JPS6242936A - Ｘ線コンピユ−タ−断層撮影用ヨウ素化抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は病気の診断用剤に関する。さらに詳ｌノくは、
本発明はＸ線］ンビューター断Ｅ”Ｕ　’Ｉｌ嘉影（Ｃ
王；コンピューターによる画像処理を行うＸ線所層踊影
）用造影剤として用いるヨウ素化抗体に関する。

身体の病巣部を含む断面をＸ線県影し、−】ンピ７ｚ−
ターに、Ｊ、り画１α；処理４行い、ｉ”、ｉ　１）ｈ
ｋ画４’ｉ＋　Ｊ、り病巣部の診１１１ｉを行うことＬ
Ｌ広＜７−■ねれ−でいる４、この方法は基本的に、検
査９４象職器ど周囲のＩｔＩ織Ａ’、ｉＦ常ＩＩ織ど病
的組織の間（３二生じるＸ線の吸ＩＩ！、！率の違い（
こ依存し℃いる。検査ス・１象臓器ヤ）症患に」、−）
では、ぞれらの３ｔいが十分大さくない場合があり、ぞ
の場合には、身体の組織とは吸収率の名（）く胃なる物
質いわゆる造影剤を身体に入れ（、対照庶を高めた像を
１１１６方法がとられる（二どかある。しかしながらこ
のプノ法では、検査対照臓器ど周囲の組織間には明らか
／Ｉ：対照が得られてし、正常組織と病的組織の間には
一１分＆−ｒ対照がＩｌ、ｌられない場合が少＜ｈい。

さらに病的組織が識別Ｃ−さてし、いかなる病的組織で
あるかはＸ線像のみからは判断でさないことが多い。本
発明老らは、これらの点を改善寸べりｉ；）意仙究の結
果、本発明に到達した。

かな４つ１う、本発明は×線］ンビｌ−ター断層擾影用
］つ素化抗体である。

ヨウ素化抗体は、抗体を！＋＜（Ｑ・目Ｉ「ｌ　ｔ、’
）素原子で直接標識する方法〈例えば、−塩化１つ索法
、り［］ラミン１−法など。日本アイソ１〜−ブ協会編
「ラジオアイソトープ薬物代謝実験法」丸首、昭和５６
年、第９５頁〜９９真参照）により、非敢用性］つ素原
子を用いて製造することがぐきるが、これらの方法では
、抗体の抗１京結合活性を損うことなく抗体１分子当り
に結合し檜！する」つ素原子の数が極めて限られる。従
って、本発明のヨウ素化抗体は、ｑｒ　Ｊ：しくは、ヨ
ウ素原子を含有する有機化合物を抗体に共有結合して成
る。抗・体−］つ素化合物複合体であり、特に好ましく
は、ヨウ素原子で置換した環状構造と抗体への結合のた
めの官能基を有する有機化合物を、該官能基で抗体に共
有結合して成る複合体くヨウ素化抗体）である。かかる
ヨウ素原子で置換した環状構造としては、例えばヨウ素
原子で置換したベンゼン環、］・り素原子で置換した４
−ピリドン環を挙げることができる。また、抗体への結
合のための官能基としては、例えばカルボキシル基、ア
ミノ基、ヂオール阜りどを挙げることができるが、カル
ボキシル い３、従っＣ抗体との結合に用いられる」つ素原ｊ′を
含有する有機化合物どしくは、一般式［　Ｔ　１１、式
中、環へは］つ素原子で置換され一Ｃいるが、ざらに曲
のイｊ機基℃゛置換されでい（ちよい。

ｎは環へにｉ６換しでいる−」つ素原子の数を表わし、
１，２または３を人．１つり−。Ｘは２（曲の右１幾基
を、口１はＯまたは１を表４つり−。

または、一般式［１］ ［式中、Ｙは２価の有機基を表わづ−６１で表わされる
化合物が特（こ好ましい。かかる式［Ｉｌまたは［■］
で表わされる化合物の成る物は、Ｘ線Ｃ−Ｆ用造影剤で
゛あり、Ｕ体制とじ゛（【ま、例えば次の構造式で表ね
（＼れる化合物を挙げることができる。

