CN110496233B - 一种spect显像剂及其标记前体及其制备方法、组合物和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种SPECT显像剂及其标记前体，并公开了上述SPECT显像剂及其标记前体的制备方法及用途；本发明还公开了含有上述SPECT显像剂的组合物，所述组合物还包括靶向PD‑L1的抗体螯合物。本发明的SPECT显像剂及其标记前体具有全新化学结构，与靶向PD‑L1的抗体螯合物具有极高的反应速率常数，可用于标记不同的放射性核素，易于临床转化，在体内不会产生免疫反应、化学毒性低。

Description

一种SPECT显像剂及其标记前体及其制备方法、组合物和用途
技术领域
本发明涉及放射性药物化学技术领域，特别是涉及一种SPECT显像剂及其标记前体及其制备方法、组合物和用途。
背景技术
程序性细胞死亡蛋白-1/程序性细胞死亡配体-1(programmed cell deathprotein-1 /programmed cell death ligand-1,PD-1/PD-L1)信号通路是近年来发现的负性免疫共刺激分子，因参与肿瘤免疫逃逸而成为肿瘤免疫治疗的新靶点。PD-1是一种诱导表达蛋白，初始T细胞不表达PD-1，在T细胞活化后表达上调。PD-1的表达主要集中在免疫细胞。PD-L1是一种抗原决定簇，命名为CD274或B7-H1，由第9号染色体CD274基因编码，PD-L1是一种分子量为40kDa的跨膜蛋白。PD-L1表达于APC、活化的CD4+T细胞、CD8+T细胞、B 细胞、巨噬细胞、树突状细胞等免疫细胞及血管内皮细胞；许多肿瘤组织中高表达，包括NSCLC、黑色素瘤、乳腺癌、胶质瘤、淋巴瘤、白血病、各种泌尿系统肿瘤、消化道肿瘤、生殖系统肿瘤。肿瘤细胞通过高表达PD-L1分子，与T细胞上的受体PD-1结合，逃避机体的免疫监控和杀伤，促进肿瘤进展。体外环境中，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、 IL-2、IL-4和IL-10)等多种细胞因子以及放疗可以上调PD-L1在肿瘤细胞上的表达，而血管内皮生长因子(VEGF)和某些化疗药物如阿霉素可以下调PD-L1在肿瘤细胞上的表达。
已有多个免疫检查点(immune checkpoint,ICP)阻滞剂(如抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4 抗体)被美国FDA批准上市或进入临床试验用于肿瘤免疫治疗：PD-L1抗体：Atezolizumab、 Durvalumab、Avelumab；PD-1单抗：Pembrolizumab、Nivolumab；CTLA-4抗体： Tremelimumab、ipilimumab。不同肿瘤及同种肿瘤不同分化类型表达PD-L1水平不一，肿瘤高表达PD-L1时预后差，但抗PD-L1治疗效果更好。病理无法动态、全面评估肿瘤及富PD-L1 器官的PD-L1表达水平，文献报道肿瘤免疫治疗疗效不一、存在治疗副作用。有必要在肿瘤免疫治疗前后对PD-L1表达水平进行全面评估—— 放射免疫显像。
放射性核素标记直接大分子(如抗体)进行放射免疫显像与治疗存在如下问题：分子量大，体内循环时间长；潴留时间长，副作用大；富血供器官显影明显；靶/本底低。生物正交点击化学(Bioorthogonal click chemistry)系统通过1,2,4,5-四嗪(1,2,4,5-terazine，Tz)与反式-环辛烯(Trans-cyslooctene，TCO)的生物正交点击化学系统被广泛应用于放射性药物合成。该系统具有以下几点优势：具有极高的反应速率常数(约2000M-1s-1)，在较低的浓度下偶联反应也较快速、高效，且成本低；对抗体修饰的方法简单，对抗体活性影响少；小分子修饰相对灵活；肝脏和肾脏放射性聚集少，化学毒性小，易于临床转化。
Heskamp等(Heskamp S,Hobo W,Molkenboer-Kuenen JD,et al.Noninvasiveimaging of tumor PD-L1 expression using radiolabeled anti-PD-L1 antibodies[J].Cancer Res,2015,75(14):2928-2936)报道利用111In标记人源性抗PD-L1单抗(PD-L1.3.1，具体不详) 对PD-L1高表达和低表达的人乳腺癌细胞株移植瘤进行SPECT显像，显像剂摄取值的高低与乳腺癌PD-L1的表达水平密切相关，进一步研究发现，在111In-PD-L1.3.1比活度为 0.4MBq/μg的条件下，当抗体剂量≤1μg时图像质量最佳；而较高剂量的抗体，会使肿瘤细胞 PD-L1结合位点饱和，反而降低了肿瘤与正常组织的对比度。
