JPS6233127A - 抗腫瘍性成分ｓｐｆ１０ｃａｐ１及びその製法 - Google Patents
抗腫瘍性成分ｓｐｆ１０ｃａｐ１及びその製法Info
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- JPS6233127A JPS6233127A JP60170574A JP17057485A JPS6233127A JP S6233127 A JPS6233127 A JP S6233127A JP 60170574 A JP60170574 A JP 60170574A JP 17057485 A JP17057485 A JP 17057485A JP S6233127 A JPS6233127 A JP S6233127A
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規な抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ及び
その製法に関するものである。
その製法に関するものである。
従来、溶血性連鎖状球菌（以下溶連菌という）の生菌体
を弱毒化して製剤化したものは、すてに制癌剤として使
用されている。
を弱毒化して製剤化したものは、すてに制癌剤として使
用されている。
また、溶連菌の菌体を破砕接水または塩類溶液で有効成
分を抽出し、有機溶媒を加えて、抗腫瘍性成分を沈澱と
して、回収する方法（特公昭３８−１６４７）、溶連菌
を溶菌酵素リゾチーム、セルラーゼまたは蛋白質分解酵
素により、溶菌し、活性画分を水溶性区分として分画す
る方法（英国特許１１６３８６５号）、溶連菌の菌体を
破砕抜水不溶性物質を採取し、核酸分解酵素および蛋白
分解酵素で処理する方法（特開昭５５−７０１４）など
が知られている。
分を抽出し、有機溶媒を加えて、抗腫瘍性成分を沈澱と
して、回収する方法（特公昭３８−１６４７）、溶連菌
を溶菌酵素リゾチーム、セルラーゼまたは蛋白質分解酵
素により、溶菌し、活性画分を水溶性区分として分画す
る方法（英国特許１１６３８６５号）、溶連菌の菌体を
破砕抜水不溶性物質を採取し、核酸分解酵素および蛋白
分解酵素で処理する方法（特開昭５５−７０１４）など
が知られている。
このように、ストレプトコッカス属細菌そのものもしく
はその菌体成分に抗腫瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
溶性もしくは水不溶性高分子細胞構成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したりし
て全体を分画しなければならなかった。
はその菌体成分に抗腫瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
溶性もしくは水不溶性高分子細胞構成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したりし
て全体を分画しなければならなかった。
このような処理では、精製は複雑となり、有効成分の単
離はきわめて困難であった。実際に分離し、有効成分と
して測定された例では分子量２００．０００の蛋白質（
特公昭４８−４３８４１、特開昭５ｌ−４４６１７）及
び分子量１５０ 、０００の糖蛋白質（特開昭５８−２
２０２６）が知られている程度である。
離はきわめて困難であった。実際に分離し、有効成分と
して測定された例では分子量２００．０００の蛋白質（
特公昭４８−４３８４１、特開昭５ｌ−４４６１７）及
び分子量１５０ 、０００の糖蛋白質（特開昭５８−２
２０２６）が知られている程度である。
本発明者らは、先に溶連菌の培養液中に抗腫瘍性成分を
溶出させる方法を鋭意研究したところ、培養中にペニシ
リン又はその関連物質を添加することによって抗腫瘍性
成分が培養液中に溶出することを見出しく特開昭６０−
３０６７７号）、培養液中から生理活性物質ＳＰＦ−１
を分離するに至ったのである。
溶出させる方法を鋭意研究したところ、培養中にペニシ
リン又はその関連物質を添加することによって抗腫瘍性
成分が培養液中に溶出することを見出しく特開昭６０−
３０６７７号）、培養液中から生理活性物質ＳＰＦ−１
を分離するに至ったのである。
（特開昭６０−３０６８９号）
本発明者らは、更に、溶連菌の培養濾液中からより有効
な成分を分離する目的で研究したところ、本発明におい
て、癌化白血球培養細胞Ｌ １２１０（以下培養細胞Ｌ
１２１０という）の生育を阻害し、かつ、アンスロン
硫酸法による呈色反応陽性の画分であることにより特徴
づけられる抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ を分離す
るに至った。
な成分を分離する目的で研究したところ、本発明におい
て、癌化白血球培養細胞Ｌ １２１０（以下培養細胞Ｌ
１２１０という）の生育を阻害し、かつ、アンスロン
硫酸法による呈色反応陽性の画分であることにより特徴
づけられる抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ を分離す
るに至った。
本発明の抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩは元素分析、
呈色反応等から糖を含むペプチド様物質と考えられるが
、紫外線吸収スペクトルから、既知の抗腫瘍性物質とは
、相違する新規な物質と認められるものである。