ＣＩ−１３ ７一 本発明において抗体とは、体の疾患部位と選択的に結合
し得る免疫グロブリンをいう。かかる抗体は、例えば、
疾患部の細胞または組織、あるいは疾患部に特に多い生
体十分や物質で免疫されたヒト、ザル、ウマ、ウシ、ヤ
ギ、ヒツジ、ウサギ。

モルモット、ハムスター等の動物から分離された抗面清
より、エタノール分画、硫安分画、イオン交換あるいは
分子ふるいカラムクロマ１〜グラフイー等の公知の手段
によって調整することができる。

また、上記の細胞等を抗原として免疫した動物より採取
された抗体生産細胞を、形質変換性ウィルス等で形質変
換させて得られる細胞の培養液から、あるいは抗体産生
１１ａを骨髄腫細胞等とＩＭ胞融合させて１ｑられた融
合細胞（ハイブリドーマ）から選別された目的とする抗
体産生性のクローンの培養液から、またはこれを動物に
接種してその血清または腹腔液からも本発明の抗体を得
ることができる。免疫グロブリンには、Ｉ（Ｉ　Ｇ、Ｔ
ｏ　Ａ、１（ＩＭ、ｒｏ　Ｄ、Ｉｏ　［の５種類がある
ことが知られているが、そのどれでも本発明に用いるこ
とができる。

本発明に於いて抗体はそのままでも、或いは抗原と結合
し得る部分を含む限りにおいては、そのフラクメンｉ〜
（例えば、Ｆ、ａｂ、　Ｆａｂ−、Ｆａｂ’の２量体Ｆ
（ａｂ′）２）でも用いることができる。

本発明者の研究にＪ：れば、 Ｘ線コンピューター断層１最影用造影剤として用いるヨ
ウ素化抗体の内、抗体−ヨウ素化合物複合体は、例えば
、ヨウ素原子で置換した環状構造とカルボキシル基を有
する有機化合物を、カルボキシル基を活性化した誘導体
に導いた後、抗体と反応させることにＪ：り工業的に極
めて右利に製造することができる。ここでカルボキシル
基を活性化した誘導体としては、例えば、活性エステル
、混合酸無水物などが好適に用いることができる。かか
る活性エステルとしては、例えば、Ｎ−ヒドロキシサク
シシイミド。Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，
３−ジカルボキシイミド、Ｎ−ヒト［１キシフタルイミ
ド、ρ−二１〜口）１ノール。

２．４−ジニ１〜ロフェノール、　　２，４．５−トリ
クロロフェノール、ペンタクロロフェノールなどのエス
テルを、また、混合酸無水物としては、カルボキシル基
に塩化イソバレリル、塩化ピバロイル、クロロギ酸エチ
ル、クロロギ酸イソブチルなどの酸塩化物を反応させて
１ワられる混合酸無水物を用いることができる。

ヨウ素原子で置換した環状構造とカルボキシル基を有づ
る有機化合物を、カルボキシル基を活性化した誘導体に
導く反応の条（！１は、ペプチド合成におけるカルボキ
シル基の活性化の条件が好ましく用いられる（泉谷信夫
、加藤哲夫、青柳東彦。

脇道共著「ペプチド合成の基礎と実験」丸首、昭和６０
年、第９１〜１４２頁参照）。例えば、活性ニスデルに
導くためには、エーテル、クロロボルム。

エステル、ケトン、Ｎ、Ｎ−ジメヂルホルムアミド、ジ
メヂルスルホキシド等の不活性溶媒中、過剰のＮ、Ｎ−
ジシク［］ヘキシルカルボジイミド等の縮合剤の存在下
に、等モルのアルー］−ル成分を反応させるのが好まし
い。混合酸無水物に導くためには、例λば、Ｉ７記の不
活性溶媒中、％１Ｅルの酸塩化物を１−り丁デルアミン
、Ｎ−メチルモルホリン等の塩基の存在ド反応せり、め
るのがりｒましい。又、アジドに導くためには、ヒドラ
ジンの一万のアミンを例えば、ｔ−ブヂルオキシ力ルボ
ニル基で保護してヨウ素含有化合物のカルボキシル基に
、不活性溶媒中、例えば、Ｎ、Ｎ”−ジシクロへキソル
力ルボイミド等の縮合剤を用いＣ縮合させた後、保護基
を除去してヒドラジドどし、次いで亜硝酸を作用１ノで
アジドとする。なお、かくして得られる活性ニスデル誘
導体、混合酸無水物。

