JPS5843926A - 選択性制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は選択性制癌剤、殊にバイブリドＦマの産生じた
ヒトの癌抗原に対する単クローン性抗体（以下”ＭｏＡ
ｂ“と略す）と制癌作用物質とが化学的に結合している
ヒトの癌細胞に対し特異的に親和性を有す制癌剤に関す
る。

悪性腫瘍、即ち癌に対する治療薬としては、既に多数の
細胞毒性物質が臨床的に実用又は試用されで）るが、こ
れらはいずれも癌細胞に対し非特異的であって、正常細
胞に対し′ても毒性を有するので、有効濃度に達するま
で投与量を増加するのは不可能であるという本質的な欠
点がある。このため、現在においても癌の化学療法剤に
対する信頼性は乏しく、早期発見、外科手術というのが
依然として癌治療の人道である。

そごで近年に至り制癌作用や細胞毒性を有する物質を特
殊なキャリヤーに結合させ、これを選択的に癌細胞に伝
達、作用させるというアイデアが生まれ、この線に沿っ
て、癌細胞の持つ抗原に対する抗体の利用が研究されて
きた。元来、同一個体の同種の、又は異種の抗腫瘍抗体
は必ずしも癌細胞に対し傷害作用を発揮するという訳で
はないが、高１い確率をもって癌細胞に結合する性質を
有する点では共通している、この性質を利用して、例え
！ｉ、 ・ダウノマイシン等の制癌剤＼抗腫瘍免疫グロブリンの
Ｆａｔ／二量体とを共有結合させた例（特開昭５１−１
４４７２３号）、 ・ジフテリア毒素とウサギ５ｖ４０抗体をグルタルアル
デヒドで架橋した複合体（Ｆ、　Ｌ、　Ｍｏｏｌｔｅｎ
ｅｔ　ａ１４　Ｊ、Ｎａｔｌ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ
、、　Ｖｏｌ、　５５゜ぼ、４７３〜４７７（１９７５
））、 ジフテリア毒素と抗リンパ球抗体とをクロラムブシルを
介して結合した結合体（Ｎａｔｕｒｅ。

Ｖｏｌ、２７１．　ｐｐ、７５２〜７５４（１９７８）
）、などが発表されており、この他、特開昭５５−１３
６２３５　、同５５−４９３２１．同５６−１６４１８
．同５６−１６４１７などの発明も公開されている。

しかしながら、これらの文献で使用される抗体はどれも
単一の抗体ではなく、正常細胞の抗原に対する抗体をも
併せ含有するため、癌細胞に対する選択性が不充分であ
って、このため、性が高い。

しかるに、本発明者らは癌細胞に対してのみ選択的に作
用しうるｍ−Ｍ瘍薬剤の創製に努力した結果、細胞融合
法により得られた融合細胞（ハイブリドーマ）が産生ず
る蛋白を精製することによりヒト癌細胞の抗原に対する
ＭｏＡｂを得ることに成功し、これを抗腫瘍薬剤又は細
胞毒性物質と化学的に結合させることにより、ここに癌
細胞に対して特異性のある選択性制癌剤を得ることがで
きた。

即ち、本発明の薬剤は癌細胞の成長を抑制し又はこれを
死滅させる作用を有する活性成分と該活性成分を担持し
、これを癌細胞に゛誘導する担体成分とから構成される
。活性成分は、今日制癌剤として実用されていると否と
を問わず強力な細胞毒性作用を有するものが好ましく、
例えばエンドキサン、ナイトロミン、サルコリシン、ミ
レラン、シクロホスファミドなどのアルキル化剤、アメ
トプテリン、８−アザグアニン、５−フルオロウラシル
、シトシンアラビノシド、６−メルカプトプリンなどの
代謝拮抗物質：マイトマイシンＣ，アクチノマイシンＤ
１アドリアマイシン、ダウノマイシン、ザルコマイシン
、などの抗生物質：ビンプラスチンなとのアルカロイド
；麦類の塩基性ポリペプチド（ＳＰｓ　、ＳＰａ　。

