JPS61101501A - 制癌作用を有する多糖及びその製法 - Google Patents
制癌作用を有する多糖及びその製法Info
- Publication number
- JPS61101501A JPS61101501A JP22458584A JP22458584A JPS61101501A JP S61101501 A JPS61101501 A JP S61101501A JP 22458584 A JP22458584 A JP 22458584A JP 22458584 A JP22458584 A JP 22458584A JP S61101501 A JPS61101501 A JP S61101501A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polysaccharide
- culture
- glc
- formula
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野コ
本発明は、制癌作用を有する新規多糖ＹＭ〜３２２９Ｇ
−Ａ及びぞの製法に関する。
−Ａ及びぞの製法に関する。
［発明の背景コ
従来１発熱などの副作用や毒性の少ない制癌性多糖物質
として、担子菌子実体あるいは培養菌体より得られるク
レスチンやレンチナンなど多数知られているが、細菌類
が生産するものは少なし・０ 本発明者らは、先に天然の土壌より分離されたシュード
モナス属に属する新種の細菌が。
として、担子菌子実体あるいは培養菌体より得られるク
レスチンやレンチナンなど多数知られているが、細菌類
が生産するものは少なし・０ 本発明者らは、先に天然の土壌より分離されたシュード
モナス属に属する新種の細菌が。
５′−ヌクレオチダーゼ阻止活性を示し、制癌作用を有
する中性の多糖類ＹＭ−３２２９Ｇを産生ずることをつ
きとめ、該ＹＭ−３２２９Ｇ及びその製法につき特許出
願した（特開昭５８−１０７１８６号）。
する中性の多糖類ＹＭ−３２２９Ｇを産生ずることをつ
きとめ、該ＹＭ−３２２９Ｇ及びその製法につき特許出
願した（特開昭５８−１０７１８６号）。
［発明の概要］
本発明者らはさらにこのＹＭ−３２２９Ｇにつ（・て精
製を繰返し、ある℃・は他の精製手段を適用して、その
物性及び多糖の構造を追及した結果。
製を繰返し、ある℃・は他の精製手段を適用して、その
物性及び多糖の構造を追及した結果。
新たに得もチした精製品がその物性においてＹＭ−３２
２９Ｇと異なること、従ってＹＭ−３２２９Ｇは精製品
ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａを含む粗製物であることをつきと
め、さらに精製品ＹＭ ３２２９Ｇ Ａの構造を解析
し、これが従来文献に記載をみな（・新規物であること
を知見し、この知見に基づ（・て本発明を完成した。
２９Ｇと異なること、従ってＹＭ−３２２９Ｇは精製品
ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａを含む粗製物であることをつきと
め、さらに精製品ＹＭ ３２２９Ｇ Ａの構造を解析
し、これが従来文献に記載をみな（・新規物であること
を知見し、この知見に基づ（・て本発明を完成した。
従って２本発明はＹＭ ３２２９Ｇ−Ａ、 すなわ
ち繰返し単位が。
ち繰返し単位が。
＝４ ）−Ｄ−Ｇｌｃ−（１−４）−Ｄ−Ｇｌｃ−（１
＝４ ）−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→４ ）−Ｄ−Ｇｌｃ （
１→（式中、 Ｇｌｃはグルコース残基を、 Ｍａｎ
はマンノース残基を意味し、数字は結合位置を表わす） である多糖と、その製法である。
＝４ ）−Ｄ−Ｇｌｃ−（１→４ ）−Ｄ−Ｇｌｃ （
１→（式中、 Ｇｌｃはグルコース残基を、 Ｍａｎ
はマンノース残基を意味し、数字は結合位置を表わす） である多糖と、その製法である。
（微生物）
本発明において利用される微生物は、シ−ドモナス属に
属し、制癌作用物質ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの生産能をも
って特徴づけられる。このような微生物としては例えば
ンユードモナス エスピーＹＭ−３２２９Ｇ （Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ、 ＹＭ−３２２９Ｇ ）なら
びにこのものの変異株がある。前者は通商産業省工業技
術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第６１６７号と
して寄託されており、その菌学的性質に関しては既に本
発明者らによって明らかにされて（・る（特開昭５８−
１０７１８６号及び同５８−１０７１７３号）。
属し、制癌作用物質ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの生産能をも
って特徴づけられる。このような微生物としては例えば
ンユードモナス エスピーＹＭ−３２２９Ｇ （Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ、 ＹＭ−３２２９Ｇ ）なら
びにこのものの変異株がある。前者は通商産業省工業技
術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第６１６７号と