アジド誘導体等は単離した１す、抗体どの反応に用いて
もよいし、また単離りることなく抗体ど反応ぜしめても
よい。

抗体またはそのフラグメントは、分子中に構成アミノ酸
に由来り−る、例えばアミノ基やカルボキシル１Ｊを複
数固有しているが、抗体−Ｊつ索化合物視合体の製造に
は、かかる反応性基の１〜３０個を沃素化合物の結合に
使用するのが好ましい。例えば、上記のカルボキシル基
を活性化した誘導体を反応せしめる場合は、抗体の蛋白
質濃度０．５〜１００ｍｇ／ｎｄｌのｐｈ５〜９の緩衝
液溶液に、少量の溶媒、例えば、Ｎ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド、メタノール、エタノール、アセトン等に溶か
したヨウ素含有化合物誘導体を、抗体１モルにつき１〜
５０モル添加し、−４°〜３０°で１５分〜１２時間反
応させるのが好ましい。抗体−ヨウ素化合物複合体は、
硫安沈澱、アセトン沈澱、透析、ゲル濾過。

イオーン交換クロマトグラフィー等により精製すること
ができる。

本発明によれば、ヨウ素化抗体は、Ｘ線コンピューター
断層撮影用造影剤として有用であり、以下の如く用いら
れる。即ち、ヨウ素化抗体を患者の静脈内に投与するか
、病巣部と考えられる身体の組織を支配する動脈内に投
与し、Ｘ線コンピューター断層撤影を行う。ヨウ素化抗
体の投与直後には、投与部位の自流が到達づる組織は一
様に強＝１２− く造影されるが、時間の経過につれて抗体が認識し結合
する抗原が存在づる病巣部のＩＩ織には、ヨウ素化抗体
が集積するため、しだいに病巣部が鮮明に描出される。

以下に］つ素化抗体の作成と、」つ素化抗体を造影剤と
して用いたＸ線コンビコーター断層撤影を例示する。

参考例１　　ヒト肝がんが特異的に産生するα−フェト
プロティン（Ａ　Ｆ　Ｐ）に対重る抗体の調整 精製したヒ［〜へＦ　Ｐ　１　ｍｙを、フロイン１へ完
全アジュバントとのエマルジョンどし、ウマに週１回皮
下注射して、過免疫とした。このウマから採面し、血清
を分離した。血清を硫安分画し、ヒトＡ「Ｐを結合した
セファロース６Ｂカラムを使用するアフイニテイクロマ
トグラフイー、およびセファテックスＧ−２００を使用
するゲル濾過等により精製し、純粋なウマ抗ヒトＡＦＰ
抗体を（ｑた。

実施例１ ｌ−１）　Ｎ−サクシンイミジルβ−（３−ジメヂルア
ミノメチレンアミノー２．４．６−１−リョードフェニ
ル）プロピオネートの合成β−（３−ジメチルアミノメ
チレンアミノ−２゜４．６−ドリヨードフエニル）プロ
ピオン酸の粉末９４０　ｍｇを、クロロホルム２０ｄと
酢酸エチル１００ｄの混合溶媒にとかし、得られた溶液
に、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド１８０．６＃Ｉｇと
Ｎ、Ｎ−−ジシクロへキシルカルボジイミド４８５　ｍ
ｇを加え、室温下１６時間撹拌した。これに氷水２蛇を
加えてＯｏで１．２５時間撹拌したのち、析出した固形
物を濾別した。濾液にジエチルエーテル３０ｍＱを加え
た後、これを水１００ｄで２回水洗し、芒硝で乾燥した
。溶媒をベンゼン−ｎ−ヘキサン（１：２）に置換し、
生じた結晶を濾取して、目的物Ｎ−サクシンイミジルβ
−（３−ジメチルアミノメチレンアミノ−２，４，６−
１−リョードフェニル）プロピオネートの結晶１，０２
　ｇを得た。ベンゼン−ｎ−ヘキサン混合溶媒より再結
晶して、精製品７７０　ｍｌを得た。

