ES2473665T3

ES2473665T3 - Composiciones útiles para reducir la nefrotoxicidad y los métodos de uso de las mismas

Info

Publication number: ES2473665T3
Application number: ES06846375.1T
Authority: ES
Inventors: Vernon D. Rowe
Original assignee: Verrow Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Verrow Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2005-11-28
Filing date: 2006-11-22
Publication date: 2014-07-07
Anticipated expiration: 2026-11-22
Also published as: WO2007062403A2; JP2009517402A; AU2006318216C1; EP1954292B1; JP2013231079A; KR20080082659A; PT1954292E; EP1954292A2; CA2631014A1; US20070123478A1; NZ568288A; WO2007062403A9; AU2006318216A2; EP1954292A4; CN101355952A; HK1125822A1; WO2007062403A3; AU2006318216B2; AU2006318216A1; JP2015155462A

Abstract

Una composición que comprende una ciclodextrina sustituida de fórmula: ciclodextrina-[(O-R-Y)-(Me)+]n donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo, alquenilo o alquinilo C1-10 de cadena lineal o ramificado; cicloalquilo C3-8 y arilo C3-8, conteniendo cada anillo opcionalmente 1 o más heteroátomos seleccionados de entre S, N y O; y opcionalmente sustituido con halo o hidroxilo; Y es un grupo seleccionado del grupo que consiste en COO, SO4, SO3, PO3H y PO4; Me+ es un catión farmacéuticamente aceptable; y n es un número entero superior a 1; y un agente de contraste nefrotóxico seleccionado de entre iohexol, ioversol, diatrizoato de meglumina e ioxaglato, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, estando dicha ciclodextrina presente en una cantidad eficaz para inhibir sustancialmente el efecto nefrotóxico de dicho agente, y donde la proporción molar del agente con respecto a la ciclodextrina es de 1,1:1 a 50:1.

Description

Composiciones útiles para reducir la nefrotoxicidad y los métodos de uso de las mismas.

Antecedentes de la invención

Se sabe que hay numerosos fármacos y otras sustancias que son nefrot�xicos y pueden causar insuficiencia renal a través de una variedad de mecanismos, entre los que se incluyen la toxicidad directa en los t�bulos renales, la nefritis intersticial alérgica y la cristalización del fármaco dentro de los t�bulos renales, que puede conducir a insuficiencia renal olig�rica aguda. Los fármacos nefrot�xicos incluyen agentes antineopl�sicos tales como cisplatino, metotrexato y doxirrubicina, antiinflamatorios no esteroideos (AINE) tales como los inhibidores de COX-2, antibióticos (por ejemplo, aminogluc�sidos, anfotericina), antivirales (por ejemplo, aciclovir, indinivir), inhibidores de la acetilcolinesterasa, bloqueadores del receptor de la angiotensina II (BRA), litio y medios de contraste radiogr�fico.

El fármaco nefrot�xico puede ser cualquier agente farmacéutico, incluyendo moléculas de bajo peso molecular y p�ptidos, que provoque daño renal tras su administración a un hospedador. Dichos fármacos incluyen, a modo de ejemplo, diuréticos, AINE, inhibidores de la ECA, ciclosporina, tacrolimus, medios de contraste radiogr�fico, interleucina-2, vasodilatadores (hidralazina, bloqueadores del canal del calcio, minoxidil, diazoxida), mitomicina C, estr�genos conjugados, quinina, 5-fluorouracilo, ticlopidina, clopidogrel, interfer�n, valaciclovir, gemcitabina, bleomicina, heparina, warfarina, estreptocinasa, aminogluc�sidos, cisplatino, nedaplatino, metoxiflurano, tetraciclina, anfotericina B, cefaloridina, estreptozocina, tacrolimus, carbamazepina, mitramicina, quinolonas, foscarnet, pentamidina, gammaglobulina intravenosa, fosfamida, zoledronato, cidofovir, adefovir, tenofovir, mannitol, dextr�n, hidroxietilalmid�n, lovastatina, etanol, codeína, barbituratos, diazepam, quinina, quinidina, sulfonamidas, hidralazina, triamtereno, nitrofuranto�na, mefenito�na, penicilina, meticilina, ampicilina, rifampina, sulfonamidas, tiazidas, cimetidina, fenito�na, alopurinol, cefalosporinas, citosina arabin�sido, furosemida, interfer�n, ciprofloxacina, claritromicina, telitromicina, rofecoxib, pantoprazol, omeprazol, atazanavir, oro, penicilamina, captopril, litio, mefenamato, fenoprof�n, mercurio, interfer�n, pamidronato, fenclofenac, tolmetin, foscarnet, aciclovir, metotrexato, sulfanilamida, triamtereno, indinavir, foscarnet, ganciclovir, metisergida, ergotamina, dihidroergotamina, metildopa, pindolol, hidralazina, atenolol, taxol, factor de necrosis tumoral, clorambucil, interleucinas, bleomicina, etop�sido, fluorouracil, vinblastina, doxorrubicina, cisplatino y similares (véase, en general, Devasmita et al., Nature Clinical Practice Nephrology (2006) 2, 80-91).

Metotrexato

De acuerdo con una realización, el fármaco nefrot�xico es el metotrexato, o un derivado o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo. El metotrexato (ácido N-[4-[[(2,4-diamino-6pteridinil)metil]metilamino]benzoil]-L-glut�mico) es un antimetabolito quimioterap�utico de fase S usado para el tratamiento de diversos neoplasmas, particularmente, linfomas del SNC. El MTX es uno de los agentes antineopl�sicos más ampliamente usados, y se emplea en el tratamiento de enfermedades neopl�sicas tales como coriocarcinoma gestacional, osteosarcoma, corioadenoma destruens, mola hidatidiforme, leucemia linfoc�tica aguda, cáncer de mama, c�nceres epidermoides de cabeza y cuello, micosis fungoide avanzada, cáncer de pulmón y linfomas no de Hodgkins (“Physicians Desk Reference” (45 ed.), Medical Economical Co., Inc., 1185-89 (Des Moines, Iowa (1991))). El MTX también es un eficaz agente inmunosupresor, con utilidad en la prevención de la reacción del injerto contra hospedador que se puede producir como consecuencia de los transplantes de tejidos, as� como en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Por consiguiente, el MTX se puede emplear en el tratamiento de la psoriasis grave e incapacitante y de la artritis reumatoide (Hoffmeister, The American Journal of Medicine (1983) 30:69-73; Jaffe, “Arthritis and Rheumatism” (1988) 31: 299).

Sin embargo, el metotrexato se asocia con la toxicidad renal y hepática cuando se aplica en la “pauta de dosificación elevada” que normalmente es necesaria para obtener su eficacia máxima (Barak et al., J. American Coll. Nutr. (1984) 3:93-96).

Numerosas patentes desvelan el MTX y análogos de MTX, pudiéndose usar cualquiera de ellas en la puesta en práctica de la presente invención. Véase, por ejemplo, las patentes de EE.UU. N� 2.512.572, 3.892.801, 3.989.703, 4.057.548, 4.067.867, 4.079.056, 4.080.325, 4.136.101, 4.224.446, 4.306.064, 4.374.987, 4.421.913, 4.767.859, 3.981.983, 4.043.759, 4.093.607, 4.279.992, 4.376.767, 4.401.592, 4.489.065, 4.622.218, 4.625.014, 4.638.045, 4.671.958, 4.699.784, 4.785.080, 4.816.395, 4.886.780, 4.918.165, 4.925.662, 4.939.240, 4.983.586, 4.997.913, 5.024.998, 5.028.697, 5.030.719, 5.057.313, 5.059.413, 5.082.928, 5.106.950, 5.108.987, 4.106.488, 4.558.690, 4.662.359, 6.559.149, estando cada una de las cuales incorporada en el presente documento por referencia. Otros análogos de MTX y compuestos de antifolato relacionados incluyen trimetrexato, edatrexato, AG331, piritrexim, 1843U89, LY 231514, ZD 9331, raltritrexed, lometrexol, MTA y AG337 (Takimoto, “Seminars in Oncology” (1997) 24:S18-40-51; Sorbello et al., “Haematoligica” (2001) 86:121-27); CB 3717, LY 309887 (Calvert, “Seminars in Oncology” (1999) 26:S6, 3-10; Rosowsky, Progress in Med. Chem. (1989) 26:1-237)).

