JP7329784B2 - 難聴の予防又は改善剤 - Google Patents
難聴の予防又は改善剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7329784B2 JP7329784B2 JP2017252016A JP2017252016A JP7329784B2 JP 7329784 B2 JP7329784 B2 JP 7329784B2 JP 2017252016 A JP2017252016 A JP 2017252016A JP 2017252016 A JP2017252016 A JP 2017252016A JP 7329784 B2 JP7329784 B2 JP 7329784B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- compound
- added
- mmol
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
- A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
Description
特許法第３０条第２項適用 （１）平成２９年６月２８日に「Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＵＭＤＦ）」が発行した「ＭＩＴＯＣＨＯＮＤＲＩＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ２０１７」にて発表
特許法第３０条第２項適用 （２）平成２９年６月２８日に「２０１７ ＵＭＤＦ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ」のポスター発表にて発表
本発明は難聴の予防剤又は改善剤に関する。
音が外耳道を通り、鼓膜を振動させ、その振動が耳小骨を経由して内耳に達するまでは、音は物理的な振動として伝達される。その後、内耳の有毛細胞において、音の振動は神経の興奮に置き換えられ、それより先は、聴神経、脳幹部、中脳を経て神経のインパルスとして伝えられ、大脳皮質で音として感覚される。大脳皮質に生ずる音の感覚レベルが、正常状態と比べ、低下した状態が難聴である。
難聴は、６５歳以上で３人に１人の割合で罹患する疾患であり、その克服は、高齢化社会における国民の生活の質にもかかわる重要課題である。難聴には、加齢の他、騒音、薬剤投与の副作用、遺伝、生活習慣等の様々な要因がある。
難聴の予防又は治療効果を有する成分として、循環障害改善剤であるカリジノゲナーゼ（特許文献１）や、エンドセリン受容体Ｂの発現を上昇させる物質（特許文献２）や、メチル基供与剤とヒストン脱アセチル化酵素阻害剤との配合剤（特許文献３）等が報告されている。
一方、本発明者らは、後述する本件化合物群が、エリスロポエチン発現増強効果及びミトコンドリア病の治療効果（特許文献４）や、臓器線維化抑制効果（特許文献５）を有することを報告している。しかしながら、本件化合物群が、難聴の予防又は改善効果を有することについては、これまで知られていなかった。
本発明の課題は、比較的簡便かつ安価に製造することができる低分子化合物を有効成分とする、難聴の予防又は改善剤を提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を続けている。その過程において、後述する本件化合物群が、難聴の症状を効果的に予防又は改善（治療）する作用を有することを見いだし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下のとおりである。
〔１〕以下の一般式（Ｉ０）；
［式中、Ｒ１は、ベンゼン環が非置換のベンゾイルメチル基であるか、あるいはベンゼン環が炭素数１～７のアルキル基、炭素数１～７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基；非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４～６のアルキル基；又は、フェニル基若しくはシクロペンチル基で置換されたメチレン又はエチレン；を表し、前記フェニル基はさらに１以上のフェニル基で置換されていてもよく、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４は、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１～Ｃ６のアルキル基、Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基、ＯＲ８で表される有機オキシ基を表し、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ７のアルキル基、Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基を表し、Ｚ５は、水素原子又はＣ１～Ｃ６のアルキル基を表し、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基である。］
、一般式（II）；
［式中、Ｒ６は水素又はメチル基であり、Ｘは炭素数４～６のアルキレン基、若しくは炭素数４のエーテル基であり、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基である。］
、及び、一般式（III）；
［式中、Ａはインドール若しくはナフタレンを表し、Ａがインドールのとき、インドールの３位及び５位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ａがナフタレンのとき、ナフタレンの１位及び７位に、それぞれ酢酸基及びＲ７Ｏが置換されており、Ｒ７は炭素数１～５のアルキル基又はベンジル基を表し、該ベンジル基のベンゼン環は１又は２以上の炭素数１～３のアルキル基又は炭素数１～３のアルコキシ基で置換されていてもよく、Ｒ３はＯＨ、ＯＲ４、ＮＨＲ４及びＮＲ４Ｒ５のいずれか一つから選ばれる基であり、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基である。］
で表される化合物、並びに、Ｒ３がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群（以下、これらを総称して「本件化合物群」ということがある）から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、難聴の予防又は改善剤。
〔２〕難聴が、内耳の機能低下；内耳より中枢側の神経の機能低下；薬剤投与；騒音；加齢；及び酸化ストレス；から選択される１又は２以上に起因する難聴であることを特徴とする上記〔１〕に記載の予防又は改善剤。
〔３〕化合物が、以下の式（Ｉ－２）で表される化合物若しくはその医薬的に許容される塩である、上記〔１〕又は〔２〕に記載の予防又は改善剤。
式（Ｉ－２）；
〔１〕以下の一般式（Ｉ０）；
、一般式（II）；
、及び、一般式（III）；
で表される化合物、並びに、Ｒ３がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群（以下、これらを総称して「本件化合物群」ということがある）から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、難聴の予防又は改善剤。
〔２〕難聴が、内耳の機能低下；内耳より中枢側の神経の機能低下；薬剤投与；騒音；加齢；及び酸化ストレス；から選択される１又は２以上に起因する難聴であることを特徴とする上記〔１〕に記載の予防又は改善剤。
〔３〕化合物が、以下の式（Ｉ－２）で表される化合物若しくはその医薬的に許容される塩である、上記〔１〕又は〔２〕に記載の予防又は改善剤。
式（Ｉ－２）；
また本発明の実施の他の形態として、本件化合物群から選択される１種又は２種以上の化合物を、難聴の予防又は改善（治療）を必要とする対象に投与する工程を含む、難聴を予防又は改善（治療）する方法；や、難聴の予防又は改善（治療）剤として使用するための、本件化合物群から選択される１種又は２種以上の化合物；や、難聴の予防又は改善（治療）における使用のための、本件化合物群から選択される１種又は２種以上の化合物；や、難聴の予防又は改善（治療）剤を製造するための、本件化合物群から選択される１種又は２種以上の化合物の使用；を挙げることができる。
本件化合物群は、難聴の症状、具体的には、聴覚（聴力）レベルを効果的に向上させる作用を有する。また、後述する実施例において具体的に示されているとおり、本件化合物群は、内耳性難聴、薬剤性難聴、遺伝性疾患、騒音性難聴、加齢性難聴、及び酸化ストレスの１又は２以上に起因する難聴に対して、特に有用である。さらに、本件化合物群は、比較的簡便かつ高収率で製造できる低分子化合物を、難聴の予防又は改善の有効成分とするため、比較的簡便かつ安価に製造することができる点でも優れている。
本発明の難聴の予防又は改善剤は、「難聴を予防又は改善するため」という用途が限定された、本件化合物群から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する剤（以下、「本件予防／改善剤」ということがある）であり、ここで難聴の予防には、難聴の発症予防の他、難聴の症状悪化の予防も含まれる。本件予防／改善剤は、有効成分である本件化合物群を、単独で飲食品又は医薬品（製剤）として使用してもよいし、さらに添加剤を混合し、組成物の形態（飲食品組成物又は医薬組成物）として使用してもよい。かかる飲食品としては、例えば、健康食品（機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、栄養強化食品、栄養調整食品、サプリメント等）、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等）を挙げることができる。
本明細書において、「難聴」とは、知覚可能な最小音圧レベルである最小可聴値（聴覚閾値）が、正常な聴覚閾値（通常約２５［ｄＢ ＨＬ］以下）と比べ、低下した状態を意味する。難聴における聴覚閾値としては、通常２６（ｄＢ ＨＬ）であり、好ましくは４１（ｄＢ ＨＬ）、より好ましくは６１（ｄＢ ＨＬ）、さらに好ましくは８１（ｄＢ ＨＬ）である。「難聴の予防又は改善」とは、換言すると、聴覚閾値の低下の抑制、又は低下した聴覚閾値の向上（上昇）を意味する。難聴の要因は１つに限られず、複数（２以上）あってもよい。
本明細書における難聴は、機能障害が起こる耳の部位に応じて、伝音性難聴と、感音性難聴とに大別される。ここで、伝音性難聴とは、外耳及び／又は中耳（例えば、外耳道、鼓膜、耳小骨［ツチ骨、キヌタ骨、アブミ骨］）の機能低下に起因する難聴をいい、伝音性難聴としては、具体的に、中耳炎、耳硬化症、鼓膜損傷、外耳道閉塞、外耳道炎、外耳道損傷等に起因する難聴を挙げることができる。また、上記感音性難聴とは、内耳（例えば、蝸牛）の機能低下に起因する難聴（内耳性難聴）、及び／又は内耳より中枢側の神経の機能低下に起因する難聴（後迷路性難聴）をいい、感音性難聴としては、具体的に、メニエール病、外リンパ瘻、蝸牛の機能低下等に起因する難聴；突発性難聴；薬剤性難聴；騒音性難聴；老人性難聴；などを挙げることができる。また、難聴は、症候性難聴（難聴以外にも他の症状、例えば、眼、皮膚等に認められる先天性疾患）と、非症候性難聴（難聴以外の症状を有さない難聴）とに大別されたり、先天性難聴と後天性難聴とに大別される。
上記難聴としては、本実施例でその効果が具体的に示されているため、内耳性難聴が好ましく、特に、蝸牛の機能低下に起因する難聴（蝸牛性難聴）が好ましい。かかる蝸牛性難聴は、例えば、ラセン神経節細胞、有毛細胞（内有毛細胞又は外有毛細胞）等の蝸牛における細胞が、何らかの要因で障害を受けた結果生じる。
上記先天性難聴としては、聴覚系統に関連する遺伝子疾患、妊娠中のウイルス感染、アルポート症候群等の先天的な要因に起因する難聴であればよく、例えば、ＧＪＢ２遺伝子（コネキシン２６をコードする遺伝子）、ＰＯＵ４Ｆ３遺伝子、ＳＬＣ２６Ａ４遺伝子、ＮＤＵＦＳ４遺伝子等の染色体遺伝子の異常や、ミトコンドリア遺伝子の異常などに起因する先天性難聴を挙げることができる。ここで、遺伝子の異常とは、正常な遺伝子において、１又は複数のヌクレオチドが付加、置換、欠失、及び／又は挿入し、その結果、当該遺伝子がコードするタンパク質の本来の機能や発現レベルが、異常になる（著しく低下又は向上する）ことをいう。
上記ミトコンドリア遺伝子の異常に起因する先天性難聴としては、ミトコンドリアゲノムＤＮＡ（NCBI Reference Sequence：NC_012920；配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド）の１５５５番のアデニン（Ａ）がグアニン（Ｇ）に置換した変異（ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異）；前記ミトコンドリアゲノムＤＮＡの３２４３番目のＡがＧに置換した変異（ｍ．３２４３Ａ＞Ｇ変異）；前記ミトコンドリアゲノムＤＮＡの７４４５番目のＡがＧに置換した変異（ｍ．７４４５Ａ＞Ｇ変異）等を例示することができる。
上記後天性難聴としては、突発性疾患、疲労、ウイルス感染、薬剤投与、酸化ストレス、頭部外傷、騒音、加齢等の後天的な要因に起因する難聴であればよく、本実施例でその効果が具体的に示されているため、薬剤投与に起因する難聴（薬剤性難聴）や、騒音に起因する難聴（騒音性難聴）や、加齢に起因する難聴（加齢性難聴）や、酸化ストレスに起因する難聴（酸化ストレス性難聴）が好ましい。かかる薬剤性難聴とは、薬剤投与による副作用に起因する難聴をいい、投与される薬剤としては、例えば、アミノグリコシド系抗菌物質（硫酸ストレプトマイシン、カナマイシン、ゲンタマイシン、ハベカシン等）、白金製剤（シスプラチン等）、サリチル酸剤（アスピリン等）、ループ利尿剤（フロセミド、トラセミド、ブメタニド、アゾセミド等）などを挙げることができる。特に上記アミノグリコシド系抗菌物質やシスプラチンに起因する薬剤性難聴は、多くが不可逆性にものであり、かかる難聴に罹患した患者のＱＯＬは大きく低下するため、予防又は改善対象の難聴としては、上記アミノグリコシド系抗菌物質やシスプラチンに起因する薬剤性難聴がより好ましい。
本件化合物群に含まれる化合物の詳細な説明は以下に示す。
本発明の一態様において、上記一般式（Ｉ０）におけるＲ１は、ベンゼン環が非置換のベンゾイルメチル基であるか、あるいはベンゼン環が炭素数１～７のアルキル基、炭素数１～７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基である。かかる「ベンゼン環が炭素数１～７のアルキル基、炭素数１～７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素で置換されたベンゾイルメチル基」とは、ベンゾイルメチル基のベンゼン環を構成する炭素原子に結合する１個若しくは２個以上の水素原子が、炭素数１～７のアルキル基、炭素数１～７のアルコキシル基、フッ素原子及び／又は塩素原子によって置き換わっていることを意味する。したがって、置換されたベンゼン環とは、ベンゼン環を構成する炭素原子に結合する水素原子のうち１～５個の水素原子が炭素数１～７のアルキル基、炭素数１～７のアルコキシル基、フッ素及び／又は塩素によって置き換えられたベンゼン環である。置換されたベンゼン環が２個以上の置換基を有する場合、当該置換基は同一であっても異なっていてもよい。例えば、１～５個の炭素数１～７のアルキル基で置換されたベンゼン環、１～５個の炭素数１～７のアルコキシル基で置換されたベンゼン環、１～５個のフッ素原子で置換されたベンゼン環、又は１～５個の塩素原子で置換されたベンゼン環を有するベンゾイルメチル基を挙げることができる。また、他の例として、炭素数１～４のアルキル基、炭素数１～４のアルコキシル基、フッ素原子及び塩素原子から選択された合計２～５個の置換基で置換されたベンゼン環を有するベンゾイルメチル基を挙げることができる。ここで、炭素数１～７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１－エチルブチル基、２－エチルブチル基、１－エチル－１－メチルプロピル基、１－エチル－２－メチルプロピル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１－エチルブチル基、２－エチルブチル基、１－エチル－１－メチルプロピル基、１－エチル－２－メチルプロピル基、ｎ－ヘプチル基、１－メチルヘキシル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、４－メチルヘキシル基、５－メチルヘキシル基、１－エチルペンチル基、２－エチルペンチル基、３－エチルペンチル基、４，４－ジメチルペンチル基、１－プロピルブチル基等を挙げることができる。
上記炭素数１～７のアルコキシル基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ－ブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ｎ－ペントキシ基、１－メチルブトキシ基、２－メチルブトキシ基、３－メチルブトキシ基、１－エチルプロポキシ基、１，１－ジメチルプロポキシ基、１，２－ジメチルプロポキシ基、２，２－ジメチルプロポキシル基、ｎ－ヘキシルオキシ基、１－メチルペンチルオキシ基、２－メチルペンチルオキシ基、３－メチルペンチルオキシ基、４－メチルペンチルオキシ基、１，１－ジメチルブトキシ基、１，２－ジメチルブトキシ基、１，３－ジメチルブトキシ基、２，２－ジメチルブトキシ基、２，３－ジメチルブトキシ基、３，３－ジメチルブトキシ基、１，１，２－トリメチルプロポキシ基、１－エチルブトキシ基、２－エチルブトキシ基、１－エチル－１－メチルプロポキシ基、１－エチル－２－メチルプロポキシ基、ｎ－ヘプチルオキシ基、１－メチルヘキシルオキシ基、２－メチルヘキシルオキシ基、３－メチルヘキシルオキシ基、４－メチルヘキシルオキシ基、５－メチルヘキシルオキシ基、１－エチルペンチルオキシ基、２－エチルペンチルオキシ基、３－エチルペンチルオキシ基、４，４－ジメルペンチルオキシ基、１－プロピルブトキシ基等を挙げることができる。
本発明の他の態様において、上記一般式（Ｉ０）におけるＲ１は、非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４～６のアルキル基である。非置換若しくはフッ素で置換された鎖状又は分枝状の炭素数４～６のアルキル基としては、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１－エチルブチル基、２－エチルブチル基、１－エチル－１－メチルプロピル基、１－エチル－２－メチルプロピル基及びこれらのフッ素化体を挙げることができ、好ましくは１－エチルブチル基、２－エチルブチル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、５－メチルペンチル基、３，３，４，４，４－ペンタフルオロブチル基、４，４，５，５，５－ペンタフルオロペンチル基、５，５，６，６，６－ペンタフルオロヘキシル基であり、より好ましくは２－エチルブチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、及び４，４，５，５，５－ペンタフルオロペンチル基であり、最も好ましくは４，４，５，５，５－ペンタフルオロペンチル基である。
本発明の他の態様において、上記一般式（Ｉ０）におけるＲ１は、フェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンであり、前記フェニル基はさらに１又は２以上のフェニル基で置換されていてもよい。フェニル基若しくはシクロペンチル基が置換したメチレン又はエチレンとは、ベンジル基、２－フェネチル基、シクロペンチルメチル基又は２－シクロペンチルエチル基である。１又は２以上のフェニル基が置換したベンジル基又は２－フェネチル基としては、３－フェニルベンジル基、４－フェニルベンジル基、３，５－ジフェニルベンジル基、２－（１，１’－ビフェニル－３－イル）－エチル基、２－（１，１’－ビフェニル－４－イル）－エチル基、及び２－（３，５－ジフェニルフェニル）－エチル基を挙げることができる。上記一般式（Ｉ）におけるＲ１としては、２－フェネエチル基、シクロペンチルメチル基、２－シクロペンチルエチル基及び２－（１，１’－ビフェニル－３－イル）－エチル基を好適に例示することができる。
上記一般式（Ｉ０）におけるＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４としては、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１～Ｃ６のアルキル基、Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基、ＯＲ８で表される有機オキシ基を表し、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ７のアルキル基、Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基を表し、Ｚ５は、水素原子又はＣ１～Ｃ６のアルキル基を挙げることができる。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を挙げることができる。Ｃ１～Ｃ６のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、４－メチルペンチル基、１，１－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，１，２－トリメチルプロピル基、１－エチルブチル基、２－エチルブチル基、１－エチル－１－メチルプロピル基、１－エチル－２－メチルプロピル基等を挙げることができる。Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基としては、エテニル基（ビニル基）、１－プロペニル基、２－プロペニル基（アリル基）、１－ブテニル基、２－ブテニル基、３－ブテニル基、イソブテニル基、１－ペンテニル基、２－ペンテニル基、３－ペンテニル基、４－ペンテニル基、１－ヘキセニル基、２－ヘキセニル基、３－ヘキセニル基、４－ヘキセニル基、５－ヘキセニル基等を挙げることができる。Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基としては、エチニル基、１－プロピニル基、２－プロピニル基（プロパルギル基）、１－ブチニル基、２－ブチニル基、３－ブチニル基、１－メチル－２－プロピニル基、２－メチル－３－ブチニル基、１－ペンチニル基 、２－ペンチニル基、３－ペンチニル基、４－ペンチニル基、１－メチル－２－ブチニル基、２－メチル－３－ペンチニル基、１－ヘキシニル基、１，１－ジメチル－２－ブチニル基等を挙げることができる。Ｃ１～Ｃ７のアルコキシル基（ＯＲ８で表される有機オキシ基において、Ｒ８がＣ１～Ｃ７のアルキル基である場合）としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ－ブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ｎ－ペントキシ基、１－メチルブトキシ基、２－メチルブトキシ基、３－メチルブトキシ基、１－エチルプロポキシ基、１，１－ジメチルプロポキシ基、１，２－ジメチルプロポキシ基、２，２－ジメチルプロポキシル基、ｎ－ヘキシルオキシ基、１－メチルペンチルオキシ基、２－メチルペンチルオキシ基、３－メチルペンチルオキシ基、４－メチルペンチルオキシ基、１，１－ジメチルブトキシ基、１，２－ジメチルブトキシ基、１，３－ジメチルブトキシ基、２，２－ジメチルブトキシ基、２，３－ジメチルブトキシ基、３，３－ジメチルブトキシ基、１，１，２－トリメチルプロポキシ基、１－エチルブトキシ基、２－エチルブトキシ基、１－エチル－１－メチルプロポキシ基、１－エチル－２－メチルプロポキシ基、ｎ－ヘプチルオキシ基、１－メチルヘキシルオキシ基、２－メチルヘキシルオキシ基、３－メチルヘキシルオキシ基、４－メチルヘキシルオキシ基、５－メチルヘキシルオキシ基、１－エチルペンチルオキシ基、２－エチルペンチルオキシ基、３－エチルペンチルオキシ基、４，４－ジメルペンチルオキシ基、１－プロピルブトキシ基等を挙げることができる。好ましくは、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４は、同一でも異なっていてもよく、水素、エトキシ基、フッ素、塩素である。
上記一般式（Ｉ０）におけるＲ４及びＲ５は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、Ｒ４とＲ５が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２－メトキシエチル基、２，２，２－トリクロロエチル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくは、メチル基及びエチル基である。
上記一般式（Ｉ０）の実施態様として下記の一般式（Ｉ）で表される化合物、及び、好ましくは、一般式（１）で表される化合物が例示される。
上記式（１）の化合物において、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４は、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１～Ｃ６のアルキル基、Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基、ＯＲ８で表される有機オキシ基を表し、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ７のアルキル基、Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基を表し、Ｚ５は、水素原子又はＣ１～Ｃ６のアルキル基を表す。
式（１）におけるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等を挙げることができる。
式（１）におけるＣ１～Ｃ６のアルキル基とは、置換基を有していてもよい炭素数１～６の直鎖状または分岐状のアルキル基を意味し、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ－へキシル基等を挙げることができる。
上記「置換基を有していてもよい」の置換基としては、ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、炭素数２～６のアルキニル基、Ｃ６～Ｃ１０のアリール基を挙げることができる。上記炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、炭素数２～６のアルキニル基は、式（１）における炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、炭素数２～６のアルキニル基と同じである。また、上記Ｃ６～Ｃ１０のアリール基としては、フェニル基、ナフチル基を挙げることができる。
式（１）におけるＣ２～Ｃ６のアルケニル基とは、置換基を有していてもよい炭素数２～６の直鎖状または分岐状のアルケニル基を意味し、具体的には、ビニル基、１－プロペニル基、２－プロペニル基、１－ブテニル基、２－ブテニル基、３－ブテニル基、１，３－ブテニル基、１－ペンテニル基、１－ヘキセニル基等を挙げることができる。
式（１）におけるＣ２～Ｃ６のアルキニル基とは、置換基を有していてもよい炭素数２～６の直鎖状または分岐状のアルキニル基を意味し、具体的には、エチニル基、１－プロピニル基、１－ブチニル基、１－ペンチニル基、１－ヘキシニル基等を挙げることができる。
