JPS6287520A - 抗腫瘍性物質ｓｐｆ−１００−ｆ１及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉ
及びその製法に関するものである。

従来、溶連菌の生菌体を弱毒化して製剤化したものは、
すでに制癌剤として使用されている。

また、ストレプトコッカス・ピオゲネスの菌体を破砕復
水または塩類溶液で有効成分を抽出し。

有機溶媒を加えて、抗腫瘍性成分を沈澱として。

回収する方法（特公昭３８−１６４７）、溶連菌を溶菌
酵素、リゾチーム、セルラーゼまたは蛋白質分解酵素に
より、溶菌し、活性画分を水溶性区分として分画する方
法（英国特許第１１６３８６５号）などが知られている
。

このように、ストレプトコッカス属細菌そのものもしく
はその菌体成分に抗腫瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
可溶性もしくは不溶性高分子細胞構成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したりし
て全体を分画しなければならなかった。このような処理
によれば、精製は複雑となり、有効成分の単離はきわめ
て困難であった。実際に分離し、有効成分として測定さ
れた例では分子量２００，０００の蛋白質（特公昭４８
−４３８４１、特開昭５１−４４６１７）及び分子量ｉ
ｓｏ、ｏｏｏの糖蛋白質（特開昭５８−２２０２６）が
知られている程度である。

本発明者らは、先に溶連菌の培養濾液中に抗腫瘍性成分
を溶出させる方法を求めて研究したところ、培養中に、
ペニシリン又は、その関連物質を添加することによって
抗腫瘍性成分が培養液中に溶出することを見出しく特開
昭６０−９２２１８号）培養液中から生理活性物質ＳＰ
Ｆ　−１を分離するに至ったのである。（特開昭６０−
３０６８９）本発明者らは、よりすぐれた抗腫瘍性有効
成分を溶連菌に求めて鋭意研究した結果、全く新規な抗
腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉを培養中から分画し
た。

本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉは培養生
菌体外に排出され、培養液中に存在するようになるので
、菌体を濾過して除去し、培養濾液を精製すればよいの
で、単離はかなり容易なものとなる。

本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉは培養液
中に排出されるとともに、分子量が９，０００〜１１　
、０００であることによって特徴づけられる。

従来、溶連菌関連の抗腫瘍性物質で、培養液中に蓄積さ
れたものはなく、また分子量も数万以下のものは知られ
ておらず、本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　
Ｉは全く新規な物質と認められる。

また、本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆｒは、
元素分析、呈色反応等からペプチド性物質と認められる
が、紫外線吸収スペクトルで特異な吸収があり、従来広
く知られた抗腫瘍活性物質などとも明らかに相違する物
質であって、物質として新規なものと認められるもので
ある。

本発明は、ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性物質
ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉ生産菌を培養し、培養物から抗
腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　ｌを採取することを特
徴とする抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１ｏｏ　−Ｆ　Ｉの製法
を包含するものである。

本発明においては、ストレプトコッカス属に属する抗腫
瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉ生産菌が広く使用され
るが、その−例としてストレプトコッカス・ピオゲネス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）　
ＡＴＣＣ２１０６０、ストレプトコッカス・エスピー（
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐ、）　ＡＴＣＣ２１
５９７、ストレプトコッカス０ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ２１５
４６、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）　ＡＴＣＣ２１５
４７、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ）　ＡＴＣＣ２１５４
８があげられる。

培養液は、肉エキス培地、酷母エキス培地、プレイン・
ハート・インフュージョン培地（ＢＨＩ培地）等の天然
培地がよく用いられるが、ストレプトコッカス属細菌が
有効に生育する培地であれば炭素源、窒素源等含んだ一
般培地も使用することができる。

培養はｐＨ５，０〜８．０、好ましくは６．１〜７．２
で３０〜４０℃好ましくは３５〜３７℃であり嫌気的に
静置培養をおこなうのが一般的であるが、その他攪拌培
養等の変法も採用することができる。