Por consiguiente, las composiciones desveladas en el presente documento se pueden usar para el tratamiento del cáncer o para la inhibición del crecimiento del cáncer, as� como para el tratamiento de la esclerosis múltiple y los síntomas asociados con la misma. Las composiciones se pueden usar en conjunción con o en combinación con otros agentes activos tales como el interfer�n. Además, las composiciones se pueden usar para el tratamiento de trastornos autoinmunes tales como el lupus y la artritis reumatoide.

Antibi�ticos

Los antibióticos aminogluc�sidos, tales como las gentamicinas, kanamicinas, estreptomicinas y tobramicinas, generalmente se utilizan como agentes antimicrobianos de amplio espectro contra, por ejemplo, bacterias gram positivas, gram negativas y resistentes a ácidos. Sin embargo, los aminogluc�sidos se suelen asociar a efectos secundarios no deseados tales como nefrotoxicidad y ototoxicidad. Otros antibióticos que se pueden usar en la práctica de la presente invención incluyen la vancomicina y la cefalosporina, tales como Rocephin� y Kefzol.

F�rmacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE)

Todos los AINE presentan toxicidad renal. Por lo general, los AINE se usan para reducir el dolor, evitando el uso de derivados opiáceos. Dos AINE ampliamente usados son la indometacina y Toradol� fabricados por Roche Pharmaceuticals.

Agentes antif�ngicos

Se sabe que tanto la caspofungina y como la anfotericina B son nefrot�xicas, y se pueden usar en la puesta en práctica de la invención desvelada.

Agentes antineopl�sicos

Muchos agentes antineopl�sicos presentan una toxicidad renal limitante de la dosis, y se pueden usar en la puesta en práctica de la presente invención. Dichos agentes incluyen, a modo de ejemplo, cisplatino, doxirrubicina, ciclofosfamida, butasulfano y similares.

Varias referencias han enseñado que un derivado de ciclodextrina usado en exceso molar en comparación con un fármaco reduce la nefrotoxicidad del mismo (véanse, por ejemplo, los documentos U.S. 2005/0032676 relativo a un antibiótico glucopept�dico, WO 01/182971, U.S. 5.134.127, U.S. 5.759.573 y U.S. 2003/0220294).

El titular de la patente ha descubierto que es posible reducir la nefrotoxicidad de fármacos y agentes de contraste en un grado mucho mayor con una proporción mucho menor de ciclodextrina.

Existe la necesidad de reducir el daño renal provocado por los fármacos nefrot�xicos.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona composiciones y métodos para reducir el daño renal provocado por fármacos nefrot�xicos. La invención proporciona composiciones que comprenden un oligosac�rido ani�nicamente sustituido, un fármaco nefrot�xico y un vehículo farmac�uticamente aceptable, donde el oligosac�rido est� presente en una cantidad eficaz para inhibir sustancialmente el efecto nefrot�xico del fármaco.

Tambi�n se proporcionan composiciones que tienen un reducido efecto nefrot�xico que comprenden un compuesto farmac�uticamente activo que tiene efecto nefrot�xico y un oligosac�rido poliani�nico, donde el oligosac�rido est� presente en una cantidad eficaz para reducir sustancialmente el efecto nefrot�xico del compuesto farmac�uticamente activo.

Tambi�n se desvelan en el presente documento métodos de reducción del efecto nefrot�xico de un compuesto farmac�uticamente activo que comprenden poner en contacto el compuesto con un oligosac�rido poliani�nico. Además, se desvelan métodos para inhibir la nefrotoxicidad asociada con un fármaco nefrot�xico, métodos que comprenden administrar una composición farmacéutica que comprende un sulfato de polisac�rido cíclico, el fármaco inductor nefrot�xico y, opcionalmente, un vehículo farmac�uticamente aceptable.

Breve resumen de las figuras

La Figura 1 muestra los resultados del estudio de solubilidad con metotrexato (MTX) y captisol en solución ácida acuosa. La Figura 2 muestra las puntuaciones de la patología renal que indican el daño renal total provocado en un modelo murino de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) inducida por la glucoprote�na de mielina del oligodendrocito (MOG) tras el tratamiento con MTX y MTX + captisol. La Figura 3 muestra las puntuaciones clónicas tras el tratamiento con MTX o MTX + captisol en ratones con EAE. La Figura 4 muestra las puntuaciones de la patología renal en cortes renales tras un solo bolo intravenoso de MTX con o sin captisol simultáneo a diferentes proporciones molares en ratones normales.

La Figura 5 muestra las puntuaciones de la patología renal en el tejido renal de ratones 24 y 48 horas después del tratamiento con MTX con o sin captisol simultáneo a diferentes proporciones molares. La Figura 6 muestra las puntuaciones medias de patología en un modelo nefrot�xico inducido por doxorrubicina para cada grupo de tratamiento al nivel de la corteza renal superficial. La Figura 7 muestra las puntuaciones de la patología renal para cada ratón tratado con doxorrubicina o doxorrubicina + captisol al nivel de la corteza renal superficial. La Figura 8 muestra las puntuaciones medias de patología en un modelo nefrot�xico inducido por doxorrubicina para cada grupo de tratamiento al nivel de la corteza renal profunda + la médula externa. La Figura 9 muestra las puntuaciones de la patología renal para cada ratón tratado con doxorrubicina o doxorrubicina + captisol al nivel de la corteza renal profunda + médula externa. La Figura 10 muestra las puntuaciones medias al nivel de la corteza superficial en los grupos tratados con cisplatino y cisplatino + captisol. La Figura 11 muestra las puntuaciones patología en un modelo nefrot�xico inducido por cisplatino de cada ratón de cada grupo de tratamiento a nivel de la corteza renal superficial. La Figura 12 muestra las puntuaciones medias al nivel de la corteza profunda y la médula externa de los grupos tratados con cisplatino y cisplatino + captisol. La Figura 13 muestra las puntuaciones de patología en un modelo nefrot�xico inducido por cisplatino de cada ratón de cada grupo de tratamiento a nivel de la corteza renal profunda y la médula externa.

Descripci�n detallada de la invención

Las composiciones de la presente invención, por lo general, comprenden un oligosac�rido ani�nicamente sustituido, un agente de contraste nefrot�xico sustituido y, normalmente, un vehículo farmac�uticamente aceptable u otro excipiente comúnmente usado en la técnica. El oligosac�rido est� presente en una cantidad eficaz para inhibir sustancialmente el efecto nefrot�xico del agente de contraste. En una realización, los oligosac�ridos est�n sustituidos con restos polares o cargados, tales como sustituyentes cati�nicos o ani�nicos. En un ejemplo, el oligosac�rido ani�nicamente sustituido es un oligosac�rido poliani�nico que comprende una ciclodextrina que tiene uno o más sustituyentes ani�nicos seleccionados del grupo que consiste en sulfonato, sulfato, carboxilato, fosfonato y fosfato. En otra realización, el oligosac�rido es un sulfato de polisac�rido cíclico, preferentemente un sulfato de a, 1 o y-ciclodextrina.