上記Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１～Ｃ６のアルキル基、ＯＲ８で表される有機オキシ基が好ましく、水素原子、フッ素原子、塩素原子、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基等のＣ１～Ｃ３のアルキル基、ＯＲ８で表される有機オキシ基がより好ましい。
上記Ｚ５は、水素原子又はＣ１～Ｃ３のアルキル基が好ましく、水素原子又はメチル基がより好ましい。
上記Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６のアルキル基が好ましく、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基等のＣ１～Ｃ３のアルキル基、ベンジル基がより好ましい。
前記式（１）で表される化合物の中でも、好ましくは、以下の式（２）、式（３）、式（４）、式（５）、式（６）で表される化合物又はその塩である。
上記式（２）、式（３）、式（４）、式（５）、式（６）中、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５は、式（１）におけるＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５と同じ定義である。
式（１）で表される化合物は、具体的には、以下に示す化合物を例示することができる。
上記化合物の中でも、好ましくは、以下の化合物である。
上記一般式（Ｉ０）におけるＲ１が２，４－ジフルオロベンゾイルメチル基であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（Ｉ０）で表される化合物は、実施例で後述する化合物＃５を表し、上記一般式（Ｉ０）におけるＲ１が４－フルオロベンゾイルメチル基であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（Ｉ０）で表される化合物は、実施例で後述する化合物＃４を表し、上記一般式（Ｉ０）におけるＲ１が４，４，５，５，５－ペンタフルオロペンチル基であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（Ｉ０）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃２１を表し、上記一般式（Ｉ０）におけるＲ１が２－シクロペンチルエチル基であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（Ｉ０）で表される化合物は、実施例で後述する化合物＃２４を表す。これら化合物の他、一般式（Ｉ０）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃２、４、５、及び２０や、実施例で後述する化合物＃１７～１９や、実施例で後述する化合物＃２２及び２３や、実施例で後述する化合物＃２５を挙げることができる。
上記一般式（II）におけるＸは、、炭素数４～６の直鎖のアルキレン基、即ちブチレン－（ＣＨ２）４－、ペンチレン－（ＣＨ２）５－、ヘキシレン－（ＣＨ２）６－、又は炭素数４のエーテル基であり、炭素数４のエーテル基としては、メチレン－Ｏ－プロピレン基、エチレン－Ｏ－エチレン基、プロピレン－Ｏ－メチレン基を挙げることができ、ブチレン、ヘキシレン及びエチレン－Ｏ－エチレン基が好ましい。
上記一般式（II）におけるＲ４及びＲ５は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、Ｒ４とＲ５が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２，２，２－トリクロロメチル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくはメチル基及びエチル基である。
上記一般式（II）におけるＸがブチレンであり、Ｒ６が水素であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（II）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃１５を表す。化合物＃１５の他、一般式（Ｉ）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃１３や、実施例で後述する化合物＃１４を挙げることができる。
上記一般式（III）におけるＲ７は、炭素数１～５のアルキル基又はベンジル基である
。鎖状又は分枝状の炭素数１～５のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、及び２，２－ジメチルプロピル基を挙げることができる。また、前記ベンジル基のベンゼン間は１又は２以上の炭素数１～３のアルキル基又は炭素数１～３のアルコキシ基で置換されていてもよい。炭素数１～３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、及びイソプロピル基を挙げることができ、炭素数１～３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、及びイソプロポキシ基を挙げることができる。上記一般式（III）におけるＲ７は、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ｎ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、及び３，５－ジメトキシベンジル基であり、より好ましくは３，５－ジメトキシベンジル基である。
。鎖状又は分枝状の炭素数１～５のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、及び２，２－ジメチルプロピル基を挙げることができる。また、前記ベンジル基のベンゼン間は１又は２以上の炭素数１～３のアルキル基又は炭素数１～３のアルコキシ基で置換されていてもよい。炭素数１～３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、及びイソプロピル基を挙げることができ、炭素数１～３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、及びイソプロポキシ基を挙げることができる。上記一般式（III）におけるＲ７は、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ｎ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、及び３，５－ジメトキシベンジル基であり、より好ましくは３，５－ジメトキシベンジル基である。
上記一般式（III）においてＲ４及びＲ５は、同一又は異なって置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基である。置換若しくは非置換の炭素数１～４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、Ｒ４とＲ５が窒素と一緒になったピロリジンや、これらのメトキシ基、フェニル基、フッ素及び塩素により置換されたものを挙げることができ、好ましくは、メチル基、モノクロロメチル基、エチル基、２，２，２－トリクロロメチル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、メトキシエチル基、イソプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、及びピロリジンであり、より好ましくはメチル基及びエチル基である。
上記一般式（III）におけるＡがインドールであり、Ｒ７が３，５－ジメトキシベンジル基であり、かつＲ３がＯＨのとき、一般式（III）で表させる化合物は、実施例で後述する化合物＃３５を表す。化合物＃３５の他、一般式（Ｉ０）で表される化合物の中で具体的なものとしては、実施例で後述する化合物＃３６～３８や、実施例で後述する化合物＃３３及び３４を挙げることができる。
本件化合物群から選択される化合物が不斉炭素原子及び軸不斉に係わる不斉点をもつとき、かかる化合物は、考えられ得るすべての光学異性体を含み、それら光学異性体は任意の比で使用することができる。例えば、ある光学活性化合物は、エナンチオマーでもラセミでも任意の割合のエナンチオマー混合物でも使用することができ、不斉点が複数存在するときは、任意の割合のジアステレオマー混合物で使用してもよい。
本件化合物群における医薬的に許容される塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から生成された金属塩や、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、リジン、プロカイン等から生成された有機塩などが含まれる。
本件化合物群から選択される化合物の合成方法は、以下に例示することができるが、これらの方法に限られず、一般的に知られている合成法を用いることができる。また、以下に示す化合物は、シグマ－アルドリッチ社、東京化成工業、和光純薬、関東化学等から入手することができる。また、反応溶媒、反応温度に関して、特に記載のない場合は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。反応は、通常、アルゴン又は窒素雰囲気下で行われる。保護基は、Green&Wuts, “PROTECTIVE GROUPS in ORGANIC SYNTHESIS” 3rded.John Wiley&Sons, Inc.を参照し、用いることできる。
上記一般式（Ｉ０）で示される化合物は、置換若しくは非置換のベンゼンと置換若しくは非置換のインドールを出発物質として合成することができる。まず、置換若しくは非置換のベンゼンと無水マレイン酸とを、フリーデル－クラフツ反応を用いて、４－アリール－４－オキソ－２－ブテン酸を合成する。このフリーデル－クラフツ反応は、ルイス酸、リン酸、ポリリン酸等を触媒として作用させることで行い、触媒として好適には塩化アルミニウムが用いられる。反応溶媒としては、塩素系の溶媒が好ましいが、出発物質の置換若しくは非置換のベンゼンを溶媒として用いることもできる。こうして得られた４－アリール－４－オキソ－２－ブテン酸と置換若しくは非置換のインドールとをマイケル反応させることにより、インドール酢酸のα位に置換若しくは非置換のベンゾイルオキシ基が置換した化合物を得て、一般式（Ｉ０）で示される化合物の基本骨格を構築することができる。このマイケル反応において、４－アリール－４－オキソ－２－ブテン酸のカルボキシル基は保護されていても保護されていなくてもよく、通常は保護する必要はないが、保護する場合、用いられる保護基としては、メチルエステル、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、２，２，２－トリクロロエチルエステル及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエステル等を挙げることができる。一方、インドールの窒素原子も保護されていても保護されていなくてもよく、保護する場合はベンジル系の保護基が好ましく、アミド系の保護基は反応性を下げてしまうため好ましくない。また、マイケル反応は、反応系を加熱することで進行することもできるし、ルイス酸等の触媒を用いることもできる。一般式（Ｉ０）で示される化合物の骨格を得た後に、必要であれば保護基を除去することで、一般式（Ｉ０）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、１，３－ジフルオロベンゼン、無水マレイン酸及びインドールから実施例で後述する化合物＃５を合成することができる。
上記一般式（Ｉ０）で示される化合物の合成方法の他の態様としては、アルコールとインドール酢酸の保護体を出発原料として合成する方法を挙げることができる。アルコールの水酸基は、直接若しくは二段階の反応で、ヨウ素又は臭素へと変換することができる。直接変換する方法としては、これらに限られないが、アルコールに、トリフェニルホスフィン、イミダゾール及びヨウ素（Ｉ２）を作用させてヨウ素（Ｉ・）を置換させる方法、又はトリフェニルホスフィンと四臭化炭素を作用させて臭素を置換させる方法を挙げることができる。複数工程を経て合成する方法としては、アルコールをメタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸等のスルホン酸エステルに誘導した後に、アルカリ金属のヨウ化物塩又はアルカリ金属の臭化物塩を反応させる方法を挙げることができる。こうして得られたハロゲン体にインドール酢酸の保護体から生じたα位のエノラートを求核反応させることで、一般式（Ｉ０）で示される化合物の基本骨格を得ることができる。インドール酢酸の保護基としては、カルボキシル基の保護としてメチルエステル、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、２，２，２－トリクロロエチルエステル及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエステル等へ誘導化する方法が挙げられる。一方、インドール酢酸のアミン部位は、炭酸アミドとして保護することが好ましく、保護基としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル等を挙げることができる。こうして得られたインドール酢酸の保護体に塩基を作用させることでエノラートへと誘導し、生じたエノラートとハロゲン体とを求核反応させることで、一般式（Ｉ０）で示される化合物の基本骨格を得ることができる。この求核反応で用いることのできる塩基としては、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等のアルカリ金属の炭酸塩、メチルリチウム、ｎ－ブチルリチウム、ｓｅｃ－ブチルリチウム、ｔｅｒｔ－ブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラザン、ナトリウムヘキサメチルジシラザン、カリウムヘキサメチルジシラザン等のアルカリ金属アミドなどを挙げることができる。用いる塩基によって、使用できる溶媒は異なるが、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）やテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。また、ヘキサメチルリン酸トリアミド等の添加は反応を促進する効果がある。こうして得られた保護体から保護基を除去することで、目的の化合物を得ることができる。この後に、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又はその医薬的に許容される塩とすることができる。具体的には、次式に示すように、４，４，５，５，５－ペンタフルオロペンタノールと１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルを出発物質として合成例で後述する化合物＃２１が合成できる。
本発明における式（１）で表される化合物は、公知の有機化学反応を用いる有機合成手法によって得ることができる。例えば、以下に示すように（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸と式（７）で表されるインドール誘導体とをマイケル反応させることにより、式（１）で表される化合物を得ることができる。
（上記式（７）におけるＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５は、式（１）におけるＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５と同じ定義である。）
上記（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸は、以下に示すように１，３－ジフルオロベンゼンと無水マレイン酸とのフリーデル－クラフツ反応により合成することができる。かかるフリーデル－クラフツ反応は、ルイス酸、リン酸、ポリリン酸等を触媒として作用させることで行い、触媒として好適には塩化アルミニウムが好適に用いられる。
上記式（７）で表されるインドール誘導体は、市販品を用いることができる。市販のインドール誘導体としては、４－フルオロインドール、４－クロロインドール、４－ブロモインドール、６－フルオロインドール、６－クロロインドール、６－ブロモインドール、５－メチルインドール等を挙げることができる。
また、上記式（７）で表されるインドール誘導体は、公知の有機化学反応を用いる有機合成手法によって得ることもできる。例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５がハロゲン原子である場合、市販のインドールに、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド等のハロゲン化剤を作用させることにより上記式（７）で表されるインドール誘導体を得ることができる。また、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４がＣ１～Ｃ６のアルキル基、Ｃ２～Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２～Ｃ６のアルキニル基、ＯＲ８で表される有機オキシ基である場合、上述のように市販のインドールをハロゲン化した後、アルキルリチウム等の有機リチウム試薬との反応、鈴木－宮浦カップリング反応等によって、上記式（７）で表されるインドール誘導体を得ることができる。さらに、Ｒ５がＣ１～Ｃ６のアルキル基である場合、ブロモメタン、ブロモエタン等のＣ１～Ｃ６のハロゲン化アルキルと市販のインドールを反応させることにより、上記式（７）で表されるインドール誘導体を得ることができる。
上記のすべての有機反応は、それぞれ溶媒中で行うことができるが、溶媒は反応温度や反応物等によって適宜選択される。また、上記有機反応の反応温度は、用いる溶媒の沸点等の条件によって適宜選択される。上記有機反応で溶媒を用いる場合、得られた反応溶液を必要に応じて濃縮した後、残渣をそのまま次の反応に使用してもよく、適宜な後処理を行った後に、式（１）で表される化合物として用いてもよい。後処理の具体的な方法としては、抽出処理及び／又は晶出、再結晶、クロマトグラフィー等の公知の精製を挙げることができる。
上述の一般式（Ｉ０）で示される化合物の合成方法は、一般式（II）で示される化合物を合成するために用いることもできる。すなわち、一般式（II）で示される化合物は、上述の一般式（Ｉ０）で示される化合物の合成方法において、出発原料として用いられるアルコールやインドール酢酸の保護体の代わりに、アミノ基がｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルで保護された直鎖のアミノアルコール又は鎖中に酸素を有する直鎖のアミノアルコールや、α位にメチル基が置換したインドール酢酸の保護体を出発原料として用い、同様の方法で合成することができる。直鎖のアミノアルコール及び鎖中に酸素を有する直鎖のアミノアルコールのｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミドへの変換は、定法により行うことができるが、通常炭酸ジｔｅｒｔ－ブチルを用いる。α位にメチル基が置換したインドール酢酸の保護体は、上記の一般式（Ｉ０）で示される化合物の合成方法において、ハロゲン体をヨウ化メチルとしたときに得られる中間体であることは、当業者には容易に理解される。こうして調製した出発原料を用い、一般式（Ｉ０）で示される化合物の合成方法と同様の方法で、一般式（II）で示される化合物を合成することができる。具体的には、次式に示すように、４－アミノブタノールと１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルを出発物質として実施例で後述する化合物＃１５が合成できる。
上記一般式（III）で示される化合物は、Ａがインドール又はナフタレンであるときに
共通して、５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステル又はα－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸エステルを出発原料として、合成することができる。５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステル及びα－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸エステルは、対応するカルボン酸をエステル化することによって得ることができるが、５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸は活性プロトンを３つ、α－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸は活性プロトンを２つ有し、反応の選択性が問題となる。このため、これら化合物のアルコール部分を保護し、エステル化を行った後に、保護基を除去し、出発原料を得ることもできる。また、E.Tsuda et. al.,“Alkoxy-auxins are selective inhibitors of auxin transport mediated by PIN, ABCB, and AUX1 transporters” Journal of Biological Chemistry, 286(3), 2354-2364; 2011.に記載の方法に従って、α－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステルを合成することもできる。その他にも、５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステルの合成法として、乾燥させたアルコール中で酸性条件下反応を行うことにより、良好な選択性で、溶媒として用いたアルコールとのエステルを合成できる。前記エステル化の反応条件としては、市販の塩酸／メタノールや、脱水したアルコールに乾燥した塩酸を吹き込む方法を挙げることができるが、予備乾燥したアルコールに酸クロライドを滴下し、系中で酸を発生させる方法が好ましい。この後に、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又はその医薬的に許容される塩とすることができる。こうして準備した出発原料とヨウ化アルキル又は臭化アルキルとを反応させることで、一般式（III）で示される化合物の基本骨格を構築できる。これら５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステル、又は７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル酢酸エステルとヨウ化アルキル又は臭化アルキルとの反応に用いられる塩基としては、水素化ナトリウムや、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムといったアルカリ金属の炭酸塩が挙げられる。反応溶媒としては、ＤＭＦやＴＨＦ等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。こうして、一般式（III）で示される化合物の骨格を得た後に、必要であれば保護基を除去することで、一般式（III）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、出発物質として１－ヨードブタンとα－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステルを用いて実施例で後述する化合物＃３４を合成できる。
共通して、５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステル又はα－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸エステルを出発原料として、合成することができる。５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステル及びα－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸エステルは、対応するカルボン酸をエステル化することによって得ることができるが、５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸は活性プロトンを３つ、α－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸は活性プロトンを２つ有し、反応の選択性が問題となる。このため、これら化合物のアルコール部分を保護し、エステル化を行った後に、保護基を除去し、出発原料を得ることもできる。また、E.Tsuda et. al.,“Alkoxy-auxins are selective inhibitors of auxin transport mediated by PIN, ABCB, and AUX1 transporters” Journal of Biological Chemistry, 286(3), 2354-2364; 2011.に記載の方法に従って、α－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステルを合成することもできる。その他にも、５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステルの合成法として、乾燥させたアルコール中で酸性条件下反応を行うことにより、良好な選択性で、溶媒として用いたアルコールとのエステルを合成できる。前記エステル化の反応条件としては、市販の塩酸／メタノールや、脱水したアルコールに乾燥した塩酸を吹き込む方法を挙げることができるが、予備乾燥したアルコールに酸クロライドを滴下し、系中で酸を発生させる方法が好ましい。この後に、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又はその医薬的に許容される塩とすることができる。こうして準備した出発原料とヨウ化アルキル又は臭化アルキルとを反応させることで、一般式（III）で示される化合物の基本骨格を構築できる。これら５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸エステル、又は７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル酢酸エステルとヨウ化アルキル又は臭化アルキルとの反応に用いられる塩基としては、水素化ナトリウムや、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムといったアルカリ金属の炭酸塩が挙げられる。反応溶媒としては、ＤＭＦやＴＨＦ等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。こうして、一般式（III）で示される化合物の骨格を得た後に、必要であれば保護基を除去することで、一般式（III）で示される化合物が合成できる。この後、目的に応じて、カルボン酸部分を適宜、エステル化、アミド化又は医薬的に許容される塩とすることもできる。具体的には、次式に示すように、出発物質として１－ヨードブタンとα－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステルを用いて実施例で後述する化合物＃３４を合成できる。
同様に、出発物質として３，５－ジメトキシ臭化ベンジルと７－ヒドロキシ－３－インドール酢酸を用いて実施例で後述する化合物＃３５を合成できる。
本件化合物群としては、本願明細書の実施例において、その効果が具体的に示されている化合物＃５が好ましい。
