JPH072690A - インターロイキン２を含有してなる免疫療法剤 - Google Patents
インターロイキン２を含有してなる免疫療法剤Info
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- JPH072690A JPH072690A JP6058960A JP5896094A JPH072690A JP H072690 A JPH072690 A JP H072690A JP 6058960 A JP6058960 A JP 6058960A JP 5896094 A JP5896094 A JP 5896094A JP H072690 A JPH072690 A JP H072690A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】免疫系疾患に対する画期的な新免疫療法剤を見
出し、免疫療法の新しい進歩に寄与するところ大なる有
用な免疫療法剤を提供する。 【構成】ヒト細胞由来のヒトインターロイキン２を含有
してなる免疫疾患治療予防剤。免疫疾患が癌、細菌感
染、ウイルス性疾患、免疫不全症または自己免疫疾患で
ある。
出し、免疫療法の新しい進歩に寄与するところ大なる有
用な免疫療法剤を提供する。 【構成】ヒト細胞由来のヒトインターロイキン２を含有
してなる免疫疾患治療予防剤。免疫疾患が癌、細菌感
染、ウイルス性疾患、免疫不全症または自己免疫疾患で
ある。
Description
【０００１】本発明はヒトインターロイキン２（以下、
「インターロイキン２」を「ＩＬ−２」と略記すること
がある。）を含有してなる免疫療法剤、更に詳しくはヒ
トリンパ球、同クローン化細胞、ヒト悪性化細胞もしく
はハイブリドーマの細胞培養やこれらの細胞を起源とし
て製造されうるヒトＩＬ−２を含有することを特徴とす
る癌、細菌感染、ウイルス性疾患、免疫不全症、自己免
疫疾患などを含む免疫疾患患者に臨床適用することので
きる免疫疾患の治療、予防剤に関するものである。
「インターロイキン２」を「ＩＬ−２」と略記すること
がある。）を含有してなる免疫療法剤、更に詳しくはヒ
トリンパ球、同クローン化細胞、ヒト悪性化細胞もしく
はハイブリドーマの細胞培養やこれらの細胞を起源とし
て製造されうるヒトＩＬ−２を含有することを特徴とす
る癌、細菌感染、ウイルス性疾患、免疫不全症、自己免
疫疾患などを含む免疫疾患患者に臨床適用することので
きる免疫疾患の治療、予防剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】今日、免疫療法は、医学の広い分野にお
いて新しい治療、予防方法として期待されはじめてい
る。例えば、感染症の分野ではオポチュニスティック・
インフェクションズ（Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ ｉ
ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）は、新生児の機能的免疫不全、癌
患者、骨髄など移植適用患者、ステロイドや化学療法剤
投与により免疫抑制の惹起された患者、老人などに頻発
し、緑膿菌感染などはとくに重篤な症状をもたらす。従
前使用されている抗生物質は、上述の免疫機能不全また
は免疫抑制状態においては殆んど有効性を示さない。
いて新しい治療、予防方法として期待されはじめてい
る。例えば、感染症の分野ではオポチュニスティック・
インフェクションズ（Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ ｉ
ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）は、新生児の機能的免疫不全、癌
患者、骨髄など移植適用患者、ステロイドや化学療法剤
投与により免疫抑制の惹起された患者、老人などに頻発
し、緑膿菌感染などはとくに重篤な症状をもたらす。従
前使用されている抗生物質は、上述の免疫機能不全また
は免疫抑制状態においては殆んど有効性を示さない。
【０００３】ウイルス性疾患においても、多大の努力に
も拘わらず充分治療効果を示す化学療法剤は未だ臨床上
頻用されるには至らず、インターフェロンについても物
質の性状、生産規模、作用機構の解明など幾多の問題を
拘え本格的臨床使用に至るまではその有効性は明確でな
い。また、インターフェロンの場合には、薬剤として適
用されるヒトインターフェロンそのものが動物では効能
を発揮せず、種特異性の存在のため薬剤の開発に必須の
動物実験ができないという限界がある。
も拘わらず充分治療効果を示す化学療法剤は未だ臨床上
頻用されるには至らず、インターフェロンについても物
質の性状、生産規模、作用機構の解明など幾多の問題を
拘え本格的臨床使用に至るまではその有効性は明確でな
い。また、インターフェロンの場合には、薬剤として適
用されるヒトインターフェロンそのものが動物では効能
を発揮せず、種特異性の存在のため薬剤の開発に必須の
動物実験ができないという限界がある。
【０００４】癌患者においても、上述の感染症、ウイル
ス性疾患と薬剤開発の状況は類似する。患者における免
疫機能の如実な低下、抑制が立証されるにつれ第４の療
法としての免疫療法には大きな関心が寄せられている。
癌に対する免疫応答を増強、修復するのみでなく、担癌
患者における一般免疫能の改善は宿主機能の改善として
有用であるとも言われている。従前癌患者に医薬品とし
て使用されている１，２の免疫療法剤は、細胞に対し直
接細胞毒作用も併せ持つという化学療法剤的性格を有す
る。従って、癌患者に真に免疫療法剤として適用され既
に明確な臨床効果が第３相試験で確認されているものと
しては、本発明者らになるレンチナンを挙げることがで
きるのみである。レンチナンの抗癌作用機構としては、
リンホカインとの相乗作用による免疫エフェクターの誘
導増強作用が重要な役割を果たしていると考えられる
が、レンチナンの投与時期によっては生体内のリンホカ
イン量が欠如していると充分の効果の発現しない同系癌
の系も存在する。なお、レンチナンの臨床効果について
は、たとえば、「癌と化学療法」第８巻第９４４〜９６
６頁（昭和５６年）を参照。
ス性疾患と薬剤開発の状況は類似する。患者における免
疫機能の如実な低下、抑制が立証されるにつれ第４の療
法としての免疫療法には大きな関心が寄せられている。
癌に対する免疫応答を増強、修復するのみでなく、担癌
患者における一般免疫能の改善は宿主機能の改善として
有用であるとも言われている。従前癌患者に医薬品とし
て使用されている１，２の免疫療法剤は、細胞に対し直
接細胞毒作用も併せ持つという化学療法剤的性格を有す
る。従って、癌患者に真に免疫療法剤として適用され既
に明確な臨床効果が第３相試験で確認されているものと
しては、本発明者らになるレンチナンを挙げることがで
きるのみである。レンチナンの抗癌作用機構としては、
リンホカインとの相乗作用による免疫エフェクターの誘
導増強作用が重要な役割を果たしていると考えられる
が、レンチナンの投与時期によっては生体内のリンホカ
イン量が欠如していると充分の効果の発現しない同系癌
の系も存在する。なお、レンチナンの臨床効果について
は、たとえば、「癌と化学療法」第８巻第９４４〜９６
６頁（昭和５６年）を参照。
【０００５】また、従前開発中の免疫活性物質の多くに
は副作用の観察される場合もあり、この意味でも生体由
来でその特徴的かつ特異的な作用の詳らかな生体由来免
疫活性物質を薬剤として開発することがその有効性への
期待とともに、待ち望まれている。
は副作用の観察される場合もあり、この意味でも生体由
来でその特徴的かつ特異的な作用の詳らかな生体由来免
疫活性物質を薬剤として開発することがその有効性への
期待とともに、待ち望まれている。
【０００６】一方、作用機構よりみた場合、開発中の免
疫活性物質の多くは免疫エフェクターの内、活性化マク
ロファージの誘導増強作用により活療効果の期待される
ものであり、本エフェクターは標的に対し非特異的に作
用するもので、厳密に規定された特異性は有しない生体
防禦機構賦活物質である。
疫活性物質の多くは免疫エフェクターの内、活性化マク
ロファージの誘導増強作用により活療効果の期待される
ものであり、本エフェクターは標的に対し非特異的に作
用するもので、厳密に規定された特異性は有しない生体
防禦機構賦活物質である。
【０００７】特異的免疫応答の発現に重要な役割を担う
ものとしてはＴリンパ球があり、免疫エフェクターとし
て標的に特異性を示す細胞障害性Ｔリンパ球が重要な作
用を有することが示唆されている。
ものとしてはＴリンパ球があり、免疫エフェクターとし
て標的に特異性を示す細胞障害性Ｔリンパ球が重要な作
用を有することが示唆されている。
【０００８】本発明の構成要素である物質ヒトＩＬ−２
は、上述のＴリンパ球の活性化、増殖に重要な働きを示
すことがｉｎ ｖｉｔｒｏの基礎実験で示されている生
体由来の微量生理活性物質として規定しうる。
は、上述のＴリンパ球の活性化、増殖に重要な働きを示
すことがｉｎ ｖｉｔｒｏの基礎実験で示されている生
体由来の微量生理活性物質として規定しうる。
【０００９】ｉｎ ｖｉｖｏ動物実験においては、本Ｉ
Ｌ−２の作用は未だ不明であり、他のモノカイン、リン
ホカインを含有するネズミＩＬ−２を粗組成物とするも
のについて免疫機能の修復が若干報告されているにすぎ
ず、またヒトＩＬ−２については動物実験においてその
作用、免疫活性、薬効の何れもが不明である。なお、ネ
ズミＩＬ−２はヒトＩＬ−２とは分子量をも異にする別
物質である。このようにヒトＩＬ−２の薬剤としての効
果即ち治療・予防効果は全く不明である。このように、
ネズミＩＬ−２については若干の免疫活性の予知された
ものであるが、桜井欽夫ら「悪性腫瘍に対する免疫療法
剤の評価法に関する」医薬品研究１１巻７４６（１９８
０）に従えば免疫活性を示すことは直ちに薬効を示すも
のでないことが規定されている。
Ｌ−２の作用は未だ不明であり、他のモノカイン、リン
ホカインを含有するネズミＩＬ−２を粗組成物とするも
のについて免疫機能の修復が若干報告されているにすぎ
ず、またヒトＩＬ−２については動物実験においてその
作用、免疫活性、薬効の何れもが不明である。なお、ネ
ズミＩＬ−２はヒトＩＬ−２とは分子量をも異にする別
物質である。このようにヒトＩＬ−２の薬剤としての効
果即ち治療・予防効果は全く不明である。このように、
ネズミＩＬ−２については若干の免疫活性の予知された
ものであるが、桜井欽夫ら「悪性腫瘍に対する免疫療法
剤の評価法に関する」医薬品研究１１巻７４６（１９８
０）に従えば免疫活性を示すことは直ちに薬効を示すも
のでないことが規定されている。
【００１０】一般に免疫療法においては、種々の抗原も
しくは抗原含有物からなる免疫原即ちワクチンを投与す
る所謂能動免疫の試ろみもあるが、生体側の免疫機能が
欠損もしくは不全状態では、癌患者、感染症患者、ウイ
ルス性疾患患者をとわず殆んど効果を上げない。液性免
疫の増強により疾患の治療、予防を意図する場合には、
上述のワクチンとともに液性免疫の非特異的な担い手の
１つである免疫グロブリンを投与する試ろみがなされつ
つある。細胞性免疫の増強による治療、予防が期待され
る疾患に対しては液性免疫におけるヒト免疫グロブリン
に対応する生体由来免疫活性物質が臨床に提供されず、
ワクチンを用いる能動免疫は期待されつつも、今のとこ
ろ患者に適用を試ろみることが不可能である。
しくは抗原含有物からなる免疫原即ちワクチンを投与す
る所謂能動免疫の試ろみもあるが、生体側の免疫機能が
欠損もしくは不全状態では、癌患者、感染症患者、ウイ
ルス性疾患患者をとわず殆んど効果を上げない。液性免
疫の増強により疾患の治療、予防を意図する場合には、
上述のワクチンとともに液性免疫の非特異的な担い手の
１つである免疫グロブリンを投与する試ろみがなされつ
つある。細胞性免疫の増強による治療、予防が期待され
る疾患に対しては液性免疫におけるヒト免疫グロブリン
に対応する生体由来免疫活性物質が臨床に提供されず、
ワクチンを用いる能動免疫は期待されつつも、今のとこ