Una composición que comprende una ciclodextrina sustituida de fórmula:

ciclodextrina-[(O-R-Y)-(Me)+]n

donde R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo o alquinilo C1-10 de cadena lineal o ramificado; cicloalquilo C3-8 y arilo C3-8, conteniendo cada anillo opcionalmente 1 o más hetero�tomos seleccionados de entre S, N y O; y opcionalmente sustituido con halo o hidroxilo; Y es un grupo seleccionado del grupo que consiste en COO, SO4, SO3, PO3H y PO4; Me+ es un cati�n farmac�uticamente aceptable; y n es un número entero superior a 1; y uno o varios agentes de contraste nefrot�xicos seleccionados de entre iohexol, ioversol, diatrizoato de meglumina e ioxaglato, y un vehículo farmac�uticamente aceptable, estando dicha ciclodextrina presente en una cantidad eficaz para inhibir sustancialmente el efecto nefrot�xico de dicho agente, y donde la proporción molar del agente con respecto a la ciclodextrina es de 1,1:1 a 50:1.

La presente invención también proporciona composiciones que tienen un reducido efecto nefrot�xico que comprenden un compuesto farmac�uticamente activo que tiene efecto inductor nefrot�xico y un oligosac�rido poliani�nico. “Nefrot�xico”, como se usa en el presente documento, significa tóxico o destructor para el ri��n o cualquiera de sus componentes.

Oligosac�ridos sustituidos

Los oligosac�ridos sustituidos generalmente se refieren a oligosac�ridos que tienen al menos un sustituyente por molécula, preferentemente un sustituyente cargado o polar. Los oligosac�ridos son preferentemente sac�ridos de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 unidades de azúcar y que tienen pesos moleculares, cuando no est�n sustituidos, de aproximadamente 650 a aproximadamente 1.300. Cuando el oligosac�rido est� ani�nicamente sustituido, en general, es preferible que los sustituyentes sean seleccionados del grupo que consiste en grupos sulfonato, sulfato, carboxilato, fosfonato y fosfato, y combinaciones de los mismos. Los sustituyentes est�n preferentemente presentes en la molécula en un grado de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 3 sustituyentes por unidad de azúcar. Las composiciones especialmente preferidas son aquellas a base de oligosac�ridos que tienen aproximadamente 1 sustituyente sulfonato por unidad de azúcar. Otras composiciones preferidas son aquellas a base de oligosac�ridos que tienen de aproximadamente 2 a aproximadamente 3 sustituyentes por unidad de azúcar, donde los sustituyentes comprenden sustituyentes sulfato, sulfonato y/o fosfato.

Los oligosac�ridos son cadenas de varias unidades de azúcar, tales como unidades de glucosa, conectadas a través de átomos de oxígeno glucos�dicos. Como se usa en el presente documento, el prefijo "oligo" indica un número intermedio de unidades de azúcar o sac�rido, en comparación con una unidad monom�rica de azúcar de uno, o como máximo, dos como en sacarosa, y un polisac�rido que tiene veinte o más unidades de azúcar y alto peso molecular. Si bien se cree que todos estos oligosac�ridos son operables dentro del alcance de la presente invención, los oligosac�ridos del presente documento tienen preferentemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 unidades de sac�rido por molécula. Este intervalo corresponde a sac�ridos no sustituidos que tienen pesos moleculares que varían de aproximadamente 650 a aproximadamente 1.300. Los oligosac�ridos que tienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 unidades de sac�rido por molécula a veces se denominan en el presente documento oligosac�ridos "simples" o "de bajo peso molecular". Los oligosac�ridos se obtienen habitualmente mediante procedimientos de degradación de almidones o celulosa que generan fragmentos de oligosac�ridos en un amplio intervalo de tamaños.

Una familia de materiales relacionada de alguna manera son los glucosaminoglucanos. Se trata de estructuras que comprenden un esqueleto de polisac�rido, modificado por una variedad de sustituyentes que contienen átomos de nitrógeno, azufre y oxígeno, y que comprenden varios segmentos tales como glucosaminas, iduronatos, glucuronatos y similares. Sus estructuras son variables entre las diferentes muestras del grupo con el mismo nombre, tal como las condroitinas, los dermatanos, el ácido hialur�nico, los sulfatos de hepar�n y las heparinas. Se sabe que cada familia es heterogénea, es decir, mezclas de composiciones. Su peso molecular varía generalmente entre 10.000 y 25.000.

Los oligosac�ridos sustituidos, y, en particular, los oligosac�ridos simples y de bajo peso molecular con sustituyentes polares o cargados, poseen la capacidad de proteger los riñones del efecto nefrot�xico de ciertas clases de fármacos. Se prefieren las ciclodextrinas ani�nicamente sustituidas, al menos en parte, debido a la relativa uniformidad y facilidad de producción de dichos compuestos, aunque se pueden usar otros sustituyentes polares tales como OH.

Los sustituyentes ani�nicos incluyen, a modo de ejemplo, los descritos en la patente de EE.UU. N� 3.426.011. Los oligosac�ridos pueden ser de fórmula general:

oligosac�rido-[(O-R-Y)-(Me)+]n

donde R se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alquenilo o alquinilo C1-10 de cadena lineal o ramificado; cicloalquilo C3-8 y arilo C3-8, conteniendo cada anillo opcionalmente 1 o más hetero�tomos seleccionados de entre S, N y O; y estando cada uno de los grupos anteriormente mencionados opcionalmente sustituido con halo (es decir, F, Cl, Br, I) o hidroxilo; Y es un grupo tal como COO, SO3, SO4, PO3H y PO4 o un ácido fosforoso, fosfinoso, fosf�nico, fosf�nico, tiofosf�nico, tiofosf�nico y sulf�nico; Me es un cati�n farmac�uticamente aceptable, tal como litio, sodio, potasio, calcio, magnesio o aluminio, o una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria tal como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina, tributilamina, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, proca�na, dibencilamina, N,N-dibencilfenetilamina, 1-efenamina, y N,N'-dibenciletilendiamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina, piperazina y similares; y n es el número de sustituyentes por oligosac�rido, cada uno de los cuales se selecciona de manera independiente, es decir, cada sustituyente puede ser igual o diferente. "N" ser� un número entero superior a 1, dependiendo el límite superior del oligosac�rido en particular. En una población de oligosac�ridos, se entender� que n representar� el número medio de sustituyentes por molécula.

De acuerdo con una realización, R es alquilo C1-10, preferentemente alquilo C1-4 seleccionado de entre metilo, etilo, propilo y butilo, estando cada uno opcionalmente sustituido con halo o hidroxilo. Se prefieren específicamente los oligosac�ridos donde en uno o más grupos, Y es SO3. Los oligosac�ridos poliani�nicamente sustituidos resultantes preferidos tienen pesos moleculares de aproximadamente 1.600 a aproximadamente 4.000.

Ciclodextrinas

Las ciclodextrinas (también denominadas "CD") son oligosac�ridos cíclicos que consisten en al menos seis unidades de glucopiranosa. Aunque se conocen CD con hasta doce unidades de glucopiranosa, solo se han estudiado ampliamente los tres primeros homólogos, a, 1 y y, que tienen 6, 7 y 8 unidades de glucopiranosa, respectivamente. Por ejemplo, la molécula de ciclodextrina 1 se compone de siete unidades de glucopiranosa enlazadas en las posiciones 1,4 con a, formando una molécula en forma de cono que tiene una superficie exterior hidrófila y una cavidad central lip�fila. Se cree que existen ciclodextrinas como moléculas en forma c�nica con los hidr�xilos primarios situados en el extremo menor del cono y los hidr�xilos secundarios situados en la abertura mayor del cono.

