかる促進効果が抑制されることが知られている。そこで、本発明の化合物によるエリスロポエチン産生抑制の解除効果について検討するために、低酸素条件かつＴＮＦα存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞を用いて解析を行った。
１−１ 方法
１２穴細胞培養プレートに１ウエルあたり３×１０６個のＨｅｐ３Ｂ細胞を撒いた後、２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養し、１１種類の化合物（化合物＃２１〜２５、及び３３〜３８）及びリコンビナントヒトＴＮＦα（Roche社製）を、それぞれ３μＭ及び２２０μｇ／ｍｌとなるようにＲＰＭＩ１６４０通常培養液１に混和し、さらに２４時間低酸素（１％Ｏ２）下で培養した後、培養液中に産生されたエリスロポエチンの濃度（ｍＩＵ／ｍｌ）をヒトエリスロポエチンＥＬＩＳＡキット（Bender MedSystems社製）を用いて測定した。なお、コントロールとして化合物非存在下でかつＴＮＦα非存在下（ジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］添加［１％］）で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図１の「med［ＴＮＦα−］」）と、化合物存在下でかつＴＮＦα（２２０μｇ／ｍｌ）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図１の「ＤＭＳＯ［ＴＮＦα＋］」）を用いた。
１−２ 結果
Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、ＴＮＦαにより低下したエリスロポエチンの濃度は、１１種類の化合物（化合物＃２１〜２５、及び３３〜３８）を加えることにより増加することが明らかとなった（図１）。この結果は、１１種類の化合物（化合物＃２１〜２５、及び３３〜３８）は、ＴＮＦα等のサイトカインなどによるエリスロポエチン産生を負に制御する経路を解除する効果を有することを示している。
２．本発明の化合物がエリスロポエチン産生促進効果を有することの確認
続いて、本発明の化合物によるエリスロポエチン産生促進効果について検討するために、正常酸素条件下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞を用いて解析を行った。
２−１ 方法
１２穴細胞培養プレートに１ウエルあたり３×１０６個のＨｅｐ３Ｂ細胞を撒いた後、２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養し、９種類の化合物（化合物＃２、４、１３〜１５、及び１７〜２０）及びリコンビナントヒトＴＮＦα（Roche社製）を、それぞれ３μＭ及び２２０μｇ／ｍｌとなるようにＲＰＭＩ１６４０通常培養液１に混和し、さらに２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養した後、培養液中に産生されたエリスロポエチンの濃度（ｍＩＵ／ｍｌ）をヒトエリスロポエチンＥＬＩＳＡキット（Bender MedSystems社製）を用いて測定した。なお、コントロールとして化合物非存在で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図２の「Medium」及び「ＤＭＳＯ」）や、エリスロポエチンの転写促進因子ＨＩＦ（Hypoxia inducible factor、低酸素応答転写因子）の活性化剤（３，４−ジヒドロキシ安息香酸；３，４−ＤＨＢ［３μＭ］、及びCiclopirox olamine［シクロピロックス オラミン］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（それぞれ図２の「３，４−ＤＨＢ」及び「Cile」）や、エリスロポエチンの転写抑制因子ＧＡＴＡ特異的な阻害剤（Ｋ７１７４［３μＭ］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図２の「Ｋ７１７４」）を用いた。
２−２ 結果
正常酸素（２０％Ｏ２）条件下において、Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるエリスロポエチンの濃度は、９種類の化合物（化合物＃２、４、１３〜１５、及び１７〜２０）により増加することが明らかとなった（図２）。この結果は、９種類の化合物（化合物＃２、４、１３〜１５、及び１７〜２０）はエリスロポエチン産生促進効果を有することを示している。
３．本発明の化合物がエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進効果を有することの確認
続いて、本発明の化合物によるエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進効果について検討するために、ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。
３−１ 方法
［プラスミドベクター］
マウスエリスロポエチン遺伝子の５’上流転写調節領域のプロモーター活性ルシフェラーゼアッセイ用のプラスミドベクターHE-mPro-lucは、マウスエリスロポエチン遺伝子のエクソン１の翻訳開始点を起点として−５７１から＋５３ｂｐの長さの領域を制限酵素XbaＩとSacＩで切り出し、ルシフェラーゼレポーターベクターpXP2（Nordeeen SK. BioTechniques. 6:454-453.1988）に挿入して作製した。
［トランスフェクションとルシフェラーゼレポーターアッセイ］