呈色反応等から糖を含むペプチド様物質と考えられるが
、紫外線吸収スペクトルから、既知の抗腫瘍性物質とは
、相違する新規な物質と認められるものである。
本発明は、ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性成分
ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍
性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩを採取することを特徴とする
抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの製造法を包含するも
のである。
ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍
性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩを採取することを特徴とする
抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの製造法を包含するも
のである。
本発明においては、ストレプトコッカス属に属する抗腫
瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ生産菌が広く使用できる。
瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ生産菌が広く使用できる。
次に抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ生産菌を記載する
。
。
培養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、プレイン・
バー１へ・インフュージョン培地（Ｌ３１１１ 培地）
等の天然培地がよく用いられるが、ストレプトコッカス
属細菌の生育に適した培地であれば任意の培地を使用で
きる。
バー１へ・インフュージョン培地（Ｌ３１１１ 培地）
等の天然培地がよく用いられるが、ストレプトコッカス
属細菌の生育に適した培地であれば任意の培地を使用で
きる。
培養は、ｐ＋１５．０〜８．０、好ましくは、６．１〜
７．２であり、培養温度は、３０〜４０℃、好ましくは
、３５〜３７°Ｃであり、嫌気的に静置培養または、攪
拌培養を行なうことができる。
７．２であり、培養温度は、３０〜４０℃、好ましくは
、３５〜３７°Ｃであり、嫌気的に静置培養または、攪
拌培養を行なうことができる。
本発明においては、培養中に適当な時期に、ペニシリン
または、その関連物質を添加することが。
または、その関連物質を添加することが。
抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの採取に重要な役割を
はだすことになる。
はだすことになる。
ペニシリンまたは、その関連物質の添加時間は、３５〜
３７℃の培養で、対数増殖期にかかって後、３〜２０時
間の間、特に５〜１０時間が好ましい。その後１〜２０
時間、好ましくは３〜１５時間培養を継続することによ
り、培養中に抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰ１を多量蓄
積させることができる。
３７℃の培養で、対数増殖期にかかって後、３〜２０時
間の間、特に５〜１０時間が好ましい。その後１〜２０
時間、好ましくは３〜１５時間培養を継続することによ
り、培養中に抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰ１を多量蓄
積させることができる。
ペニシリンまたはその関連物質としては、すでに知られ
たペニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいか
なるものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いられる。
たペニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいか
なるものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いられる。
添加量は、ペニシリンＧで１００〜７０００単位／ｍＱ
、好ましくは、３００〜５０００単位／１ＩＩＱ培養液
程度で十分である。
、好ましくは、３００〜５０００単位／１ＩＩＱ培養液
程度で十分である。
ストレプトコッカス属細菌のペニシリンまたは、その関
連物質の添加培養によって得られた培養液は遠心分離に
よって菌体を除去し、濾液に硫安を添加し、５０〜９０
％飽和度の画分を分取する。
連物質の添加培養によって得られた培養液は遠心分離に
よって菌体を除去し、濾液に硫安を添加し、５０〜９０
％飽和度の画分を分取する。
得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ を含む硫安
塩析物は凍結状態で保存することもできる。
塩析物は凍結状態で保存することもできる。
この硫安塩析物から抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩを
抽出するには、塩析物を緩衝液に溶解し、この水溶液を
ＤＥＡＥセルロースカラムに吸着させ、燐酸緩衝液を用
いて段階的に溶出させ、培養細胞Ｌ１２１０の生育を阻
