JPS6330289B2 - - Google Patents
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Description
本発明はヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤に関
する。 近年、免疫化学の発展にともない、多くの腫瘍
関連抗原が発見され、それに対して選択的に結合
する腫瘍特異抗体が開発されてきた。さらに、こ
れらの腫瘍特異抗体に抗腫瘍性物質を結合させ、
腫瘍部位へのみ薬剤を集中移行させようという試
みがなされている。ここで腫瘍特異抗体は、腫瘍
細胞あるいは腫瘍関連抗原を家兎、馬、羊等に免
疫する手法を用いて作製し、動物血清から免疫グ
ロブリン画分を得て使用している。最近では、腫
瘍細胞あるいは腫瘍関連抗原をマウスに免疫した
後、抗体産生細胞を取り出し、NS―1等のマウ
スミエローマ細胞と細胞融合させることによりモ
ノクローンの抗腫瘍抗体細胞を得て、そこから抗
腫瘍抗体を取り出している。 これらの試みは、抗腫瘍抗体単独あるいはある
種の細胞毒性物質を抗腫瘍抗体に結合させた形で
行なわれているが、実用化には至つていない。そ
の理由は、上記抗腫瘍抗体は、異種動物に免疫し
て作製している為に、人に対しては異種蛋白とな
るからである。つまり異種動物から得られる抗体
をヒトに投与した場合、2回目以後の投与ではア
ナフイラキシー等の血清病をさけることが出来な
い為に、1回しか使用出来ないからであり、これ
は最大の欠点であつた。これを解決するには、同
種抗体を用いることが必要であり、ヒトリンパ球
を用いたモノクローナル抗体は理想であるが、ま
だ研究途上である。 そこで、これらの欠点を改善し、実用性に関す
る事項を解決するには、同種抗体の中から腫瘍細
胞に集まる抗体を検索する必要があつた。そこ
で、本発明者らは、鋭意種々の抗体の 125I―標
識物の生体内分布の検討を行なつた。その結果、
一般自然抗体が腫瘍部位に到達し、しかも長く残
留することを見出した。それら免疫グロブリンに
抗腫瘍性物質を結合させて、これを担癌個体に投
与すれば薬剤は腫瘍部位に長く留り、抗腫瘍効果
を示すことを知つて、本発明を完成した。ヒト免
疫グロブリン結合抗腫瘍剤は、異種動物由来抗腫
瘍抗体に比べて頻回投与が可能になつたという点
又腫瘍部位に長くとどまる点で最大の特色と利点
を有している。したがつて本発明は、実用性の高
いヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤を含有する新
しいタイプの薬剤を提供するものである。本発明
は、クロラムブチル、メルフアラン、ACNU、
シクロホスフアミドなどのアルキル化剤、マイト
マイシンC、塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウノル
ビシン、ブレオマイシン、アクチノマイシンD、
ネオカルチノスタチンなどの抗性物質、シタラビ
ン、8―アザグアニン、5―フルオロウラシル、
メソトレカセート、アミノプテリンナトリウム、
ロイケリンなどの代謝拮抗剤からなる群に属する
細胞毒性の高い抗腫瘍性物質を、極めて穏和な条
件下で、ヒト免疫グロブリンに結合させた新規な
化合物に基づく抗腫瘍剤であり、抗腫瘍効果にす
ぐれながら、細胞毒性は原料の1つである抗腫瘍
性物質にくらべて格段に低い抗腫瘍剤を提供する
とを目的とする。以下に本発明を詳しく説明す
る。 近年、種々の抗腫瘍剤が広く使用されており、
ある程度の効果をあげている。これらの抗腫瘍剤
として、クロラムブチル、メルフアラン、
ACNU、シクロホスフアミド、シタラビン、8
―アザクアニン、5―フルオロウラシル、メソト
レキセート、アミノプテリンナトリウム、マイト
マイシンC、塩酸ドキソルビシン、ブレオマイシ
ン、ダウノルビシン、アクチノマイシンD、ザル
コマイシンのごときものが使用されているが、こ
れらの物質は、それ自体何れも高い細胞毒性を有
していて、投与した後に、白血球減少、脱毛、胃
腸傷害等の副作用を呈することが知られており、
その為に、これらの薬剤の使用に限度があるのが
実情である。 また従来から、腫瘍細胞あるいは腫瘍関連抗原
に対する抗体を製造または単離して、これをその
腫瘍の治療に用いる試みがなされているが、望ま
しい腫瘍効果は得られていない。さらに、最近、
抗腫瘍抗体に抗腫瘍性物質を化学的に結合させて
得られる新規な物質による抗腫瘍効果を期待する
ことが提案されているが、上記物質を得るための
化学反応の条件が過酷すぎるために、十分な成果
は得られていない。また、これらの実験で用いら
れる抗体は、異種動物の抗体を使用していたため
に、血清病等の副作用をさけることは出来なかつ
た。 そこで本発明者らは、異種動物から得られる抗
腫瘍抗体をアフイニテイ―クロマトで精製を行な
うという方法を発明した(特願昭53−161388、昭
54−142152、昭54−142153)。この方法を用いれ
ば高度に抗体を精製することが可能であるが、頻
回投与を行なうという点で問題が残つている。 そこで各種の抗体を用いて腫瘍到達性を鋭意検
討したところ、自然抗体が高濃度で、腫瘍部位に
移行し、その滞留時間も他の臓器よりも長いこと
が判明した。この事実に基づいて、クロラムブチ
ル、メルフアラン、ACNU、シクロホスフアミ
ド、シタラビン、8―アザグアニン、5―フルオ
ロウラシル、メソトレキセート、アミノプテリン
ナトリウム、マイトマイシンC、塩酸ドキソルビ
シンブレオマイシン、ダウノルビシン、アクチノ
マイシンD、ザルコマイシンをヒト免疫グロブリ
ンに結合せしめたところ好ましい抗腫瘍効果が得
られることが判明した。さらにこの組合せの中で
もメルフアランとそのエステル類は合成的に容易
に得られる抗腫瘍剤であり、安定性も高いことか
ら、ヒト免疫グロブリンとメルフアラン及びその
エステルとの結合体が最も好ましい。自然抗体は
ヒト免疫グロブリン(Ig)及びその低分子抗体
(F(ab′)2)を包含する。 ヒト免疫グロブリンと抗腫瘍性物質の結合は次
の方法により製造される。 抗腫瘍性物質を水性溶媒に溶解せしめる、水性
溶媒は酸性水溶液、アルカリ性水溶液中性水溶
液、リン酸緩衝液ホウ酸ナトリウム等である。こ
れに結合剤、例えばカルボジイミド、デキストラ
ン、グルタルアルデヒド、ジエチルマロンイミデ
ート、イソシアナート、ポリグルタミン酸より選
択されたものを加え、更にヒト免疫グロブリン
(F(ab′)2も含む)を加え反応させる。反応温度
は−30℃乃至50℃、好ましくは0℃乃至30℃であ
り、反応時間は1分乃至48時間、好ましくは10分
乃至25時間である。反応物を塩析、沈澱、再結
晶、溶出、カラム分別等の手段により精製し、結
合体を得る。 本発明のヒト免疫グロブリンと抗腫瘍性物質と
の結合体(以下、本物質と略称する)の哺乳動物
に対する急性毒性をマウスに4000mg/Kgの投与量
で静脈注射して調べたが、1週間の観察では死亡
が認められなかつた。 さらに、ヒト免疫グロブリンをペプシン
(Nisonoff Science132 1770(1970))、プラスミ
ン(Sgouris Vox Sang18 71(1967))、サーモ
ライシン(特願昭50−19871)、パパイン、トリプ
シン、キモトリプシンで酵素水解して得られる低
分子抗体についても、抗腫瘍剤を結合せしめて検
討を行なつた。これらの物質例えばF(ab′)2でも
毒性は4000mg/Kg以上であつた。 したがつて、本物質は、毒性が極めて低く、頻
回投与も可能でさらに各種の人癌に対して有効で
ある。例えば、急性白血病、悪性リンパ腫、癌
腫、肉腫悪性繊毛上皮腫、急性骨髄性白血病、メ
ラノーマ、急性リンパ性白血病、骨髄癌等に有効
である。本物質を抗腫瘍剤として用いる場合の製
剤化法、および投与の方法としては、抗腫瘍剤に
関する公知の方法を適用し得る。投与方法として
は、経口、非経口たとえば注射または直腸投与が
あげられる。投与形態としては、粉末、顆粒、錠
剤、カプセル、または注射剤、座薬のいずれであ
つてもよい。特に錠剤あるいは注射による投与が
好ましい。注射薬の製剤には、生理的食塩水、滅
菌水、リンゲル液等の水溶性溶剤、非水溶性溶剤
等張化剤、無痛化剤、安定剤、防腐剤、懸濁化
剤、緩衝剤、乳化剤等を任意に用いうる。 その一例を示すと、本物質1gとマンニトール
5gを蒸留水に溶解して50mlとして常法で除菌し
た後、それを注射用小瓶に分けたり、又はそのま
ま凍結乾燥して注射剤とする。そして本剤は、使
用に際し、生理的食塩水で稀釈して注射液とす
る。本物質は製剤化中一般に0.01〜90%、好まし
くは0.1〜60%含有することが出来る。 本物質の投与量は主として症状に左右されるが
成人1人1日当り0.1g〜10g、好ましくは1〜
6gである。 本発明によると、ヒト免疫グロブリンおよび酵
素処理ヒト免疫グロブリンの向腫瘍性ならびに、
抗腫瘍性物質の抗腫瘍性は失なわれることなく上
記化合物に保たれているので、本物質は、投与さ
れると効率よく目的とする腫瘍部位に到達し、長
期間残存し、抗腫瘍効果を発揮する。 本発明は、必ずしも抗体を抗腫瘍抗体から選ば
なくてもすむために工業的には大変利であると言
える。 以下に、本発明を実施例によつて更に詳細に説
明する。 実施例 1 ヒト免疫グロブリンの分布 実用性のある抗体はいかなる抗体であるかを検
索する為に、抗S―180ウサギ免疫グロブリン、
正常ICRマウス免疫グロブリン、ヒト免疫グロブ
リンの生体内分布を調べる為に各物質に 125I―
標識を行なつた。 すなわち、W.H.HurterらBiochem.J.89114
(1963)の方法に従つて免疫グロブリンのタンパ
ク質部分に 125I―標識を行なつた。方法はいず
れも同様であるので一例をあげる。マイトマイシ
ンC結合剤S―180抗体を5mg/mlの濃度になる
様に0.5Mのリン酸緩衝液(pH7.4)溶かした。そ