ろ患者に適用を試ろみることが不可能である。
【００１１】以上述べてきたように、種々の免疫疾患に
対する従来の免疫療法は非特異的免疫療法に属するもの
であり、Ｔリンパ球を介する細胞性免疫応答を増強もし
くは調節することによる特異的免疫応答の人工的制御に
よる治療は厳密には未だ試ろみられていないか不十分で
ある。能動免疫としてのワクチン療法は免疫機能に障害
のある実際の患者には効果が弱く、殺細胞作用を中心と
する化学療法剤や制菌作用のみの抗生物質の投与では頻
々副作用が惹起される。
対する従来の免疫療法は非特異的免疫療法に属するもの
であり、Ｔリンパ球を介する細胞性免疫応答を増強もし
くは調節することによる特異的免疫応答の人工的制御に
よる治療は厳密には未だ試ろみられていないか不十分で
ある。能動免疫としてのワクチン療法は免疫機能に障害
のある実際の患者には効果が弱く、殺細胞作用を中心と
する化学療法剤や制菌作用のみの抗生物質の投与では頻
々副作用が惹起される。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、Ｔリンパ
球特異的免疫アジュバンドであるレンチナンの作用を詳
細に検討する中で、免疫応答を制禦するには、リンホカ
インに対する免疫エフェクター前駆細胞の応答性を改善
するとともに、免疫エフェクター誘導を行なう１次シグ
ナルとしてのリンホカインを投与することにより免疫系
疾患に顕著な薬効の得られることを見出すとともに、ヒ
トリンパ球、同クローン化細胞、悪性化細胞、ハイブリ
ドーマの細胞培養により得られるヒトＩＬ−２を大量に
製造、単離・精製する技術を既に完成しており、こうし
て得られた他のリンホカイン、モノカインを含有しない
ヒトＩＬ−２を用い動物実験でその免疫疾患に対する薬
効を確認するとともに、ヒトＩＬ−２により免疫エフェ
クターが確かに生成されることを立証し、上に詳述した
現在の免疫療法のかかえる諸問題を解決する新しい免疫
療法剤を発明、完成した。
球特異的免疫アジュバンドであるレンチナンの作用を詳
細に検討する中で、免疫応答を制禦するには、リンホカ
インに対する免疫エフェクター前駆細胞の応答性を改善
するとともに、免疫エフェクター誘導を行なう１次シグ
ナルとしてのリンホカインを投与することにより免疫系
疾患に顕著な薬効の得られることを見出すとともに、ヒ
トリンパ球、同クローン化細胞、悪性化細胞、ハイブリ
ドーマの細胞培養により得られるヒトＩＬ−２を大量に
製造、単離・精製する技術を既に完成しており、こうし
て得られた他のリンホカイン、モノカインを含有しない
ヒトＩＬ−２を用い動物実験でその免疫疾患に対する薬
効を確認するとともに、ヒトＩＬ−２により免疫エフェ
クターが確かに生成されることを立証し、上に詳述した
現在の免疫療法のかかえる諸問題を解決する新しい免疫
療法剤を発明、完成した。
【００１３】即ち本発明はヒトＩＬ−２単独又は他物質
との併用によって始めて免疫系疾患に対する画期的な新
免疫療法剤としての薬効を見出し、免疫療法の新しい進
歩に寄与するところ大なる有用な免疫療法剤に関するも
のである。
との併用によって始めて免疫系疾患に対する画期的な新
免疫療法剤としての薬効を見出し、免疫療法の新しい進
歩に寄与するところ大なる有用な免疫療法剤に関するも
のである。
【００１４】本発明に用いられるヒトＩＬ−２は、たと
えば、ヒト末梢血、扁桃腺、脾臓等より得られるリンパ
球を単独もしくはホルボールエステルの存在下で１２〜
４８時間Ｔリンパ球マイトジェンであるフイトヘマグル
チニン（ＰＨＡ）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、プ
ロテインＡ（ＰｒｏＡ）等で刺激して得られる。また、
これらヒトリンパ球をプールして、Ｒａｊｉ細胞、Ｄａ
ｕｄｉ細胞で代表されるヒト−Ｂ−リンホブラスト（Ｂ
−ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔ）の存在下に上述のＴマイト
ジェンで刺激すると一層高活性のヒトＩＬ−２が得られ
る。更に、本発明者らは、ヒトＴ白血病細胞株やＴリン
パ腫細胞株を培養し、血清添加または血清アルブミン添
加無白清培地や血清アルブミンすら含まぬ合成培地で上
述のＴリンパ球マイトジェンによる刺激を含有する工程
でもヒトＩＬ−２を調製できることを見出した。この場
合にもヒトＢ−リンホブラストの共存やホルボールエス
テルの共存は産生能の増大に有効である。また、本ヒト
細胞株をクローン化して得られるクローンの幾つかはマ
イトジェン刺激なしに自発的にヒトＩＬ−２を産生する
ことも見出された。また、ヒトリンパ球や上述のヒト細
胞株を細胞融合して得られるハイブリドーマよりＴリン
パ球マイトジェンの存在もしくは非存在下に産生される
ヒトＩＬ−２も、本発明に用いることができる。更に
は、上述の細胞よりえられたメッセンジャーＲＮＡ（ｍ
ＲＮＡ）を利用してリコンビナントＤＮＡ（ｒｅｃｏｍ
ｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ）を作成する遺伝子工学的手法で
作成されるヒトＩＬ−２も、その生物活性が後述の範囲
に入る限りにおいて、本発明の薬剤に含有されるヒト細
胞由来のヒトＩＬ−２である。
えば、ヒト末梢血、扁桃腺、脾臓等より得られるリンパ
球を単独もしくはホルボールエステルの存在下で１２〜
４８時間Ｔリンパ球マイトジェンであるフイトヘマグル
チニン（ＰＨＡ）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、プ
ロテインＡ（ＰｒｏＡ）等で刺激して得られる。また、
これらヒトリンパ球をプールして、Ｒａｊｉ細胞、Ｄａ
ｕｄｉ細胞で代表されるヒト−Ｂ−リンホブラスト（Ｂ
−ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔ）の存在下に上述のＴマイト
ジェンで刺激すると一層高活性のヒトＩＬ−２が得られ
る。更に、本発明者らは、ヒトＴ白血病細胞株やＴリン
パ腫細胞株を培養し、血清添加または血清アルブミン添
加無白清培地や血清アルブミンすら含まぬ合成培地で上
述のＴリンパ球マイトジェンによる刺激を含有する工程
でもヒトＩＬ−２を調製できることを見出した。この場
合にもヒトＢ−リンホブラストの共存やホルボールエス
テルの共存は産生能の増大に有効である。また、本ヒト
細胞株をクローン化して得られるクローンの幾つかはマ
イトジェン刺激なしに自発的にヒトＩＬ−２を産生する
ことも見出された。また、ヒトリンパ球や上述のヒト細
胞株を細胞融合して得られるハイブリドーマよりＴリン
パ球マイトジェンの存在もしくは非存在下に産生される
ヒトＩＬ−２も、本発明に用いることができる。更に
は、上述の細胞よりえられたメッセンジャーＲＮＡ（ｍ
ＲＮＡ）を利用してリコンビナントＤＮＡ（ｒｅｃｏｍ
ｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ）を作成する遺伝子工学的手法で
作成されるヒトＩＬ−２も、その生物活性が後述の範囲
に入る限りにおいて、本発明の薬剤に含有されるヒト細
胞由来のヒトＩＬ−２である。
【００１５】上述の如き細胞培養法により培養上清に生
成、蓄積されたヒトＩＬ−２は、通常の単離、精製法に
よって濃縮、精製するとよい。即ち、塩析、濃縮、真空
透析、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマ
トグラフィー、調製用等電点電気泳動、ゲル電気泳動法
等の種々の方法を単独にまたは適宜組み合わせて用い
る。
成、蓄積されたヒトＩＬ−２は、通常の単離、精製法に
よって濃縮、精製するとよい。即ち、塩析、濃縮、真空
透析、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマ
トグラフィー、調製用等電点電気泳動、ゲル電気泳動法
等の種々の方法を単独にまたは適宜組み合わせて用い
る。
【００１６】本発明の実施例において用いられるヒトＩ
Ｌ−２は、培養上清を４℃において限外濾過濃縮器ホロ
ファイバーＨＩＰ５（アミコン社製ＤＣ２型）を用い短
時間の間に約１０〜２０倍濃縮し、次いで８５％硫安で
塩析し、セファデックスＧ−１５（ファルマシア社製）
で脱塩後、ＤＥＡＥ−セルロースで段階溶出を行ない、
ｐＨ７．６の０．０６Ｍトリス緩衝液での溶出区分をプ
ールしたのち凍結乾燥を行ない、次いでフェニルセファ
デックスカラム（ファルマシア社製）を通し、更に調製
用等電点電気泳動装置（ファルマシア社製ＦＢＥ３００
０）にてファルマシア社製ファルマライト（ｐＨ５−
８）で展開し、単一バンドとして得られたものである。
上記凍結乾燥品を実施例に示すようにコントロールドポ
アガラスビーズカラムクロマトグラフィー及びオレンジ
セファロースクロマトグラフィーに付してもよい。
Ｌ−２は、培養上清を４℃において限外濾過濃縮器ホロ
ファイバーＨＩＰ５（アミコン社製ＤＣ２型）を用い短
時間の間に約１０〜２０倍濃縮し、次いで８５％硫安で
塩析し、セファデックスＧ−１５（ファルマシア社製）
で脱塩後、ＤＥＡＥ−セルロースで段階溶出を行ない、
ｐＨ７．６の０．０６Ｍトリス緩衝液での溶出区分をプ
ールしたのち凍結乾燥を行ない、次いでフェニルセファ
デックスカラム（ファルマシア社製）を通し、更に調製
用等電点電気泳動装置（ファルマシア社製ＦＢＥ３００
０）にてファルマシア社製ファルマライト（ｐＨ５−
８）で展開し、単一バンドとして得られたものである。
上記凍結乾燥品を実施例に示すようにコントロールドポ
アガラスビーズカラムクロマトグラフィー及びオレンジ
セファロースクロマトグラフィーに付してもよい。
【００１７】本精製操作によりヒトＩＬ−２は、後述の
活性検定法により、比活性はロットを問わず２×１０5
ｕｎｉｔ／ｍｇ以上を示した。
活性検定法により、比活性はロットを問わず２×１０5
ｕｎｉｔ／ｍｇ以上を示した。
【００１８】このようにして得られたヒトＩＬ−２は、
ギリスら「インターロイキン２依存性の細胞障害性Ｔ細
胞株の培養」（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉ
ｅｗｓ ５４巻８１−１０９頁（１９８１））に示され
るものと類似の物性を示し、分子量１５，０００で蛋白
分解酵素で失活し、５６℃１時間熱処理安定で、ｐＨ２
０−９０の範囲で安定である。
ギリスら「インターロイキン２依存性の細胞障害性Ｔ細
胞株の培養」（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉ
ｅｗｓ ５４巻８１−１０９頁（１９８１））に示され
るものと類似の物性を示し、分子量１５，０００で蛋白
分解酵素で失活し、５６℃１時間熱処理安定で、ｐＨ２
０−９０の範囲で安定である。
【００１９】ヒトＩＬ−２の活性は、次のようにして検
定した。
定した。
【００２０】組織培養プレートの個々のくぼみ（ｗｅｌ
ｌ）に、活性を検定しようとする検体を適当な濃度範囲
で２段階希釈し１００μｌずつ分注した。そこにギリス
ら（ネーチュア（Ｎａｔｕｒｅ）２６８巻１５４頁（１
９７７））によって教示された方法に従って作成した活
性化Ｔリンパ球株を４×１０3 個／１００μｌの濃度に
て１００μｌずつ各くぼみに添加した。３７℃、５％Ｃ
Ｏ2 含有空気の通気下２０時間培養し、ここにトリチウ
ム化チミジン０．５μＣｉを加え、４時間培養し、この
分野において良く知られた方法により細胞を採取し細胞
内に取り込まれた放射線量を測定した。ヒトＩＬ−２の
比活性は、トリチウム化チミジンの取り込みの最高値の
５０％の値の取り込みを示す検体の希釈度のプロピット
プロットより算出した。又、ヒトＩＬ−２の活性を検定
するために、アロ抗原刺激で生成するアロキラーＴ細胞
の記憶細胞に検体を添加し、３７℃で３〜４日培養後、
出現したアロキラーＴ細胞による標的細胞の細胞障害度
を51Ｃｒ標識標的細胞よりの51Ｃｒの上清への遊離でも
測定を行なったところ、前述の活性化Ｔリンパ球の増殖
をみる方法での測定値と相関のあることを確認した。