害する活性画分を分取し、この活性画分をＤＥＡＥセフ
ァデックスＡ−２５カラムに吸着させ、燐酸緩衝液中の
塩化ナトリウム濃度を直線的に上昇させつつ溶出し、そ
の非吸着部分及び塩化ナトリウム低濃度部分を分取し、
この分画部分を緩衝液に対して透析し、ゲル濾過材トヨ
パールＨＶ−５０Ｆカラムに吸着させ、０．ＩＭ Ｎａ
ＣＱを含む燐酸緩衝液で溶出させ、アンスロン硫酸法に
よる呈色反応陽性部分を分取し、次いでこの分画部分を
燐酸緩衝液に対して透析脱塩後、ハイドロキシアパタイ
トカラムに吸着させ、 Ｉ Ｘｌ０−２Ｍリン酸緩衝液
で溶出し、これを凍結乾燥することによって得ることが
できる。
抽出するには、塩析物を緩衝液に溶解し、この水溶液を
ＤＥＡＥセルロースカラムに吸着させ、燐酸緩衝液を用
いて段階的に溶出させ、培養細胞Ｌ１２１０の生育を阻
害する活性画分を分取し、この活性画分をＤＥＡＥセフ
ァデックスＡ−２５カラムに吸着させ、燐酸緩衝液中の
塩化ナトリウム濃度を直線的に上昇させつつ溶出し、そ
の非吸着部分及び塩化ナトリウム低濃度部分を分取し、
この分画部分を緩衝液に対して透析し、ゲル濾過材トヨ
パールＨＶ−５０Ｆカラムに吸着させ、０．ＩＭ Ｎａ
ＣＱを含む燐酸緩衝液で溶出させ、アンスロン硫酸法に
よる呈色反応陽性部分を分取し、次いでこの分画部分を
燐酸緩衝液に対して透析脱塩後、ハイドロキシアパタイ
トカラムに吸着させ、 Ｉ Ｘｌ０−２Ｍリン酸緩衝液
で溶出し、これを凍結乾燥することによって得ることが
できる。
次に、実施例１で得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡ
ＰＩの凍結乾燥標品は、次の理化学的性質を示す。
ＰＩの凍結乾燥標品は、次の理化学的性質を示す。
１、元素分析 Ｃ３８，４〜４４．９％１１５．６〜６
．６％ Ｎ １２．２〜１６．１％ ０ ２９．６〜４２．７％ Ａｓｈ １．１〜２．８％ ２、分解点 本物質は１６５℃で褐変し２４０℃になる
と黒色となり分解する。
．６％ Ｎ １２．２〜１６．１％ ０ ２９．６〜４２．７％ Ａｓｈ １．１〜２．８％ ２、分解点 本物質は１６５℃で褐変し２４０℃になる
と黒色となり分解する。
３、比旋光度 〔α〕２０Ｄ＝−７８＠〜−１１２°（
ｃ＝ｉ、ｏｏ） ４、紫外線吸収スペクトル 本物質０．１％の水溶液の
紫外線吸収スペトルは第１図に示される。
ｃ＝ｉ、ｏｏ） ４、紫外線吸収スペクトル 本物質０．１％の水溶液の
紫外線吸収スペトルは第１図に示される。
５、赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。
６、塩基性、酸性、中性の区別 本物質１．０％の水溶
液のｐｌ＋は６．５である。
液のｐｌ＋は６．５である。
７、物質の色 淡褐色
８、呈色反応
ローリ−反応 十
ビューレット反応 十
ニンヒドリン反応 十
アンスロン硫酸反応 十
モーリッシュ反応 ＋
システイン硫酸反応 十
オルシン塩酸反応 −
９、分子量 ゲル濾過法による測定では分子量約８，０
００〜５０ 、０００である。
００〜５０ 、０００である。
１０、 溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メ
タノール、エタノール、ｎ−プロパノール、アセトン、
エチルエーテル、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エ
チル等の溶剤には難溶又は不溶である。
タノール、エタノール、ｎ−プロパノール、アセトン、
エチルエーテル、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エ
チル等の溶剤には難溶又は不溶である。
１１、 イオン交換体に対する挙動
ハイドロキシアパタイトに吸着され、１×ｌＯ′″２Ｍ
リン酸緩衝液により溶出される。
リン酸緩衝液により溶出される。
次にイン ビトロ における培養細胞Ｌ １２１０に対
する抗腫瘍性活性の測定方法及びアンスロン硫酸法によ
る呈色反応の方法を示す。
する抗腫瘍性活性の測定方法及びアンスロン硫酸法によ
る呈色反応の方法を示す。
抗腫瘍活性の測定方法
抗腫瘍活性の測定は、培養細胞Ｌ １２１０の生育阻止
率（ＩＲ％）の測定により行った。
率（ＩＲ％）の測定により行った。
Ｌ １２１０細胞を１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ １６４
０培地（５ｍｇ／１２カナマイシン含有）に１＠濁した
。この培養液０．５＋ｎ１２をファルコン２０５８チュ
ーブに注加し、細胞数がＩ ＸＩＯ’ ｃｅｌｌｓ／１
ｕｂｅになるようにした。次いでこの培養液に所定量の
標品（抗腫瘍性組成物ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ ）を目的濃
度になるように培養液に溶解した０、５ｍｆｌを注加し
て、３７℃で５％ｃｏ２存在下に培養した。標品を添加
して４８時間後にトリパンブルーによる染色をおこない
、次式により Ｉｎ （％）を算出した。
０培地（５ｍｇ／１２カナマイシン含有）に１＠濁した
。この培養液０．５＋ｎ１２をファルコン２０５８チュ
ーブに注加し、細胞数がＩ ＸＩＯ’ ｃｅｌｌｓ／１
ｕｂｅになるようにした。次いでこの培養液に所定量の
標品（抗腫瘍性組成物ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ ）を目的濃
度になるように培養液に溶解した０、５ｍｆｌを注加し
