JPS58118520A - 抗腫瘍性蛋白複合体およびその製造法 - Google Patents
抗腫瘍性蛋白複合体およびその製造法Info
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- JPS58118520A JPS58118520A JP136182A JP136182A JPS58118520A JP S58118520 A JPS58118520 A JP S58118520A JP 136182 A JP136182 A JP 136182A JP 136182 A JP136182 A JP 136182A JP S58118520 A JPS58118520 A JP S58118520A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は＃規な抗腫傷性蛋白複介体とその一造法に関す
る。更に詳しくは、本発明は、杭暉傳免疫グロブリンか
らなる構成部分と、制ガン剤からなる構ＦＩ？、部分を
有する、特に悪性・叢罐の治１１！薬として用いられる
、新規な蛋白複合体とその製造法ＶＣ１Ｉｌするもので
ある。
る。更に詳しくは、本発明は、杭暉傳免疫グロブリンか
らなる構成部分と、制ガン剤からなる構ＦＩ？、部分を
有する、特に悪性・叢罐の治１１！薬として用いられる
、新規な蛋白複合体とその製造法ＶＣ１Ｉｌするもので
ある。
長性陣竿、即ちガンの治療薬（制ガン剤）としてはこれ
まで多くのものが知られているが、これらの婆はガン細
胞のみならず正常ＩＩＢ＃！！にも相当の毒性を発揮す
るので、ガン細胞を死責さ忙るｌ＠１ｌｔｃＩで十分に
その使用量を上げることができないという欠点を有して
いる。
まで多くのものが知られているが、これらの婆はガン細
胞のみならず正常ＩＩＢ＃！！にも相当の毒性を発揮す
るので、ガン細胞を死責さ忙るｌ＠１ｌｔｃＩで十分に
その使用量を上げることができないという欠点を有して
いる。
本発明者は、制ガン剤をガン細胞とぞけ特異的に績合し
正常細胞には結合しないといつ性質（以下では単に、特
異性という。）をもった特殊なキャリヤーと複合体を作
らせれば、制ガン剤はガン４Ｊ＠くだけ吸引され、この
欠点が解決されることを見い出した。この特殊なキャリ
ヤーとして抗ｑｑ免疫グロブリンを利用する。ガン噸り
の血中あるいけガン細胞の表面〈は、極めて電着である
が、抗ＴＷａ痒抗体（抗、嘩瘍免疫グロブリン）が存在
する。オた、これ迄実際的にはガン組織を動物に免疫し
、更にヒト正常組織で吸収するととによって、抗−痺抗
体が得られてき九。このような同一個体の、同種の、又
は異種の抗呻瘍抗体は、必ずしもガン細胞に付して細胞
傷害作用を発揮すると４限ちないが、筆めて高い特異性
をもってガン細−と結合するという共通した性質を有し
ている。念とえげ抗ＡＦＰ （α−フェトプロティン）
免疫グロブリンはこの糧の抗帽瘍免疫グロブリンの−１
で、上述のように制ガン剤を選択的（ガン細胞に吸引さ
せるためのキャリヤーとして利用できる。
正常細胞には結合しないといつ性質（以下では単に、特
異性という。）をもった特殊なキャリヤーと複合体を作
らせれば、制ガン剤はガン４Ｊ＠くだけ吸引され、この
欠点が解決されることを見い出した。この特殊なキャリ
ヤーとして抗ｑｑ免疫グロブリンを利用する。ガン噸り
の血中あるいけガン細胞の表面〈は、極めて電着である
が、抗ＴＷａ痒抗体（抗、嘩瘍免疫グロブリン）が存在
する。オた、これ迄実際的にはガン組織を動物に免疫し
、更にヒト正常組織で吸収するととによって、抗−痺抗
体が得られてき九。このような同一個体の、同種の、又
は異種の抗呻瘍抗体は、必ずしもガン細胞に付して細胞
傷害作用を発揮すると４限ちないが、筆めて高い特異性
をもってガン細−と結合するという共通した性質を有し
ている。念とえげ抗ＡＦＰ （α−フェトプロティン）
免疫グロブリンはこの糧の抗帽瘍免疫グロブリンの−１
で、上述のように制ガン剤を選択的（ガン細胞に吸引さ
せるためのキャリヤーとして利用できる。
特開昭５１−１４４７２３には、タウノマイシン等の制
ガン剤を抗ｌｉｌ瘍争疫グロブリンのＦａｂ’ ２９体
に共有的に結合させ丸薬削−抗体複合物からなる抗ＩＪ