Topogr�ficamente, las CD se pueden representar como una forma toroidal, cuyo borde superior est� cubierto por grupos -CH2OH primarios, y el borde inferior, por grupos hidroxilo secundarios. Alineada coaxialmente con la forma toroidal, hay una cavidad en forma de canal de aproximadamente 5, 6 o 7,5 UA de diámetro para las CD a, 1 y y, respectivamente. Estas cavidades permiten a las ciclodextrinas formar compuestos de inclusión con moléculas huésped hidrófobas de diámetros adecuados.

En la literatura, se ha preparado y descrito un número razonablemente elevado de derivados de CD. En general, estas CD modificadas químicamente se forman mediante la reacción de los grupos hidroxilo primarios o secundarios unidos a los carbonos 2, 3 o 6, sin afectar a los enlaces hemiacetales (1-4) a. En Croft et al., (Tetrahedron (1983) 39 (9): 1417-1474), incorporado en el presente documento por referencia, se ofrece una revisión de dichas preparaciones. La sustitución a través de los grupos hidroxilo de las unidades de glucopiranosa incluiría hasta 18 para las CD a; 21 para las CD 1; y 24 para las CD y. Las ciclodextrinas se seleccionan de entre las dextrinas de fórmula:

ciclodextrina-[(O-R-Y)-(Me)+]n

donde R, Y, Me y n son como se han desvelado anteriormente. Como ser� evidente, n es 1 a 18 para CD a; 1 a 21 para CD 1; y 1 a 24 para CD y.

Preferentemente, la ciclodextrina tendr� uno o más restos cargados, preferentemente sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en sulfonato, sulfato, carboxilato, fosfonato y fosfato. De acuerdo con una realización, R es alquilo C1-10 de cadena lineal o ramificado, preferentemente alquilo C1-4 seleccionado de entre metilo, etilo, propilo y butilo, cada uno opcionalmente sustituido con halo o hidroxilo. Se prefieren específicamente los oligosac�ridos donde en uno o más grupos, Y es SO3.

Las CD preferidas son derivados de sulfato o sulfonato de ciclodextrinas a, 1 y y. La preparación de sulfatos y sulfonatos de cicloamilosa, y sulfatos y sulfonatos de ciclodextrina modificada se describen en la técnica. Véanse, por ejemplo, las patentes de EE.UU. N� 2.923.704; 4.020.160; 4.247.535; 4.258.180; 4.596.795 y 4.727.064, cada una de las cuales se incorpora en el presente documento por referencia. Por lo general, estos sulfatos y sulfonatos de ciclodextrina se asocian con un cati�n fisiológicamente aceptable.

De acuerdo con otra realización, los grupos hidroxilo est�n sustituidos con alquil�tersulfonatos de fórmula -O-(alquil C1-C8)-SO3. En un ejemplo, se puede usar Captisol� disponible en el mercado (CyDex), que es un derivado de sulfobutil�ter de ciclodextrina 1 que tiene una media de siete grupos sulfobutil�ter por molécula de ciclodextrina (es decir, O-R-Y es -O-(CH2)4-SO3-Na+). El captisol no presenta la nefrotoxicidad asociada con la ciclodextrina 1 no derivatizada. En las patentes de EE.UU. N� 5.134.127; 6.165.995 y 6.060.597, cada una de las cuales se incorpora en el presente documento por referencia, se describen derivados adicionales de ciclodextrina.

Agentes de contraste

Los agentes de contraste se inyectan en un paciente antes de las exploraciones de rayos X. Los agentes de contraste son compuestos yodados muy concentrados (soluciones al 50-66 %). En vista de esta alta concentración, es probable que baste solo con una proporción máxima del agente de contraste con respecto a la ciclodextrina de

1:1. Los ejemplos del posible uso de ciclodextrinas para proteger contra el daño renal causado por los agentes de contraste incluyen el iohexol y el ioversol. Otros agentes de contraste que se pueden usar en la práctica de la presente invención incluyen diatrizoato de meglumina e ioxaglato.

Administraci�n

El oligosac�rido puede formar un complejo con el agente de contraste nefrot�xico, aunque no se considera necesario para el efecto de protección antinefrot�xica de la composición. La proporción del fármaco con respecto al oligosac�rido est� preferentemente en un intervalo tal que el agente de contraste no precipite al pH normalmente encontrado en el ri��n, teniendo en cuenta el tiempo de tránsito del fármaco a través del ri��n. En algunos casos, puede ser deseable reducir al mínimo la cantidad de oligosac�ridos in vivo. Se pueden usar sencillos experimentos de solubilidad in vitro, tales como los descritos en los ejemplos, para determinar la cantidad mínima de oligosac�rido necesaria para proteger eficazmente del daño renal. La proporción molar del agente de contraste con respecto al oligosac�rido es superior a 1:1, y varía de aproximadamente 1,1:1 a aproximadamente 50:1, preferentemente de aproximadamente 1,25:1 a aproximadamente 25:1; más preferentemente de aproximadamente 1,75:1 a aproximadamente 2:1 a aproximadamente 10:1. En el caso del metotrexato, solamente a modo de ejemplo, se encontr� que una proporción molar de aproximadamente 2:1 de metotrexato:captisol funcion� bien para mantener el metotrexato en solución in vitro y proporcion� el efecto nefrot�xico deseado. Cuando se desean cantidades inferiores de oligosac�ridos, se contempla la posibilidad de usar agentes solubilizantes adicionales, siempre que la cantidad de oligosac�ridos de la composición siga siendo suficiente para proporcionar un efecto de protección renal.

En algunos casos, puede ser deseable tener una proporción del agente de contraste con respecto al oligosac�rido inferior a 1:1. Cuando, por ejemplo, la constante de unión del agente de contraste sea baja o el agente de contraste sea procesado por los riñones a una velocidad inferior a la de la ciclodextrina, puede ser beneficioso tener un exceso molar de oligosac�rido. Esto puede valer para muchas clases de agentes de contraste, cuando la dosis del agente de contraste requerida para obtener un efecto terapéutico sea baja. Por lo tanto, aunque la proporción molar de oligosac�rido podría ser mayor, la cantidad o concentración absoluta in vivo no se aumenta necesariamente. Como tal, la composición puede comprender un exceso molar de aproximadamente 2 a aproximadamente 50; de aproximadamente 2 a aproximadamente 20; o de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 veces de oligosac�rido, o preferentemente en el intervalo de aproximadamente 1 a aproximadamente 5:1, y más preferentemente en el intervalo de aproximadamente 2 a aproximadamente 5:1, del oligosac�rido con respecto al agente de contraste.

Adem�s, se proporcionan métodos para reducir el efecto nefrot�xico de un compuesto de contraste que comprenden poner en contacto el compuesto con un oligosac�rido poliani�nico. Se incluyen métodos para inhibir o reducir la nefrotoxicidad asociada con un compuesto nefrot�xico, que comprenden administrar una composición farmacéutica que comprende un oligosac�rido poliani�nico, el agente de contraste nefrot�xico y, opcionalmente, un vehículo farmac�uticamente aceptable. Aunque es preferible que la administración se produzca en una sola dosis, en particular cuando el oligosac�rido ayude en la solubilizaci�n del agente de contraste, los métodos también se pueden efectuar administrando simultáneamente una composición farmacéutica que comprenda un oligosac�rido poliani�nico y una composición farmacéutica que comprenda el agente inductor nefrot�xico, es decir, en dosis separadas. Cuando el agente y el oligosac�rido se combinan en una sola unidad de dosificación, se pueden combinar con un vehículo farmac�uticamente aceptable, por ejemplo, en forma de solución conjunta o dispersi�n en un disolvente inerte farmac�uticamente aceptable o un agente dispersante, o similar.