Ｈｅｐ３Ｂ細胞は２４穴細胞培養プレートに１穴あたり１０×１０４個の細胞数で調整して継代し、検鏡下で７０〜８０％の細胞密度となったＨｅｐ３Ｂ細胞に対してルシフェラーゼレポーターアッセイ用のプラスミドＤＮＡのトランスフェクションを施行した。トランスフェクション用の溶液組成は１穴あたりHE-mPro-luc ２μｇ、pRh-TK（Promega社製）５０ｎｇ、Lipofectamine2000（Invitrogen社製）２μｌをＯｐｔｉＭＥＭ−Ｉ（GIBCO社製）１００μｌに混合してから室温で２０分インキュベーションして調製し、無血清のＯｐｔｉＭＥＭ−Ｉ培養液０．５ｍｌでプレインキュベーションした２４穴細胞培養プレートＨｅｐ３Ｂ細胞に添加した後、３７℃、５％ＣＯ２／２０％Ｏ２の条件にて無血清かつ抗生物質添加無しで４時間インキュベーションした。その後、５種類の化合物（化合物＃２、４、５、１８、及び２１）を１０μＭの濃度で添加したＲＰＭＩ１６４０通常培養液１に交換し、さらに３７℃、５％ＣＯ２／２０％Ｏ２の条件で４８時間インキュベートした。その後、培養液を無血清のＰＢＳ０．５ｍｌに交換して細胞を穏やかに洗浄後ＰＢＳを吸引除去する作業を２回施行してから、passive lysis buffer（Promega社製）１００μｌを加えて２０分室温にて混和し溶解した。なお、ネガティブコントロールとして化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図３の「２０％Ｏ２／ＤＭＳＯ」）を用い、ポジティブコントロールとしてＨＩＦの活性化剤（ＦＧ−４５９２［１０μＭ］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図３の「２０％Ｏ２／ＦＧ４５９２」）や、低酸素（１％Ｏ２）条件かつ化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図３の「１％Ｏ２／ＤＭＳＯ」）を用いた。
ルシフェラーゼレポーターアッセイはDual Luciferase Reporter Assay System（Promega社製）を使用し、測定はルミノメーターLumat LB9507（NERTHOLD TECHNOLOGIES社製）
を用いてFire fly及びRenillaのルシフェラーゼ量を測定した。そして、Fire flyルシフェラーゼ量をRenillaルシフェラーゼ量で割ることにより、エリスロポエチン遺伝子の転写活性を算出した。
３−２ 結果
正常酸素（２０％Ｏ２）条件下において、Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写量は、５種類の化合物（化合物＃２、４、５、１８、及び２１）により増加することが明らかとなった（図３）。また、かかる化合物による増加レベルに、統計学的な有意差（図３の「＊」は「２０％Ｏ２／ＤＭＳＯ」に対してｐ＜０．０５［t-test、両側検定］を示し、「＊＊」は「２０％Ｏ２／ＤＭＳＯ」に対してｐ＜０．０１［t-test、両側検定］を示す。）が認められた。この結果は、５種類の化合物（化合物＃２、４、５、１８、及び２１）はエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進効果を有することを示すとともに、かかる効果は既存のＨＩＦの活性化剤（ＦＧ−４５９２）による効果よりも優れていることも示している。
４．本発明の化合物がエリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量を増加させる効果を有することの確認
続いて、本発明の化合物によるエリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量を増加させる効果について検討するために、定量ＰＣＲ（Quantitative polymerase chain reaction；ＱＴ−ＰＣＲ）による解析を行った。
４−１ 方法
上記実施例４でエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進効果が認められた５種類の化合物のうち、４種類の化合物（化合物＃２、４、５、及び２１）を選択し、かかる４種類の化合物を１０μＭの濃度で添加したＲＰＭＩ１６４０通常培養液１で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞を６穴細胞培養プレートよりTriPure Isolation Reagent（Roche社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。なお、ネガティブコントロールとして化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図４の「２０％Ｏ２／ＤＭＳＯ」）を用い、ポジティブコントロールとしてＧＡＴＡ特異的な阻害剤（Ｋ７１７４［１０μＭ］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図４の「２０％Ｏ２／Ｋ７１７４」）や、低酸素（１％Ｏ２）条件かつ化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図４の「１％Ｏ２／ＤＭＳＯ」）を用いた。
抽出したＲＮＡをテンプレート（鋳型）とし、SuperScript III RTS First-strand kit（Invitrogen社製）を用いてｃＤＮＡを合成したのち、ＧＡＰＤＨを内部標準としてエリスロポエチンのｍＲＮＡの発現を定量ＰＣＲで測定した。定量ＰＣＲはTaqMan（登録商標）Gene Expression Assaysを使用し（ＧＡＰＤＨ；Assay ID: Rn99999916_s1、ヒトエリスロポエチン；Assay ID: Hs00171267_m1のTaqMan［登録商標］プローブ［Applied Biosystems社製］を使用）、Step One Plus Real-Time PCR System（Applied Biosystems社製）により行った。