の0.5mlをスピツク管に入れ、そこに0.25mCiの
Na 125Iを加える。さらに0.05Mのリン酸緩衝液
200μに溶かした0.7mgのクロラミンTを加えて
0℃で15分反応させた。続いて0.05Mのリン酸緩
衝液に溶かしたピロ亜硫酸ナトリウム(1.75mg)
とKI(10mg)を加えて反応を停止した。反応液を
Sephadex G―25(φ2.2cm×40cm)カラムを用い
て、未反応の放射性ヨード及び試薬を除去した。
このようにして 125I―標識マイトマイシン結合
抗S―180ウサギ免疫グロブリンを得た。以下同
様にして 125I標識正常ICRマウス免疫グロブリ
ン、 125I標識ヒト免疫グロブリンを得た。これ
らを用いて生体内分布の検討を行なつた。 すなわち、S―180担癌ICRマウス(移植後2
週間)を用いて、静脈内に投与し、24時間後と
144時間後に動物をと殺して、解剖し、血液S―
180腫瘍部位、肝臓、腎臓、ひ臓、消化器等の各
臓器を取り出してウエル型のγ―カウンターでカ
ウントを行ない、投与薬剤の各組織重量当りの到
達薬剤量という形で分布を以下のように表示した
(表―1)。
する。 近年、免疫化学の発展にともない、多くの腫瘍
関連抗原が発見され、それに対して選択的に結合
する腫瘍特異抗体が開発されてきた。さらに、こ
れらの腫瘍特異抗体に抗腫瘍性物質を結合させ、
腫瘍部位へのみ薬剤を集中移行させようという試
みがなされている。ここで腫瘍特異抗体は、腫瘍
細胞あるいは腫瘍関連抗原を家兎、馬、羊等に免
疫する手法を用いて作製し、動物血清から免疫グ
ロブリン画分を得て使用している。最近では、腫
瘍細胞あるいは腫瘍関連抗原をマウスに免疫した
後、抗体産生細胞を取り出し、NS―1等のマウ
スミエローマ細胞と細胞融合させることによりモ
ノクローンの抗腫瘍抗体細胞を得て、そこから抗
腫瘍抗体を取り出している。 これらの試みは、抗腫瘍抗体単独あるいはある
種の細胞毒性物質を抗腫瘍抗体に結合させた形で
行なわれているが、実用化には至つていない。そ
の理由は、上記抗腫瘍抗体は、異種動物に免疫し
て作製している為に、人に対しては異種蛋白とな
るからである。つまり異種動物から得られる抗体
をヒトに投与した場合、2回目以後の投与ではア
ナフイラキシー等の血清病をさけることが出来な
い為に、1回しか使用出来ないからであり、これ
は最大の欠点であつた。これを解決するには、同
種抗体を用いることが必要であり、ヒトリンパ球
を用いたモノクローナル抗体は理想であるが、ま
だ研究途上である。 そこで、これらの欠点を改善し、実用性に関す
る事項を解決するには、同種抗体の中から腫瘍細
胞に集まる抗体を検索する必要があつた。そこ
で、本発明者らは、鋭意種々の抗体の 125I―標
識物の生体内分布の検討を行なつた。その結果、
一般自然抗体が腫瘍部位に到達し、しかも長く残
留することを見出した。それら免疫グロブリンに
抗腫瘍性物質を結合させて、これを担癌個体に投
与すれば薬剤は腫瘍部位に長く留り、抗腫瘍効果
を示すことを知つて、本発明を完成した。ヒト免
疫グロブリン結合抗腫瘍剤は、異種動物由来抗腫
瘍抗体に比べて頻回投与が可能になつたという点
又腫瘍部位に長くとどまる点で最大の特色と利点
を有している。したがつて本発明は、実用性の高
いヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤を含有する新
しいタイプの薬剤を提供するものである。本発明
は、クロラムブチル、メルフアラン、ACNU、
シクロホスフアミドなどのアルキル化剤、マイト
マイシンC、塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウノル
ビシン、ブレオマイシン、アクチノマイシンD、
ネオカルチノスタチンなどの抗性物質、シタラビ
ン、8―アザグアニン、5―フルオロウラシル、
メソトレカセート、アミノプテリンナトリウム、
ロイケリンなどの代謝拮抗剤からなる群に属する
細胞毒性の高い抗腫瘍性物質を、極めて穏和な条
件下で、ヒト免疫グロブリンに結合させた新規な
化合物に基づく抗腫瘍剤であり、抗腫瘍効果にす
ぐれながら、細胞毒性は原料の1つである抗腫瘍
性物質にくらべて格段に低い抗腫瘍剤を提供する
とを目的とする。以下に本発明を詳しく説明す
る。 近年、種々の抗腫瘍剤が広く使用されており、
ある程度の効果をあげている。これらの抗腫瘍剤
として、クロラムブチル、メルフアラン、
ACNU、シクロホスフアミド、シタラビン、8
―アザクアニン、5―フルオロウラシル、メソト
レキセート、アミノプテリンナトリウム、マイト
マイシンC、塩酸ドキソルビシン、ブレオマイシ
ン、ダウノルビシン、アクチノマイシンD、ザル
コマイシンのごときものが使用されているが、こ
れらの物質は、それ自体何れも高い細胞毒性を有
していて、投与した後に、白血球減少、脱毛、胃
腸傷害等の副作用を呈することが知られており、
その為に、これらの薬剤の使用に限度があるのが
実情である。 また従来から、腫瘍細胞あるいは腫瘍関連抗原
に対する抗体を製造または単離して、これをその
腫瘍の治療に用いる試みがなされているが、望ま
しい腫瘍効果は得られていない。さらに、最近、
抗腫瘍抗体に抗腫瘍性物質を化学的に結合させて
得られる新規な物質による抗腫瘍効果を期待する
ことが提案されているが、上記物質を得るための
化学反応の条件が過酷すぎるために、十分な成果
は得られていない。また、これらの実験で用いら
れる抗体は、異種動物の抗体を使用していたため
に、血清病等の副作用をさけることは出来なかつ
た。 そこで本発明者らは、異種動物から得られる抗
腫瘍抗体をアフイニテイ―クロマトで精製を行な
うという方法を発明した(特願昭53−161388、昭
54−142152、昭54−142153)。この方法を用いれ
ば高度に抗体を精製することが可能であるが、頻
回投与を行なうという点で問題が残つている。 そこで各種の抗体を用いて腫瘍到達性を鋭意検
討したところ、自然抗体が高濃度で、腫瘍部位に
移行し、その滞留時間も他の臓器よりも長いこと
が判明した。この事実に基づいて、クロラムブチ
ル、メルフアラン、ACNU、シクロホスフアミ
ド、シタラビン、8―アザグアニン、5―フルオ
ロウラシル、メソトレキセート、アミノプテリン
ナトリウム、マイトマイシンC、塩酸ドキソルビ
シンブレオマイシン、ダウノルビシン、アクチノ
マイシンD、ザルコマイシンをヒト免疫グロブリ
ンに結合せしめたところ好ましい抗腫瘍効果が得
られることが判明した。さらにこの組合せの中で
もメルフアランとそのエステル類は合成的に容易
に得られる抗腫瘍剤であり、安定性も高いことか
ら、ヒト免疫グロブリンとメルフアラン及びその
エステルとの結合体が最も好ましい。自然抗体は
ヒト免疫グロブリン(Ig)及びその低分子抗体
(F(ab′)2)を包含する。 ヒト免疫グロブリンと抗腫瘍性物質の結合は次
の方法により製造される。 抗腫瘍性物質を水性溶媒に溶解せしめる、水性
溶媒は酸性水溶液、アルカリ性水溶液中性水溶
液、リン酸緩衝液ホウ酸ナトリウム等である。こ
れに結合剤、例えばカルボジイミド、デキストラ
ン、グルタルアルデヒド、ジエチルマロンイミデ
ート、イソシアナート、ポリグルタミン酸より選
択されたものを加え、更にヒト免疫グロブリン
(F(ab′)2も含む)を加え反応させる。反応温度
は−30℃乃至50℃、好ましくは0℃乃至30℃であ
り、反応時間は1分乃至48時間、好ましくは10分
乃至25時間である。反応物を塩析、沈澱、再結
晶、溶出、カラム分別等の手段により精製し、結
合体を得る。 本発明のヒト免疫グロブリンと抗腫瘍性物質と
の結合体(以下、本物質と略称する)の哺乳動物
に対する急性毒性をマウスに4000mg/Kgの投与量
で静脈注射して調べたが、1週間の観察では死亡
が認められなかつた。 さらに、ヒト免疫グロブリンをペプシン
(Nisonoff Science132 1770(1970))、プラスミ
ン(Sgouris Vox Sang18 71(1967))、サーモ
ライシン(特願昭50−19871)、パパイン、トリプ
シン、キモトリプシンで酵素水解して得られる低
分子抗体についても、抗腫瘍剤を結合せしめて検
討を行なつた。これらの物質例えばF(ab′)2でも
毒性は4000mg/Kg以上であつた。 したがつて、本物質は、毒性が極めて低く、頻
回投与も可能でさらに各種の人癌に対して有効で
ある。例えば、急性白血病、悪性リンパ腫、癌
腫、肉腫悪性繊毛上皮腫、急性骨髄性白血病、メ
ラノーマ、急性リンパ性白血病、骨髄癌等に有効
である。本物質を抗腫瘍剤として用いる場合の製
剤化法、および投与の方法としては、抗腫瘍剤に
関する公知の方法を適用し得る。投与方法として
は、経口、非経口たとえば注射または直腸投与が
あげられる。投与形態としては、粉末、顆粒、錠
剤、カプセル、または注射剤、座薬のいずれであ
つてもよい。特に錠剤あるいは注射による投与が
好ましい。注射薬の製剤には、生理的食塩水、滅
菌水、リンゲル液等の水溶性溶剤、非水溶性溶剤
等張化剤、無痛化剤、安定剤、防腐剤、懸濁化
剤、緩衝剤、乳化剤等を任意に用いうる。 その一例を示すと、本物質1gとマンニトール
5gを蒸留水に溶解して50mlとして常法で除菌し
た後、それを注射用小瓶に分けたり、又はそのま
ま凍結乾燥して注射剤とする。そして本剤は、使
用に際し、生理的食塩水で稀釈して注射液とす
る。本物質は製剤化中一般に0.01〜90%、好まし
くは0.1〜60%含有することが出来る。 本物質の投与量は主として症状に左右されるが
成人1人1日当り0.1g〜10g、好ましくは1〜
6gである。 本発明によると、ヒト免疫グロブリンおよび酵
素処理ヒト免疫グロブリンの向腫瘍性ならびに、
抗腫瘍性物質の抗腫瘍性は失なわれることなく上
記化合物に保たれているので、本物質は、投与さ
れると効率よく目的とする腫瘍部位に到達し、長
期間残存し、抗腫瘍効果を発揮する。 本発明は、必ずしも抗体を抗腫瘍抗体から選ば