Natarajan等(Natarajan A,Mayer AT,Xu L,et al.Novel radiotracer forimmunoPET imaging of PD-1checkpoint expression on tumor infiltratinglymphocytes[J].Bioconjug Chem,2015,26(10):2062-2069)在转基因黑色素瘤模型中采用64Cu-DOTA标记的鼠源性抗 PD-1抗体对黑色素瘤肿瘤浸润淋巴细胞进行PET显像，结果显示该显像方法可清晰、特异地显示肿瘤和脾脏PD-1的表达。不足之处是注射显像剂后48h血液中的放射性摄取仍然很高，这是我们利用点击化学研究的基础。Chatterjee等(Chatterjee S,Lesniak WG,Gabrielson M,et al.A humanized antibody for imagingimmune checkpoint ligand PD-L1 expression in tumors[J].Oncotarget,2016,7(9):10215-10227)用111In和近红外荧光染料分别标记人源性 PD-L1单抗Atezolizumab，监测乳腺癌细胞移植瘤和NSCLC细胞移植瘤PD-L1的表达水平，体内外实验均显示了与PD-L1表达水平相一致的特异性摄取。
Lesniak等(Lesniak WG,Chatterjee S,Gabrielson M,et al.PD-L1 detectionin tumors using [64Cu]atezolizumab with PET[J].Bioconjug Chem,2016,27(9):2103-2110)用64Cu标记的人源化PD-L1单抗Atezolizumab显像仓鼠卵巢细胞系(相当于阳性、阴性对照)和乳腺癌；PET 显像显示，高表达PD-L1的CHOhPD-L1细胞高摄取，而低表达PD-L1的CHO细胞低摄取。 Lesniak等用64Cu标记的人源化PD-L1单抗Atezolizumab与肿瘤细胞的特异性结合跟PD-L1 的表达水平相关；PET显像显示，高表达PD-L1的人乳腺癌MDAMB231细胞高摄取，而低表达PD-L1的人乳腺癌SUM149细胞摄取明显降低。血、肝、脾摄取较高。乳腺癌4T1显示了较其他组织更高的摄取。
至今为止，综合国内外针对放射性核素通过螯合剂标记抗体靶向PD-1/PD-L1的研究，可以发现：没有运用预定位方法；显像剂不能够区分同系肿瘤不同细胞株之间的PD-L1表达水平。申请人通过预定位方法减低血液及富血供器官如肝、肺、脾的放射性摄取，提高T/B，进行特异性显像评估肿瘤PD-L1表达水平高低，能够区分同系肿瘤不同细胞株之间的PD-L1 表达水平，提示可用于PD-1/PD-L1免疫治疗的患者选择，评估肿瘤PD-L1免疫治疗疗效。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种SPECT显像剂及其标记前体及其制备方法、用途，以及一种基于生物正交点击化学预定位方法靶向肺癌PD-L1的SPECT显像剂组合物及其用途，能通过预定位方法减低血液及富血供器官如肝、肺、脾的放射性摄取，提高靶/本底比值，进行肿瘤PD-L1特异性显像，能够区分同系肿瘤不同细胞株之间的PD-L1 表达水平，提示可用于PD-1/PD-L1免疫治疗的患者选择，评估肿瘤PD-L1免疫治疗疗效。
本发明为实现上述目的采用的技术方案是：一种SPECT显像剂标记前体，具有如式(I) 所示结构：
Figure BDA0002192817000000031
进一步地，式(I)中，n为整数，1≤n≤20；优选的，n为11。
本发明还涉及一种SPECT显像剂，具有如式(II)所示结构：
Figure BDA0002192817000000032
进一步地，式(II)中，n为整数，1≤n≤20；优选的，n为11。
本发明还涉及一种预定位靶向PD-L1的SPECT显像剂组合物，包括如上所述的SPECT 显像剂标记前体与放射性药物结合的化合物或如上所述的SPECT显像剂，还包括靶向PD-L1 的抗体螯合物；优选的，所述抗体螯合物为TCO-Atezolizumab；
进一步地，所述抗体螯合物TCO-Atezolizumab的制备方法如下：调节Atezolizumab溶液的pH至7-9后，加入DMF和TCO-NHS酯溶液制得；所述的TCO-NHS酯也即TCO-NHS ester 具有如下CAS号：1191901-33-3，具体为(4E)-4-cycloocten-1-yl-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester carbonic acid。