５ＰＪＪＨなど）、ジフテリア毒素、ボツリヌス毒素、
破傷風毒素、リシン（ｒｉｃｉｎ）のような毒性蛋白又
オケチドが例示できる。

担体成分はヒト癌抗原に対する単一抗体であって発明の
主要部を構成する。このものは、ヒナの癌細胞で感作さ
れた適当な実験動物、例えばＢＡＬＢ／ｃマウスの牌臓
細胞と、マウス由来の骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）と
の融合細胞（ハイブリドーマ）で、これをクローニング
することにより、ヒト癌細胞の癌特異抗原と結合能のあ
るＭｏＡｂ　　を産生する融合細胞を選択、分離し、次
いでこの選択された癌特異抗原と結合能を有する抗体産
能を有する融合細胞を増殖させることにより得られる。

培養法又は動物体内で増殖した融合細胞（ハイブリドー
マ）は採集され、それから適宜の手段で抗体が分離され
る。発明目的上、この癌抗体は可及的純粋でなければな
らず、理想的には電気泳動的に単一にまで純化されてい
るのが好ましい。

精製された抗体は１次いで所望の抗腫瘍性薬剤又は細胞
毒性物質と化学的に結合せしめられる。

この結合は、抗体の有する遊離のアミノ基又はカルボキ
シル基と薬剤の持つアミ７基、カルボキシル基、アルデ
ヒド基などを化学的に反応させることにより行われるが
、具体的には例えば以下の諸法がある。

（ｉ）　　薬剤が塩基性蛋白又はポリペプチドである場
合−この場合、結合体の合成中に抗体・抗体、薬剤・薬
剤、抗体。薬剤・薬剤゛などの副生物の生成を如何に防
ぐかという点が麓要である。さらに、結合体が抗体とし
て特異性を有しなければならないのも当然である。しが
し発明者は、薬剤中のアミノ基の大部分をグアニジル化
した後、その遊離アミノ基を、抗体中の瞭性アミノ酸１
部分のカルボキシル基とカルボジイミド試薬を用いて縮
合させると一般に良好な結果の得られることを確認した
。この方法を適用しつる具体的な薬剤としては、例えば
麦類の塩基性・ポリづタイドＣ３Ｐｓ　、Ｓ１％、、Ｓ
Ｐ時Ｈなど）、マイトマ゛イシン、ダウノマイシン、ア
ドリアマイシン、ＡＣＮｔＪ　、カルボコン、メルフア
ラン、クロラムブチルなどが例示される。

（ｉｏ　　薬剤が糖を１８成成分とする場合−この場合
、薬剤の糖部分における隣接したヒドロ−キル基（一部
アミノ基の場合もある）の間をメタ過ヨウ素酸ナトリウ
ムを用い切断してアルデヒド基を生成させた後、抗体の
塩基性アミノ基との間にシッフベースを形成させ１、こ
のシッフベースを水素化ホウ素ナトリウムのような選択
的還元試薬で還元して相当するアミノメチル体とする□
この方法により°結合できる薬剤化合物の具体例として
は、例えばダウノマイシン、アトリアマイシス、ＦＴ−
２０７、シタラビン、チオイノシンなどが例示される。

Ｃ榊　　薬剤がアミノ基を有する場合□この場合はグル
タルアルデヒドの如き２価アルデヒドにより薬剤と抗体
のアミン基とを交叉結合させる。結合物は必要に応じ飽
和化′合物に還元される。

以下実施例により発明の実施手段を具体的に述べるが、
もちろん説明は単なる例示であって発明思想の内包・外
延を限るものではない。

実施例１．　（ハイブリドーマ（２２５，２８８）の培
養及びＭｏＡｂの精製） 予めダルベツコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ
Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ）（Ｄ−
ＭＥＭ）、（１０９６の仔牛血清を含む）中で培養した
ノ１イブリドーマ（２２５，２８Ｓ）をＢＡＬＢ／ｃマ
ウス（♀、８〜１２　　週令）の腹腔内にｓ　ｘ　ｔｏ
’個づつ接種する。なお、マウスには接種の１週間前に
ブリスティン（２、６，１０，１４−テトラメチルペン
タデカン）を０，３−づつ腹腔内へ投与し、ハイブリド
ーマが生育し易い状態にしておく。