Como alternativa, el oligosac�rido se puede formular por separado con materiales farmac�uticamente aceptables y administrarse por separado; bien simultáneamente con el agente, o aproximadamente una hora antes o después de la administración del fármaco. Por simultáneamente, se entiende que la administración de las dosis separadas se realiza sustancialmente al mismo tiempo, de modo que tanto el oligosac�rido como los agentes est�n presentes in vivo. Como alternativa, la administración se puede realizar secuencialmente, siempre que los oligosac�ridos est�n presentes en el entorno renal a medida que aumenta la concentración de agente en el ri��n hasta los niveles en los que se puede producir el efecto tóxico del fármaco.

El modo de administración, la dosis y la frecuencia de dosificación se rigen por el modo de administración y las consideraciones de dosificación empleadas convencionalmente con el agente farmacéutico. As� pues, por ejemplo, se pueden administrar varias combinaciones de la invención por vía intramuscular o intravenosa, o de otra manera, según lo estipulado por la práctica m�dica y farmacol�gica relacionada con el uso deseado del agente empleado en particular. La administración se puede realizar por vía oral o parenteral, incluyendo, entre otras cosas, la aplicación típica, inyección intravenosa, intraarterial o subcutánea, e incluyendo la absorción, as� como la inyección y la introducción en las aberturas u orificios corporales.

Se entender� que el nivel de dosis específico para cualquier paciente en particular depender� de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto empleado en particular, la edad, el peso corporal, el estado de general, el sexo, la dieta, el momento de la administración, la vía de administración, la velocidad de excreci�n, la combinación de fármacos y la gravedad de la enfermedad concreta sometida a terapia.

Las otras características de la invención se har�n evidentes a lo largo de las siguientes descripciones de realizaciones de referencia a modo de ejemplo que se dan para ilustrar los antecedentes de la invención.

Ejemplos

Ejemplo 1. Efecto del pH sobre la solubilidad del MTX

Se llevaron a cabo estudios de solubilidad para determinar si el captisol podía impedir la precipitación del MTX durante un período de tiempo superior al tiempo de tránsito del MTX a través del ri��n (es decir, inferior a 2 minutos). Las soluciones se prepararon como se muestra en la Tabla 1. Se acidific� cada solución con HCl, se centrifug� y se extrajeron alícuotas del sobrenadante en función del tiempo, y se midió la concentración de MTX en la solución espectrofotom�tricamente.

Como se muestra en la Figura 1, el captisol impidió la precipitación del MTX a una velocidad dependiente de la concentración. A una proporción molar de 1:1, el MTX permanece en solución indefinidamente. A proporciones inferiores, la precipitación se produce a una velocidad dependiente de la concentración. A una proporción de 0,50:1 del captisol con respecto al MTX, el MTX permanece en solución durante al menos 15 minutos, y a una proporción de 0,25:1, gran parte del mismo permanece durante 10 minutos. En vista de la alta velocidad de tránsito de la filtración renal, se pueden realizar experimentos in vivo para determinar la proporción óptima del MTX con respecto al captisol para prevenir el daño renal.

Ejemplo 2. Efecto protector de captisol-MTX

Se compar� el efecto de 40 mg/kg de MTX con y sin Captisol� (proporción molar de 1:1) en la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) inducida por glucoprote�na de mielina del oligodendrocito (MOG) en ratones 5 C57BL6. Se midieron los signos cl�nicos, la patología del SNC y la patología renal.

La EAE se indujo de la siguiente manera. Se anestesiaron los ratones con Avertin (222 tribromoetanol) y se les administraron dos inyecciones subcutáneas de 150 !g de MOG en PBS (dosis total de 300 !g) que se había emulsionado en un volumen igual de adyuvante incompleto de Freund que contenía 250 !g de M. tuberculosis

10 H37RA (dosis total de 500 !g). La primera inyección se administr� en la nuca y la segunda, en el dorso. Se administr� toxina Pertussis (100 ng; iv a través de la vena de la cola) a los días 0, 3, 7 de la encefalitopat�a.

Se us� solución madre de MTX a 25 mg/ml (Bedford Laboratories). Se diluyó la solución madre de MTX 3,67 veces con PBS (2 ml de solución madre + 5,34 ml de PBS) para un volumen total de 7,34 ml, a una concentración de 15 6,8 mg/ml (14,9 mM).

Se dividieron en alícuotas 3,00 ml de la solución diluida de MTX y se añadieron a 96,6 mg de captisol en polvo, y se mezcl� la solución con movimientos vorticiales. La solución resultante result� ser prácticamente transparente, pero de color amarillo pálido. Todas las soluciones se mantuvieron a oscuras a temperatura ambiente hasta que 20 estuvieron listas para su inyección. 96,6 mg/3 ml = 32.228 mg/ml = 14,9 mM; proporción molar de MTX:captisol de

1:1.

Las mezclas de ensayo se administraron a 5 grupos de ratones (grupos I-V; véase la Tabla 2).

25 Tabla 2.

Grupos: EAE/control Tratamiento Número de ratones

Grupo I: EAE PBS 5

Grupo II: EAE 40 mg/kg de MTX 10

Grupo III: EAE 40 mg/kg de MTX + captisol (proporción molar de 1:1) 10

Grupo IV: EAE 201,25 mg/kg de captisol solamente 10

Grupo V: EAE Sin tratamiento 5

Veinticuatro (24) horas después de la aparición de los síntomas, se administr� MTX (40 mg/kg de peso corporal) a través de la vena de la cola. El volumen de inyección fue de entre 100 y 120 !l. MTX + captisol se inyect� en un volumen de 100-120 !l a través de la vena de la cola. El captisol solo (32,22 mg/ml) se inyect� a través de la vena

30 de la cola en un volumen de 100-120 !l. La leucovorina (20 mg/kg de peso corporal) se inyect� a través de la vena de la cola 4 horas después de la inyección de MTX y, de nuevo, 24 horas después. La leucovorina, el metabolito activo del ácido fálico, normalmente se administra con metotrexato en la quimioterapia contra el cáncer para ayudar a proteger las células normales.

35 Se pesaron los animales y se puntuaron los signos cl�nicos diariamente. Las puntuaciones se basaron en los siguientes signos:

0: normal,

1: cola flácida, piloerecci�n y/o pérdida de peso

: 40 2: debilidad de las extremidades posteriores que dificulta el enderezamiento

3: debilidad de las extremidades posteriores que imposibilita el enderezamiento

4: paresia de las extremidades posteriores, cojera y/o incontinencia

5: parálisis parcial de las extremidades posteriores

6: parálisis total de las extremidades posteriores más debilidad de las extremidades anteriores

: 45 7: parálisis total de las extremidades posteriores más paresia o parálisis de las extremidades anteriores

8: muerte o estado moribundo que requiere el sacrificio del animal.

Se puntuaron diariamente los ratones en cuanto a la gravedad de la enfermedad y luego se sacrificaron al décimo día de la enfermedad. Se fijaron en formol el cerebro, el ri��n y el bazo. Para evaluar la infiltración de los linfocitos T

50 en el SNC, se realizó una inmunohistoqu�mica CD3+ en cortes de la parte posterior del cerebro de 8 micrómetros de espesor introducidos en parafina de ratones con EAE no tratados y ratones con EAE tratados simultáneamente con MTX y captisol. Para examinarlos bajo el microscopio óptico, se fijaron los riñones en formol tamponada al 10 % y se procesaron de la manera habitual para su inclusión en parafina. Se tiñeron cortes tisulares de 5 micrómetros con hematoxilina y eosina, y se examinaron bajo un microscopio óptico Coolpix de Nikon.