本件予防／改善剤の添加剤としては、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分を例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
本件予防／改善剤の投与形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液などの剤型で投与する経口投与や、溶液、乳剤、懸濁液などの剤型を注射、又はスプレー剤の型で鼻孔内投与する非経口投与を挙げることができる。
本件予防／改善剤の投与量は、年齢、体重、性別、症状、薬剤への感受性等に応じて適宜決定され、例えば、１μｇ～２００ｍｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量の範囲である。後述する本実施例において、モデルマウスを用いた実験により、０．３～１０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物＃５の投与量が具体的に示されている。かかる投与量は、マウスにおけるヒト等価用量（ＨＥＤ）１２．３（資料「Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers」参照）を基に、ヒトへの投与量に換算した場合、２４．４～８１３μｇ／ｋｇ／日である。このため、本件予防／治療剤の投与量としては、１μｇ～１００ｍｇ／ｋｇ／日が好ましく、５μｇ～５０ｍｇ／ｋｇ／日がより好ましく、１０μｇ～１０ｍｇ／ｋｇ／日がさらに好ましく、１５μｇ～５ｍｇ／ｋｇ／日がさらにより好ましく、２０μｇ～１．０ｍｇ／ｋｇ／日が最も好ましい。なお、本件予防／治療剤は、一日あたり単回又は複数回（例えば、２～４回）に分けて投与されるが、症状の改善の状況に応じて投与量を調節してよい。
本件予防／改善剤としては、本件化合物群以外の、難聴の予防又は改善成分を含むものであってもよいが、本件化合物群単独でも優れた難聴の予防又は改善効果を発揮するため、本件化合物群以外の、難聴の予防又は改善成分（例えば、タンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡ、植物由来の抽出物）を含まないものが好ましい。
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
１．本件化合物群の合成
以下に示す化合物の合成方法に用いる合成原料、反応試薬等は一般的な市販品である。また、反応溶媒、反応温度に関して特に記載のない場合は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。また、反応は、アルゴン若しくは乾燥させた窒素雰囲気下で行われる。
以下に示す化合物の合成方法に用いる合成原料、反応試薬等は一般的な市販品である。また、反応溶媒、反応温度に関して特に記載のない場合は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。また、反応は、アルゴン若しくは乾燥させた窒素雰囲気下で行われる。
［化合物＃１の合成］
４－フェニル－２－（４－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン（化合物＃１）は、インドールの代わりに４－クロロインドールを用いて、後述する化合物＃２０の合成方法により合成した。
４－フェニル－２－（４－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン（化合物＃１）は、インドールの代わりに４－クロロインドールを用いて、後述する化合物＃２０の合成方法により合成した。
［化合物＃２及び化合物＃３の合成］
４－（４－クロロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸（化合物＃２）及び３－（１Ｈ－インドール－３－イル）－１－オキソ－１－フェニル－ブタン（化合物＃３）は、Sayed,G. H. et al, “Synthesis and reactions of some β-aroyl-α-（indol-3-yl）propionic acids” Journal of the Chemical Society of Pakistan,7（4), 263-72； 1985の記載の方法に従って合成した。
４－（４－クロロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸（化合物＃２）及び３－（１Ｈ－インドール－３－イル）－１－オキソ－１－フェニル－ブタン（化合物＃３）は、Sayed,G. H. et al, “Synthesis and reactions of some β-aroyl-α-（indol-3-yl）propionic acids” Journal of the Chemical Society of Pakistan,7（4), 263-72； 1985の記載の方法に従って合成した。
（化合物＃２）
［化合物＃４の合成］
トランス－４－（４－フルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
トランス－４－（４－フルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
４－（４－フルオロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸（化合物＃４）
ｆｏｒ ３１２．１０３６ （Ｃ１８Ｈ１５ＦＮＯ３）.
［化合物＃５の合成］
トランス－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
トランス－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸（化合物＃５）
［化合物＃６の合成］
トランス－４－（２，４－ジメチルフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
トランス－４－（２，４－ジメチルフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
４－（２，４－ジメチルフェニル）－２－（１－プロピル－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸（化合物＃６）
４－フェニル－２－（１Ｈ－５－エトキシインドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸（化合物＃７）は、インドールの代わりに５－エトキシインドールを用いて、化合物＃２０と同様の方法で合成した。
化合物＃８、１３～１５、１７～１９、及び２１～２５はＮ－メトキシカルボニルインドール酢酸メチルを鍵中間体として合成した。
１－メトキシカルボニルインドール－３－酢酸 メチルエステル
インドール－３－酢酸（２．００ｇ，１１．４２ｍｍｏｌ）をメタノール（４０ｍｌ）に溶かし、そこに塩化アセチル（０．５ｍｌ，６．６８８ｍｍｏｌ）を一滴ずつ滴下し、室温で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、飽和重曹水溶液を加え、反応を停止させ、酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：３）で精製し、インドール－３－酢酸 メチルエステルを得た。（２．１４ｇ，収率９９％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１３（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１０－７．１９（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．３，１３６．０，１２７．１，１２３．２，１２２．０，１１９．５，１１８．６，１１１．２，１０８．０，５１．９，３１．０；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３４１０，１７３０，１４５８，１４３５，１３３７，１１６４，１０９５，１０１１ｃｍ－１；ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ １８９ ［Ｍ］＋．
１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
インドール－３－酢酸メチル（２．００ｇ，１０．５７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）に溶かし、そこにヨウ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＩ，３０．０ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ）、３０％水酸化ナトリウム水溶液（２４ｍｌ）を加え、０℃に冷却した。反応液に塩化ギ酸メチル（１．９６ｇ，２０．７３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、反応を停止させた。水（５０ｍｌ）を加え、クロロホルム（５０ｍｌ）で３回抽出し、有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、Ｎ－メトキシカルボニルインドール－３－酢酸メチルを得た。（２．２６ｇ，収率８７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７１．１，１５１．１，１３５．２，１２９．９，１２４．６，１２３．８，１２２．８，１１８．９，１１５．０，１１３．８，５３．５，５１．９，３０．６；ＩＲ（ｎｅａｔ）：１７４６，１４５５，１３８２，１２５８，１１６４，１０８９，１０１８ｃｍ－１；ＥＩ－ＭＳ： ｍ／ｚ ２４７ ［Ｍ］＋．
インドール－３－酢酸メチル（２．００ｇ，１０．５７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）に溶かし、そこにヨウ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＩ，３０．０ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ）、３０％水酸化ナトリウム水溶液（２４ｍｌ）を加え、０℃に冷却した。反応液に塩化ギ酸メチル（１．９６ｇ，２０．７３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、反応を停止させた。水（５０ｍｌ）を加え、クロロホルム（５０ｍｌ）で３回抽出し、有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、Ｎ－メトキシカルボニルインドール－３－酢酸メチルを得た。（２．２６ｇ，収率８７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７１．１，１５１．１，１３５．２，１２９．９，１２４．６，１２３．８，１２２．８，１１８．９，１１５．０，１１３．８，５３．５，５１．９，３０．６；ＩＲ（ｎｅａｔ）：１７４６，１４５５，１３８２，１２５８，１１６４，１０８９，１０１８ｃｍ－１；ＥＩ－ＭＳ： ｍ／ｚ ２４７ ［Ｍ］＋．
化合物＃８及び９は、国際公開公報２０１０／０４５４５１号パンフレットに記載の方法に従って合成した。
［化合物＃８の合成］
２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ピペリジニル）エタノール
２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ピペリジニル）エタノール
２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ピペリジニル）－１－ヨウ化エタン
α－［２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ピペリジニル）－１－エチル］－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－[２－（１－アセチル－４－ピペリジニル）－エチル]－1－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸メチルエステル
α－２－（１－アセチル－４－ピペリジニル）－エチル－３－インドール酢酸（化合物＃８）
α－２－（１－アセチル－４－ピペリジニル）－メチル－３－インドール酢酸（化合物＃９）は、２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ピペリジニル）エタノールの代わりにＮ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ピペリジニルメタノールを用いて、化合物＃８と同様の手法で合成した。
［化合物＃１０の合成］
α－４－アミノブチル－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－４－アミノブチル－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－［Ｎ－（１－アセチルピロリジン－２－カルボニル）－４－アミノブチル］－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－［Ｎ－（１－アセチルピロリジン－２－カルボニル）－４－アミノブチル］－３－インドール酢酸（化合物＃１０）
［化合物＃１１の合成］
α－［２－（２－アミノエトキシ）－エチル］－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－［２－（２－アミノエトキシ）－エチル］－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－｛Ｎ－（１－アセチルピロリジン－２－カルボニル）－［２－（２－アミノエトキシ）－エチル］｝－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－［２－（２－アミノエトキシ）－エチル］－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル（８０．０ｍｇ，０．２３９ｍｍol）をテトラヒドロフラン（３ｍｌ）に溶かし、そこにＮ－アセチル－Ｌ－プロリン（５６．４ｍｇ，０．３５９ｍｍol）、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド（４１．２ｍｇ，０．３５８ｍｍol）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（７４．０ｍｇ，０．３５９ｍｍol）、４－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（３５．０ｍｇ，０．２８６ｍｍol）を加え、室温で７時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を停止させ、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：アセトン＝７：３）で精製し、α－［Ｎ－（１－アセチルピロリジン－２－カルボニル）－４－アミノブチル］－Ｎ－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。（７６．１ｍｇ，収率６７％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５７－７．６６（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２５－７．２８（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３２-３．５２（ｍ，７Ｈ），２．３６－２．４８（ｍ，２Ｈ），１．８４-２．１８（ｍ，７Ｈ），１．４９-１．５６（ｍ，２Ｈ），１．３３-１．３８（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７４．２，１７１．５，１７０．８，１５１．１，１３５．５，１２９．３，１２４．８，１２３．１，１２３．０，１１９．４，１１８．９，１１５．２，6９．４，６８．４，５９．２，５３．８，５２．２，４８．２，３９．５，３９．２，３２．２，２７．８，２５．０，２２．５；ＦＡＢ－ＭＳ：ｍ／ｚ ４７４［Ｍ＋Ｈ］＋．
α－［Ｎ－（１－アセチルピロリジン－２－カルボニル）－４－アミノブチル］－３－インドール酢酸（化合物＃１１）
［化合物＃１２の合成］
α－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヘキシル）－α－（１－ナフチル）－酢酸 メチルエステル
α－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヘキシル）－α－（１－ナフチル）－酢酸 メチルエステル
α－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヘキシル）－α－（１－ナフチル）－酢酸（化合物＃１２）
［化合物＃１３の合成］
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヘキサノール
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヘキサノール
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヨードへキサン
α－メチル－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルはKatayamaM, Kato Y, Marumo S. “Synthesis，absolute configuration and biological activity of both enantiomers of 2-（5,6-dichloro-3-indolyl）propionic acid： new dichloroindole auxins” Bioscience，Biotechnology，and Biochemistry，65（2），270-276
； 2001.に記載の方法に従って合成した。
； 2001.に記載の方法に従って合成した。
α－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヘキシル）－α－メチル－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－アミノ－１－ヘキシル）－α－メチル－３－インドール酢酸（化合物＃１３）
［化合物＃１４の合成］
２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－２－アミノエトキシ）－エタノール
２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－２－アミノエトキシ）－エタノール
２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－２－アミノエトキシ）－１－ヨードエタン
α－［２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－２－アミノエトキシ）－１－エチル］－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－［２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－２－アミノエトキシ）－１－エチル］－３－インドール酢酸（化合物＃１４）
［化合物＃１５の合成］
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－アミノ－１－ブタノール
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－アミノ－１－ブタノール
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－アミノ－１－ヨードブタン
α－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－アミノ－１－ブチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－アミノ－１－ブチル）－３－インドール酢酸（化合物＃１５）
［化合物＃１７の合成］
２－エチル－１－ヨードブタン
２－エチル－１－ヨードブタン
α－（２－エチル－１－ブチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－（２－エチル－１－ブチル）－３－インドール酢酸（化合物＃１７）
［化合物＃１８の合成］
３－メチル－１－ヨードペンタン
３－メチル－１－ヨードペンタン
ｇ，７．３４４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５．０ｍｌ）に溶かし、５分撹拌した後、ヨウ素（１．８６ｇ，７．３２８ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。そこに３－メチル－１－ペンタノール（０．５ｇ，５．６７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍｌ）溶液を滴下し、室温で１．５時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、反応液をセライト濾過し、濾液に５％チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えてヨウ素を除去した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９８：２）で精製し、３－メチル－１－ヨードペンタンを得た。（０．１２ｍｇ，収率１１％）
α－（３－メチル－１－ペンチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－（３－メチル－１－ペンチル）－３－インドール酢酸（化合物＃１８）
［化合物＃１９の合成］
２－メチル－１－ヨードペンタン
２－メチル－１－ヨードペンタン
α－（２－メチル－１－ペンチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－（２－メチル－１－ペンチル）－３－インドール酢酸（化合物＃１９）
［化合物＃２０の合成］
４－フェニル－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸
（化合物＃２０）
４－フェニル－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸
（化合物＃２０）
ＩＲ：（ｎｅａｔ）：３４００，３０５５，１７１１，１６７７，１４５３ｃｍ－１；ＨＲＦＡＢ－ＭＳ ｆｏｕｎｄ ｍ／ｚ ２９４．１１４３［Ｍ＋Ｈ］＋， ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２９４．１１３０（Ｃ１８Ｈ１６ＮＯ３）．
［化合物＃２１の合成］
４，４，５，５，５－ペンタフルオロ－１－ヨードペンタン
４，４，５，５，５－ペンタフルオロ－１－ヨードペンタン
α－（４，４，５，５，５－ペンタフルオロ－１－ペンチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－（４，４，５，５，５－ペンタフルオロ－１－ペンチル）－３－インドール酢酸（化合物＃２１）
［化合物＃２２の合成］
３－（２－ヒドロキシ－１－エチル）－１，１’－ビフェニル
３－（２－ヒドロキシ－１－エチル）－１，１’－ビフェニル
３－（２－ヨード－１－エチル）－１，１’－ビフェニル
α－［２－（１，１’－ビフェニル－３－イル）－１－エチル］－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－［２－（１，１’－ビフェニル－３－イル）－１－エチル］－３－インドール酢酸（化合物＃２２）
３５５［Ｍ］＋．
［化合物＃２３の合成］
α－（２－フェニル－１－エチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－（２－フェニル－１－エチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
ウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン）で精製し、α－（２－フェニル－１－エチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。（２２８ｍｇ，収率５４％）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１３－７．２６（ｍ，６Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．８，１５１．２，１４０．９，１３５．４，１２９．３，１２８．４，１２８．３，１２６．０，１２４．８，１２３．１，１２２．９，１１９．３，１１９．０，１１５．２，５３．７，５２．０，４１．８，３３．５；ＥＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ ３５１［Ｍ］＋．
α－（２－フェニル－１－エチル）－３－インドール酢酸（化合物＃２３）
［化合物＃２４の合成］
２－シクロペンチル－１－ヨードエタン
２－シクロペンチル－１－ヨードエタン
ルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、２－シクロペンチル－１－ヨードエタンを得た。（０．４６ｇ，収率８４％）
１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
インドール３－酢酸メチルエステル（２．００ｇ,１０．５７ｍｍｏｌ）をジクロロメ
タン３０ｍｌに溶かし、そこにテトラブチルアンモニウムヨージド（３０．０ｍｇ,０．
０８１ｍｍｏｌ）、３０％水酸化ナトリウム水溶液２４ｍｌを加え、０℃に冷却した。反応液にクロロギ酸メチル（１．９６ｇ,２０．７３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌
した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、反応を停止させた。水５０ｍｌを加え、クロロホルム５０ｍｌで３回抽出し、有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。(２．２６ｇ,収率８７％)：１Ｈ ＮＭＲ （４００ Ｍ
Ｈｚ， ＣＤＣｌ３）： ｄ ８．１８ （ｄ， Ｊ＝７．０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５９（ｓ， １Ｈ）， ７．５３（ｄ， Ｊ＝７．７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３５（ｔ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７（ｔ， Ｊ＝７．４Ｈｚ， １Ｈ）， ４．００（ｓ， ３Ｈ）， ３．７２（ｓ， ３Ｈ）， ３．７１（ｓ， ２Ｈ）； １３Ｃ－ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： ｄ １７１．１， １５１．１， １３５．２， １２９．９， １２４．６， １２３．８， １２２．８， １１８．９， １１５．０， １１３．８， ５３．５， ５１．９， ３０．６； ＥＩ－ＭＳ： ｍ／ｚ ２４７ ［Ｍ］＋
タン３０ｍｌに溶かし、そこにテトラブチルアンモニウムヨージド（３０．０ｍｇ,０．