ハイブリドーマの接種後２週間目よりマウスが斃死する
まで腹水を収集する。この腹水を３００Ｏｒ、ｐ、ｍ、
、　１０分間遠心して赤卑球及びブリスティンを除く。

上清に飽和硫酸アンモニウム溶液を終濃度３３．３％に
なるように充分混合しながら加え、４＠Ｃで１時間以上
放置する。

生成した沈澱を遠心分離する（１００００ｒ、ｐ、ｍ、
’　。

１０分、４ｔ）。集められた沈澱を少量のリン酸塩緩衝
生理食塩水液（Ｃａ”　及びＭｇ＋なし）（ＰＢＳ）に
溶かし、透析用チューブ（ＣｅｌｌｏｐｈａｎｅＴｕｂ
ｉｎｇ−５ｅａｍｌｅｓｓ、　　米国Ｕｎｉｏｎ　Ｃａ
ｒｂｉｄｅ社製）中に填めて１夜ＰＢＳに対し透析する
。この間中くとも４回外液の交換を行い、最後に’／ｉ
ｏｏ　’リスー塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）に対し透析し
た後、予め同一緩衝液で緩衝化されたＤＥ−５２カラム
（２，５Ｘ１６．５ｍ　）に負荷する。このカラムを同
二の緩衝液を用い、但し該液中の食塩濃度が０〜０．５
Ｍで直線的に変化するように食塩を添加して溶出する。

溶出ピーク画分（２８０ｎｍ　　において）中のＭｏＡ
ｂの活性は　Ｉ−プロティンＡを用い、ヒト悪性黒色腫
（Ｈｕｍａｎ　Ｍａｌｌｉｇｎａｎｔ　Ｍｅｌａｎｏｍ
ａ）　ヘの結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）量で測定する。活性
画分を４ｔで濃縮後、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘ）Ｇ−２００カラム（１，５Ｘ９０．　）を通すと、
２８０ｎｍの吸収パターンでは単一のピークにまで精製
される。このＭｏＡｂは電気泳動的にも単一である。こ
のものは凍結乾燥するか又は凍結状態で保存できる。な
お、以上の培養及び精製単離手段は、ハイブリドーマの
産生ずる、ヒト悪性黒色腫抗原番こ対する他のＭｏＡｂ
　、例えば３７６．７４，３７６．９６，４６５．１４
，４７３．５４゜６５３．２５（以上の数値はハイブリ
ドーマとその産生ずるＭｏＡｂの種類を示す。）に対し
ても適用される。各抗体は悪性黒色腫の抗原に対しての
み特異的に結合するが、抗体の種類により多少結合部位
を異にするため、数種のＭｏＡｂと薬剤との結合体との
混合物は、結合部位を異にする数種の抗体・薬剤結合体
によるカクテル療法の可能性を示唆する。

実施例２（薬剤・ＭｏＡｂ結合体の製造、その１）０−
メチルイン尿素２．５８２　ｇ　（０，５モル）を水２
５−に溶かす。これをＩＯＮ苛性ソーグを用いてｐＨ３
，２に調整後、５Ｐ−Ｈ（麦類中から本発明者らにより
単離された塩基性ポリペフチドで４本の−５−Ｓ−鎖で
結ばれた４５ケのアミノ酸単位から構成される。特開昭
５６−４９３４２号参照。）　３００ｍｇを添加、溶解
させた後、さらに苛性ソーダ液を注加してｐＨ９，２ま
で上げ、４′ｃで４８時間放置する。次いで反応画分液
をセファデックスＧ−１０を用いゲル濾過し、溶出液を
凍結乾燥すると、グアニジル化５Ｐ−Ｈの標品２９９ａ
＋ｇが得られる。この標品λは、原５Ｐ−Ｈ中の５個の
ε−リジンの遊離アミノ基のうち約４個がグアニジル化
されているが、その抗腫瘍細胞活性は無処理の５Ｐ−Ｈ
と殆んど変らない。