ｌ）に、活性を検定しようとする検体を適当な濃度範囲
で２段階希釈し１００μｌずつ分注した。そこにギリス
ら（ネーチュア（Ｎａｔｕｒｅ）２６８巻１５４頁（１
９７７））によって教示された方法に従って作成した活
性化Ｔリンパ球株を４×１０3 個／１００μｌの濃度に
て１００μｌずつ各くぼみに添加した。３７℃、５％Ｃ
Ｏ2 含有空気の通気下２０時間培養し、ここにトリチウ
ム化チミジン０．５μＣｉを加え、４時間培養し、この
分野において良く知られた方法により細胞を採取し細胞
内に取り込まれた放射線量を測定した。ヒトＩＬ−２の
比活性は、トリチウム化チミジンの取り込みの最高値の
５０％の値の取り込みを示す検体の希釈度のプロピット
プロットより算出した。又、ヒトＩＬ−２の活性を検定
するために、アロ抗原刺激で生成するアロキラーＴ細胞
の記憶細胞に検体を添加し、３７℃で３〜４日培養後、
出現したアロキラーＴ細胞による標的細胞の細胞障害度
を51Ｃｒ標識標的細胞よりの51Ｃｒの上清への遊離でも
測定を行なったところ、前述の活性化Ｔリンパ球の増殖
をみる方法での測定値と相関のあることを確認した。
【００２１】該分野で用いられるＩＬ−２の活性検定法
と称せられるものには様々のものがあるが、必らずしも
ＩＬ−２の特異的活性検定法でないものがあり、Ｔリン
パ球よりもしくは共存マクロファージ単球より生成する
他のリンホカインやモノカインの共存がＩＬ−２の特異
的活性検出を妨害している場合が頻々である。上述の活
性化Ｔリンパ球の増殖をみる方法が現在最も信頼される
ヒトＩＬ−２の特異的検出法である。
と称せられるものには様々のものがあるが、必らずしも
ＩＬ−２の特異的活性検定法でないものがあり、Ｔリン
パ球よりもしくは共存マクロファージ単球より生成する
他のリンホカインやモノカインの共存がＩＬ−２の特異
的活性検出を妨害している場合が頻々である。上述の活
性化Ｔリンパ球の増殖をみる方法が現在最も信頼される
ヒトＩＬ−２の特異的検出法である。
【００２２】本発明者らは、ヒトＩＬ−２の薬剤として
の発明を完成した。
の発明を完成した。
【００２３】上述の、他のリンホカイン、モノカインが
含有されている粗ヒトＩＬ−２を用いたのでは、薬理作
用の本体が何に由来するのか定かではないために臨床に
適用する場合に薬剤の投与時期、投与量も明確に規定す
ることが困難である。
含有されている粗ヒトＩＬ−２を用いたのでは、薬理作
用の本体が何に由来するのか定かではないために臨床に
適用する場合に薬剤の投与時期、投与量も明確に規定す
ることが困難である。
【００２４】本発明になる薬剤に含有されるヒトＩＬ−
２に他のリンホカインであるＴリンパ球代替因子、コロ
ニー刺激因子、免疫インターフェロン、インターロイキ
ン１、マクロファージ活性化因子が含まれているかどう
かは、当該分野においてよく知られる方法により検定さ
れる。簡単に記すと以下の如くである。（１）Ｔリンパ
球代替因子の存在しないことは、本薬剤中にＴリンパ球
を抗Ｔｈｙ１抗体により除去した脾臓細胞中に抗体産生
細胞を出現させる活性がないことにより検定される。
（２）コロニー刺激因子の存在しないことは、骨髄細胞
をｉｎ ｖｉｔｒｏでメチルセルロース中で培養する
際、本薬剤を添加しても骨髄細胞にコロニー形成が見ら
れないことにより検定された。（３）免疫インターフェ
ロンの活性の存在しないことは、本薬剤中に抗ウイルス
直接作用のないことにより検定される。（４）ＩＬ−２
非産生細胞株ＬＢＲＭ３３−１Ａ５はインターロイキン
１を４時間作用させるとＩＬ−２産生細胞に転換し、Ｃ
ｏｎＡ刺激によりＩＬ−２を産生する。ＬＢＲＭ３３−
１Ａ５に本薬剤を４時間作用させてもＩＬ−２産生細胞
への転換は生じないことから、本薬剤がインターロイキ
ン１を含まないことが検定された。（５）マクロファー
ジ活性化因子の活性の存在しないことは、本薬剤をｉｎ
ｖｉｔｒｏでマクロファージに作用させても、マクロ
ファージに対し抗腫瘍細胞活性（腫瘍細胞のＤＮＡ合成
阻害）を誘起しえないことにより検定される。
２に他のリンホカインであるＴリンパ球代替因子、コロ
ニー刺激因子、免疫インターフェロン、インターロイキ
ン１、マクロファージ活性化因子が含まれているかどう
かは、当該分野においてよく知られる方法により検定さ
れる。簡単に記すと以下の如くである。（１）Ｔリンパ
球代替因子の存在しないことは、本薬剤中にＴリンパ球
を抗Ｔｈｙ１抗体により除去した脾臓細胞中に抗体産生
細胞を出現させる活性がないことにより検定される。
（２）コロニー刺激因子の存在しないことは、骨髄細胞
をｉｎ ｖｉｔｒｏでメチルセルロース中で培養する
際、本薬剤を添加しても骨髄細胞にコロニー形成が見ら
れないことにより検定された。（３）免疫インターフェ
ロンの活性の存在しないことは、本薬剤中に抗ウイルス
直接作用のないことにより検定される。（４）ＩＬ−２
非産生細胞株ＬＢＲＭ３３−１Ａ５はインターロイキン
１を４時間作用させるとＩＬ−２産生細胞に転換し、Ｃ
ｏｎＡ刺激によりＩＬ−２を産生する。ＬＢＲＭ３３−
１Ａ５に本薬剤を４時間作用させてもＩＬ−２産生細胞
への転換は生じないことから、本薬剤がインターロイキ
ン１を含まないことが検定された。（５）マクロファー
ジ活性化因子の活性の存在しないことは、本薬剤をｉｎ
ｖｉｔｒｏでマクロファージに作用させても、マクロ
ファージに対し抗腫瘍細胞活性（腫瘍細胞のＤＮＡ合成
阻害）を誘起しえないことにより検定される。
【００２５】本発明者らは、前述の技術の工夫により、
種々の方法で得られ単離、精製され明確に規定された性
状と機能を有し、他のリンホカイン、モノカインを含有
しないヒトＩＬ−２を大量に生産し、その薬理作用を検
討することによりヒトＩＬ−２が癌、細菌感染、ウイル
ス感染、免疫不全症、自己免疫疾患を中心とする免疫系
疾患に明確な薬効すなわち治療、予防効果を有すること
を見出し新しい免疫療法剤を発明した。
種々の方法で得られ単離、精製され明確に規定された性
状と機能を有し、他のリンホカイン、モノカインを含有
しないヒトＩＬ−２を大量に生産し、その薬理作用を検
討することによりヒトＩＬ−２が癌、細菌感染、ウイル
ス感染、免疫不全症、自己免疫疾患を中心とする免疫系
疾患に明確な薬効すなわち治療、予防効果を有すること
を見出し新しい免疫療法剤を発明した。
【００２６】癌、細菌感染、ウイルス性疾患や免疫不全
症を含む免疫系疾患においてＴリンパ球機能が重要な働
きをしていることは既に明確にされている。
症を含む免疫系疾患においてＴリンパ球機能が重要な働
きをしていることは既に明確にされている。
【００２７】本発明を構成するヒトＩＬ−２は、活性化
もしくは抗原で感作されたＴリンパ球のクローンを拡大
し増殖する作用を有することが確認され、Ｔリンパ球機
能異常の関与する疾患に対し薬理効果を発現することが
期待される。
もしくは抗原で感作されたＴリンパ球のクローンを拡大
し増殖する作用を有することが確認され、Ｔリンパ球機
能異常の関与する疾患に対し薬理効果を発現することが
期待される。
【００２８】以下、本発明を構成するヒトＩＬ−２を用
いて見出された薬理効果を列記する。（イ）マウス腫瘍
細胞ＦＢＬ−３に対し生成し長期継代培養されている正
常な細胞障害性Ｔリンパ球株ＣＴＬＬ−２の増殖の顕著
な促進効果。（ロ）主要組織適合性抗原（Ｈ−２）の不
適合な脾臓細胞の組み合わせで生成されたアロキラーＴ
リンパ球、リンパ球と腫瘍細胞の混合培養で生成された
アロキラーＴリンパ球およびパプテン特異的Ｈ−２支配
キラーＴリンパ球の増殖の顕著な促進効果およびこれら
キラーＴリンパ球の記憶細胞よりのキラーＴリンパ球
（ＣＴＬ）の抗原非存在下での誘導効果。（ハ）ＰＮＡ
+ （ピーナッツ・アグルチニン結合性）胸腺細胞にＣｏ
ｎＡを共存させる培養系において、顕著な増殖誘導効果
（本効果はインターロイキン１では観察されない）。
（ニ）ｉｎ ｖｉｔｒｏで脾臓細胞のナチュラルキラー
細胞（ＮＫ）活性の増強効果。（ホ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ
で脾臓細胞のＮＫ活性を増強する場合のインターフェロ
ンまたはインターフェロン誘起物質（インデューサー）
との相乗効果。（ヘ）ｉｎ ｖｉｖｏで脾臓細胞のＮＫ
活性を増強するにあたりｉｎ ｖｉｔｒｏレンチナン投
与との相乗効果。（ト）同系癌担癌の免疫機能の抑制さ
れたマウスの脾臓細胞を応答細胞とするキラーＴ誘導培
養系においてｉｎ ｖｉｔｒｏで本誘導を修復、増強す
る効果。（チ）同系癌担癌のＮＫ活性の抑制されたマウ
スの脾臓細胞のＮＫ活性を修復、増強する効果。（リ）
通常ＣＴＬの誘導されない、Ｉａ+ −マクロファージ
（インターロイキン１産生細胞）非存在下のＨ−２不適
合な脾臓細胞の混合リンパ球培養においてアロキラーＴ
リンパ球を誘導する効果。
いて見出された薬理効果を列記する。（イ）マウス腫瘍
細胞ＦＢＬ−３に対し生成し長期継代培養されている正
常な細胞障害性Ｔリンパ球株ＣＴＬＬ−２の増殖の顕著
な促進効果。（ロ）主要組織適合性抗原（Ｈ−２）の不
適合な脾臓細胞の組み合わせで生成されたアロキラーＴ
リンパ球、リンパ球と腫瘍細胞の混合培養で生成された
アロキラーＴリンパ球およびパプテン特異的Ｈ−２支配
キラーＴリンパ球の増殖の顕著な促進効果およびこれら
キラーＴリンパ球の記憶細胞よりのキラーＴリンパ球
（ＣＴＬ）の抗原非存在下での誘導効果。（ハ）ＰＮＡ
+ （ピーナッツ・アグルチニン結合性）胸腺細胞にＣｏ
ｎＡを共存させる培養系において、顕著な増殖誘導効果
（本効果はインターロイキン１では観察されない）。
（ニ）ｉｎ ｖｉｔｒｏで脾臓細胞のナチュラルキラー
細胞（ＮＫ）活性の増強効果。（ホ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ
で脾臓細胞のＮＫ活性を増強する場合のインターフェロ
ンまたはインターフェロン誘起物質（インデューサー）
との相乗効果。（ヘ）ｉｎ ｖｉｖｏで脾臓細胞のＮＫ
活性を増強するにあたりｉｎ ｖｉｔｒｏレンチナン投
与との相乗効果。（ト）同系癌担癌の免疫機能の抑制さ
れたマウスの脾臓細胞を応答細胞とするキラーＴ誘導培
養系においてｉｎ ｖｉｔｒｏで本誘導を修復、増強す
る効果。（チ）同系癌担癌のＮＫ活性の抑制されたマウ
スの脾臓細胞のＮＫ活性を修復、増強する効果。（リ）
通常ＣＴＬの誘導されない、Ｉａ+ −マクロファージ
（インターロイキン１産生細胞）非存在下のＨ−２不適
合な脾臓細胞の混合リンパ球培養においてアロキラーＴ
リンパ球を誘導する効果。
【００２９】以上（イ）〜（リ）に示した効果は本発明
を構成するヒトＩＬ−２が確かに他のリンホカインとは
異なること、Ｔリンパ球の増殖維持、分化活性を有する
こと、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて免疫エフェクターとし
て重要なＣＴＬ，ＮＫ活性を誘導増強すること、これら
の免疫エフェクターの誘導がレンチナン、インターフェ
ロンやインターフェロン誘起剤と相乗効果を示すこと、
またこれらの免疫エフェクターの誘導の修復、増強が免
疫機能の抑制された生体のリンパ球に対しても発揮され
ることを如実に示すものである。単に免疫活性を示すの
みでなく、免疫疾患の治療、予防に重要な証拠となる免
疫エフェクターたるＣＴＬ，ＮＫの活性化の増強および
修復をなすことは大きな意義を有する。
を構成するヒトＩＬ−２が確かに他のリンホカインとは
異なること、Ｔリンパ球の増殖維持、分化活性を有する
こと、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて免疫エフェクターとし
て重要なＣＴＬ，ＮＫ活性を誘導増強すること、これら
の免疫エフェクターの誘導がレンチナン、インターフェ
ロンやインターフェロン誘起剤と相乗効果を示すこと、
またこれらの免疫エフェクターの誘導の修復、増強が免
疫機能の抑制された生体のリンパ球に対しても発揮され
ることを如実に示すものである。単に免疫活性を示すの
みでなく、免疫疾患の治療、予防に重要な証拠となる免
疫エフェクターたるＣＴＬ，ＮＫの活性化の増強および
修復をなすことは大きな意義を有する。