所述被命名为TCO-Atezolizumab的抗体螯合物为经过TCO-NHS ester修饰的能特异性靶向PD-L1的抗体螯合物，其制备方法具体为：在555.6ul浓度为9mg/ml的Atezolizumab的 PBS pH7.2溶液中，加入344.4ul浓度为0.2M的碳酸氢钠溶液。溶液最终的pH值为8.2。在此溶液中加入53.79ul N,N-二甲基甲酰胺和46.21ul浓度为10mg/ml的TCO-NHS ester溶液，使得反应液中抗体浓度为5mg/ml，N,N-二甲基乙酰胺含量为10％，TCO-PEG4-NHS ester与抗体的摩尔比为50。反应于22℃避光中进行2小时，之后采用截留分子量为40KD的脱盐柱纯化，得到最终抗体偶联产物，产物保存于PBS pH7.4的缓冲液中。
Figure BDA0002192817000000041
本发明还公开了如上所述的SPECT显像剂标记前体的制备方法，具体为：由5-氧代-5-[[[4-(1,2,4,5-四嗪-3-基)苯基]甲基]氨基]戊酸(即Tz)与丁二酸酐反应后与NH2-PEGn-NHBoc 反应后脱保护基，再与Boc保护的6-肼基烟酸(即HYNIC)反应后脱保护基制得，n为整数， 1≤n≤20；优选的，n为11。如上所述的SPECT显像剂标记前体能够与TCO-Atezolizumab 在体内发生正交点击化学反应并能用于放射性核素99mTc标记，将其命名为HYNIC-PEGn-Tz，当n为11时即为HYNIC-PEG11-Tz，结构式如下所示：
Figure BDA0002192817000000042
如上所述的HYNIC-PEGn-Tz的制备路线如下所示：
Figure BDA0002192817000000051
本发明还公开了如上所述的SPECT显像剂的制备方法，将如上所述的SPECT显像剂标记前体与三(羟甲基)甲基甘氨酸(即tricine)混合后加入Na99mTcO4反应制得，其具体制备路线如下所示：
Figure BDA0002192817000000052
本发明还公开了如上所述的预定位靶向PD-L1的SPECT显像剂组合物用于评估肿瘤 PD-L1表达水平的用途。
PD-L1是一种分子量为40kDa的跨膜蛋白。许多肿瘤如NSCLC、黑色素瘤、乳腺癌、胶质瘤、淋巴瘤、白血病、各种泌尿系统肿瘤、消化道肿瘤、生殖系统肿瘤高表达PD-L1。预定位SPECT显像时，Atezolizumab-TCO预先注射入小鼠体内，连接了TCO的Atezolizumab 不影响其与肿瘤高表达的PD-L1结合的特异性与亲和力，体内的Atezolizumab-TCO会特异性地与肿瘤PD-L1靶点结合，同时未结合的Atezolizumab-TCO缓慢排出体外，等待 Atezolizumab-TCO与肿瘤PD-L1充分结合且未结合的Atezolizumab-TCO缓慢排出体外后(由于Atezolizumab抗体是大分子物质，体内循环时间长，一般需要几天时间)，再注射放射性配体99mTc-HYNIC-PEG11-Tz，99mTc-HYNIC-PEG11-Tz的Tz将与预定位的Atezolizumab-TCO中的TCO部分快速反应形成稳定的环状化合物，这样放射性核素99mTc特异性地靶向到肿瘤部位，同时由于99mTc-HYNIC-PEG11-Tz是一种小分子化合物，在体内循环时间短，未反应的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz迅速排除体外，放射性本底低，对正常组织器官的辐射损伤小。
本发明的优点和效果：
1)提供了一种HYNIC-PEG11-Tz的合成方法及其与放射性核素99mTc的标记方法，此制备方法合成路线简便，标记放化纯度高，比活度高，满足要求；通过预定位方法减低血液及富血供器官如肝、肺、脾的放射性摄取，提高T/B，降低非靶器官组织的放射性损伤；
2)提供了一种新的评估肿瘤PD-L1表达的特异性显像剂，能够区分同系肿瘤不同细胞株之间的PD-L1表达水平，可用于PD-1/PD-L1免疫治疗的患者选择，评估肿瘤PD-L1免疫治疗疗效；
3)TCO与Tz间的反应具有极高的反应速率常数(约2000M-1s-1)，在较低的浓度下偶联反应也较快速、高效，且成本低，TCO与Tz间的反应具有高特异性，TCO或Tz不会与生物体中的其他物质发生反应；Atezolizumab抗体连接TCO方法简单，一般实验室均可操作，修饰后对抗体活性影响少，抗体与抗原的特异性结合能力不受影响；