０８１ｍｍｏｌ）、３０％水酸化ナトリウム水溶液２４ｍｌを加え、０℃に冷却した。反応液にクロロギ酸メチル（１．９６ｇ,２０．７３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌
した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え、反応を停止させた。水５０ｍｌを加え、クロロホルム５０ｍｌで３回抽出し、有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：２）で精製し、１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。(２．２６ｇ,収率８７％)：１Ｈ ＮＭＲ （４００ Ｍ
Ｈｚ， ＣＤＣｌ３）： ｄ ８．１８ （ｄ， Ｊ＝７．０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５９（ｓ， １Ｈ）， ７．５３（ｄ， Ｊ＝７．７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３５（ｔ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７（ｔ， Ｊ＝７．４Ｈｚ， １Ｈ）， ４．００（ｓ， ３Ｈ）， ３．７２（ｓ， ３Ｈ）， ３．７１（ｓ， ２Ｈ）； １３Ｃ－ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： ｄ １７１．１， １５１．１， １３５．２， １２９．９， １２４．６， １２３．８， １２２．８， １１８．９， １１５．０， １１３．８， ５３．５， ５１．９， ３０．６； ＥＩ－ＭＳ： ｍ／ｚ ２４７ ［Ｍ］＋
α－（２－シクロペンチル－１－エチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
ペンチル－１－ヨードエタン（２０４ｍｇ，０．９１０ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン１ｍｌ溶液を一滴ずつゆっくり滴下し、－７８℃で１時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、０℃にし、水５ｍｌを加え、反応を停止させ、酢酸エチル５ｍｌで３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン:酢酸エチル=９５：５）で精製し、α－（２－シクロペンチル－１－エチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１５１ｍｇ，収率７２％）: １Ｈ ＮＭＲ
（４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： ｄ ８．１８ （ｄ， Ｊ＝６．８Ｈｚ， １Ｈ），７．６２ （ｄ， Ｊ＝７．７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５６ （ｓ， １Ｈ）， ７．３４ （ｔ， Ｊ＝７．４Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２６ （ｔ， Ｊ＝７．３Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０２（ｓ， ３Ｈ）， ３．７９ （ｔ， Ｊ＝７．６Ｈｚ， １Ｈ），
３．６８ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０３ （ｍ， ２Ｈ）， １．７３ － １．７７
（ｍ， ３Ｈ）， １．４８ －１．５８ （ｍ， ４Ｈ）， １．３４ （ｑ， Ｊ＝７．２Ｈｚ， ２Ｈ）， １．０４ － １．０７ （ｍ， ２Ｈ）； １３Ｃ－ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：ｄ １７４．２， １５１．３， １３５．５， １２９．５， １２４．７， １２２．９， １１９．５， １１９．３， １１５．２， ５３．７， ５２．０， ４２．８， ３９．９，３４．１， ３２．６， ３２．５， ３１．４， ２５．１； ＥＩ－ＭＳ： ｍ／ｚ ３４３ ［Ｍ］＋
α－（２－シクロペンチル－１－エチル）－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル（化合物＃２４）
［化合物＃２５の合成］
シクロペンチルヨードメタン
シクロペンチルヨードメタン
α－シクロペンチルメチル－１－メトキシカルボニル－３－インドール酢酸 メチルエステル
α－シクロペンチルメチル－３－インドール酢酸（化合物＃２５）
化合物＃２６～３１は、Muro Fumihito et. al. “Discovery of trans-4-[1-[[2,5-Dichloro-4-(1-methyl-3-indolylcarboxamido)phenyl]acetyl]-(4S)-methoxy-(2S)-pyrrolidinylmeｔhoxy]cyclohexanecarboxylic Acid: An Orally Active, Selective Very Late Antigen-4 Antagonist” Journal of Medicinal Chemistry, 52(24), 7974-7992; 2009.
に記載の方法に従って合成した。
に記載の方法に従って合成した。
［化合物＃２６の合成］
Ｎ－メチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
Ｎ－メチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
メチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化メチル（２２３ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌し
た。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製し、Ｎ－メチル－３－インドール酢酸
メチルエステルを得た。（１４０ｍｇ，収率６５％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ=８．２，７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄｄ，Ｊ=８．２，７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ
１７２．６，１３６．９，１２７．７，１２１．７（２Ｃ），１１９．２６，１１８．９，１０９．３，１０６．８，５１．９，３２．７，３１．０．
Ｎ－メチル－３－インドール酢酸（化合物＃２６）
を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ－メチル－３－インドール酢酸（化合物＃２６）を得た。（１０８ｍｇ，収率９６％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９（ｄ，Ｊ=８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３５
（ｄ，Ｊ=８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ=７．０，６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ=８．１，６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｓ，
３Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ）．１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．６，１３６．８，１２７．９，１２７．５，１２１．８，１１９．２，１１８．９，１０９．５，１０６．１，５３．７，３１．７．
［化合物＃２７の合成］
Ｎ－エチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
Ｎ－エチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
チルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化エチル（２４６ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した
。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製し、Ｎ－エチル－３－インドール酢酸メチルエステルを得た。（１３３ｍｇ，収率５８％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ=８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ=８．３，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=８．３，７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），４．１１（q，Ｊ=７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｔ，Ｊ=７．３，３Ｈ）；１
３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１６０．８，１３５．９，１２７．８，１２５．９，１２１．６，１１９．０，１０９．３，５１．９，４０．８，３１．１，１５．４．
Ｎ－エチル－３－インドール酢酸（化合物＃２７）
（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄｄｄ，Ｊ=７．５，７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄｄ，Ｊ=７．３，７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（q，Ｊ=７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ=７．３Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．３，１３６．８，１２９．０，１２７．１，１２２．０，１１９．８，１１９．４，１１０．１，１０８．１，４１．１，３１．９，１５．８．
［化合物＃２８の合成］
Ｎ－プロピル－３－インドール酢酸 メチルエステル
Ｎ－プロピル－３－インドール酢酸 メチルエステル
メチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化プロピル（２６８ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌
した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ－プロピル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１３６ｍｇ，収率５６％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ=８．３Ｈｚ，１Ｈ）７．２１（ｄｄ，Ｊ=８．０，７．１Ｈｚ，１Ｈ）７．１１（ｄｄ，Ｊ=７．７，６．９Ｈｚ，１Ｈ）７．０８（ｓ，１Ｈ）４．０４（ｔ，Ｊ=７．１Ｈｚ，２Ｈ）３
．７７（ｓ，２Ｈ）３．６９（ｓ，３Ｈ）１．８６（ｍ，２Ｈ）０．９３（ｔ，Ｊ=７．
３Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１３６．２，１２７．７０，１２６．７，１２１．５，１１９．０，１１９．０，１０９．４，１０６．６，５１．９，４７．９，３１．１，２３．５，１１．５．
Ｎ－プロピル－３－インドール酢酸（化合物＃２８）
）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ－プロピル－３－インドール酢酸（化合物＃２８）を得た。（１０３ｍｇ，収率９８％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．
３２（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ=７．２，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=７．３，９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），４．０４（
ｔ，Ｊ=７．１，２Ｈ），３．７９（ｓ，２Ｈ），１．８５（ｍ，２Ｈ），０．９２（ｔ
，Ｊ=７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７
．５，１３６．２，１２７．６，１２７．０，１２１．６，１１９．１，１１９．０，１０９．５，１０６．０，５３．７，３１．７，２３．５，１１．５．
［化合物＃２９の合成］
Ｎ－ブチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
Ｎ－ブチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
メチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化ブチル（２９０ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌し
た。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ－ブチル－３－インドール酢酸
メチルエステルを得た。（１３７ｍｇ，収率５３％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ=８．５，９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=９．７，７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ=７．１Ｈｚ，２
Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｍ，２Ｈ），１．３４（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ=７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ
，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１３６．２，１２７．７，１２６．７，１２１．５，１１９．０，１１９．０，１０９．４，１０６．７，５１．９，４６．０，３２．３，３１．１，２０．２，１３．７．
Ｎ－ブチル－３－インドール酢酸（化合物＃２９）
を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ－ブチル－３－インドール酢酸（化合物＃２９）を得た。（１０４ｍｇ，収率９８％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１
（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ=７．１，７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ=７．３，７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），４．０６（ｔ，
Ｊ=７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｍ
，２Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ=７．４，３Ｈ）;１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７８．０，１３６．１，１２７．６，１２６．９，１２１．６１１９．１０，１１９．０，１０９．５，１０６．０，５３．６，３１．７，２９．１，２０．２，１３．７．
［化合物＃３０の合成］
Ｎ－ヘキシル－３－インドール酢酸 メチルエステル
Ｎ－ヘキシル－３－インドール酢酸 メチルエステル
メチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化ヘキシル（３３４ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌
した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ－ヘキシル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１４７ｍｇ，収率５１％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０（ｄ，Ｊ=７．８Ｈｚ，１Ｈ）７．３１，（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ=８．６，５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ
ｄ，Ｊ=８．０，７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｓ，２Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ=７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ），１．３０（ｍ，６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ=６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１０
０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．６，１３６．１，１２７．７，１２６．７，１２１．５，１１９．０，１１９．０，１０９．４，１０６．６，５１．９，４６．３，３１．４，３１．１，３０．２，２２．６，２２．５，１４．０．
Ｎ－ヘキシル－３－インドール酢酸（化合物＃３０）
）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ－ヘキシル－３－インドール酢酸（化合物＃３０）を得た。（１０３ｍｇ，収率９６％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９（ｄ，Ｊ=７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．
３１（ｄ，Ｊ=８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ=７．９，７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄｄ，Ｊ=７．４，７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（１Ｈ，ｓ，１Ｈ），
４．０５（ｔ，Ｊ=７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ）
，１．３１（ｍ，６Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ=６．３Ｈｚ，３Ｈ）;１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７８．０，１３６．１，１２７．６，１２７．６，１２１．６，１１９．１，１１９．０，１０９．５，１０６．０，５３．７，３１．７，２９．２，２８．９，２７．０，２３．０，１４．０２．
［化合物＃３１の合成］
Ｎ－ヘプチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
Ｎ－ヘプチル－３－インドール酢酸 メチルエステル
メチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（６０ｍｇ）を加えた。この溶液に、ヨウ化ヘプチル（３５８ｍｇ、１．５８ｍｍoｌ）を加えて、室温で６時間攪拌
した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、Ｎ－ヘプチル－３－インドール酢酸 メチルエステルを得た。（１４８ｍｇ，収率４９％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ３．６９（３Ｈ，ｓ), ７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８）,７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８.２）７．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，６．７），７．０８
（１Ｈ，ｓ）,４．０６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１）,３．７７（２Ｈ，ｓ）３．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．２，６．７），１．８２（２Ｈ，ｍ），１．２９（８Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１）．；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７２．５７，１３６．１６，１２７．７０，１２６．６６，１２１．５４，１１８．９８，１１８．９８，１０９．４３，１０６．６４，５１．８９，４６．３１，３１．６７，３１．１１，３０．２４，２８．８９，２６．９６，２２．５５，１４．０２．
Ｎ－ヘプチル－３－インドール酢酸（化合物＃３１）
）を、テトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）に溶かし、そこにメタノール（０．５ｍｌ）及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍｌ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、Ｎ－ヘプチル－３－インドール酢酸（化合物＃３１）を得た。（１８０ｍｇ，収率９５％）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．５９ （１Ｈ,ｄ,Ｊ＝７．９６）， ７．３１（１Ｈ,ｄ,Ｊ＝８．１７）， ７．２１ （１Ｈ,ｄｄｄ，Ｊ＝８．４９，６．７３），７．１１（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝７．２１，７．２９），７．０８（１Ｈ,Ｓ）， ４．０６（２Ｈ,ｔ,Ｊ＝７．２５）， ３．７９ （２Ｈ,ｓ） １．８１ （２Ｈ,ｍ ） １．２９（８Ｈ,ｍ ） ０．８７（３Ｈ,ｔ,Ｊ＝６．８３)；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．８１, １３６．１０, １２７．５５，１２６．８５，１２１．６２, １１９．１１, １１８．９４， １０９．４９，１０５．９１，５３．６３，４６．３２，３０．９９，２９．６８，２９．１６, ２６．６４,２２．４９, １３．９９．
化合物＃３３及び３４はα－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステルを鍵中間体として合成した。α－（７－ヒドロキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステルはE.Tsuda et. al., “Alkoxy-auxins are selective inhibitors of auxin transport mediated by PIN, ABCB, and AUX1 transporters” Journal of Biological Chemistry, 286(3), 2354-2364; 2011.に記載の方法に従って合成した。
［化合物＃３３の合成］
α－（７－ブトキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステル
α－（７－ブトキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステル
α－（７－ブトキシ－１－ナフタレニル）－酢酸（化合物＃３３）
認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（１０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製しα－（７－ブトキシ－１－ナフタレニル）－酢酸（化合物＃３３）を得た。（６７ｍｇ，収率９８％）：融点１０２～１０４℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．１，６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｑ，Ｊ＝８．９，２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ），１．５１（ｍ，２Ｈ），１．８０（ｍ，２Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７７．６，１５７．６，１３３．２，１３０．２，１２９．１，１２８．６，１２７．９（２Ｃ），１２３．０，１１８．７，１０３．１，６７．７，３９．２，３１．２，１９．３，１３．８；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３０２１，２９３１，１６９９，１４５７，１１３８ｃｍ－１；ＨＲＥＩ－ＭＳ ｆｏｕｎｄ ｍ／ｚ ２５８．１２６８［Ｍ］＋，ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２５８．１２５６（Ｃ１６Ｈ１８Ｏ３）．
［化合物＃３４の合成］
α－（７－ペントキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステル
α－（７－ペントキシ－１－ナフタレニル）－酢酸 エチルエステル
．３３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７１．５，１５７．４，１３３．２，１３０．０，１２９．３，１２９．１，１２８．４，１２７．６，１２３．０，１１８．５，１０３．２，６７．８，６０．８，３９．６，２８．９，２８．２，２２．４，１４．１，１４．０；ＩＲ（ｎｅａｔ）：２９６９，１７３４，１５０９，１４５９，１１６０ｃｍ－１；ＨＲＥＩ－ＭＳ ｆｏｕｎｄ ｍ／ｚ ３００．１７２７［Ｍ］＋，ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ３００．１７２５ （Ｃ１９Ｈ２４Ｏ３）．
α－（７－ペントキシ－１－ナフタレニル）－酢酸（化合物＃３４）
）：３０１４，２９４５，１６８９，１４６３，１１６９ｃｍ－１；ＨＲＥＩ－ＭＳ ｆｏｕｎｄ ｍ／ｚ ２７２．１３７８［Ｍ］＋， ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２７２．１４１２ （Ｃ１７Ｈ２０Ｏ３）．
化合物＃３５～３７は５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸 メチルエステルを鍵中間体として合成した。
５－ヒドロキシ－３－インドール酢酸 メチルエステル