精製品の物理性状、　ｍ　、ｐ　、ｉ５４，５−１５５
，０゜ＩＲ（ＫＢγ）　　：　　２９４０，１８１５，
１７８０．１７３０　（Ｓ　）１６２５（Ｓ）　　、１
３６０（Ｓ） １２０（１（Ｓ　’）　　、１０７０　（Ｓ　”）ｍ　
−１ ＮＭＲ＜ＣＭ（Ｊ３中ＴＭＳよりのδ値）２．７８　　
（４１−１、Ｓ）　、２．７８　　（２１−１，ｍ）３
．０２　　（６Ｈ，Ｓ）　、３．５１　　（２Ｈ，Ｉｎ
）７．０２　　（１１−１、Ｓ）　　、８．１７　　（
月−１，Ｓ）。

ｐｐｍ。

１−２）ウマ抗ヒトＡＦＰ抗体−ヨウ素化合物複合体の
作成 ［反応及び精製］ ウマ抗ヒトＡＦＰ抗体の０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝
液溶液（ｆａ度５ｍ９　／　ｍｅ　）　３　ｍＱに、前
記１−１で得られたＮ−サクシンイミジルβ−（３−ジ
メヂルアミノメチレンアミノー２．４．６−ドリヨード
フエニル）プロピオネート８３４μΩに溶かして得た溶
液を、３分して１時間ごとに添加し、さらに１７時間静
置して反応せしめた。少量の沈澱物を遠心分離し、上清
をゲル濾過カラムクロマトグラフィー（セファデックス
Ｇ−２５（ファイン）１に（Ｂ　Ｘ　４０（：ｍ　、溶
媒は１０ｍ　Ｍリン酸ナトリウム−０，１４ｍＮａ　（
Ｊ　（ｐｈ７．４０）　）に付して精製し、目的物であ
る抗体−ヨウ素化合物複合体１２．３ｍｇを含む溶液を
得た。さらに、ミリポアフィルタ−を通して滅菌しし保
存した。

［複合体の定量］ 抗体及び抗体に導入されたヨウ素の母は、複合体のＵＶ
吸収を測定して得た値が、構成成分である抗体そのもの
およびβ−（３−ジメヂルアミノメチレンアミノー２．
４．６−ドリヨードフエニル）プロピオン酸のそれぞれ
のＵＶ吸収が加算されたものとなっていることを想定し
て算出した。

計算には下記の定数を用いた。

ウマ免疫グロブリンの分子吸光系数 ε２８０ｎｍ２．０３　ｘ　１０５ ε２５０ｎｎ＋０．７１　ｘ　１０５ β−（３−ジメチルアミノメチレンアミノー２．４．６
−１〜リヨードフエニル）プロピオンの分子吸光系数 ε２８０ｎｍ７．８００ ε２５０ｎｍ２３，０００ 複合体を含む溶液の吸収測定値Ａ２８０ｎｍ　、　Ａ２
５０ｎｍは、それぞれ３，４０８．　２．８６４であっ
た。

β−（３−ジメチルアミノメチ、レンアミノー２゜４．
６−ドリイオドフエニル）プロピオニル基のモル濃度を
Ｘ、抗体のモル濃度をＹとすると７．８ｘ１０３Ｘ＋　
２．０３　ｘ１０’　Ｙ＝　３．４０８２．３ｘ１０４
Ｘ＋　０，７１　ｘ１０５Ｙ＝　２．８６４となり、こ
れからＸ、Ｙを求めて、β−（３−ジメチルアミノ−２
，４，６−ｔ−リイオドフエニルプロピオニル基と、抗
体の濃度を求めた。ヨウ素の濃度は、Ｘの３倍である。