４−２ 結果
正常酸素（２０％Ｏ２）条件下において、Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるエリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量は、４種類の化合物（化合物＃２、４、５、及び２１）により増加することが明らかとなった（図４）。また、かかる化合物による増加レベルに、統計学的な有意差（図４の「＊」は「Ｏ２２０％／ＤＭＳＯ０．１％」に対してｐ＜０．０５［t-test、両側検定］を示し、「＊＊」は「２０％Ｏ２／ＤＭＳＯ」に対してｐ＜０．０１［t-test、両側検定］を示す。）が認められた。なお、ＧＡＰＤＨ（内部標準）遺伝子のｍＲＮＡ発現量は、各サンプル間で変化は認められなかった。この結果は、４種類の化合物（化合物＃２、４、５、及び２１）はエリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量を増加させる効果を有することを示すとともに、エリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進効果を有する化合物は、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量を増加させる効果を有することも示している。
５．本発明の化合物がＨＩＦのαサブユニット（ＨＩＦ−α）産生を増加させる効果を有することの確認
本発明の化合物によるエリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性促進効果の作用機序を調べるために、ＨＩＦのαサブユニット（ＨＩＦ−α）の濃度を測定した。
５−１ 方法
２４穴細胞培養プレートに１ウエルあたり１×１０４個のＨｅｐ３Ｂ細胞を撒いた後、２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養し、３種類の化合物（化合物＃４、２１、及び３５）を、１０μＭとなるようにＲＰＭＩ１６４０通常培養液１中に混和し、さらに２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養した後、培養液中に産生されたＨＩＦ−αの濃度をTotal HIF-1 α Cell-Based ELISA Kit（R&D Systems, Inc. 社製）を用いて測定した。なお、ネガティブコントロールとして化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図５の「Control」）を用い、ポジティブコントロールとしてＨＩＦの活性化剤（ＦＧ−４５９２［１０μＭ］、ＤＭＯＧ［１０μＭ］、Ciclopirox［シクロピロックス］［１０μＭ］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（それぞれ図５の「ＦＧ」、「ＤＭＯＧ」、及び「Ciclo」）を用いた。
５−２ 結果
正常酸素（２０％Ｏ２）条件下において、Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるＨＩＦ−α濃度は、３種類の化合物（化合物＃４、２１、及び３５）により増加することが明らかとなった（図５）。また、かかる化合物による増加レベルに、統計学的な有意差（図５の「＊」は「Control」に対してｐ＜０．０５［t-test、両側検定］を示す。）が認められた。この結果は、３種類の化合物（化合物＃４、２１、及び３５）はＨＩＦ−α産生を増加させる効果を有することを示している。
上記実施例３〜６の結果を総合すると、本発明の化合物によりＨＩＦ−α産生量が増加し、ＨＩＦによりエリスロポエチン産生を正に制御する経路の活性化された結果、エリスロポエチン遺伝子プロモーターの転写活性が促進され、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量が増加し、エリスロポエチン産生が増加することを示唆している。
［参考例１］
６．化合物＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３９がＡＴＰ産生を増加させる効果を有することの確認
エリスロポエチンは、虚血臓器障害に対する保護作用を有することが知られている。また、脳虚血部位では、ＡＴＰ濃度が低下することも知られている。そこで、エリスロポエチンによる虚血臓器障害に対する保護作用機序において、細胞内のＡＴＰ濃度が上昇するのではないかと考え、エリスロポエチン発現増強剤のスクリーニングに用いた４１種類の化合物のうち、化合物＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３９についてＡＴＰ産生を増加させる効果を検討した。
６−１ 方法