て、３７℃で５％ｃｏ２存在下に培養した。標品を添加
して４８時間後にトリパンブルーによる染色をおこない
、次式により Ｉｎ （％）を算出した。
ここで（Ａ）とは対照群の生細胞数を示す。
対照は標品を含まない培養液０．５ｍＱを用い同時に行
った。
った。
アンスロン硫酸法による呈色反応
脱イオン水に溶解し目的濃度にした標品１ｍｆｌに２１
１１Ωのアンスロン試薬（０，２０ｇｒのアンスロンを
１００ｍ１２の濃硫酸に溶解したもの）を注加し、混合
３０分後、標品１ｍＱに代えて脱イオン水１ｍＱに２ｍ
Ｑのアンスロン試薬を注加した液を対照として６２０ｎ
ｍで吸収を測定する。定量値はグルコースを用いて同様
に測定して得た検量式より求める。
１１Ωのアンスロン試薬（０，２０ｇｒのアンスロンを
１００ｍ１２の濃硫酸に溶解したもの）を注加し、混合
３０分後、標品１ｍＱに代えて脱イオン水１ｍＱに２ｍ
Ｑのアンスロン試薬を注加した液を対照として６２０ｎ
ｍで吸収を測定する。定量値はグルコースを用いて同様
に測定して得た検量式より求める。
次に本発明の実施例を示す。
実施例１
ストレプトコッカス・ピオゲネス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）
ＡＴＣＣ２１０６０をＢＨＩ培地１００ｍ Ｑに接種し
て３７℃、８時間静置培養をおこなって得た種培養液を
第１表に示す培地ＡＩＱに接種し、種培養と同一条件で
嫌気的に前培養を行った。
ＡＴＣＣ２１０６０をＢＨＩ培地１００ｍ Ｑに接種し
て３７℃、８時間静置培養をおこなって得た種培養液を
第１表に示す培地ＡＩＱに接種し、種培養と同一条件で
嫌気的に前培養を行った。
第 １ 表 培地Ａ
マルトース ０．２５％肉エキス
１．０％ポリペプトン
１．０％ 酵−母エキス ０．２５％酸性第一
燐酸カリウム ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．０５％ｐＨ＝６．８ １０Ｑジャーファーメンタ−に培地Ａ８Ｑを投入して１
２０℃、１０分間加熱殺菌後、３７℃まで冷却して、前
培養液ＩＱを接種し、３７℃、１５．５時間、ｐｌ＋６
．８，３００回転回転刃攪拌しながら嫌気的に培養する
。次いでペニシリン０１０００単位／ｍＱ培養液になる
ように添加して、培養を更に５時間継続した。
１．０％ポリペプトン
１．０％ 酵−母エキス ０．２５％酸性第一
燐酸カリウム ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．０５％ｐＨ＝６．８ １０Ｑジャーファーメンタ−に培地Ａ８Ｑを投入して１
２０℃、１０分間加熱殺菌後、３７℃まで冷却して、前
培養液ＩＱを接種し、３７℃、１５．５時間、ｐｌ＋６
．８，３００回転回転刃攪拌しながら嫌気的に培養する
。次いでペニシリン０１０００単位／ｍＱ培養液になる
ように添加して、培養を更に５時間継続した。
得られた培養液を遠心分離にかけて菌体を除去した。
培養濾液には硫酸アンモニウムを添加し、５０〜９０％
飽和度で沈澱する画分を分取した。この硫安塩析標品を
Ｉ Ｘｌ０−２Ｍ、 ｐＨ７，０の燐酸緩衝液（Ｋｌｌ
□ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ，） ３００ｏ＋Ｑに溶解し、
この水溶液をＤＥＡＥセルロースカラム（５Ｘ７０ｃｍ
）に吸着させた後、０．３Ｍ塩化ナトリウムを含む上記
燐酸緩衝液を用いて、段階的に溶出させ、アンスロン硫
酸法による呈色反応陽性でかつ培養細胞Ｌ １２１０の
生育を阻害する活性画分を分取した。
飽和度で沈澱する画分を分取した。この硫安塩析標品を
Ｉ Ｘｌ０−２Ｍ、 ｐＨ７，０の燐酸緩衝液（Ｋｌｌ
□ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ，） ３００ｏ＋Ｑに溶解し、
この水溶液をＤＥＡＥセルロースカラム（５Ｘ７０ｃｍ
）に吸着させた後、０．３Ｍ塩化ナトリウムを含む上記
燐酸緩衝液を用いて、段階的に溶出させ、アンスロン硫
酸法による呈色反応陽性でかつ培養細胞Ｌ １２１０の
生育を阻害する活性画分を分取した。
この活性画分をＤＥＡＥセファデックスＡ−２５カラム
（２，６Ｘ ７０ｃｍ）に吸着させ、次いで上記燐酸緩
衝液中の塩化ナトリウム濃度を直線的に上昇させて溶出
を行い、培養細胞Ｌ １２１０に対して活性のある部分
を分取する。この溶出曲線は第３図に示される。第３図
において点線部分は非吸着部分で、実線部分は塩化ナト
リウム添加部分である。Ａは培養細胞Ｌ １２１０生育
阻害活性画分で、ＭＰ−２（特開昭６Ｏ−３０６８９）
生育阻害非活性画分であり、Ｂは培養細胞！、１２１０
生育阻非活性画分で、ＭＰ−２生育阻害活性画分である
。
（２，６Ｘ ７０ｃｍ）に吸着させ、次いで上記燐酸緩
衝液中の塩化ナトリウム濃度を直線的に上昇させて溶出
を行い、培養細胞Ｌ １２１０に対して活性のある部分
を分取する。この溶出曲線は第３図に示される。第３図
において点線部分は非吸着部分で、実線部分は塩化ナト
リウム添加部分である。Ａは培養細胞Ｌ １２１０生育
阻害活性画分で、ＭＰ−２（特開昭６Ｏ−３０６８９）
生育阻害非活性画分であり、Ｂは培養細胞！、１２１０
生育阻非活性画分で、ＭＰ−２生育阻害活性画分である
。
Ａの活性画分の溶出液を硫酸アンモニウムを９０％飽和
度まで添加し沈澱画分とし、上記燐酸緩衝液に溶解し透
析膜を用いて脱塩後凍結乾燥する。
度まで添加し沈澱画分とし、上記燐酸緩衝液に溶解し透