【００３０】次にｉｎ ｖｉｖｏのヒトＩＬ−２投与に
より確認された生物活性、免疫活性を列記する。（ヌ）
ＮＫ活性の単独投与もしくはインターフェロンと併用投
与による増強効果。（ル）アロＣＴＬ活性の増強効果。
（ヲ）同系癌担癌マウスに単独もしくはレンチナンと併
用して投与した時のＣＴＬ誘導増強活性。（ワ）羊赤血
球（ＳＲＢＣ）等の抗原を用いる遅延型過敏症反応を指
標とする細胞性免疫の増強効果。（カ）腫瘍抗原による
遅延型過敏症反応を指標とする癌特異的免疫応答の増強
効果。（ヨ）同系癌担癌マウスにおける免疫抑制状態へ
の投与によるＣＴＬ誘導、ＮＫ活性化、遅延型過敏症反
応を指標とする細胞性免疫の修復効果。（タ）Ｔリンパ
球機能の欠損したヌードマウスへの投与による抗ＳＲＢ
Ｃ抗体産生、ＣＴＬ誘導機能の発現効果。
より確認された生物活性、免疫活性を列記する。（ヌ）
ＮＫ活性の単独投与もしくはインターフェロンと併用投
与による増強効果。（ル）アロＣＴＬ活性の増強効果。
（ヲ）同系癌担癌マウスに単独もしくはレンチナンと併
用して投与した時のＣＴＬ誘導増強活性。（ワ）羊赤血
球（ＳＲＢＣ）等の抗原を用いる遅延型過敏症反応を指
標とする細胞性免疫の増強効果。（カ）腫瘍抗原による
遅延型過敏症反応を指標とする癌特異的免疫応答の増強
効果。（ヨ）同系癌担癌マウスにおける免疫抑制状態へ
の投与によるＣＴＬ誘導、ＮＫ活性化、遅延型過敏症反
応を指標とする細胞性免疫の修復効果。（タ）Ｔリンパ
球機能の欠損したヌードマウスへの投与による抗ＳＲＢ
Ｃ抗体産生、ＣＴＬ誘導機能の発現効果。
【００３１】以上（ヌ）〜（タ）に示した効果は、ヒト
ＩＬ−２が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでなくｉｎ ｖｉｖｏに
おいても１０〜１００ｕｎｉｔの投与により、生体内で
の吸収・分解・代謝にも拘らず、確かに免疫活性を示す
ことを始めて見出したことを示すものであり、ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏで観察されたように、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて
もＴリンパ球の増殖、分化活性を有すること、ＣＴＬ，
ＮＫの如き重要な免疫エフェクターの誘導増強作用を有
すること、またこれら免疫機能が抑制、不全、欠損の生
体においても、ヒトＩＬ−２の投与でこれらの機能が修
復、増強されることを示すものである。このことにより
始めてヒトＩＬ−２が生体への投与によっても免疫疾患
の治療、予防に有用な効果を示すことが明らかになっ
た。特にＩＬ−２投与により生体内で特異的免疫エフェ
クターとしてはたらくＣＴＬ誘導機能を顕著に増強させ
ること及び非特異的免疫エフェクターとしてはたらくＮ
Ｋ活性化を顕著に増強させることに始めて成功したのは
本発明の重要な知見である。老令生体では種々の免疫機
能が低下していることが知られており、また最近ギリス
ら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６７巻９３７頁（１
９８１））は老令生体でＩＬ−２の生産能の低下してい
ることを示しており、ここに示したｉｎ ｖｉｖｏでの
効果はＩＬ−２が実際に薬剤として汎く免疫機能の改善
に有用であることを示す。又、上述（ヌ）〜（タ）の効
果に示すとおり、ＩＬ−２とレンチナンもしくはインタ
ーフェロンとのｉｎ ｖｉｖｏでの相乗効果も明らかで
ある。
ＩＬ−２が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでなくｉｎ ｖｉｖｏに
おいても１０〜１００ｕｎｉｔの投与により、生体内で
の吸収・分解・代謝にも拘らず、確かに免疫活性を示す
ことを始めて見出したことを示すものであり、ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏで観察されたように、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて
もＴリンパ球の増殖、分化活性を有すること、ＣＴＬ，
ＮＫの如き重要な免疫エフェクターの誘導増強作用を有
すること、またこれら免疫機能が抑制、不全、欠損の生
体においても、ヒトＩＬ−２の投与でこれらの機能が修
復、増強されることを示すものである。このことにより
始めてヒトＩＬ−２が生体への投与によっても免疫疾患
の治療、予防に有用な効果を示すことが明らかになっ
た。特にＩＬ−２投与により生体内で特異的免疫エフェ
クターとしてはたらくＣＴＬ誘導機能を顕著に増強させ
ること及び非特異的免疫エフェクターとしてはたらくＮ
Ｋ活性化を顕著に増強させることに始めて成功したのは
本発明の重要な知見である。老令生体では種々の免疫機
能が低下していることが知られており、また最近ギリス
ら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６７巻９３７頁（１
９８１））は老令生体でＩＬ−２の生産能の低下してい
ることを示しており、ここに示したｉｎ ｖｉｖｏでの
効果はＩＬ−２が実際に薬剤として汎く免疫機能の改善
に有用であることを示す。又、上述（ヌ）〜（タ）の効
果に示すとおり、ＩＬ−２とレンチナンもしくはインタ
ーフェロンとのｉｎ ｖｉｖｏでの相乗効果も明らかで
ある。
【００３２】更に、（ワ），（カ）に示すように免疫原
たる抗原、腫瘍に対する細胞性免疫応答のｉｎ ｖｉｖ
ｏでの増強効果は、ヒトＩＬ−２が免疫原たる抗原と共
に投与した場合に免疫アジュバントとして作用すること
を示しており、能動免疫におけるヒトＩＬ−２の薬剤と
しての有用性を示すものである。
たる抗原、腫瘍に対する細胞性免疫応答のｉｎ ｖｉｖ
ｏでの増強効果は、ヒトＩＬ−２が免疫原たる抗原と共
に投与した場合に免疫アジュバントとして作用すること
を示しており、能動免疫におけるヒトＩＬ−２の薬剤と
しての有用性を示すものである。
【００３３】本発明者らは、最後にヒトＩＬ−２の動物
実験における薬効試験を実施し、以下に列記する効果を
見出した。既に述べた（イ）〜（タ）の効果より明らか
なように、ヒトＩＬ−２の薬剤としての有用性は以下に
列記する範囲にとどまらず、当業者が容易に類推・実施
しうる免疫系疾患全般を含むものである。
実験における薬効試験を実施し、以下に列記する効果を
見出した。既に述べた（イ）〜（タ）の効果より明らか
なように、ヒトＩＬ−２の薬剤としての有用性は以下に
列記する範囲にとどまらず、当業者が容易に類推・実施
しうる免疫系疾患全般を含むものである。
【００３４】前記効果とは、すなわち、（１）同系癌担
癌動物の癌病巣摘出手術後のヒトＩＬ−２投与による延
命効果、（２）同系癌に対する化学療法ＦＴ２０７、サ
イクロフォスフアミド投与との併用による延命効果、
（３）腫瘍ワクチン投与との併用による同系癌担癌動物
の延命効果、（４）ＩＬ−２単独投与による同系癌の退
縮、延命効果、（５）細菌感染に対する延命効果、
（６）ウイルス性疾患に対する延命効果、（７）レンチ
ナンとの併用による同系癌退縮効果である。
癌動物の癌病巣摘出手術後のヒトＩＬ−２投与による延
命効果、（２）同系癌に対する化学療法ＦＴ２０７、サ
イクロフォスフアミド投与との併用による延命効果、
（３）腫瘍ワクチン投与との併用による同系癌担癌動物
の延命効果、（４）ＩＬ−２単独投与による同系癌の退
縮、延命効果、（５）細菌感染に対する延命効果、
（６）ウイルス性疾患に対する延命効果、（７）レンチ
ナンとの併用による同系癌退縮効果である。
【００３５】以上の効果より明らかな様に本発明者らの
発明になるヒトＩＬ−２は、前述の様々な免疫活性、生
物活性にもとづき、（１）〜（７）に述べた様なｉｎ
ｖｉｖｏでの実際に医学分野において有用な薬効を示
す。しかもこれらの効果が確かにＩＬ−２によるもので
あり、他の微量成分によるものでないことが判明した。
発明になるヒトＩＬ−２は、前述の様々な免疫活性、生
物活性にもとづき、（１）〜（７）に述べた様なｉｎ
ｖｉｖｏでの実際に医学分野において有用な薬効を示
す。しかもこれらの効果が確かにＩＬ−２によるもので
あり、他の微量成分によるものでないことが判明した。
【００３６】本発明になるヒトＩＬ−２は、２×１０5
ｕｎｉｔ／ｍｇ以上の比活性を有する程度に一旦精製さ
れたものが望ましく、対象の疾患、患者の病状、免疫機
能を配慮して使用量、使用回数を決める。また、投与経
路は治療効果の実施例においては全て静脈内投与を示し
ているが、用法として本投与経路にのみ限局されるもの
ではない。
ｕｎｉｔ／ｍｇ以上の比活性を有する程度に一旦精製さ
れたものが望ましく、対象の疾患、患者の病状、免疫機
能を配慮して使用量、使用回数を決める。また、投与経
路は治療効果の実施例においては全て静脈内投与を示し
ているが、用法として本投与経路にのみ限局されるもの
ではない。
【００３７】上記比活性より弱い比活性を有するヒトＩ
Ｌ−２を含有する薬剤や、他のリンホカイン、モノカイ
ン等の微量成分を含有する薬剤も、本発明の趣旨よりし
て、本発明の技術的範囲に含まれることは明らかであ
る。本発明は、ヒトＩＬ−２そのものに、詳述したｉｎ
ｖｉｖｏの治療、予防効果のあることの発見により完
成したものであり、本効果を妨害しない他成分の含有は
本発明の範囲に含まれる。以下、本発明を実施例により
さらに説明する。
Ｌ−２を含有する薬剤や、他のリンホカイン、モノカイ
ン等の微量成分を含有する薬剤も、本発明の趣旨よりし
て、本発明の技術的範囲に含まれることは明らかであ
る。本発明は、ヒトＩＬ−２そのものに、詳述したｉｎ
ｖｉｖｏの治療、予防効果のあることの発見により完
成したものであり、本効果を妨害しない他成分の含有は
本発明の範囲に含まれる。以下、本発明を実施例により
さらに説明する。
【００３８】実施例１：ＩＬ−２の製造
【００３９】ヒト末梢Ｔリンパ球を、採血後該分野でよ
く知られた方法により、採取し１×１０6 ／ｍｌの細胞
密度となし、ここにヒトＢリンパ球細胞株であるＲａｊ
ｉ細胞を１×１０6 ／ｍｌの細胞密度で等容量添加し、
更にコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）２５μｇ／ｍｌ、ホ
ルボールミリスチート・アセテート（ＰＭＡ）１０ｎｇ
／ｍｌを添加し、最終容量２０００ｍｌとなした。これ
を１０ｌのジャー式撹拌培養槽に入れ３７℃にて４８時
間培養し、遠沈操体により細胞を分離してＩＬ−２を含
む培養上清を得た。用いた培地は１％の牛胎児血清を含
むローズウェルパーク・メモリアル・インスチュート
（ＲＰＭＩ）１６４０培地で、得られた培養上清は３６
ｕ／ｍｌのＩＬ−２活性を含有していた。なお、ｕはｕ
ｎｉｔの略で、「単位」を意味する。
く知られた方法により、採取し１×１０6 ／ｍｌの細胞
密度となし、ここにヒトＢリンパ球細胞株であるＲａｊ
ｉ細胞を１×１０6 ／ｍｌの細胞密度で等容量添加し、
更にコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）２５μｇ／ｍｌ、ホ
ルボールミリスチート・アセテート（ＰＭＡ）１０ｎｇ
／ｍｌを添加し、最終容量２０００ｍｌとなした。これ
を１０ｌのジャー式撹拌培養槽に入れ３７℃にて４８時
間培養し、遠沈操体により細胞を分離してＩＬ−２を含
む培養上清を得た。用いた培地は１％の牛胎児血清を含
むローズウェルパーク・メモリアル・インスチュート
（ＲＰＭＩ）１６４０培地で、得られた培養上清は３６
ｕ／ｍｌのＩＬ−２活性を含有していた。なお、ｕはｕ
ｎｉｔの略で、「単位」を意味する。
【００４０】一方、ヒトＴ白血病細胞株ジュルカット
（Ｊｕｒｋａｔ）−１１１株を４×１０6 ／ｍｌの細胞
密度で０．５％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する
無血清培地ＲＩＴＣ−５５−９ １０００ｍｌに懸濁
し、ファルコン社製回転培養瓶に入れ、ここにＣｏｎＡ
を１０μｇ／ｍｌになるように添加し、密栓後３７℃に
て２４時間回転培養した。培養終了後、培養上清を遠心