以上のグアニジル化５Ｐ−Ｈ３５ｍｇ　ト、前例で得た
抗体の凍結乾燥品１０ｍｇを１５ｒｎｌのＰＢＳに溶解
し、これに、水溶性カルボジイミド水溶液６０μｌを添
加した後、６Ｎ塩酸でｐＨ８，５に調整し、室温下で４
時間撹拌する。反応液は撹拌中止後、直ちにセファデッ
クスＧ−２００カラム（１，５Ｘ’１Ｏｃｒｎ）を用い
てゲル濾過に附す。この際、溶離液としてＰＢＳを用い
、２４４膚の速度でカラム中を自然流下させ、Ｆ−１→
■の３個のフラクションに分画される、後述の如く、フ
ラクションＦ−１（チューブＮＯ９〜１０）及びＦ−Ｉ
Ｉ（チューブ屋１２〜１５）は所望の５Ｐ−Ｈ・ＭｏＡ
ｂ結合体である。これに対しフラクションＦ−１１１（
チューブ４２６〜３０）は、恐らく未反応のグアニジル
化５Ｐ−Ｈであろうと考えられる。

実施例３．（薬剤・ＭｏＡｂ結合体の製造、その２）ア
ドリアマイシン４０ｑをＩＷｌｌのＰＢＳ中に溶解し、
この溶液にやや′過剰量のメタ過ヨウ酸ナトリウム（Ｎ
ａ１０４）を加え、暗所で１時間放置する。

得られた反応液にグリセリン水（１Ｍ）を終濃度００５
Ｍになるように加えて過剰の過ヨウ素酸ソーダを分解す
る。この薬剤溶液に、０．１５Ｍの炭酸カリウム溶液１
−中に溶かした実施例１の抗体２０Ｉｌｖを加え（ｐＨ
９，５、）　、　、室温で１時間反応させる。この反応
液に、水素化ホウ素ナトリウムを該反応液ＩＴｎ１当り
０．３〜の割で加え、３７°Ｃで２時間放置してからゲ
ル濾過すると、アドリアマイシン・ＭｏＡｂ結合体が得
られる。

実施例４．（薬剤・ＭｏＡｂ結合体の製造その３）実施
例１で得た抗体３０〜とダウノマイシ７５〜をＰＢＳ　
３艷に溶解し、これにグルタルアルデヒドを終濃度０．
１％になるように加え、室温で１５分間放置する。得ら
れた反応液をゲル濾過して精製すると、μ的のアドリア
マイシン・ＭｏＡｂ結合体が得られる。

〔本発明物質の免疫学的性質〕

以上各実施例で得られた薬剤・抗体結合体は標的癌細胞
に対し選択的に結合する性質を有する０以下、本事実を
証する実験事実を記載する。

（実験材料） 細　胞：　Ｃ，ｏｌｏ３８細胞（ヒト悪性黒色腫細胞）
、及びＲａｊｉ細胞（Ｂ−細胞 由来のヒトリンホイド細胞） 培養液：　Ｃｏ１ｏ３８用−１％％仔牛血清添加ダルヘ
ツコ変形イーグル培地（前出） Ｒａｊｉ用−１０％仔牛血清添加ＲＭＰ　１１６４０培
地 薬　剤：実施例１記載のＳＰ７Ｈ＝ＭｏＡｂ結合体、Ｐ
Ｉ３５に溶解して適用。なお、稀釈 には夫々の培地溶液を使用。

（実験方法）　− から、プラスチック製プレートに各プレート当リ１０　
　個づつ細胞を散布する。これらのプレートに薬剤（結
合体）を終濃度と、して１ｍｌ当り０−１００μｇ添加
し、４ｔで１時間撹拌しながら放置する。次いで細胞を
同様に５回洗い、黄色ブドウ吠球菌（Ｓｔａｐｈ、　ａ
ｕｒｅｕｓ　ｓｐ、）由来の、１８５■で標識されたプ
ロティンＡを適量加えて１時間放置し、同様に５回洗滌
後、ガンマ−カウンター（ベックマン社（米国）製）を
用いて１２５■の細胞に対する付着量を測る。因みに、
プロティンＡは結合体のＦｃ部分に結合するため、細胞
に結合体が結合しておればプロティンＡもそれに結合す
るので、放射能の測定により結合の有無及び程度が判る
。