して寄託されており、その菌学的性質に関しては既に本
発明者らによって明らかにされて（・る（特開昭５８−
１０７１８６号及び同５８−１０７１７３号）。
（製法）
本発明の制癌作用物質である多糖ＹＭ−３，２２９Ｇ−
Ａの製造は２例えばシュードモナスエスピーＹＭ−３２
２９Ｇを培地で培養し、培養物より菌体を除去し、水、
トリクロロ酢酸やエタノール等の溶剤に対する溶解性の
差、 Ｄｏｗｅｘ １ （ＯＨ”’）やＤＥＡＥ−セ
ルロース−５２すどの陰１１ｍイオン交換樹脂に対する
親和性の差、脱塩透析の精製手段を適宜組合せあるし・
は反覆適用し、凍結乾燥を単離積取手段とすることによ
って行なわれろ。この場合シー−トモナス エスピー
Ｙ Ｍ −３２２９Ｇを培地で培養する手段はＹＭ−３
２２９Ｇを「２ 製造する麿めの培養手段と同様である。本発明多糖ＹＭ
３２２９Ｇ Ａの製法は、このシュードモナスエス
ピーＹＭ−３２２９Ｇを生産菌とする方法においてはＹ
Ｍ −３２２９Ｇの製法とその精製手段を適用する度
合ある（・は適用する具体的な精製手段やその組合上の
相違によって峻別される。
Ａの製造は２例えばシュードモナスエスピーＹＭ−３２
２９Ｇを培地で培養し、培養物より菌体を除去し、水、
トリクロロ酢酸やエタノール等の溶剤に対する溶解性の
差、 Ｄｏｗｅｘ １ （ＯＨ”’）やＤＥＡＥ−セ
ルロース−５２すどの陰１１ｍイオン交換樹脂に対する
親和性の差、脱塩透析の精製手段を適宜組合せあるし・
は反覆適用し、凍結乾燥を単離積取手段とすることによ
って行なわれろ。この場合シー−トモナス エスピー
Ｙ Ｍ −３２２９Ｇを培地で培養する手段はＹＭ−３
２２９Ｇを「２ 製造する麿めの培養手段と同様である。本発明多糖ＹＭ
３２２９Ｇ Ａの製法は、このシュードモナスエス
ピーＹＭ−３２２９Ｇを生産菌とする方法においてはＹ
Ｍ −３２２９Ｇの製法とその精製手段を適用する度
合ある（・は適用する具体的な精製手段やその組合上の
相違によって峻別される。
しかし、ＹＭ−３，２２’９Ｃ；−Ａは後記する如（２
ＹＭ−３２２９Ｇとその物性にお−・て異なり、 Ｙｙ
Ｌ−３２２９Ｇと収別することが可能である。
ＹＭ−３２２９Ｇとその物性にお−・て異なり、 Ｙｙ
Ｌ−３２２９Ｇと収別することが可能である。
従って２本発明のＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの製法は。
シー−トモナス属に属し、 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａ生産
能を有する微生物を培地で培養し、培養物よりＹＭ−３
２２９Ｇ−Ａを採取する点において、特開・昭５８−１
０７１８６号に記載されたＹＭ−３２２９Ｇの製造の発
明と峻別でき、特定することができる。
能を有する微生物を培地で培養し、培養物よりＹＭ−３
２２９Ｇ−Ａを採取する点において、特開・昭５８−１
０７１８６号に記載されたＹＭ−３２２９Ｇの製造の発
明と峻別でき、特定することができる。
培養は、特開昭５８−１０７１．８６号と同様、その微
生物が利用する栄養源を含有する培地を用い↓ て行なわれる。培地は合成、半合成は天然の。
生物が利用する栄養源を含有する培地を用い↓ て行なわれる。培地は合成、半合成は天然の。
固体又は液体培地のいずれを用いてもよいが。
通常天然の栄養源を含んだ液体培地を使用するのが好ま
しい。培地に添加する栄養源としては。
しい。培地に添加する栄養源としては。
炭素源としてはＤ−グルコース、スターチあるいはグリ
セリンが、窒素圀としては肉エキス。
セリンが、窒素圀としては肉エキス。
ペプトン、グルテンミール、カゼイン加水分解物、綿実
粕、大豆粉、落下生粉、魚粉、コーンスチープリカー、
乾燥酵母、酵母エキス、各独アミノ酸（例えばグルタミ
ン酸、アラニア、リジン等）、アンモニウム塩（例えば
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等）や尿素などの
有機。
粕、大豆粉、落下生粉、魚粉、コーンスチープリカー、
乾燥酵母、酵母エキス、各独アミノ酸（例えばグルタミ
ン酸、アラニア、リジン等）、アンモニウム塩（例えば
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等）や尿素などの
有機。
無機の窒素源が用℃・られる。
また、培地には必要に応じナトリウム、カリウム、マグ
ネシウム、カルシウム、亜鉛、鉄などの金属の硫酸塩、
硝酸塩、塩化物、炭酸塩。
ネシウム、カルシウム、亜鉛、鉄などの金属の硫酸塩、
硝酸塩、塩化物、炭酸塩。
リン酸塩などを添加することができる。
培養は好気的条件下に行なうのが良（、静置。
振曇１通気攪拌培養いずれでも可能であるが。
振但ある（・は通気攪拌培養が有利である。培養温度は
およそ１８〜３５℃の範囲内が好ましく。
およそ１８〜３５℃の範囲内が好ましく。
殊に約２７〜２８℃が有利である。また、培地のｐＨは
約５．５〜８．５．殊に６〜８の中性付近に保持するの
が好適である。培養期間は培地の組成。
約５．５〜８．５．殊に６〜８の中性付近に保持するの
が好適である。培養期間は培地の組成。
温度等の培養条件によって異なるが２通常約２日〜１０
日程度がよい。
日程度がよい。
培養物よりＹＭ−３２２９Ｇ−Ａを単離・精製・採取す
るには９例えば培養物としてシュードモナス エスピー
ＹＭ−３２２９Ｇを菌株とする場合には、具体的には