操作で回収した。本培養液のＩＬ−２活性は４０９６単
位／ｍｌであった。
（Ｊｕｒｋａｔ）−１１１株を４×１０6 ／ｍｌの細胞
密度で０．５％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する
無血清培地ＲＩＴＣ−５５−９ １０００ｍｌに懸濁
し、ファルコン社製回転培養瓶に入れ、ここにＣｏｎＡ
を１０μｇ／ｍｌになるように添加し、密栓後３７℃に
て２４時間回転培養した。培養終了後、培養上清を遠心
操作で回収した。本培養液のＩＬ−２活性は４０９６単
位／ｍｌであった。
【００４１】Ｊｕｒｋａｔ−ＦＨＣＲＣ株およびＪｕｒ
ｋａｔ−Ｆ１８８６株を同様に処理して得られたＩＬ−
２活性は各々６４および２８ｕ／ｍｌであった。
ｋａｔ−Ｆ１８８６株を同様に処理して得られたＩＬ−
２活性は各々６４および２８ｕ／ｍｌであった。
【００４２】ヒト末梢リンパ球をＴ細胞成長因子の存在
下に培養しクローン化したＴリンパ球またはヒトＴリン
パ球とヒトＴ白血病細胞株ＣＥＭを細胞融合して得られ
たハイブリドーマを同条件下でＣｏｎＡで刺激した場合
は、各々２４および１２ｕ／ｍｌのＩＬ−２活性を示し
た。
下に培養しクローン化したＴリンパ球またはヒトＴリン
パ球とヒトＴ白血病細胞株ＣＥＭを細胞融合して得られ
たハイブリドーマを同条件下でＣｏｎＡで刺激した場合
は、各々２４および１２ｕ／ｍｌのＩＬ−２活性を示し
た。
【００４３】上述のＪｕｒｋａｔ−１１１株を使用して
得られたＩＬ−２を含有する培養上清は、まずホロファ
イバー限外濾過濃縮器ＨＩＰ５（アミコン社製ＤＣ２）
を用いて１０倍に濃縮し、８５％硫安で塩析後セファデ
ックスＧ−１５（ファルマシア社製）で脱塩し、ＤＥＡ
Ｅ−セルロースカラムクロマトグラフィーでイオン強度
を変化させて段階溶出し、０．０６Ｍトリス緩衝液（ｐ
Ｈ７．６）で溶出する分画をプールした。このプール分
画を凍結乾燥後コントロールポアーガラス（ＣＰＧ）ビ
ーズ（３５０Ａ、フナコシ薬品製）を用いるクロマトグ
ラフィーを行ない、０．３Ｍグリシン塩酸緩衝液にて溶
出し、ＩＬ−２活性画分をプールした。このプール画分
を０．０１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７．６）でオレンヂセ
ファロースカラムに吸着させ、０．０１Ｍトリス緩衝液
（ｐＨ７．６）、１．０Ｍ ＮａＣｌにて溶出し、得ら
れたＩＬ−２活性画分を５０ｍＭ重炭酸アンモニウム溶
液に対し透析後、凍結乾燥により重炭酸アンモニウムを
除去し、得られた画分を調製用電気泳動装置ＦＢＥ３０
００（ファルマシア社製）を用いて展開し、平板ゲルを
３０片に切り、各ゲル中より蛋白質を滅菌蒸留水に対し
溶出し透析ＩＬ−２の活性、蛋白量を測定し、本発明に
用いるヒトＩＬ−２標品を得た。
得られたＩＬ−２を含有する培養上清は、まずホロファ
イバー限外濾過濃縮器ＨＩＰ５（アミコン社製ＤＣ２）
を用いて１０倍に濃縮し、８５％硫安で塩析後セファデ
ックスＧ−１５（ファルマシア社製）で脱塩し、ＤＥＡ
Ｅ−セルロースカラムクロマトグラフィーでイオン強度
を変化させて段階溶出し、０．０６Ｍトリス緩衝液（ｐ
Ｈ７．６）で溶出する分画をプールした。このプール分
画を凍結乾燥後コントロールポアーガラス（ＣＰＧ）ビ
ーズ（３５０Ａ、フナコシ薬品製）を用いるクロマトグ
ラフィーを行ない、０．３Ｍグリシン塩酸緩衝液にて溶
出し、ＩＬ−２活性画分をプールした。このプール画分
を０．０１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７．６）でオレンヂセ
ファロースカラムに吸着させ、０．０１Ｍトリス緩衝液
（ｐＨ７．６）、１．０Ｍ ＮａＣｌにて溶出し、得ら
れたＩＬ−２活性画分を５０ｍＭ重炭酸アンモニウム溶
液に対し透析後、凍結乾燥により重炭酸アンモニウムを
除去し、得られた画分を調製用電気泳動装置ＦＢＥ３０
００（ファルマシア社製）を用いて展開し、平板ゲルを
３０片に切り、各ゲル中より蛋白質を滅菌蒸留水に対し
溶出し透析ＩＬ−２の活性、蛋白量を測定し、本発明に
用いるヒトＩＬ−２標品を得た。
【００４４】本精製工程の概略を表１に示す。
【００４５】
【表１】
【００４６】なお、ここに得られたグレードＥのＩＬ−
２は、マウスに静注した時１００万単位にても全く死亡
例がみられず、ヒトＬ細胞の培養細胞に対しても１０万
単位／ｍｌの濃度でも何等の殺細胞作用は示さなかっ
た。グレードＡ，Ｃのものは１０万単位／ｍｌの濃度で
Ｌ細胞の成育を阻害し、何等かの直接細胞毒物質の含ま
れることを示した。
２は、マウスに静注した時１００万単位にても全く死亡
例がみられず、ヒトＬ細胞の培養細胞に対しても１０万
単位／ｍｌの濃度でも何等の殺細胞作用は示さなかっ
た。グレードＡ，Ｃのものは１０万単位／ｍｌの濃度で
Ｌ細胞の成育を阻害し、何等かの直接細胞毒物質の含ま
れることを示した。
【００４７】実施例２：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴリ
ンパ球の増殖促進効果
ンパ球の増殖促進効果
【００４８】活性化Ｔリンパ球株ＣＴＬＬを１×１０4
／ｍｌの細胞密度で２４穴のＮｕｎｃ社製の培養プレー
トに１ｍｌ／ｗｅｌｌの量で添加し、ここにＩＬ−２検
体を１０μｌ添加して以後２４時間ごとに本Ｔリンパ球
数の増加を観察した。培養に用いた培地は、ＲＰＭＩ１
６４０培地で牛胎児血清５％含むもので、３７℃、炭酸
ガス（７．５％）インキュベーター中にて培養した。細
胞をエオシン染色後顕微鏡にて生細胞および死胞細胞を
計数した。
／ｍｌの細胞密度で２４穴のＮｕｎｃ社製の培養プレー
トに１ｍｌ／ｗｅｌｌの量で添加し、ここにＩＬ−２検
体を１０μｌ添加して以後２４時間ごとに本Ｔリンパ球
数の増加を観察した。培養に用いた培地は、ＲＰＭＩ１
６４０培地で牛胎児血清５％含むもので、３７℃、炭酸
ガス（７．５％）インキュベーター中にて培養した。細
胞をエオシン染色後顕微鏡にて生細胞および死胞細胞を
計数した。
【００４９】結果を図１Ａに示す。
【００５０】また、ＣＴＬＬを１×１０4 ／ｍｌの細胞
密度でＲＰＭＩ−１６４０培地に添加し、２倍希釈列に
て希釈したＩＬ−２サンプルを１ｍｌ当たり１００μｌ
添加し、１ｍｌ／ｗｅｌｌの容量で２４穴プレート（Ｎ
ＵＮＣ社製）にて培養した。９６時間後細胞をエオシン
染色した後顕微鏡にて生細胞及び死細胞数を計数した。
密度でＲＰＭＩ−１６４０培地に添加し、２倍希釈列に
て希釈したＩＬ−２サンプルを１ｍｌ当たり１００μｌ
添加し、１ｍｌ／ｗｅｌｌの容量で２４穴プレート（Ｎ
ＵＮＣ社製）にて培養した。９６時間後細胞をエオシン
染色した後顕微鏡にて生細胞及び死細胞数を計数した。
【００５１】結果を図１Ｂに示す。
【００５２】図１Ｂより精製度の低いＩＬ−２検体中に
はＩＬ−２に対し阻害活性を示すインヒビーターの入っ
ていることが判明した。
はＩＬ−２に対し阻害活性を示すインヒビーターの入っ
ていることが判明した。
【００５３】なお、図１Ａ、図１Ｂにおいて、ＩＬ−２
グレードは表１に示すものと同じである。
グレードは表１に示すものと同じである。
【００５４】実施例３：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるキラ
ーＴリンパ球の記憶細胞よりのキラーＴリンパ球の誘導
促進効果
ーＴリンパ球の記憶細胞よりのキラーＴリンパ球の誘導
促進効果
【００５５】ＣＢＡ／Ｊマウスの脾臓リンパ球４×１０
6 と２，０００レントゲンのＸ線照射を受けたＢＡＬＢ
／Ｃマウス脾臓リンパ球１×１０6 を２ｍｌのクリック
培地（牛胎児血清濃度５％）に懸濁し、Ｎｕｎｃ社製２
４穴培養プレートで１０日間培養し、アロキラーＴリン
パ球の記憶細胞を得た。本記憶細胞のキラー活性は認め
られなかった。
6 と２，０００レントゲンのＸ線照射を受けたＢＡＬＢ
／Ｃマウス脾臓リンパ球１×１０6 を２ｍｌのクリック
培地（牛胎児血清濃度５％）に懸濁し、Ｎｕｎｃ社製２
４穴培養プレートで１０日間培養し、アロキラーＴリン
パ球の記憶細胞を得た。本記憶細胞のキラー活性は認め
られなかった。
【００５６】この記憶細胞を５×１０4 細胞／穴宛９６
穴のマイクロプレートに添加し、ここに２段階希釈した
ＩＬ−２検体を添加し最終容量２００μｌにてクリック
培地中３７℃にて５％炭酸ガスインキュベーター中３日
間培養した。
穴のマイクロプレートに添加し、ここに２段階希釈した
ＩＬ−２検体を添加し最終容量２００μｌにてクリック
培地中３７℃にて５％炭酸ガスインキュベーター中３日
間培養した。
【００５７】培養液を洗浄後新鮮な培地と常法により51
Ｃｒで標識したＰ８１５−Ｘ2 マストサイトーマを１×
１０4 ／穴宛添加し３時間３７℃の５％炭酸ガスインキ
ュベーター中で培養し、遊離する51Ｃｒ量をオートガン
マカウンターで測定することにより標的癌細胞Ｐ８１５
−Ｘ2 の傷害を測定し、記憶細胞よりのキラーＴリンパ
球の誘導効果を測定した。
Ｃｒで標識したＰ８１５−Ｘ2 マストサイトーマを１×
１０4 ／穴宛添加し３時間３７℃の５％炭酸ガスインキ
ュベーター中で培養し、遊離する51Ｃｒ量をオートガン
マカウンターで測定することにより標的癌細胞Ｐ８１５
−Ｘ2 の傷害を測定し、記憶細胞よりのキラーＴリンパ
球の誘導効果を測定した。
【００５８】図２に結果を示す。ＩＬ−２グレードは表
１のものに同じ。
１のものに同じ。
【００５９】実施例４：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるナチ
ュラルキラー活性の増強効果およびレンチナン、インタ
ーフェロンとの併用効果
ュラルキラー活性の増強効果およびレンチナン、インタ
ーフェロンとの併用効果
【００６０】Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスの脾臓細胞を常法に
より採取し単細胞化したのち、ダルベッコ変法イーグル
培地（ＤＭＥＭ）に１０7 細胞／２ｍｌに懸濁し、Ｎｕ
ｎｃ社製２４穴培養プレートに添加し、ここにＩＬ−２
標品を１００μｌ宛添加し、３７℃、５％炭酸ガスイン
キュベーター中にて２４時間培養し、得られた細胞を新
鮮培地２ｍｌに角懸濁し、各１ｍｌ宛小試験法に分注
し、ここに51Ｃｒ標識ＹＡＣ−１細胞を２×１０4 宛添
加し、４時間のインキュベーション後、上清に遊離され
る51Ｃｒの値をキートガンマカウンターで測定すること
により標的癌細胞ＹＡＣ−１の傷害度を求め、ナチュラ
ルキラー細胞活性の活性化能を測定した。
より採取し単細胞化したのち、ダルベッコ変法イーグル
培地（ＤＭＥＭ）に１０7 細胞／２ｍｌに懸濁し、Ｎｕ
ｎｃ社製２４穴培養プレートに添加し、ここにＩＬ−２
標品を１００μｌ宛添加し、３７℃、５％炭酸ガスイン
キュベーター中にて２４時間培養し、得られた細胞を新
鮮培地２ｍｌに角懸濁し、各１ｍｌ宛小試験法に分注
し、ここに51Ｃｒ標識ＹＡＣ−１細胞を２×１０4 宛添
加し、４時間のインキュベーション後、上清に遊離され
る51Ｃｒの値をキートガンマカウンターで測定すること
により標的癌細胞ＹＡＣ−１の傷害度を求め、ナチュラ
ルキラー細胞活性の活性化能を測定した。
【００６１】レンチナンとの併用効果については、Ｃ３
Ｈ／ＨｅＮマウスの脾臓細胞を採取する２４時間前に１
ｍｇ／ｋｇの投与量でレンチナンを静脈注射しておいた
Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスの脾臓細胞を用いることにより検
定した。
Ｈ／ＨｅＮマウスの脾臓細胞を採取する２４時間前に１
ｍｇ／ｋｇの投与量でレンチナンを静脈注射しておいた
Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスの脾臓細胞を用いることにより検
定した。
【００６２】α−インターフェロンとの併用効果につい
ては、ＮｕｎｃプレートにＩＬ−２を添加する際に１０
3 際単位／ｍｌα−インターフェロンを添加することに
より検定した。
ては、ＮｕｎｃプレートにＩＬ−２を添加する際に１０
3 際単位／ｍｌα−インターフェロンを添加することに
