JPS63123390A - Ｌ−フエニルアラニンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はＬ−フェニルアラニンの製造方法に関し、詳し
くは特定の微生物を利用してフェニルピルビン酸からＬ
−フェニルアラニンを製造する方法に関する。

［従来の技術１発明が解決しようとする問題点］微生物
を利用してフェニルピルビン酸からＬ−フェニルアラニ
ンを製造する方法としては、エネルギー源、無機アンモ
ニウム化合物または尿素および酸素の存在下にフェニル
ピルビン酸に特定ノ微生物を作用させる方法（特開昭８
０−１８０８９０号公報）、フマール酸、アンモニウム
イオンまたは尿素の存在下にフェニルピルビン酸に特定
の微生物を作用させる方法（特開昭１１ｉ１−１５１１
ｆ９７号公報）、アミン供与体の存在下フェニルピルビ
ン酸にトランスアミナーゼ活性を有する固定化細胞を作
用させる方法（特開昭８０−１０２１９４号公報）など
が知られている。

しかしながら、これらの方法は安定的にＬ−フェニルア
ラニンを製造することが困難である等の問題点がある。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者らは、Ｌ−フェニルアラニンの効率的な製造法
を確立すべく、使用する微生物について検討したところ
、前記刊行物に記載された微生物以外の特定微生物を用
いることによって、フェニルピルビン酸を原料としてＬ
−フェニルアラニンを効率よく製造できることを見出し
、かかる知見に基いて本発明を完成したのである。

すなわち本発明はアースロバクター（Ａｒｔｈｒｏ−ｈ
ａｃｔｅｒ）属、ロドトルラ　（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌ
ａ）属およびロドスボリディウム（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒ
ｉｄｉｕｍ）属の中から選ばれた１種または２種以上の
微生物を、アミノ基供与物質の存在下フェニルピルビン
酸に接触させることを特徴とするＬ−フェニルアラニン
の製造方法に関する。

本発明に使用できる微生物は、上記属に属するものであ
って、アミノ基供与物質の存在下フェニルピルビン酸を
Ｌ−フェニルアラニンに変換する能力を有する微生物で
あり、具体的にはアースロバクター・シンプレックス　
（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｉｍｐｌｅｘ）　ＡＴＣ
Ｃ６９４Ｂ、ロドスボリデイウム・トルロイデス（Ｒｈ
ｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ　ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ）　
ＡＴＣ０１０７８８、ロドトルラ・グルチニス　（Ｒｈ
ｏｄｏｔｏｌｕｒａｇｌｕｔｉｎｉｓ）　ＩＦｏ　３８
９などを挙げるコトができる。

微生物は様々な形態で使用することができ、たとえば増
殖期の菌体、休止期の菌体、固定化された菌体などのい
ずれであってもよく、さらには微生物菌体から抽出処理
して得た酵素系を含む抽出処理物であう七もよい、ここ
で、微生物菌体の固定化は、担体結合法、架橋法、包括
法などの常法の固定化技術を適用して行なうことができ
る。また、抽出処理としては、微生物菌体の懸濁液を超
音波、フレンチプレス、高圧ホモジナイザーなどにより
破砕したのち遠心分離等によって可溶性抽出物を得る方
法などを採用することができる。

フェニルピルビン酸に上記微生物を接触させてＬ−フェ
ニルアラニンを製造する場合、アミノ基供与物質の存在
が必要である。アミン基供与物質としては種々の化合物
を使用できるが、安価かつ容易に入手できる無機アンモ
ニウム化合物、たとえばアンモニアガス、アンモニア水
、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム。

炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどや酢酸アン
モニウム等の有機アンモニウム化合物、グルタミン酸、
アスパラギン酸、ロイシン等のアミノ酸類や尿素などが
好適である。

上記微生物を培養してＬ−フェニルアラニンを得るため
の培地としては、炭素源、窒素源などのエネルギー源と
なる物質を含む培地を用いることが望ましい、炭素源と
してはグルコース、シュークロース等の糖類やエタノー
ル、プロパツール。

エチレングリコール等のアルコール類、ホルムアルデヒ
ド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド等のアル
デヒド類、ギ酸、酢酸、プロピオン酸等のカルボン酸類
などが好適に使用できる。また、窒素源としては前記ア
ミノ基供与物質のほか肉エキス、ペプトンなどが用いら
れる。さらに、必要に応じてリン酸カリウム塩、硫酸鉄
塩、硫酸マンガン塩などの無機塩類や微生物の生育に必
要な栄養物質を培地に適宜加えることができる。

フェニルピルビン酸は培地に最初から加えてもよく、培
養を開始してから適当な時期に添加してもよい、また、
その添加は一度に行なってもよく、あるいは数回に分割
し上行なってもよｌ／）。

上記微生物とフェニルピルビン酸との反応は好気的条件
下および鵡気的条件下のいずれで行なってもよく、使用
する微生物の性質を考慮して適宜決定すればよい、たと
えば増殖期の菌体を培養しながら反応させる場合、１０
〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃の温度、ｐＨ３〜１
０、好ましくは６〜９の範囲にて１〜４日間培養するこ
とによりフェニルピルビン酸からＬ−フェニルアラニン
を製造することができる。また、休止菌体を用いて反応
させる場合、５〜５０℃、好ましくは２５〜４０°Ｃの
温度、ｐＨ３〜１０、好ましくは６〜９の範囲で適当な
時間反応させればよい。