本発明においては、培養中の適当な時期にペニシリン又
はその関連物質を添加することが、抗腫瘍性物質ＳＰＦ
−１００−Ｆ　ｌの取得に重要な役割をはだすことにな
る。

ペニシリン又はその関連物質の添加時期は３７℃の培養
で対数増殖期にかかって後３〜２０時間の間。

特に５〜１０時間の間が好ましい。その後１時間乃至２
０時間好ましくは３〜１５時間そのまま培養を続けるこ
とによって、培養液中に抗腫瘍性物質ＳＰＦ−ｉｏｏ　
−Ｆ　Ｉを多ｆ蓄積させることができる。

ペニシリン又はその関連物質としてはすでに知られたペ
ニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいかなる
ものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いられる。添加
量はペニシリンＧで１００〜３０００単位／　ｍ　Ｑ、
好ましくは３００〜１５００単位／　ｍ　Ｑ培養液程度
で十分である。

得られた培養液は、遠心分離によって菌体を除去し、濾
液に硫安を添加し５０〜９０％飽和度の両分を分取して
得られた沈澱物を緩衝液に溶解する。

抗ｊＩＩ瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉ含有液は凍結
状態で又は凍結乾燥して保存することができる。この物
質は必要に応じてイオン交換体あるいはゲル濾過剤と接
触せしめてさらに精製することができる。

イオン交換体としてはイオン交換樹脂、イオン交換セル
ロース、イオン交換セファデックス（ファルマシア社製
）、ハイドロキシアパタイト等が用いられ、ゲル濾過剤
としては、トヨパール）（Ｗ５０Ｆ（東洋曹達（株）製
）、セファデックス（ファルマシア社製）等が用いられ
る。本精製過程において、上記担体を用いる回分法、又
は担体をカラムに充てん後流通法により精製される。抗
腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉは、上記精製法によ
り得られた標品をＧ３０００ＳＷカラム（東洋曹達（株
）製）を用いた高速液体クロマトグラフィーを行うこと
により得られる。

実施例１で得られた本発明の抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１０
０−Ｆ　Ｉはペプチド性物質で、凍結乾燥すると淡黄色
の粉末となる。

次に、抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉの理化学的
性質を示す。

１、元素分析　Ｃ４５，２２−４５，４６Ｈ６，１５−
６，２２ Ｎ　　　　１１．２３−１１．４８ ０　　　３６．２６−３４．４８ Ａｓｈ　　　１．１４−２．３６ ２、　分子量 ゲル濾過法による測定では、分子Ｂ９ｏｏｏ〜１１００
０である。

３、分解点 本物質は１６０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
り分解する。

４、比旋光度 〔α〕ら’＝−８０〜−８４　（Ｃ＝１．００）５、紫
外線吸収スペクトル 本物質の０．１％の水溶液の紫外線吸収スペクトルは第
１図に示される。　３２０ｎｍ、　２８０ｎｍに吸収を
有しており特徴的である。

６、赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。

７、溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタノール。

ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｎ−プロパノ−ル、
ｎ−ヘキサン、クロロホルム、アセトン。

メチルイソブチルケトン、エチルエーテル等の溶剤には
Ｎ溶又は不溶である。

８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質の０．１％水溶液のｐＨは６．９５である。

９、物質の色 淡黄色粉末状である。

１０、呈色反応 ニンヒドリン反応　　　　　　十 ビュウレット反応　　　　　　士 モーリッシュ反応　　　　　　士 オルシン塩酸反応　　　　　　− アンスロン反応　　　　　　　＋ システイン硫酸反応　　　　　士 モーリッシュ反応、オルシン塩酸反応、アンスロン反応
、システィン硫酸反応の各呈色反応は、０．１％水溶液
を用いて行った。

１１、安定化 本物質はＬ−システイン、ジチオスレイトール（ＤＤＴ
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、α−およ
びβ　サイクロアキス１−リン、　（ＮＨ４）、ＳＯい
食塩等の添加によって安定化される。

次に本発明の実施例を示す。

なお実施例における抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　
１の活性１１を位の測定は鵜高法（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ｖｏｌ　３５　（１０）、
１３１２−１３１８　（１９８２）；、Ｉｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ｖｏｌ　３５　Ｎ＋
ｘ１０１３＋９−１３２５ＯＣＴ　１９８２）によった
。測定には−ｒｒ＋分子透過性大腸菌変異株ＵＲ〜；３
を使用し、てＯＲ−３に対する抗菌活性を指標としてバ
イオ・アッセイする。