ＩＩｃ剤が開示されている。この複合物は４的ガン細胞
に薬刊をかｆｋｂ選択的に吸引させつるという点で帰れ
たものであるが、抗体（Ｆａ’ｂ’２當体）に結合した
グウノマイシン等の制ガン剤れ、ガン細胞のみならず正
常細胞に対しても依然として細胞毒性をイイしているが
故に、ガン細胞のみを＊ｍするという点では未だ十分で
はない。すなわち用いらｈた杭１噸免疫グロブリンの特
異性に問題が喪っている。
ガン剤を抗ｌｉｌ瘍争疫グロブリンのＦａｂ’ ２９体
に共有的に結合させ丸薬削−抗体複合物からなる抗ＩＪ
ＩＩｃ剤が開示されている。この複合物は４的ガン細胞
に薬刊をかｆｋｂ選択的に吸引させつるという点で帰れ
たものであるが、抗体（Ｆａ’ｂ’２當体）に結合した
グウノマイシン等の制ガン剤れ、ガン細胞のみならず正
常細胞に対しても依然として細胞毒性をイイしているが
故に、ガン細胞のみを＊ｍするという点では未だ十分で
はない。すなわち用いらｈた杭１噸免疫グロブリンの特
異性に問題が喪っている。
本発明者らは、先行技術の有する欠点を解消し、ガン細
胞にのみ選択的に強力な毒性を発揮する抗陣瘍性物質を
開発すべく鋭意研究の結果本発明ＶＣ到達した。
胞にのみ選択的に強力な毒性を発揮する抗陣瘍性物質を
開発すべく鋭意研究の結果本発明ＶＣ到達した。
即ち、本発明は抗障瘍免疫グロブリンからなるＩ！ＩＩ
峻部分色部分ン剤ふらなる構成部分を有する、Ｆ記式（
１）で表わされる抗稀瘍性蛋白複合体でちる。
峻部分色部分ン剤ふらなる構成部分を有する、Ｆ記式（
１）で表わされる抗稀瘍性蛋白複合体でちる。
Ａｂｎ、−Ｘｒ、２−ＡＴＤｎ、・・・−−−−（ＩＩ
ここでＡｂ呟抗腫瘍免疫グロブリンからなる構成部分を
、ＡＴＤ ｉｊ制ガン剤からなる構成部分を表わす。Ｘ
けＡｔ）とＡＴＤを架橋するための構成部分を表わし、
ｎｌ、ｎ２及びｎｓｈ各々独立の１０以下の幣数を表わ
す。
ここでＡｂ呟抗腫瘍免疫グロブリンからなる構成部分を
、ＡＴＤ ｉｊ制ガン剤からなる構成部分を表わす。Ｘ
けＡｔ）とＡＴＤを架橋するための構成部分を表わし、
ｎｌ、ｎ２及びｎｓｈ各々独立の１０以下の幣数を表わ
す。
＆祐明にシｂて抗順瘍免疫グロブリンとは、たとえばα
−フェトプロティン（ＡＦｐ ） やカルジノエンブ
リオニックアンティジエン（ｃｉＡ）ｔサル、ウマ、ウ
シ、ヤギ、ヒツジ、ウサギ等の動物に４免疫した血清か
ら、コーンのエタノール分画法、硫安分画法、イオン交
換クロマトグラフィー法等の公知の手段によって調製さ
れもところの抗・Ｉ１１痺活性を有する蛋白質（免疫グ
ロブリン）あるいは、同杭原を動物に免疫して得た抗体
量生性りンバ球を、例えば骨髄帰痺＃Ｍ胞と融合させて
、培養可能で抗体を産生する重含細胞（ハイプリドーマ
）を得、これをｉｎ ”／ｒ ｊ ｒ。
−フェトプロティン（ＡＦｐ ） やカルジノエンブ
リオニックアンティジエン（ｃｉＡ）ｔサル、ウマ、ウ
シ、ヤギ、ヒツジ、ウサギ等の動物に４免疫した血清か
ら、コーンのエタノール分画法、硫安分画法、イオン交
換クロマトグラフィー法等の公知の手段によって調製さ
れもところの抗・Ｉ１１痺活性を有する蛋白質（免疫グ
ロブリン）あるいは、同杭原を動物に免疫して得た抗体
量生性りンバ球を、例えば骨髄帰痺＃Ｍ胞と融合させて
、培養可能で抗体を産生する重含細胞（ハイプリドーマ
）を得、これをｉｎ ”／ｒ ｊ ｒ。
または血清やｇＬ腔沿から爛製さすＬる棒めて特鴨性の
高い抗罎瘍活性を有する蛋白縄（ｔ＋疫ダグロブリンを
いう、また、弊廖組織から界面活性剤等の変性酬で種部
抗体を遊離させ、これから前述と同様な手段でＭＷされ
る抗挿無活性を有する蛋白質も本＠明の抗４亀免疫グロ
ブリンに含オれる０本発明の抗庫痺性蛋白復合体の構成
部分の１つである抗・−・―瘍兎疫グロブリンからなる
構成部分とけ、前述のごとき４Ｐ、＃グロブリンからな
る構成部分を意味する。、６島布る免疫グロブリンは、
分子甲に未情アミノ萬や槽成アミノ管のりジンに由来す
るアミノ基を複数個有しているので、かかるアミノ基を
利用して本発明の抗１１！瘍性蛋白複合体が製造される
。
高い抗罎瘍活性を有する蛋白縄（ｔ＋疫ダグロブリンを
いう、また、弊廖組織から界面活性剤等の変性酬で種部
