SE462261B - Farmaceutisk komposition och konjugat av melfalan och normalt humanimmunoglobulin med antitumoerverkan samt foerfarande foer dess framstaellning - Google Patents

Farmaceutisk komposition och konjugat av melfalan och normalt humanimmunoglobulin med antitumoerverkan samt foerfarande foer dess framstaellning

Info

Publication number
SE462261B
SE462261B SE8401942A SE8401942A SE462261B SE 462261 B SE462261 B SE 462261B SE 8401942 A SE8401942 A SE 8401942A SE 8401942 A SE8401942 A SE 8401942A SE 462261 B SE462261 B SE 462261B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
human immunoglobulin
tumor
aqueous
solution
binding
Prior art date
Application number
SE8401942A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8401942L (sv
SE8401942D0 (sv
Inventor
Y Oguchi
K Niimura
T Fujii
M Fujii
K Matsunaga
C Yoshikumi
Original Assignee
Kureha Chemical Ind Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kureha Chemical Ind Co Ltd filed Critical Kureha Chemical Ind Co Ltd
Publication of SE8401942D0 publication Critical patent/SE8401942D0/sv
Publication of SE8401942L publication Critical patent/SE8401942L/sv
Publication of SE462261B publication Critical patent/SE462261B/sv

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/809—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fv, fc, heavy chain or light chain
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