すなわち、バクト・アンチバイオチックメディアム３（
ディフコ社製）　１．７５％、寒天１．３％より成る培
地（Ｍ、−培地）を１２０℃、１５分加熱殺菌し、２０
ｍ　Ｑずつシャーレに分注し、放冷してプレート培地を
調整する。

一方、ペプトン０．５％、肉エキス０．５％、ＮａＣＱ
ｏ、３％、寒天０．８％より成る培地を１２０℃、１５
分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培地の
温度が４２℃になったらあらかじめ３７℃で１７時間培
養した０Ｒ−３菌を１＋ｎＱ中に１０４個の細胞が存在
する様に培地中に加える。ピペットによって２＋ｎＱを
採取し、あらかじめ作製して置いたＭ３培地表面上に加
え、すばやく均一にひろげ固化させる。抗腫瘍性物質Ｓ
ＰＦ−１００−Ｆ　Ｉを含む被験液を適当に希釈して、
その溶液０．０５ｍＱをペーパー・ディスク（直径８　
ｍｍ）　（東洋濾紙）にしみ込ませる。このペーパー・
ディスクを前記作製プレート上に置き、３７℃で１７時
間培養し、抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉによっ
てできる阻止用の大きさを測定する。阻止用の直径１０
ｍｍを与える抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉの濃
度を１単位（ＩＵ）と定義する。

抗腫瘍活性の測定方法 抗腫瘍活性の測定は、培養細胞Ｌ　１２１０の生育阻止
率（ＩＲ％）の測定により行った。

１．１２１０細胞を１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ　１６４
０培地（５ｍｇ／Ｑカナマイシン含有）に懸濁した。こ
の培養液０．５１１ＩＱをファルコン２０５８チューブ
に注加し、細胞数がｌＸｌ０５ｃｅｌｌｓ／１ｕｂｅに
なるようにした。

次いでこの培養液に所定量の標品（抗腫瘍性物質ＳＰＦ
　−１００−Ｆ　Ｉ　）を目的濃度になるように培養液
に溶解した０、５ｍ１１１を注加して５３７℃で５％Ｃ
Ｏ７存在下に培養した。標品を添加して４８時間後にト
リパンブルーによる染色をおこない、次式によりｉＲ（
％）を算出した。

ここで（Ａ）とは対照群の生細胞数を示す。

対照は標品を含まない培養液０．５１１１２を用い同時
に行った。

実施例１ 第１表　培地Ａ マルトース　　　　　　　　０．２５％肉エキス　　　
　　　　　１１０％ ポリペプトン　　　　　　ｉ、ｏ％ 酵母エキス　　　　　　　　０．２５％リン酸カリウム
　　　　　　０．１　％硫酸マグネシウム　　　　　０
．０５％塩化ナトリウム　　　　　０．１％ ｐＨ６，７ ス１−レブトコッカス・ピオゲネス （Ｓｔｒｅｐｔｏｃ、ｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）
　ＡＴＣＣ２１０６０をＢＨＩ培地１００ｍ　Ｄ、に接
種して３７℃８時間静置培養をおこなった種培養液１０
０ｍ　Ｑを培地Ａ　１．　Ｑに接種し種培養と同じ条件
で前培養する。

この前培養液を培地Ａ８Ｑに接種１５９．１０Ｑのジャ
ーファーメンタ−を用いて、３７℃１４．５時間３００
ｒｐｍで嫌気的に培養後、ペニシリンＧ　１０００ＱＬ
位／＋ＩＩＱまで添加し、更に５時間培養を継続する。

得られた培養液を遠心分薄し菌体を除去する。

培養液に硫安を添加しで、５０〜９０％飽和度の両分を
分取して抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉを富む沈
殿物を得る。この沈殿物全量を安定止剤含有緩衝液３０
０ｏ＋　Ｑに溶解し、１〕Ｅ　Ａ　Ｅ−セルローズカラ
ム（５，ＯＸ　７０ｃｍ）に加えて吸着させる。これに
０．３Ｍ塩化す１−リウムを含む緩衝液で段階的に溶出
させ、ＵＲ−３活性部分を分取する。