抗体を遊離させ、これから前述と同様な手段でＭＷされ
る抗挿無活性を有する蛋白質も本＠明の抗４亀免疫グロ
ブリンに含オれる０本発明の抗庫痺性蛋白復合体の構成
部分の１つである抗・−・―瘍兎疫グロブリンからなる
構成部分とけ、前述のごとき４Ｐ、＃グロブリンからな
る構成部分を意味する。、６島布る免疫グロブリンは、
分子甲に未情アミノ萬や槽成アミノ管のりジンに由来す
るアミノ基を複数個有しているので、かかるアミノ基を
利用して本発明の抗１１！瘍性蛋白複合体が製造される
。
本発明におする制ガン剤からなる構成部分としては反応
性の茅を有する制ガン剤、４？にアミノ基を有する制ガ
ン剤が挙げられる。そのような制ガン剤の例を下記に示
す： ｔ アルキル化剤 ８ａｒｃｏｌｙａｉｎ ＣＮＵ −し ５−Ｆｌｕｏｆｏｃｙｔｏｅｉｎｅ、 Ｃｙｔｏｓｉｎ
ｅａｒａＭｎｏｓｉｃＬｅ。
性の茅を有する制ガン剤、４？にアミノ基を有する制ガ
ン剤が挙げられる。そのような制ガン剤の例を下記に示
す： ｔ アルキル化剤 ８ａｒｃｏｌｙａｉｎ ＣＮＵ −し ５−Ｆｌｕｏｆｏｃｙｔｏｅｉｎｅ、 Ｃｙｔｏｓｉｎ
ｅａｒａＭｎｏｓｉｃＬｅ。
ＩＣ
五 抗ガン性抗生物貞
Ｐｕｔｏｍｙｃｉｎ
（Ａｇｕｓｅｒｉｎｓ）
（ＤＯＮ）
Ａｅｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｃ，Ｄ
Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ
Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ （ＢＬＭ）
Ｄａｕｎｏｍｙｏｉｎ
Ｎｅｏｃａｒｇｉｎｏｓｔａｔｉｎ （ＮＣ８）本
その他 Ｍｅｔｙｌ −ＧＡＧ 但し、本＠明の制ガン構成部分は、上に例示したものに
限定されるものではない。
その他 Ｍｅｔｙｌ −ＧＡＧ 但し、本＠明の制ガン構成部分は、上に例示したものに
限定されるものではない。
本発明における架橋構成部分け、杭帥億免疫グロブリン
中のアミノ基と、及び制ガン剤中のアミノ基と反応する
ことができる反応性基を有する架橋剤に由来する。か奉
る化合物としては、たとえばカルボニル化合物とくにジ
アルデヒドたとえ＃′ｉ２〜６個の炭素原子を持つ脂肪
族ジアルデヒドがあげられる。オた稿々のカルボジイミ
ド酵導体九とえばＮ−エチル−Ｎ’−（５−ジメチルア
ミノプロピル）−カルボジイミドがあげられる。架橋反
応後の杭体性の低下が少（へこと及び架橋反応が少ない
ことの壱から、４〜６側の炭′Ｒ原子を持つ脂肪族ジア
ルデヒド特にグルタルアルデヒドが轡に好ましい。
中のアミノ基と、及び制ガン剤中のアミノ基と反応する
ことができる反応性基を有する架橋剤に由来する。か奉
る化合物としては、たとえばカルボニル化合物とくにジ
アルデヒドたとえ＃′ｉ２〜６個の炭素原子を持つ脂肪
族ジアルデヒドがあげられる。オた稿々のカルボジイミ
ド酵導体九とえばＮ−エチル−Ｎ’−（５−ジメチルア
ミノプロピル）−カルボジイミドがあげられる。架橋反
応後の杭体性の低下が少（へこと及び架橋反応が少ない
ことの壱から、４〜６側の炭′Ｒ原子を持つ脂肪族ジア
ルデヒド特にグルタルアルデヒドが轡に好ましい。
式（ＩＪ Ｋおけるｎｌ、ｎ２及びｎ１ｉｊ、各々独立
の１０以下好寸しくＦｉ６以下の整数である。
の１０以下好寸しくＦｉ６以下の整数である。
ｎｌＦｉ通常１であるのがよいと考えられる。
ｎ２があ寸抄大きいと、抗障標免疫グロブリンの好オし
く、ｎｌ：ｎ３！１：１＃１：６の範囲が特に良い。
く、ｎｌ：ｎ３！１：１＃１：６の範囲が特に良い。
本発明に係る抗ｍ瘍性蛋白複合体を作るためには、（ａ
＋架橋部分を構成する架橋剤と抗４欅免疫グロブリンと
の反応、（旬架橋剤と制ガン剤との反応を任意の順序で
又は同時に、慣用の反応条ｔ′←下で行うことができる
。グルタルアルデヒドを架橋剤としてアトリア！イクン
を複合させる４合を例にとると、先ず０．１慢グルタル
アルデヒド水溶１ｔ１．６ｍに、生理的食塩水に溶解し
たアドリアマイシン溶液（１ｍＭ） ２−を加えて室温
で１時間根Ｉｌｌ混和する。これを０〜４むの部嘴に４
し、アドリアマイシン同上液２４１４．、さらに抗＃瘍