析膜を用いて脱塩後凍結乾燥する。
この凍結乾燥標品を燐酸緩衝液に溶解しトヨパールＨ１
ｔ１５０ Ｆカラム（２，６Ｘ １００ｃ＋１１）に吸
着させ、次いで、上記燐酸緩衝液中に塩化ナトリウム０
．１Ｍを含む溶液で溶出させ、アンスロン硫酸法による
呈色反応陽性の画分を分取した。この溶出曲線は第４図
に示される。第４図において実線は全体の溶出曲線を示
し、点線はアンスロン硫酸法による呈色反応陽性部分の
溶出曲線を示している。ここではＣをアンスロン硫酸法
による呈色反応陽性画分とした。
ｔ１５０ Ｆカラム（２，６Ｘ １００ｃ＋１１）に吸
着させ、次いで、上記燐酸緩衝液中に塩化ナトリウム０
．１Ｍを含む溶液で溶出させ、アンスロン硫酸法による
呈色反応陽性の画分を分取した。この溶出曲線は第４図
に示される。第４図において実線は全体の溶出曲線を示
し、点線はアンスロン硫酸法による呈色反応陽性部分の
溶出曲線を示している。ここではＣをアンスロン硫酸法
による呈色反応陽性画分とした。
Ｃの画分は燐酸緩衝液に対して透析脱塩後ハイドロキシ
アパタイトカラム（２，ε４ Ｘ ４５ｃｍ）に吸着さ
せ、最初１×１０−２Ｍ燐酸緩衝液で溶出し、次いで１
×１０−２Ｍ燐酸緩衝液で溶出した。この溶出曲線は第
５図に示される。第５図において実線は全体の溶出曲線
を示し５点線はアンスロン硫酸法による呈色反応陽性部
分の溶出曲線を示している。
アパタイトカラム（２，ε４ Ｘ ４５ｃｍ）に吸着さ
せ、最初１×１０−２Ｍ燐酸緩衝液で溶出し、次いで１
×１０−２Ｍ燐酸緩衝液で溶出した。この溶出曲線は第
５図に示される。第５図において実線は全体の溶出曲線
を示し５点線はアンスロン硫酸法による呈色反応陽性部
分の溶出曲線を示している。
ここでＤの画分をＳＰＦＩＯＣＡＰＩとし、Ｅの画分を
５ｐＦ１０ＣＡＰ２とした。
５ｐＦ１０ＣＡＰ２とした。
Ｄの画分を凍結乾燥した。この凍結乾燥標品は抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩであり、１．４１ｇｒを得た。
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩであり、１．４１ｇｒを得た。
実施例２
ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは３００単位／ｆｆ１Ｑ培
養液となるように添加し、更に培養を１０時間継続した
。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成
分ＳＰＦ１０ＣＡＰＩ Ｏ，８１ｇｒを得た。
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは３００単位／ｆｆ１Ｑ培
養液となるように添加し、更に培養を１０時間継続した
。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成
分ＳＰＦ１０ＣＡＰＩ Ｏ，８１ｇｒを得た。
実施例３
ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは３０００単位／ｍＱ培養
液となるように添加し、更に培養を３時間継続した。こ
の培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分Ｓ
ＰＦＩＯＣＡＰＩ １．４４ｇｒを得た。
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは３０００単位／ｍＱ培養
液となるように添加し、更に培養を３時間継続した。こ
の培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分Ｓ
ＰＦＩＯＣＡＰＩ １．４４ｇｒを得た。
実施例４
ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第２表に示す培地Ｂを用いて実施例１と同様に培養した
。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍＱ＠養液
となるように添加し、更に培養を５時間継続した。この
培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分ＳＰ
Ｆ１０ＣＡＰ１１，０７ｇｒを得た。
第２表に示す培地Ｂを用いて実施例１と同様に培養した
。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍＱ＠養液
となるように添加し、更に培養を５時間継続した。この
培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分ＳＰ
Ｆ１０ＣＡＰ１１，０７ｇｒを得た。
第 ２ 表 培地Ｂ
マルトース ０．１％肉エキス
０．５％ ポリペプトン １．０％ 酵母エキス ０．２５％塩化ナトリウ
ム ０．１％ｐＨ＝７．２ 実施例５ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第３表に示す培地Ｃを用いて実施例１と同様に３５℃で
培養した。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍ
Ｑ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ １．１９ｇｒを得た。
０．５％ ポリペプトン １．０％ 酵母エキス ０．２５％塩化ナトリウ