462 261 Följaktligen har det varit nödvändigt för att eliminera nack- delarna med ovannämnda metod och lösa problemen i samband med det praktiska genomförandet därav att undersöka de homospecifika anti- kropparna och välja ut sådana som samlas vid eller dras till tumör- cellerna.
Som ett resultat av undersökning av fördelningen av de olika 1251-märkta antikropparna i en levande kropp har föreliggande upp- finnare funnit, att de vanliga naturliga antikropparna kommer till tumördelen och blir kvar där under lång tid, och följaktligen har föreliggande uppfinnare kommit fram till att i det fall, då efter bindning av ett anti-tumörmedel till immunoglobulinet den sålunda erhållna substansen administreras till den cancerbärande individen, anti-tumörmedlet blir kvar under lång tid i tumördelen, varigenom den uppvisar sin anti-tumöreffekt. rad på dessa upptäckter.
Föreliggande uppfinning är base- Den anti-tumörsubstans som erhålles genom bindning av ett speciellt anti-tumörmedel till normalt humanimmunoglobulin en- ligt föreliggande uppfinning har den största specificiteten och fördelen i att den kan administreras ofta eller flera gånger jämfört med den kända produkt som erhålles genom bindning av anti-tumörmedlet till den anti-tumörantikropp som är härledd från djur eller olika typer från människa, och att den blir kvar vid tumördelen under lång tid.
Följaktligen åstadkommes enligt föreliggande uppfinning en ny typ av mediciner, som är synnerligen väl lämpade för praktisk användning.
SAMMANFATTNING AV UPPFINNINGEN Enligt en första aspekt av föreliggande uppfinning åstad- kommes sålunda en anti-tumörsubstans, vilken innefattar en substans erhållen genom bindning av melfalan eller en ester därav till humanimmunoglobulin härlett från en normal frisk person.
Enligt en andra aspekt av föreliggande uppfinning åstadkom- mes ett förfarande för framställning av ovannämnda anti-tumör- substans, vilket innefattar att man löser melfalan eller en ester därav i ett vattenbaserat lösningsmedel, att man efter tillsats av ett bindemedel till den sålunda bildade vattenbase- rade lösningen sätter humanimmunoglobulin härlett från en normal 40 b: 462 261 frisk person, varvid humanimmunoglobulinet reagerar med melfala- net eller estern därav vid från -30 till SOOC under en tidspe- riod av från en minut till 48 timmar, och att den sålunda bil- dade reaktionsprodukten renas med hjälp av åtminstone en renings- metod vald bland utsaltning, utfällning, omkristallisation, eluering och kolonnfraktionering.
Enligt en tredje aspekt av föreliggande uppfinning åstad- kommes en farmaceutisk komposition i enhetsdoseringsform, vilken som aktiv komponent innefattar en anti-tumörsubstans erhållen genom bindning av melfalan eller en ester därav till humanimmu- noglobulin härlett från en normal frisk person.
DETALJERAD BESKRIVNING AV UPPFINNINGEN Föreliggande uppfinning hänför sig till en anti-tumörsub- stans, som erhålles genom bindning av melfalan eller en ester därav till humanímmunoglobulin härlett från en normal frisk person samt till ett förfarande för framställning av denna anti-tumörsubstans innefattande upplösning av melfalan eller estern därav i ett vattenbaserat lösningsmedel, efter tillsats av ett bindemedel till den sålunda framställda lösningen, tillsats av humanímmunoglobulin härlett från en normal frisk person till blandningen, varvid humanimmunoglobulinet omsättes med melfalanet eller estern därav vid från -30 till 5006 under en period av från en minut till 48 timmar, utsättande av den sålunda bildade reaktionsprodukten för minst en reningsproce- dur vald bland utsaltning, utfällning, omkristallisation, elu- ering och kolonnfraktionering. Uppfinningen hänför sig vidare till en farmaceutisk komposition i enhetsdoseringsform, vilken som aktiv beståndsdel innefattar nämnda anti-tumörsubstans, vari melfalan eller estern därav har bundits till humanimmuno- globulin härlett från en normal frisk person.
Anti-tumörsubstansen enligt föreliggande uppfinning är sålunda den produkt som erhålles genom bindning av det starkt cytotoxiska anti-tumörmedlet melfalan eller en ester därav till humant immunoglobulin härlett från en normal frisk person under extremt milda reaktionsbetingelser, och det är en anti- -tumörsubstans som har utmärkta anti-tumöreffekter trots sin anmärkningsvärt låga cytotoxicitet jämfört med den för det anti-tumörmedel som är ett av utgångsmaterialen för föreliggan- de substans. 462 261 4 På senare tid har olika anti-tumörmedel använts i stor omfatt- ning, vilka uppvisar viss grad av effekt. Som anti-tumörmedel an- vändes klorambucil, melfalan, ACNU, cyklofosfamid, cytarabin, 8-aza- guanin,-5-fluoruracil, metotrexat, natriumaminopterin, mitomycin, daunorubicin, aktinomycin D och sarkomycin, varvid dock gäller att var och en av dessa substanser har hög cytotoxicitet, och det har varit känt att efter administration med substansen bieffekter, såsom leukocytepeni, depilation och gastroenterostörningar, har uppträtt hos patienter administrerade med substansen, och följaktligen före- ligger i realiteten en gräns vad beträffar användning av substansen som läkemedel. Ä andra sidan har försök utförts där en antikropp till tumör- cellen eller det tumörrelaterade antigenet framställes eller isole- ras och de sålunda framställda eller isolerade cellerna eller anti- generna användes vid behandling av tumören, varvid dock gäller att några gynnsamma effekter ej har uppnåtts. Vidare har det nyligen an- tytts att en anti-tumöreffekt kan förväntas i en ny substans erhållen genom kemisk bindning av ett anti-tumörmedel till en anti-tumöranti- kropp. Eftersom reaktionsbetingelserna för framställning av en sådan substans är alltför svåra, har emellertid några tillfredsställande resultat ej uppnåtts. Eftersom dessutom vid ovannämnda experiment antikroppar erhållna från annat djursläkte än människa användes, var följaktligen bieffekter från den heterospecifika antikroppen, såsom serumsjukdomar, oundvikliga.
Föreliggande uppfinnare har härvid funnit ett förfarande för rening av en anti-tumörantikropp erhållen från ett heterospecifikt djur medelst affinitetskromatografi (se de japanska publicerade pa- tentansökningarna 55-092325 (1980), nr 56-065828 (1981) och nr 56-065829 (1981)). Genom den sålunda funna metoden erhålles en hög- ren antikropp, varvid det dock fortfarande föreligger problem med utförande av flera administrationer.
Som ett resultat av en undersökning av åtkomligheten hos ett flertal antikroppar för tumördelen har föreliggande uppfinnare konstaterat att en naturligt erhållningsbar antikropp erhållen genom affinitetskromatografi kan komma åt eller komma fram till tumördelen i hög koncentration och att den kan bli kvar under längre tidsperiod i andra organ, och baserat på dessa upptäckter bands melfalan och estrar därav till humanimmunoglo- bulin härlett från en normal frisk person. 462 261 De sålunda erhållna substanserna visade sig besitta gynnsam anti-tumöreffekt, och dessutom gäller att melfalan och estrar där- av var lätta att syntetisera och uppvisade hög stabilitet. I detta sammanhang kan nämnas att den naturligt förekommande antikroppen innehåller humanimmunoglobulin (Ig) och en antikropp (F(ab'),) med låg molekylvikt. B Bindningen mellan det speciella humanimmunoglobulinet och den speciella anti-tumörsubstansen utfördes med hjälp av följande metod.
Melfalan eller estern därav löstes i ett vattenbaserat lös- ningsmedel valt bland en vattenbaserad sur lösning, en vattenba- serad alkalisk lösning, en vattenbaserad neutral lösning och en vattenbaserad fosforsyrabuffertlösning innehållande natriumborat och liknande. Ett bindemedel valt ur gruppen bestående av karbodi- imid, dextran, glutaraldehyd, dietylmalonimidat, isocyanat och polyglutaminsyra sattes till lösningen, och reaktionen utfördes genom tillsats av humanimmunoglobulinet (även innehållande F(ab'),) till blandningen vid från -30 till +50°C, företrädesvis från 0 u till SOOC, under en tid av från en minut till 48 timmar, före- trädesvis från 10 minuter till 25 timmar.
Reaktíonsprodukten renades med hjälp av utsaltning, utfäll- ning, omkristallisation, eluering, kolonnfraktionering, varigenom den beskrivna anti-tumörsubstansen erhölls.
Den akuta toxiciteten för den sålunda erhållna anti-tumör- substansen (i fortsättningen benämnd föreliggande substans) under- söktes genom injektion därav intravenöst på en grupp möss i en do- seringsmängd av 4000 mg/kg, varvid dock något dödsfall inte kunde observeras en vecka efter ínjektionen.