免疫グロブリン生理的食塩水溶液（０，０２ｍＭ） ４
畦を順次攪拌しつつ治下するつ１０〜１・６時間振盪混
和して複合体を＠成させる。その後反応混合物をゲル濾
過あるいは透析することＫよって未反応の架橋剤や低分
子量反応生成物と目的とする複合体とが分離される。
＋架橋部分を構成する架橋剤と抗４欅免疫グロブリンと
の反応、（旬架橋剤と制ガン剤との反応を任意の順序で
又は同時に、慣用の反応条ｔ′←下で行うことができる
。グルタルアルデヒドを架橋剤としてアトリア！イクン
を複合させる４合を例にとると、先ず０．１慢グルタル
アルデヒド水溶１ｔ１．６ｍに、生理的食塩水に溶解し
たアドリアマイシン溶液（１ｍＭ） ２−を加えて室温
で１時間根Ｉｌｌ混和する。これを０〜４むの部嘴に４
し、アドリアマイシン同上液２４１４．、さらに抗＃瘍
免疫グロブリン生理的食塩水溶液（０，０２ｍＭ） ４
畦を順次攪拌しつつ治下するつ１０〜１・６時間振盪混
和して複合体を＠成させる。その後反応混合物をゲル濾
過あるいは透析することＫよって未反応の架橋剤や低分
子量反応生成物と目的とする複合体とが分離される。
本発明の抗帰瘍性蛋白欅合体は、呻痺細胞に対し毒性を
発揮する制ガン剤と、帥標細胞を特異的に１ｌＦｌｌｌ
ｌ制ガン削を腫痒細胸オで誘導するためのキャリヤーで
あると共に、制ガン剤を細胞内部にとり込ませる働きを
する抗４ｓ免疫グロブリンとからなるものであるが、こ
の複合体は以下のごとき優れ九特徴を有する。
発揮する制ガン剤と、帥標細胞を特異的に１ｌＦｌｌｌ
ｌ制ガン削を腫痒細胸オで誘導するためのキャリヤーで
あると共に、制ガン剤を細胞内部にとり込ませる働きを
する抗４ｓ免疫グロブリンとからなるものであるが、こ
の複合体は以下のごとき優れ九特徴を有する。
（１７本発明の複合体において社、免疫グロブリーンが
実質的に原形を保持した状部で存在しているので、抗ｗ
ｇ免疫グロブリンの有する一瘍細胞Ｍ織能や補体活性能
がその寸＼侮持されている。
実質的に原形を保持した状部で存在しているので、抗ｗ
ｇ免疫グロブリンの有する一瘍細胞Ｍ織能や補体活性能
がその寸＼侮持されている。
（２１本発明の複合体においては、制ガン剤の杭＠欅活
性はそのオ＼保持されている。その上正常Ｉａ嘲に対す
る制ガン剤の毒性は極２に減少せしめられている。
性はそのオ＼保持されている。その上正常Ｉａ嘲に対す
る制ガン剤の毒性は極２に減少せしめられている。
以下、実権例′によ〉本発明を詳述する。
夷１１１１ｆ１
（イ） ウサギ抗ラットα−フェトプロティン抗体の１
製 ラットミーフェトプロティン（以下ＡＦＰと雀略する）
で過免疫したウサギ２匹より、抗ｒｆｌ清４５４を得た
。抗血清は非働化の後、１０ｍＭＩＪン醗塩緩衝化食塩
水４５鴫で金沢し、次いでＡＩＦＰセファロース（ブロ
ムシアン法でＡＦｌ結合させ次セファロース４Ｂ、ゲル
１べ当シ２．３ダ結合し九ものを約１４−用い九、）に
適した。ゲルは１１０１ＥＬリン酸塩緩傭化食塩水５０
−１０．５Ｍ塩化ナトリウム５Ｇ−更に水１００蛾で光
分洗浄した後、閣２．８の４＠で抗ＡＦＰ抗体を溶出し
九、溶出後直ちに、０．５Ｍトリス＠峻曖衝液（ｐＨ８
，５）１０分１溶積を加えて−を上げ、次に限外濾過法
によ抄濃縮し、０．９嘔壇化ナトリクム水溶液に充分透
析した。こうして得られ九抗ＡｉＦＰ抗体け、８Ｄ８−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動的に均一であった。
製 ラットミーフェトプロティン（以下ＡＦＰと雀略する）
で過免疫したウサギ２匹より、抗ｒｆｌ清４５４を得た
。抗血清は非働化の後、１０ｍＭＩＪン醗塩緩衝化食塩
水４５鴫で金沢し、次いでＡＩＦＰセファロース（ブロ
ムシアン法でＡＦｌ結合させ次セファロース４Ｂ、ゲル
１べ当シ２．３ダ結合し九ものを約１４−用い九、）に
適した。ゲルは１１０１ＥＬリン酸塩緩傭化食塩水５０
−１０．５Ｍ塩化ナトリウム５Ｇ−更に水１００蛾で光
分洗浄した後、閣２．８の４＠で抗ＡＦＰ抗体を溶出し
九、溶出後直ちに、０．５Ｍトリス＠峻曖衝液（ｐＨ８
，５）１０分１溶積を加えて−を上げ、次に限外濾過法
によ抄濃縮し、０．９嘔壇化ナトリクム水溶液に充分透