２４穴細胞培養プレートに１ウエルあたり１×１０４個のＨｅｐ３Ｂ細胞を撒いた後、２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養し、３６種類の化合物（化合物＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３９）を、１０μＭとなるようにＲＰＭＩ１６４０通常培養液１中に混和し、さらに３時間、６時間、又は２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養した後、培養液中に産生されたＡＴＰの濃度を『細胞の』ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製）を用いてGloMa 96 Microplate Luminometer（Promega社製）により測定した。なお、ネガティブコントロールとして化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図６〜８の「ＤＭＳＯ」）を用い、ポジティブコントロールとしてＨＩＦの活性化剤（ＦＧ−４５９２［１０μＭ］、ＤＭＯＧ［１０μＭ］、３，４−ＤＨＢ［１０μＭ］、及びシクロピロックス［１０μＭ］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図６〜８のそれぞれ「ＦＧ」、「ＤＭＯＧ」、「３４−ＤＨＢ」、及び「Cyclo」）や、エリスロポエチンの転写抑制因子ＧＡＴＡ特異的な阻害剤（Ｋ７１７４［１０μＭ］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図６〜８の「Ｋ７１７４」）を用いた。
６−２ 結果
３、６、及び２４時間培養した場合の結果をそれぞれ図６〜８に示す。Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるＡＴＰ濃度は、３６種類の化合物（化合物＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３９）により増加し（図６〜８）、特に８種類の化合物（化合物＃１〜８）による増加レベルは高いことが明らかとなった（図７）。この結果は、３６種類の化合物（化合物＃１〜１５、１７〜３１、及び３４〜３９）はＡＴＰ産生の増加効果を有し、特に８種類の化合物（化合物＃１〜８）はかかる効果が高いことを示している。さらに、特にＡＴＰ産生効果が高かった８種類の化合物（化合物＃１〜８）を用いて、化合物の濃度を３μＭで同様に検討を行ったところ、化合物＃１〜８を３μＭの濃度で用いた場合においても、同様にＡＴＰ産生の増加効果が認められることが明らかとなった。
７．本発明の化合物による細胞毒性について検討
本発明の化合物による細胞毒性について検討するために、本発明の化合物存在下で細胞を培養したときの細胞生存率を測定した。
７−１ 方法
２４穴細胞培養プレートに１ウエルあたり１×１０４個のＨｅｐ３Ｂ細胞を撒いた後、２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養し、化合物＃４を、０．５、１、５、１０、又は５０μＭとなるようにＲＰＭＩ１６４０通常培養液１中に混和し、さらに２４時間正常酸素（２０％Ｏ２）下で培養した後、生細胞数をCell Counting Kit-8（同仁化学研究所社製）を用いて測定し、細胞の生存率を算出した。なお、コントロールとして化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（図９の「ＤＭＳＯ」）や、ＨＩＦの活性化剤（ＤＭＯＧ［１０μＭ］、及びシクロピロックス［１０μＭ］）存在下で培養したＨｅｐ３Ｂ細胞（それぞれ図９の「ＤＭＯＧ」、及び「Ciclopirox」）を用いた。
７−２ 結果
１００μＭの化合物＃４を用いて細胞培養した場合は、０．５μＭの化合物＃４を用いて細胞培養した場合と比べ、細胞生存率は約７０％まで低下していたものの、１、５、及び１０μＭの化合物＃４を用いて細胞培養した場合の細胞生存率は、０．５μＭの化合物＃４を用いて細胞を培養した場合とほとんど変わらなかった（図９）。なお、０．５μＭの化合物＃４を用いて細胞を培養した場合の細胞生存率は、化合物非存在（ＤＭＳＯ添加［１％］）下で培養した場合の細胞生存率とほとんど同じであった。この結果は、本発明の化合物＃４を少なくとも０〜１０μＭの濃度範囲で使用すれば、本発明の化合物による細胞毒性はほとんど認められないことを示している。
８．本発明の化合物による吸収についての検討
本発明の化合物の吸収能力について検討するために、本発明の化合物をモデル動物に投与し、血漿中の本発明の化合物の濃度を測定した。
８−１ 方法
［化合物の投与と投与後のマウスからの血漿の単離］
マウス（C57BL/6N 8W、オス、２１-２５ｇ）３匹に化合物＃４を尾静脈単投与し、投与して３０分、１時間、及び６時間後に、各マウスを頚椎脱臼し、５００μｌを心臓採血した後、抗凝固薬（ヘパリン１０μｌ）を添加し、遠心処理（１２０００ｒｐｍ×２０分、４℃）し、血漿を単離した。なお、コントロールとしてＤＭＳＯ（５７μｌ）を尾静脈単投与したマウスを用いた。
［ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いた定量］
血漿中の化合物＃４の濃度は、TSQ Quantum Ultra（Thermo Fisher Scientific社製）及びNANOSPACE SI-2（資生堂社製）から構成されるＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて定量した。化合物＃４や内標準物質として用いた２−メチル−５−（［２−ナフチルアミノ］カルボニル)−3−チエニル）酢酸（以下、「内部標準化合物」という）の選択反応モニタリング（selected reaction monitoring；ＳＲＭ）法の条件は、「m/z 311.1>116.0（collisionnergy, CE=24）」及び「m/z 324.1>280.0（CE=14）」である。分析カラムは「Xbridge C18（150 mm×2.1 mm i.d., 3.5 μm particle size）」を選択し、移動相には２．５ｍＭ酢酸アンモニウム及び２．５ｍＭ酢酸アンモニウム／メタノール（２．５／９７．５［v/v］）を流速２００μｌ／分の２液グラジェントにて化合物を溶出した。化合物＃４及び内部標準化合物は、それぞれ８．５１及び９．００分に検出され（図１０の上段）、一回の分析時間は１５分であった。血漿試料（５０μｌ）の前処理は、内部標準化合物（１００ｎｇ／ｍｌ、５０μｌ）及び０．１％ギ酸−アセトニトリル（２００μｌ）による除タンパク法を用い、上清を窒素乾固させた後、水／メタノール（５０／５０［v/v］）（５０μｌ）に再溶解し、フィルターを通じた試料（１μｌ）をＬＣ／ＭＳ／ＭＳに導入し、血漿中の化合物＃４の濃度（μｇ／ｍｌ）を定量した（図１０の下段）。