結果； 複合体中のヨウ素／抗体比（モル１モル）−１２，３複
合体の量（抗体の恒）＝１２．３ｍｇ複合体中の沃素の
吊−１９０，２μｑ １−３）　Ａ　Ｆ　Ｐ産生牲胃癌○ＳＳを移植したヌー
ドマウスのＸ線］ンビューター断層囮影（０丁） ＡＦＰ産牛産生ト胃がんＯ８Ｓをヌードマウスに移植し
、移植腫瘍の長径が１　、５　ｃｍに達した時期に前記
１−２）で作成した抗体−ヨウ素化合物複合体、または
正常ウマグロプリン−ヨ・り素化合物接合体、またはヨ
ウ素をそれぞれヨウ素濃度として３０μ（１／ｄを、０
．５ｍｊ　／　ｈｅａｄ腹腔内投与した。

次いでＧ　ｆ三ネ１製９８００型のＣＴスキャナーを用
い、投与後３日日、５日目、７日目、１０日目に、１．
５ｍｍ幅で腫瘍全体をスキャンし、ヨウ素集積部及び周
囲組織のＣＴ値、ハンスフイールド」ニラ１〜（＋−Ｉ
　Ｕ　）を測定した。

抗体−ヨウ素化合物複合体投与群では、第１図に示す如
くいずれも小さな斑点状の集積像とじてヨウ素が検出さ
れたのに対し、正常ウマグ［］］プリンーヨウ素化合物
複合体群ヨウ素群ではまったく集（＾（，１見られなか
−）ムニ。投ノＪ後σ月１故による検討τ゛（，１，３
Ｆ、１　［１，５１”１　ｔ−１ＪＰで１１１１出可能
であ−）／、−が、それ以降は描出（髪れなかった。；
（、た」つ素集槓部のＣ−「値（、ｔ　１００〜１３０
１−Ｉ　Ｕ　、周囲組織の値は５０＝７０１−１１Ｊで
あった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の〒ｌつ素化抗体を投すした、ヒ１〜
胃が／Ｖ移稙ヌードマウスの０丁スキ１グナー像である
。 手続ネ市−１「−月（１ノ式） ％式％ １、事件の表示 特願昭　６０−１８１６６５号 （３００）帝人株式会ネ１ 昭和６０年１１月２６１１ ６、補ｌ−の対象 図面 ７、補正の内容

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、Ｘ線コンピューター断層撮影用造影剤として用いる
   ヨウ素化抗体。 ２、ヨウ素化抗体が、ヨウ素原子を含有する有機化合物
   を抗体に共有結合して成る、抗体−ヨウ素化合物複合体
   である特許請求の範囲第１項記載のヨウ素化抗体。 ３、ヨウ素原子で置換した環状構造と抗体への結合のた
   めの官能基を有する有機化合物を、該官能基で抗体に共
   有結合して成る、特許請求の範囲第２項記載のヨウ素化
   抗体。 ４、抗体への結合のための官能基がカルボキシル基であ
   る、特許請求の範囲第３項記載のヨウ素化抗体。 ５、ヨウ素原子で置換した環状構造がヨウ素原子で置換
   したベンゼン環である、特許請求の範囲第３項または４
   項記載のヨウ素化抗体。 ６、ヨウ素原子で置換した環状構造がヨウ素原子で置換
   した４−ピリドン環である、特許請求の範囲第３項また
   は４項記載のヨウ素化抗体。 ７、ヨウ素原子を含有する有機化合物が、一般式［ I
   ］、 ▲数式、化学式、表等があります▼……［ I ］ 〔式中、環Ａはヨウ素原子で置換されているが、さらに
   他の有機基で置換されていてもよい。ｎは環Ａに置換し
   ているヨウ素原子の数を表わし、１、２または３を表わ
   す。 Ｘは２価の有機基を、ｍは０または１を表わす。〕 で表わされる化合物である、特許請求の範囲第２項、３
   項、４項または５項記載のヨウ素化抗体。 ８、ヨウ素原子を含有する有機化合物が、一般式［II］
   、 ▲数式、化学式、表等があります▼……［II］ ［式中、Ｙは２価の有機基を表わす。］ で表わされる化合物である、特許請求の範囲第２項、３
   項、４項または６項記載のヨウ素化抗体。 ９、ヨウ素原子を有する有機化合物がＸ線造影剤である
   、特許請求の範囲第２項、３項、４項、５項、６項、７
   項または８項記載のヨウ素化抗体。