ム ０．１％ｐＨ＝７．２ 実施例５ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第３表に示す培地Ｃを用いて実施例１と同様に３５℃で
培養した。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍ
Ｑ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ １．１９ｇｒを得た。
第 ３ 表 培地Ｃ
マルトース ０．１％肉エキス
０．５％ ポリペプトン ０．５％ カザミノ酸 ０．３％ 酵母エキス ０．５％ 酸性第一燐酸カリウム ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．０５％ＰＨ＝６．５ 実施例６ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第４表に示す培地りを用いて実施例１と同様に培養した
。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍＱ培養液
となるように添加し、更に培養を５時間継続した。この
培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分ＳＰ
ＦＩＯＣＡＰＩ ０．５６ｇｒを得た。
０．５％ ポリペプトン ０．５％ カザミノ酸 ０．３％ 酵母エキス ０．５％ 酸性第一燐酸カリウム ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．０５％ＰＨ＝６．５ 実施例６ ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第４表に示す培地りを用いて実施例１と同様に培養した
。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍＱ培養液
となるように添加し、更に培養を５時間継続した。この
培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分ＳＰ
ＦＩＯＣＡＰＩ ０．５６ｇｒを得た。
第 ４ 表 培地Ｄ
マルトース ０．２５％カザミノ酸
０．３％ 酵母エキス １．０％酸性第一燐酸カ
リウム ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．０５％ＰＨ，＝６．
９ 実施例７ ストレプトコッカス・エスピーＡＴＣＣ２１５９７を第
１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養した
。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍＱ培養液
となるように添加し、更に培養を５時間継続した。この
培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分ＳＰ
ＦＩＯＣＡＰＩ ０．８？ｇｒを得た。
０．３％ 酵母エキス １．０％酸性第一燐酸カ
リウム ０．１％ 硫酸マグネシウム ０．０５％ＰＨ，＝６．
９ 実施例７ ストレプトコッカス・エスピーＡＴＣＣ２１５９７を第
１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養した
。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ｍＱ培養液
となるように添加し、更に培養を５時間継続した。この
培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分ＳＰ
ＦＩＯＣＡＰＩ ０．８？ｇｒを得た。
実施例８
ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１！？４６
を第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養
した。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ＩＩＩ
Ｑ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ ０．６６ｇｒを得た。
を第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養
した。この場合、ペニシリンＧは１０００単位／ＩＩＩ
Ｑ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ ０．６６ｇｒを得た。
実施例９
ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１５４７を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは１ｏｏｏ単位／ｌ１１１
２培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ Ｏ，９５ｇｒを得た。
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧは１ｏｏｏ単位／ｌ１１１
２培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ Ｏ，９５ｇｒを得た。
実施例１０
ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１５４ｇを