なくてもすむために工業的には大変利であると言
える。 以下に、本発明を実施例によつて更に詳細に説
明する。 実施例 1 ヒト免疫グロブリンの分布 実用性のある抗体はいかなる抗体であるかを検
索する為に、抗S―180ウサギ免疫グロブリン、
正常ICRマウス免疫グロブリン、ヒト免疫グロブ
リンの生体内分布を調べる為に各物質に 125I―
標識を行なつた。 すなわち、W.H.HurterらBiochem.J.89114
(1963)の方法に従つて免疫グロブリンのタンパ
ク質部分に 125I―標識を行なつた。方法はいず
れも同様であるので一例をあげる。マイトマイシ
ンC結合剤S―180抗体を5mg/mlの濃度になる
様に0.5Mのリン酸緩衝液(pH7.4)溶かした。そ
の0.5mlをスピツク管に入れ、そこに0.25mCiの
Na 125Iを加える。さらに0.05Mのリン酸緩衝液
200μに溶かした0.7mgのクロラミンTを加えて
0℃で15分反応させた。続いて0.05Mのリン酸緩
衝液に溶かしたピロ亜硫酸ナトリウム(1.75mg)
とKI(10mg)を加えて反応を停止した。反応液を
Sephadex G―25(φ2.2cm×40cm)カラムを用い
て、未反応の放射性ヨード及び試薬を除去した。
このようにして 125I―標識マイトマイシン結合
抗S―180ウサギ免疫グロブリンを得た。以下同
様にして 125I標識正常ICRマウス免疫グロブリ
ン、 125I標識ヒト免疫グロブリンを得た。これ
らを用いて生体内分布の検討を行なつた。 すなわち、S―180担癌ICRマウス(移植後2
週間)を用いて、静脈内に投与し、24時間後と
144時間後に動物をと殺して、解剖し、血液S―
180腫瘍部位、肝臓、腎臓、ひ臓、消化器等の各
臓器を取り出してウエル型のγ―カウンターでカ
ウントを行ない、投与薬剤の各組織重量当りの到
達薬剤量という形で分布を以下のように表示した
(表―1)。
【表】
さらに144時間後における各臓器に残存する量
の合計に対する各臓器における量の率を残存率と
して表わすと下表―2のようになる。
の合計に対する各臓器における量の率を残存率と
して表わすと下表―2のようになる。
【表】
これらの結果は腫瘍抗原を異種動物に免疫して
得られる異種抗体が優れた到達率を示すことを表
わしている。しかし、同種の自然抗体も特異抗体
に比べて腫瘍到達率は1/5〜1/10と落ちるが、他
の臓器に比べると腫瘍部位での残存率が高いとい
うことがここに判明した。このことから自然抗体
がキヤリヤーとして実用性の高い抗体であること
を知るに到つた。 実施例 2 ヒト免疫グロブリンの調整 ヒト正常人血清1000mlに対し1000mlの0.005M
リン酸緩衝食塩水(以下、PBSと略)を加えて
希釈する。この希釈血清に2000mlの飽和硫安水溶
液(pH7.2)をかくはんしながら徐々に加える。
4℃で60分放置すると塩析物が析出沈澱してくる
ので8000rpmで30分間遠心分離を行ない沈澱を集
める。この沈澱をPBSに溶かし、全量を1000ml
とする。これに対し撹拌しながら、徐々に飽和硫
安の250mlを加え20%飽和とする。溶液が白濁し、
沈澱を生ずる場合はフイブリノーゲンであるので
遠心除去を行なう。この上清に飽和硫安の250ml
を加え33%飽和とする。60分放置した後8000rpm
で30分間遠心分離を行ない沈澱を集める。この沈
澱を1000mlのPBSに溶解した後500mlの飽和硫安
を加える。60分撹拌後8000rpmで30分間遠心分離
を行ない沈澱を集める。得られた沈澱を300mlの
PBSに溶かして、PBSに対して透析を行ない硫
安を除いた。さらに透析終了後、DEAE―セルロ
ースカラム(直径5cm×50cm)を用いて、
0.005MpH8.0です通りするフラクシヨンを集め
た。す通の画分を蒸留水に対して透析して脱塩の
後、凍結乾燥してシト免疫グロブリン12.5gを得
た。 実施例 3 正常人由来ヒト免疫グロブリンとマイトマイシ
ンC、塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウノルビシ
ン、ブレオマイシン、アクチノマイシン、ザルコ
マイシンの各々とを反応せしめて、ヒト免疫グロ
ブリン結合抗性物質を合成した。以下に合成例を
述べる。 3―1 マイトマイシンCの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに111.3mgのマイトマイシン
Cを溶解させる。1.0Nの塩酸水溶液でpHを5.5
に調整しつつ、4℃で262.6mgの1―エチル―
3―(3―ジメチルアミノプロピル)―カルボ
ジイミド塩酸塩を加えて下記の時間反応させ、
酢酸―酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)5mlの
添加で反応を停止させた。次いで、反応液を限
外ろ過器を用いて10mlに濃縮脱塩を行なつた。
10mlの濃縮液をセフアデツクスG―25(フアル
マシア・ジヤパン社)を充填した直径5cm、高
さ90cmのカラムを通して、反応液中の高分子量
物質及び低分子量物質を完全に分離した。溶出
液を超遠心分離で40000g×60分遠心分離して
得られた上清液を0℃で凍結乾燥して製品たる
本物質を得た。ヒト免疫グロブリンに対する各
反応時間におけるマイトマイシンCの結合量
360nmの紫外線吸収を用いて測定した結果は、
表―3に示すごとくであつた。
得られる異種抗体が優れた到達率を示すことを表
わしている。しかし、同種の自然抗体も特異抗体
に比べて腫瘍到達率は1/5〜1/10と落ちるが、他
の臓器に比べると腫瘍部位での残存率が高いとい
うことがここに判明した。このことから自然抗体
がキヤリヤーとして実用性の高い抗体であること
を知るに到つた。 実施例 2 ヒト免疫グロブリンの調整 ヒト正常人血清1000mlに対し1000mlの0.005M
リン酸緩衝食塩水(以下、PBSと略)を加えて
希釈する。この希釈血清に2000mlの飽和硫安水溶
液(pH7.2)をかくはんしながら徐々に加える。
4℃で60分放置すると塩析物が析出沈澱してくる
ので8000rpmで30分間遠心分離を行ない沈澱を集
める。この沈澱をPBSに溶かし、全量を1000ml
とする。これに対し撹拌しながら、徐々に飽和硫
安の250mlを加え20%飽和とする。溶液が白濁し、
沈澱を生ずる場合はフイブリノーゲンであるので
遠心除去を行なう。この上清に飽和硫安の250ml
を加え33%飽和とする。60分放置した後8000rpm
で30分間遠心分離を行ない沈澱を集める。この沈
澱を1000mlのPBSに溶解した後500mlの飽和硫安
を加える。60分撹拌後8000rpmで30分間遠心分離
を行ない沈澱を集める。得られた沈澱を300mlの
PBSに溶かして、PBSに対して透析を行ない硫
安を除いた。さらに透析終了後、DEAE―セルロ
ースカラム(直径5cm×50cm)を用いて、
0.005MpH8.0です通りするフラクシヨンを集め
た。す通の画分を蒸留水に対して透析して脱塩の
後、凍結乾燥してシト免疫グロブリン12.5gを得
た。 実施例 3 正常人由来ヒト免疫グロブリンとマイトマイシ
ンC、塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウノルビシ
ン、ブレオマイシン、アクチノマイシン、ザルコ
マイシンの各々とを反応せしめて、ヒト免疫グロ
ブリン結合抗性物質を合成した。以下に合成例を
述べる。 3―1 マイトマイシンCの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに111.3mgのマイトマイシン
Cを溶解させる。1.0Nの塩酸水溶液でpHを5.5
に調整しつつ、4℃で262.6mgの1―エチル―
3―(3―ジメチルアミノプロピル)―カルボ
ジイミド塩酸塩を加えて下記の時間反応させ、
酢酸―酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)5mlの
添加で反応を停止させた。次いで、反応液を限
外ろ過器を用いて10mlに濃縮脱塩を行なつた。
10mlの濃縮液をセフアデツクスG―25(フアル
マシア・ジヤパン社)を充填した直径5cm、高
さ90cmのカラムを通して、反応液中の高分子量
物質及び低分子量物質を完全に分離した。溶出
液を超遠心分離で40000g×60分遠心分離して
得られた上清液を0℃で凍結乾燥して製品たる
本物質を得た。ヒト免疫グロブリンに対する各
反応時間におけるマイトマイシンCの結合量
360nmの紫外線吸収を用いて測定した結果は、
表―3に示すごとくであつた。
【表】
3―2
上記の操作に準じてヒト免疫グロブリン1.0
gと塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウノルビシ
ン、ブレオマイシンおよびアクチノマイシンD
のそれぞれと反応せしめて約800mgの本物質を
得た。塩酸ドキソルビシンのヒト免疫グロブリ
ン(mg)当りの結合量は反応時間60分、24時間
で夫々4.8μg、9.5μgであつた。 実施例 4 正常人由来ヒト免疫グロブリンとクロラムブチ
ル、メルフアラン(フエニルアラニンマスター
ド)ACNU、ウラムスチン、シクロホスフアミ
ド、メルフアランメチルエステルの各々と反応せ
しめて、アミド結合によるそれぞれの化合物を合
成した。以下その合成例を述べる。 4―1 メルフアランの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに100mgのメルフアランを懸
濁させる。1.0Nの塩酸水溶液でpHを5.5に調節
しつつ、4℃で、1―エチル―3―(3―ジメ
チルアミノプロピル)―カルボジイミド塩酸塩
を加えて2時間反応させ、酢酸―酢酸ナトリウ
ム緩衝液(pH5.5)5mlの添加で反応を停止さ
せた。次いで反応液を限外ろ過器を用いて10ml
に濃縮脱塩を行なつた。10mlの濃縮液をセフア
デツクスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)
を充填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通し
て反応液中の高分子量物質及び低分子量物質を
完全に分離した。溶出液を超遠心分離で40000
g×60分遠心分離して得られた上清液を0℃で
凍結乾燥して製品たる化合物を得た。この物質
中のタンパク含量はアルブミンを標準とした―
銅―フオリン法により、アルキル化活性は
Epsteinの方法(Epstein J.Anal.Chem.27
1423(1955))でそれぞれ測定した。この結果ヒ
ト免疫グロブリン1mgに対してメラフアランが
6μg結合していることがわかつた。 4―2 上記の操作に準じてヒト免疫グロブリン1.0
gとクロラムブチル、ACNU、ウラムスチン
のそれぞれ反応せしめて約90mgの本物質を得
た。ヒト免疫グロブリン(mg)当りのクロラム
ブチルの結合量は反応時間60分、24時間で夫々
5.1μg、11.7μgであつた。 4―3 メルフアランメチルエステルの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに100mgのメルフアランメチ
ルエステル塩酸塩を溶解させる。1.0Nの塩酸
水溶液でpHを5.5に調節しつつ、4℃で1―エ
チル―3―(3―ジメチルアミノプロピル)―
カルボジイミド塩酸塩を加えて24時間反応させ
酢酸―酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)5mlの
添加で反応を停止させた。次いで反応液を限外
ろ過器を用いて、10mlに濃縮脱塩を行なつた。
10mlの濃縮液をセフアデツクスG―25(フアル
マシア・ジヤパン社)を充填した直径5cm、高
さ90cmのカラムを通して反応液中の高分子量物
質及び低分子量物質を完全に分離した。溶出液
を超遠心分離で40000g×60分遠心分離して得
られた上清液を0℃で凍結乾燥して製品たる化
合物を得た。ヒト免疫グロブリンmgあたりの結
合量は10μgであつた。 実施例 5 正常人由来ヒト免疫グロブリンとシダラビン、
8―アザグアニン、5―フルオロウラシル、メソ
トレキセートおよびアミノプテリンナトリウムの
各々と反応せしめて、アミド結合によるそれぞれ
の化合物を合成した。以下にその合成例を述べ
る。 5―1 メソトレキセートの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに151.3mgのメソトレキセー
トを溶解させる。1.0Nの塩酸水溶液でpHを5.5
に調節しつつ、4℃で1―エチル―3―(3―
ジメチルアミノプロピル)―カルボジイミド塩
酸塩を加えて下記の時間反応させ、酢酸―酢酸
ナトリウム緩衝液(pH5.5)5mlの添加で反応
を停止させた。次いで反応液を限外ろ過器を用
いて10mlに濃縮し脱塩を行なつた。10mlの濃縮
液をセフアデツクスG―25(フアルマシア・ジ
ヤパン社)を充填した直径5cm、高さ90cmのカ
ラムを通して反応液中の高分子量物質及び低分
子量物質を完全に分離した。溶出液を超遠心分
離で40000g×60分遠心分離して得られた上清
液を0℃で凍結乾燥して製品たる化合物を得
た。ヒト免疫グロブリンに対するメソトレキセ
ートの結合量を305nmの吸収を用いて測定した
結果はmgタンパク当り8.3μgであつた。 5―2 上記操作に準じてヒト免疫グロブリン1.0g
とシタラビン、8―アザグアニン、5―フルオ
ロウラシル、アミノプテリンナトリウムのそれ
ぞれと反応せしめて約910mgの結合化合物を得
た。ヒト免疫グロブリンmg当りのシタラビン結
合量は反応60分、24時間で夫々4.7μg、8.3μg
であつた。 実施例 6 ヒト免疫グロブリン(ab′)2の調整 ヒト免疫グロブリンの1gを100mlの0.1N酢酸
ナトリウム緩衝液(pH4.5)に溶解させる。酵素
と蛋白質との比率を1/100(重量/重量)として
ペプシンを加え、37℃で16時間消化を行なう。そ
の液に固体のトリス塩酸塩を加えてpH8.0として
反応を停止させる。反応液を限外ろ過器により濃
縮して10mlとする。直径5cmで高さ90cmのカラム
にセフアデツクスG―150を充填し、そこに濃縮
液の5mlをチヤージし、pH7のPBSで溶出する。
3つのピークに分離するが第1番目のピークをF
(ab′)2として集める。この画分を透析チユーブに
つめて脱塩し凍結乾燥を行ないヒト免疫グロブリ
ンF(ab′)2を得た。 実施例 7 ヒト免疫グロブリンF(ab′)2と抗腫瘍剤との結
合 7―1 ヒト免疫グロブリンF(ab′)2の500mgを50ml
の蒸留水に溶解する。そこに55.6mgのマイトマ
イシンCを溶解させる。1.0Nの塩酸水溶液で
pHを5.5に調整しつつ4℃で131.3mgの1―エチ
ル―3―(3―ジメチルアミノプロピル)―カ
ルボジイミド塩酸塩を加えて下記の時間反応さ
せ、酢酸―酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)5
mlの添加で反応を停止させた。次いで反応液を
限外ろ過器を用いて5mlにし濃縮液をセフアデ
ツクスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)を
充填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通して
反応液中の高分子量物質及び低分子量物質を完
全に分離した。溶出液を超遠心分離で40000g
×60分遠心分離して得られた上清液を0℃で凍
結乾燥して製品たる化合物を得た。ヒト免疫グ
ロブリンF(ab′)2に対する、各反応時間におけ
るマイトマイシンの結合量を360nmの紫外線吸
収を用いて測定した結果は表―4に示すごとく
であつた。
gと塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウノルビシ
ン、ブレオマイシンおよびアクチノマイシンD
のそれぞれと反応せしめて約800mgの本物質を
得た。塩酸ドキソルビシンのヒト免疫グロブリ
ン(mg)当りの結合量は反応時間60分、24時間
で夫々4.8μg、9.5μgであつた。 実施例 4 正常人由来ヒト免疫グロブリンとクロラムブチ
ル、メルフアラン(フエニルアラニンマスター
ド)ACNU、ウラムスチン、シクロホスフアミ
ド、メルフアランメチルエステルの各々と反応せ
しめて、アミド結合によるそれぞれの化合物を合
成した。以下その合成例を述べる。 4―1 メルフアランの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに100mgのメルフアランを懸
濁させる。1.0Nの塩酸水溶液でpHを5.5に調節
しつつ、4℃で、1―エチル―3―(3―ジメ
チルアミノプロピル)―カルボジイミド塩酸塩
を加えて2時間反応させ、酢酸―酢酸ナトリウ
ム緩衝液(pH5.5)5mlの添加で反応を停止さ
せた。次いで反応液を限外ろ過器を用いて10ml
に濃縮脱塩を行なつた。10mlの濃縮液をセフア
デツクスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)
を充填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通し
て反応液中の高分子量物質及び低分子量物質を
完全に分離した。溶出液を超遠心分離で40000
g×60分遠心分離して得られた上清液を0℃で
凍結乾燥して製品たる化合物を得た。この物質
中のタンパク含量はアルブミンを標準とした―
銅―フオリン法により、アルキル化活性は
Epsteinの方法(Epstein J.Anal.Chem.27
1423(1955))でそれぞれ測定した。この結果ヒ
ト免疫グロブリン1mgに対してメラフアランが
6μg結合していることがわかつた。 4―2 上記の操作に準じてヒト免疫グロブリン1.0
gとクロラムブチル、ACNU、ウラムスチン
のそれぞれ反応せしめて約90mgの本物質を得
た。ヒト免疫グロブリン(mg)当りのクロラム
ブチルの結合量は反応時間60分、24時間で夫々
5.1μg、11.7μgであつた。 4―3 メルフアランメチルエステルの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに100mgのメルフアランメチ
ルエステル塩酸塩を溶解させる。1.0Nの塩酸
水溶液でpHを5.5に調節しつつ、4℃で1―エ
チル―3―(3―ジメチルアミノプロピル)―
カルボジイミド塩酸塩を加えて24時間反応させ
酢酸―酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)5mlの
添加で反応を停止させた。次いで反応液を限外
ろ過器を用いて、10mlに濃縮脱塩を行なつた。
10mlの濃縮液をセフアデツクスG―25(フアル
マシア・ジヤパン社)を充填した直径5cm、高
さ90cmのカラムを通して反応液中の高分子量物
質及び低分子量物質を完全に分離した。溶出液
を超遠心分離で40000g×60分遠心分離して得
られた上清液を0℃で凍結乾燥して製品たる化
合物を得た。ヒト免疫グロブリンmgあたりの結
合量は10μgであつた。 実施例 5 正常人由来ヒト免疫グロブリンとシダラビン、
8―アザグアニン、5―フルオロウラシル、メソ
トレキセートおよびアミノプテリンナトリウムの
各々と反応せしめて、アミド結合によるそれぞれ
の化合物を合成した。以下にその合成例を述べ
る。 5―1 メソトレキセートの結合 1.0gのヒト免疫グロブリンを100mlの蒸留水
に溶解する。そこに151.3mgのメソトレキセー
トを溶解させる。1.0Nの塩酸水溶液でpHを5.5
に調節しつつ、4℃で1―エチル―3―(3―