析した。こうして得られ九抗ＡｉＦＰ抗体け、８Ｄ８−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動的に均一であった。
（傅 抗・４瘍性蛋白複合体の製造（ＮＯ０１憾グルタ
ルアルデヒド水溶液１．６４に生理的食塩水に溶解した
アドリアマイシン液（１ｍＭ）２１１１．を加えて室温
でＩ ＦＥ＃ ＋ｉ 、欅拌嘔盪する。かくして生じ九
アドリアマイシンーグルタルアルデヒド複合体［０〜４
ｊ″でさらにアドリアマイシン同上液２ｍと前記（イｌ
でえられ九抗ＡＦＰ免疫グロブリンの生理的食塩水＃ｌ
敵（０，ＯｌｍＭ） ４輔とを順次横押しつつ滴下する
。そのオ＼１゛０〜１６時開墨、−シて。
ルアルデヒド水溶液１．６４に生理的食塩水に溶解した
アドリアマイシン液（１ｍＭ）２１１１．を加えて室温
でＩ ＦＥ＃ ＋ｉ 、欅拌嘔盪する。かくして生じ九
アドリアマイシンーグルタルアルデヒド複合体［０〜４
ｊ″でさらにアドリアマイシン同上液２ｍと前記（イｌ
でえられ九抗ＡＦＰ免疫グロブリンの生理的食塩水＃ｌ
敵（０，ＯｌｍＭ） ４輔とを順次横押しつつ滴下する
。そのオ＼１゛０〜１６時開墨、−シて。
アドリアマイシン、グルタルアルデヒド、抗ＡＦＰ免疫
グロブリンの複合体を形成せしめる。
グロブリンの複合体を形成せしめる。
ついで反応物性、セファデックス（８ｅｐｈａｄｅｘ）
Ｇ２５ （２，５α×２３側）のゲルｐ過に≠為けて、
高分子の複合体を分離し、塩析を行って＃縮する。
Ｇ２５ （２，５α×２３側）のゲルｐ過に≠為けて、
高分子の複合体を分離し、塩析を行って＃縮する。
セファデックスＧ−２５のゲル濾過により得られる物の
吸収のデータを第１図に示す、ピーク（φ６〜９）は高
分子の溶出される位置くあ抄、抗体タンパクの吸収（−
１１＋；２８０ ｚ＋ｍ）とアドリアマイシンの吸収（
月４９５ｎｌｌ ） トが共に認められる。結合しない
アドリアマイシンは分子量が小さいので図示されていな
いはるかに右方の分画に境われる。
吸収のデータを第１図に示す、ピーク（φ６〜９）は高
分子の溶出される位置くあ抄、抗体タンパクの吸収（−
１１＋；２８０ ｚ＋ｍ）とアドリアマイシンの吸収（
月４９５ｎｌｌ ） トが共に認められる。結合しない
アドリアマイシンは分子量が小さいので図示されていな
いはるかに右方の分画に境われる。
こ九によって本発明の目的物質ができていることが判る
。抗ＡＦＰ免疫グロブリン約１１ダを使用し、最ａ凛品
として得られ九複合体の抗ＡＦＦ’免疫グロブリンは約
６ダであった。
。抗ＡＦＰ免疫グロブリン約１１ダを使用し、最ａ凛品
として得られ九複合体の抗ＡＦＦ’免疫グロブリンは約
６ダであった。
この複合体における免疫グロブリン：アドリアマイシン
の結合モル比は１：１．５〜１０であった。
の結合モル比は１：１．５〜１０であった。
（９抗１１１瘍性蛋白複合体の製造−
Ｎ−エチル−Ｎｆ （ｓ−ジメチルアミノプロピル）
−カルボジイミド・ＦＩＣ／を５１１ｖ秤竣し、これに
アドリアマイシン生理的食塩水ｆ！４＠ （ｏ、ｓ ｍ
Ｍ）を２蛾７ＪＩ Ｌ テＮ −ｘ チル−Ｗ’−（３
−ジメチルアミノプロピル）−カルボシイミド・ＨＣｌ
を溶解する。さらに＃紀（イＩでえられ九抗ＡＦＰ免疫
グロブリンの生理的食塩水溶液（０，０１１１Ｍ ）を
５ｗ１ｆｌｌｌ拌しつつ滴下する。そのオー１８時間室
温でｌ１１１Ｉシ、アドリアマイシン、抗ＡＦＰ免疫グ
ロブリンの複合体を形成せしめる。ついで反応物は、セ
ファデックスＧ２５ （２，２ｃｍｙ５０ｃｌｉ）のゲ
ル炉１−にかけて複合体を分離する。この物の吸収デー
タを第２図に示す。上記（ＡＪにおけると１′８！様、
結合し′＆＾アドリアマイシンは図示されていないはる
か右方の分画ＫＪｊｔわれる。
−カルボジイミド・ＦＩＣ／を５１１ｖ秤竣し、これに
アドリアマイシン生理的食塩水ｆ！４＠ （ｏ、ｓ ｍ
Ｍ）を２蛾７ＪＩ Ｌ テＮ −ｘ チル−Ｗ’−（３
−ジメチルアミノプロピル）−カルボシイミド・ＨＣｌ
を溶解する。さらに＃紀（イＩでえられ九抗ＡＦＰ免疫
グロブリンの生理的食塩水溶液（０，０１１１Ｍ ）を
５ｗ１ｆｌｌｌ拌しつつ滴下する。そのオー１８時間室
温でｌ１１１Ｉシ、アドリアマイシン、抗ＡＦＰ免疫グ
ロブリンの複合体を形成せしめる。ついで反応物は、セ