更に、この溶出液を濃縮しゲル濾過剤トヨバール［１５
０Ｆカラム１２．６　Ｘ　１００ｃｍ）に吸着させ、緩
１街ｄ々で溶：Ｂ　Ｌ　ＩＪＲ−３活性部分を分取し濃
縮する。

この濃縮液をＴＳＫ　−ＧＥＬ　Ｇ　３０（１０實（東
洋曹達工業（株）０，７５　Ｘ　６０ｃＩ１１）カラノ
、を用いた高速液体り［１７トグラフイーを行った、こ
の溶出曲線は第：３図に示される。

ここでＡの両分をＳＰＦ−１００−１月とし、ｌ）の両
分をＳｒ’Ｆ−１００−Ｆ　ＨとしたａＡの両分を凍Ｍ
乾燥した。この凍結乾燥商品は抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１
００−Ｆ　Ｉであり、　４３ｒｓｇを得た。　ＳＰＦ−
４００・Ｆｌを被験薬とした抗腫瘍性活性は実験例１に
示すようにインビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）実験でその
効果を確認した。

実施例２ ス１−レブ１−コツカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６
０を第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培
養した。この場合、ペニシリンＧは３００単位／ｍＱ培
養液となるように添加し、更に培養を１０時間継続した
。、′″′、の培養濾液を実施例１と同様に精製して抗
腫瘍性成分ＳＰＦ−１００−Ｆ目８ｍｇを得た。

実施例３ スト１ノブ１−コツカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６
０を第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培
養した。この場合、ペニシリンＧは３０００単位／ｍＱ
培養液どなるように添加し、更に培養を３時間継続した
。この培養濾液を実施例Ｉ−と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦ　−１００−Ｆ　Ｘ　６１ｍｇを得た。

実施例４ ス１−レプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０
を第２表に示す培地Ｂを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは１０００噴位／ｍΩ培養
液となるように添加し、更に培養を５時間、継続した。

この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分
ＳＰＦ　−１００−Ｆ　Ｉ　３２ｍｇを得た。

第２表　培地■３ マルトース　　　　　　　　０．１％ 肉エキス　　　　　　　　０．５％ ポリペプトン　　　　　　１＋０％ 酵母エキス　　　　　　　０．２５％ 塩化ナトリウム　　　　　　０．１％ ｐｌ＋＝７．２ 実施例５ ス１−レプトコッカス・ピオゲネス＾ＴＣＣ２１０６０
を第３表に示す培地Ｃを用いて実施例１と同様に３５℃
で培養した。この場合、ペニシリンＧは１０００ｍ位／
１ＩＩＱ培養液となるように添加し、更に培養を５時間
継続した。この培養濾液を実施例Ｊと同様に精製して抗
腫瘍性成分ＳＰＦ−１００〜Ｆ　１１４ｍｇを得た。

第３表　培地Ｃ マルトース　　　　　　　　０．１　％肉エキス　　　
　　　　　０．５％ ボリペブ１１ン　　　　　　Ｑ　、　５％カザミノ酸　
　　　　　　０，３％ 酵母エキス　　　　　　　　０．５％ 酸性第一燐酸カリウム　　０．１’Ｘ。

硫酸マグネシウム　　　　０．０５％ ｐＨ＝６．５ 実施例６ ストレゾｌ−コツカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０
を第４表に示す培地りを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは１０００　、！、１’−
位／ｌ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継
続したにの培養濾液を実施例１−と同様に精製して抗腫
瘍性成分ＳＰＦ　−１００−Ｆ夏４９ｍｇを得た。

第４表　培養Ｄ マルトース　　　　　　　　０．２５％カザミノ酸　　
　　　　　　０．３％ 酵母エキス　　　　　　　　１．０％ 酸性第一燐酸カリウム　　０．１％ 硫酸マグネシウム　　　　０．０５％ ｐＨ＝６．９ 実施例７ ストレプトコッカス・エスピーＡＴＣＣ２１５９７ヲ第
１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養した
。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／社培養液と
なるように添加し、更に培養を５時間継続した。この培
養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性物質ＳＰＦ
　−１００−Ｆ　Ｉ　３９＋ｍｇを得た。