培養物より菌体を分離除去し。
るには９例えば培養物としてシュードモナス エスピー
ＹＭ−３２２９Ｇを菌株とする場合には、具体的には
培養物より菌体を分離除去し。
菌体除去液にトリクロロ酢酸を加えて生成する沈殿を除
去し、脱塩透析し９次（・でエタノールを加えて、生成
する沈殿を分離回収する。
去し、脱塩透析し９次（・でエタノールを加えて、生成
する沈殿を分離回収する。
粗粉末を水に溶解し、再度トリクロロ酢酸を加えて生成
する沈殿を分離除去し、脱塩透析後。
する沈殿を分離除去し、脱塩透析後。
陰イオン交換樹脂［Ｄｏｗｅｘ １ （ＯＨ−） 、ダ
ウケミカルズ社製コを加え、上清をとり、一旦凍結乾燥
する。
ウケミカルズ社製コを加え、上清をとり、一旦凍結乾燥
する。
次いで凍乾品を緩衝液に溶解し、陰イオン交換樹脂ジエ
チルアミノエチルセルロース（ＤＥＡＥセルロース−５
２ワットマン社製）を加え、上清をとり、脱塩透析後凍
結乾燥することによってＹＭ−３２２９Ｇ−Ａを製造す
ることができる。
チルアミノエチルセルロース（ＤＥＡＥセルロース−５
２ワットマン社製）を加え、上清をとり、脱塩透析後凍
結乾燥することによってＹＭ−３２２９Ｇ−Ａを製造す
ることができる。
すなわち、培養物の菌体除去液を、溶剤に対する溶解性
の差、透析性、イオン交換樹脂に対する吸着親和性の差
（電気的性質）を利用する精製手段を適宜組合せ、ある
いは反覆適用して精製し、単離する方法である。
の差、透析性、イオン交換樹脂に対する吸着親和性の差
（電気的性質）を利用する精製手段を適宜組合せ、ある
いは反覆適用して精製し、単離する方法である。
しかし、 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの精製法はこれらの
精製手段、その組合せ１反覆にのみ限定されるものでは
なく 、 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａを特定するに足る物
性を示すまで精製する方法であれば本発明の精製法に含
まれる。
精製手段、その組合せ１反覆にのみ限定されるものでは
なく 、 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａを特定するに足る物
性を示すまで精製する方法であれば本発明の精製法に含
まれる。
差、上記以外の種々の吸着剤に対する吸着親和性の差、
２種の液相間における分配の差を利用する方法などが知
られており１本発明方法にはこれらの精製手段を適用す
ることもできる。
２種の液相間における分配の差を利用する方法などが知
られており１本発明方法にはこれらの精製手段を適用す
ることもできる。
ス
、なお、精製の一指標として５′−慶りレオチダーゼ阻
止活性を測定する手段を用いることかできる。
止活性を測定する手段を用いることかできる。
（多糖）
このようにして得られたＹＭ−３２２９Ｇ−Ａは以下の
物理化学的性質を示す。
物理化学的性質を示す。
（１） 分子の均一性
ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａはガラ１１紙（ＧＦ／Ａ。
２０．３ Ｘ ２５．４ ｃｍ” 、 ワットマン社
製）を担体として。
製）を担体として。
０．１Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ９，３）を用い、 ７０
０Ｖで７０分間電気泳動後、ｐ−アニシジン−硫酸で発
色し、あるいはＦ紙より試料を水で抽出し、５′−ヌク
レオチダーゼ阻止活性を測定した結果、いずれの場合も
単一のスポットが得られた。
０Ｖで７０分間電気泳動後、ｐ−アニシジン−硫酸で発
色し、あるいはＦ紙より試料を水で抽出し、５′−ヌク
レオチダーゼ阻止活性を測定した結果、いずれの場合も
単一のスポットが得られた。
（２）分子量
ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａはセファローズ４ Ｂ （Ｓｅｐ
ｈａ−ス ｒｏｓｅ ４ Ｂ ；ファルＷシアファインケミカルズ
社製）ヲ担体として０．０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ，７，０）で展開し、ゲル濾過を行なうと単一ピーク
をを与え２分子量は１００万以上と推定される。
ｈａ−ス ｒｏｓｅ ４ Ｂ ；ファルＷシアファインケミカルズ
社製）ヲ担体として０．０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ，７，０）で展開し、ゲル濾過を行なうと単一ピーク
をを与え２分子量は１００万以上と推定される。
（３）外観
白色粉末
（４）融点
明確な融点は示さないが、３００°Ｃ以上である。
（５）元素分析値
Ｃ（％）４０．１７ Ｈ（％）６２０（Ｑ 赤外部
吸収 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの赤外線吸収スペクトル（臭化カ
リウム錠剤法）を第１図に示す。
吸収 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの赤外線吸収スペクトル（臭化カ
リウム錠剤法）を第１図に示す。
（力 紫外部吸収
紫外線吸収スペクトルによれば末端吸収で特性吸収は認
められなし・。
められなし・。
（８）溶剤に対する１容解性