ファデックスＧ２５ （２，２ｃｍｙ５０ｃｌｉ）のゲ
ル炉１−にかけて複合体を分離する。この物の吸収デー
タを第２図に示す。上記（ＡＪにおけると１′８！様、
結合し′＆＾アドリアマイシンは図示されていないはる
か右方の分画ＫＪｊｔわれる。
この複合体における免疫グロブリンｒドリアマイシンの
結合モル比ハ、１ ： ３．５〜４．７であつ九。
結合モル比ハ、１ ： ３．５〜４．７であつ九。
（ハ） 抗帽瘍性蛋白複合体の抗肺痺活性（工１ラット
肝Ｍ３ｍｌＲＡｔ（６６（５，７Ｘ １０’Ｍ ） Ｋ
、蛋白量としてＱ、４４Ｗ／ｑｔ、アドリアマイシｙ量
トＬ、テ１５．２６ｐｆ／ｗ４．の上記（ＣＱ （ＡＩ
で得た抗Ｓ痒性蛋白複合体を加え、５７むで一時間放置
した後、１−侶ｑ培地８−で３７む２０時間慣！した。
肝Ｍ３ｍｌＲＡｔ（６６（５，７Ｘ １０’Ｍ ） Ｋ
、蛋白量としてＱ、４４Ｗ／ｑｔ、アドリアマイシｙ量
トＬ、テ１５．２６ｐｆ／ｗ４．の上記（ＣＱ （ＡＩ
で得た抗Ｓ痒性蛋白複合体を加え、５７むで一時間放置
した後、１−侶ｑ培地８−で３７む２０時間慣！した。
対照ｌ（＃１ＰＢ８（声７．２）のみを加えた。培１後
、細胞を培讐峻に懸濁させ、０．４噛トリパンブルーで
染色して額微鏡下に死細砲を計数した。その結果、表１
”Ｋ示したように対照と比較して染色された細胞数が５
３嘔多く、製造し九抗１１１ｍ＋蛋白複合体には抗す１
瘍性があることがわ泰った。
、細胞を培讐峻に懸濁させ、０．４噛トリパンブルーで
染色して額微鏡下に死細砲を計数した。その結果、表１
”Ｋ示したように対照と比較して染色された細胞数が５
３嘔多く、製造し九抗１１１ｍ＋蛋白複合体には抗す１
瘍性があることがわ泰った。
（１抗ｎ欅性蛋白複合体の抗Ｗ＊活性（１３ラットＷＷ
瘍細胞人Ｆｉ６６ＣｌＸ１０ 個）抗Ｉ！ｌｌ瘍性蛋白
複舎体のＰ８Ｓ ｇ液（蛋白濃度０．４ＩＩ９／−アド
リアマイシン濃度８．５μｆ／蛾）、■抗入ＦＰ抗体の
ＰＢ８ ｆｒＩ液＜ ０．４ＩＩ９／ｍおよびｔｈｙｍ
ｉａｉｎ・を添加してさらに３７むで２時間放電する。
瘍細胞人Ｆｉ６６ＣｌＸ１０ 個）抗Ｉ！ｌｌ瘍性蛋白
複舎体のＰ８Ｓ ｇ液（蛋白濃度０．４ＩＩ９／−アド
リアマイシン濃度８．５μｆ／蛾）、■抗入ＦＰ抗体の
ＰＢ８ ｆｒＩ液＜ ０．４ＩＩ９／ｍおよびｔｈｙｍ
ｉａｉｎ・を添加してさらに３７むで２時間放電する。
その後、２５嗟τＣ人溶液を２５βＩ加え４むで一晩放
電した後、遠心する。沈殿を数回洗浄し０．２ ＠のギ
＠に溶解してトルエン−トライトンＸ−１００シンチレ
ータ−１２−７を加え、シンチレーションカウンターで
放射活性をＳ＋宇した。対照のＰＢ８添加の＊ｂ込み情
を１００１とすると、アドリアマイシンＰＢ８ ｆ＃液
、および抗和瘍性看白複合体ＰＦＩＦＪ Ｗ液ではそれ
ぞれ６５．７４．６６Ａ鴫の阻害を示した。啼た抗ＡＦ
Ｐ抗体ＰＢ８浴液を投与し九場合は０．４１９／ｄ、０
．６１１９７−で６．７憾、２１１Ｌ５憾となシ、それ
ほど大きな阻害効嗅は示さないことがわかった。さらに
■Ｈｕｍａｎ ｒｇＧ −７ドリアマイシン複合体、の
ような非ａｓ ４％的なタンパクと制癌剤との複合体を
投与した場合も１１．１−と大きな阻害効果が観察され
ず、薬剤活性の低下が認められたが、このことは抗Ｉ！
！１瘍性蛋白複合体の正常細Ｔｈ、 Ｋ：対する毒性が
制癌剤単独投与に比しかか炒減屑されるという可能性を
示すものである、 表 １ ｆｉＨ６６培養細胞死峨効果 ＡＩＩＩｊ’６墳曹細施のチζジン取やこみ抑制効果■
アドリアマイシン単独 ６９７５．７
５４．２■抗嗜欅性蛋白複合体 ６
Ｂ９７．７ Ｓ５．Ｂ■抗ＡＦＰ抗体凰独０，４ｍ
９ １８？５８，７ ９５．００．６〜
１４５５１．１ ７１．４対照 １０
４１４．２１００ ［Ｆ］ヒトエｇＧ・アドリアマイシン複合体 ９２５
６．８． ８８５
電した後、遠心する。沈殿を数回洗浄し０．２ ＠のギ
＠に溶解してトルエン−トライトンＸ−１００シンチレ
ータ−１２−７を加え、シンチレーションカウンターで
放射活性をＳ＋宇した。対照のＰＢ８添加の＊ｂ込み情
を１００１とすると、アドリアマイシンＰＢ８ ｆ＃液
、および抗和瘍性看白複合体ＰＦＩＦＪ Ｗ液ではそれ