実施例８ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１５４６を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍ（ｌ培
養液となるように添加し、更に培養を５時間継続した。

この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分
ＳＰＦ　−１００−Ｆ　Ｉ　５１ｍｇを得た。

実施例９ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１５４７を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧはｘｏｏｏ、；Ｉｉ位／ｍ
Ｑ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦ　−１００−Ｆ　Ｉ　３８ｍｇを得た。

実施例１０ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１５４８を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍＱ培養
液となるように添加し、更に培養を５時間継続した。こ
の培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分Ｓ
ＰＦ　−１００−Ｆ　Ｉ　４７ｍｇを得た。

実施例１１ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、セファロスポリンＣは６０００μｇ／＋
ａΩ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続
した。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍
性成分ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉ　１３ｍｇを得た。

実験例１ 実施例１で得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦ−１００−Ｆ　
１のインビトロにおける抗腫瘍活性試験は１本文中に記
載した抗腫瘍活性の測定方法により行い、その結果を表
−５に示す。

表−５９ＰＦ　−１００−Ｆ　Ｉの抗腫瘍活性の結果Ｓ
ＰＦ−１００−Ｆｌ　（ｍｇ／ｍｕ）　　　　ＩＲ％０
．１２５　　　　　　１００．０ ０．０５　　　　　　　４５．２ ０．０２５　　　　　　　３６．６ ０．０１３　　　　　　　２４．２

【図面の簡単な説明】

第１図は抗ＰａｆＪＳ性物質ＳＰＦ−１００−Ｆ　Ｉ　
（７）紫外線吸収スペクトルを示し、第２図は同じく赤
外線吸収スペクトルを示す。第３図は実施例１における
活性画分のＴＳＫ−ＧＥＬ　Ｇ　３０００　ＳＷカラム
を用いた高速液体クロマトグラフィーにおける溶出曲線
を示図である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有する抗腫瘍性物質ＳＰＦ
   −１００−ＦＩ １、元素分析　Ｃ　　　４５．２２−４５．４６ 　　　　　　　Ｈ　　　　６．１５−　６．２２ 　　　　　　　Ｎ　　　１１．２３−１１．４８ 　　　　　　　Ｏ　　　３６．２６−３４．４８ 　　　　　　　Ａｓｈ　　１．１４−　２．３６ ２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約９０００〜１１０
   ００である。 ３、分解点 本物質は１６０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
   り分解する。 ４、比旋光度 〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝−８０〜−８４（Ｃ＝１．００）
   ５、紫外線吸収スペクトル 本物質の０．１％の水溶液の紫外線吸収スペクトルは第
   １図に示される。 ３２０ｎｍ、２８０ｎｍに吸収を有しており特徴的であ
   る。 ６、赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。 ７、溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタノール、ｎ−ブタ
   ノール、イソブタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ヘキ
   サン、クロロホルム、アセトン、メチルイソブチルケト
   ン、エチルエーテル等の溶剤には難溶又は不溶である。 ８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質の０．１％水溶液のｐＨは６．９５である。 ９、物質の色 淡黄色粉末状である。 １０、呈色反応 ニンヒドリン反応　＋ ビュウレット反応　＋ モーリッシュ反応　± オルシン塩酸反応　− アンスロン反応　　　＋ システイン硫酸反応　± １１、安定化 本物質はＬ−システイン、ジチオスレイトール（ＤＤＴ
   ）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、α−およ
   びβ−サイクロデキストリン、（ＮＨ＿４）＿２ＳＯ＿
   ４、食塩等の添加によって安定化される。
2. （２）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性物質ＳＰ
   Ｆ−１００−ＦＩ生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性
   物質ＳＰＦ−１００−ＦＩを採取することを特徴とする
   抗腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−ＦＩの製法。
3. （３）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性物質ＳＰ
   Ｆ−１００−ＦＩ生産菌を培養するに際し、培養中の適
   当な時期にペニシリン又はその関連物質を添加して培養
   することを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗
   腫瘍性物質ＳＰＦ−１００−ＦＩの製法。