より検定した。
【００６３】結果は図３に示す。使用したＩＬ−２は表
１のグレードＥのものである。
１のグレードＥのものである。
【００６４】実施例５：ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＮＫ活
性の増強効果およびレンチナンとの併用効果
性の増強効果およびレンチナンとの併用効果
【００６５】Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスの尾静脈にＩＬ−２
検体０．１ｍｌを静脈注射し、３日後に同マウスの脾臓
細胞を採取し、２×１０6 細胞／ｍｌ宛ＤＭＥＭに懸濁
し、ここに51Ｃｒ標識ＹＡＣ−１細胞２×１０4 ／１０
０μｌ宛添加して、実施例４同様に51Ｃｒ遊離試験を行
ないＮＫ活性の活性化効果を検定した。
検体０．１ｍｌを静脈注射し、３日後に同マウスの脾臓
細胞を採取し、２×１０6 細胞／ｍｌ宛ＤＭＥＭに懸濁
し、ここに51Ｃｒ標識ＹＡＣ−１細胞２×１０4 ／１０
０μｌ宛添加して、実施例４同様に51Ｃｒ遊離試験を行
ないＮＫ活性の活性化効果を検定した。
【００６６】レンチナンとの併用効果の検定はＩＬ−２
投与の１時間前に同一マウスに１ｍｇ／ｋｇのレンチナ
ンを腹腔内投与することにより検定した。
投与の１時間前に同一マウスに１ｍｇ／ｋｇのレンチナ
ンを腹腔内投与することにより検定した。
【００６７】
【表２】
【００６８】実施例６：ｉｎ ｖｉｖｏにおけるキラー
Ｔリンパ球誘導増強効果およびレンチナンとの併用効果
Ｔリンパ球誘導増強効果およびレンチナンとの併用効果
【００６９】Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾腔内にＰ８１５
−Ｘ2 マストサイトーマ細胞を１×１０6 ／０．５ｍｌ
生理食塩水懸濁液として投与した。３日後と５日後にＩ
Ｌ−２を１００μｌずつ尾静脈より注射し、１０日目に
脾臓細胞を採取し、これらエフェクター細胞と51Ｃｒ標
識標的細胞Ｐ８１５を１００：１の比で混合し、３時間
の51Ｃｒ遊離試験により、キラーＴリンパ球誘導増強効
果を測定した。
−Ｘ2 マストサイトーマ細胞を１×１０6 ／０．５ｍｌ
生理食塩水懸濁液として投与した。３日後と５日後にＩ
Ｌ−２を１００μｌずつ尾静脈より注射し、１０日目に
脾臓細胞を採取し、これらエフェクター細胞と51Ｃｒ標
識標的細胞Ｐ８１５を１００：１の比で混合し、３時間
の51Ｃｒ遊離試験により、キラーＴリンパ球誘導増強効
果を測定した。
【００７０】表３に示す通り、ＩＬ−２投与群で生理食
塩水投与の対照群に比し顕著な増強効果が認められると
ともに、本増強効果がレンチナンの０．１ｍｇ／ｋｇ
（１日目）の投与で更に増巾されることが判明した。
塩水投与の対照群に比し顕著な増強効果が認められると
ともに、本増強効果がレンチナンの０．１ｍｇ／ｋｇ
（１日目）の投与で更に増巾されることが判明した。
【００７１】
【表３】
【００７２】実施例７：同系癌担癌マウスに投与するこ
とによる抗同系癌キラーＴリンパ球誘導の増強効果およ
びレンチナンとの併用効果
とによる抗同系癌キラーＴリンパ球誘導の増強効果およ
びレンチナンとの併用効果
【００７３】ＤＢＡ／２マウスの皮下に５×１０6 ／
０．１ｍｌのＰ８１５−Ｘ2 マストサイトーマを移植し
た。移植後１８日目にＩＬ−２を１００ｕｎｉｔ／０．
１ｍｌ尾静脈より注射し、更に５日後に脾臓細胞又は腫
瘍細胞を採取し各々単細胞化した。腫瘍細胞は更にフイ
コール（ファルマシア社製）の密度分画を行ない、リン
パ球（８８％純度）を集めた。各々をエフェクター：標
的細胞＝１００：１で51Ｃｒ標識Ｐ８１５を標的細胞と
して４時間の51Ｃｒ遊離テストを実施し、脾臓細胞及び
腫瘍局所中の同系癌に対するキラーＴリンパ球活性を検
定した。
０．１ｍｌのＰ８１５−Ｘ2 マストサイトーマを移植し
た。移植後１８日目にＩＬ−２を１００ｕｎｉｔ／０．
１ｍｌ尾静脈より注射し、更に５日後に脾臓細胞又は腫
瘍細胞を採取し各々単細胞化した。腫瘍細胞は更にフイ
コール（ファルマシア社製）の密度分画を行ない、リン
パ球（８８％純度）を集めた。各々をエフェクター：標
的細胞＝１００：１で51Ｃｒ標識Ｐ８１５を標的細胞と
して４時間の51Ｃｒ遊離テストを実施し、脾臓細胞及び
腫瘍局所中の同系癌に対するキラーＴリンパ球活性を検
定した。
【００７４】表４に示す通り、ＩＬ−２投与により始め
て脾臓細胞及び腫瘍局所中に癌細胞を殺すキラーＴリン
パ球の産生がみられた。
て脾臓細胞及び腫瘍局所中に癌細胞を殺すキラーＴリン
パ球の産生がみられた。
【００７５】
【表４】
【００７６】（１）用いたＩＬ−２は精製グレードＥの
もので、Ｃのものでは本増強効果は単独でもレンチナン
併用群でもみられなかった。グレードは表１に同じ。 （２）レンチナンはＰ８１５移植後、１５，１６，１７
日目に各１ｍｇ／ｋｇずつ腹腔内投与した。
もので、Ｃのものでは本増強効果は単独でもレンチナン
併用群でもみられなかった。グレードは表１に同じ。 （２）レンチナンはＰ８１５移植後、１５，１６，１７
日目に各１ｍｇ／ｋｇずつ腹腔内投与した。
【００７７】実施例８：腫瘍抗原に対する特異的細胞性
免疫応答の増強効果
免疫応答の増強効果
【００７８】Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスに１×１０6 ／０．
１ｍｌの同系腫瘍ＭＭ４６を移植し、腫瘍の大きくなっ
た移植後１３日目にＩＬ−２を１００ｕ／０．１ｍｌ生
理食塩水の投与量で尾静脈より注射した。一方、ＭＭ４
６腫瘍抗原を３Ｍ−ＫＣｌで抽出する常法で作成し、上
記同系ＭＭ４６腫瘍担癌マウスの足蹠に０．６０ｍｇ蛋
白相当量をＭＭ４６移植後２０日目、ＩＬ−２投与後７
日目に局所注射し２４時間後の足蹠の肥厚を測定するこ
とにより、同系腫瘍担癌マウスの腫瘍抗原に対する特異
的細胞性免疫反応である癌特異的遅延型過敏症反応の増
強効果を検定した。対照として、ＭＭ４６腫瘍を移植し
ないＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスにＩＬ−２を同量静注したも
の及びＭＭ４６と異なる腫瘍であるＭＭ１０２抗原を同
蛋白相当量注射する系などをおいたが結果を図４に示
す。ＩＬ−２は表１の精製グレードＥのものを使用。図
４より明らかなように、ＭＭ４６担癌マウスにＩＬ−２
を投与した後、腫瘍抗原を投与した場合にのみＭＭ４６
腫瘍に対する特異的な遅延型過敏反応の増強が認めら
れ、ＩＬ−２投与は同系腫瘍担癌マウスにおいて当該腫
瘍に対する特異的細胞性免疫反応を増強することが確か
に立証された。
１ｍｌの同系腫瘍ＭＭ４６を移植し、腫瘍の大きくなっ
た移植後１３日目にＩＬ−２を１００ｕ／０．１ｍｌ生
理食塩水の投与量で尾静脈より注射した。一方、ＭＭ４
６腫瘍抗原を３Ｍ−ＫＣｌで抽出する常法で作成し、上
記同系ＭＭ４６腫瘍担癌マウスの足蹠に０．６０ｍｇ蛋
白相当量をＭＭ４６移植後２０日目、ＩＬ−２投与後７
日目に局所注射し２４時間後の足蹠の肥厚を測定するこ
とにより、同系腫瘍担癌マウスの腫瘍抗原に対する特異
的細胞性免疫反応である癌特異的遅延型過敏症反応の増
強効果を検定した。対照として、ＭＭ４６腫瘍を移植し
ないＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスにＩＬ−２を同量静注したも
の及びＭＭ４６と異なる腫瘍であるＭＭ１０２抗原を同
蛋白相当量注射する系などをおいたが結果を図４に示
す。ＩＬ−２は表１の精製グレードＥのものを使用。図
４より明らかなように、ＭＭ４６担癌マウスにＩＬ−２
を投与した後、腫瘍抗原を投与した場合にのみＭＭ４６
腫瘍に対する特異的な遅延型過敏反応の増強が認めら
れ、ＩＬ−２投与は同系腫瘍担癌マウスにおいて当該腫
瘍に対する特異的細胞性免疫反応を増強することが確か
に立証された。
【００７９】実施例９：免疫抑制動物における免疫不全
状態の回復効果
状態の回復効果
【００８０】ＩＬ−２が免疫抑制状態にある動物に投与
された場合にＴリンパ球機能の回復を通じ種々の免疫応
答を回復させることを立証するため、担癌マウスにおい
てＩＬ−２投与により免疫不全状態が修復されるか否か
を検定した。即ち、ＤＢＡ／２マウスに１×１０6 ／
０．１ｍｌのＰ８１５−Ｘ2 マストサイトーマを皮下移
植し、腫瘍が充分に大きくなった時期にＩＬ−２を投与
し、（ｉ）ＮＫ活性化の修復、（ii）アロキラー産生能
の修復、（iii)羊赤血球ＳＲＢＣに対する遅延型反応の
修復の３つの効果を検定した。
された場合にＴリンパ球機能の回復を通じ種々の免疫応
答を回復させることを立証するため、担癌マウスにおい
てＩＬ−２投与により免疫不全状態が修復されるか否か
を検定した。即ち、ＤＢＡ／２マウスに１×１０6 ／
０．１ｍｌのＰ８１５−Ｘ2 マストサイトーマを皮下移
植し、腫瘍が充分に大きくなった時期にＩＬ−２を投与
し、（ｉ）ＮＫ活性化の修復、（ii）アロキラー産生能
の修復、（iii)羊赤血球ＳＲＢＣに対する遅延型反応の
修復の３つの効果を検定した。
【００８１】（ｉ）ＮＫ活性化 Ｐ８１５−Ｘ2 の移植後、１６日、１８日目に各５０ｕ
／０．１ｍｌ生理食塩水のＩＬ−２を尾静脈より注射し
て移植後２０日目の脾臓細胞を採取し、エフェクター細
胞：標的細胞＝２００：１にて、51Ｃｒ標識ＹＡＣ−１
細胞を標的細胞として４時間の51Ｃｒ遊離テストを行な
い、標的ＹＡＣ−１細胞の傷害度（％）を測定すること
によりＮＫ活性を測定した。
／０．１ｍｌ生理食塩水のＩＬ−２を尾静脈より注射し
て移植後２０日目の脾臓細胞を採取し、エフェクター細
胞：標的細胞＝２００：１にて、51Ｃｒ標識ＹＡＣ−１
細胞を標的細胞として４時間の51Ｃｒ遊離テストを行な
い、標的ＹＡＣ−１細胞の傷害度（％）を測定すること
によりＮＫ活性を測定した。
【００８２】正常（非担癌）マウスのＮＫ活性は１９．
８％であったのに対し、Ｐ８１５−Ｘ2 担癌マウスでは
７．６％で有意に低下がみられたが、ここに精製グレー
ドＥ（表１参照）のＩＬ−２を静注した群では２２．３
％と顕著なＮＫ活性化の低下状態の修復効果がみられ
た。
８％であったのに対し、Ｐ８１５−Ｘ2 担癌マウスでは
７．６％で有意に低下がみられたが、ここに精製グレー
ドＥ（表１参照）のＩＬ−２を静注した群では２２．３
％と顕著なＮＫ活性化の低下状態の修復効果がみられ
た。
【００８３】ＮＫ活性化の低下は正常ＤＢＡ／２マウス
にＰ８１５担癌（腹水型）マウスの腹水液を０．５ｍｌ
ずつ３回腹腔内投与しても観察されたが（１９．８％→
６．４％）、この場合にも上記同様のＩＬ−２投与でＮ
Ｋ活性は２３．４％にまで修復された。
にＰ８１５担癌（腹水型）マウスの腹水液を０．５ｍｌ
ずつ３回腹腔内投与しても観察されたが（１９．８％→
６．４％）、この場合にも上記同様のＩＬ−２投与でＮ
Ｋ活性は２３．４％にまで修復された。
【００８４】（ii）アロキラーＴリンパ球産生能 （ｉ）同様に処理し、Ｐ８１５−Ｘ2 皮下移植後２０日
目の脾臓細胞を採取し、本脾臓細胞を応答性細胞とし、
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓細胞を２，０００レントゲ
ンのＸ線処理したものを刺激細胞とし、実施例３に述べ
たと同様の条件下にアロキラーＴリンパ球誘導の混合リ
ンパ球反応を実施した。培養開始後５日目に細胞を採取
し、エフェクター細胞：標的細胞＝１０：１にて51Ｃｒ
標識ＥＬ４−サイモーマを標的細胞として３時間の51Ｃ
ｒ遊離テストを行ない、標的ＥＬ４細胞の傷害度（％）
を測定することによりアロキラーＴリンパ球産生能を検
定した。
目の脾臓細胞を採取し、本脾臓細胞を応答性細胞とし、
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓細胞を２，０００レントゲ
ンのＸ線処理したものを刺激細胞とし、実施例３に述べ
たと同様の条件下にアロキラーＴリンパ球誘導の混合リ
ンパ球反応を実施した。培養開始後５日目に細胞を採取
し、エフェクター細胞：標的細胞＝１０：１にて51Ｃｒ
標識ＥＬ４−サイモーマを標的細胞として３時間の51Ｃ