水及びジメチルスルホキンドに！容解するが。
メタノール、エタノール、ブタノール、アセトン、クロ
ロホルム、ペンゼ／、酢酸エチル。
ロホルム、ペンゼ／、酢酸エチル。
酢酸ブチルなどの通常の有機溶媒には＠汁ない。
（９）呈色反応
フェノール−硫酸反応 陽性
アンス０フ反応 陽性
フェーリ／グチスト 陰性
エルンンモルガン反応陰性
ニンヒドリン反応 陰性
（１０） イオン交換樹脂に対する吸着性Ｄｏｗｅｘ
１ （ＯＨ−） 、 Ａｍｂｅｒｌｉ＠ｔｅ Ｉ Ｒ
１２０（Ｈ”）の陰、陽イオン交換樹脂のし・ずれにも
吸着されない。
１ （ＯＨ−） 、 Ａｍｂｅｒｌｉ＠ｔｅ Ｉ Ｒ
１２０（Ｈ”）の陰、陽イオン交換樹脂のし・ずれにも
吸着されない。
上記の結果より本物質は中性多糖であると推定される。
０１）旋光度
［αコ、８９−１４０°（Ｃ＝０．５０． Ｏ，ｔ
Ｎ水酸化ナトリウム）■ 加水分解性 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａ Ｉｔ ２Ｎ−硫酸とともに沸騰
水浴中で加水分解する。Ｓｏｍｏｇｙｉ −Ｎｅ １ｓ
ｏｎ法による加水分解物に含まれる還元糖の定量洗より
−。
Ｎ水酸化ナトリウム）■ 加水分解性 ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａ Ｉｔ ２Ｎ−硫酸とともに沸騰
水浴中で加水分解する。Ｓｏｍｏｇｙｉ −Ｎｅ １ｓ
ｏｎ法による加水分解物に含まれる還元糖の定量洗より
−。
Ｙ Ｍ−３゜２９ソ■完全ＫＪ］水分解門へ５、ると推
定される。
定される。
０３）構成糖、構成比、構造
ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの２Ｎ−硫酸による加水分解物を
、シリカゲル６０ （５Ｘ ２０ｃｍ’ 、メルク社製
）を担体とする薄層クロマトグラフィー及びセルロース
（アビセルＳＦ、フナコシ社製）ヲ担体とする薄層クロ
マトグラフィーに、前者をブタノール：酢酸：水（容量
比２：１：１）で。
、シリカゲル６０ （５Ｘ ２０ｃｍ’ 、メルク社製
）を担体とする薄層クロマトグラフィー及びセルロース
（アビセルＳＦ、フナコシ社製）ヲ担体とする薄層クロ
マトグラフィーに、前者をブタノール：酢酸：水（容量
比２：１：１）で。
後者を酢酸エチル：ピリジン：水：酢酸（容量比５：５
°３：１）でそれぞれ展開した。前者は５％メタノール
−硫酸で、後者はジフェニルアミンアニリン試薬で発色
した。
°３：１）でそれぞれ展開した。前者は５％メタノール
−硫酸で、後者はジフェニルアミンアニリン試薬で発色
した。
その結果、 Ｙ Ｍ −３２２９Ｇ−Ａはグルコース
残基、Ｄ−マンノース残基によって構成されてし・るも
のと推定された。
残基、Ｄ−マンノース残基によって構成されてし・るも
のと推定された。
この構成糖の確認・と、さらに構成比の測定は、上記完
全加水分解物をトリメチルシＩＪ ）し２°Ｃ／ｍ１ｎ
）に付して分析した。
全加水分解物をトリメチルシＩＪ ）し２°Ｃ／ｍ１ｎ
）に付して分析した。
その結果。
Ｄ−マンノース １０モル比
Ｄりグルコース １．７モル比であった。
次に、構成糖の結合位置などを調べるためにＫｕｈｎ法
で完全メチル化してメチル化分析を行った。ｔｏ勘もＬ
Ａ’Ｉ１本１ｚ省・１゜第１表 ＹＭ−３２２９Ｇ −
Ａのメチル化分析２．３，４．６−チトラーＯ−メチル
ーＤ−マンノース ０．９９ ０．９３３．４．
６−トリー〇−メチルーＤ−マンノース ｘ
、ｓ５０．９３２．３．６−）リーＯ−メチルーＤ−グ
ルコース ２，３５ ３．２２．６−ジー
０−メチル−Ｄ−グルコース ３．５２
１．０＊３％ＥＣＮ５５−ＭカラムのＧＣ−ＭＳ （ガ
スクロマトグラフィー−マススペクトル）において、
１９０ Ｃにオケル１．５−ジー０−アセチル−２，３
，４，６−チトラーＯ−メチルーグルシトールに対する
相対保持時間以上の結果を総合勘案すると、 ＹＭ−３
２２９Ｇ−Ａは、Ｄ−グルコース残基：Ｄ−マンノース
残基の構成比が４：２であり、１→４結合したＤ−グル
コース残基４モルを主鎖とし２分岐した枝が３←１結合
と２←１結合のマノノース残基２モルによへｊｒ口 って構成されたーーボリマーであると推定され。
で完全メチル化してメチル化分析を行った。ｔｏ勘もＬ
Ａ’Ｉ１本１ｚ省・１゜第１表 ＹＭ−３２２９Ｇ −
Ａのメチル化分析２．３，４．６−チトラーＯ−メチル
ーＤ−マンノース ０．９９ ０．９３３．４．
６−トリー〇−メチルーＤ−マンノース ｘ
、ｓ５０．９３２．３．６−）リーＯ−メチルーＤ−グ
ルコース ２，３５ ３．２２．６−ジー
０−メチル−Ｄ−グルコース ３．５２
１．０＊３％ＥＣＮ５５−ＭカラムのＧＣ−ＭＳ （ガ
スクロマトグラフィー−マススペクトル）において、
１９０ Ｃにオケル１．５−ジー０−アセチル−２，３
，４，６−チトラーＯ−メチルーグルシトールに対する
相対保持時間以上の結果を総合勘案すると、 ＹＭ−３
２２９Ｇ−Ａは、Ｄ−グルコース残基：Ｄ−マンノース
残基の構成比が４：２であり、１→４結合したＤ−グル
コース残基４モルを主鎖とし２分岐した枝が３←１結合
と２←１結合のマノノース残基２モルによへｊｒ口 って構成されたーーボリマーであると推定され。
以下の繰返し単位をもつものと同定した。
→４ ） −Ｄ−Ｇｌｃ −（１−＝４ ） −Ｄ−Ｇ
ｌｃ −（１”４ ） −Ｄ−Ｇｌｃ −（１−４）
−Ｄ−Ｇｌｃ （１→↑ −Ｍａｎ （式中、 Ｇｌｃ、Ｍａｎは前記と同じ意味を有し、数