ジメチルアミノプロピル)―カルボジイミド塩
酸塩を加えて下記の時間反応させ、酢酸―酢酸
ナトリウム緩衝液(pH5.5)5mlの添加で反応
を停止させた。次いで反応液を限外ろ過器を用
いて10mlに濃縮し脱塩を行なつた。10mlの濃縮
液をセフアデツクスG―25(フアルマシア・ジ
ヤパン社)を充填した直径5cm、高さ90cmのカ
ラムを通して反応液中の高分子量物質及び低分
子量物質を完全に分離した。溶出液を超遠心分
離で40000g×60分遠心分離して得られた上清
液を0℃で凍結乾燥して製品たる化合物を得
た。ヒト免疫グロブリンに対するメソトレキセ
ートの結合量を305nmの吸収を用いて測定した
結果はmgタンパク当り8.3μgであつた。 5―2 上記操作に準じてヒト免疫グロブリン1.0g
とシタラビン、8―アザグアニン、5―フルオ
ロウラシル、アミノプテリンナトリウムのそれ
ぞれと反応せしめて約910mgの結合化合物を得
た。ヒト免疫グロブリンmg当りのシタラビン結
合量は反応60分、24時間で夫々4.7μg、8.3μg
であつた。 実施例 6 ヒト免疫グロブリン(ab′)2の調整 ヒト免疫グロブリンの1gを100mlの0.1N酢酸
ナトリウム緩衝液(pH4.5)に溶解させる。酵素
と蛋白質との比率を1/100(重量/重量)として
ペプシンを加え、37℃で16時間消化を行なう。そ
の液に固体のトリス塩酸塩を加えてpH8.0として
反応を停止させる。反応液を限外ろ過器により濃
縮して10mlとする。直径5cmで高さ90cmのカラム
にセフアデツクスG―150を充填し、そこに濃縮
液の5mlをチヤージし、pH7のPBSで溶出する。
3つのピークに分離するが第1番目のピークをF
(ab′)2として集める。この画分を透析チユーブに
つめて脱塩し凍結乾燥を行ないヒト免疫グロブリ
ンF(ab′)2を得た。 実施例 7 ヒト免疫グロブリンF(ab′)2と抗腫瘍剤との結
合 7―1 ヒト免疫グロブリンF(ab′)2の500mgを50ml
の蒸留水に溶解する。そこに55.6mgのマイトマ
イシンCを溶解させる。1.0Nの塩酸水溶液で
pHを5.5に調整しつつ4℃で131.3mgの1―エチ
ル―3―(3―ジメチルアミノプロピル)―カ
ルボジイミド塩酸塩を加えて下記の時間反応さ
せ、酢酸―酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)5
mlの添加で反応を停止させた。次いで反応液を
限外ろ過器を用いて5mlにし濃縮液をセフアデ
ツクスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)を
充填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通して
反応液中の高分子量物質及び低分子量物質を完
全に分離した。溶出液を超遠心分離で40000g
×60分遠心分離して得られた上清液を0℃で凍
結乾燥して製品たる化合物を得た。ヒト免疫グ
ロブリンF(ab′)2に対する、各反応時間におけ
るマイトマイシンの結合量を360nmの紫外線吸
収を用いて測定した結果は表―4に示すごとく
であつた。
【表】
7―2
上記操作に準じてヒト免疫グロブリンF
(ab′)2500mgと塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウ
ノルビシン、ブレオマイシンおよびアクチノマ
イシンDのそれぞれと反応せしめて、約800mg
の結合化合物を得た。塩酸ドキソルビシンのヒ
ト免疫グロブリンF(ab′)2mg当りの結合量は反
応時間60分、24時間で夫々8.5μg、19.6μgで
あつた。 7―3 上記の操作に準じてヒト免疫グロブリンF
(ab′)2500mgとクロラムブチル、メルフアラン、
ACNU、ウラムスチン、メルフアランメチル
エステル、シクロホスアミドの各々を反応せし
めて約400mgの結合化合物を得た。メルフアラ
ンのヒト免疫グロブリンF(ab′)2mg当りの結合
量は反応時間90分、24時間で夫々8.1μg、
17.6μgであつた。 7―4 上記の操作に準じて、ヒト免疫グロブリンF
(ab′)2500mgとシタラビン、8―アザグアニン、
5―フルオロウラシル、メソトレキセート、ア
ミノプテリンナトリウムのそれぞれと反応せし
めて約400mgの結合化合物を得た。メソトレキ
セートのヒト免疫グロブリンF(ab′)2mg当りの
結合量は反応60分、24時間で夫々7.5μg、
17.3μgであつた。 実施例 8 ザルコーマ180固型腫瘍に対する抗腫瘍効果 ICRマウスを用いて継代培養したマウスザルコ
ーマー180腫瘍細胞を10匹からなる群のICRマウ
スの腋下部の皮下に1×106個/匹移植し、移植
の24時間後から各種抗体、各市販抗腫瘍剤、ヒト
免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF(ab′)2お
よび各種抗腫瘍性物質との結合物のそれぞれの水
溶液を1日置に1回合計10回各マウスの腹腔内に
注射し、最後の注射を5日後にマウスを殺して腫
瘍を摘出して秤量し10匹についての平均値を求め
た。この平均腫瘍重量()を、結合物水溶液の
代りに生理的食塩水を10回投与した対照群マウス
10匹の平均腫瘍重量(と比較することによつ
て、本発明結合物の腫瘍増殖抑制率を(1−T/C) ×100(%)として表―5、6および7に示す。表
―5はマイトマイシンCとで合成した結合物、表
―6はブレオマイシンとで合成した化合物、表―
7は塩酸ドキソルビシンとで合成した化合物によ
る結果である。
(ab′)2500mgと塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウ
ノルビシン、ブレオマイシンおよびアクチノマ
イシンDのそれぞれと反応せしめて、約800mg
の結合化合物を得た。塩酸ドキソルビシンのヒ
ト免疫グロブリンF(ab′)2mg当りの結合量は反
応時間60分、24時間で夫々8.5μg、19.6μgで
あつた。 7―3 上記の操作に準じてヒト免疫グロブリンF
(ab′)2500mgとクロラムブチル、メルフアラン、
ACNU、ウラムスチン、メルフアランメチル
エステル、シクロホスアミドの各々を反応せし
めて約400mgの結合化合物を得た。メルフアラ
ンのヒト免疫グロブリンF(ab′)2mg当りの結合
量は反応時間90分、24時間で夫々8.1μg、
17.6μgであつた。 7―4 上記の操作に準じて、ヒト免疫グロブリンF
(ab′)2500mgとシタラビン、8―アザグアニン、
5―フルオロウラシル、メソトレキセート、ア
ミノプテリンナトリウムのそれぞれと反応せし
めて約400mgの結合化合物を得た。メソトレキ
セートのヒト免疫グロブリンF(ab′)2mg当りの
結合量は反応60分、24時間で夫々7.5μg、
17.3μgであつた。 実施例 8 ザルコーマ180固型腫瘍に対する抗腫瘍効果 ICRマウスを用いて継代培養したマウスザルコ
ーマー180腫瘍細胞を10匹からなる群のICRマウ
スの腋下部の皮下に1×106個/匹移植し、移植
の24時間後から各種抗体、各市販抗腫瘍剤、ヒト
免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF(ab′)2お
よび各種抗腫瘍性物質との結合物のそれぞれの水
溶液を1日置に1回合計10回各マウスの腹腔内に
注射し、最後の注射を5日後にマウスを殺して腫
瘍を摘出して秤量し10匹についての平均値を求め
た。この平均腫瘍重量()を、結合物水溶液の
代りに生理的食塩水を10回投与した対照群マウス
10匹の平均腫瘍重量(と比較することによつ
て、本発明結合物の腫瘍増殖抑制率を(1−T/C) ×100(%)として表―5、6および7に示す。表
―5はマイトマイシンCとで合成した結合物、表
―6はブレオマイシンとで合成した化合物、表―
7は塩酸ドキソルビシンとで合成した化合物によ
る結果である。
【表】
【表】
【表】
実施例 9
吉田肉腫に対する抗腫瘍効果
Donrynラツトを用いて継代培養した吉田肉腫
腹水細胞を10匹からなる群の各Donryuラツトの
腹腔内に1×106個/匹移殖し、移殖の24時間後
からヒト免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF
(ab′)2と各種抗腫瘍剤、それぞれ単独およびヒト
免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF(ab′)2と
各種抗腫瘍性物質との結合物のそれぞれの水溶液
を1日置に5回、合計で5回、各々のラツトの腹
腔内に注射し、試料投与群の平均生存日数(T)
および対照群の平均生存日数(C)を求め、延命
率(T/C×100)を算出した。結果を表―8乃
至表―10に示す。
腹水細胞を10匹からなる群の各Donryuラツトの
腹腔内に1×106個/匹移殖し、移殖の24時間後
からヒト免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF
(ab′)2と各種抗腫瘍剤、それぞれ単独およびヒト
免疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF(ab′)2と
各種抗腫瘍性物質との結合物のそれぞれの水溶液
を1日置に5回、合計で5回、各々のラツトの腹
腔内に注射し、試料投与群の平均生存日数(T)
および対照群の平均生存日数(C)を求め、延命
率(T/C×100)を算出した。結果を表―8乃
至表―10に示す。
【表】
【表】
【表】
実施例 10
マウス白血病P―388に対する抗腫瘍効果
DBA/2マウスを用いて継代培養したP―388
腹水細胞を10匹からなる群の各DBA/2マウス
の腹腔内に1×106個/匹移植し、移植の24時間
後から各種抗腫瘍剤、それぞれ単独およびヒト免
疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF(ab′)2と各