８−２ 結果
少なくとも投与３０分後には、血漿中に高いレベルで化合物＃４が検出され、少なくとも投与６時間後まで化合物＃４が検出された（図１０の下段、「＃４」）。他方、コントロールのＤＭＳＯを投与したマウスからは化合物＃４は検出されなかった（図１０の下段、「ＤＭＳＯ」）。この結果は、化合物＃４を投与すると、効率よく体内に吸収されることを示している。
９．本発明の化合物がインビボでエリスロポエチン産生促進効果を有することの確認
本発明の化合物によるインビボでのエリスロポエチン産生促進効果について検討するために、本発明の化合物を投与したマウスを用いて解析を行った。
９−１ 方法
４種類の化合物（化合物＃４、５、２１、及び３５）（１０ｍｇ／１００μｌＤＭＳＯ）１０μｌとコーン油１９０μｌとの混和液（２００μｌ）を調製し、かかる混和液（２００μｌ）をマウス（C57BL/6N 8W、オス、２１-２５ｇ）１匹あたり、毎日１５〜１８時の間にゾンデを用いて経口投与し、かかる投与を７日間連続して行った。なお、コントロールとしてコーン油やＤＭＳＯ及びコーン油を経口投与したマウスの他、未投与のマウスを用いた。
最終投与して２４時間後に、各マウスを頚椎脱臼し、５００μｌを心臓採血した後、抗凝固薬（ヘパリン１０μｌ）を添加し、遠心処理（１２０００ｒｐｍ×２０分、４℃）し、血漿を単離した。血漿中のエリスロポエチンの濃度（ｐｇ／ｍｌ）はキット（Quantikine Mouse/Rat Epo Immunoassay、R&D Systems社製）を用いて測定した。
９−２ 結果
マウス血中におけるエリスロポエチン量は、コーン油のみ、又はＤＭＳＯとコーン油を投与した場合（それぞれ図１１Ａの「コーン油」、「ＤＭＳＯ＋コーン油」）や未投与の場合（図１１Ａの「ノーマル」）と比べ、４種類の化合物（化合物＃４、５、２１、及び３５）を投与した場合（図１１Ａの「＃４、５、２１、及び３５」）、増加することが明らかとなった。この結果は、４種類の化合物（＃４、５、２１、及び３５）はインビボでエリスロポエチン産生促進効果を有することを示すとともに、上記実施例において、エリスロポエチン産生促進効果をインビトロで検証した結果を支持している。
１０．本発明の化合物が赤血球産生促進効果を有することの確認
本発明の化合物がインビボでエリスロポエチン産生促進効果を有することが確認されたので、本発明の化合物による赤血球産生促進効果について検討した。
１０−１ 方法
化合物＃４（１ｍｇ）を、２００μｌＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）に混和した化合物＃４混和液（１ｍｇ／２００μｌＣＭＣ）をマウス（C57BL/6N 8W、オス、２１-２５ｇ）１匹あたり、毎日１５〜１８時の間にゾンデを用いて経口投与し、かかる投与を７日間連続して行った（ｎ＝３）。なお、コントロールとしてＣＭＣを経口投与したマウスを用いた（ｎ＝３）。
最終投与して２４時間後に、各マウスを頚椎脱臼し、５００μｌを心臓採血した後、抗凝固薬（ヘパリン１０μｌ）を添加し、Ｈｃｔ値及びヘモグロビン濃度をアイ・スタット（扶桑薬品工業社製）を用いて測定した。
１０−２ 結果
マウスのＨｃｔ値（％ＰＣＶ）は、コントロールのＣＭＣのみを投与した場合、４２．７±１．７８（平均値±標準偏差）であったのに対して、化合物＃４を投与した場合、４７．７±０．８１６と増加していた（図１１Ｂの左図）。また、マウスの血液中のヘモグロビン濃度（ｇ／ｄＬ）は、コントロールのＣＭＣのみを投与した場合、１４．５±０．６０４（平均値±標準偏差）であったのに対して、化合物＃４を投与した場合、１６．２±０．２８６と増加していた（図１１Ｂの右図）。この結果は、化合物＃４は赤血球産生促進効果を有することを示している。
上記実施例９及び１０の結果を総合すると、本発明の化合物によりインビボでエリスロポエチン産生が促進され、血液中の赤血球濃度が上昇することから、本発明の化合物は、エリスロポエチン発現低下やエリスロポエチン反応性低下に起因する貧血の予防や治療に有効できることを示している。
１１．本発明の化合物が肝機能改善効果を有することの確認
上述のとおりエリスロポエチンは、虚血臓器障害に対する保護作用を有することが知られており、虚血臓器障害の一つとして、肝臓の虚血による腎機能障害が知られている。そこで、本発明の化合物、すなわちエリスロポエチン産生促進効果が認められたものが、肝臓の虚血障害を改善し、肝機能を改善する可能性を考え、本発明の化合物による肝臓の機能改善効果について検討した。
１１−１ 方法
化合物＃４（１０ｍｇ／１００μｌＤＭＳＯ）１０μｌ及び化合物＃４（２０ｍｇ／１００μｌＤＭＳＯ）１５μｌを、それぞれコーン油１９０μｌ及び１８５μｌに混和した低濃度（５μｇ／ｍｌ）化合物＃４及び高濃度（１５μｇ／ｍｌ）化合物＃４混和液（２００μｌ）を調製し、かかる混和液（２００μｌ）をマウス（C57BL/6N 8W、オス、２１-２５ｇ）１匹あたり、毎日１５〜１８時の間にゾンデを用いて経口投与し、かかる投与を７日間連続して行った（ｎ＝４）。なお、コントロールとしてＤＭＳＯを経口投与したマウスを用いた（ｎ＝４）。