Den akuta toxiciteten undersöktes ytterligare på anti-tumör- substanserna erhållna genom bindning av nämnda anti-tumörmedel till en antikropp med låg molekylvikt erhâllen genom enzymatisk hydrolys av humanimmunoglobulin med pepsin (se Nisonoff, Science, 132, 1770 (1970)), plasmin (Sgouris, Vox Sang, 18, 71 (1967)), termolysin (se japansk publicerad patentansökan nr S1-95125), papain, trypsin eller kymotripsin. Vid ovannämnda fall för bind- ning av anti-tumörsubstansen till antikroppen med låg molekylvikt, t.ex. F(ab')2, förorsakade den travenösa injektionen av 4000 mg/kg därav ej något dödsfall hos de sålunda behandlade mössen inom en vecka. 462 261 6 Följaktligen har föreliggande substans extremt låg toxicitet, och den kan administreras ofta samt är effektiv vid behandling av exempelvis cancer hos människa, akut leukemi, svårartad lymfom, karcinom, sarkom, svårartad koreonefteleom, akut myelogen leukemi, melanom, akut lymfatisk leukemi och myelom; huvud- och halscancer, övre gastrointestinal cancer, kolorektal karinom, pankreatisk karinom och svårartad hepatom, endokrina tumörer, genitourinära tumörer, gyne- * kologiska tumörer, bröstcancer, leukemi och myelom samt svårartad melanom; och lungcancer, esofag cancer, bröstcancer, magcancer, koloncancer, rektal cancer, hepatisk cancer (hepatom), renal cancer, leukemi och myelom. fall då föreliggande aktiv komponent i en ovarian cancer, uterus cervikal cancer samt Vad beträffar beredningssättet i det substans användes som anti-tumörmedel eller farmaceutisk komposition samt vad beträffar sättet för administra- tion av kompositionen gäller att respektive kända metoder kan använ- das. Som administrationsväg kan oral, injektiv eller rektal administra- tion nämnas. Som form av komposition innefattande föreliggande substans kan nämnas pulver, granul, tablett, injektion och suppositorie, varvid dock gäller att administrationen företrädesvis utföres via tablett eller injektion. För beredning av kompositionen för injektion kan man eventuellt använda ett vattenbaserat lösningsmedel, såsom en vatten- baserad fysiologisk saltlösning, steriliserat vatten, Ringers lösning, etc., icke vattenlösliga lösningsmedel, isotoniska medel, indolent- medel, stabiliseringsmedel, antiseptika, suspensionsstabilisatorer, buffertämnen, emulgermedel.
Som exempel på beredning eller framställning av kompositionen enligt föreliggande uppfinning ges följande.
Efter framställning av 50 ml av en vattenbaserad lösning av 1 g av föreliggande substans och 5 g mannitol samt sterilisering av lös- ningen på konventionellt sätt uppdelas den sterilíserade lösningen i ampuller för injektion eller också frystorkas densamma för att fungera som komposition för injektion, vilken utspädes med en vattenbaserad fysiologisk saltlösning eller injektion. Vanligtvis är innehållet av föreliggande substans i kompositionen från 0,01 till 90 vikt-%, före- trädesvis från 0,1 till 60 vikt-%.
Den mängd som administreras av föreliggande substans beror på patientens tillstånd, varvid dock gäller att den vanligtvis är från 0,1 till 10 g/dag/60 kg, företrädesvis från 1 till 6 g/dag/60 kg. 7 462 261 Eftersom enligt föreliggande uppfinning anti-tumöraktiviteten för anti-tumörmedlet och den tumör-tropiska egenskapen hos human- immunoglobinet av det enzymbehandlade huma mmunoglobinet bibehålles i anti-tumörsubstansen enligt föreliggande uppfinning utan att gå för- lorad, gäller att föreliggande substans, när den administreras, när det avsedda tumörstället på ett effektivt sätt och blir kvar där un- der lång tidsperiod, så att den kan utöva sin anti-tumörverkan.
Eftersom det ej är nödvändigt att välja antikroppen bland anti- -tumörantikroppar vid syntetisering av föreliggande substans, är före- liggande uppfinning mycket fördelaktig ur industriell synpunkt.
Föreliggande uppfinning kommer att förklaras mera i detalj med hjälp av nedanstående exempel.
Föreliggande uppfinning är emellertid icke begränsad till nämnda exempel. Av ovanstående beskrivning kan fackmannen på omrâdet lätt ut- läsa de väsentliga särdragen för föreliggande uppfinning, och utan att avvika från själva uppfinningsidén kan fackmannen göra olika föränd- ringar och modifikationer av föreliggande uppfinning för anpassning av densamma till olika tillämpningar och betingelser. ÉÄÉMPEL 1: UNDERSÖKNING AV FÖRDELNINGEN AV HUMANIMMUNOGLOBULIN I syfte att undersöka vilket slag av antikroppar som är prak- tiskt användbart vid förfarandet enligt föreliggande uppfinning ad- 1251-märkt anti-S-180-kanin- immunoglobulin, 1251- -märkt humanimmunoglobulin till en S-180-cancerbärande mus, och för- 125 n . _ I-markta immunoglobuli- ministrerades fördelningen av vardera av 1251-märkt normalt ICR-musimmunoglobulin och delningen av vardera av de administrerade nerna detekterades på följande sätt.
Vart och ett av immunoglobulinerna märktes med 1251 i enheten medelst metoden enligt W. H. Hurter et al (se Biochem. J., §2, 114 (1963)). Exempelvis löstes mitomycin C bundet till anti-S- -180-antikropp (kaninimmunoglobulin) i vattenbaserad 0,5 M fosfor- syrabuffertlösning med pH 7,4 för erhållande av en koncentration av mg/ml, och efter tillsats av 0,5 ml av lösningen i ett s.k. Spick- sattes Naïzsl till lösningen i en mängd av 0,25 mCi. Till bland- protein- ”TDI” ningen sattes 0,7 mg kloramin T upplöst i 200 ul vattenbaserad 0,05 M fosforsyrabuffertlösning för genomförande av en reaktion vid OOC i 15 minuter. Reaktionen avbröts därefter genom tillsats av 10 mg kalium- jodid och 1,75 mg natriumpyrosulfit upplöst i vattenbaserad 0,05 M fosforsyrabuffertlösning. Genom att reaktionsblandningen bringades 462 261 8 att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (innerdiameter 2,2 cm och höjd 40 cm) avlägsnades oreagerat radioaktivt jod och reagensen till bildning av ett 1251-märkt mitomïtin bundet till anti-s-1s0-kanin- immunoglobulin. På samma sätt bands 1'5I-märkt mitomycin till normalt 1251-märkt mitomycín till humanimmunoglobulin.\ ICR-musimmunoglobulin och Till en grupp av S-180-cancerbärande ICR-möss (efter två veckors transplantatíon av S-180-cancer) administrerades vardera av sålunda framställt 125 liner intravenöst, och efter det att djuren hade avlivats efter 24 och I-märkt mitomycin C bundet till respektive immunoglobu- 144 timmar från administrationen uttogs blodet, delen av S-180-cancer, levern, njurarna och tarmarna, och radioaktiviteten för den sålunda utskurna delen eller organet undersöktes med en Y-räknare av brunns- typ för beräkning av den mängd av vardera av sålunda framställt 1251- märkt mitomycin C bundet till respektive immunoglobulin per enhetsvikt av delen eller organet.
Av de sålunda erhållna mängderna kunde fördelningen av substan- sen i den levande kroppen hos det sålunda behandlade djuret efter 24 timmars administration utläsas, såsom redovisas i tabell 1.
TABELL 1 -í-íí- 1% Typ av Ackumulering Förhållande 2) 9: antikropp i tumör 1) Tumör Tumör Tumör Njure Lever Tarmar 1*3) , , 9,0 12,0 2 0,6 2,8 1,5 8,4 3 1,9 1,9 3,8 19,0 l . _ _ Antikropp i tumör Anmarknlngar' *1' Total administrerad antikropp x tumörvikt X 100 ,2_ % ackumulering i tumör ' ackumulering i annan vävnad 6 *3: 1: Anti-S-180-kaninimmunoglobulin 2: Normalt ICR-musimmunoglobulin 3: Humanimmunoglobulin På samma sätt erhölls genom mätning av radíoaktíviteten för de utskurna organen 144 timmar efter administrationen víktprocentandelen av den kvarvarande substansen i varje organ i förhållande till total- mängden kvarvarande substans i djurets kropp, och resultaten redovisas i tabell 2. _æ 9 462 261 TABELL 2 Enhet: vikt-% Typ av Organ eller position för tumören antikropp Del av tumör Lever Njure Mjälte Tarmar Övrigt 1*U sms 7A 131 56 ps 7A 41,3 27,9 4,2 20,9 2,1 3,6 3 38,7 10,2 20,4 10,2 2,0 18,5 Anmärkningar: *1) 1: Anti-S-180-kaninimmunoglobulin 2: Normalt ICR-musimmunoglobulin 3: Humanimmunoglobulin Resultaten visar, att den heterospecifika antikroppen erhállen genom immuniseríng av det heterospecifika djuret med ett tumörantigen uppvisar utmärkt tillgänglighet till tumören, varvid det emellertid också framgår att den naturliga antikroppen av samma art blir kvar i delen av tumören i hög kvantitet jämfört med de övriga organen, även om tillgänglighetsmängden för den naturliga antikroppen är så låg som 1/5 till 1/10 jämfört med tillgängligheten av den artspecifika anti- kroppen. Utgående från dessa fakta har föreliggande uppfinnare visat att den naturliga antikroppen i praktiken är mycket god som bärare.