4)小分子Tz经螯合剂HYNIC修饰简单，相对灵活，如连接不同的螯合剂还可用于标记不同的放射性核素，易于临床转化；相对于Avidin/Biotin系统，TCO/Tz体系无免疫原性，在体内不会产生免疫反应，化学毒性小；相对于用长半衰期核素直接标记抗体进行显像，利用预定位Atezolizumab-TCO/99mTc-HYNIC-PEG11-Tz方法可以将放射性核素在体内的滞留时间由几天减少到几小时，正常器官、组织尤其是血液、肝脏和肾脏放射性聚集少，放射性毒副作用小。
综上所述，本专利中涉及到的前体化合物HYNIC-PEG11-Tz、TCO-Atezolizumab是第一次被成功合成，并将HYNIC-PEG11-Tz用于放射性药物99mTc的标记，结果显示99mTc标记HYNIC-PEG11-Tz的放射化学产率＞95％。本发明所述的单光子显像剂99mTc-HYNIC-PEG11-Tz/TCO-Atezolizumab通过预定位方法减低血液及富血供器官如肝、肺、脾的放射性摄取，提高靶/本底比值，进行肿瘤PD-L1特异性显像，能够区分同系肿瘤不同细胞株之间的PD-L1表达水平，提示可用于PD-1/PD-L1免疫治疗的患者选择，评估肿瘤PD-L1 免疫治疗疗效。本发明首次进行了99mTc-HYNIC-PEG11-Tz/TCO-Atezolizumab的成功合成，制备方法简单快捷，为99mTc-HYNIC-PEG11-Tz/TCO-Atezolizumab的科学研究和临床应用奠定了基础
Figure BDA0002192817000000071
附图说明
图1为99mTc-HYNIC-PEG11-Tz分子探针的稳定性随时间变化的趋势图示意图；
图2为99mTc-HYNIC-PEG11-Tz的血药浓度-时间曲线示意图；
图3为Atezolizumab-TCO/99mTc-HYNIC-PEG11-Tz预定位细胞结合的CPM值与对照组细胞结合的CPM值对照图；
图4为各个脏器对99mTc-HYNIC-PEG11-Tz的相对吸收值示意图；
图5为各个脏器对99mTc-HYNIC-PEG11-Tz/Atezolizumab-TCO预定位生物分布示意图；
图6为H1975肿瘤与A549肿瘤显像对照图。
具体实施方式
以下通过实施例，对本发明作进一步的具体说明，但这些实施例不对本发明有任何限制。
首先是制备经TCO-NHS ester修饰的Atezolizumab及放射性标记前体化合物HYNIC-PEG11-Tz。Atezolizumab-TCO可靶向PD-L1靶点；HYNIC-PEG11-Tz用99mTc标记后可以得到一种能与Atezolizumab-TCO正交反应的四嗪衍生物，同时能将放射性核素99mTc引到靶点。预定位SPECT显像时，Atezolizumab-TCO预先注射入小鼠体内，Atezolizumab-TCO 会特异性地与肿瘤PD-L1靶点结合，同时未结合的Atezolizumab-TCO缓慢排出体外，然后再注射放射性配体99mTc-HYNIC-PEG11-Tz，99mTc-HYNIC-PEG11-Tz将与预定位的 Atezolizumab-TCO快速反应，同时未反应的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz迅速排出体外。
实施例1
化合物3的合成：
Figure BDA0002192817000000081
向溶于2.5mL二氯甲烷的化合物1(250mg,1.11mmol,HCl)和2(191mg,1.67mmol)的溶液中加入三乙胺(339mg,3.35mmol)。反应液在20℃搅拌1小时。TLC检测反应，原料反应完全。反应减压浓缩，拌硅胶过柱纯化(100～200目硅胶，DCM:MeOH＝50:1)得到红色固体化合物3(250mg,产率70.5％)。
实施例2
化合物4的合成过程：
Figure BDA0002192817000000082
向化合物3(140mg,464umol)的5mL二氯甲烷溶液中加入HATU(176mg,465umol) 和DIEA(150mg,1.16mmol),20℃搅拌15min后，加入NH2-PEG11-NHBoc(250mg,387 umol),20℃再搅拌1小时。TLC检测，原料反应完全。减压浓缩，爬大板(SiO2,DCM: MeOH＝10:1)纯化，得到红色油状化合物4(320mg,产率81.7％)。
实施例3
化合物5的合成过程：
Figure BDA0002192817000000091
向化合物4(320mg,344umol)的乙酸已酯(3mL)溶液中加入4M的乙酸乙酯的盐酸溶液(86.2uL),20℃搅拌30min。TLC检测，原料反应完全。减压旋干，得到红色油状化合物5(260mg,产率81.9％)，直接用于下一步反应。