最終投与して２４時間後に、各マウスを頚椎脱臼し、５００μｌを心臓採血した後、抗凝固薬（ヘパリン１０μｌ）を添加し、遠心処理（１２０００ｒｐｍ×２０分、４℃）し、血漿を単離した。血漿中の肝機能の指標（ＧＯＴ［Glutamic Oxaloacetic Transaminase；グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ］、及びＧＰＴ［Glutamic Pyruvic Transaminase；グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ］）を、トランスアミナーゼCII-テストワコー（和光純薬工業社製）を用いて測定することにより、肝機能改善効果を検討した。また、血漿中のエリスロポエチンの濃度（ｐｇ／ｍｌ）はキット（Quantikine Mouse/Rat Epo Immunoassay、R&D Systems社製）を用いて測定した。
１１−２ 結果
低濃度（５μｇ／ｍｌ）及び高濃度（１５μｇ／ｍｌ）の化合物＃４の投与によりマウス血漿中におけるエリスロポエチン濃度が上昇することが確認された（図１２の左図）。また、血漿中のＧＯＴ及びＧＰＴ濃度は、化合物＃４の投与により低下することが明らかとなった（それぞれ図１２の中央図、右図）。この結果は、化合物＃４は肝機能改善効果を有することを示している。
１２．本発明の化合物が脳虚血障害改善効果を有することの確認
上述のとおりエリスロポエチンは、虚血臓器障害に対する保護作用を有することが知られており、虚血臓器障害の一つとして、脳虚血による脳血管障害が知られている。そこで、本発明の化合物、すなわちエリスロポエチン産生促進効果が認められたものについて、脳虚血障害改善効果を検討するために、ＭＣＡ（middle cerebral artery；中大脳動脈）閉塞モデルマウス（８−１２週齢のC57BL/6マウス［２２−３０ｇ］）を用いて解析を行った。
１２−１ 方法
［本発明の化合物の投与方法とＭＣＡ閉塞モデルマウスの作製］
虚血４時間前のマウスに、２種類の化合物（化合物＃４及び３５）（４０ｍｇ／ｋｇマウス体重）を腹腔内投与した（ｎ＝１）。なお、コントロールとしてvehicle（ＤＭＳＯ）を投与した（ｎ＝１）。マウスに４％ハロタン及び酸素を麻酔導入し、ケタミン（４０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（4ｍｇ／ｋｇ）を３０分間隔で腹腔内投与することにより麻酔維持を行った。全身麻酔導入後、顕微鏡下に総頚動脈分岐部を露出した。先端をシリコンコーティングした6-0ナイロン糸を内頚動脈から中枢側にむけて挿入し、前交通動脈まで先端を到達させ、さらに総頚動脈を結紮することにより中大脳動脈への血流を遮断した。３０分の虚血負荷後、ナイロン糸を抜去し、総頚動脈の結紮を解除して再灌流を誘導した。
［ＴＴＣ染色法と神経学的評価］
再灌流２４時間後にマウスを頸椎脱臼の後、断頭し脳を摘出した。大脳と小脳の境界より厚さ２ｍｍの大脳冠状切片を５枚作製した。大脳冠状切片をＰＢＳで１．５％希釈したＴＴＣ溶液に３７℃で２０分間反応させることにより、ＴＣＣ染色を行った。染色後デジタルカメラで大脳冠状切片の画像を取得した。
１２−２ 結果
化合物＃４及び３５を投与したＭＣＡ閉塞モデルマウスの脳においては、ＴＴＣ染色されない細胞死した組織を示す領域、すなわち脳梗塞巣の体積は、ＤＭＳＯを投与したＭＣＡ閉塞モデルマウスにおける脳梗塞巣の体積と比べ、減少していることが明らかとなった（図１３）。この結果は、化合物＃４及び３５は、脳梗塞などの脳虚血障害を改善する効果を有することを示している。
１３．本発明の化合物が腎保護効果を有することの確認
慢性腎臓病、虚血性腎症、糖尿病性腎症等の腎障害においては、腎臓が虚血状態にあることが知られている。また、上述のとおり、本発明の化合物は脳虚血障害を改善する効果を有することが認められた。そこで、次に本発明の化合物による腎保護効果について検討した。具体的には、シスプラチン存在下でヒト腎臓由来細胞株（ＨＫ−２）を培養した場合に、本発明の化合物による細胞毒性の解除効果について検討した。
１３−１ 方法
ＨＫ−２細胞を９６穴細胞培養プレートに５×１０３個/ウエルで撒いた後、一晩培養し、シスプラチン及び化合物＃４を、それぞれ３０μＭ及び各種濃度（３０、１０、３、１、０．３、０．１、０．０３、０．０１、及び０．００３μＭ）となるようにＤＭＥＭ／Ｆ１２通常培養液中に混和し、さらに２４時間培養した後、キット（Cell counting kit-8、同仁化学研究所製）を用い、生細胞中のミトコンドリア脱水素酵素によるホルマザン色素への変換をＯＤ４５０ｍｍの吸光度を測定することにより検出し、生細胞の割合を解析した。なお、コントロールとして、シスプラチン非存在下で培養したＨＫ−２細胞（図１４の「シスプラチン−」）や、シスプラチン（３０μＭ）存在下及び化合物＃４非存在下で培養したＨＫ−２細胞（図１４の「シスプラチン＋」）を用いた。
１３−２ 結果
化合物＃４は、少なくとも１〜３００μＭの濃度でシスプラチンによるＨＫ−２細胞死を有意に抑制し、特に３０μＭ前後の濃度の化合物＃４を用いた場合、効率よく細胞死を抑制できることが明らかとなった（図１４）。この結果は、化合物＃４は、シスプラチンなどの薬物による腎毒性の解除効果、すなわちかかる薬物からの腎保護効果を有することを示している。
さらに本発明の化合物存在下でＨＫ−２細胞を前培養（preincubation）することにより細胞死が効果的に抑制できるか検討を行った。本発明の化合物＃４を３μＭの濃度であらかじめ細胞を１時間培養した後、上記実施例１２に記載の方法にしたがって解析を行った。その結果、前培養処理を行わなかった場合（図１５の「前処理−」）と比べ、前培養処理をいった場合（図１５の「前処理＋」）は、シスプラチンによるＨＫ−２細胞死をさらに抑制できることが明らかとなった（図１５）。この結果は、化合物＃４を複数回投与すると、より効果的にシスプラチンなどの薬物による腎毒性の解除効果、すなわちかかる薬物からの腎保護効果を発揮できる可能性を示唆している。