EXEMPEL 2 FRAMSTÄLLNING AV HUMANIMMUNOGLOBULIN Till 1000 ml serum från en normal frisk person sattes 1000 ml vattenbaserad 0,005 M fosforsyrabuffertlösning av natriumklorid (i fortsättningen benämnd PBS) för framställning av utspätt serum, och till detta utspädda serum sattes långsamt under omröring 2000 ml vat- tenbaserad mättad lösning av ammoniumsulfat. När blandningen hade lämnats att stå i 60 minuter vid 400, utsaltades en fällning, och genom att blandningen utsattes för centrifugalseparation vid 8000 rpm i 30 minuter uppsamlades fällningen och löstes i PBS så att den totala volymen blev 1000 ml. Genom tillsats av 250 ml vattenbaserad mättad lösning av ammoniumsulfat till blandningen inställdes mättnads- graden av ammoniumsulfat för hela blandningen på 20 %. När blandningen blev grumlig och bildade en fällning, utsattes hela blandningen för centrifugering för avlägsnande av fällníngen, som var fibrinogen. Till den sålunda erhållna supernatantvätskan sattes 250 ml vattenbaserad 50 462 261 10 mättad lösning av ammoniumsulfat, så att mättnadsgraden för ammonium- sulfat för hela blandningen blev 33 %. När hela blandningen hade läm- nats att stå i 60 minuter, utsattes den för centrifugering vid S000 rpm i 30 minuter för uppsamling av fällningen. Efter upplösning av den sålunda uppsamlade fällningen i 1000 ml PBS tillsattes 500 ml vattenbaserad mättad lösning av ammoniumsulfat till lösningen. Efter omröring av hela blandningen i 60 minuter utsattes den för centrifuge- ring vid 8000 rpm i 30 minuter för uppsamling av fällningen, och den sålunda uppsamlade fällningen löstes i 300 ml PBS. Lösningen dialyse- rades mot PBS för avlägsnande av ammoniumsulfat, och dialysatet utsat- tes för kolonnkromatografi under användning av en DEAE-cellulosakolonn med 5 cm diameter och 50 cm höjd, varvid en fraktion erhölls vilken passerade igenom vid 0,005 M och pH 8,0. Den fraktion, som passerade genom kolonnen, dialyserades mot destillerat vatten för avlägsnande av det däri ingående saltet, och dialysatet utsattes för frystorkning till bildning av 12,5 g humanimmunoglobulin.
EXEMPEL 3 FRAMSTÄLLNING AV DEN SUBSTANS SOM ERHÅLLES GENOM BINDNING AV IMMUNOGLOBULIN HÄRLETT FRÅN EN NORMAL MÄNNISKA TILL ETT ANTI-TUMÖRMEDEL Vardera av mitomycin C, doxorubicin-hydroklorid, daunorubicil- -hydroklorid, breomycin, aktinomycin och sarkomycin omsattes med immuno- globulin härlett från en normal frisk människa för syntetisering av vardera av nedanstående substanser.
BINDNING AV MITOMYCIN C TILL HUMANIMNUNOGLOBULIN I 100 ml destillerat vatten löstes 1,0 g humanimmunoglobulin, och i den sålunda bildade lösningen löstes 111,3 mg mitomycin C. Efter justering av pH-värdet för lösningen till 5,5 med vattenbaserad 1,0 N saltsyra tillsattes 262,6 mg av 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbo- diimid-hydroklorid till densamma vid 4°C och efter följande reaktions- tid avbröts reaktionen genom tillsats av buffertlösning med pH 5,5. Efter kondensation och avsaltning av reak- tionsblandningen under användning av ett ultrafilter till 10 ml bringa- des 10 ml av det sålunda erhållna kondensatet att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (tillverkad av Pharmacia Japan Co.) med 5 cm diameter och 90 cm höjd för fullständig separation av substansen med hög molekylvikt och substansen med låg molekylvikt. Supernatantlös- ningen erhållen genom att eluatet utsattes för ultracentrifugering i 60 minuter vid 40.000 G frystorkades vid OOC för framställning av ml ättiksyra-natriumacetat- JJ>~ 11 62 261 föreliggande substans som en produkt. Mängden bundet mitomycin C be- stämdes med hjälp av ultraviolett absorption vid 360 nm och redovisas i tabell 3.
TABELL 3 Reaktionstid (timmar) Mitomycin C/humanimmunoglobulin (pg/mg) 1 2,8 4 5,3 24 8,6 På samma sätt som beskrivits ovan bringades 1,0 g humanimmuno- globulin att reagera med vardera av doxorubicin-hydroklorid, dauno- rubicin-hydroklorid, bleomycin och aktinomycin D till bildning av cirka 800 mg av respektive substanser.
Mängden bundet doxorubicin per mg humanimmunoglobulin var 4,8 Hg (i fallet reaktion under 60 minuter) och 9,5 ug (i fallet reaktion i 24 timmar).
EXEMPEL 4 Vardera av nedanstående substanser framställdes genom omsätt- ning av immunoglobulin härlett från en normal människa med vardera av klorambucil, melfalan (fenylaraninsenap), ACNU, uramustin, cyklo- fosfamid och melfalanmetylester medelst amidbíndning, såsom fram- går av nedanstående. 4-1) BINDNING AV MELFALAN TILL HUMANIMMUNOGLOBULIN I 100 ml destillerat vatten löstes 1,0 g humanimmunoglobulin, och 100 mg melfalan suspenderades i den sålunda bildade lösningen.
Efter justering av pH-värdet för den vattenbaserade suspensionen till ,5 genom tillsats av vattenbaserad 1,0 N saltsyra sattes 1-etyl-3- -(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid-hydroklorid till den vattenbaserade suspensionen för reaktion i 24 timmar. Reaktionen avbröts genom till- sats av 5 ml vattenbaserad ättiksyra-natríumacetatbuffert1ösning, och därefter utsattes reaktionsblandningen för kondensation och avsaltning under användning av ett ultrafilter till en volym av 10 ml, och konden- satet (10 ml) bringades att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (tillverkad av Pharmacia Japan Co.) med 5 cm diameter och 90 cm höjd, varigenom substanserna med hög molekylvikt separerades fullständigt från substanserna med låg molekylvikt. 462 261 12 När eluatet hade utsatts för ultracentrifugering vid 40.000 G i 60 minuter, utsattes supernatantvätskan för frystorkning vid OOC för framställning av föreliggande substans. Innehållet av protein i sålunda erhållen föreliggande substans bestämdes med hjälp av Copper-Folin-me- toden under användning av albumin som standard, och alkyleringsaktivi- teten för föreliggande substans bestämdes med hjälp av metoden enligt Epstein (se Epstein, J. Anal. Chem., 27, 1423 (1955)), och som ett resultat därav visade det sig, att 6 ug melfaran hade bundits till 1 mg humanimmunoglobulin. 4-2) BINDNING AV KLORAMBUCIL, ACNU ELLER URAMUSTIN TILL HUMAN- IMMUNOGLOBULIN Med hjälp av samma procedur som i 4-1 bringades 1,0 g human- immunoglobulin att reagera med vardera av klorambucil, ACNU och ura- mustin till bildning av cirka 900 mg av vardera av ifrågavarande substanser. Mängden klorambucil bunden till 1 mg humanimmunoglobulin var 5,1 ug efter reaktion i 60 minuter och 11,7 ug efter reaktion i 24 timmar. 4-3) BINDNING AV METYLBSTER AV MELFALAN TILL HUMANIMUNOGLOBULIN Efter upplösning av 1,0 g humanimmunoglobulin i 100 ml destille- rat vatten löstes 100 mg hydroklorid av metylestern av melfalan vid den sålunda framställda lösningen, och under justering av pH-värdet för lösningen till 5,5 genom tillsats av vattenbaserad 1,0 N saltsyra- lösning tillsattes 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid-hydro- klorid för reaktion i 24 timmar. När reaktionen hade avbrutíts genom tillsats av 5 ml vattenbaserad ättiksyra-natriumacetatbuffertlösning med pH 5,5 till reaktionsblandningen, kondenserades och avsaltades reaktionsblandningen till 10 ml genom användning av ett ultrafílter. ml av den sålunda kondenserade och avsaltade vätskan bringades att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (tillverkad av Pharmacia Co.) med diametern 5 cm och höjden 90 cm, varigenom de högmolekylära substanserna separerades fullständigt från de lågmolekylära substan- serna i reaktionsvätskan. Eluatet utsattes för ultracentrifugering vid 40.000 G i 60 minuter, och supernatantvätskan frystorkades vid 0°C för framställning av föreliggande substans. Mängden metylester av melfaran bunden till 1 mg humanimmunoglobulin var 10 ug.
EXBMPEL 5 Immunoglobulin härlett från normal människa omsattes med vardera av cytarabin, 8-azaguanin, 5-fluoruracil, metotrexat och aminopterin- natrium till bildning av vardera av föreningarna under formning av en 13 462 261 amidbindning, såsom framgår av följande exempel. -1) BINDNING AV METOTREXAT TILL HUMANIMMUNOGLOBULIN Efter upplösning av 1,0 g humanimmunoglobulin i 100 ml destille- rat vatten löstes 151,3 mg metotrexat i den sålunda framställda lös- ningen, och under justering av pH-värdet för lösningen till 5,5 genom tillsats av vattenbaserad 1,0 N saltsyralösning tillsattes 1-etyl-3- -(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid-hydroklorid för reaktion i 24 tim- När reaktionen hade avbrutíts genom tillsats av 5 ml vattenbase- med pH 5,5 till reaktions- reaktionsblandningen till ml av den sålunda kon- att passera genom en kolonn Co.) med 5 cm diameter och mar. rad ättiksyra-natriumacetatbuffertlösning blandningen, kondenserades och avsaltades ml genom användning av ett ultrafilter. denserade och avsaltade vätskan bringades av Sephadex G-25 (tillverkad av Pharmacia 90 cm höjd, varigenom substanserna med hög molekylvikt separerades fullständigt från substanserna med låg molekylvikt i reaktionsvätskan.