55 Se evalu� la gravedad del daño renal total mediante una medición semicuantitativa del daño como se ha descrito. Se evalu� la degeneración de la estructura glomerular, el hacinamiento y la congestión glomerular, la dilatación del espacio de Bowman, la degeneración de los t�bulos proximales y distales, y la dilatación de los t�bulos renales, la congestión vascular y la infiltración de células inflamatorias de cada corte de tejido renal. Para la atrofia glomerular, los glom�rulos que contenían más de 20 núcleos recibieron la puntuación de "0 ", y los que contenían menos de 10 núcleos recibieron la puntuación de “4”. Las etapas intermedias fueron de 1, 2 y 3. Otro criterio se calificó en una escala del 0 al 3: 0 = ninguno; 1 = leve; 2 = moderado; 3 = grave.

La puntuación microscópica de cada tejido se calcul� como la suma de las puntuaciones otorgadas a cada criterio, y se analizaron al menos 100 nefronas (glom�rulos más t�bulos circundantes) por corte. Los datos se representan como media � ETM (véase la Figura 2).

Los ratones tratados con MOG desarrollaron manifestaciones clónicas graves a partir del día 10-11. Se mantuvieron hasta su sacrificio realizado el décimo tercer día. Todos los animales se vieron afectados. Parálisis parcial o total de las patas posteriores (puntuación clónica).

La eficacia de 40 mg/kg de MTX + captisol fue comparable a la eficacia observada con el tratamiento de MTX solo.

El resultado de la patología del SNC – inmunotinci�n con CD3+ demostr� que los ratones con EAE no tratados tuvieron una extensa infiltración de linfocitos T CD3+ en la parte posterior del cerebro y la médula espinal (que no se muestra). Los ratones con EAE tratados tras la aparición de los síntomas simultáneamente con MTX + captisol (40 mg/kg + captisol, proporción molar de 1:1) demostraron una reducción del 80-90 % en la infiltración de los linfocitos T (que no se muestra). La eficacia de MTX + captisol fue comparable a la eficacia con el tratamiento de MTX solo.

En la Tabla 3, se muestran las puntuaciones de la patología renal. Los cortes renales de 3 ratones diferentes con EAE tratados con 40 mg/kg de MTX mostraron dilatación de los t�bulos renales y degeneración de los t�bulos proximales. Los cortes renales de los ratones tratados simultáneamente con MTX + captisol mostraron un efecto protector sobre los t�bulos. Una sola inyección en bolo intravenosa de 40 mg/kg de MTX produjo cambios morfológicos en el ri��n que se limitaron principalmente a la dilatación de los t�bulos renales de la corteza. La administración simultánea de captisol con MTX produjo una reducción de la puntuación de la patología en los ratones con EAE.

Ejemplo 3. Captisol-MTX a varias proporciones molares.

Se realizó un estudio de los cambios histopatol�gicos en el ri��n tras un solo bolo por vía intravenosa de MTX con o sin captisol simultáneo a diferentes proporciones molares.

Las soluciones de MTX se prepararon de la siguiente manera. La solución A (24 mg/ml (53 mM)) se prepar� a partir de solución madre de 25 mg/ml (metotrexato de Bedford Laboratories), en PBS estéril (volumen total de 6 ml). La solución B se prepar� diluyendo 3 ml de solución A hasta 1:1,33 en PBS, obteniéndose una dilución de trabajo de 18 mg/ml (39,6 mM), pH 7,4. La solución C se prepar� diluyendo 2 ml de solución A 1:2, obteniéndose una dilución de trabajo de 12 mg/ml (26,4 mM), pH 7,2.

Las soluciones de MTX + captisol se prepararon de la siguiente manera. La solución D se prepar� mediante la adición de 57,32 mg de captisol a una alícuota de 500 microlitros de solución A (proporción molar de 1:1, pH neutro). La solución E se prepar� mediante la adición de 85,6 mg de captisol a una alícuota de 1 ml de solución B (proporción molar de 1:1, pH neutro). La solución F se prepar� mediante la adición de 57,10 mg de captisol a una alícuota de 1 ml de la solución C (proporción molar de 1:1, pH neutro). La solución G se prepar� mediante la adición de 42,8 mg de captisol a una alícuota de 1 ml de solución B. La solución H se prepar� mediante la adición de 28,6 mg de captisol a una alícuota de 1 ml de solución C.

Se administraron el MTX y el captisol a 8 grupos de ratones (Grupos I-VIII; véase la Tabla 3) a través de la vena de la cola mediante una sola inyección en un volumen de 100-120 !l. Los animales fueron sacrificados a las 48 horas. Se registraron los síntomas cl�nicos y los pesos corporales. Se conservaron los riñones (uno congelado y otro fijado en formol) para el análisis patológico. Se administr� leucovorina a las 4 horas y después de 18 horas. La orina no se alcaliniz�.

Tabla 3.

GRUPOS: GRUPO TRATAMIENTO Molaridad del MTX Molaridad del captisol Prop, molar de MTX:captisol N� de ratón

Grupo I: Ratones normales solo MTX, 80 mg/kg, bolo iv, Solución A 26,4 mM 3

Grupo II: Ratones normales solo MTX, 120 mg/kg, iv, bolo, Solución B 39,6 mM 3

Grupo III: Ratones normales solo MTX, 160 mg/kg, iv, bolo, Solución C 53 mM 1

Grupo IV: Ratones normales MTX, 80 mg/kg, iv + Captisol 382 mg/kg de peso corporal, Solución D 26,4 mM 26,4 mM 1:1 3

Grupo V: Ratones normales MTX, 120 mg/kg, iv + Captisol 570 mg/kg, Solución E 39,6 mM 39,6 mM 1:1 3

Grupo VI: Ratones normales MTX, 160 mg/kg, iv + Captisol 764 mg/kg de peso corporal, Solución F 53 mM 53 mM 1:1 1

Grupo VII: Ratones normales MTX, 80 mg/kg, iv + Captisol 191 mg/kg, Solución G 26,4 mM 13,2 mM 1:0,5 3

Grupo VIII: Ratones normales MTX, 120 mg/kg, iv + Captisol 285 mg/kg, Solución H 39,6 mM 19,8 mM 1:0,5 3

En la Figura 4, se muestran las estimaciones semicuantitativas del daño renal total en los ratones tratados con

5 80 mg/kg, 120 mg/kg de MTX y una combinación de MTX + captisol en una proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:1 y 1:0,5. Las puntuaciones para el ri��n de control estaban entre 3 y 4 (no mostradas en el gráfico). Para determinar la extensión del daño renal, se analizaron microscópicamente cortes teñidos con hematoxilina y eosina de ri��n introducido en parafina. Los datos se expresan como la media � ETM. Los datos para el MTX a 160 mg/kg no se incluyen en el gráfico, ya que solo había un ratón en este grupo.

10 Los cortes en parafina de los riñones teñidos con hematoxilina y eosina (no mostrados) demostraron que los riñones de los ratones que habían recibido 80 mg/kg de MTX sufrían de dilatación de los t�bulos, cambios degenerativos en los t�bulos, hipercelularidad en el glom�rulo, y colección at�pica de células intersticiales y t�bulos convolutos. Los riñones de los ratones que habían recibido 80 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar del MTX con

15 respecto al captisol de 1:1 y 80 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:0,5 mostraron una degeneración más leve de los t�bulos, glom�rulo normal y ausencia de infiltración de células inflamatorias. Sin embargo, el grado de protección del ri��n fue mucho mayor cuando la proporción molar del MTX con respecto al captisol fue de 1:0,5.