字は前記と同様結合位置を表ハす） なお９本多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａ ＆セルラーゼで処
理すると、１２時間で（１→４）−β−Ｄ−グルコース
結合の２４％分解に相当する還元性を示す。また、施光
度が［αＧ：、−１４０°であり赤外線吸収スペクトル
において８８４ｃｍ−ｒに吸収があることから２本多糖
分子内はβ−結合であると考えられる。
ｌｃ −（１”４ ） −Ｄ−Ｇｌｃ −（１−４）
−Ｄ−Ｇｌｃ （１→↑ −Ｍａｎ （式中、 Ｇｌｃ、Ｍａｎは前記と同じ意味を有し、数
字は前記と同様結合位置を表ハす） なお９本多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａ ＆セルラーゼで処
理すると、１２時間で（１→４）−β−Ｄ−グルコース
結合の２４％分解に相当する還元性を示す。また、施光
度が［αＧ：、−１４０°であり赤外線吸収スペクトル
において８８４ｃｍ−ｒに吸収があることから２本多糖
分子内はβ−結合であると考えられる。
本多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａは１００万以上の分子量を
もつが、５′−ヌクレオチダーゼ阻止活性及び制癌活性
を低減させることなく２部分分解することが可能である
。従って２本発明多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａには、上記
の繰返し単位をもち分子量が１００万以下に低減された
部分分解物も包含される。
もつが、５′−ヌクレオチダーゼ阻止活性及び制癌活性
を低減させることなく２部分分解することが可能である
。従って２本発明多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａには、上記
の繰返し単位をもち分子量が１００万以下に低減された
部分分解物も包含される。
この部分分解物を製造するには希硫酸の存在下に加熱す
るなどの方法によって達成できる。部分分解物の精成は
上記ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａに適用する手段がそのまま適
用できる。上記繰返し単位をもつ本発明多糖は、従来の
文献に記載をみない新規物質であると認められる。また
２以上の物理化学的性質や繰返り単位の構造を考察する
とき、 ＹＭ−３２２９０はＹＭ−３２２９Ｇ −Ａを
含む粗製物であると考えられる。
るなどの方法によって達成できる。部分分解物の精成は
上記ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａに適用する手段がそのまま適
用できる。上記繰返し単位をもつ本発明多糖は、従来の
文献に記載をみない新規物質であると認められる。また
２以上の物理化学的性質や繰返り単位の構造を考察する
とき、 ＹＭ−３２２９０はＹＭ−３２２９Ｇ −Ａを
含む粗製物であると考えられる。
［効果コ
本発明多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａは５′−ヌクレオチダ
ーゼ阻止活性を有し、優れた制癌作用を示す。
ーゼ阻止活性を有し、優れた制癌作用を示す。
しかも２本発明多＠ｙＭ−３２２ｃ＋ Ｇ−Ａ ＆！低
ｓ性テある。
ｓ性テある。
以下にその制癌作用に関する生体内試験（１ｎｖｉｖｏ
）とその結果を示す。
）とその結果を示す。
試、験方法
一群ｌＯ匹のＩＣＲ／ＣＲＪ ５週の雌性マウス（（ザ
Ａ／：Ｉ−マ（Ｓａｒｃｏｍａ）１８０，３Ｘ１０’
１ｒＩＡの細胞をマウス皮下に接種して腫瘍を作る。こ
のマウスにＹＭ−３２２９’Ｇ−Ａ （ｌｆｆｇ／ｋｇ
、 ５ｍｇ／ｋｇ、 １１０１Ｔｔ／ｋｇ）を腹腔内よ
り１日１回１０日間連投連設２週目。
Ａ／：Ｉ−マ（Ｓａｒｃｏｍａ）１８０，３Ｘ１０’
１ｒＩＡの細胞をマウス皮下に接種して腫瘍を作る。こ
のマウスにＹＭ−３２２９’Ｇ−Ａ （ｌｆｆｇ／ｋｇ
、 ５ｍｇ／ｋｇ、 １１０１Ｔｔ／ｋｇ）を腹腔内よ
り１日１回１０日間連投連設２週目。
３週目における腫瘍の大きさを測定し、対照との比較に
おいてＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの腫瘍に対する抑制率を求
めた。
おいてＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの腫瘍に対する抑制率を求
めた。
従って２本発明の多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａはヒトを含
む温血動物の各種の癌の予防及び治療に有用である。
む温血動物の各種の癌の予防及び治療に有用である。
投与は、癌の原発部位２手術後の癌摘出部位等の局所組
織内投与、皮肉、皮下、筋肉内、静脈内注射１局所への
塗布、噴霧、坐剤、膀胱内注入などの外用的投与法等の
非経口投与１錠剤。
織内投与、皮肉、皮下、筋肉内、静脈内注射１局所への
塗布、噴霧、坐剤、膀胱内注入などの外用的投与法等の
非経口投与１錠剤。
カプセル剤などの経口投与のいずれであってもよい。
投与量は投与法と癌の悪性度、癌の種類、温血動物の種
類や年令、病状や一般状態、癌の進行度等によって一定
したものではないが１例えばヒト（成人）に対し静注で