（実験結果） 以上の実験結果は第２図に示される。図示の如く癌特異
抗原を持つＣｏ１ｏ３８は実線で、該抗原を持たないＲ
ａｊｉは点線で示される。ＭｏＡｂ（２２５，２８Ｓ）
　、結合体１（Ｆ−１５、結合体ＩＩ　（Ｆ−１１）は
その濃度に従ってＣｏ１ｏ３８細胞に結合しているのが
判る。これに反し適応抗原を有しないＲａｊｉ細胞に対
しては、抗体（２２５，２８５）　、結合体１　（ＦＬ
Ｉ）及び結合体ＩＩＣＦ−１１）のいづれも全く結３合
していない。フラクションＦ−Ｉ［１はＣｏｌ。

細胞に結合しないので、ゲル濾過時の挙動と併せて未反
応の５Ｐ−Ｈであろうと推測される。

なお、対照とした未結合の薬剤単独（ＳＰ−Ｈ）は、抗
体を有しないため当然のことながらＣｏｌ。

及びＲａｊｉいづれの細胞に対しても結合しない。

〔本発明物質の細胞障害効果〕

本発明に係る薬剤・抗体結合体は抗原細胞に対し明らか
に選択性を有する。以下、この結論を支持する実験事実
を示す。

（実験材料） １掲実験と同じ。

（実験方法） 各細胞をプレート当り２×１０　個づつ分散させ、同時
に各結合体を培地ｌ−当り（）−１００μｌづつ添加し
て３７’Ｃ、４８時間培養°した後、一部の細胞を採取
してその生死を終濃度０．０５％のトリバンプルーに対
する染色性の存否（染色されないものを″生理、染色さ
れるものを″死″とじて判断）をチュルクービエル力−
（Ｔｉｉｒｋ−Ｂｉｉｒｋｅｒ）計算盤を用いて算定し
た。

（実験結果） 実験結果は添附第３図及び第４図に示される。前記結合
体Ｉ及び■はメラノーマ抗原を有するＣｏ１ｏ３８細胞
に対し細胞゛障害効果を示すが（第３図参照）、癌抗原
を有しないＲａｊｉ細胞には殆んど障害効果を示さない
（第４図参照）。これに反し対照として用いたＭｏＡｂ
（２２５゜２８Ｓ）はいづれの細胞をも傷害せず、また
薬剤単独（ＳＰ−Ｈ）及びフラクション、Ｆ−１１１は
どの細胞に対しても強い障害作用を呈している。

〔本発明物質の細胞生理作用〕

本発明物質が標的細胞に対し阻害効果を発揮する理由は
、薬剤単独使用時と同様であろうと思われる。これを検
証するため、細胞のチミジン取りこみ能を阻害する作用
があることが判っている５Ｐ−Ｈと抗体との結合体につ
き以下の実験を行う。

（実験材料） 前掲各実験と同じ。

（実験方法） 各細胞をプレート当り各２×ｌθ　個つつ分散し、同時
に各結合体及び対照物質を培地ｌ−当り０〜２００８ｇ
づつ゛添加して３ｒ’ｃ、ｓ時間培養する。その後、各
プレートに１μＣｉのヤーチミジンを加え、１６時間経
過後に夫々の細胞の取りこみチミジン量を測定する。

（実験結果） 第５図が示すとおり、結合体Ｉ及び■は、標的細胞のＣ
ｏ１ｏ３８に対しその添加濃度に従ってチミジンの取り
こみを阻害している。これに対し、第６図に示す適合抗
原を持たないＲａｊｉ細胞ではチミジンの取りこみは全
（影響を受けない。なお、対照である抗原単独及び５Ｐ
−Ｈ単独では、予想されるとおり、前者はチミジンの取
りこみを全く阻害せず、後者は強い阻害を示す。