ぞれ６５．７４．６６Ａ鴫の阻害を示した。啼た抗ＡＦ
Ｐ抗体ＰＢ８浴液を投与し九場合は０．４１９／ｄ、０
．６１１９７−で６．７憾、２１１Ｌ５憾となシ、それ
ほど大きな阻害効嗅は示さないことがわかった。さらに
■Ｈｕｍａｎ ｒｇＧ −７ドリアマイシン複合体、の
ような非ａｓ ４％的なタンパクと制癌剤との複合体を
投与した場合も１１．１−と大きな阻害効果が観察され
ず、薬剤活性の低下が認められたが、このことは抗Ｉ！
！１瘍性蛋白複合体の正常細Ｔｈ、 Ｋ：対する毒性が
制癌剤単独投与に比しかか炒減屑されるという可能性を
示すものである、 表 １ ｆｉＨ６６培養細胞死峨効果 ＡＩＩＩｊ’６墳曹細施のチζジン取やこみ抑制効果■
アドリアマイシン単独 ６９７５．７
５４．２■抗嗜欅性蛋白複合体 ６
Ｂ９７．７ Ｓ５．Ｂ■抗ＡＦＰ抗体凰独０，４ｍ
９ １８？５８，７ ９５．００．６〜
１４５５１．１ ７１．４対照 １０
４１４．２１００ ［Ｆ］ヒトエｇＧ・アドリアマイシン複合体 ９２５
６．８． ８８５
才１図は、本発明（従う実権例（０）（１’４抗＾ＦＰ
抗体−アドリアマイシン複合体のゲルＦ＋Ｍ分−物の吸
収を示す。 第２図は実権例（ｑ （Ｂ＋の同じ本のを示す。図中、
白丸ｌｉ ２８０ ｎ１ｌｌ 、 Ｊｌ丸ａ４５５ｎｍ
に対応する。
抗体−アドリアマイシン複合体のゲルＦ＋Ｍ分−物の吸
収を示す。 第２図は実権例（ｑ （Ｂ＋の同じ本のを示す。図中、
白丸ｌｉ ２８０ ｎ１ｌｌ 、 Ｊｌ丸ａ４５５ｎｍ
に対応する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 抗鴫欅免疫グロブリンからなる構成部分と制ガン剤
務らなる構成部分を有する、下記式（１）で表わされる
抗帽鵬性蛋白複合体’ｂｎｔ−ｘｎ２−”ｎｉ ・・
・・・・（１７（た廻しここで、Ａｂは抗ｌｌｌ瘍免疫
グロブリンからなる構成部分を、人ＴＤは制ガン剤から
なる構成部分を表わし、ＸはｋｂとＡ’ｒＤを架喘する
ための構°成部分を表わし、ｎｌ、ｎ２及びｎｌｊ各々
独立の１０以下の整数を表わす。）。 ２．１がジアルデヒド、又はカルボジイミド誘ヵ・ら ４律事導された架橋構成部分である特許請求の範囲第１
項記載の抗＠瘍性蛋白複合体。 ３、Ｘ４（４〜６＠の炭素数を持つジアルデヒドから錆
属された架橋構成部分でちる特許請求の範囲第２項記載
の抗ｉｌｌ！柩性贋白複合体。 ４ アミノ基を有する制ガン剤反び抗１頷性免疫グロブ
リンを架ＩＩ ＩＩＩと反応さすること、を特徴とする
下記式（Ｉｆで表わされる杭？４ Ｋ性ゼ白複合体の卿
造法 Ａｂ −Ｘ −ＡＴＤ、、 、、、−、ＩＩＩｎ
１ ｎ２ （ただしここで、Ａｂけ杭弾層性争疫グロブリンからな
る構成部分を、ＡＴＤＨ制ガン剤からなる構成部分を表
わし、Ｘ ｉｊ Ａｔ＋とＡＴＤを架橋するための構５
！部分を表わし、７１１．ｎ２ Ｍ！、びυ墨は各々独
立した１０以下の整数を表わす。）。 ５、＠ガン剤と架橋剤とをまず反応させ、得られた生成
物と抗峰痺性免疫グロブリンとを反応させる特許請求の
範ｉｌ！ｆＩ牙４項記載の笥造法。 ＆ 架−剤か４〜６情の炭素数を本つジアルデヒドであ
る特Ｉｆ！ｆ請求の範囲第４．頃又打第５頂記載の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP136182A JPS58118520A (ja) | 1982-01-09 | 1982-01-09 | 抗腫瘍性蛋白複合体およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP136182A JPS58118520A (ja) | 1982-01-09 | 1982-01-09 | 抗腫瘍性蛋白複合体およびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58118520A true JPS58118520A (ja) | 1983-07-14 |
Family