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧはｌ０００単位／ｍＡ培養
液となるように添加し、更に培養を５時間継続した。こ
の培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分Ｓ
ＰＦＩＯＣＡＰＩ Ｏ，４３ｇｒを得た。
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、ペニシリンＧはｌ０００単位／ｍＡ培養
液となるように添加し、更に培養を５時間継続した。こ
の培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性成分Ｓ
ＰＦＩＯＣＡＰＩ Ｏ，４３ｇｒを得た。
実施例１１
ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、セファロスポリンＣは６００μｇ／ｒｍ
Ｑ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ １．７ｇｒを得た。
第１表に示した培地Ａを用いて実施例１と同様に培養し
た。この場合、セファロスポリンＣは６００μｇ／ｒｍ
Ｑ培養液となるように添加し、更に培養を５時間継続し
た。この培養濾液を実施例１と同様に精製して抗腫瘍性
成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩ １．７ｇｒを得た。
実験例１
実施例１で得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの
インビトロにおける抗腫瘍活性試験は１本文中に記載し
た抗腫瘍活性の測定方法により行い、その結果を表−５
に示す。
インビトロにおける抗腫瘍活性試験は１本文中に記載し
た抗腫瘍活性の測定方法により行い、その結果を表−５
に示す。
表−５ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの抗腫瘍活性の結果ＳＰＦＩ
ＯＣＡＰＩ （ｍｇ／ ｍ Ｑ ） ＩＲ％１
．０ １００．０ ０．５ ９２．１ ０．２５ ８３．５′ 実験例２ 実施例１で得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの
インビボにおける抗腫瘍活性試験はＣＲＪ −ＣＤ−１
（ＩＣＲ系、雌性７週齢）マウスを使用して実施した。
ＯＣＡＰＩ （ｍｇ／ ｍ Ｑ ） ＩＲ％１
．０ １００．０ ０．５ ９２．１ ０．２５ ８３．５′ 実験例２ 実施例１で得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの
インビボにおける抗腫瘍活性試験はＣＲＪ −ＣＤ−１
（ＩＣＲ系、雌性７週齢）マウスを使用して実施した。
腫瘍細胞としてはＳａｒｃｏｍａ−１８０腹水癌細胞
を用いこれを生理食塩水に浮遊させ、マウスの内に５
Ｘ １０’ ｃｅｌｌｓ／マウス接種した。
を用いこれを生理食塩水に浮遊させ、マウスの内に５
Ｘ １０’ ｃｅｌｌｓ／マウス接種した。
癌細胞接種２４時間後から１日１回５日間連続してＳＰ
ＦＩＯＣＡＰＩ を腹腔内に投与してその生存数をＩ察
しその結果を表−６に示す。
ＦＩＯＣＡＰＩ を腹腔内に投与してその生存数をＩ察
しその結果を表−６に示す。
表−６ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの抗腫瘍活性−マウスの生存
数日数 ０ １０ １５ ２０ ２５ ３０対照
８／８７／８１／８０／８０／８０／８ＳＰＦＩ
ＯＣＡＰＩ （５ｍｇ／マウス）８／８ ８／８ ７／
８ ７／８ ５／８ ５／８
数日数 ０ １０ １５ ２０ ２５ ３０対照
８／８７／８１／８０／８０／８０／８ＳＰＦＩ
ＯＣＡＰＩ （５ｍｇ／マウス）８／８ ８／８ ７／
８ ７／８ ５／８ ５／８
第１図は抗腫瘍性成分ＳＰＦＩＯＣＡＰＩの紫外線吸収
スペクトルを示し、第２図は同じく赤外線吸収スペクト
ルを示す。第３図は実施例１における活性画分のＤＥＡ
ＥセファデックスＡ−２５カラムの溶出曲線を示す図で
、第４図はこのＡ画分をトヨパールＩ（ｆｉｌ ５０
Ｆカラムに吸着させ、０．１Ｍ ＮａＣＡ燐酸緩衝液に
よる溶出曲線を示す図で、第５図はこのＣ画分をハロイ
ドロキシアパタイト力ラムに吸着させて、Ｄは１×１０
−２Ｍ燐酸緩衝液及びＥはｌＸ１０−’Ｍ燐酸緩衝液に
よって溶出させた溶出曲線を示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第 １ 図 ｎｍ 第 ３ 図 Ｆ 第 ４ 図 □Ｆ
スペクトルを示し、第２図は同じく赤外線吸収スペクト
ルを示す。第３図は実施例１における活性画分のＤＥＡ
ＥセファデックスＡ−２５カラムの溶出曲線を示す図で
、第４図はこのＡ画分をトヨパールＩ（ｆｉｌ ５０
Ｆカラムに吸着させ、０．１Ｍ ＮａＣＡ燐酸緩衝液に
よる溶出曲線を示す図で、第５図はこのＣ画分をハロイ
ドロキシアパタイト力ラムに吸着させて、Ｄは１×１０
−２Ｍ燐酸緩衝液及びＥはｌＸ１０−’Ｍ燐酸緩衝液に
よって溶出させた溶出曲線を示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第 １ 図 ｎｍ 第 ３ 図 Ｆ 第 ４ 図 □Ｆ
Claims (5)
- （１）下記の理化学的性質を有する抗腫瘍性成分ＳＰＦ