以上各実験が示す如く、本発明に係る薬剤・ＭｏＡｂ結
合体は、適合抗原を持つ特定の癌細胞に対してのみ強い
親和性を現わし、当該癌細胞を死滅させ又はその増殖を
阻止する効果を有する反面、正常細胞に対しては殆んど
影響を与えないので、選択的癌治療剤としての貢献が嘱
望される。

本発明物質は臨床的に血管内又は筋肉内注射の形で投与
されるか又は癌組織に対し直接適用されるのが最適であ
ろう。先の実験結果が示すとおり、結合体は標的讐細胞
の癌特異抗原と結合し、その後、癌細胞の食作用（ｐｈ
ａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）及び歌作用（ｐｉｎｏｃｙｔｏ
ｓｉｓ）により内部に取りこまれる結果、当該細胞に致
死効果を奏するものと推定される。この際、適応抗原を
有しないその他の正常細胞にはこの結合体が結合しない
ため、当然致死作用が表われないものと考えることがで
きる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、５Ｐ−Ｈ・抗体結合反応生成物のセファデッ
クスＧ−２００による分画状況を示すグラフ（溶出曲線
図）、第２図は、Ｓ　Ｐ−Ｈ・抗体結合体のＣｏ１ｏ３
８細胞に対する選択的吸着能を示すグラフ、第３図及び
第４図はＳＰ−ＨＯＭｏＡｂ結合体のＣｏＩ。 ３８細胞（メラノーマ細胞）及びＲａｊｉ細胞（正常細
胞）に対する阻害効果を示すグラフ、第５図及び第６図
はＳＰ−Ｈ＝ＭｏＡｂ結合体のＣｏ１ｏ３８細胞及びＲ
ａｊｉ細胞に対するチミジン取りこみ阻害効果を示すグ
ラフである。第２図〜第６図を通じ実線はＣｏ１ｏ３８
に対する結果を、点線はＲａｊｉ細胞に“対する結果を
示し、またへ、○、・、口、及びムは夫々ＭｏＡｂ単独
、結合体１（第１図Ｆ−１）、結合体■（第１図Ｆ−１
１）　、フラクシヨン■（第１図Ｆ−ＢＴ−）及び５Ｐ
−Ｈ単独（物質記号５ＵＮ９１０２　）を現わす。 特許出願人　　サントリー株式会社 ４Ｉ４１ｒ号（各介Ｍｔ４ｍ０ 第３図 第　４　図 第５１！ｌ　　　　　　第６図 手続補正書（自発） 昭和５７年　８月２８日 昭和５６年　特　許　順第１４２１５８号２、発明の名
称　　選択性制癌剤 ３、　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 ４、代理人 【１）　　明細書８頁、１１行目＝「アトリアマイシス
」とあるのを「アトリアマイシスリと改める。 （２）　　同１３頁、末行：「アドリアマイシン」とあ
るのを「ダクノマイシン」と改める。 （３）　　同１４頁、下から７行目＝「実施例１」とあ
るのを「実施例２」と改める。 （４）　　同１６頁、９行目：「Ｔ・・・障害効果」と
あるのを「Ｔ・・・障害効果（その１）」と改める１つ
（６）　　同１７頁、下から〜８行目さ７行目きの闇に
下その１の実験を実施例３で得られたアドリアマイシン
・ＭｏＡｂ結合体を用いて反復した。結果を第７図に示
す。図示の如く対照の抗体単独はＣｏ１ｏ３８細胞に対
し全く致死効果を有しな後者は前者に比し一層強力でる
る。」 １６１　　ｌ５１１細書１８頁、下から２行目と末行と
の闇に丁亥を挿入する。 「〔本発明物質の実験動物に対する抗腫瘍効果（その１
）〕 前寅験において、本発明物質が試験管内で標的細１！に
対し選択的π細胞障害作用を奏する事実が確認されたの
で、次に実際の標的細胞（ヒトメラノーマ、、Ｃｏ１ｏ
３８）をヌードマウスに接種し、これに本発明物質を投
与して生体内での有効性を検討したところ、その効果を