ｒ遊離テストを行ない、標的ＥＬ４細胞の傷害度（％）
を測定することによりアロキラーＴリンパ球産生能を検
定した。
【００８５】正常マウスの脾臓細胞では本条件下に有意
のアロキラーＴリンパ球産生がみられるのに対し、Ｐ８
１５−Ｘ2 担癌ＤＢＡ／２マウスの脾臓細胞では同産生
は全くみられない。しかしながら、このような免疫不全
状態においてもＩＬ−２を投与することによりアロキラ
ーＴリンパ球の産生が顕著にみられ、ＩＬ−２投与が免
疫不全状態の動物に免疫機能の修復に働くことが判明し
た。
のアロキラーＴリンパ球産生がみられるのに対し、Ｐ８
１５−Ｘ2 担癌ＤＢＡ／２マウスの脾臓細胞では同産生
は全くみられない。しかしながら、このような免疫不全
状態においてもＩＬ−２を投与することによりアロキラ
ーＴリンパ球の産生が顕著にみられ、ＩＬ−２投与が免
疫不全状態の動物に免疫機能の修復に働くことが判明し
た。
【００８６】結果を表５に示す。
【００８７】
【表５】
【００８８】（iii)羊赤血球に対する遅延型過敏反応 （ｉ）同様に処理し、Ｐ８１５−Ｘ2 マストサイトーマ
１×１０6 皮下移植後２０日目にＩＬ−２を５０ｕ／
０．１ｍｌ静注されたＤＢＡ／２マウスに２５日目に１
×１０6 の羊赤血球ＳＲＢＣを足蹠に投与し、更に６日
後に１×１０6 のＳＲＢＣを再度足蹠に注射し、２４時
間後足蹠の肥厚を測定した。図５に示す通り、担癌免疫
不全状態で抑制された足蹠の遅延過敏型反応はＩＬ−２
の投与で正常以上の状態に修復増強されることが判明し
た。
１×１０6 皮下移植後２０日目にＩＬ−２を５０ｕ／
０．１ｍｌ静注されたＤＢＡ／２マウスに２５日目に１
×１０6 の羊赤血球ＳＲＢＣを足蹠に投与し、更に６日
後に１×１０6 のＳＲＢＣを再度足蹠に注射し、２４時
間後足蹠の肥厚を測定した。図５に示す通り、担癌免疫
不全状態で抑制された足蹠の遅延過敏型反応はＩＬ−２
の投与で正常以上の状態に修復増強されることが判明し
た。
【００８９】実施例１０：Ｔリンパ球免疫機能欠損動物
における免疫機能発現効果
における免疫機能発現効果
【００９０】Ｔリンパ球機能が欠損し、従ってキラーＴ
リンパ球産生やＴリンパ球依存性抗原に対する抗体産生
のみられないヌードマウスにおいて、ＩＬ−２投与がこ
れらの免疫機能を発現させることは以下のごとくに立証
した。
リンパ球産生やＴリンパ球依存性抗原に対する抗体産生
のみられないヌードマウスにおいて、ＩＬ−２投与がこ
れらの免疫機能を発現させることは以下のごとくに立証
した。
【００９１】ＢＡＬＢ／Ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの足蹠に
２，０００ＲのＸ線照射をしたＣ５７ＢＬ／６マウスの
脾細胞２×１０7 個を投与しアロ抗原による感作を連続
２日行なった。抗原投与開始と同時に表１のＩＬ−２サ
ンプルＥ１００ｖ／１００μｌを静脈内投与し、３日お
きに３回投与を続けた。１０日後、このＢＡＬＢ／Ｃｎ
ｕ／ｎｕマウスの脾細胞４×１０6 個を２，０００Ｒの
Ｘ線処理をしたＣ５７ＢＬ／６マウスの脾細胞１×１０
6 と共に２ｍｌのクリック／ＲＰＭＩ培地に添加し５日
間培養し、51ＣｒラベルしたＥＬ４細胞株を標的細胞と
してキラー活性を測定した。
２，０００ＲのＸ線照射をしたＣ５７ＢＬ／６マウスの
脾細胞２×１０7 個を投与しアロ抗原による感作を連続
２日行なった。抗原投与開始と同時に表１のＩＬ−２サ
ンプルＥ１００ｖ／１００μｌを静脈内投与し、３日お
きに３回投与を続けた。１０日後、このＢＡＬＢ／Ｃｎ
ｕ／ｎｕマウスの脾細胞４×１０6 個を２，０００Ｒの
Ｘ線処理をしたＣ５７ＢＬ／６マウスの脾細胞１×１０
6 と共に２ｍｌのクリック／ＲＰＭＩ培地に添加し５日
間培養し、51ＣｒラベルしたＥＬ４細胞株を標的細胞と
してキラー活性を測定した。
【００９２】表６に示すとおりＩＬ−２投与により、Ｔ
細胞機能の欠損したヌードマウスにキラーＴリンパ球産
生を誘導できた。
細胞機能の欠損したヌードマウスにキラーＴリンパ球産
生を誘導できた。
【００９３】
【表６】
【００９４】上表において、マウス：ＢＡＬＢ／Ｃ ｎ
ｕ／ｎｕ；抗原：Ｃ５７ＢＬ／６脾細胞；ＩＬ−２：表
１のサンプルＥ；標的細胞：ＥＬ−４；ＩＬ−２投与：
１００ｕｎｉｔ／１００μｌ×３回である。ＢＡＬＢ／
Ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの腹腔内に抗原として羊赤血球１
×１０6 個を投与し、抗原投与と同時に表１のＩＬ−２
サンプルＥ１００ｖ／１００μｌを静脈内投与し、３日
おきに３回投与を続けた。このＢＡＬＢ／Ｃ ｎｕ／ｎ
ｕマウスの脾細胞０．７５×１０6 個と羊赤血球１×１
０5 個を混合し、２００μｌのＲＰＭＩ−１６４０培地
に添加し、９６穴の平底マイクロプレート（コスター社
製）に２００μｌ／ｗｅｌｌの容量で５日間培養した。
５日後各ｗｅｌｌの細胞を回収しカニンガムの方法によ
り出現した抗体産生細胞数を測定した。
ｕ／ｎｕ；抗原：Ｃ５７ＢＬ／６脾細胞；ＩＬ−２：表
１のサンプルＥ；標的細胞：ＥＬ−４；ＩＬ−２投与：
１００ｕｎｉｔ／１００μｌ×３回である。ＢＡＬＢ／
Ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの腹腔内に抗原として羊赤血球１
×１０6 個を投与し、抗原投与と同時に表１のＩＬ−２
サンプルＥ１００ｖ／１００μｌを静脈内投与し、３日
おきに３回投与を続けた。このＢＡＬＢ／Ｃ ｎｕ／ｎ
ｕマウスの脾細胞０．７５×１０6 個と羊赤血球１×１
０5 個を混合し、２００μｌのＲＰＭＩ−１６４０培地
に添加し、９６穴の平底マイクロプレート（コスター社
製）に２００μｌ／ｗｅｌｌの容量で５日間培養した。
５日後各ｗｅｌｌの細胞を回収しカニンガムの方法によ
り出現した抗体産生細胞数を測定した。
【００９５】表７に示すとおり、ＩＬ−２投与群のみに
抗体産生の誘導がみられた。
抗体産生の誘導がみられた。
【００９６】
【表７】
【００９７】上表にて、マウス：ＢＡＬＢ／Ｃ ｎｕ／
ｎｕ；抗原：羊赤血球；培養：コスター９６穴平底マイ
クロプレート；ＩＬ−２投与：１００ｕｎｉｔ／１００
μｌ×３回である。
ｎｕ；抗原：羊赤血球；培養：コスター９６穴平底マイ
クロプレート；ＩＬ−２投与：１００ｕｎｉｔ／１００
μｌ×３回である。
【００９８】実施例１１：癌病巣摘出手術動物に対する
延命効果
延命効果
【００９９】Ｃ５７ＢＬ／６マウスに同系腫瘍であるＥ
Ｌ４を３×１０6 ／０．１ｍｌ皮下移植し、腫瘍が増大
した１４日目にナイロン系を用い、本固型腫瘍を外科的
に採取し、傷口をカットバンドで縫合し、翌日にＩＬ−
２を１００ｕ／０．１ｍｌ静注し、以降４日おきに３
回、合計４回同量のＩＬ−２を静注し、各群のマウスの
生存を測定したところ、表１の精製グレードＥのＩＬ−
２群においてのみ顕著な延命効果が観察された。
Ｌ４を３×１０6 ／０．１ｍｌ皮下移植し、腫瘍が増大
した１４日目にナイロン系を用い、本固型腫瘍を外科的
に採取し、傷口をカットバンドで縫合し、翌日にＩＬ−
２を１００ｕ／０．１ｍｌ静注し、以降４日おきに３
回、合計４回同量のＩＬ−２を静注し、各群のマウスの
生存を測定したところ、表１の精製グレードＥのＩＬ−
２群においてのみ顕著な延命効果が観察された。
【０１００】結果を表８に示す。
【０１０１】
【表８】
【０１０２】実施例１２：手術後の転移腫瘍に対する治
療効果 手術後に少量残存する腫瘍細胞は免疫療法の最も期待さ
れる対象と考えられている。実験には、転移性のマウス
同系腫瘍であるＬ１２１０，Ｐ３８８Ｄ1 およびＭＨ１
３４腫瘍を対象として用いた。
療効果 手術後に少量残存する腫瘍細胞は免疫療法の最も期待さ
れる対象と考えられている。実験には、転移性のマウス
同系腫瘍であるＬ１２１０，Ｐ３８８Ｄ1 およびＭＨ１
３４腫瘍を対象として用いた。
【０１０３】Ｌ１２１０については、１×１０4 個の腫
瘍細胞をＢＤＦ1 マウス足蹠皮下に移植後１０日目に移
植部位を切除した場合、切除後１，３，５日目に各１０
０ｕ／０．１ｍｌのＩＬ−２を投与した群では全例が完
全治癒したが、ＩＬ−２非投与の対照群では４０％の死
亡例がみられた（図６Ａ）。
瘍細胞をＢＤＦ1 マウス足蹠皮下に移植後１０日目に移
植部位を切除した場合、切除後１，３，５日目に各１０
０ｕ／０．１ｍｌのＩＬ−２を投与した群では全例が完
全治癒したが、ＩＬ−２非投与の対照群では４０％の死
亡例がみられた（図６Ａ）。
【０１０４】Ｐ３８８Ｄ1 は、１×１０5 個をＢＤＦ1
の足蹠皮下移植後同様に処置したところ、ＩＬ−２投与
群では８０％が完全治癒したのに対して対照群では８０
％が死亡した（図１Ｂ）。
の足蹠皮下移植後同様に処置したところ、ＩＬ−２投与
群では８０％が完全治癒したのに対して対照群では８０
％が死亡した（図１Ｂ）。
【０１０５】またＭＨ１３４については、１×１０5 個
をＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスの足蹠皮下に移植し同様に処置
したところ、ＩＬ−２投与例は全例完全治癒したが、対
照群では、術後６０日目までに６０％が死亡した（図６
Ｃ）。
をＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスの足蹠皮下に移植し同様に処置
したところ、ＩＬ−２投与例は全例完全治癒したが、対
照群では、術後６０日目までに６０％が死亡した（図６
Ｃ）。
【０１０６】本実験結果は、グレードＥ（表１参照）の
ＩＬ−２投与で認められたものであるが、粗ＩＬ−２の
場合にはこの様に明瞭な効果は認められなかった。
ＩＬ−２投与で認められたものであるが、粗ＩＬ−２の
場合にはこの様に明瞭な効果は認められなかった。
【０１０７】実施例１３：自家癌担癌動物に対する化学
療法剤との併用による延命効果
療法剤との併用による延命効果
【０１０８】３−メチルコランスレン（ＭＣ）のオリー
ブ油懸濁液（０．５ｍｇ／０．１ｍｌ）をＳＷＭ／Ｍｓ
マウスの腰部皮下に０．１ｍｌ投与し、触知法により小
豆大（０．５ｃｍ直径）の腫瘍発生が１５週目までにみ
とめられたマウスを集め、３群に分けた。１群は対照群
となし、１群にはサイクロフォスフアミドを１００ｍｇ
／ｋｇ腹腔内投与し（１日目）、一方他の１群にはサイ
クロフォスフアミド１００ｍｇ／ｋｇ投与後２０，２
２，２４，２６，２８，３０日目に各１００ｕ／０．１
ｍｌのＩＬ−２を尾静脈より注射し、各群の平均生存日
数を求めた。
ブ油懸濁液（０．５ｍｇ／０．１ｍｌ）をＳＷＭ／Ｍｓ
マウスの腰部皮下に０．１ｍｌ投与し、触知法により小
豆大（０．５ｃｍ直径）の腫瘍発生が１５週目までにみ
とめられたマウスを集め、３群に分けた。１群は対照群
となし、１群にはサイクロフォスフアミドを１００ｍｇ
／ｋｇ腹腔内投与し（１日目）、一方他の１群にはサイ
クロフォスフアミド１００ｍｇ／ｋｇ投与後２０，２
２，２４，２６，２８，３０日目に各１００ｕ／０．１
ｍｌのＩＬ−２を尾静脈より注射し、各群の平均生存日
数を求めた。
【０１０９】対照無処置群は４５．０日、サイクロフォ
スフアミド単独投与群は４５．５日、サイクロフォスフ
アミドとＩＬ−２併用群では１２３．８日となり、併用
群における顕著な生存日数の延長がみとめられＩＬ−２
が化学療法剤との併用で自家癌に対しても抗腫瘍効果を
示すことが立証された。
スフアミド単独投与群は４５．５日、サイクロフォスフ
アミドとＩＬ−２併用群では１２３．８日となり、併用
群における顕著な生存日数の延長がみとめられＩＬ−２
が化学療法剤との併用で自家癌に対しても抗腫瘍効果を
示すことが立証された。
【０１１０】実施例１４：腫瘍抗原との併用投与による
同系担癌動物に対する延命効果
同系担癌動物に対する延命効果
【０１１１】マウス白血病細胞ＬＳＴＲＡを８，０００
レントゲン照射して造腫瘍性をなくしたものを腫瘍ワク
チン、すなわち、腫瘍抗原として用いた。Ｘ線照射した
ＬＳＴＲＡ死細胞１×１０6 をＢＡＣＬ／Ｃマウスの足
蹠に注射し、本ワクチン注射後５，７，９日目にＩＬ−
２ ５０〜１００ｕ／０．０５ｍｌを静脈注射し、次い