实施例4
化合物7的合成过程：
Figure BDA0002192817000000092
向化合物6(159mg,328umol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(143mg,376umol) 和DIEA(162mg,1.26mmol)，20℃搅拌15min后，加入化合物5(260mg,314umol)，20℃再搅拌1小时。TLC检测，原料反应完全。减压旋干，爬大板(SiO2,DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到红色油状化合物7(300mg,产率86.53％)。
实施例5
化合物(II)的合成过程：
Figure BDA0002192817000000093
向化合物7(300mg,282umol)的EtOAc(3mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4M,3mL)， 20℃搅拌30min。LCMS检测原料反应完全，并检测到产物MS。减压旋干，过高压液相(TFA 体系)制备得到红色固体C18122916(133mg,产率44.0％,纯度90.0％)。
实施例6
显像剂标记前体HYNIC-PEG11-Tz的99mTc标记方法，其制备步骤如下：
Figure BDA0002192817000000101
在1.5mL的EP管中，加入20μg HYNIC-PEG11-Tz(1mg/mL溶于H2O)与200μL tricine溶液(100mg/mL，溶于H2O)，加入185MBq Na99mTcO4和1μl SnCl2溶液(1mg/mL溶于 10-3MHCl)，用10-4M HCl将pH调节至5.0，混匀后室温下反应15min。反应后经RP-HPLC 检测标记率及放化纯度＞95％。标记方法简单、快捷，标记率高，无需进一步纯化。
实施例7
经过TCO-NHS ester修饰的能特异性靶向PD-L1的抗体螯合物，其制备方法具体为：
Figure BDA0002192817000000102
在555.6ul浓度为9mg/ml的Atezolizumab的PBS pH7.2溶液中，加入344.4ul浓度为0.2M 的碳酸氢钠溶液。溶液最终的pH值为8.2。在此溶液中加入53.79ul N,N-二甲基甲酰胺和 46.21ul浓度为10mg/ml的TCO-NHS ester溶液，使得反应液中抗体浓度为5mg/ml，N,N-二甲基乙酰胺含量为10％，TCO-PEG4-NHS ester与抗体的摩尔比为50。反应于22℃避光中进行2小时，之后采用截留分子量为40KD的脱盐柱纯化，得到最终抗体偶联产物，产物保存于PBS pH7.4的缓冲液中。
实施例8
本发明99mTc-HYNIC-PEG11-Tz的体外稳定性实验：
以实施例6所得的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz约10μCi分别置于100μL 0.9％生理盐水，PBS 及FBS中，充分混匀后37℃下存放。分别在1h、2h、4h和6h取样，在分析型HPLC上检验其纯度变化。结果表明此99mTc-HYNIC-PEG11-Tz分子探针随着时间仅有缓慢分解，体外稳定性好。99mTc-HYNIC-PEG11-Tz分子探针在生理盐水，PBS及FBS中的稳定性结果如图1所示。
实施例9
本发明99mTc-HYNIC-PEG11-Tz的药代动力学实验：
以实施例6所得的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz约200μCi尾静脉注射进3只8周雄性裸鼠体内，分别于注射后1、3、5、10、20、30、45、和60min时断尾，用毛细血管取约为5μL血样，置于计数管底部，测其计数，绘制其血药浓度-时间曲线，结果如图2所示。
实施例10
本发明99mTc-HYNIC-PEG11-Tz/Atezolizumab-TCO预定位细胞受体结合试验：
将实施例7所得的Atezolizumab-TCO(100nM每孔)加入24孔板中的H1975细胞(每孔约1×106个)中，在加入Atezolizumab-TCO 24h之前加入γ干扰素(IFN-γ)模拟体内环境诱导细胞PD-L1表达，加入Atezolizumab-TCO后在37℃下将细胞孵育2h后，再加入实施例2所得的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz，收集细胞进行γ计数器计数，得到时间预定位细胞结合 CPM值，Atezolizumab-TCO/99mTc-HYNIC-PEG11-Tz预定位细胞结合的CPM值显著高于对照组细胞结合的CPM值，具体结果参见图3。