種抗腫瘍性物質との結合物のそれぞれの水溶液を
1日5日間連続、合計で5回各マウスの腹腔内に
注射し、試料投与群の平均生存日数(T)および
対照群の平均生存日数(C)を求め、延命率
(T/C×100)を算出した。結果を表―11乃至表
―13に示す。
腹水細胞を10匹からなる群の各DBA/2マウス
の腹腔内に1×106個/匹移植し、移植の24時間
後から各種抗腫瘍剤、それぞれ単独およびヒト免
疫グロブリン、ヒト免疫グロブリンF(ab′)2と各
種抗腫瘍性物質との結合物のそれぞれの水溶液を
1日5日間連続、合計で5回各マウスの腹腔内に
注射し、試料投与群の平均生存日数(T)および
対照群の平均生存日数(C)を求め、延命率
(T/C×100)を算出した。結果を表―11乃至表
―13に示す。
【表】
【表】
【表】
実施例 11
11―1
500mgのデキストランを500mlの蒸留水に溶解
させ、pHを1NのNaOHを加えて11とする。室
温で、250mg/mlに調整したBrCNのアセトニ
トリル溶液を、すばやく撹拌しながら加える。
NaOHを加えてpHを10.8〜11.0に調整する。
BrCNを加え終つた後10分pHを保つておく。
そこに2.5mlの水に溶解した100mgのヘキサメチ
レンジアミンを加えてpHを1NのHClにて9.0に
あわせる。5分間、撹拌した後、250mgのメル
フアランを加えて、pHを6.5におとしpHを15
分間そのままに保つ。反応終了後4℃で反応液
を10mlに濃縮する。10mlの濃縮液をセフアデツ
クスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)を充
填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通して反
応液中の高分子物質及び低分子量物質を完全に
分離した。溶出液を超遠心分離で40000g×60
分、遠心分離して得られた上清液を0℃で凍結
して製品たる化合物を得た。この結合物はメル
フアラン―デキストラン結合体で1分子のデキ
ストランあたり30分子〜50分子のメルフアラン
が結合していた。この結合体100mgとヒト免疫
グロブリン100mgをグルタルアルデヒドを用い
て結合体を作製した。同様にしてヒト免疫グロ
ブリンF(ab′)2を用いて結合体を得た。 11―2 500mgのデキストランを500mlの蒸留水に溶解
させ、pHを1NのNaOHを加えて11とする。室
温で250mg/mlの濃度に調整したBrCNのアセ
トニトリル溶液をすばやく撹拌しながら加え
る。NaOHを加えてpHを10.8〜11.0に調整す
る。BrCNを加え終つた後10分間pHを保つて
おく。そこに2.5mlの水に溶解した100mgのヘキ
サメチレンジアミンを加えてpHを1NのHClに
て9.0にあわせる。5分間、撹拌した後、250mg
のマイトマイシンCを加えてpHを6.5におと
し、pHを15分間、そのままに保つ。反応終了
後、4℃で反応液を10mlに濃縮する。10mlの濃
縮液をセフアデツクスG―25(フアルマシア・
ジヤパン社)を充填した直径5cm、高さ90cmの
カラムを通して反応液中の高分子量及び低分子
量物質を完全に分離した。溶出液を超遠心分離
で40000g×60分遠心分離して得られた上清液
を0℃で凍結乾燥して製品たる化合物を得た。
この結合物はマイトマイシンC―デキストラン
結合体で1分子のデキストランあたり30分子〜
50分子のマイトマイシンCが結合していた。 この結合体100mgとヒト免疫グロブリン100mg
をグルタルアルデヒド最終100μg/mlとなる
濃度で加えて室温で1時間反応を行ないヒト免
疫グロブリン結合デキストラン―マイトマイシ
ンCを得た。 11―3 500mgのデキストランを500mlの蒸留水に溶解
させpHを1NのNaOHを加えて11とする。室温
で250mg/mlの濃度に調整したBrCNのアセト
ニトリル溶液をすばやく撹拌しながら加える。
NaOHを加えてpHを10.8〜11.0に調整する。
BrCNを加え終つた後10分間pHを保つておく。
そこに2.5mlの水に溶解した100mgのヘキサメチ
レンジアミンを加えてpHを1NのHClにて9.0に
あわせる。5分間撹拌した後、250mgのメソト
レキセートを加えてpHを6.5におとしてpHを
15分間そのままに保つ。反応終了後、4℃で反
応液を10mlに濃縮する。10mlの濃縮液をセフア
デツクスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)
を充填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通し
て反応液中の高分子量及び低分子量物質を完全
に分離した。溶出液を超遠心分離で40000g×
60分遠心分離して得られた上清液を0℃で凍結
乾燥して製品たる化合物を得た。この結合物は
メソトレキセート―デキストラン結合体で1分
子のデキストランあたり30分子〜50分子のメソ
トレキセートが結合していた。 この結合体100mgとヒト免疫グロブリンF
(ab′)2120mgをグルタルアルデヒド最終100μ
g/mlとなる濃度で加え結合体を作製した。 同様にしてヒト免疫グロブリンを用いて結合
体を得た。 実施例 12 12―1 マイトマイシンC11.3mgを0.01Mのリン酸緩
衝液(pH6.8)に1mlに溶解させ、ここに1%
のグルタルアルデヒド水溶液20μを加えて室
温で8時間撹拌する。そこに100mgのヒト免疫
グロブリンを20mlのリン酸緩衝液(pH6.8)に
溶解した液を加えてさらに2時間室温で反応さ
せる。反応終了後、セフアデツクスG―25(フ
アルマシア・ジヤパン社)を充填した直径5
cm、高さ90cmのカラムを通して反応液中の高分
子量物質及び低分子量物質を完全に分離した。
溶出液を超遠心分離で40000g×60分遠心分離
して得られた上清液を0℃で凍結乾燥して製品
たる化合物を得た。ヒト免疫グロブリンに対す
るマイトマイシンCの結合量は蛋白mgあたり、
9.6μgであつた。 12―2 アドリアマイシン196mgを0.01Mのリン酸緩
衝液(pH6.8)に1mlに溶解させる。ここに1
%のグルタルアルデヒド水溶液20μを加えて
室温で8時間撹拌する。そこに100mgのヒト免
疫グロブリンを20mlのリン酸緩衝液(pH6.8)
に溶解した液を加えて、さらに2時間室温で反
応させる。反応終了後、セフアデツクスG―25
(フアルマシア・ジヤパン社)を充填した直径
5cm、高さ90cmのカラムを通して、反応液中の
高分子量物質及び低分子量物質を完全に分離し
た。溶出液を超遠心分離で40000g×60分遠心
分離して得られた上清液を0℃で凍結乾燥して
製品たる化合物を得た。ヒト免疫グロブリンに
対するアドリアマイシンの結合量は蛋白mgあた
り、5.6μgであつた。 同様にしてヒト免疫グロブリンF(ab′)2を用
いて結合体を得た。 12―3 メソトレキセート200mgを0.01Mのリン酸緩
衝液(pH6.8)1mlに溶解させる。ここに1%
のグルタルアルデヒド水溶液20μを加えて室
温で8時間撹拌する。そこに100mgのヒト免疫
グロブリンF(ab′)2を20mlのリン酸緩衝液
(pH6.8)に溶解した液を加えてさらに2時間
室温で反応をさせる。反応終了後、セフアデツ
クスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)を充
填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通して、
反応液中の高分子量物質及び低分子量物質を完
全に分離した。溶出液を超遠心分離で40000g
×60分遠心分離して得られた上清液を0℃で凍
結乾燥して製品たる化合物を得た。ヒト免疫グ
ロブリンF(ab′)2に対するメソトレキセートの
結合量は蛋白mgあたり7.8μgであつた。 実施例 13 13―1 マイトマイシンC11.3mgとヒト免疫グロブリ
ンの100mgを0.2Mとホウ酸ナトリウム(pH9.3)
の10mlに溶解させる。そこに5mgのジエチルマ
ロンイミデートを加えて室温でpHを8.6に保つ
たまま、1時間撹拌させる。さらに2.5mgのジ
エチルマロンイミデートを添加して1時間撹拌
を行なつた。反応終了後、中性にpHをもどし
た後、45%の飽和硫安を加えてヒト免疫グロブ
リン―マイトマイシンC結合体を沈澱させた。
7000rpmで15分遠心分離を行ない沈澱を集め
た。沈澱を5mMのリン酸緩衝液5mlに溶解
し、蒸留水に対して透析を行ない硫安が検出さ
れなくなるまで(72hr)透析した。透析終了
後、セフアデツクスG―25(フアルマシア・ジ
ヤパン社)を充填した直径5cm、高さ90cmのカ
ラムを通して反応液中の低分子量物質を完全に
のぞいた。溶出液を−20℃で凍結乾燥して製品
たる化合物を得た。ヒト免疫グロブリンmg当り
の結合量は6.3μgであつた。 同様にしてヒト免疫グロブリンF(ab′)2を用
いて結合体を得た。 13―2 上記の操作に準じてヒト免疫グロブリン100
mgとメルフアラン、アミノプテリンナトリウム
との反応を行ない85mgの結合化合物を得た。 実施例 14 実施例11、実施例12、実施例13で合成した化合
物について実施例8、9、10の抗腫瘍試験を用い
て効果を調べた結果を表―14乃至表―16に示し
た。
させ、pHを1NのNaOHを加えて11とする。室
温で、250mg/mlに調整したBrCNのアセトニ
トリル溶液を、すばやく撹拌しながら加える。
NaOHを加えてpHを10.8〜11.0に調整する。
BrCNを加え終つた後10分pHを保つておく。
そこに2.5mlの水に溶解した100mgのヘキサメチ
レンジアミンを加えてpHを1NのHClにて9.0に
あわせる。5分間、撹拌した後、250mgのメル
フアランを加えて、pHを6.5におとしpHを15