連設する場合の好ましい一日投与量は約１〜５００μｇ
／ｋｇである。
類や年令、病状や一般状態、癌の進行度等によって一定
したものではないが１例えばヒト（成人）に対し静注で
連設する場合の好ましい一日投与量は約１〜５００μｇ
／ｋｇである。
［実施例］
以下に実施例を掲記し２本発明を更に詳細に説明する。
なお、制癌作用物質の力価の測定は以下の方法によった
。
。
［５′−ヌクレオチダーゼ活性阻止物質の検定法］ス
基質溶液； ５．５ｍＭの塩化員グネシウムを含む５５
ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ＰＨ８，５ンに１．１ ｍＭ
のアデノシンモノホスツー−トナトリウム塩と１０ｍＭ
の酒石酸ナト リウム・カリウム塩を溶解したもの を用いる。
ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ＰＨ８，５ンに１．１ ｍＭ
のアデノシンモノホスツー−トナトリウム塩と１０ｍＭ
の酒石酸ナト リウム・カリウム塩を溶解したもの を用いる。
酵 素 液；ラット肝臓形質膜５′−ヌクレオチターゼ
測 定；基質溶液０．９ ｍｌと酵素液６０μｌ及び
ＹＭ〜３２２９ Ｇの培養液（又はＹＭ−３２２９Ｇの
水溶液、）４０μｔを加え温浴中３０Ｃで３０分間反応
させる。反応終了後。
測 定；基質溶液０．９ ｍｌと酵素液６０μｌ及び
ＹＭ〜３２２９ Ｇの培養液（又はＹＭ−３２２９Ｇの
水溶液、）４０μｔを加え温浴中３０Ｃで３０分間反応
させる。反応終了後。
ｌ ｍｌの１０％トリクロロ酢酸を加えて夾雑するタフ
バク質を沈澱させ、遠 心分離する。上清１ ｍｌをとり１％トリドア５０ｔｔ
ｌ、蒸留水３．５ ｒｎｌ及び２．５％（Ｗ／Ｖ ）モ
リブデン酸アンモニウムを含む５規定の硫酸水溶液０．
５ ｍｌを加え。
バク質を沈澱させ、遠 心分離する。上清１ ｍｌをとり１％トリドア５０ｔｔ
ｌ、蒸留水３．５ ｒｎｌ及び２．５％（Ｗ／Ｖ ）モ
リブデン酸アンモニウムを含む５規定の硫酸水溶液０．
５ ｍｌを加え。
２０分後６６０ｎｍの吸光度を用いて測定する。
実施例 １
（１） グルコース２．５％、大豆粉１．５％、綿実粕
０５％、肉エキス１％、炭酸カルシウム０．３％、塩化
カトリウム０．２％を含むｐＨ７，０の液体培地３ｔを
用意し、培地を５００ ｍｌの三角フラスコにそれぞれ
１００ ｒｎｌずつ分注し、 １２０ Ｃで２０分間滅
菌する。
０５％、肉エキス１％、炭酸カルシウム０．３％、塩化
カトリウム０．２％を含むｐＨ７，０の液体培地３ｔを
用意し、培地を５００ ｍｌの三角フラスコにそれぞれ
１００ ｒｎｌずつ分注し、 １２０ Ｃで２０分間滅
菌する。
滅菌終了後、了じめ調製したンユードモナスエスビー
ＹＭ−３２２９Ｇ株の前培養菌液をそれぞれのフラスコ
に２ｍｔずつ接種し、２７Ｃで４日間振盪培養する。
ＹＭ−３２２９Ｇ株の前培養菌液をそれぞれのフラスコ
に２ｍｔずつ接種し、２７Ｃで４日間振盪培養する。
培養終了後、それぞれのフラスコ中の培養液を集め、
６，０００回転、１０分間遠心分離し、遠心上清を集
めると１．９ｔの培養液が得られた（２５．３■／ｍ４
）。
６，０００回転、１０分間遠心分離し、遠心上清を集
めると１．９ｔの培養液が得られた（２５．３■／ｍ４
）。
この培養液には前記検定法で測定したところ。
５′−ヌクレオチダーゼ活性を５０％阻止する濃度を１
単位とすると、５′−ヌクレオチターゼ活性阻止物質が
全体量として４８万６千単位含有する。また、これを５
′−ヌクレオチターゼ活性物質収量当りの活性に換算し
て、その特異活性［５ｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ
（ｕｎｉｔｓ／ｍｇ） ］を求めるとｌＯに相当する
。
単位とすると、５′−ヌクレオチターゼ活性阻止物質が
全体量として４８万６千単位含有する。また、これを５
′−ヌクレオチターゼ活性物質収量当りの活性に換算し
て、その特異活性［５ｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ
（ｕｎｉｔｓ／ｍｇ） ］を求めるとｌＯに相当する
。
培養液を３（Ｋ減圧濃縮し、トリクロロ酢酸を最終濃度
５％となるように加え攪拌した後放置すると沈澱が生成
する。沈澱を１２，０００回転１５分間遠心分離して除
去する。
５％となるように加え攪拌した後放置すると沈澱が生成
する。沈澱を１２，０００回転１５分間遠心分離して除
去する。
遠心上清を中和した後セロファンチ、−プで３日間蒸留
水で脱塩透析する。透析内液にエタノールを５倍量加え
、生成する沈澱をｓ、ｏｏｏ回転１０分間遠心分離して
回収し、８５％エタノール水溶液。
水で脱塩透析する。透析内液にエタノールを５倍量加え
、生成する沈澱をｓ、ｏｏｏ回転１０分間遠心分離して
回収し、８５％エタノール水溶液。
エタノールｃ ｉｏｏ％）お、よびエーテルで順次洗浄
し、真空乾燥すると黄褐色の粗粉末１３．８ｇ （３９
万９千単位、特異活性２９．収率８２％）ｂ′−得られ
た。
し、真空乾燥すると黄褐色の粗粉末１３．８ｇ （３９
万９千単位、特異活性２９．収率８２％）ｂ′−得られ
た。
この粗粉末５．０ｇ （１４万５千単位）をとり、水５
００ｍ１ＶＣ溶解し、５０％トリクロロ酢酸水溶液１０
０ ｍｌを加え、４Ｃで３時間静置する。生成する沈澱
を１２．０００回転１５分間遠心分離して除去する。遠
心上清を中和した後、セロファンチューブで３日間蒸留