20 Los cortes en parafina de ri��n teñido con hematoxilina y eosina (no mostrados) demostraron que los riñones de los ratones que habían recibido 120 mg/kg de MTX, iv, sufrían de atrofia glomerular, degeneración de la membrana basal de la cápsula de Bowman, cambios degenerativos en los t�bulos, hipercelularidad en el glom�rulo e infiltración de las células mononucleares. Los riñones de los ratones que habían recibido 120 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:1 y 120 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar

25 del MTX con respecto al captisol de 1:0,5, mostraron un glom�rulo en su mayor parte normal, protección de t�bulos proximales y distales, y ausencia de infiltración de células inflamatorias.

Ejemplo 4. Estudios temporales del Captisol-MTX

30 Se administraron mezclas de MTX-Captisol como se expone en la Tabla 4.

Tabla 4.

Ratones normales: Tratamiento Inyección de un solo bolo intravenoso a través de la vena de la cola Obtención de tejidos Proporción molar de MTX:Captisol Número de ratones

160 mg/kg de MTX: Ri��n extraído 24 h después de la administración del fármaco 1:0 4

160 mg/kg de MTX + 764 mg/kg de captisol: 1:1 4

160 mg/kg de MTX + 382 mg/kg de captisol: 1:0,5 4

160 mg/kg de MTX + 191 mg/kg de captisol: 1:0,25 4

Ratones normales: 160 mg/kg de MTX Ri��n extraído 48 h después de la administración del fármaco 1:0 4

160 mg/kg de MTX + 764 mg/kg de captisol: 1:1 4

160 mg/kg de MTX + 382 mg/kg de captisol: 1:0,5 4

160 mg/kg de MTX +191 mg/kg de captisol: 1:0,25 4

Ratones normales: 160 mg/kg de MTX Ri��n extraído 1 semana después de la administración del fármaco 1:1 4

160 mg/kg de MTX + 764 mg/kg de captisol: 4

Para el examen con el microscopio óptico, se fijaron los riñones en formol tamponado al 10 % y se procesaron de la manera habitual para su introducción en parafina. Se tiñeron cortes de tejido de 5 micrómetros con hematoxilina y 5 eosina, y se examinan bajo un microscopio óptico Coolpix de Nikon, siendo la fotografía realizada con una cámara Coolpix de Nikon. Se evalu� la gravedad del daño renal total mediante una medición semicuantitativa del daño como se describe a continuación. Se evalu� cada corte de tejido renal en cuanto a la degeneración de la estructura glomerular, el hacinamiento y la congestión glomerular, la dilatación del espacio de Bowman, la degeneración de los t�bulos proximales y distales, y la dilatación de los t�bulos renales, la congestión vascular y la infiltración de células

10 inflamatorias. Para la atrofia glomerular, los glom�rulos que contenían más de 20 núcleos recibieron la puntuación de "0" y los que contenían menos de 10 núcleos obtuvieron la puntuación de "4”. Las etapas intermedias fueron 1, 2 y 3. Otro criterio se calificó en una escala del 0 al 3: 0 = ninguno; 1 = leve; 2 = moderado; y 3 = grave.

La puntuación microscópica de cada tejido se calcul� como la suma de las puntuaciones otorgadas a cada criterio, y

15 se analizaron al menos 100 nefronas (glom�rulos más t�bulos circundantes) por corte. Véase, por ejemplo, Bhat et al., PNAS (2003) 100 (7); Sener et al., Cell Biol Toxicol (2006) 22:470-60.

En cuanto a la Figura 5, el tejido renal de los ratones tratados con MTX muestra grandes cambios histopatol�gicos tras 24 y 48 horas. A las 24 y 48 horas, había atrofia del glom�rulo, degeneración y dilatación del espacio de

20 Bowman, infiltración de células inflamatorias en el intersticio tubular y degeneración tubular. El grupo tratado con captisol + MTX mostr� cambios glomerulares y tubulares más leves y una menor infiltración de células inflamatorias. Sin embargo, algunos de los cambios observados tras 24 horas parecían ser reversibles, pues la puntuación patológica acumulativa fue menor a las 48 horas que a las 24 horas.

25 Se estudiaron los cambios histopatol�gicos en el ri��n a las 24 horas de la inyección de MTX con o sin la administración conjunta de captisol. Los ratones se sacrificaron 24 horas después de la administración de MTX o MTX + captisol. Se tiñeron los cortes renales en parafina con hematoxilina y eosina (no mostrados). La administración de 160 mg/kg de MTX dio lugar a la degeneración de la estructura glomerular y dilatación del espacio de Bowman, degeneración de los t�bulos proximales y distales, e infiltración de células inflamatorias. Se observ�

30 una denegación glomerular y tubular más leve para 160 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:1. El tratamiento de 160 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:0,5 fue más eficaz en la preservación de las estructuras glomerulares y tubulares. La infiltración de células inflamatorias estuvo completamente ausente. El tratamiento de 160 mg/kg de MTX + captisol usado en una proporción molar de 1:0,25 no protegió contra el daño renal.

Se registraron los cambios histopatol�gicos producidos en el ri��n a las 48 horas de la inyección de MTX con o sin la administración conjunta de captisol. Los ratones se sacrificaron 48 horas después de la administración de MTX o MTX + captisol. Se tiñeron los cortes renales en parafina con hematoxilina y eosina (no mostrados). 48 h después de la inyección, la administración de 160 mg/kg de MTX (iv) dio lugar a la degeneración de la estructura glomerular, la dilatación del espacio de Bowman, la dilatación de los t�bulos proximales y distales, la degeneración de los t�bulos proximales y distales y la infiltración de células inflamatorias. Se observ� una denegación glomerular y tubular más leve para 160 mg/kg de MTX + captisol (proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:1). El tratamiento de 160 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar de 1:0,5 dio lugar a una preservación relativamente mejor de las estructuras glomerulares y tubulares. La infiltración de células inflamatorias estuvo completamente ausente. 160 mg/kg de MTX + captisol usado en una proporción molar de 1:0,25 no fue eficaz en la protección del ri��n del daño inducido por MTX. La mayor protección se observ� con una proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:0,5.

Tambi�n se estudiaron los cambios histopatol�gicos producidos en el ri��n una semana después de la administración de MTX. Los ratones se sacrificaron 1 semana después de la administración de 160 mg/kg de MTX en una sola inyección de bolo iv. Se tiñeron los cortes renales en parafina con hematoxilina y eosina (no mostrados). La administración de solo MTX dio lugar principalmente a la degeneración de los t�bulos proximales y distales, con atrofia o hacinamiento glomerular ocasional. Se observaron células en degeneración con núcleos hinchados recubriendo los t�bulos proximales y distales. Ocasionalmente, se observaron algunos t�bulos recubiertos por una capa doble de células. Algunos t�bulos se congestionaron con materiales eosin�filos. Los cambios patológicos se encontraron sobre todo en las zonas corticales del ri��n. La mayoría de las estructuras glomerulares resultaron ser normales.

Se registraron los cambios histopatol�gicos producidos en el ri��n 1 semana después de la inyección de MTX + captisol. Los ratones fueron sacrificados 1 semana después de la administración conjunta de MTX + captisol. Se tiñeron los cortes renales en parafina con hematoxilina y eosina de cuatro ratones separados (no mostrados). Los riñones de los ratones que habían recibido la administración conjunta de 160 mg/kg de MTX + captisol en una proporción molar del MTX con respecto al captisol de 1:1 mostraron un trastorno glomerular significativamente menor y una mayor preservación de los t�bulos. No se produjo infiltración de células inflamatorias.

Ejemplo 5. Evaluación del efecto nefroprotector del captisol en un modelo murino de nefrotoxicidad inducida por doxorrubicina.

