JPS63126491A - Ｌ−フエニルアラニンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はＬ−フェニルアラニンの製造方法に関し、詳し
くは特定の微生物を利用してフェニルピルビン酸からＬ
−２エニルアラニンを製造する方法に関する。

［従来の技術９発明が解決しようとする問題点］微生物
を利用してフェニルピルビン酸がらＬ−フェニルアラニ
ンを製造する方法としては、エネルギー源、無機アンモ
ニウム化合物または尿素および酸素の存在下にフェニル
ピルビン酸に特定の微生物を作用させる方法（特開昭８
０−１８０８９０号公報）、フマール酸、アンモニウム
イオンまたは尿素の存在下にフェニルピルビン酸に特定
の微生物を作用させる方法（特開昭８１−１５８９７号
公報）、アミノ供与体の存在下フェニルピルビン酸にト
ランスアミナーゼ活性を有する固定化細胞を作用させる
方法（特開昭８０ｉ０２１９４号公報）などが知られて
いる。

しかしながら、これらの方法は安定的にＬ−フェニルア
ラニンを製造することが困難である等の問題点がある。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者らは、Ｌ−フェニルアラニンの効率的な製造法
を確立すべく、使用する微生物について検討したところ
、特定微生物を用いることによって、フェニルピルビン
酸を原料としてＬ−フェニルアラニンを効率よく製造で
きることを見出し、かかる知見に基いて本発明を完成し
たのである。

すなわち本発明はプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属およ
びパラコツカス（ＰａｒａｃｏｃｃｕＳ）属の中から選
ばれた１種または２種以上の微生物を、アミノ基供与物
質の存在下フェニルピルビン酸に接触させることを特徴
とするＬ−フェニルアラニンの製造方法を提供するもの
である。

本発明に使用できる微生物は、上記属に属するものであ
って、アミノ基供与物質の存在下フェニルピルビン酸を
Ｌ−フェニルアラニンに変換する箋力を宥する微生物で
あり、具体的にはプロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ　ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ）　ＩＦｏ　３８４９゜パラ
コツカス・デニトリフィカンス　（Ｐａｒａｃｏｃｃｕ
ｓｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）　ＡＴＣＣｔ９３Ｂ７
などがあり、これらを単独で、もしくは組合せて用いる
ことができる。

微生物は様々な形態で使用することができ、たとえば増
殖期の菌体、休止期の菌体、固定化された菌体などのい
ずれであってもよく、さらには微生物菌体から抽出処理
して得た酵素系を含む抽出処理物であってもよい。ここ
で、微生物菌体の固定化は、担体結合法、架橋法、包括
法などの常法の固定化技術を適用して行なうことができ
る。また、抽出処理としては、微生物菌体の懸濁液を超
音波、フレンチプレス、高圧ホモジナイザーなどにより
破砕したのち遠心分離等によって可溶性抽出物を得る方
法などを採用することができる。

フェニルピルビン酸に上記微生物を接触させてＬ−フェ
ニルアラニンを製造する場合、アミノ基供与物質の存在
が必要である。アミノ基供与物質としては種々の化合物
を使用できるが、安価かつ容易に入手できる無機アンモ
ニウム化合物、たとえばアンモニアガス、アンモニア水
、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム。

炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどや酢酸アン
モニウム等の有機アンモニウム化合物や尿素などが好適
である。

上記微生物を培養してＬ−フェニルアラニンを得るため
の培地としては、炭素源、窒素源などのエネルギー源と
なる物質を含む培地を用いることが望ましい、炭素源と
してはグルコース、シュークロース等の糖類やエタノー
ル、プロパツール。

エチレングリコール等のアルコール類、ホルムアルデヒ
ド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド等のアル
デヒド類、ギ酸、酢酸、プロピオン酸等のカルボン酸類
などが好適に使用できる。また、窒素源としては前記ア
ミノ基供与物質のほか肉エキス、ペプトンなどが用いら
れる。さらに、必要に応じてリン醜カリウム塩、硫酸鉄
塩、硫醜マンガン塩などの無機塩類や微生物の生育に必
要な栄養物質を培地に適宜加えることができる。

フェニルピルビン酸は培地に最初から加えてもよく、培
養を開始してから適当な時期に添加してもよい。また、
その添加は一度に行なってもよく、あるいは数回に分割
して行なってもよい。

上記微生物とフェニルピルビン酸との反応は好気的条件
下および様気的条件下のいずれで行なってもよく、使用
する微生物の性質を考慮して適宜決定すればよい、たと
えば増殖期の菌体を培養しながら反応させる場合、１０
〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃の温度、ｐＨ３〜ｌ
Ｏ１好ましくは６〜９の範囲にて１〜４日間培養するこ
とによりフェニルピルビン酸からＬ−フェニルアラニン
を製造することができる。また、休止菌体を用いて反応
させる場合、５〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃の温
度、ｐＨ３〜ｌＯ１好ましくは６〜９の範囲で適当な時
間反応させればよい。