ID=11499348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP136182A Granted JPS58118520A (ja) | 1982-01-09 | 1982-01-09 | 抗腫瘍性蛋白複合体およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58118520A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6067434A (ja) * | 1983-09-24 | 1985-04-17 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 抗腫瘍剤 |
| KR100530369B1 (ko) * | 2002-05-27 | 2005-11-22 | 이영환 | 항암물질에 나노입자를 결합시킨 주사 제형의 약물 시스템 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5161640A (en) * | 1974-09-20 | 1976-05-28 | Searle & Co | Koshuyozaino seizoho |
| JPS54132503A (en) * | 1978-04-07 | 1979-10-15 | Kayaku Antibiotic Research Co | Immune globulin combined neocarcinostatin |
| JPS5592325A (en) * | 1978-12-29 | 1980-07-12 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumor agent and its preparation |
| JPS5665828A (en) * | 1979-11-02 | 1981-06-03 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumor agent |
| JPS5843926A (ja) * | 1981-09-08 | 1983-03-14 | Suntory Ltd | 選択性制癌剤 |
-
1982
- 1982-01-09 JP JP136182A patent/JPS58118520A/ja active Granted
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5161640A (en) * | 1974-09-20 | 1976-05-28 | Searle & Co | Koshuyozaino seizoho |
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| JPS5592325A (en) * | 1978-12-29 | 1980-07-12 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumor agent and its preparation |
| JPS5665828A (en) * | 1979-11-02 | 1981-06-03 | Kureha Chem Ind Co Ltd | Antitumor agent |
| JPS5843926A (ja) * | 1981-09-08 | 1983-03-14 | Suntory Ltd | 選択性制癌剤 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6067434A (ja) * | 1983-09-24 | 1985-04-17 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 抗腫瘍剤 |
| JPH0585532B2 (ja) * | 1983-09-24 | 1993-12-07 | Mitsubishi Chem Ind | |
| KR100530369B1 (ko) * | 2002-05-27 | 2005-11-22 | 이영환 | 항암물질에 나노입자를 결합시킨 주사 제형의 약물 시스템 |
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