Ratones C57BL/6 hembra recibieron una inyección por vía intravenosa con una dosis única de (10 mg/kg) doxorrubicina. Los ratones se sacrificaron 72 horas después. Se evalu� el desarrollo de la lesión glomerular y tubulointersticial tras la doxorrubicina y la doxorrubicina + captisol por medio de la histología renal. Se hicieron cortes en parafina de 5 !M, y se tiñeron con H y E y ácido periódico de Schiff (PAS). Se examinaron por microscop�a óptica y se puntuaron de forma ciega. Se puntuaron treinta glom�rulos y t�bulos circundantes de la corteza superficial (cerca de la superficie de la cápsula) y cien glom�rulos y t�bulos circundantes a nivel de la corteza renal profunda y de alrededor de las tiras exteriores de la médula externa.

La Figura 6 muestra las puntuaciones medias de patología para cada grupo de tratamiento a nivel de la corteza renal superficial. La Figura 7 muestra las puntuaciones de patología renal de cada ratón tratado con doxorrubicina o con doxorrubicina + captisol a nivel de la corteza renal superficial. La Figura 8 muestra las puntuaciones medias de patología para cada grupo de tratamiento a nivel de la corteza renal profunda + médula externa. La Figura 9 muestra las puntuaciones de la patología renal de cada ratón tratado con doxorrubicina o con doxorrubicina + captisol a nivel de la corteza renal profunda + médula externa.

Ninguno de los ratones de control o tratados con captisol result� tener cambios t�bulointersticiales. El grupo tratado con doxorrubicina mostr� cilindros tubulares, abundantes t�bulos dilatados y pérdida moderada del borde en cepillo de algunos t�bulos proximales. Algunos de los glom�rulos se plegaron y en distintas etapas de la degeneración. La patología result� ser más prominente en la periferia exterior de la corteza renal. No se observ� atrofia tubular ni infiltración de neutr�filos. En los ratones tratados con doxorrubicina + captisol, se produjo una reducción de casi el 71 % de la degeneración y una reducción de casi el 72 % de la dilatación tubular. En la corteza renal más profunda y en la médula, se produjo una reducción del 90 % de la degeneración glomerular y una reducción del 50 % de la dilatación tubular.

Ejemplo 6. Evaluación del efecto nefroprotector del captisol en un modelo murino de nefrotoxicidad inducida por cisplatino

Ratones C57BL/6 hembra recibieron una inyección por vía intravenosa con una dosis única de (10 mg/kg) cisplatino (N = 5) o cisplatino + captisol en una proporción molar del cisplatino con respecto al captisol de 1:1, 1:0,5 y 1:0,25 (N = 5, N = 4 y N = 6, respectivamente). Los animales se sacrificaron 72 horas después.

Se evalu� el desarrollo de la lesión glomerular y tubulointersticial tras el cisplatino y la protección del cisplatino + captisol por medio de la histología renal. Se hicieron cortes en parafina de 5 !M, y se tiñeron con H y E y ácido periódico de Schiff (PAS). Se examinaron por microscop�a óptica y se puntuaron de forma ciega. Se puntuaron treinta glom�rulos y t�bulos circundantes de la corteza superficial (cerca de la superficie de la cápsula) y cien

5 glom�rulos y t�bulos circundantes a nivel de la corteza renal profunda y de alrededor de las tiras exteriores de la médula externa.

La Figura 10 muestra las puntuaciones medias a nivel de la corteza superficial en los grupos tratados con cisplatino y cisplatino + captisol (proporción molar del cisplatino con respecto al captisol de 1:1, 1:0,5 y 1: 0,25). La Figura 11

10 muestra las puntuaciones de patología de cada ratón de cada grupo de tratamiento a nivel de la corteza renal superficial. La Figura 12 muestra las puntuaciones medias a nivel de la corteza profunda y la médula externa en los grupos tratados con cisplatino y cisplatino + captisol (proporción molar del cisplatino con respecto al captisol de 1:1, 1:0,5 y 1:0,25). La Figura 13 muestra las puntuaciones de patología de cada ratón de cada grupo de tratamiento a nivel de la corteza renal profunda y la médula externa.

15 Ninguno de los ratones de control result� tener cambios t�bulointersticiales. Los ratones tratados con cisplatino mostraron necrosis, descamaci�n de células epiteliales tubulares y pérdida del borde en cepillo de algunos t�bulos proximales. La abundante presencia de t�bulos dilatados fue una característica destacada de la nefrotoxicidad inducida por el cisplatino. Algunos de los glom�rulos se plegaron y algunos mostraron cambios degenerativos

20 tempranos. Todos estos cambios fueron mucho menos destacados mediante el tratamiento con cisplatino + captisol, demostrando que el captisol protegió el ri��n tanto a la proporción del cisplatino con respecto al captisol de 1:1 como a la proporción del cisplatino con respecto al captisol de 1:0,5.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende una ciclodextrina sustituida de fórmula:

ciclodextrina-[(O-R-Y)-(Me)+]n

donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo, alquenilo o alquinilo C1-10 de cadena lineal o ramificado; cicloalquilo C3-8 y arilo C3-8, conteniendo cada anillo opcionalmente 1 o más hetero�tomos seleccionados de entre S, N y O; y opcionalmente sustituido con halo o hidroxilo; Y es un grupo seleccionado del grupo que consiste en COO, SO4, SO3, PO3H y PO4; Me+ es un cati�n farmac�uticamente aceptable; y n es un número entero superior a 1; y un agente de contraste nefrot�xico seleccionado de entre iohexol, ioversol, diatrizoato de meglumina e ioxaglato, y un vehículo farmac�uticamente aceptable, estando dicha ciclodextrina presente en una cantidad eficaz para inhibir sustancialmente el efecto nefrot�xico de dicho agente, y donde la proporción molar del agente con respecto a la ciclodextrina es de 1,1:1 a 50:1.
2.

La composición de la reivindicación 1, donde dicha ciclodextrina est� sustituida con uno o más restos cargados.
3.

La composición de la reivindicación 1, donde R es alquilo C1-10, opcionalmente sustituido con halo o hidroxilo.
4.

La composición de la reivindicación 1, donde dicha ciclodextrina es seleccionada del grupo que consiste en ciclodextrina a, 1 y y.
5.

La composición de la reivindicación 4, donde dicha ciclodextrina es ciclodextrina 1.
6.

La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde la proporción molar del agente con respecto a la ciclodextrina es de al menos aproximadamente 2:1.
7.

La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde dicho agente de contraste es un agente farmacéutico con carga positiva.
8.

La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde dicha ciclodextrina es ciclodextrina 1; (OR-Y)-(Me)+ es -O-(CH2)4-SO3-Na+ y n es aproximadamente 7.
9.

La composición de la reivindicación 1, donde la proporción molar del agente con respecto a la ciclodextrina es de aproximadamente 1,25:1 a 25:1.
10.

La composición de la reivindicación 1, donde la proporción molar del agente con respecto a la ciclodextrina es de aproximadamente 1,75:1 a 10:1.
11.

La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en la reducción o la inhibición del efecto nefrot�xico del agente.
12.

La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en la protección de un paciente contra el daño renal asociado con la administración del agente de contraste, cuando se usa para la generación de imágenes por rayos X en un paciente que lo necesita.
13.

La composición de la reivindicación 11 o 12, donde la composición es administrada simultáneamente o es administrada en el transcurso de aproximadamente una hora antes o después de la administración de una composición farmacéutica que comprende el agente de contraste nefrot�xico seleccionado de entre iohexol, ioversol, diatrizoato de meglumina e ioxaglato.
14.

La composición de la reivindicación 13, donde el agente nefrot�xico es iohexol.