［化合物＃３５の合成］
５－（３，５－ジメトキシベンジルオキシ）－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－（３，５－ジメトキシベンジルオキシ）－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－（３，５－ジメトキシベンジルオキシ）－３－インドール酢酸（化合物＃３５）
［化合物＃３６の合成］
５－メトキシ－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－メトキシ－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－メトキシ－３－インドール酢酸（化合物＃３６）
［化合物＃３６の合成］
５－メトキシ－３－インドール酢酸 メチルエステル（６０．０ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶かし、水酸化リチウム（１９．７ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。ＴＬＣで反応終了を確認した後、６Ｎ塩酸を加え酸性（ｐＨ＝３～４）にし、溶媒を減圧留去した。水（５ｍｌ）を加え、酢酸エチル（５ｍｌ）で３回抽出した。有機層を飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、５－メトキシ－３－インドール酢酸（化合物＃３６）を得た。（１５．３ｍｇ，収率２７．２％）；融点１４７．０～１４９．８℃；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ ７．２８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ １７３．３，１５４．８，１３２．６，１２８．９，１２５．２，１１２．７，１１２．４，１０８．８，１０１．４，５５．８，３１．５；ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３５９，２９９６，２８５１，１７０５，１４５６，１１３７ｃｍ－１；ＥＩ－ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２０５（７５％），１６０；ＨＲＥＩ－ＭＳ ｆｏｕｎｄ ｍ／ｚ ２０５．０７３７［Ｍ］＋，ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２０５．０７３９（Ｃ１１Ｈ１１ＮＯ３）．
［化合物＃３７の合成］
５－エトキシ－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－エトキシ－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－エトキシ－３－インドール酢酸（化合物＃３７）
ｍ／ｚ［Ｍ］＋ ２１９，２０５（４０％），１９０，１７４，１６２（７０％），１６０（５０％）；ＨＲＥＩ－ＭＳ ｆｏｕｎｄ ｍ／ｚ ２１９．０８８６［Ｍ］＋，ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ２１９．０８９５（Ｃ１２Ｈ１３ＮＯ３）．
［化合物＃３８の合成］
５－（１－プロポキシ）－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－（１－プロポキシ）－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－（１－プロポキシ）－３－インドール酢酸（化合物＃３８）
［化合物＃３９の合成］
５－（１－ブトキシ）－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－（１－ブトキシ）－３－インドール酢酸 メチルエステル
５－（１－ブトキシ）－３－インドール酢酸（化合物＃３９）
［式（１）の化合物の合成］
４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（６－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（化合物（４－１））の合成
６－フルオロインドール（４８５ｍｇ，３．５９ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（５０８ｍｇ，２．３９ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で７時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：アセトン＝２：１）で精製した、４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（６－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（４３３ｍｇ，収率５２％）を無色結晶で得た。
融点 210-214℃；
1H-NMR(400MHz, CDCl3) δ 10.31 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.47 (dd, J=8.8, 5.2, 1H),7.34 (d, J=2.0, 2H), 7.12-7.20 (m, 3H), 6.92 (td, J=9.6, 2.4, 1H), 4.54 (dd, J=10.4, 4.0, 1H), 4.01 (ddd, J=18.8, 10.8, 3.2, 1H), 3.38 (td, J=18.8, 3.2, 1H);
13C-NMR (100MHz, CDCl3) δ 195.18, 174.85, 166.28 JC-F(dd, 254, 13 Hz), 163.42 JC-F (dd, 254, 13 Hz), 161.74, 159.4, 137.54 JC-F (d, 13 Hz), 133.47 JC-F(dd, 11,
3 Hz), 123.35 JC-F(d, 4Hz), 123.02 JC-F (dd, 13, 4 Hz), 120.97 JC-F (d, 11 Hz),
113.51, 112.94 JC-F (dd, 10, 2 Hz) , 108.27 JC-F (d, 24 Hz), 105.59 JC-F (t, 27
Hz), 98.27 JC-F (d, 26 Hz), 46.68 JC-F (d, 7Hz) ,38.47;
FAB-MS m/z = 348 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, CDCl3) δ 10.31 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.47 (dd, J=8.8, 5.2, 1H),7.34 (d, J=2.0, 2H), 7.12-7.20 (m, 3H), 6.92 (td, J=9.6, 2.4, 1H), 4.54 (dd, J=10.4, 4.0, 1H), 4.01 (ddd, J=18.8, 10.8, 3.2, 1H), 3.38 (td, J=18.8, 3.2, 1H);
13C-NMR (100MHz, CDCl3) δ 195.18, 174.85, 166.28 JC-F(dd, 254, 13 Hz), 163.42 JC-F (dd, 254, 13 Hz), 161.74, 159.4, 137.54 JC-F (d, 13 Hz), 133.47 JC-F(dd, 11,
3 Hz), 123.35 JC-F(d, 4Hz), 123.02 JC-F (dd, 13, 4 Hz), 120.97 JC-F (d, 11 Hz),
113.51, 112.94 JC-F (dd, 10, 2 Hz) , 108.27 JC-F (d, 24 Hz), 105.59 JC-F (t, 27
Hz), 98.27 JC-F (d, 26 Hz), 46.68 JC-F (d, 7Hz) ,38.47;
FAB-MS m/z = 348 [M+H]+
４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（化合物（３－１））の合成
５－フルオロインドール（９２５ｍｇ，６．８５ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（９６９ｍｇ，４．５７ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で１１時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、クロロホルムと酢酸エチルから再結晶を行い、４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（１１２２ｍｇ，収率７１％）を無色結晶で得た。
融点 207-208℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.34 (s, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.47 (dd, J=10.4, 2.8,
1H), 7.39-7.43 (m, 2H), 7.13-7.21 (m, 2H), 6.93 (td, J=9.2 , 2.8, 1H), 4.52 (dd, J=10.4, 3.6, 1H), 4.03 (ddd, 18.4, 10.8, 3.6, 1H), 3.40 (td, 18.4, 3.6, 1H); 13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ 195.17, 174.86, 166.52 JC-F(dd, 254, 13 Hz), 163.58 JC-F(dd, 254, 13 Hz), 159.52, 157.21, 134.25, 133.46 JC-F (dd, 11, 4 Hz), 127.66 JC-F(d, 11 Hz), 123.01 JC-F (dd, 10, 4 Hz), 113.42 JC-F (d, 5 Hz), 113.28
JC-F(d, 10 Hz), 113.51 JC-F (dd, 21, 4 Hz), 110.56 JC-F(d, 27 Hz), 105.61 JC-F
(t, 27 Hz), 104.65 JC-F (d, 24 Hz), 46.68 JC-F (d, 8Hz), 38.48；
FAB-MS m/z = 348 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.34 (s, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.47 (dd, J=10.4, 2.8,
1H), 7.39-7.43 (m, 2H), 7.13-7.21 (m, 2H), 6.93 (td, J=9.2 , 2.8, 1H), 4.52 (dd, J=10.4, 3.6, 1H), 4.03 (ddd, 18.4, 10.8, 3.6, 1H), 3.40 (td, 18.4, 3.6, 1H); 13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ 195.17, 174.86, 166.52 JC-F(dd, 254, 13 Hz), 163.58 JC-F(dd, 254, 13 Hz), 159.52, 157.21, 134.25, 133.46 JC-F (dd, 11, 4 Hz), 127.66 JC-F(d, 11 Hz), 123.01 JC-F (dd, 10, 4 Hz), 113.42 JC-F (d, 5 Hz), 113.28
JC-F(d, 10 Hz), 113.51 JC-F (dd, 21, 4 Hz), 110.56 JC-F(d, 27 Hz), 105.61 JC-F
(t, 27 Hz), 104.65 JC-F (d, 24 Hz), 46.68 JC-F (d, 8Hz), 38.48；
FAB-MS m/z = 348 [M+H]+
２－（７－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（化合物（５－１））の合成
７－クロロインドール（１０９４ｍｇ，５．１６ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（９３５ｍｇ，４．４１ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で１０時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で２回洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、ベンゼンとアセトンから再結晶を行い、２－（７－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（１０１７ｍｇ，収率５４％）を無色結晶で得た。
融点 225-227℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.55 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.75 (d, J=8.4, 1H), 7.45 (d, J=2.8, 1H), 7.06-7.14 (m, 4H), 7.08 (t. J=7.6, 1H), 4.57 (dd, J=10.4 , 3.6, 1H), 4.03 (ddd, 18.4, 10.8, 3.6, 1H), 3.41 (td, 18.4, 3.6, 1H);
13C-NMR(100MHz, acetone-d6) δ195.06, 74.67, 166.53, JC-F(dd, 252, 12 Hz), 163.63 JC-F(dd, 252, 12 Hz), 134.45, 133.46 JC-F(dd, 11, 5 Hz), 129.25, 124.97, 122.98 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 121.91, 120.84, 119.03, 117.22, 114.73, 112.99 JC-F(dd, 21, 3 Hz), 105.61 JC-F(t, 27 Hz), 46.71 JC-F (d, 8 Hz) , 38.50；
FAB-MS m/z = 364 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.55 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.75 (d, J=8.4, 1H), 7.45 (d, J=2.8, 1H), 7.06-7.14 (m, 4H), 7.08 (t. J=7.6, 1H), 4.57 (dd, J=10.4 , 3.6, 1H), 4.03 (ddd, 18.4, 10.8, 3.6, 1H), 3.41 (td, 18.4, 3.6, 1H);
13C-NMR(100MHz, acetone-d6) δ195.06, 74.67, 166.53, JC-F(dd, 252, 12 Hz), 163.63 JC-F(dd, 252, 12 Hz), 134.45, 133.46 JC-F(dd, 11, 5 Hz), 129.25, 124.97, 122.98 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 121.91, 120.84, 119.03, 117.22, 114.73, 112.99 JC-F(dd, 21, 3 Hz), 105.61 JC-F(t, 27 Hz), 46.71 JC-F (d, 8 Hz) , 38.50；
FAB-MS m/z = 364 [M+H]+
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（化合物（３－２））の合成
５－クロロインドール（１０００ｍｇ，６．６１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（９３５ｍｇ，４．４１ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で７時間、加熱還流した。反応液に、蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で２回洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、ベンゼンとアセトンから再結晶を行い、２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（１０８４ｍｇ，収率６３％）を淡黄色結晶で得た。
融点 236-239℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.45 (s, 1H), 8.02 (q, J=8.3, 1H), 7.80 (d, J=1.6,
1H), 7.44 (m, 2H), 7.11-7.22 (m, 3H), 4.54 (dd, J=10.4, 3.8, 1H), 4.01 (ddd, J=18.7, 10.7, 3.2, 1H), 3.41 (td, J=18.7, 3.2, 1H)；
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.10, 174.76, 166.52 JC-F(dd, 253, 12Hz), 163.62 JC-F(dd, 253, 12 Hz), 136.06, 133.44 JC-F(dd, 12, 4 Hz), 128.47, 125.62, 122.96 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.48, 119.33, 113.77, 113.12, 112.96 JC-F(dd, 22, 3 Hz), 105.61 JC-F(t, 27 Hz), 46.72 JC-F (d, 8 Hz), 38.35；
FAB-MS m/z = 364 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.45 (s, 1H), 8.02 (q, J=8.3, 1H), 7.80 (d, J=1.6,
1H), 7.44 (m, 2H), 7.11-7.22 (m, 3H), 4.54 (dd, J=10.4, 3.8, 1H), 4.01 (ddd, J=18.7, 10.7, 3.2, 1H), 3.41 (td, J=18.7, 3.2, 1H)；
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.10, 174.76, 166.52 JC-F(dd, 253, 12Hz), 163.62 JC-F(dd, 253, 12 Hz), 136.06, 133.44 JC-F(dd, 12, 4 Hz), 128.47, 125.62, 122.96 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.48, 119.33, 113.77, 113.12, 112.96 JC-F(dd, 22, 3 Hz), 105.61 JC-F(t, 27 Hz), 46.72 JC-F (d, 8 Hz), 38.35；
FAB-MS m/z = 364 [M+H]+
２－（４－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（化合物（２－１））の合成
４－クロロインドール（９０３ｍｇ，５．９８ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（８４２ｍｇ，３．９７ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で７時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製した後、ベンゼンとアセトンから再結晶を行い、２－（４－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（６０２ｍｇ，収率５１％）を無色結晶で得た。
融点 203-204℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.24 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.77 (d, J=8.4, 1H), 7.42 (d, J=8.0, 1H), 7.21～7.03 (m, 4H), 4.57 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.03 (ddd 18.8, 10.8, 3.2, 1H), 3.38 (td, 18.8, 3.2, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.28, 174.97, 166.55 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 163.62 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 137.646, 137.49, 133.46 JC-F (dd, 11, 4 Hz), 127.37, 123.70, 123.54, 123.05 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.39, 119.88, 119.79, 112.95 JC-F(dd, 22, 4 Hz), 105.58 JC-F (t, 26 Hz), 46.95 JC-F (d, 8 Hz), 38.47；
FAB-MS m/z = 364 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.24 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.77 (d, J=8.4, 1H), 7.42 (d, J=8.0, 1H), 7.21～7.03 (m, 4H), 4.57 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.03 (ddd 18.8, 10.8, 3.2, 1H), 3.38 (td, 18.8, 3.2, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.28, 174.97, 166.55 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 163.62 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 137.646, 137.49, 133.46 JC-F (dd, 11, 4 Hz), 127.37, 123.70, 123.54, 123.05 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.39, 119.88, 119.79, 112.95 JC-F(dd, 22, 4 Hz), 105.58 JC-F (t, 26 Hz), 46.95 JC-F (d, 8 Hz), 38.47；
FAB-MS m/z = 364 [M+H]+
４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（５－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（化合物（３－３））の合成
５－メチルインドール（１７１ｍｇ，１．３１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（１８５ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で７時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、ベンゼンとアセトンから再結晶を行い、４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（５－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（２００ｍｇ，収率６７％）を無色結晶で得た。
融点200-202℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.10 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.20-7.31 (m, 2H), 7.13-7.20 (m, 1H), 7.96 (d, J=6.8, 1H), 4.53 (dd, J=10.6, 3.6, 1H), 4.01 (ddd 18.8, 10.6, 3.2, 1H), 3.36 (td, 18.8, 3.2, 1H), 2.40 (s, 3H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.33, 175.08, 166.54 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 163.49 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 136.01, 133.45 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 128.59, 127.63, 124.02, 123.72, 123.05 JC-F (dd, 13, 4 Hz), 119.43, 112.94 JC-F(dd, 22, 4 Hz), 112.74, 112.03, 105.59 JC-F(t, 26 Hz), 47.01 JC-F(d, 7 Hz), 38.45, 21.64;
FAB-MS m/z = 344 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.10 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.20-7.31 (m, 2H), 7.13-7.20 (m, 1H), 7.96 (d, J=6.8, 1H), 4.53 (dd, J=10.6, 3.6, 1H), 4.01 (ddd 18.8, 10.6, 3.2, 1H), 3.36 (td, 18.8, 3.2, 1H), 2.40 (s, 3H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.33, 175.08, 166.54 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 163.49 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 136.01, 133.45 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 128.59, 127.63, 124.02, 123.72, 123.05 JC-F (dd, 13, 4 Hz), 119.43, 112.94 JC-F(dd, 22, 4 Hz), 112.74, 112.03, 105.59 JC-F(t, 26 Hz), 47.01 JC-F(d, 7 Hz), 38.45, 21.64;
FAB-MS m/z = 344 [M+H]+