さらに、上記培養法と休止菌体を組合せたり、他の固定
化菌体、菌体抽出処理物を単独で、もしくは上記培養法
などと適宜組合せて行なうことも可能である。

反応終了後、培養液などからＬ−フェニルアラニンを回
収するには、イオン交換樹脂や活性炭などを用いる常法
により行なえばよく、回収後、必要に応じて精製処理を
行なう。

［実施例］ 次に、本発明を実施例により詳しく説明する。

実施例１ ペプトン・肉エキス寒天斜面培地上で３０℃、２４時間
培養した所定の微生物の１白金耳を、表１に示す組成の
培Ｊｌｌ！！１００履ｐを分注し、１２０℃で１５分間
加圧滅菌した５００ｍ１＋容坂ロフラスコに各々接種し
、３０℃にて２４時間振盪培養を行なった。

表　　１ 肉エキス　　　　５ｇ ペプトン　　　　１５ｇ ＮａＣ１）　　　　　　　５　ｇ Ｋ２ＨＰＯ４５ｇ ＳＩＮ−Ｈ（ｉ！、　ＮａＯＨにてｐＨ７に調整後、蒸
留水でＩ！！にする。

培養終了後、培養液を５℃にて１１，０ＯＯＸ　ｇ　。

１０分間遠心分離して得た菌体を０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７）で３回洗浄後、表２に示す組成の反応液５ｍ
Ａ＋に菌体濃度が１５ｇ／ｉ’になるように懸濁した。

好気下または榎気下（窒素雰囲気下）で３０°Ｃ９２４
時間反応を行なった。

反応終了後、除菌液を高速液体クロマトグラフによりＬ
−フェニルアラニンを定量した。結果を表５に示す、な
お、フェニルピルビン酸無添加の場合は、いずれもＬ−
フェニルアラニンは検出されなかった。

表　　２ グルコース　　　　　　　　２０ｇ ＮＨａＣＩ！’　　　　　　　　　　１０ｇフェニルピ
ルビン酸　　　１０ｇ ｔ　Ｏ，１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）にてＩＩ２にする
。

実施例２〜８ 表２におけるグルコースの代りに表３に示すエネルギー
源を煉用したこと以外は実施例１と同様に反応を行なっ
た。蓄積したＬ−フェニルアラニンは表５に示す通りで
あった。なお、フェニルピルビン酸無添加の場合は、い
ずれもＬ−フェニルアラニンは検出されなかった。

表　　３ 実施例　　　　エネルギー源 ２　　　　エタノール ３　　　　プロパツール ４　　　　プロピレングリコール ５　　　　酢酸ナトリウム ６　　　　乳酸ナトリウム ７２−ブテン−１，４−ジオール ８　　　　コハク准ナトリウム 実施例９ 表２に示した反応液の組成を表４に示す組成のものに変
えたこと以外は実施例１と同様に反応を行なった。蓄積
したＬ−フェニルアラニンの量は表５に示す通りであっ
た。なお、フェニルピルビン酸無添加の場合は、いずれ
もＬ−フェニルアラ表　　４ ０イシン　　　　　　　２０ｇ フェニルピルビン酸　　１０ｇ 中０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）にてｉｆｆにする。

実施例１Ｏ 表４におけるロイシンをアスパラギン酸に変えたこと以
外は実施例９と同様に反応を行なった。

結果を表５に示す、なお、フェニルピルビン酸無添加の
場合は、いずれもＬ−フェニルアラニンは検出されなか
った。

実施例１１ 実施例１と同様にして３０℃にて２４時間振盪培養した
５００１１Ｉ！容坂ロフラスコ１本にプロピレングリコ
ール１．８　ｇ　、フェニルピルビン酸ｏ、ａ　ｇ　。

ＮＨａＣρ　０．８ｇを無菌的に添加し、さらに３０℃
で２４時間培養した。培養終了後、培養液を５℃。

１１．０ＯＯＸ　ｇにて１０分間遠心分離して得た上清
液について実施例１と同様にして定量分析を行なった。

結果を表６に示す、なお、フェニルピルビン酸を添加し
なかった区分ではＬ−フェニルアラニンは検出されなか
った。

表　　６ ［発明の効果］ 本発明によれば、ジペプチド甘味料であるアスパルチル
フェニルアラニンメチルエステルなどの原料として食品
工業、医薬品工業等の分野において有用なＬ−フェニル
アラニンを特定の微生物を用いて効率よく製造すること
ができる。

特詐出願人　出光興産株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）
   属、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属およびロ
   ドスポリディウム（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）属
   の中から選ばれた１種または２種以上の微生物を、アミ
   ノ基供与物質の存在下フェニルピルビン酸に接触させる
   ことを特徴とするＬ−フェニルアラニンの製造方法。
2. （２）微生物が増殖期の菌体、休止期の菌体、固定化菌
   体および菌体抽出処理物のうちのいずれかである特許請
   求の範囲第１項記載の方法。