分間そのままに保つ。反応終了後4℃で反応液
を10mlに濃縮する。10mlの濃縮液をセフアデツ
クスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)を充
填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通して反
応液中の高分子物質及び低分子量物質を完全に
分離した。溶出液を超遠心分離で40000g×60
分、遠心分離して得られた上清液を0℃で凍結
して製品たる化合物を得た。この結合物はメル
フアラン―デキストラン結合体で1分子のデキ
ストランあたり30分子〜50分子のメルフアラン
が結合していた。この結合体100mgとヒト免疫
グロブリン100mgをグルタルアルデヒドを用い
て結合体を作製した。同様にしてヒト免疫グロ
ブリンF(ab′)2を用いて結合体を得た。 11―2 500mgのデキストランを500mlの蒸留水に溶解
させ、pHを1NのNaOHを加えて11とする。室
温で250mg/mlの濃度に調整したBrCNのアセ
トニトリル溶液をすばやく撹拌しながら加え
る。NaOHを加えてpHを10.8〜11.0に調整す
る。BrCNを加え終つた後10分間pHを保つて
おく。そこに2.5mlの水に溶解した100mgのヘキ
サメチレンジアミンを加えてpHを1NのHClに
て9.0にあわせる。5分間、撹拌した後、250mg
のマイトマイシンCを加えてpHを6.5におと
し、pHを15分間、そのままに保つ。反応終了
後、4℃で反応液を10mlに濃縮する。10mlの濃
縮液をセフアデツクスG―25(フアルマシア・
ジヤパン社)を充填した直径5cm、高さ90cmの
カラムを通して反応液中の高分子量及び低分子
量物質を完全に分離した。溶出液を超遠心分離
で40000g×60分遠心分離して得られた上清液
を0℃で凍結乾燥して製品たる化合物を得た。
この結合物はマイトマイシンC―デキストラン
結合体で1分子のデキストランあたり30分子〜
50分子のマイトマイシンCが結合していた。 この結合体100mgとヒト免疫グロブリン100mg
をグルタルアルデヒド最終100μg/mlとなる
濃度で加えて室温で1時間反応を行ないヒト免
疫グロブリン結合デキストラン―マイトマイシ
ンCを得た。 11―3 500mgのデキストランを500mlの蒸留水に溶解
させpHを1NのNaOHを加えて11とする。室温
で250mg/mlの濃度に調整したBrCNのアセト
ニトリル溶液をすばやく撹拌しながら加える。
NaOHを加えてpHを10.8〜11.0に調整する。
BrCNを加え終つた後10分間pHを保つておく。
そこに2.5mlの水に溶解した100mgのヘキサメチ
レンジアミンを加えてpHを1NのHClにて9.0に
あわせる。5分間撹拌した後、250mgのメソト
レキセートを加えてpHを6.5におとしてpHを
15分間そのままに保つ。反応終了後、4℃で反
応液を10mlに濃縮する。10mlの濃縮液をセフア
デツクスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)
を充填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通し
て反応液中の高分子量及び低分子量物質を完全
に分離した。溶出液を超遠心分離で40000g×
60分遠心分離して得られた上清液を0℃で凍結
乾燥して製品たる化合物を得た。この結合物は
メソトレキセート―デキストラン結合体で1分
子のデキストランあたり30分子〜50分子のメソ
トレキセートが結合していた。 この結合体100mgとヒト免疫グロブリンF
(ab′)2120mgをグルタルアルデヒド最終100μ
g/mlとなる濃度で加え結合体を作製した。 同様にしてヒト免疫グロブリンを用いて結合
体を得た。 実施例 12 12―1 マイトマイシンC11.3mgを0.01Mのリン酸緩
衝液(pH6.8)に1mlに溶解させ、ここに1%
のグルタルアルデヒド水溶液20μを加えて室
温で8時間撹拌する。そこに100mgのヒト免疫
グロブリンを20mlのリン酸緩衝液(pH6.8)に
溶解した液を加えてさらに2時間室温で反応さ
せる。反応終了後、セフアデツクスG―25(フ
アルマシア・ジヤパン社)を充填した直径5
cm、高さ90cmのカラムを通して反応液中の高分
子量物質及び低分子量物質を完全に分離した。
溶出液を超遠心分離で40000g×60分遠心分離
して得られた上清液を0℃で凍結乾燥して製品
たる化合物を得た。ヒト免疫グロブリンに対す
るマイトマイシンCの結合量は蛋白mgあたり、
9.6μgであつた。 12―2 アドリアマイシン196mgを0.01Mのリン酸緩
衝液(pH6.8)に1mlに溶解させる。ここに1
%のグルタルアルデヒド水溶液20μを加えて
室温で8時間撹拌する。そこに100mgのヒト免
疫グロブリンを20mlのリン酸緩衝液(pH6.8)
に溶解した液を加えて、さらに2時間室温で反
応させる。反応終了後、セフアデツクスG―25
(フアルマシア・ジヤパン社)を充填した直径
5cm、高さ90cmのカラムを通して、反応液中の
高分子量物質及び低分子量物質を完全に分離し
た。溶出液を超遠心分離で40000g×60分遠心
分離して得られた上清液を0℃で凍結乾燥して
製品たる化合物を得た。ヒト免疫グロブリンに
対するアドリアマイシンの結合量は蛋白mgあた
り、5.6μgであつた。 同様にしてヒト免疫グロブリンF(ab′)2を用
いて結合体を得た。 12―3 メソトレキセート200mgを0.01Mのリン酸緩
衝液(pH6.8)1mlに溶解させる。ここに1%
のグルタルアルデヒド水溶液20μを加えて室
温で8時間撹拌する。そこに100mgのヒト免疫
グロブリンF(ab′)2を20mlのリン酸緩衝液
(pH6.8)に溶解した液を加えてさらに2時間
室温で反応をさせる。反応終了後、セフアデツ
クスG―25(フアルマシア・ジヤパン社)を充
填した直径5cm、高さ90cmのカラムを通して、
反応液中の高分子量物質及び低分子量物質を完
全に分離した。溶出液を超遠心分離で40000g
×60分遠心分離して得られた上清液を0℃で凍
結乾燥して製品たる化合物を得た。ヒト免疫グ
ロブリンF(ab′)2に対するメソトレキセートの
結合量は蛋白mgあたり7.8μgであつた。 実施例 13 13―1 マイトマイシンC11.3mgとヒト免疫グロブリ
ンの100mgを0.2Mとホウ酸ナトリウム(pH9.3)
の10mlに溶解させる。そこに5mgのジエチルマ
ロンイミデートを加えて室温でpHを8.6に保つ
たまま、1時間撹拌させる。さらに2.5mgのジ
エチルマロンイミデートを添加して1時間撹拌
を行なつた。反応終了後、中性にpHをもどし
た後、45%の飽和硫安を加えてヒト免疫グロブ
リン―マイトマイシンC結合体を沈澱させた。
7000rpmで15分遠心分離を行ない沈澱を集め
た。沈澱を5mMのリン酸緩衝液5mlに溶解
し、蒸留水に対して透析を行ない硫安が検出さ
れなくなるまで(72hr)透析した。透析終了
後、セフアデツクスG―25(フアルマシア・ジ
ヤパン社)を充填した直径5cm、高さ90cmのカ
ラムを通して反応液中の低分子量物質を完全に
のぞいた。溶出液を−20℃で凍結乾燥して製品
たる化合物を得た。ヒト免疫グロブリンmg当り
の結合量は6.3μgであつた。 同様にしてヒト免疫グロブリンF(ab′)2を用
いて結合体を得た。 13―2 上記の操作に準じてヒト免疫グロブリン100
mgとメルフアラン、アミノプテリンナトリウム
との反応を行ない85mgの結合化合物を得た。 実施例 14 実施例11、実施例12、実施例13で合成した化合
物について実施例8、9、10の抗腫瘍試験を用い
て効果を調べた結果を表―14乃至表―16に示し
た。
【表】
【表】
【表】
比較例 1
Walker256の腫瘍をウイスター―今道ラツト腋
下部の皮下に8mm角で移植し、移植後24時間後か
ら、メルフアラン4.0mg/Kg/dayまたはヒト免疫
グロブリン結合メルフアラン400mg/Kg/dayを
連日10日間投与した。薬物は強制経口投与で行な
つた。移植後60日目の生存率を求めた。各群10匹
について行ない、コントロール群(C)と薬物投与群
(T)の平均生存日数から、延命効率T/C×100
(%)を算出した。下記に結果を示す。
下部の皮下に8mm角で移植し、移植後24時間後か
ら、メルフアラン4.0mg/Kg/dayまたはヒト免疫
グロブリン結合メルフアラン400mg/Kg/dayを
連日10日間投与した。薬物は強制経口投与で行な
つた。移植後60日目の生存率を求めた。各群10匹
について行ない、コントロール群(C)と薬物投与群
(T)の平均生存日数から、延命効率T/C×100
(%)を算出した。下記に結果を示す。
【表】
上記の結果から明らかな通り、本発明化合物は
延命効果においてはるかに優れている。メルフア
ラン投与群ではコントロールに比べて抗腫瘍効果
よりもむしろメルフアランの副作用の為毒性死し
ていることが特徴である。更に5日後血液検査を
行なつたところ血液像が、メルフアラン群では白
血球数が3839で正常の12000よりはるかに減少し
ており、副作用の発現が明らかである。これに対
して本願化合物では9836と正常値に近くなつてお
り、副作用が低下している。さらに、メルフアラ
ン投与群では60日生存は4匹であつたのに対し、
本発明化合物では7匹生存であつた。高投与量に
おいて本発明化合物の特徴が明らかにされた。従
つて、本発明は低分子薬剤であるメルフアランの
毒性を改良した新しい薬剤を提供するものである
と言える。 比較例 2 Balb/cマウス腋下部の皮下にルイス肺癌の
角片(3mm3)を移植し、移植の24時間後から正
常人由来の免疫グロブリン結合メルフアラン又は
メルフアランを下記の投与量で1日置に1回合計
10回強制経口投与し、その生存日数より延命率を
求めた。
延命効果においてはるかに優れている。メルフア