４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（化合物（６－１））の合成
１－メチルインドール（２５１２ｍｇ，１９．１７ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（２７１０ｍｇ，１２．７８ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で１時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で２回洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、ベンゼンとアセトンから再結晶を行い、４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（３８９８ｍｇ，収率８９％）を無色結晶で得た。
融点 192-193℃
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ 8.00 (m, 1H), 7.75 (d, J=7.6, 1H) , 7.37 (d, J=8.4, 1H), 7.12-7.22 (m, 4H), 7.07 (t, J=7.6, 1H), 4.54 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.00 (ddd, 18.8, 10.4, 3.6, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.36 (td, 18.8, 3.6, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.22, 174.94, 166.52 JC-F(dd, 253, 13 Hz), 163.57 JC-F(dd, 253, 13 Hz), 138.08, 133.46 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 128.00, 127.79, 123.03 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.36, 120.07, 119.72, 112.94 JC-F(d, 22, 4 Hz), 112.33, 110.32, 105.60 JC-F(t, 27 Hz), 47.01 JC-F(d, 8 Hz), 38.36, 32.72;
FAB-MS m/z = 344 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ 8.00 (m, 1H), 7.75 (d, J=7.6, 1H) , 7.37 (d, J=8.4, 1H), 7.12-7.22 (m, 4H), 7.07 (t, J=7.6, 1H), 4.54 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.00 (ddd, 18.8, 10.4, 3.6, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.36 (td, 18.8, 3.6, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.22, 174.94, 166.52 JC-F(dd, 253, 13 Hz), 163.57 JC-F(dd, 253, 13 Hz), 138.08, 133.46 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 128.00, 127.79, 123.03 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.36, 120.07, 119.72, 112.94 JC-F(d, 22, 4 Hz), 112.33, 110.32, 105.60 JC-F(t, 27 Hz), 47.01 JC-F(d, 8 Hz), 38.36, 32.72;
FAB-MS m/z = 344 [M+H]+
４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（７－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸の（化合物（５－２））の合成
７－メトキシインドール（１０８３ｍｇ，７．３６ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（１０４１ｍｇ，４．９０ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で１４時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、ベンゼンとアセトンから再結晶を行い、続いて、クロロホルムから再結晶を行って、４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（７－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（１１７９ｍｇ，収率６７％）を無色結晶で得た。
融点 181-183℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.26 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.35 (d, J=8.0, 1H), 7.28 (d, J=2.8, 1H), 7.12-7.20 (m, 2H), 6.98 (t, J=7.8, 1H), 6.67 (d, J=7.8, 1H),
4.54 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.03 (ddd 18.8, 10.6, 3.3, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.36
(td, 18.6, 3.2, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ1195.28, 174.98, 166.54 JC-F(dd, 252, 12 Hz), 163.48 JC-F(dd, 252, 12 Hz), 147.35, 133.44 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 128.81, 127.83, 123.22, 123.05 JC-F (dd, 13, 4 Hz) , 120.43, 113.76, 112.94 JC-F(dd, 22, 4 Hz), 112.7, 105.59 JC-F(t, 27 Hz), 102.52, 55.52, 46.97 JC-F(d, 8 Hz) , 38.59；
FAB-MS m/z = 360 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.26 (s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.35 (d, J=8.0, 1H), 7.28 (d, J=2.8, 1H), 7.12-7.20 (m, 2H), 6.98 (t, J=7.8, 1H), 6.67 (d, J=7.8, 1H),
4.54 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.03 (ddd 18.8, 10.6, 3.3, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.36
(td, 18.6, 3.2, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ1195.28, 174.98, 166.54 JC-F(dd, 252, 12 Hz), 163.48 JC-F(dd, 252, 12 Hz), 147.35, 133.44 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 128.81, 127.83, 123.22, 123.05 JC-F (dd, 13, 4 Hz) , 120.43, 113.76, 112.94 JC-F(dd, 22, 4 Hz), 112.7, 105.59 JC-F(t, 27 Hz), 102.52, 55.52, 46.97 JC-F(d, 8 Hz) , 38.59；
FAB-MS m/z = 360 [M+H]+
４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（化合物（３－４））の合成
５－メトキシインドール（１１６６ｍｇ，７．９３ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で１０時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で２回洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、ベンゼンとアセトンから再結晶を行い、続いて、クロロホルムから再結晶を行って、４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソブタン酸（１４７８ｍｇ，収率７５％）を無色結晶で得た。
融点 205-206℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.09 (s, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.27-7.31 (m, 3H), 7.13-7.20 (m, 2H), 6.79 (dd, J=8.8, 2.4, 1H), 4.52 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.00 (ddd, 18.8, 10.4, 3.4, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.38 (td, 18.6, 3.4, 1H；
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.35, 175.03, 166.53, JC-F(dd, 253, 12 Hz), 163.61 JC-F(dd, 253, 12 Hz), 154.84, 133.45 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 132.72, 127.78, 124.22, 123.04 JC-F (dd, 12, 4 Hz), 112.95 JC-F (dd, 22, 4 Hz), 112.96, 112.68, 105.61 JC-F (t, 26 Hz), 101.58, 55.79, 46.9 JC-F(d, 8 Hz), 38.67；
FAB-MS m/z = 360 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ10.09 (s, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.27-7.31 (m, 3H), 7.13-7.20 (m, 2H), 6.79 (dd, J=8.8, 2.4, 1H), 4.52 (dd, J=10.8, 3.6, 1H), 4.00 (ddd, 18.8, 10.4, 3.4, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.38 (td, 18.6, 3.4, 1H；
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.35, 175.03, 166.53, JC-F(dd, 253, 12 Hz), 163.61 JC-F(dd, 253, 12 Hz), 154.84, 133.45 JC-F(dd, 11, 4 Hz), 132.72, 127.78, 124.22, 123.04 JC-F (dd, 12, 4 Hz), 112.95 JC-F (dd, 22, 4 Hz), 112.96, 112.68, 105.61 JC-F (t, 26 Hz), 101.58, 55.79, 46.9 JC-F(d, 8 Hz), 38.67；
FAB-MS m/z = 360 [M+H]+
２－（６－ベンジルオキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（化合物（４－２））の合成
６－ベンジルオキシインドール（１２５５ｍｇ，５．６２ｍｍｏｌ）を５０ｍＬ丸底フラスコに入れた後、（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸（７９５ｍｇ，３．７４ｍｍｏｌ）を加え、ベンゼン（２０ｍＬ）で溶解し、８０℃で９時間、加熱還流した。反応液に蒸留水（５０ｍＬ）を加えたのち、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄してから、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮した。濃縮して得られた生成物を桐山ロートでろ過し、クロロホルムから再結晶を行って、２－（６－ベンジルオキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソブタン酸（５３１ｍｇ，収率３３％）を淡黄色結晶で得た。
融点 177-178℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ 10.0 4(s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.65 (d, J=8.8, 1H), 7.48 (d, J-7.6, 2H), 7.38 (t, J=7.2, 2H), 7.31 (m, 1H), 7.13-7.20 (m, 3H), 7.03 (d, J=2.0, 1H), 6.83 (dd, J=8.4 , 2.0, 1H), 4.51 (dd, J=10.4 , 3.6, 1H), 4.01 (ddd, 18.1, 10.4, 3.3, 1H), 3.36 (td, 18.1, 3.3, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.29, 175.00, 166.54 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 163.52 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 156.33, 138.85, 138.45, 133.45, JC-F (dd, 11, 4 Hz), 129.17, 128.37, 128.23, 123.01 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.49, 121.97, 120.54, 113.24,
113.06 JC-F (dd, 21, 4 Hz), 110.73, 105.59 JC-F(t, 27 Hz), 96.89, 70.70, 46.94 JC-F(d, 8 Hz), 38.57；
FAB-MS m/z = 436 [M+H]+
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ 10.0 4(s, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.65 (d, J=8.8, 1H), 7.48 (d, J-7.6, 2H), 7.38 (t, J=7.2, 2H), 7.31 (m, 1H), 7.13-7.20 (m, 3H), 7.03 (d, J=2.0, 1H), 6.83 (dd, J=8.4 , 2.0, 1H), 4.51 (dd, J=10.4 , 3.6, 1H), 4.01 (ddd, 18.1, 10.4, 3.3, 1H), 3.36 (td, 18.1, 3.3, 1H);
13C-NMR (100MHz, acetone-d6) δ195.29, 175.00, 166.54 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 163.52 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 156.33, 138.85, 138.45, 133.45, JC-F (dd, 11, 4 Hz), 129.17, 128.37, 128.23, 123.01 JC-F(dd, 13, 4 Hz), 122.49, 121.97, 120.54, 113.24,
113.06 JC-F (dd, 21, 4 Hz), 110.73, 105.59 JC-F(t, 27 Hz), 96.89, 70.70, 46.94 JC-F(d, 8 Hz), 38.57；
FAB-MS m/z = 436 [M+H]+
［参考例１］
（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸
本件化合物＃１～１０の合成で用いた（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸は、以下のとおり合成した。すなわち、１，３－ジフルオロベンゼン（１３００ｍｇ，１１．３９ｍｍｏｌ）を１００ｍＬ丸底フラスコに入れた後、無水マレイン酸（８９４ｍｇ，９．１２ｍｍｏｌ）を加え、ジクロロメタン（４０ｍＬ）で溶解し、スターラーで撹拌した。撹拌しながら、無水塩化アルミニウム（２２７９ｍｇ，１７．０９ｍｍｏｌ）を少しずつ投入して室温で６時間撹拌した。反応液を丸底フラスコの中の反応物を氷水（１００ｍＬ）に入れて反応を停止させた後、水層を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出し、有機層を食塩水（１００ｍＬ）で２回抽出操作をした後、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮して固形物を得た。この固形物を温浴中でベンゼンと少量のアセトンで再結晶させて精製したところ、淡黄色結晶の（Ｅ）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）－４－オキソ－２－ブテン酸を収率４８％で得た。
融点 136.0～139.0℃；
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ 7.98 (m, 1H), 7.72 (dd, J=15.6 , 3.6, 1H), 7.20-7.28 (m, 2H), 6.75 (d, J=15.6, 2H);
13C-NMR(100MHz, acetone-d6) δ187.13, 166.86 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 166.35, 163.33 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 139.95 JC-F(d, 7 Hz), 133.98 JC-F (dd, 66, 59 Hz), 132.91, 123.22 JC-F(d, 9 Hz), 113.33 JC-F(dd, 22 , 3 Hz), 105.76, JC-F (t, 22 Hz)
1H-NMR(400MHz, acetone-d6) δ 7.98 (m, 1H), 7.72 (dd, J=15.6 , 3.6, 1H), 7.20-7.28 (m, 2H), 6.75 (d, J=15.6, 2H);
13C-NMR(100MHz, acetone-d6) δ187.13, 166.86 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 166.35, 163.33 JC-F(dd, 254, 12 Hz), 139.95 JC-F(d, 7 Hz), 133.98 JC-F (dd, 66, 59 Hz), 132.91, 123.22 JC-F(d, 9 Hz), 113.33 JC-F(dd, 22 , 3 Hz), 105.76, JC-F (t, 22 Hz)
以下の実施例２、３、及び５において、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞は、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」を有する患者に皮膚生検を行って皮膚線維芽細胞を得た後、１０％ＦＢＳ（Fetal bovine serum）を含むＤＭＥＭ（低グルコース）培養液（ナカライテスク社製）中で５％ＣＯ２／２０％Ｏ２、３７℃条件下で初代培養を行い、単離した。また、以下の実施例４及び５において、内耳の培養は、１０％ＦＢＳ（Fetal bovine serum）を含むＤＭＥＭ（高グルコース）培養液中で５％ＣＯ２／２０％Ｏ２、３７℃条件下で行った。
２．本件化合物群が、酸化ストレス処理による難聴患者由来細胞の細胞死及び細胞障害を抑制する効果を有することの確認
「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」を有する患者は、難聴をきたすことが知られている（文献「Usami et al., J Med Genet. 2000 Jan;37(1):38-40.」参照）。また、酸化ストレスが騒音性難聴のなりやすさに関連していること（文献「Honkura et al., Sci Rep. 2016 Jan 18;6:19329. doi: 10.1038/srep19329」参照）や、酸化ストレスによる聴覚系細胞の細胞死及び細胞障害が、老人性難聴に関連していること（文献「日耳鼻 １１２：４１４－４２１，２００９」参照）が知られている。そこで、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、酸化ストレス処理した「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、本件化合物群存在下で培養したときに、細胞生存レベル及び細胞障害レベルが回復するか否かを解析した。
「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」を有する患者は、難聴をきたすことが知られている（文献「Usami et al., J Med Genet. 2000 Jan;37(1):38-40.」参照）。また、酸化ストレスが騒音性難聴のなりやすさに関連していること（文献「Honkura et al., Sci Rep. 2016 Jan 18;6:19329. doi: 10.1038/srep19329」参照）や、酸化ストレスによる聴覚系細胞の細胞死及び細胞障害が、老人性難聴に関連していること（文献「日耳鼻 １１２：４１４－４２１，２００９」参照）が知られている。そこで、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、酸化ストレス処理した「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、本件化合物群存在下で培養したときに、細胞生存レベル及び細胞障害レベルが回復するか否かを解析した。
２－１ 方法
〔１〕９６ウェル細胞培養プレートに１ウェルあたり２０００個の「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を撒いた後、２４時間培養した。
〔２〕グルタチオン合成阻害剤ＢＳＯ（L-Buthionine sulphoximine）（Sigma-Aldrich社製）を、１００μＭとなるように培養液中に混和し、２４時間培養した（ＢＳＯ処理群）。なお、コントロールとして「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞をＢＳＯ非存在下で２４時間培養した（対照処理群）。
〔３〕ＢＳＯ処理群について、実施例１で合成した化合物＃５を、各種濃度（０．３、１、３、１０、及び３０μＭ）となるように培養液中に混和し、４８時間培養した（ｎ＝４）。なお、コントロールとして化合物＃５非存在下（ＤＭＳＯを０．０１％となるように添加）で培養した。
〔４〕細胞生存レベルを、Cell Counting Kit-8（同仁化学研究所社製）を用いたＭＴＴアッセイにより測定した。すなわち、各ウェルにCell Count Reagent SFを１００μＬずつ添加し、２時間インキュベートし、マイクロプレートリーダーで３秒間撹拌した後、吸光度４５０ｎｍ（リファレンス７５０ｎｍ)を測定した。また、細胞障害レベルは、Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST（同仁化学研究所社製）を用いて細胞外に放出された乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を測定することにより検出した。すなわち、各ウェルに調製したWorking Solutionを１００μＬずつ添加し、３０分間インキュベーションし、Stop Solutionを５０μＬずつ添加し、マイクロプレートリーダーで３秒間撹拌した後、吸光度４９０ｎｍ（リファレンス７５０ｎｍ)を測定した。
〔１〕９６ウェル細胞培養プレートに１ウェルあたり２０００個の「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を撒いた後、２４時間培養した。
〔２〕グルタチオン合成阻害剤ＢＳＯ（L-Buthionine sulphoximine）（Sigma-Aldrich社製）を、１００μＭとなるように培養液中に混和し、２４時間培養した（ＢＳＯ処理群）。なお、コントロールとして「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞をＢＳＯ非存在下で２４時間培養した（対照処理群）。
〔３〕ＢＳＯ処理群について、実施例１で合成した化合物＃５を、各種濃度（０．３、１、３、１０、及び３０μＭ）となるように培養液中に混和し、４８時間培養した（ｎ＝４）。なお、コントロールとして化合物＃５非存在下（ＤＭＳＯを０．０１％となるように添加）で培養した。
〔４〕細胞生存レベルを、Cell Counting Kit-8（同仁化学研究所社製）を用いたＭＴＴアッセイにより測定した。すなわち、各ウェルにCell Count Reagent SFを１００μＬずつ添加し、２時間インキュベートし、マイクロプレートリーダーで３秒間撹拌した後、吸光度４５０ｎｍ（リファレンス７５０ｎｍ)を測定した。また、細胞障害レベルは、Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST（同仁化学研究所社製）を用いて細胞外に放出された乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を測定することにより検出した。すなわち、各ウェルに調製したWorking Solutionを１００μＬずつ添加し、３０分間インキュベーションし、Stop Solutionを５０μＬずつ添加し、マイクロプレートリーダーで３秒間撹拌した後、吸光度４９０ｎｍ（リファレンス７５０ｎｍ)を測定した。
２－２ 結果