Eluatet utsattes för ultracentrifugering vid 40.000 G i 60 minuter, och supernatantvätskan frystorkades vid OOC för framställning avifrå- gmwrmüß substans. Mängden metotrexat bunden till 1 mg humanimmunoglo- bulin bestämd genom användning av ultraviolett absorption vid 305 nm var 10 ug. ' -2) BINDNING AV CYTARABIN, 8-AZAGUANIN, 5-FLUORURACIL ELLER AMINOPTERINNATRIUM TILL HUMANIMMUNOGLOBULIN Efter upplösning av 1,0 g humanimmunoglobulin i 100 ml destille- rat vatten löstes 100 mg av vardera av cytarabin, 8-azaguanin, 5-fluor- uracil och amínopterinnatrium i den sålunda framställda lösningen, och under justering av pH-värdet för lösningen till 5,5 genom tillsats av vattenbaserad 1,0 N saltsyralösning tillsattes 1-etyl-3-(3-dimetyl- aminopropyl)karbodiimid-hydroklorid för reaktion i 24 timmar. När reaktionen hade avbrutits genom tillsats av 5 ml vattenbaserad ättik- syra-natriumacetatbuffertlösning med pH 5,5 till reaktíonsblandningen, kondenserades och avsaltades reaktionsblandningen till 10 ml genom användning av ett ultrafilter. 10 ml av den sålunda kondenserade och avsaltade vätskan bringades att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (tillverkad av Pharmacia Co.) med diametern 5 cm och höjden 90 cm, varigenom substanserna med hög molekylvikt separerades fullständigt från substanserna med låg molekylvikt i reaktionsvätskan. Eluatet utsat- tes för ultracentrifugering vid 40.000 G i 60 minuter, och supernatant- vätskan frystorkades vid OOC till bildning av cirka 900 ml av vardera HV iñågmïïwfiß substanser. Mängden cytarabin bunden till 1 mg human- 55 462 261 14 immunoglobulin var 4,7 ug efter reaktion i 60 minuter och 8,3 ug efter reaktion i 24 timmar.
EXEMPEL 6 BINDNING AV ETT ANTI-TUMORMEDEL TILL HUMANIMMUNOGLOBULIN FCab')Z 6-1) FRAMSTÄLLNING AV HUMANIMMUNOGLOBULIN F(ab')2 Efter upplösning av 1 g humanimmunoglobulin i 100 ml vattenbase- rad 0,1 N natriumacetatbuffertlösning med pH 4,5 sattes pepsin till den sålunda framställda lösningen, så att viktförhållandet enzym till protein blev 1:100 i lösningen, och digestionen utfördes vid 37°C i 16 timmar. När reaktionen hade avbrutits genom tillsats av fast tris- hydroklorid så att pH-värdet för reaktionsblandningen blev 8,0, konden- serades reaktionsvätskan till 10 ml genom användning av ett ultrafilter. ml av kondensatet satsades i en kolonn av Sephadex G-150 (tillverkad av Pharmacia Co.) med diametern 5 cm och höjden 90 cm och det adsorbe- rade materialet eluerades med PBS med pH 7, och av de sålunda erhållna Efter påfyll- ning av den sålunda uppsamlade fraktionen i ett dialysrör utsattes tre topparna uppsamlades den första toppen som F(ab')2. fraktionen för avsaltning och därefter frystorkning för erhållande av humanimmunoglobulin F(ab')2. 6-Z) BINDNING AV ETT ANTI-TUMÖRMEDEL TILL HUMANIMMUNOGLOBULIN 29222 Efter upplösning av 500 mg av det sålunda erhållna humanimmuno- globulinet F(ab')2 i 50 ml destillerat vatten löstes 55,6 mg mitomycin C i den sålunda framställda lösningen. Under justering av lösningens pH-värde till 5,5 med tillsats av vattenbaserad 1,0 N saltsyralösning sattes 131,3 mg 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid-hydroklorid till lösningen vid 4°C, varvid reagensen fick reagera med varandra un- der nedan angiven tid, varpå reaktionen avbröts genom tillsats av 5 ml av en vattenbaserad ättiksyra-natriumacetatbuffertlösning. Efter kon- densering av reaktionsvätskan till 5 ml genom användning av ett ultra- filter bringades kondensatet att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (tillverkad av Pharmacia Co.) med 5 cm diameter och 90 cm höjd för fullständig separation av substanserna med hög molekylvikt och substanserna med låg molekylvikt i kondensatet. När eluatet hade ut- satts för ultracentrífugering vid 40.000 G i 60 minuter, frystorkades supernatantvätskan vid 0°C för erhållande av ifrågavarande substans.
Den mängd mitomycin C som bands till humanimmunoglobulin F(ab')2, vil- ken mängd bestämdes genom användning av ultravioletta absorptionen vid 360 nm, redovisas i tabell 4-1 som en funktion av reaktionstiden. 462 261 TABELL 4-1 Reaktionstid (timmar) Mitomycin C/Humanimmunoglobulin P(ab')2 (ng/mg) 1 3,4 4 6,7 24 10,3 6-3] BINDNING AV ETT ANNAT ANTI-TUMÖRMEDEL TILL HUMANIMMUNO- GLOBULIN F(ab')2 På samma sätt som i 6-2 omsattes vardera av de i tabell 4-2 angivna anti-tumörmedlen med humanimmunoglobulin F(ab')2 till bild- ning av vardera av ifrågavarande substanser.
TABELL 4-2 Anti-tumörmedel Utbyte avsubstanser Doxorubicin-hydroklorid Daunorubicin-hydroklorid Bleomycin Actinomycin D Klorambucil Melfalan ACNU Uramustin Metylester av melfalan Cyklofosfamid Cytarabin 8-azaguanin -fluoruracil Metotrexat Aminopterinnatrium cirka 800 mg cirka 800 mg cirka 800 mg cirka 800 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg cirka 400 mg Dessutom redovisas i tabell 4-3 respektive mängder av doxorubi- cin-hydroklorid, melfalan och metotrexat per 1 mg humanimmunoglobulin F(ab')2 som respektive funktioner av reaktionstiden. 462 261 16 TABELL 4-3 Enhet: ng Anti-tumörmedel Reaktionstid (timmar) 1 24 Doxorubicin-hydroklorid 8,5 19,6 Melfalan 8,1 17,6 Metotrexat 7,5 17,3 EXEMPEL 7 FRAMSTÄLLNING AV FURELIGGANDE SUBSTANS GENOM ANVÄNDNING AV DEXTRAN OCH GLUTARALDEHYD SOM BINDEMEDEL I 500 ml destillerat vatten löstes 500 mg dextran, och efter justering av lösningens pH till 11 genom tillsats av en vattenbaserad 1 N natriumhydroxidlösning sattes en lösning av 250 mg bromcyan i 1 ml acetonitril snabbt till den alkaliska lösningen under omröring, och blandningens pH justerades till 10,8 til. tenbaserad 1 N 11,0 genom tillsats av vat- natriumhydroxidlösning, och pH-värdet bibehölls i 10 minuter efter tillsats av bromcyan. Därefter sattes 100 mg hexamety- lendiamin upplöst i 2,5 ml vatten till blandningen, och pH-värdet för hela blandningen justerades till 9,0 genom tillsats av vattenbaserad 1 N saltsyralösning.
Efter omröring av blandningen i 5 minuter sattes 250 mg melfalan till blandningen, och pH-värdet för reaktionsblandningen reducerades till 6,5 genom tillsats av vattenbaserad 1 N saltsyra, och det reduce- rade pH-värdet upprätthölls i 15 minuter. Därefter kondenserades reak- tionsblandningen vid 4°C till 10 ml. Hela mängden av kondensatet bringa- des att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (tillverkad av Pharmacia Japan Co.) med 5 cm diameter och 90 cm höjd för fullständig låg molekylvikt, och eluatet utsattes för ultracentrifugering vid 40.000 separation av substansen med hög molekylvikt från substansen med G i 60 minuter, och den sålunda erhållna supernatantvätskan frystorka- des vid OOC till bildning av en förening bildad genom bindning av 30 till 50 molekyler melfalan till en molekyl dextran.
Genom användning av 100 mg av den sålunda erhållna föreningen och 100 mg humanimmunoglobulin F(ab')2 under bindning av de båda via glutaraldehyd erhölls en av föreliggande substanser enligt uppfinningen.
Pâ samma sätt som visats ovan, med undantag av att 250 mg mito- (I 462 261 mycin C användes istället för 250 mg melfalan, erhölls en förening bil- dad genom bindning av 50 till 50 molekyler mitomycin C till en molekyl dextran, och under användning av 100 mg av den sålunda erhållna före- ningen och 100 mg humanimmunoglobulin F(ab']2 erhölls en annan substans i närvaro av 100 g/ml glutaraldehyd i systemet vid rums- 17' temperatur.
På exakt samma sätt som visats ovan, med undantag av att 250 mg metotrexat användes i stället för 250 mg mitomycin C, erhölls en före- ning bildad genom tillsats av 30 till 50 molekyler metotrexat till en molekyl dextran. Genom bindning av 100 mg av den sålunda erhållna föreningen till 120 mg humanimmunoglobulin F(ab']2 i närvaro av 100 ug/ml glutaraldehyd (vid den slutliga koncentrationen) erhölls ännu en annan substans. Genom användning av humanimmunoglobulin istäl- let för humanimmunoglobulin F(ab')2 erhölls dessutom ännu en annan av ifrågavarande substanser.
EXEMPEL 8 FRAMSTÄLLNING AV EN SUBSTANS GENOM ANVÄNDNING AV ENBART GLUTARALDEHYD SOM BINDEMEDEL " I 1 ml vattenbaserad 0,01 M fosforsyrabuffertlösning med pH 6,8 löstes 11,3 mg mitomycin C, och 20 ul av en vattenbaserad 1 vikt-% lösning av glutaraldehyd sattes till den sålunda framställda lösningen, och blandningen omrördes i 8 timmar vid rumstemperatur. Därefter sat- tes en lösning av 100 mg humanimmunoglobulin upplöst i 20 ml vatten- baserad fosforsyrabuffertlösning med pH 6,8 till blandningen för ge- nomförande av reaktionen i 2 timmar vid rumstemperatur. Reaktionsbland- ningen bríngades att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 (tillver- kad av Pharmacia Japan Co.) med diametern 5 cm och höjden 90 cm för fullständig separation av substansen med hög molekylvikt och substan- sen med låg molekylvikt. När eluatet hade utsatts för ultracentrifuge- ring vid 40.000 G i 60 minuter, frystorkades supernatantvätskan vid OOC till bildning av en substans vari 9,6 /ug mitomycin C var bundet till 1 mg humanimmunoglobulin.