１０ＣＡＰ１ １、元素分析 Ｃ ３８．４〜４４．９％ Ｈ ５．６〜６．６％ Ｎ １２．２〜１６．１％ Ｏ ２９．６〜４２．７％ Ａｓｈ １．１〜２．８％ ２、分解点 本物質は１６５℃で褐変し２４０℃になる
と黒色となり分解する。 ３、比旋光度 〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝−７８°〜−１１
２°（Ｃ＝１．００） ４、紫外線吸収スペクトル 本物質０．１％の水溶液の
紫外線吸収スペトルは第１図に示される。 ２７３ｎｍに吸収極大がみられ特徴的である。 ５、赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。 ６、塩基性、酸性、中性の区別 本物質１．０％の水溶
液のｐＨは６．５である。 ７、物質の色 淡褐色 ８、呈色反応 ローリー反応 ＋ ビューレット反応 ＋ ニンヒドリン反応 ＋ アンスロン硫酸反応 ＋ モーリッシュ反応 ＋ システイン硫酸反応 ＋ オルシン塩酸反応 − ９、分子量 ゲル濾過法による測定では分子量約８，０
００〜５０，０００である。 １０、イオン交換体に対する挙動 ハイドロキシアパタイトに吸着され、１×１０＾−＾２
Ｍリン酸緩衝液により溶出される。 １１、溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノ
ール、エタノール、ｎ−プロパノール、アセトン、エチ
ルエーテル、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル
等の溶剤には、難溶又は不溶である。 - （２）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性成分ＳＰ
Ｆ１０ＣＡＰ１生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性成
分ＳＰＦ１０ＣＡＰ１を採取することを特徴とする抗腫
瘍性成分ＳＰＦ１０ＣＡＰ１の製法。 - （３）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性成分ＳＰ
Ｆ１０ＣＡＰ１生産菌を培養するに際し、培養中の適当
な時期にペニシリン又はその関連物質を添加して培養す
ることを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗腫
瘍性成分ＳＰＦ１０ＣＡＰ１の製法。 - （４）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性成分ＳＰ
Ｆ１０ＣＡＰ１生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性成
分ＳＰＦ１０ＣＡＰ１を採取するに当たり、培養細胞Ｌ
１２１０の生育を阻害し、又は／及びアンスロン硫酸
法による呈色反応陽性の画分を分取することを特徴とす
る特許請求の範囲第２項に記載の抗腫瘍性成分ＳＰＦ１
０ＣＡＰ１の製法。 - （５）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性成分ＳＰ
Ｆ１０ＣＡＰ１生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性成
分ＳＰＦ１０ＣＡＰ１を採取するに当たり、培養細胞Ｌ
１２１０の生育を阻害し、かつ、アンスロン硫酸法に
よる呈色反応陽性でハイドロキシアパタイトに吸着され
１×１０＾−＾２Ｍリン酸緩衝液により溶出される画分
を分取することを特徴とする特許請求の範囲第２項に記
載の抗腫瘍性成分ＳＰＦ１０ＣＡＰ１の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60170574A JPS6233127A (ja) | 1985-08-03 | 1985-08-03 | 抗腫瘍性成分ｓｐｆ１０ｃａｐ１及びその製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60170574A JPS6233127A (ja) | 1985-08-03 | 1985-08-03 | 抗腫瘍性成分ｓｐｆ１０ｃａｐ１及びその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6233127A true JPS6233127A (ja) | 1987-02-13 |
| JPH0156075B2 JPH0156075B2 (ja) | 1989-11-28 |
Family
ID=15907357
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60170574A Granted JPS6233127A (ja) | 1985-08-03 | 1985-08-03 | 抗腫瘍性成分ｓｐｆ１０ｃａｐ１及びその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6233127A (ja) |
-
1985
- 1985-08-03 JP JP60170574A patent/JPS6233127A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0156075B2 (ja) | 1989-11-28 |
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