で２８日目にＬＳＴＲＡ生細胞を１０6 足蹠に注射し、
マウスの生存を観察した。
レントゲン照射して造腫瘍性をなくしたものを腫瘍ワク
チン、すなわち、腫瘍抗原として用いた。Ｘ線照射した
ＬＳＴＲＡ死細胞１×１０6 をＢＡＣＬ／Ｃマウスの足
蹠に注射し、本ワクチン注射後５，７，９日目にＩＬ−
２ ５０〜１００ｕ／０．０５ｍｌを静脈注射し、次い
で２８日目にＬＳＴＲＡ生細胞を１０6 足蹠に注射し、
マウスの生存を観察した。
【０１１２】腫瘍移植後５０日目の生存数は表９の通り
で、この場合にも腫瘍抗原と併用投与されたＩＬ−２は
治療効果を示し、種々の抗原に対しＩＬ−２がアジュバ
ンドとして作用し、治療・予防効果を示すことが立証さ
れた。
で、この場合にも腫瘍抗原と併用投与されたＩＬ−２は
治療効果を示し、種々の抗原に対しＩＬ−２がアジュバ
ンドとして作用し、治療・予防効果を示すことが立証さ
れた。
【０１１３】
【表９】
【０１１４】実施例１５：単独投与による同系癌の退縮
および担癌動物の延命効果
および担癌動物の延命効果
【０１１５】ＤＢＡ／２マウスに１×１０6 のＰ８１５
−Ｘ2 マストサイトーマを背部皮下に移植し、１４，１
６，１８，２０，２２日目の５回に分けて各回１００ｕ
／０．１ｍｌのＩＬ−２を静注し、４週目の腫瘍退縮率
を腫瘍重量より、又、１００日目のＤＢＡ／２マウスの
生存率を求めた。
−Ｘ2 マストサイトーマを背部皮下に移植し、１４，１
６，１８，２０，２２日目の５回に分けて各回１００ｕ
／０．１ｍｌのＩＬ−２を静注し、４週目の腫瘍退縮率
を腫瘍重量より、又、１００日目のＤＢＡ／２マウスの
生存率を求めた。
【０１１６】グレードＥのＩＬ−２（表１参照）の静注
では顕著な抗腫瘍効果が腫瘍退縮効果及び延命効果にお
いて認められ、ＩＬ−２は単独投与によっても抗腫瘍効
果のあることが判明した。
では顕著な抗腫瘍効果が腫瘍退縮効果及び延命効果にお
いて認められ、ＩＬ−２は単独投与によっても抗腫瘍効
果のあることが判明した。
【０１１７】結果を表１０に示す。
【０１１８】
【表１０】
【０１１９】実施例１６：細菌感染に対する延命効果
【０１２０】デイフコ栄養培地で培養したエセリア・コ
リ菌Ｎｏ．４２を５×１０7 ／０．２ｍｌ宛ｄｄＹマウ
スに腹腔内投与し、本感染前３日目、１日目にＩＬ−２
１０〜２００ｕ／０．１ｍｌを尾静脈より注射し、菌
感染２日後の生存マウス数を測定したところ表１１Ａに
示す結果を得た。
リ菌Ｎｏ．４２を５×１０7 ／０．２ｍｌ宛ｄｄＹマウ
スに腹腔内投与し、本感染前３日目、１日目にＩＬ−２
１０〜２００ｕ／０．１ｍｌを尾静脈より注射し、菌
感染２日後の生存マウス数を測定したところ表１１Ａに
示す結果を得た。
【０１２１】
【表１１Ａ】
【０１２２】同じく、クレブジェラ・ニューモニア菌Ｎ
ｏ．１９を５×１０6 ／０．２ｍｌ宛ｄｄＹマウスに腹
腔内注射し、感染１時間後にＩＬ−２ １０〜２００ｕ
／匹投与し、感染後５日目の生存数を測定し、表１１Ｂ
に示す結果をえた。
ｏ．１９を５×１０6 ／０．２ｍｌ宛ｄｄＹマウスに腹
腔内注射し、感染１時間後にＩＬ−２ １０〜２００ｕ
／匹投与し、感染後５日目の生存数を測定し、表１１Ｂ
に示す結果をえた。
【０１２３】
【表１１Ｂ】
【０１２４】実施例１７：ウイルス感染に対する延命効
果
果
【０１２５】（ＢＡＬＢ／Ｃ×Ｃ５７ＢＬ／６）Ｆ1 マ
ウスに水泡性口内炎（ＶＳＶ）ウイルスを１．２×１０
5 ｐｆｃ単位／０．０５ｍｌ当りエーテル麻酔下鼻腔よ
り感染させてＩＬ−２の抗原ウイルス効果を検定した。
ウスに水泡性口内炎（ＶＳＶ）ウイルスを１．２×１０
5 ｐｆｃ単位／０．０５ｍｌ当りエーテル麻酔下鼻腔よ
り感染させてＩＬ−２の抗原ウイルス効果を検定した。
【０１２６】ＩＬ−２はウイルス感染の３日前より感染
後５日目まで連日５０ｕ／０．０５ｍｌを静注した。対
照群では８日目までに８０％のマウスが死亡したのに対
し、ＩＬ−２投与群では１５日目においても尚１００％
のマウスが生存し、ＩＬ−２により顕著なウイルス感染
の治療効果が観察された。
後５日目まで連日５０ｕ／０．０５ｍｌを静注した。対
照群では８日目までに８０％のマウスが死亡したのに対
し、ＩＬ−２投与群では１５日目においても尚１００％
のマウスが生存し、ＩＬ−２により顕著なウイルス感染
の治療効果が観察された。
【０１２７】実施例１８：レンチナンとの併用による同
系癌退縮効果
系癌退縮効果
【０１２８】Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスに同系腫瘍ＭＭ１０
２ ３×１０6 ／０．１ｍｌを皮下移植しレンチナンを
腫瘍移植日、７日目、１４日目に投与（１ｍｇ／ｋｇ、
静注）すると共にレンチナン投与後２日目に１０ｕ／
０．１ｍｌのＩＬ−２を腹腔内投与し、腫瘍移植後３５
日目に腫瘍のサイズより腫瘍増殖阻止率を測定すると共
に移植後７０日目のマウスの生存数を算出した。
２ ３×１０6 ／０．１ｍｌを皮下移植しレンチナンを
腫瘍移植日、７日目、１４日目に投与（１ｍｇ／ｋｇ、
静注）すると共にレンチナン投与後２日目に１０ｕ／
０．１ｍｌのＩＬ−２を腹腔内投与し、腫瘍移植後３５
日目に腫瘍のサイズより腫瘍増殖阻止率を測定すると共
に移植後７０日目のマウスの生存数を算出した。
【０１２９】表１２に示す通り、レンチナンとＩＬ−２
の併用による抗腫瘍効果の増進が観察された。
の併用による抗腫瘍効果の増進が観察された。
【０１３０】
【表１２】
【図１】ＩＬ−２のｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴリンパ
球の増殖促進効果
球の増殖促進効果
【図２】ＩＬ−２のｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるキラーＴ
リンパ球の記憶細胞よりのキラーＴリンパ球の誘導促進
効果
リンパ球の記憶細胞よりのキラーＴリンパ球の誘導促進
効果
【図３】ＩＬ−２によるナチュラルキラー細胞活性の増
強（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）
強（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）
【図４】癌特異的遅延型過敏症反応のＩＬ−２による増
強効果
強効果
【図５】ＩＬ−２の羊赤血球に対する遅延型過敏反応の
修復効果
修復効果
【図６】手術後の転移腫瘍に対するＩＬ−２の治療効果
に関する実験結果
に関する実験結果
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/00 Ｇ 9284−4Ｃ // Ａ６１Ｋ 35/12 ＡＤＺ 7431−4Ｃ 35/14 ＡＤＹ 7431−4Ｃ 35/28 ＡＤＵ 7431−4Ｃ 35/84 8217−4Ｃ
Claims (9)
- 【請求項１】 ヒト細胞由来のヒトインターロイキン２
を含有してなる免疫疾患治療予防剤。 - 【請求項２】 ヒト細胞がヒトリンパ球、同クローン化
細胞、ヒト悪性化細胞またはハイブリドーマである請求
項１記載の薬剤。 - 【請求項３】 ヒトインターロイキン２の比活性が２×
１０5 ｕｎｉｔ／ｍｇ蛋白であり、他のヒトリンホカイ
ン、モノカイン活性を含有しないものである請求項１記
載の薬剤。 - 【請求項４】 免疫疾患が癌、細菌感染、ウイルス性疾
患、免疫不全症または自己免疫疾患であるところの請求
項１記載の薬剤。 - 【請求項５】 ヒトインターロイキン２を含有してなる
薬剤がヒトインターロイキン２と他の化学療法剤もしく
は／および他の免疫療法剤を含有してなる薬剤もしくは
ヒトインターロイキン２を含有する第１剤と化学療法剤
もしくは／および他の免疫療法剤を含有する第２剤より
なる薬剤キットとして構成される請求項１記載の薬剤。 - 【請求項６】 他の免疫療法剤がインターフェロンもし
くは免疫活性多糖である請求項５記載の薬剤。 - 【請求項７】 免疫活性多糖がレンチナンである請求項
６記載の薬剤。 - 【請求項８】 ヒトインターロイキン２を含有してなる
薬剤がヒトインターロイキン２と免疫原としての抗原を
含有してなる薬剤もしくはヒトインターロイキン２を含
有する第１剤と抗原を含有する第２剤よりなる薬剤キッ
トとして構成される請求項１記載の薬剤。 - 【請求項９】 免疫原としての抗原が腫瘍抗原、細菌抗
原またはウイルス抗原であるところの請求項８記載の薬
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6058960A JPH072690A (ja) | 1994-03-29 | 1994-03-29 | インターロイキン２を含有してなる免疫療法剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6058960A JPH072690A (ja) | 1994-03-29 | 1994-03-29 | インターロイキン２を含有してなる免疫療法剤 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57040369A Division JPH0751511B2 (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | インターロイキン２を含有してなる癌治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH072690A true JPH072690A (ja) | 1995-01-06 |
Family
ID=13099415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6058960A Pending JPH072690A (ja) | 1994-03-29 | 1994-03-29 | インターロイキン２を含有してなる免疫療法剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH072690A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003246743A (ja) * | 2002-02-22 | 2003-09-02 | Taiyo Kagaku Co Ltd | 免疫調節組成物 |
| JP2005320309A (ja) * | 2004-05-02 | 2005-11-17 | Hokkaido Technology Licence Office Co Ltd | 癌抗原非特異的な標的化ｔ細胞の製造方法及び医薬 |
| JP2010265327A (ja) * | 2010-08-25 | 2010-11-25 | Hokkaido Univ | 癌抗原非特異的な標的化ｔ細胞の製造方法及び医薬 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5829714A (ja) * | 1980-10-02 | 1983-02-22 | フ−パ−・トレ−テイング・カンパニ−・エヌ・ベ− | 血清不含およびミトゲン不含ｔ細胞生長因子およびその製造法 |
-
1994
- 1994-03-29 JP JP6058960A patent/JPH072690A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5829714A (ja) * | 1980-10-02 | 1983-02-22 | フ−パ−・トレ−テイング・カンパニ−・エヌ・ベ− | 血清不含およびミトゲン不含ｔ細胞生長因子およびその製造法 |
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| JP2010265327A (ja) * | 2010-08-25 | 2010-11-25 | Hokkaido Univ | 癌抗原非特異的な標的化ｔ細胞の製造方法及び医薬 |
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