明らかに観察できた。以下、その実験事実を記載する。 （実験材料） 細　胞：　Ｃｏ１ｏ３８（ヒト悪性黒色腫細胞）培養液
：１０％仔牛血Ｗ！！添加 ＲＭＰＩ　　１６４０培地。 薬　剤：実施例２記載のＳＰ−Ｈ−ＭｏＡｂ結合体 幼　物：　Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ　Ａ　（−ｎ　ｕ　
／　Ｊ　ＣＲ）ヌードマクス９６眉令。ヒトメラノ ーマ細）尼は各マクスに３．６Ｘ１０’個づつ皮下注射
。薬剤及び対照（抗体 単独及び５Ｐ−Ｈ単独）＃ｉ犬々０，１ＩＩｖ／マクス
、１Ｍｇ／−ｖクス及び０．５茹 Ｉｌｖ／ｋＣＩＩの割で１．３，５及び２０目ＶＣ腹腔
内注射。 （実験結果及び考Ｉｔ） 結果は第８図に示される。対照群のマウス（各６匹）は
３０日以内に死亡した。即ち５Ｐ−Ｈ単独又は抗体率、
独の注射はマク・スの生存を延長できなかったが、本発
明薬剤投与群（各６匹）は対照群に比べて明らかに生存
日数が延長され、３７日後まで生存した。 〔本発明薬剤の実験動物に対する腫瘍効果（その２）〕 その１の実験において、標的＠胞を腹水型のＣｏ１ｏ３
８　ＶＣ代えて同様の実験を反復した結果を第９図とし
て示す。図示の如く対照群のマクスは２０日までに全部
死亡したが、本発明薬剤投与群のマクスは早くとも２５
日間生存し、１匹は６０日後もなお生存した。従って本
発明薬剤の効果は前例に比べ一層明瞭である。Ｊ（７）
　　同２０頁、８行目：［・・・グラフである。 」とあるのを、「・・・グラフ、第７図はアドリアマイ
シン・Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ結合体のＣｏ１ｏ３８細胞に斧す
る細胞障害効果を示すグラフ、第８図及び第９図は、本
発明に係るＳＰ−Ｈ−ＭｏＡｂ結合体の担癌マクスに対
する延命効果を示すグラフである。」と改める。 （８）　　同２０頁、１４行目：「現わす。」の次に丁
亥を加える。 ［また、第７図中Ｏはアドリアマイシン・ＭＯＡｂ結合
体、（＃はアドリアマイシン単独、ΔはＭｏＡｂ単独を
、第８図及び第９図中ムは５ｐ−Ｈ−Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　
結合体ヲ、Ｏ’ｄ　Ｍ　ｏ　Ａ　ｂ　ｌｅａ＆、・は薬
剤無投与を、ムは５Ｐ−Ｈ単独を示ｆ、　Ｊ（９１別紙
のとおり図面第７図〜第９図を補充する。 ９　添付書類の目録 （１１図面（第７図から第９図）　　　１通０　　５　
１０　１５　２０　２５　３０　３５日数 第９図 日数

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　ハイブリドーマの産生じたヒトの癌抗原に対
   する単クローン性抗体と制癌作用物質とが化学的に結合
   している選択性制癌剤。
2. （２）　　ハイブリドーマが、ヒト悪性黒色腫で感作し
   た動物（ＢＡＬＢ／マウス）の牌臓細胞と動物の骨髄腫
   細胞（ミエローマ細胞）との融合細胞ポリペプチドであ
   る特許請求の範囲第１（１）項又は第（２）項記載の制
   癌剤。 アミドを構成して結合している特許請求の範囲第（３）
   項記載の制癌剤。 構成して結合している特許請求の範囲第（＋）項又は第
   （２）項記載の制癌剤。 結合している特許請求の範囲第（１）項又は第（２）飽
   和２価アルデヒドを介して交叉結合している特許請求の
   範囲第（１）項又は第（２）項記載の制癌剤。