１４．本発明の化合物がインスリン分泌促進効果を有することの確認
本発明の化合物によるインスリン分泌促進効果について検討するために、ラ氏島由来細胞株（ＩＳＮ−１ｅ）を用いてＡＴＰ産生量を解析した。
１４−１ 方法
ＩＳＮ−１ｅ細胞を９６穴細胞培養プレートに２×１０５個/ウエルで撒いた後、一晩培養し、化合物＃４を、各種濃度（１０、３、１、０．３、０．１、及び０．０３μＭ）となるようにＲＰＭＩ１６４０通常培養液２中に混和し、さらに３時間培養した後、培養液中に産生されたＡＴＰの濃度を『細胞の』ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製）を用いてGloMa 96 Microplate Luminometer（Promega社製）により測定した。なお、コントロールとして、化合物非存在下（ＤＭＳＯ添加［１％］）で培養したＩＳＮ−１ｅ細胞（図１６の「control」）や、ＨＩＦの活性化剤（ＦＧ−４５９２［１０、３、１、０．３、及び０．１μＭ］）存在下で培養したＩＳＮ−１ｅ細胞を用いた。
１４−２ 結果
化合物＃４は、少なくとも０．０３〜１０μＭの濃度でＩＳＮ−１ｅ細胞内のＡＴＰ濃度を有意に（コントロールに対して２倍以上）上昇させることが明らかとなった（図１６）。ラ氏島においては細胞内のＡＴＰ濃度の上昇はインスリン分泌を促進することが知られており、このことから化合物＃４は、ラ氏島細胞のインスリン分泌刺激効果を有することを示すとともに、かかる効果により糖尿病を改善できる可能性を示唆している。
１５．化合物＃２、４、５、２１及び３５が、Ｌｅｉｇｈ細胞の酸化ストレスによる細胞死を抑制する効果を有することの確認
本発明の化合物は、低酸素条件下でサイトカイン（ＴＮＦα）によるエリスロポエチン産生を負に制御する経路を解除する効果を有することや（実施例２参照）、脳虚血障害を改善する効果を有すること（実施例１２参照）が明らかとなった。かかる結果から、本発明の化合物は虚血・低酸素状態を改善し、酸化ストレスを減弱（抑制）する作用を有するのではないかと考えた。そこで、Ｌｅｉｇｈ細胞の酸化ストレスによる細胞死を抑制する効果について検討するために、グルタチオン合成阻害剤ＢＳＯで処理したＬｅｉｇｈ細胞を、化合物＃２、４、５、２１及び３５存在下で培養し、細胞生存率を測定した。
１５−１ 方法
２４穴細胞培養プレートに１ウエルあたり４×１０４個のＬｅｉｇｈ細胞を撒いた後、２４時間培養し、グルタチオン合成阻害剤ＢＳＯ（L-Buthionine sulphoximine）（Sigma-Aldrich社製）を、５００μｌとなるように培養液中に混和した。ＢＳＯ存在下で２４時間培養した後、５種類の化合物（化合物＃２、４、５、２１及び３５）を、１０μＭとなるように培養液中に混和した。上記５種類の化合物存在下で４日間培養した後、生細胞数をCell Counting Kit-8（同仁化学研究所社製）を用いて測定し、細胞の生存率を算出した（図１７の「BSO+#2」、「BSO+#4」、「BSO+#5」、「BSO+#21」、「BSO+#35」）。なお、コントロールとして、化合物及びＢＳＯ非存在で培養したＬｅｉｇｈ細胞（図１７の「cell only」）や、化合物非存在で培養したＬｅｉｇｈ細胞（図１７の「BSO」）や、ＨＩＦの活性化剤（ＦＧ−４５９２［１０μＭ］）存在下で培養したＬｅｉｇｈ細胞（図１７の「BSO+FG4592」）や、ＡＴＰ産生促進剤（コエンザイムＱ１０［１μＭ］）存在下で培養したＬｅｉｇｈ細胞（図１７の「BSO+CoQ10」）や、抗酸化物質（α−リポ酸［１μＭ］）存在下で培養したＬｅｉｇｈ細胞（図１７の「BSO+αLA」）を用いた。
１５−２ 結果
５種類の化合物（化合物＃２、４、５、２１及び３５）は、ＢＳＯによるＬｅｉｇｈ細胞の細胞死を効率よく抑制できることが明らかとなった（図１７）。この結果は、５種類の化合物（化合物＃２、４、５、２１及び３５）が、Ｌｅｉｇｈ脳症等のミトコンドリア病患者の酸化ストレスによる細胞死を抑制できることを示しており、本発明の化合物がＬｅｉｇｈ脳症等のミトコンドリア病を治療できることを示唆している。
本発明によると、エリスロポエチン産生の抑制を解除することや、エリスロポエチン産生を促進することができ、エリスロポエチンの産生低下や反応性低下に起因する疾患に伴う貧血を治療・予防することができる他、かかる疾患の進行を遅らせることや上記疾患の症状を改善することもできるので、上記疾患の治療薬の分野で有用である。

Claims (12)

  1. 以下の一般式（Ｉ）；
    ［式中、Ｒ１はベンゼン環が非置換若しくは炭素数１〜７のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基、非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基、又はフェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンを表し、前記フェニル基はさらに１以上のフェニル基で置換されていてもよく、Ｒ２はインドールの４，５，６及び／又は７位に置換する水素、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素、塩素からなる群から選択され、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
    、一般式（II）；
    ［式中、Ｒ６は水素又はメチル基であり、Ｘは炭素数４〜６のアルキレン基、若しくは炭素数４のエーテル基であり、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
    、及び、一般式（III）；