På samma sätt som redovisats ovan, med undantag av att 196 mg adriamycin användes istället för 11,3 mg mitomycin C, erhölls ännu en annan substans vari 5,6 /ug adriamycin var bundet till 1 mg humanimmunoglobulin. 55 462 261 18 På samma sätt som redovisats ovan, med undantag av att 200 mg metotrexat användes istället för 11,3 mg mitomycin C och att 100 mg humanimmunoglobulin F(ab')2 användes istället för 100 mg humanimmuno- globulin, erhölls ännu en annan substans, vari 7,8 g metotrexat var bundet till 1 mg humanimmunoglobulin F(ab')2.
EXEMPEL 9 FRAMSTÄLLNING AV EN SUBSTANS MED DIETYLMALONIMIDAT SOM BINDEMEDEL I 10 ml vattenbaserad 0,2 M lösning av natriumborat med pH 9,3 löstes 11,3 mg mítomycin C och 100 mg humanimmunoglobulin. Till denna sattes 5 mg dietylmalonimidat, och blandningen omrördes i en timme vid under det att blandningens pH hölls vid 8,6. Därefter sattes ytterligare 2,5 mg dietylmalonimidat till reaktionsblandningen, och omröringen fortsattes i en timme. Nar reaktionen var över, bringa- rumstemperatur, des reaktionsblandningen till neutralitet, och genom tillsats av en vattenbaserad mättad lösning av ammoniumsulfat till reaktionsbland- ningen utfälldes en förening erhållen genom bindning av humanimmuno- globulin till mitomycin C. När fällníngen hade uppsamlats genom att reaktionsblandningen utsattes för centrifugering vid 7000 rpm, löstes fällningen i 5 ml vattenbaserad 5 mM fosforsyrabuffertlösning, och den sålunda erhållna lösningen dialyserades mot destillerat vatten till dess att något ammoniumsulfat inte kunde påvisas i dialysatet (i 72 timmar). Dialysatet bringades att passera genom en kolonn av Sephadex G-25 med 5 cm diameter och 90 cm höjd för fullständigt av- lägsnande av substansen med låg molekylvikt i dialysatet. Eluatet frystorkades vid -20°C för framställning av en substans, vari 6,3 g mitomycin C var bundet till 1 mg humanimmunoglobulin.
Pâ exakt samma sätt som beskrivits ovan erhölls en annan substans, F(ab')2.
På samma sätt som beskrivits ovan erhölls vardera av ifråga- varande substanser av l0O mg humanimmunoglobulin och en av melfalan och amínopterinnatrium i ett utbyte av 85 mg. vari mitomycin var bundet till humanimmunoglobulin EXEMPEL 10 UNDERSOKNING AV ANTI-TUMORAKTIVITETER Undersökning av anti-tumöraktiviteten för substanser erhåll- na genom bindning av ett anti-tumörmedel till humanimmunoglobulin eller erhållna genom bindning av anti-tumörmedlet till humanimmunoglo- Mï 07 19 462 261 bulin F(ab'), utfördes under användning av tre typer av tumörer, var- vid anti-tumöraktiviteten för anti-tumörmedlet jämfördes på följande sätt. -1) ANTI-TUMORAKTIVITET GENTEMOT SOLID SARKOM 180-TUMUR Celler av mussarkom-180, vilka hade utsatts för upprepad sub- -odling på ICR-mus, transplanterades subkutant i axilardelen hos var- dera av 10 ICR-möss i en grupp med 1 X 106 celler/djur, och till var- dera av de sålunda behandlade mössen administrerades intraperitonealt varannan dag och totalt 10 gånger en vattenbaserad lösning av vart och ett av de kända anti-tumörmedlen, en vattenbaserad lösning av vardera av ifrågavaræuk substanser framställda genom bindning av ett av de kända anti-tumörmedlen till humanimmunoglobulin eller en vatten- baserad lösning av vardera av ifrågavarande substanser framställda genom bindning av ett av de kända anti-tumörmedlen till humanimmu- noglobulin F(ab'),. Fem dagar efter den sista administrationen av- livades mössen fö; utskärning av respektive tumörer, som vägdes.
Den genomsnittliga vikten för tumörerna (T) hos de sålunda behand- lade mössen och den genomsnittliga vikten för tumörerna (Ö) hos jämförelsemöss, till vilka en vattenbaserad fysiologisk saltlösning hade administrerats istället för ovannämnda medel, behandlades med hjälp av följande formel, varigenom anti-tumöraktiviteten för den administrerade substansen erhölls, dvs aktiviteten då Jet gäller att förhindra utvecklingen av den transplanterade tumören: Anti-tumöraktivitet (%) = (1 - -É-) X 100 C Den sålunda erhållna anti-tumöraktíviteten för substansen framställd enligt exemplen 3 till 6 redovisas i tabell 5 under jämförelse med den för anti-tumörmedlet använt för framställning av ifråga- varande substans. 462 261 20 TABELL 5 ANTI-TUMORAKTIVITET (AKTIVITET DÅ DET GÄLLER ATT FURHINDRA UTVECKLINGEN AV EN SOLID SARKOM-180-TUMÖR) Administrerad substans Administrerad mängd Anti-tumör- (mg/kg kroppsvikt) aktivitet (%) Totalt Beräknat som anti-tumörmedel Mitomycin 1 1 40 Mitomycin + humanimmunoglobulin 200 1 35 Mitomycin + humanimmunoglobulin F(ab')2 200 1 38 Bleomycin 0,5 0, 45 Bleomycin + humanimmunoglobulin 100 0,5 40 Bleomycin + humanimmunoglobulin P(ab')2 100 0,5 42 Doxorubicin 2 2 50 Doxorubicin + humanímmunoglobulin 400 2 47 Doxorubicin + humanimmunoglobulin F(ab')2 400 2 49 -2) ANTI-TUMÖRAKTIVITET MOT YOSHIDA-SARKOM Ascítesceller från Yoshída-sarkom, som hade utsatts för upprepad sub-odling under användning av Donryu-råttor, transplanterades till abdominalkaviteten hos vardera av 10 Donryu-råttor i en grupp med 1><1o6 nen administrerades en vattenbaserad lösning av ett anti-tumörmedel, celler/djur, från en tidpunkt 24 timmar efter transplantatio- en vattenbaserad lösning av en substans erhållen genom bindning av anti-tumörmedlet till humanimmunoglobulín eller en vattenbaserad lös- ning av en substans erhållen genom bindning av anti-tumörmedlet till humanimmunoglobulín F(ab')2 varannan dag totalt fem gånger, varvid detta skedde intraperítonealt till den sålunda transplanterade råttan.
Råttor observerades för registrering av det genomsnittliga antalet överlevandedagar (T) (för råttor admínistrerade med varje medel), och II Ü' 21 e462 261 det genomsnittliga antalet överlevandedagar (Ü) (för råttor som enbart administrerades med en vattenbaserad fysiologisk saltlösning istället för medlet). Graden av livsförlängning beräknades med hjälp av formeln: crad av livsförlängning (%) (-š- X 100) C Resultaten redovisas i tabell 6.
TABELL 6 ANTI-TUMÖRAKTIVITET (GRAD AV LIVSFÖRLÄNGNING) Adminístrerad substans Adminístratíonsmängd Grad av (mg/kg kroppsvikt) lívsför- längning Totalt Beräknat som (%) anti-tumörmedel Klorambucil 1,0 1,0 259 Klorambucil + humanímmunoglobulin 200 1 230 Klorambucil + humanimmunoglobulín*20O 1 235 Melfalan _ 1,5 1,5 230 Melfalan + humanimmunoglobulin 300 1,5 200 Melfalan + humanimmunoglobulin* ,30O 1,5 190 Melfalanmetylester + humanimmuno- globulin %00 1,5 220 Melfalanmetylester + humanimmuno- globulin* 300 1,5 230 Uramustin 5 5 290 Uramustín + humanimmunoglobulin 1000 5 240 Uramustin + humanimmunoglobulín 1000 5 260 Anm: * betyder humanimmunoglobulin F(ab')2 -3) ANTI-TUMÖRAKTIVITET MOT MUSLEUKEMI P-388 Ascitesceller av musleukemi P-388, som hade utsatts för upprepad subkultur under användning av DBA/2-mus, transplanterades intraperíto- nealt på vardera av 10 DBA/2-möss ur en grupp, och från en tidpunkt 24 timmar efter transplantationen-administrerades íntraperitonealt en gång per dag under fem på varandra följande dagar en vattenbaserad lösning av vardera av anti-tumörmedlen, en vattenbaserad lösning av vardera av 462 261 22 substanserna erhållna genom bindning av varje anti-tumörmedel till humanimmunoglobulin eller en vattenbaserad lösning av vardera av substanserna erhållna genom bindning av var och en av antí-tumör- substanserna till humanimmunoglobulin F(ab')Z. De sålunda behandlade mössen observerades för registrering av det genomsnittliga antalet överlevandedagar (T) för mössen administrerade med medlet eller substansen och det genomsnittliga antalet överlevandedagar (Û) för kontrollmössen (administrerade med en vattenbaserad fysiologisk salt- lösning istället för medlet eller substansen). Anti-tumöraktiviteten för medlet eller substansen (grad av livsförlängning) beräknades med hjälp av följande formel.
T Grad av livsförlängning (%) = (-- X 100) Û Resultaten redovisas i tabell 7.
TABELL 7 ANTI-TUMÖRAKTIVITET (GRAD AV LIVSFÖRLÄNGNING) r/l I? Administrerad substans Adminístrationsmängd Grad av (mg/kg kroppsvikt) livsför- längning Totalt Beräknat som (%) anti-tumörmedel Cytarabin 20 20 220 Cytarabin + humanimmunoglobulin 4000 20 190 Cytarabin + humanimmunoglobulin* 4000 20 195 Metotrexat 3 3 250 Metotrexat + humanimmunoglobulin 600 3 220 Metotrexat + humanimmunoglobulin* 600 3 235 Aminopterinnatrium 3 3 270 Aminopterinnatrium + humanimmuno- globulin 600 3 240 Aminopterinnatrium + humanimmuno- globulin* 600 3 250 (H Anm: * betyder humanimmunoglobulin F(ab')2 462 TABELL 7 (forts.) Administrerad substans Administrationsmängd Grad av (mg/kg kroppsvikt) livsför- längníng Totalt Beräknat som (%) anti-tumörmedel Melfalan 1,5 1,5 230 Melfalan + dextran + humanimmuno- globulin 15 1,5 210 Melfalan + dextran + humanimmuno- globulin* 15 1,5 220 Adríamycin 2 2 50 Adriamycín + humanimmunoglobulin 20 2 48 Adriamycin + humanímmunoglobulin* 20 2 46 Mitomycín C 1 1 40 Mitomycin C + humanimmunoglobulin 10 1 35 Mitomycin C + humanimmunoglobulin* 10 1 38 Anm: * betyder humanimmunoglobulin F(ab')2