水で脱塩透析する。
００ｍ１ＶＣ溶解し、５０％トリクロロ酢酸水溶液１０
０ ｍｌを加え、４Ｃで３時間静置する。生成する沈澱
を１２．０００回転１５分間遠心分離して除去する。遠
心上清を中和した後、セロファンチューブで３日間蒸留
水で脱塩透析する。
次℃・で２この透析内液に陰イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ
１（ＯＨ−）（ダウ社製） ２００ ｍｌを加え、３時
間攪拌した後ｓ、ｏｏｏ回転１０分間遠心分離して樹脂
を除去ら６−３ この粗粉末１．１ｇ （＠万１千単位）をとり、 ０．
０１ Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，０） ５００
ｍｌに溶解し、同緩衝液で平衡化した陰イオン交換樹脂
ＤＥＡＥセルロース−５２（ワ、トマ／社製） １００
ｍｌを加え４Ｃで３時間攪拌する。樹脂を５，０００
回転１０分間遠心分離して除去し、得られた遠心上清を
セロフ７／チー−ブで３日間蒸留水で脱塩透析した後、
凍結
１（ＯＨ−）（ダウ社製） ２００ ｍｌを加え、３時
間攪拌した後ｓ、ｏｏｏ回転１０分間遠心分離して樹脂
を除去ら６−３ この粗粉末１．１ｇ （＠万１千単位）をとり、 ０．
０１ Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，０） ５００
ｍｌに溶解し、同緩衝液で平衡化した陰イオン交換樹脂
ＤＥＡＥセルロース−５２（ワ、トマ／社製） １００
ｍｌを加え４Ｃで３時間攪拌する。樹脂を５，０００
回転１０分間遠心分離して除去し、得られた遠心上清を
セロフ７／チー−ブで３日間蒸留水で脱塩透析した後、
凍結
第１図は本発明多糖ＹＭ−３２２９Ｇ−Ａの赤外線吸収
スペクトルである。
スペクトルである。
Claims (3)
- （１）繰返し単位が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｇｌｃはグルコース残基を、Ｍａｎはマンノー
ス残基を意味し、数字は結合位置を表わす） である多糖 - （２）繰返し単位が ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｇｌｃはグルコース残基を、Ｍａｎはマンノー
ス残基を意味し、数字は結合位置を表わす） である多糖生産能を有するシュードモナス属に属する微
生物を培地に培養し、培養物より前記多糖を採取するこ
とを特徴とする多糖の製法 - （３）培養物より菌体を除去し、溶剤に対する溶解性の
差、及び陽又は陰イオン交換樹脂に対する親和性の差を
利用する手段並びに脱塩透析によって精製し、凍結乾燥
により単離採取する特許請求の範囲第２項記載の製法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22458584A JPS61101501A (ja) | 1984-10-24 | 1984-10-24 | 制癌作用を有する多糖及びその製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22458584A JPS61101501A (ja) | 1984-10-24 | 1984-10-24 | 制癌作用を有する多糖及びその製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61101501A true JPS61101501A (ja) | 1986-05-20 |
Family
ID=16816035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22458584A Pending JPS61101501A (ja) | 1984-10-24 | 1984-10-24 | 制癌作用を有する多糖及びその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61101501A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6254701A (ja) * | 1985-05-10 | 1987-03-10 | Ajinomoto Co Inc | グルカン誘導体 |
| EP0352646A2 (en) * | 1988-07-26 | 1990-01-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | FR901228 Substance and preparation thereof |
| EP0591534A1 (en) * | 1991-06-14 | 1994-04-13 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Substances wb2663, production thereof and use |
| WO2000042062A1 (fr) * | 1999-01-13 | 2000-07-20 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Nouveau compose a base de depsipeptide |
-
1984