    ［式中、Ａはインドール若しくはナフタレンを表し、Ａがインドールのとき、インドールの３位及びに５位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ａがナフタレンのとき、ナフタレンの１位及び７位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ｒ７は炭素数１〜５のアルキル基又はベンジル基を表し、該ベンジル基のベンゼン環は１又は２以上の炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されていてもよく、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
    で表される化合物、並びに、Ｒ３がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、エリスロポエチン発現増強剤。
  2. 炎症性サイトカインによるエリスロポエチン発現抑制の解除作用、及び／又は、エリスロポエチン発現促進作用を有することを特徴とする請求項１に記載のエリスロポエチン発現増強剤。
  3. 炎症性サイトカインがＴＮＦαであることを特徴とする請求項２に記載のエリスロポエチン発現増強剤。
  4. 化合物が、以下の式（Ｉ−１）、（Ｉ−２）又は（III−１）で表される化合物若しくはそれらの医薬的に許容される塩であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤。
    式（Ｉ−１）；
    式（Ｉ−２）；
    式（III−１）；
  5. 請求項１〜４のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする貧血の治療・予防薬。
  6. 請求項１〜４のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする肝機能改善剤。
  7. 請求項１〜４のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする虚血障害改善剤。
  8. 請求項１〜４のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とする腎保護剤。
  9. 請求項１〜４のいずれかに記載のエリスロポエチン発現増強剤を含むことを特徴とするインスリン分泌促進剤。
  10. 以下の一般式（Ｉ）；
    ［式中、Ｒ１はベンゼン環が非置換若しくは炭素数１〜７のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基、非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４〜６のアルキル基、又はフェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンを表し、前記フェニル基はさらに１以上のフェニル基で置換されていてもよく、Ｒ２はインドールの４，５，６及び／又は７位に置換する水素、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜７のアルコキシル基、フッ素、塩素からなる群から選択され、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
    、一般式（II）；
    ［式中、Ｒ６は水素又はメチル基であり、Ｘは炭素数４〜６のアルキレン基、若しくは炭素数４のエーテル基であり、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
    、及び、一般式（III）；
    ［式中、Ａはインドール若しくはナフタレンを表し、Ａがインドールのとき、インドールの３位及びに５位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ａがナフタレンのとき、ナフタレンの１位及び７位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ｒ７は炭素数１〜５のアルキル基又はベンジル基を表し、該ベンジル基のベンゼン環は１又は２以上の炭素数１〜３のアルキル基又は炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されていてもよく、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１〜４のアルキル基である。］
    で表される化合物、並びに、Ｒ３がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、ミトコンドリア病の治療剤。
  11. 化合物が、以下の式（Ｉ−１）、（Ｉ−１’’’）、（Ｉ−１’’’’）、（Ｉ−２）又は（III−１）で表される化合物若しくはそれらの医薬的に許容される塩であることを特徴とする請求項１０に記載のミトコンドリア病の治療剤。
    式（Ｉ−１）；
    式（Ｉ−１’’’）
    式（Ｉ−１’’’’）
    式（Ｉ−２）；
    式（III−１）；
  12. 以下の式（Ｉ−１’）、（Ｉ−１’’）、（Ｉ−２）、（Ｉ−２’）、（Ｉ−２’’）、（Ｉ−２’’’）、（Ｉ−３）、（Ｉ−３’）、（II−２）、（III−１）、又は（IV−１）で表される化合物若しくはそれらの医薬的に許容される塩。
    式（Ｉ−１’）；
    式（Ｉ−１’’）；
    式（Ｉ−２）；
    式（Ｉ−２’）；
    式（Ｉ−２’’）；
    式（Ｉ−２’’’）；
    式（Ｉ−３）；
    式（Ｉ−３’）；
    式（II−２）；
    式（III−１）；
    式（IV−１）；
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