Claims (19)

462 267 24 PATENTKRAV
1. Anti-tumörsubstans, k ä n n e t e c k n a d av att den innefattar en substans erhållen genom bindning av melfalan eller en ester därav till humanimmunoglobulin härlett från en normal frisk person.
2. Anti-tumörsubstans enligt krav 1, k ä n n e t e c k - n a d av att humanimmunoglobulinet är IgG.
3. Anti-tumörsubstans enligt krav l, k ä n n e t e c k - n a d av att humanimmunoglobulinet är F(ab')2.
4. Anti-tumörsubstans enligt något av kraven 1-3, k ä n n e t e c k n a d av att bindningen är utförd under an- vändning av en vattenlöslig karbodiimid.
5. Anti-tumörsubstans enligt något av kraven 1-3, k ä n - n e t e c k n a d av att bindningen är utförd under användning av isocyanat, dietylmalonimidat, glutaraldehyd, polyglutamin- syra eller dextran.
6. Anti-tumörsubstans enligt något av de föregående kraven, k ä n n e t e c k n a d av att den föreligger i en form för oral administration.
7. Anti-tumörsubstans enligt något av kraven 1-5, k ä n - n e t e c k n a d av att den föreligger i en form för injektion.
8. Förfarande för framställning av en anti-tumörsubstans, k ä n n e t e c k n a t av att man löser melfalan eller en ester därav i ett vattenbaserat lösningsmedel, att man efter tillsats av ett bindemedel till den sålunda bildade vattenbaserade lös- ningen sätter humanimmunoglobulin härlett från en normal frisk person till den vattenbaserade lösningen, varigenom nämnda human- immunoglobulin och melfalan eller ester därav omsättes vid en temperatur av från -30 till SOOC under från en minut till 48 timmar, och att den sålunda framställda reaktionsprodukten ut- sättes för rening medelst utsaltning, utfällning, omkristallisa- tion, eluering eller kolonnfraktionering.
9. Förfarande enligt krav 8, k ä n n e t e c k n a t av att det vattenbaserade lösningsmedlet väljes ur gruppen be- stående av en vattenbaserad sur lösning, en vattenbaserad alka- lisk lösning, en vattenbaserad neutral lösning eller en vatten- baserad fosforsyrabuffertlösning innehållande natriumborat.
10. Pörfarande enligt krav 8 eller 9, k ä n n e t e c k - 25 462 261 n a t av att bindemedlet väljes ur gruppen bestående av karbo- diimid, dextran, glutaraldehyd, dietylmalonimidat, isocyanat och polyglutaminsyra.
11. ll. Pörfarande enligt något av kraven 8-10, k ä n n e - t e c k n a t av att humanimmunoglobulinet år IgG.
12. Förfarande enligt något av kraven 8-10, k ä n n e - t e c k n a t av att humanimmunoglobulinet är F(ab')2.
13. Farmaceutisk komposition i enhetsdoseringsform, k ä n n e t e c k n a d av att den innefattar en anti-tumör- substans erhållen genom bindning av melfalan eller en ester där- av till humanimmunoglobulin härlett från en normal frisk person som aktiv komponent däri.
14. Farmaceutisk komposition enligt krav 13, k ä n n e - t e c k n a d av att humanimmunoglobulinet är IgG.
15. Farmaceutisk komposition enligt krav 13, k ä n n e - t e c k n a d av att humanimmunoglobulinet är F(ab')2.
16. Farmaceutisk komposition enligt något av kraven 13-15, k ä n n e t e c k n a d av att bindningen är utförd under användning av en vattenlöslig karbodiimid som bindnings- medel.
17. Farmaceutísk komposition enligt något av kraven 13-15, k ä n n e t e c k n a d av att bindningen är utförd under an- vändning av ett bindningsmedel valt ur gruppen bestående av iso- cyanat, dietylmalonimidat, glutaraldehyd, polyglutaminsyra och dextran.
18. Parmaceutisk komposition enligt något av kraven 13-17, k å n n e t e c k n a d av att den föreligger i en form för oral administration.
19. Parmaceutisk komposition enligt något av kraven 13-17, k ä n n e t e c k n a d av att den föreligger i en form för injektion.
SE8401942A 1983-04-08 1984-04-06 Farmaceutisk komposition och konjugat av melfalan och normalt humanimmunoglobulin med antitumoerverkan samt foerfarande foer dess framstaellning SE462261B (sv)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP58061923A JPS59186924A (ja) 1983-04-08 1983-04-08 ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8401942D0 SE8401942D0 (sv) 1984-04-06
SE8401942L SE8401942L (sv) 1984-11-13
SE462261B true SE462261B (sv) 1990-05-28