まず、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、ＢＳＯ存在下で培養すると（図１の「ＢＳＯ処理群のＤＭＳＯ」）、ＢＳＯ非存在下で培養した場合（図１の「対照群」）と比べ、細胞生存レベルが低下し（図１Ａ参照）、細胞障害レベルが上昇する（図１Ｂ参照）ことを確認した。次に、かかる条件で化合物＃５を添加すると、細胞生存レベルの低下は、少なくとも１μＭの濃度で抑制され、１０μＭの濃度では有意に抑制された（図１Ａ参照）。また、細胞障害レベルの上昇は、少なくとも０．３μＭの化合物＃５存在下で抑制され、さらに、少なくとも１μＭの化合物＃５存在下では、対照群とほぼ変わらないレベルまで低下し、特に３μＭの化合物＃５存在下では有意差が認められた（図１Ｂ参照）。
これらの結果は、化合物＃５等の本件化合物群は、難聴患者の酸化ストレスによる細胞死や細胞障害を抑制する効果を有することを示し、酸化ストレスに起因する難聴に対する予防又は改善効果が期待される。
まず、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、ＢＳＯ存在下で培養すると（図１の「ＢＳＯ処理群のＤＭＳＯ」）、ＢＳＯ非存在下で培養した場合（図１の「対照群」）と比べ、細胞生存レベルが低下し（図１Ａ参照）、細胞障害レベルが上昇する（図１Ｂ参照）ことを確認した。次に、かかる条件で化合物＃５を添加すると、細胞生存レベルの低下は、少なくとも１μＭの濃度で抑制され、１０μＭの濃度では有意に抑制された（図１Ａ参照）。また、細胞障害レベルの上昇は、少なくとも０．３μＭの化合物＃５存在下で抑制され、さらに、少なくとも１μＭの化合物＃５存在下では、対照群とほぼ変わらないレベルまで低下し、特に３μＭの化合物＃５存在下では有意差が認められた（図１Ｂ参照）。
これらの結果は、化合物＃５等の本件化合物群は、難聴患者の酸化ストレスによる細胞死や細胞障害を抑制する効果を有することを示し、酸化ストレスに起因する難聴に対する予防又は改善効果が期待される。
３．本件化合物群が、薬剤処理による難聴患者由来細胞の細胞死を抑制する効果を有することの確認
「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」を有する患者は、薬剤に対して感受性が高く、容易に難聴（薬剤性難聴）をきたすことが知られている（文献「Prezant et al., Nat Genet. 1993 Jul;4(3):289-94.」参照）。そこで、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、薬剤とともに本件化合物群の存在下で培養したときに、細胞生存レベルが回復するか否かを解析した。
「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」を有する患者は、薬剤に対して感受性が高く、容易に難聴（薬剤性難聴）をきたすことが知られている（文献「Prezant et al., Nat Genet. 1993 Jul;4(3):289-94.」参照）。そこで、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、薬剤とともに本件化合物群の存在下で培養したときに、細胞生存レベルが回復するか否かを解析した。
３－１ 方法
〔１〕９６ウェル細胞培養プレートに１ウェルあたり２０００個の「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を撒いた後、２４時間培養した。
〔２〕シスプラチン（ヤクルト社製）、又はゲンタマイシン（ナカライテスク社製）を、それぞれ１００μＭ、及び２０００μＭとなるように培養液中に混和し、さらに、実施例１で合成した化合物＃５を、各種濃度（１及び１０μＭ）となるように培養液中に混和し、２４時間培養した（シスプラチン処理群、及びゲンタマイシン処理群）。なお、コントロールとして「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞をシスプラチン非存在下（対照群）や、シスプラチン処理群において化合物＃５非存在下（ＤＭＳＯを０．０１％となるように添加）で２４時間培養した。
〔３〕細胞生存レベルを、Cell Counting Kit-8（同仁化学研究所社製）を用いたＭＴＴアッセイにより測定した。すなわち、各ウェルにCell Count Reagent SFを１００μＬずつ添加し、２時間インキュベートし、マイクロプレートリーダーで３秒間撹拌した後、吸光度４５０ｎｍ（リファレンス７５０ｎｍ)を測定した。
〔１〕９６ウェル細胞培養プレートに１ウェルあたり２０００個の「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を撒いた後、２４時間培養した。
〔２〕シスプラチン（ヤクルト社製）、又はゲンタマイシン（ナカライテスク社製）を、それぞれ１００μＭ、及び２０００μＭとなるように培養液中に混和し、さらに、実施例１で合成した化合物＃５を、各種濃度（１及び１０μＭ）となるように培養液中に混和し、２４時間培養した（シスプラチン処理群、及びゲンタマイシン処理群）。なお、コントロールとして「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞をシスプラチン非存在下（対照群）や、シスプラチン処理群において化合物＃５非存在下（ＤＭＳＯを０．０１％となるように添加）で２４時間培養した。
〔３〕細胞生存レベルを、Cell Counting Kit-8（同仁化学研究所社製）を用いたＭＴＴアッセイにより測定した。すなわち、各ウェルにCell Count Reagent SFを１００μＬずつ添加し、２時間インキュベートし、マイクロプレートリーダーで３秒間撹拌した後、吸光度４５０ｎｍ（リファレンス７５０ｎｍ)を測定した。
３－２ 結果
まず、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、シスプラチン又はゲンタマイシン存在下で培養すると（図２Ａの「シスプラチン処理群のＤＭＳＯ」、及び図２Ｂの「ゲンタマイシン処理群のＤＭＳＯ」）、シスプラチン又はゲンタマイシン非存在下で培養した場合（図２Ａ及び２Ｂの「対照群」）と比べ、細胞生存レベルが低下することを確認した（図２Ａ及び２Ｂ参照）。次に、かかる条件で化合物＃５を添加すると、シスプラチン処理による細胞生存レベルの低下は、少なくとも１～１０μＭの濃度で有意に抑制された（図２Ａ参照）。また、ゲンタマイシンによる細胞生存レベルの低下についても、少なくとも１μＭの化合物＃５で抑制され、１０μＭの化合物＃５では優位に抑制された（図２Ｂ参照）。
これらの結果は、化合物＃５等の本件化合物群は、難聴患者の薬剤（例えば、シスプラチン、ゲンタマイシン）による細胞死を抑制する効果を有することを示し、薬剤性難聴に対する予防又は改善効果が期待される。
まず、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を、シスプラチン又はゲンタマイシン存在下で培養すると（図２Ａの「シスプラチン処理群のＤＭＳＯ」、及び図２Ｂの「ゲンタマイシン処理群のＤＭＳＯ」）、シスプラチン又はゲンタマイシン非存在下で培養した場合（図２Ａ及び２Ｂの「対照群」）と比べ、細胞生存レベルが低下することを確認した（図２Ａ及び２Ｂ参照）。次に、かかる条件で化合物＃５を添加すると、シスプラチン処理による細胞生存レベルの低下は、少なくとも１～１０μＭの濃度で有意に抑制された（図２Ａ参照）。また、ゲンタマイシンによる細胞生存レベルの低下についても、少なくとも１μＭの化合物＃５で抑制され、１０μＭの化合物＃５では優位に抑制された（図２Ｂ参照）。
これらの結果は、化合物＃５等の本件化合物群は、難聴患者の薬剤（例えば、シスプラチン、ゲンタマイシン）による細胞死を抑制する効果を有することを示し、薬剤性難聴に対する予防又は改善効果が期待される。
４．本件化合物群が、薬剤処理による内耳細胞の細胞死を抑制する効果を有することの確認
本件化合物群が、薬剤処理による内耳細胞の細胞死を抑制する効果を有することを確認するために、マウスから内耳を単離し、薬剤とともに本件化合物群の存在下で培養したときに、内耳細胞の生存レベルが回復するか否かを解析した。
本件化合物群が、薬剤処理による内耳細胞の細胞死を抑制する効果を有することを確認するために、マウスから内耳を単離し、薬剤とともに本件化合物群の存在下で培養したときに、内耳細胞の生存レベルが回復するか否かを解析した。
４－１ 方法
実験は、薬剤（シスプラチン）濃度を変えた場合と、本件化合物群（化合物＃５）濃度を変えた場合の２つの実験を行った。
（薬剤濃度を変えた場合）
〔１〕生後３日目のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（以下、「Ｐ３マウス」という）の内耳を単離し、培養液中で２４時間培養した。
〔２〕シスプラチンを、各種濃度（０、５、７．５、１０、１５、及び２０μＭ）となるように培養液中に混和し、さらに実施例１で合成した化合物＃５を、１０μＭとなるように培養液中に混和し、４８時間培養した（化合物＃５処理群）。なお、コントロールとして、内耳を、上記各種濃度のシスプラチンを含み、かつ化合物＃５を含まない（０．０１％のＤＭＳＯを含む）培養液中で、４８時間培養した（ＤＭＳＯ処理群）。
〔３〕培養後のサンプルを、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）溶液中に、室温で２時間固定処理し、０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＴｒｉｓ緩衝液（ＴＢＳ）中に、室温で１０分間浸した後、遮光条件下の室温で３０分間、ローダミン標識したファロイジン（１:１００、Invitrogen社製）によりＦ－アクチンを染色した。その後、０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＴＢＳ（ＴＢＳＴ）溶液を用いた５分間の洗浄を２回行い、蛍光顕微鏡（ＢＺ－９０００、Keyence社製）で撮影し、ＢＺ－Ｈ１ソフトウェア（Keyence社製）を用いて観察した。得られた画像から、頂回転、中回転、及び基底回転の各部位に相当する各々２００μｍずつの形態が保たれている細胞数と損傷細胞数を計測し、蝸牛の３部（頂部、中部、及び基底部）における外有毛細胞及び内有毛細胞の生存率（％）を算出した。
実験は、薬剤（シスプラチン）濃度を変えた場合と、本件化合物群（化合物＃５）濃度を変えた場合の２つの実験を行った。
（薬剤濃度を変えた場合）
〔１〕生後３日目のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（以下、「Ｐ３マウス」という）の内耳を単離し、培養液中で２４時間培養した。
〔２〕シスプラチンを、各種濃度（０、５、７．５、１０、１５、及び２０μＭ）となるように培養液中に混和し、さらに実施例１で合成した化合物＃５を、１０μＭとなるように培養液中に混和し、４８時間培養した（化合物＃５処理群）。なお、コントロールとして、内耳を、上記各種濃度のシスプラチンを含み、かつ化合物＃５を含まない（０．０１％のＤＭＳＯを含む）培養液中で、４８時間培養した（ＤＭＳＯ処理群）。
〔３〕培養後のサンプルを、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）溶液中に、室温で２時間固定処理し、０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＴｒｉｓ緩衝液（ＴＢＳ）中に、室温で１０分間浸した後、遮光条件下の室温で３０分間、ローダミン標識したファロイジン（１:１００、Invitrogen社製）によりＦ－アクチンを染色した。その後、０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＴＢＳ（ＴＢＳＴ）溶液を用いた５分間の洗浄を２回行い、蛍光顕微鏡（ＢＺ－９０００、Keyence社製）で撮影し、ＢＺ－Ｈ１ソフトウェア（Keyence社製）を用いて観察した。得られた画像から、頂回転、中回転、及び基底回転の各部位に相当する各々２００μｍずつの形態が保たれている細胞数と損傷細胞数を計測し、蝸牛の３部（頂部、中部、及び基底部）における外有毛細胞及び内有毛細胞の生存率（％）を算出した。
（本件化合物群濃度を変えた場合）
〔１〕Ｐ３マウスの内耳を単離し、培養液中で２４時間培養した。
〔２〕シスプラチンを、１０μＭとなるように培養液中に混和し、さらに実施例１で合成した化合物＃５を、各種濃度（０、１、５、１０、及び５０μＭ）となるように培養液中に混和し、４８時間培養した。
〔３〕上記（薬剤濃度の変えた場合）の〔３〕に記載の方法により、組織学的に蝸牛の３部（頂部、中部、及び基底部）における外有毛細胞及び内有毛細胞の生存率（％）を算出した。
〔１〕Ｐ３マウスの内耳を単離し、培養液中で２４時間培養した。
〔２〕シスプラチンを、１０μＭとなるように培養液中に混和し、さらに実施例１で合成した化合物＃５を、各種濃度（０、１、５、１０、及び５０μＭ）となるように培養液中に混和し、４８時間培養した。
〔３〕上記（薬剤濃度の変えた場合）の〔３〕に記載の方法により、組織学的に蝸牛の３部（頂部、中部、及び基底部）における外有毛細胞及び内有毛細胞の生存率（％）を算出した。
４－２ 結果
（薬剤濃度を変えた場合）
ＤＭＳＯ処理群における外有毛細胞の生存率は、シスプラチンの濃度依存的に低下することを確認した（図３Ａ～Ｃ参照）。一方、化合物＃５処理群における外有毛細胞の生存率は、ＤＭＳＯ処理群と比べ上昇することが示された（図３Ａ～Ｃ参照）。この結果は、化合物＃５等の本件化合物群は、シスプラチン等の薬剤処理による内耳細胞の細胞死を抑制する効果を有することを示している。なお、内有毛細胞の生存率については、そもそもＤＭＳＯ処理群において、シスプラチンによる細胞生存率低下がほとんど認められなかったため、化合物＃５処理群との違いはほとんど認められなかった（図３Ｄ～Ｆ参照）。
（薬剤濃度を変えた場合）
ＤＭＳＯ処理群における外有毛細胞の生存率は、シスプラチンの濃度依存的に低下することを確認した（図３Ａ～Ｃ参照）。一方、化合物＃５処理群における外有毛細胞の生存率は、ＤＭＳＯ処理群と比べ上昇することが示された（図３Ａ～Ｃ参照）。この結果は、化合物＃５等の本件化合物群は、シスプラチン等の薬剤処理による内耳細胞の細胞死を抑制する効果を有することを示している。なお、内有毛細胞の生存率については、そもそもＤＭＳＯ処理群において、シスプラチンによる細胞生存率低下がほとんど認められなかったため、化合物＃５処理群との違いはほとんど認められなかった（図３Ｄ～Ｆ参照）。
（本件化合物群濃度を変えた場合）
外有毛細胞の生存率は、化合物＃５の濃度依存的に上昇することが示された（図４Ａ～Ｃ参照）。この結果から、化合物＃５等の本件化合物群は、シスプラチン等の薬剤処理による内耳細胞の細胞死を、濃度依存的に抑制できることを示している。なお、内有毛細胞の生存率については、そもそもシスプラチンによる細胞生存率低下がほとんど認められなかったため、化合物＃５の濃度の違いによる生存率の変化はほとんど認められなかった（図４Ｄ～Ｆ参照）。
外有毛細胞の生存率は、化合物＃５の濃度依存的に上昇することが示された（図４Ａ～Ｃ参照）。この結果から、化合物＃５等の本件化合物群は、シスプラチン等の薬剤処理による内耳細胞の細胞死を、濃度依存的に抑制できることを示している。なお、内有毛細胞の生存率については、そもそもシスプラチンによる細胞生存率低下がほとんど認められなかったため、化合物＃５の濃度の違いによる生存率の変化はほとんど認められなかった（図４Ｄ～Ｆ参照）。
５．本件化合物群が、難聴患者由来細胞及び内耳細胞におけるＡＴＰ産生量を増加させる効果を有することの確認
本件化合物群による難聴患者由来細胞及び内耳細胞の細胞死抑制効果のメカニズムを解析するために、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞及び内耳細胞を化合物＃５存在下で培養し、ＡＴＰ産生量を測定した。
本件化合物群による難聴患者由来細胞及び内耳細胞の細胞死抑制効果のメカニズムを解析するために、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞及び内耳細胞を化合物＃５存在下で培養し、ＡＴＰ産生量を測定した。
５－１ 方法
（難聴患者由来細胞について）
〔１〕９６ウェル細胞培養プレートに１ウェルあたり３０００個の「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を撒いた後、２４時間培養した。
〔２〕実施例１で合成した化合物＃５を、１０μＭとなるように培養液中に混和し、１２時間培養した（化合物処理群）。なお、コントロールとして「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を化合物＃５非存在下の培養液中（対照群）や、０．０１％のＤＭＳＯを含む培養液中（ＤＭＳＯ処理群）で１２時間培養した。
〔３〕培養液中のＡＴＰ濃度は、「細胞の」ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製）により測定した。
（難聴患者由来細胞について）
〔１〕９６ウェル細胞培養プレートに１ウェルあたり３０００個の「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を撒いた後、２４時間培養した。
〔２〕実施例１で合成した化合物＃５を、１０μＭとなるように培養液中に混和し、１２時間培養した（化合物処理群）。なお、コントロールとして「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞を化合物＃５非存在下の培養液中（対照群）や、０．０１％のＤＭＳＯを含む培養液中（ＤＭＳＯ処理群）で１２時間培養した。
〔３〕培養液中のＡＴＰ濃度は、「細胞の」ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製）により測定した。
（内耳細胞について）
〔１〕Ｐ３マウスの内耳を単離し、培養液中で２４時間培養した。
〔２〕実施例１で合成した化合物＃５を、１０μＭとなるように培養液中に混和し、各種時間（３時間、６時間、及び１２時間）培養した。なお、内耳細胞は分裂・増殖しないため、解剖摘出後、徐々に弱っていくことを考慮して、摘出後３６時間の時点でＡＴＰ産生量が測定できるように、化合物＃５を添加する時期を調整した。
〔３〕培養液中のＡＴＰ濃度は、「細胞の」ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製）により測定した。
〔１〕Ｐ３マウスの内耳を単離し、培養液中で２４時間培養した。
〔２〕実施例１で合成した化合物＃５を、１０μＭとなるように培養液中に混和し、各種時間（３時間、６時間、及び１２時間）培養した。なお、内耳細胞は分裂・増殖しないため、解剖摘出後、徐々に弱っていくことを考慮して、摘出後３６時間の時点でＡＴＰ産生量が測定できるように、化合物＃５を添加する時期を調整した。
〔３〕培養液中のＡＴＰ濃度は、「細胞の」ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製）により測定した。
５－２ 結果
「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞及び内耳細胞のいずれにおいても、化合物＃５存在下で培養することにより、ＡＴＰ産生量が増加することが示された（図５Ａ及び５Ｂの「３時間の結果」参照）。この結果は、化合物＃５等の本件化合物群が、難聴患者由来細胞及び内耳細胞におけるＡＴＰ産生量を増加させた結果、酸化ストレスや薬剤処理によるこれら細胞の細胞死が抑制されたことを示唆している。また、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」以外の他の遺伝性疾患（ＰＯＵ４Ｆ３遺伝子変異、ＭＥＬＡＳ［ｍ．３２４３Ａ＞Ｇ変異］、及びアルポート症候群）に起因する難聴患者由来の皮膚細胞においても、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞と同様の効果が確認された。
「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞及び内耳細胞のいずれにおいても、化合物＃５存在下で培養することにより、ＡＴＰ産生量が増加することが示された（図５Ａ及び５Ｂの「３時間の結果」参照）。この結果は、化合物＃５等の本件化合物群が、難聴患者由来細胞及び内耳細胞におけるＡＴＰ産生量を増加させた結果、酸化ストレスや薬剤処理によるこれら細胞の細胞死が抑制されたことを示唆している。また、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」以外の他の遺伝性疾患（ＰＯＵ４Ｆ３遺伝子変異、ＭＥＬＡＳ［ｍ．３２４３Ａ＞Ｇ変異］、及びアルポート症候群）に起因する難聴患者由来の皮膚細胞においても、「ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ変異」細胞と同様の効果が確認された。
６．本件化合物群が、聴力障害の改善効果を有することの確認１
ミトコンドリア内膜に存在する呼吸鎖複合体Ｉの構成タンパク質であるＮｄｕｆｓ４（NADH dehydrogenase iron-sulfur protein 4）をノックアウトしたマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス）から、６０日齢の時点で蝸牛組織を単離し、４％ＰＦＡ固定パラフィン包埋標本を作製した後、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色し、ラセン神経節の細胞数を計測した（ｎ＝４）。その結果、「聴くこと」を司るラセン神経節細胞の密度が、野生型マウスや、Ｎｄｕｆｓ４のヘテロ欠損型マウス（Ｎｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス）と比べ、有意に小さいことが示された（図６参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスは、内耳（特に、蝸牛）の機能低下に起因する難聴、すなわち、内耳性（蝸牛性）難聴を発症している可能性を示唆している。そこで、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスに本件化合物群を投与し、聴力障害レベルが回復するか否かを解析した。
ミトコンドリア内膜に存在する呼吸鎖複合体Ｉの構成タンパク質であるＮｄｕｆｓ４（NADH dehydrogenase iron-sulfur protein 4）をノックアウトしたマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス）から、６０日齢の時点で蝸牛組織を単離し、４％ＰＦＡ固定パラフィン包埋標本を作製した後、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色し、ラセン神経節の細胞数を計測した（ｎ＝４）。その結果、「聴くこと」を司るラセン神経節細胞の密度が、野生型マウスや、Ｎｄｕｆｓ４のヘテロ欠損型マウス（Ｎｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス）と比べ、有意に小さいことが示された（図６参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスは、内耳（特に、蝸牛）の機能低下に起因する難聴、すなわち、内耳性（蝸牛性）難聴を発症している可能性を示唆している。そこで、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスに本件化合物群を投与し、聴力障害レベルが回復するか否かを解析した。
６－１ 方法
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４遺伝子の第二エクソンが、ｌｏｘＰ配列で挟まれたＮｅｏで置換されたことによる変異マウス）は、Jacson Laboratoryより購入した。マウスの遺伝的背景はＣ５７ＢＬ／６とし、６０日齢（体重１０～１３ｇ）を用いた。２８日齢～６０日齢までの間、実施例１で合成した化合物＃５（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスに経口投与し（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群、ｎ＝５）、６０日齢の時点で、化合物＃５投与群の聴力を聴性脳幹反応(ＡＢＲ)により評価した。なお、コントロールとして、化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群、ｎ＝４）、化合物＃５未投与の野生型マウス（野生型マウス未投与群、ｎ＝３）、及び化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス未投与群、ｎ＝４）の聴力を、６０日齢の時点でＡＢＲにより評価した。なお、聴力測定の際、ケタミン（１００ｍｇ／体重ｋｇ）、キシラジン（２０ｍｇ／体重ｋｇ）の混合液を、マウスの腹腔内注射により麻酔した。また、ＡＢＲは、TDT System 3 ワークステーション及びBioSigRPソフトウェア（Tucker-Davis Technologies社製）を用いて解析した。各周波数（４、８、１２、１６、及び３２ｋＨｚ）のトーンバースト音に対する誘発反応の加算平均（１０００回）を記録した。刺激音は、各周波数、１００ｄＢ ＳＰＬ（Sound Pressure Level）から１０ｄＢ ＳＰＬまで５ｄＢ間隔で提示した。ＡＢＲの閾値は、少なくとも１つの波形が再現性を持って確認される最小の音圧閾値とした。
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４遺伝子の第二エクソンが、ｌｏｘＰ配列で挟まれたＮｅｏで置換されたことによる変異マウス）は、Jacson Laboratoryより購入した。マウスの遺伝的背景はＣ５７ＢＬ／６とし、６０日齢（体重１０～１３ｇ）を用いた。２８日齢～６０日齢までの間、実施例１で合成した化合物＃５（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスに経口投与し（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群、ｎ＝５）、６０日齢の時点で、化合物＃５投与群の聴力を聴性脳幹反応(ＡＢＲ)により評価した。なお、コントロールとして、化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群、ｎ＝４）、化合物＃５未投与の野生型マウス（野生型マウス未投与群、ｎ＝３）、及び化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス未投与群、ｎ＝４）の聴力を、６０日齢の時点でＡＢＲにより評価した。なお、聴力測定の際、ケタミン（１００ｍｇ／体重ｋｇ）、キシラジン（２０ｍｇ／体重ｋｇ）の混合液を、マウスの腹腔内注射により麻酔した。また、ＡＢＲは、TDT System 3 ワークステーション及びBioSigRPソフトウェア（Tucker-Davis Technologies社製）を用いて解析した。各周波数（４、８、１２、１６、及び３２ｋＨｚ）のトーンバースト音に対する誘発反応の加算平均（１０００回）を記録した。刺激音は、各周波数、１００ｄＢ ＳＰＬ（Sound Pressure Level）から１０ｄＢ ＳＰＬまで５ｄＢ間隔で提示した。ＡＢＲの閾値は、少なくとも１つの波形が再現性を持って確認される最小の音圧閾値とした。
６－２ 結果