ラン投与群ではコントロールに比べて抗腫瘍効果
よりもむしろメルフアランの副作用の為毒性死し
ていることが特徴である。更に5日後血液検査を
行なつたところ血液像が、メルフアラン群では白
血球数が3839で正常の12000よりはるかに減少し
ており、副作用の発現が明らかである。これに対
して本願化合物では9836と正常値に近くなつてお
り、副作用が低下している。さらに、メルフアラ
ン投与群では60日生存は4匹であつたのに対し、
本発明化合物では7匹生存であつた。高投与量に
おいて本発明化合物の特徴が明らかにされた。従
つて、本発明は低分子薬剤であるメルフアランの
毒性を改良した新しい薬剤を提供するものである
と言える。 比較例 2 Balb/cマウス腋下部の皮下にルイス肺癌の
角片(3mm3)を移植し、移植の24時間後から正
常人由来の免疫グロブリン結合メルフアラン又は
メルフアランを下記の投与量で1日置に1回合計
10回強制経口投与し、その生存日数より延命率を
求めた。
【表】
以上の結果の通り、本発明薬剤は、200mg/Kg、
400mg/Kg投与群それぞれにおいて明らかにメル
フアラン2mg/Kg、4mg/Kg投与群よりも優れた
延命効果が認められる。メルフアラン4mg/Kg投
与群では、生存マウスは0匹であり、効果よりも
毒性の為に生存日数が減少している。本発明は副
作用の少ない薬剤を提供するものである。
400mg/Kg投与群それぞれにおいて明らかにメル
フアラン2mg/Kg、4mg/Kg投与群よりも優れた
延命効果が認められる。メルフアラン4mg/Kg投
与群では、生存マウスは0匹であり、効果よりも
毒性の為に生存日数が減少している。本発明は副
作用の少ない薬剤を提供するものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 正常人由来の免疫グロブリンにメルフアラン
又はそのエステルを結合した化合物を有効成分と
する抗腫瘍剤。 2 免疫グロブリンがF(ab′)2であることを特徴
とする特許請求の範囲第1項に記載の抗腫瘍剤。 3 水溶性カルボジイミドを用いて結合されるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第1項又は第2項
のいずれかに記載の抗腫瘍剤。 4 イソシアナート、ジエチルマロンイミデー
ト、グルタルアルデヒド、ポリグルタミン酸又は
デキストランを用いて結合されることを特徴とす
る特許請求の範囲第1項又は第2項のいずれかに
記載の抗腫瘍剤。 5 経口投与形態にあることを特徴とする特許請
求の範囲第1項乃至第4項のいずれかに記載の抗
腫瘍剤。 6 経口投与形態が顆粒であることを特徴とする
特許請求の範囲第5項に記載の抗腫瘍剤。 7 経口投与形態が錠剤であることを特徴とする
特許請求の範囲第5項に記載の抗腫瘍剤。 8 経口投与形態がカプセルであることを特徴と
する特許請求の範囲第5項に記載の抗腫瘍剤。 9 非経口投与形態であることを特徴とする特許
請求の範囲第1項乃至第4項のいずれかに記載の
抗腫瘍剤。 10 経口投与形態が座薬であることを特徴とす
る特許請求の範囲第9項に記載の抗腫瘍剤。 11 非経口投与形態が注射剤であることを特徴
とする特許請求の範囲第9項に記載の抗腫瘍剤。
Priority Applications (12)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP58061923A JPS59186924A (ja) | 1983-04-08 | 1983-04-08 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
ZA842272A ZA842272B (en) | 1983-04-08 | 1984-03-27 | Anti-tumour substance and process for producing the same |
CA000451028A CA1301066C (en) | 1983-04-08 | 1984-03-30 | Anti-tumour substance and process for producing the same |
EP84302364A EP0122132A3 (en) | 1983-04-08 | 1984-04-06 | Anti-tumour substance |
DK181484A DK181484A (da) | 1983-04-08 | 1984-04-06 | Middel mod svulster og fremgangsmaade til fremstilling deraf |
SE8401942A SE462261B (sv) | 1983-04-08 | 1984-04-06 | Farmaceutisk komposition och konjugat av melfalan och normalt humanimmunoglobulin med antitumoerverkan samt foerfarande foer dess framstaellning |
JP61265119A JPH0611714B2 (ja) | 1983-04-08 | 1986-11-07 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
JP61265118A JPH0653682B2 (ja) | 1983-04-08 | 1986-11-07 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
JP61265117A JPH0611713B2 (ja) | 1983-04-08 | 1986-11-07 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
US07/005,302 US4738843A (en) | 1983-04-08 | 1987-01-20 | Anti-tumor substance of immunoglobulin and melphalan and process for producing the same |
US07/143,747 US4925662A (en) | 1983-04-08 | 1988-01-14 | Anti-tumor substance and process for producing the same |
SE8904004A SE8904004L (sv) | 1983-04-08 | 1989-11-27 | Anti-tumoersubstans och foerfarande foer framstaellning av densamma |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP58061923A JPS59186924A (ja) | 1983-04-08 | 1983-04-08 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
Related Child Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61265118A Division JPH0653682B2 (ja) | 1983-04-08 | 1986-11-07 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
JP61265119A Division JPH0611714B2 (ja) | 1983-04-08 | 1986-11-07 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
JP61265117A Division JPH0611713B2 (ja) | 1983-04-08 | 1986-11-07 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS59186924A JPS59186924A (ja) | 1984-10-23 |
JPS6330289B2 true JPS6330289B2 (ja) | 1988-06-17 |
Family
ID=13185161
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP58061923A Granted JPS59186924A (ja) | 1983-04-08 | 1983-04-08 | ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US4738843A (ja) |
EP (1) | EP0122132A3 (ja) |
JP (1) | JPS59186924A (ja) |
CA (1) | CA1301066C (ja) |
DK (1) | DK181484A (ja) |
SE (2) | SE462261B (ja) |
ZA (1) | ZA842272B (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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US10854554B2 (en) | 2018-01-23 | 2020-12-01 | Ferro Corporation | Carbide, nitride and silicide enhancers for laser absorption |
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---|---|---|---|---|
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