- 1984-10-24 JP JP22458584A patent/JPS61101501A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6254701A (ja) * | 1985-05-10 | 1987-03-10 | Ajinomoto Co Inc | グルカン誘導体 |
| EP0352646A2 (en) * | 1988-07-26 | 1990-01-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | FR901228 Substance and preparation thereof |
| EP0591534A1 (en) * | 1991-06-14 | 1994-04-13 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Substances wb2663, production thereof and use |
| EP0591534A4 (en) * | 1991-06-14 | 1994-10-19 | Fujisawa Pharmaceutical Co | SUBSTANCES WB2663, THEIR PRODUCTION AND USE. |
| WO2000042062A1 (fr) * | 1999-01-13 | 2000-07-20 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Nouveau compose a base de depsipeptide |
| US6670326B1 (en) | 1999-01-13 | 2003-12-30 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Depsipeptide compound |
| US7098024B2 (en) | 1999-01-13 | 2006-08-29 | Astellas Pharma Inc. | Depsipeptide compound |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS6215560B2 (ja) | ||
| JPH0566394B2 (ja) | ||
| JP2873340B2 (ja) | 抗生物質ｔａｎ―１０５７，その製造法および用途 | |
| JPS61101501A (ja) | 制癌作用を有する多糖及びその製法 | |
| JPS61236792A (ja) | 新規アントラサイクリン抗生物質 | |
| EP0254223A1 (en) | Bisucaberin, a process for producing this compound and its use as a medicament | |
| EP0084334B1 (en) | Polysaccharide substance, process for the production of same, pharmaceutical compositions containing the same and their use as medicaments | |
| JP3075873B2 (ja) | 新規な環状イソマルトオリゴ糖及びその製造法 | |
| JPS58129001A (ja) | 新規免疫活性多糖質およびその製造法 | |
| JP3459331B2 (ja) | 分岐シクロデキストリンカルボン酸の製造法 | |
| JPH0429356B2 (ja) | ||
| JP3192723B2 (ja) | 新規マクロライド抗生物質ｓｆ２７４８ｂ物質、ｓｆ２７４８ｃ１物質、ｓｆ２７４８ｄ物質およびｓｆ２７４８ｅ物質ならびにその製造法 | |
| JPS6055065B2 (ja) | ５−アミノ−２−カルボキシ−４−オキソ−１，４，５，６−テトラヒドロピリジン−３−酢酸誘導体 | |
| JP2594085B2 (ja) | 新規抗腫瘍抗生物質ｓｆ２５７５物質ならびにその製造法 | |
| EP0024206A2 (en) | Antitumor substance, composition comprising it and process for preparing said substance | |
| WO1985004408A1 (en) | Antibiotic tan-588, process for its preparation, and novel strainbelonging to genus empedobacter | |
| JP3071023B2 (ja) | 新規酵素阻害物質ピリジノスタチン及びその製造法 | |
| JPS60186298A (ja) | アドリアマイシンの製造法 | |
| JP2913101B2 (ja) | 抗生物質ｔａｎ―１１７１およびその製造法 | |
| JPS61104793A (ja) | 制癌作用を有する多糖及びその製造法 | |
| JPS5934896A (ja) | 抗腫瘍性多糖類の製造法 | |
| JPS6135832B2 (ja) | ||
| JPS6261999A (ja) | １３５物質 | |
| JPS597698B2 (ja) | フエガノマイシン群抗生物質 | |
| JPS6216426A (ja) | 抗腫瘍性成分ｓｐｆ−１０及びその製法 |