Family

ID=13185161

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8401942A SE462261B (sv) 1983-04-08 1984-04-06 Farmaceutisk komposition och konjugat av melfalan och normalt humanimmunoglobulin med antitumoerverkan samt foerfarande foer dess framstaellning
SE8904004A SE8904004L (sv) 1983-04-08 1989-11-27 Anti-tumoersubstans och foerfarande foer framstaellning av densamma

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8904004A SE8904004L (sv) 1983-04-08 1989-11-27 Anti-tumoersubstans och foerfarande foer framstaellning av densamma

Country Status (7)

Country Link
US (2) US4738843A (sv)
EP (1) EP0122132A3 (sv)
JP (1) JPS59186924A (sv)
CA (1) CA1301066C (sv)
DK (1) DK181484A (sv)
SE (2) SE462261B (sv)
ZA (1) ZA842272B (sv)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0653682B2 (ja) * 1983-04-08 1994-07-20 呉羽化学工業株式会社 ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤
CA1260828A (en) * 1983-07-04 1989-09-26 Masakazu Iwai Therapeutic and prophylactic agent for gastrointestinal ulcers
FR2581313A1 (fr) * 1985-05-02 1986-11-07 Pasteur Institut Composes suscitant la formation d'anticorps, compositions immunogeniques et compositions immunoprotectrices les contenant et procede d'obtention d'anticorps les mettant en oeuvre
EP0250486A4 (en) * 1986-01-03 1988-05-25 Univ Melbourne MELPHALAN DERIVATIVES.
CA1330378C (en) * 1986-05-08 1994-06-21 Daniel J. Coughlin Amine derivatives of folic acid analogs
JPH0662438B1 (sv) * 1986-08-28 1994-08-17 Teijin Ltd
WO1988001513A1 (en) * 1986-08-28 1988-03-10 Teijin Limited Cytocidal antibody complex and process for its preparation
MY103231A (en) * 1987-03-11 1993-05-29 Univ Melbourne Immunoglobulin conjugates
US4900547A (en) * 1987-10-23 1990-02-13 University Of British Columbia Method to immunize mammals against tumors
GB8727157D0 (en) * 1987-11-19 1987-12-23 Wellcome Found Pharmaceutical formulations
US4994440A (en) * 1989-02-13 1991-02-19 Creaven Patrick J Method for the treatment of renal cell carcinoma
US6326467B1 (en) * 1989-02-23 2001-12-04 Colorado State University Research Foundation Hormone-recombinant toxin compounds and methods for using same
CA2021942C (en) * 1989-08-10 2001-04-10 Michel Page Coupling of an anti-tumor to an antibody using glutaraldehyde preactivated anti-tumor agent
GB2246779B (en) * 1990-08-03 1994-08-17 Delta Biotechnology Ltd Tumour-associated protease inhibitors targeted to tumour cells
ATE127018T1 (de) * 1992-03-06 1995-09-15 Fiutowski Zdzislaw Pharmazeutische zusammensetzung mit antiviraler und antibakterieller wirkung.
JP2578044B2 (ja) * 1992-03-14 1997-02-05 呉羽化学工業株式会社 フェニルアラニン−グリシン誘導体、その製造方法、及びその誘導体を含有する抗腫瘍剤
EP0679083A4 (en) * 1992-12-21 1999-03-24 Ophidian Pharm Inc PREVENTION AND TREATMENT OF SEPTICEMIA.
EP0608546A3 (en) * 1992-12-22 1995-09-27 Takeda Chemical Industries Ltd Glia activating factor (gaf), antibodies against it and their uses.
US5382582A (en) * 1993-03-26 1995-01-17 Chan; Carcy L. Methotrexate analogs and methods of using same
US5502037A (en) * 1993-07-09 1996-03-26 Neuromed Technologies, Inc. Pro-cytotoxic drug conjugates for anticancer therapy
US5698556A (en) * 1995-06-07 1997-12-16 Chan; Carcy L. Methotrexate analogs and methods of using same
US6441025B2 (en) * 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
PT923941E (pt) * 1996-06-27 2006-09-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Medicamentos para mieloma a serem utilizados com agentes antitumorais de mostarda nitrogenada
US20080312201A1 (en) * 2004-09-10 2008-12-18 Patrick Fogarty Reduced Toxicity Methotrexate Formulations and Methods for Using the Same
AU2006292433B2 (en) * 2005-09-20 2011-05-19 Amgen Inc. Method for generating F(ab')2 antibody fragments
ES2473665T3 (es) 2005-11-28 2014-07-07 Verrow Pharmaceuticals, Inc. Composiciones útiles para reducir la nefrotoxicidad y los métodos de uso de las mismas
JP5237821B2 (ja) 2005-12-05 2013-07-17 日東電工株式会社 ポリグルタミン酸−アミノ酸結合体および方法
US20080181852A1 (en) * 2007-01-29 2008-07-31 Nitto Denko Corporation Multi-functional Drug Carriers
CN104800856A (zh) * 2007-04-10 2015-07-29 日东电工株式会社 多功能聚谷氨酸盐药物载体
JP2010526917A (ja) * 2007-05-09 2010-08-05 日東電工株式会社 複数種の薬物を有するポリグルタミン酸塩複合体及びポリグルタミン酸塩−アミノ酸複合体
EP2155255B1 (en) 2007-05-09 2013-08-14 Nitto Denko Corporation Compositions that include a hydrophobic compound and a polyamino acid conjugate
WO2008141111A2 (en) * 2007-05-09 2008-11-20 Nitto Denko Corporation Polymers conjugated with platinum drugs
EP2265274B1 (en) 2008-03-03 2018-11-21 Tosk, Inc. Methotrexate adjuvants to reduce toxicity and methods for using the same
WO2009111271A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-11 Nitto Denko Corporation Polymer paclitaxel conjugates and methods for treating cancer
AR077384A1 (es) 2010-07-05 2011-08-24 Eriochem Sa Una formulacion farmaceutica inyectable de melfalano.
AU2013280644B2 (en) 2012-06-26 2018-08-02 Jeffrey A. BACHA Methods for treating tyrosine-kinase-inhibitor-resistant malignancies in patients with genetic polymorphisms or AHI1 dysregulations or mutations employing dianhydrogalactitol, diacetyldianhydrogalactitol, dibromodulcitol, or analogs or derivatives thereof
JP2016519684A (ja) 2013-04-08 2016-07-07 デニス エム ブラウン 準最適に投与された薬物療法の有効性を改善するための及び／又は副作用を低減するための方法および組成物
US10723160B2 (en) 2018-01-23 2020-07-28 Ferro Corporation Carbide, nitride and silicide enhancers for laser absorption
US10854554B2 (en) 2018-01-23 2020-12-01 Ferro Corporation Carbide, nitride and silicide enhancers for laser absorption

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1509707A (en) * 1974-09-20 1978-05-04 Searle & Co Immunological compounds
GB1541435A (en) * 1975-02-04 1979-02-28 Searle & Co Immunological materials
IL47372A (en) * 1975-05-27 1979-10-31 Yeda Res & Dev Fab'dimers bound to daunomycin or adriamycin,their preparation and pharmaceutical compositions containing same
US4263279A (en) * 1975-08-19 1981-04-21 Yeda Research & Development Co. Ltd Pharmaceutically active compositions containing adriamycin and daunomycin
US4017471A (en) * 1975-09-15 1977-04-12 G. D. Searle & Co. Immunological compounds
JPS5364617A (en) * 1976-11-22 1978-06-09 Furukawa Electric Co Ltd:The Manufacture of oxygen-free high-conductivity copper
JPS54132503A (en) * 1978-04-07 1979-10-15 Kayaku Antibiotic Research Co Immune globulin combined neocarcinostatin
FR2437213A1 (fr) * 1978-09-28 1980-04-25 Cm Ind Produits cytotoxiques formes par liaison covalente de la chaine a de la ricine avec un anticorps et leur procede de preparation
US4493793A (en) * 1978-12-26 1985-01-15 E-Y Laboratories Soluble immunoassay reagent comprising lectin covalently bonded to reactive component
US4315851A (en) * 1978-12-29 1982-02-16 Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition having antitumor activity
JPS5616418A (en) * 1979-07-20 1981-02-17 Teijin Ltd Antitumor protein complex and its preparation
US4359457A (en) * 1980-09-30 1982-11-16 Neville Jr David M Anti Thy 1.2 monoclonal antibody-ricin hybrid utilized as a tumor suppressant
FR2504010B1 (fr) * 1981-04-15 1985-10-25 Sanofi Sa Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation
US4489710A (en) * 1981-06-23 1984-12-25 Xoma Corporation Composition and method for transplantation therapy
JPH0651643B2 (ja) * 1983-01-19 1994-07-06 帝人株式会社 殺細胞性修飾免疫グロブリン及びその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP0122132A3 (en) 1985-11-27
SE8904004D0 (sv) 1989-11-27
JPS6330289B2 (sv) 1988-06-17
US4738843A (en) 1988-04-19
ZA842272B (en) 1984-11-28
DK181484A (da) 1984-10-09
EP0122132A2 (en) 1984-10-17
JPS59186924A (ja) 1984-10-23
CA1301066C (en) 1992-05-19
SE8401942L (sv) 1984-11-13
DK181484D0 (da) 1984-04-06
US4925662A (en) 1990-05-15
SE8401942D0 (sv) 1984-04-06
SE8904004L (sv) 1991-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE462261B (sv) Farmaceutisk komposition och konjugat av melfalan och normalt humanimmunoglobulin med antitumoerverkan samt foerfarande foer dess framstaellning
US4315851A (en) Pharmaceutical composition having antitumor activity
DE69830570T3 (de) Immuntherapie der b-zell bösartige krankheiten mittels anti-cd22 antikörper
EP0354729B1 (en) Cytotoxic drug conjugates
US6129916A (en) Method of Increasing activation on proliferation of T cells using antibody-microbead conjugates
US6117982A (en) Conjugates of microbeads and antibodies specific for T lymphocytes and their use as in vivo immune modulators
JPH04504129A (ja) 炎症組織部位の画像化
JPH08505764A (ja) 腫瘍血管内皮細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体とその利用方法
JPS631296B2 (sv)
CN1056084C (zh) 抗与表面抗原相关的cd33的免疫毒素
CH664969A5 (fr) Lymphokine humain, sa production et son utilisation pour obtenir un anticorps monoclonal specifique de ce lymphokine.
JPS63502112A (ja) メルファラン誘導体
CN88101810A (zh) 免疫球蛋白结合物
KR930004596B1 (ko) 신규 림포킨(lymphokine) 및 이에 대해 특이성을 갖는 모노클로날(monoclonal) 항체의 제조 방법
JPS6254086B2 (sv)
JPH02504267A (ja) 肝遮断薬
JPS6069034A (ja) 免疫毒素、免疫毒素を含有する薬剤及び免疫毒素の生体外使用方法
Burke Induced immunologic response to tumors
JPS6256136B2 (sv)
JPS6256137B2 (sv)
JPH0193538A (ja) 抗腫瘍剤
JPH072690A (ja) インターロイキン２を含有してなる免疫療法剤
WO2003007874A2 (en) Anti-tumor activity from reptile serum
JPS62142124A (ja) ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤
JPS62142123A (ja) ヒト免疫グロブリン結合抗腫瘍剤

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8401942-1

Effective date: 19921108

Format of ref document f/p: F