さらに、上記培養法と休止菌体法を組合せたり、他の固
定化菌体、菌体抽出処理物を単独で、もしくは上記培養
法などと適宜組合せて行なうことも可能である。

反応終了後、培養液などからＬ−フェニルアラニンを回
収、精製するには、固液分離、イオン交換樹脂、活性炭
などを用いる常法により行なえばよい。

［実施例コ 次に、本発明を実施例により詳しく説明する。

実施例１ ペプトン・肉エキス寒天斜面培地上で３０℃。

２４時間培養したプロテウス属またはバラコツカス属の
微生物の１白金耳を、表１に示す組成の培地１００＋ａ
ｉ’を分注し、１２０℃で１５分間加圧滅菌した５００
ｍｊ）容坂ロフラスコに各々接種し、３０℃で２４時間
振盪培養を行なった。培養終了後、培養液を５℃、　１
１，０ＯＯＸ　ｇで１０分間遠心分離して得た菌体を０
．１　Ｍリン酸緩衝液ｐ）！７で３回洗浄後、表２に示
す組成の反応液５ｍｊ）に菌体濃度が１５ｇ／ｉ）にな
るように懸濁した。好気的または１気的（窒素雰囲気下
）条件で、３０℃、２４時間反応を行なった。

反応後、除菌液を高速液体クロマトグラフによりＬ−フ
ェニルアラニンを定量した結果を表４に示す。なお、フ
ェニルピルビン酸無添加の場合、いずれもＬ−フェニル
アラニンは検出されなかった。

表　　１　　　　　　　　　　　　　　　　　表　　２
肉エキス　５ｇ　　　　　グルコース　　２０ｇペプト
ン　１５ｇ　　　　　　ＮＨａＣ４’　　　　　１０ｇ
ＩＮ−ＨＣｊ）またはｌＮ−Ｎａ０）１　　　０．１　
Ｍリン酸緩衝液を用いてｐ）１７に調整後、　　（ｐＨ
７）を用いてＩＪ２蒸留水で１ρにする。　　　　にす
る。

実施例２〜９ 表２のグルコースを表３に示すエネルギー源に変えたこ
と以外は実施例１と同様に反応を行なった。蓄積したＬ
−フェニルアラニンの量は表４に示す通りであった。な
お、フェニルピルビン酸無添加の場合、いずれもＬ−フ
ェニルアラニンは検出されなかった。

表　　３ 実施例１０ 実施例１と同様にして所定の微生物を３０℃、２４時間
培養した５０ｈｉ）容坂ロフラスコ１本にプロパツール
１．８ｇ　、フェニルピルビン酸０．８　ｇおよびＮＨ
４Ｃ１）　　０．８ｇを無菌的に添加し、さらに３０℃
で２４時間培養した。培養液を５℃、　！１，０ＯＯＸ
　ｇにて１０分間遠心分離して得た上清液について実施
例１と同様にして定量分析を行なった。結果を表５に示
す、なお、フェニルピルビン酸を添加しなかった区分で
はＬ−フェニルアラニンは検出されなかった。

表　　５ 実施例１１ 表２のグルコース２０ｇをプロピレングリコール２０ｇ
に、ＮＨａＣ１’　　１０　ｇを尿素８ｇに変えたこと
以外は実施例１と同様に反応を行なった。蓄積したＬ−
フェニルアラニンの量は表６に示す通りであった。なお
、フェニルピルビン酸無添加の場合は、いずれもＬ−フ
ェニルアラニンは検出されなかった。

表　　　６ 菌　　　　　株　　　　　　　　ノ　産量　（Ｉ１ｇ／
ｍＲ）プロテウス・ミラビリス ＩＦｏ　３８４９　　　　　　　　’・８［発明の効果
］ 本発明によれば、ジペプチド甘味料であるアスパルチル
フェニルアラニンメチルエステルなどの原料として食品
工業、医薬品工業等の分野において有用なＬ−フェニル
アラニンを特定の微生物を用いて効率よく製造すること
ができる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属およびパラコッ
   カス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属の中から選ばれた１種
   または２種以上の微生物を、アミノ基供与物質の存在下
   フェニルピルビン酸に接触させることを特徴とするＬ−
   フェニルアラニンの製造方法。
2. （２）アミノ基供与物質が無機アンモニウム化合物、有
   機アンモニウム化合物または尿素である特許請求の範囲
   第１項記載の方法。
3. （３）微生物が増殖期の菌体、休止期の菌体、固定化菌
   体および菌体抽出処理物のうちのいずれかである特許請
   求の範囲第１項記載の方法。