实施例11
本发明99mTc-HYNIC-PEG11-Tz的生物分布实验：
以实施例6所得的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz约500μCi尾静脉注射进8周雄性裸鼠9只，麻醉状态下，采取摘取眼球取血方式，分别在30min、2h及6h时各处死3只裸鼠，收集包括血、脑、心、肺、肝、脾、肾、胃、小肠、大肠、骨、肌肉和甲状腺组织进行称量及放射性计数。进行衰变校正后，将各个组织样品的计数与标准计数比较，结果表示为％ID/g(每克样品组织的放射性占注射剂量的百分含量)，即为各个脏器对99mTc-HYNIC-PEG11-Tz的相对吸收值，具体结果如图4所示。
实施例12
本发明99mTc-HYNIC-PEG11-Tz/Atezolizumab-TCO预定位生物分布实验：
以实施例7所得的Atezolizumab-TCO约100ug静脉注射入8周3只雄性裸鼠，预定位24h或48h后，再以实施例2所得的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz约500μCi尾静脉注射后6h，麻醉状态下，采取摘取眼球取血方式，收集包括血、脑、心、肺、肝、脾、肾、胃、小肠、大肠、骨、肌肉和甲状腺组织进行称量及放射性计数。进行衰变校正后，将各个组织样品的计数与标准计数比较，结果表示为％ID/g(每克样品组织的放射性占注射剂量的百分含量)，结果如图5所示。
实施例13
本发明99mTc-HYNIC-PEG11-Tz/Atezolizumab-TCO预定位活体显像试验：
以实施例7所得的Atezolizumab-TCO约100ug静脉注射入8周龄雄性裸鼠，预定位24h 或48h后，再以实施例2所得的99mTc-HYNIC-PEG11-Tz约500μCi尾静脉注射后6h，在持续麻醉状态下进行Micro-SPECT/CT显像。结果发现皮下接种的H1975肿瘤显像剂摄取显著高于皮下A549肿瘤(阴性对照组)，显像对照结果如图6所示。图6中a、d分别为皮下接种的H1975肿瘤模型鼠Atezolizumab-TCO预定位24h，99mTc-HYNIC-PEG11-Tz注射后6h显像的轴位及最大密度投影图(MIP)；b、e分别为皮下接种的H1975肿瘤模型鼠Atezolizumab-TCO 预定位48h，99mTc-HYNIC-PEG11-Tz注射后6h显像的轴位及MIP图；c、f分别为皮下接种的A549肿瘤模型鼠(阴性对照组)Atezolizumab-TCO预定位48h，99mTc-HYNIC-PEG11-Tz 注射后6h显像的轴位及MIP图。
上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点，其目的是在于让本领域内的普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本发明内容的实质所作出的等效的变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一种预定位靶向PD-L1的SPECT显像剂组合物，包括如式(II)所示结构的SPECT显像剂：
Figure FDA0003569573980000011
中，n为11；
还包括靶向PD-L1的抗体螯合物，所述抗体螯合物为TCO-Atezolizumab。
2.如权利要求1所述的预定位靶向PD-L1的SPECT显像剂组合物，其特征在于，所述抗体螯合物TCO-Atezolizumab的制备方法如下：调节Atezolizumab溶液的pH至7-9后，加入DMF和TCO-NHS酯溶液制得。
3.如权利要求1所述的预定位靶向PD-L1的SPECT显像剂组合物，其特征在于，所述SPECT显像剂标记前体的制备方法为，由5-氧代-5-[[[4-(1,2,4,5-四嗪-3-基)苯基]甲基]氨基]戊酸与丁二酸酐反应后与NH2-PEGn-NHBoc反应后脱保护基，再与Boc保护的6-肼基烟酸反应后脱保护基制得。
4.如权利要求3所述的预定位靶向PD-L1的SPECT显像剂组合物，其特征在于，所述SPECT显像剂为将SPECT显像剂标记前体与三(羟甲基)甲基甘氨酸混合后加入Na99mTcO4反应制得。
5.如权利要求1所述的预定位靶向PD-L1的SPECT显像剂组合物在制备用于评估肿瘤PD-L1表达水平的药物中的用途。
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