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群におけるＡＢＲ閾値は、野生型マウス未投与群やＮｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス未投与群におけるＡＢＲ閾値と比べ、上昇することが示された（図７参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力が低下していることを示している。一方、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群におけるＡＢＲ閾値は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群におけるＡＢＲ閾値と比べ、低下することが示された（図７参照）。この結果は、化合物＃５をＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウスに投与すると、ＡＢＲ閾値の上昇レベルは低下することが示された（図７参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力低下は、化合物＃５を投与することにより軽減することを示している。遺伝子疾患であるＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力低下は、内耳の機能低下に起因し、加齢とともに発症することから、本件化合物群は、遺伝子疾患、内耳の機能低下、及び加齢に起因する難聴に対して有効である。
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群におけるＡＢＲ閾値は、野生型マウス未投与群やＮｄｕｆｓ４ ヘテロＫＯマウス未投与群におけるＡＢＲ閾値と比べ、上昇することが示された（図７参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力が低下していることを示している。一方、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群におけるＡＢＲ閾値は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群におけるＡＢＲ閾値と比べ、低下することが示された（図７参照）。この結果は、化合物＃５をＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウスに投与すると、ＡＢＲ閾値の上昇レベルは低下することが示された（図７参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力低下は、化合物＃５を投与することにより軽減することを示している。遺伝子疾患であるＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力低下は、内耳の機能低下に起因し、加齢とともに発症することから、本件化合物群は、遺伝子疾患、内耳の機能低下、及び加齢に起因する難聴に対して有効である。
７．本件化合物群が、聴力障害の改善効果を有することの確認２
７－１ 方法
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスと、その同腹の野生型マウス（リターメイト野生型マウス）用い、実施例６の「６－１」の項目に記載の方法にしたがって、化合物＃５未投与のリターメイト野生型マウス（野生型マウス未投与群、ｎ＝５）、化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群、ｎ＝５）、及び化合物＃５投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群、ｎ＝５）の聴力を、２８日齢及び６０日齢の時点でＡＢＲにより評価した。
７－１ 方法
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスと、その同腹の野生型マウス（リターメイト野生型マウス）用い、実施例６の「６－１」の項目に記載の方法にしたがって、化合物＃５未投与のリターメイト野生型マウス（野生型マウス未投与群、ｎ＝５）、化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群、ｎ＝５）、及び化合物＃５投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群、ｎ＝５）の聴力を、２８日齢及び６０日齢の時点でＡＢＲにより評価した。
７－２ 結果
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値は、２８日齢の時点では、野生型マウス未投与群のＡＢＲ閾値と同レベルであることが示された（図８Ａ参照）。この結果は、比較的若い時期のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力は、正常であることを示している。
一方、６０日齢の時点においては、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値は、野生型マウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、上昇したのに対して、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群のＡＢＲ閾値は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、低下することが示された（図８Ｂ及び８Ｃ参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力低下は、化合物＃５を投与することより軽減することを示し、上記実施例６の結果が再現された。
Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値は、２８日齢の時点では、野生型マウス未投与群のＡＢＲ閾値と同レベルであることが示された（図８Ａ参照）。この結果は、比較的若い時期のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力は、正常であることを示している。
一方、６０日齢の時点においては、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値は、野生型マウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、上昇したのに対して、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群のＡＢＲ閾値は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、低下することが示された（図８Ｂ及び８Ｃ参照）。この結果は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウスの聴力低下は、化合物＃５を投与することより軽減することを示し、上記実施例６の結果が再現された。
８．本件化合物群が、聴力障害の改善効果を有することの確認３
８－１ 方法
化合物＃５の投与量（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を、０．３ｍｇ／体重ｋｇ／日へ減らし、実施例６の「６－１」の項目に記載の方法にしたがって、化合物＃５未投与のリターメイト野生型マウス（野生型マウス未投与群、ｎ＝４）、化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群、ｎ＝４）、及び化合物＃５投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群、ｎ＝４）の聴力を、２８日齢及び６４日齢の時点でＡＢＲにより評価した。
８－１ 方法
化合物＃５の投与量（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を、０．３ｍｇ／体重ｋｇ／日へ減らし、実施例６の「６－１」の項目に記載の方法にしたがって、化合物＃５未投与のリターメイト野生型マウス（野生型マウス未投与群、ｎ＝４）、化合物＃５未投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群、ｎ＝４）、及び化合物＃５投与のＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス（Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群、ｎ＝４）の聴力を、２８日齢及び６４日齢の時点でＡＢＲにより評価した。
８－２ 結果
実施例７に示す結果と同様に、２８日齢の時点では、野生型マウス未投与群とＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群との間でＡＢＲ閾値にほとんど違いは認められなかったが、６０日齢の時点においては、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値は、野生型マウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、上昇したのに対して、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群のＡＢＲ閾値は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、低下することが示された（図９Ｂ及び８Ｃ参照）。この結果は、化合物＃５の投与量（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を、０．３ｍｇ／体重ｋｇ／日へ減らした場合でも同様に、化合物＃５による聴力低下の軽減効果が認められることを示している。
実施例７に示す結果と同様に、２８日齢の時点では、野生型マウス未投与群とＮｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群との間でＡＢＲ閾値にほとんど違いは認められなかったが、６０日齢の時点においては、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値は、野生型マウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、上昇したのに対して、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス投与群のＡＢＲ閾値は、Ｎｄｕｆｓ４ ＫＯマウス未投与群のＡＢＲ閾値と比べ、低下することが示された（図９Ｂ及び８Ｃ参照）。この結果は、化合物＃５の投与量（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を、０．３ｍｇ／体重ｋｇ／日へ減らした場合でも同様に、化合物＃５による聴力低下の軽減効果が認められることを示している。
９．本件化合物群が、聴力障害の改善効果を有することの確認４
次に、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、強大音響を曝露し、短期聴力障害を誘発したマウスに本件化合物群を投与し、聴力障害レベルが回復するか否かを解析した。
次に、本件化合物による難聴の予防又は改善効果を確認するために、強大音響を曝露し、短期聴力障害を誘発したマウスに本件化合物群を投与し、聴力障害レベルが回復するか否かを解析した。
９－１ 方法
２カ月齢の野生型オスマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を、３種類の群（野生型マウス未投与群、野生型マウス投与（１）群、及び野生型マウス投与（１０）群）にそれぞれ６匹ずつ分けた。野生型マウス投与（１）群には、化合物＃５（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を１週間経口投与し、野生型マウス投与（１０）群には、化合物＃５（１０ｍｇ／体重ｋｇ／日）を１週間経口投与した。なお、野生型マウス未投与群には、化合物＃５を投与しなかった。１週間の経口投与後、それぞれの群のマウスを、覚醒状態で強大音響曝露用チャンバーに入れ、音圧レベル１００ｄＢ ＳＰＬ、８～１６ｋＨｚのオクターブバンドノイズを、２時間曝露した。ノイズは、ノイズジェネレーター（ＳＦ－０６、Random Noise Generator；RION社製）で生成した後、アンプ（Ｄ－７５Ａ；Crown社製）で増幅し、オーディオフィルター（Multifunction Filter；NF Corporation社製）で周波数帯域を設定し、チャンバー内の天井中央に取り付けたスピーカー（２４４６Ｈ；JBL社製）により出力した。音圧レベルは、実験ごとに音圧測定装置（２２５０Ｌ；Bruel & Kjar社製）で測定し、確認した。強大音響曝露前と、曝露４時間後に、実施例６の「６－１」の項目に記載の方法に従って、ＡＢＲにより聴力を評価した。
２カ月齢の野生型オスマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を、３種類の群（野生型マウス未投与群、野生型マウス投与（１）群、及び野生型マウス投与（１０）群）にそれぞれ６匹ずつ分けた。野生型マウス投与（１）群には、化合物＃５（１ｍｇ／体重ｋｇ／日）を１週間経口投与し、野生型マウス投与（１０）群には、化合物＃５（１０ｍｇ／体重ｋｇ／日）を１週間経口投与した。なお、野生型マウス未投与群には、化合物＃５を投与しなかった。１週間の経口投与後、それぞれの群のマウスを、覚醒状態で強大音響曝露用チャンバーに入れ、音圧レベル１００ｄＢ ＳＰＬ、８～１６ｋＨｚのオクターブバンドノイズを、２時間曝露した。ノイズは、ノイズジェネレーター（ＳＦ－０６、Random Noise Generator；RION社製）で生成した後、アンプ（Ｄ－７５Ａ；Crown社製）で増幅し、オーディオフィルター（Multifunction Filter；NF Corporation社製）で周波数帯域を設定し、チャンバー内の天井中央に取り付けたスピーカー（２４４６Ｈ；JBL社製）により出力した。音圧レベルは、実験ごとに音圧測定装置（２２５０Ｌ；Bruel & Kjar社製）で測定し、確認した。強大音響曝露前と、曝露４時間後に、実施例６の「６－１」の項目に記載の方法に従って、ＡＢＲにより聴力を評価した。
９－２ 結果
強大音響曝露前のＡＢＲ閾値は、上記３種類の群の間で違いは認められなかった（図１０Ａ参照）。一方、強大音響曝露４時間後のＡＢＲ閾値については、野生型マウス未投与群と比べ、野生型マウス投与（１）群及び野生型マウス投与（１０）群の方が低下することが示された（図１０Ｂ参照）。また、強大音響曝露前後のＡＢＲ閾値変化量は、野生型マウス未投与群と比べ、野生型マウス投与（１）群及び野生型マウス投与（１０）群の方が減少することが示された（図１０Ｃ参照）。
これらの結果は、強大音響曝露により誘発した短期聴力障害を、化合物＃５を投与することより軽減することを示している。このため、本件化合物群は、特に騒音に起因する難聴に対して有用である。
強大音響曝露前のＡＢＲ閾値は、上記３種類の群の間で違いは認められなかった（図１０Ａ参照）。一方、強大音響曝露４時間後のＡＢＲ閾値については、野生型マウス未投与群と比べ、野生型マウス投与（１）群及び野生型マウス投与（１０）群の方が低下することが示された（図１０Ｂ参照）。また、強大音響曝露前後のＡＢＲ閾値変化量は、野生型マウス未投与群と比べ、野生型マウス投与（１）群及び野生型マウス投与（１０）群の方が減少することが示された（図１０Ｃ参照）。
これらの結果は、強大音響曝露により誘発した短期聴力障害を、化合物＃５を投与することより軽減することを示している。このため、本件化合物群は、特に騒音に起因する難聴に対して有用である。
本発明は、難聴の予防又は改善（治療）に資するものである。
Claims (2)
- 以下の一般式（Ｉ０）；
で表される化合物、並びに、Ｒ３がＯＨのときそれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、難聴の予防又は改善剤であって、前記難聴が、騒音性難聴又は加齢性難聴である、前記予防又は改善剤。 - 化合物が、以下の式（Ｉ－２）で表される化合物若しくはその医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の予防又は改善剤。
式（Ｉ－２）；
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017252016A JP7329784B2 (ja) | 2017-12-27 | 2017-12-27 | 難聴の予防又は改善剤 |
| US16/229,595 US11147796B2 (en) | 2017-12-27 | 2018-12-21 | Agent for preventing or ameliorating hearing impairment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017252016A JP7329784B2 (ja) | 2017-12-27 | 2017-12-27 | 難聴の予防又は改善剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2019116453A JP2019116453A (ja) | 2019-07-18 |
| JP7329784B2 true JP7329784B2 (ja) | 2023-08-21 |
Family
ID=67299594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017252016A Active JP7329784B2 (ja) | 2017-12-27 | 2017-12-27 | 難聴の予防又は改善剤 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11147796B2 (ja) |
| JP (1) | JP7329784B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7219387B1 (ja) | 2021-08-06 | 2023-02-08 | 国立大学法人東北大学 | ４－（２，４－ジフルオロフェニル）－２－（１ｈ－インドール－３－イル）－４－オキソ－ブタン酸のｒ体 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004099537A (ja) | 2002-09-10 | 2004-04-02 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 難聴疾患の予防又は治療剤 |
| JP5548839B2 (ja) | 2009-08-08 | 2014-07-16 | 国立大学法人名古屋大学 | 難聴又は耳鳴りの予防・治療剤 |
| JP2012148995A (ja) | 2011-01-18 | 2012-08-09 | Japan Health Science Foundation | 難聴疾患の予防又は治療剤 |
| JP6284159B2 (ja) | 2012-11-26 | 2018-02-28 | 国立大学法人東北大学 | エリスロポエチン発現増強剤 |
| JP6372817B2 (ja) | 2014-03-27 | 2018-08-15 | 国立大学法人東北大学 | 臓器線維化抑制剤 |
-
2017
- 2017-12-27 JP JP2017252016A patent/JP7329784B2/ja active Active
-
2018
- 2018-12-21 US US16/229,595 patent/US11147796B2/en active Active
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| Ｈｅａｒ Ｒｅｓ．，２０１０年，Ｖｏｌ．２６４，ｐ．９８－１０７ |
| Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２０１３年，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．９，ｐ．４０１１－４０２３ |
| Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ，２００２年，Ｖｏｌ．１１２，ｐ．１５１５－１５３２ |
| Ｏｘｉｄ．Ｍｅｄ．Ｃｅｌｌ．Ｌｏｎｇｅｖ．，２０１４年，Ｖｏｌ．２０１４，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ５８２８４９，ｐ．１－６ |
| ＴＯＨＯＫＵＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１５年，Ｖｏｌ．２３６，ｐ．２２５－２３２ |
| 日本耳鼻咽喉科学会会報，Ｖｏｌ．１０６（ｓｕｐｐｌ－１），ｐ．１０９－１１０ |
| 耳鼻咽喉科ニューロサイエンス，２０１７年５月，Ｖｏｌ．３１，ｐ．３５－３６ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20190224165A1 (en) | 2019-07-25 |
| JP2019116453A (ja) | 2019-07-18 |
| US11147796B2 (en) | 2021-10-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE602004006433T2 (de) | Pyrrol-substituierte indole als inhibitoren von pai-1 | |
| EA007008B1 (ru) | Триамидзамещённые индолы, бензофураны и бензотиофены в качестве ингибиторов микросомального белка, переносящего триглицериды, (мтр) и/или ингибиторов секреции аполипопротеина в (аро в) | |
| CN1026322C (zh) | 苯并哑唑衍生物的制备方法 | |
| KR101440015B1 (ko) | ｍＰＧＥＳ-1 억제제인 2-아릴인돌 유도체 | |
| CN1139929A (zh) | 取代的3-亚芳基-7-氮杂羟吲哚化合物及其制备方法 | |
| GB2085880A (en) | 1-carboxyalkanoylindoline-2-carboxylic acids process for their manufacture pharmaceutical preparations containing thhese compounds and their therapeutic application | |
| JP2008521805A (ja) | β−アドレナリン作用性受容体およびホスホジエステラーゼに対する阻害活性を有する強心性化合物 | |
| JPH07285933A (ja) | １Ｈ−インドール−３−グリオキシルアミドｓＰＬＡ２阻害剤 | |
| LU88248A1 (fr) | Derives de l'indole | |
| CN104936591A (zh) | 促红细胞生成素表达增强剂 | |
| CA2576727A1 (fr) | Derives de n-(1h-indolyl)-1h-indole-2-carboxamides, leur preparation et leur application en therapeutique | |
| EP2847165A2 (en) | Indole, indoline derivatives, compositions comprising them and uses thereof | |
| JP7329784B2 (ja) | 難聴の予防又は改善剤 | |
| JP6857346B2 (ja) | ライソゾーム病の予防又は改善剤 | |
| EP1347950A1 (fr) | Derives de l'acide 4-hydroxybutano que et de son homologue superieur comme ligands des recepteurs du gamma-hydroxybutyrate (ghb) compositions pharmaceutiques les contenant et utilisations pharmaceutiques | |
| JPS6129341B2 (ja) | ||
| JP6977990B2 (ja) | 軟骨基質分解酵素の産生抑制剤 | |
| JP2585341B2 (ja) | アルキルメラトニン類 | |
| CA2378628C (fr) | Nouveaux derives d'indenoindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent | |
| CA2376876C (fr) | Nouveaux derives d'isoindoloindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent | |
| WO2017072816A1 (ja) | 臓器線維化疾患の治療剤 | |
| JP2007537229A (ja) | ジアルキルオキシインドールの新規なピペラジン誘導体 | |
| EP1383762A1 (fr) | Tetrahydropyridyl-alkyl-heterocycles, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenants | |
| CA1327582C (fr) | Derive de la dihydro-1,4 pyridine denomme (-){[(amino-2 ethoxy)-2 ethoxy]methyl}-2(dichloro-2,3 phenyl)-4 ethoxycarbonyl-3 methoxycarbonyl-5 methyl-6 dihydro-1,4 pyridine, son procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui le contiennent | |
| FR2478639A1 (fr) | Nouveaux derives de l'indolizino (8,7-b) indole et intermediaires, leur procede de preparation et leur utilisation en therapeutique |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20180125 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201021 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210927 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211015 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211206 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220314 |
|
| C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20220531 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220531 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230731 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7329784 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |