JPS63101400A

JPS63101400A - 抗腫瘍性成分ｓｐｆ−ｐｃｏ−２０

Info

Publication number: JPS63101400A
Application number: JP61244179A
Authority: JP
Inventors: Michitaka Kodera; 小寺　道高; Juzo Udaka; 重三鵜高; Hideo Kamiyama; 英夫上山; Junichi Taniguchi; 順一谷口; Katsumi Okumura; 奥村　克巳; Kenichi Arita; 健一有田; Masanori Yamamoto; 山本　真則; Hiroko Nariyama; 成山　博子
Original assignee: Shikibo Ltd; Shikishima Boseki KK
Current assignee: Shikibo Ltd; Shikishima Boseki KK
Priority date: 1986-10-16
Filing date: 1986-10-16
Publication date: 1988-05-06

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、新規な抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０及
びその製法に関するものである。

従来、溶血性連鎖状球菌（以下溶連菌という）の生菌体
を弱毒化して製剤化したものは、すてに裂癌剤として使
用されている。

また、溶連菌の菌体を破砕後、水または塩類溶液で有効
成分を抽出し、有機溶媒を加えて、抗腫瘍性成分を沈澱
として、回収する方法（特公昭３８−１６４７）、溶連
菌を溶菌酵素、リゾチーム、セルラーゼまたは蛋白質分
解酵素により溶菌し、活性画分を水溶性区分として分画
する方法（英国特許１１６３８６５号）、溶連菌の菌体
を破砕接水不溶性物質を採取し、核酸分解酵素および蛋
白分解酵素で処理する方法（特開昭５５−７０１４）な
どが知られている。

このように、ストレプトコッカス属細菌そのものもしく
はその菌体成分に抗腫瘍活性があること′は広く知られ
ているのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは
菌体内成分であり、有効成分として測定された例では分
子ｉ　２００，０００の蛋白質（特公昭４８−４３８４
１、特開昭５ｌ−４４６１７）及び分子量ｉｓｏ、ｏｏ
ｏの糖蛋白質（特“開昭５８−２２０２６）が知られて
いる程度である。

また、ストレプトコッカス属細菌は、抗腫瘍性成分を菌
体外に出さないものとして知られてきた。

（ｔＬ　Ｏｋａｍｏｔｏ、　Ｓ、　５ｈｏｉｎ、　Ｓ、
　Ｋｏｓｈｉｍｕｒａ。

５ｔｒｅｐｔｏｌｙｓｉｎ　Ｓ−ｆｏｒｍｉｎｇ　ａｎ
ｄ　ａｎｔｉｔｕｍｏｕｒａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　　ｏ
ｆ　　Ｇｒｏｕｐ　　Ａ　　５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ
、　　Ｉｎ“Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｔｏｘｉｎｓ　ａｎ
ｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ、”　ｅｄ、　Ｊ。

Ｊｅｌｊａｚｅｗｉｃｚ　ａｎｄ　Ｔ、すａｄｓｔｒ２
；ｍ、　ｐｐ、２５９−２８９゜Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ
ｒｅｓｓ、　Ｌｏｎｄｏｎ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　５
ａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ、１９７８）。

本発明者らは、先に溶連菌の培養液中に抗腫瘍性成分を
溶出させる方法を鋭意研究したところ、培養中にペニシ
リン又はその関連物質を添加することによって抗腫瘍性
成分が培養液中に溶出することを見出しく特開昭６０−
３０６７７号）、培養液中から生理活性物質ＳＰＦ−１
（特開昭６０−３０６８９号）及びＳＰＦ−１４０（特
開昭６ｌ−６９７２５）を分離するに至ったのである。

本発明者らは、更に、溶連菌の培養濾液中がら簡単に、
より有効な成分を分離する目的で研究したところ、培養
中にペニシリン又はその関連物質を添加しても、しなく
ても、培養物中に新たな抗腫瘍性成分が存在することを
確認し、この新規抗腫瘍性成分をＳＰＦ−ＰＣＯ−２０
と命名し、本発明を完成するに至った。

本発明の抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０（以下、単
にＳＰＦ−ＰＣＯ−２０ということもある）は培養細胞
Ｊ７７４−１の生育を阻害する画分であることにより特
徴づけることもできる。

また、本発明は、ペニシリン又はその関連物質を添加し
なくてもよいため、ペニシリン又はその関連物質に要す
るコストの低減、ペニシリン又はその関連物質添加後に
要する培養時間の短縮、さらにペニシリンを用いないた
め、製品中に混入した場合生じる可能性のあるペニシリ
ンショックを防ぐなどの利点の他、ペニシリン又はその
関連物質の添加による抗腫瘍活性成分以外の余分の菌体
成分の混入が減少し、簡単に精製出来るなど多くの利点
を有する。

また、ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の精製は、培養濾液もしく
はその限外濾過濃縮液に、メタノール、エタノール等の
アルコール類またはアセトン等の有機溶剤を添加すると
き培養細胞Ｊ７７４−１で測定されるほとんどの活性が
効果的に少量の沈澱物として得られ、その沈澱物を、ハ
イドロキシアパタイトに吸着させＯ，Ｏｌ、Ｍリン酸緩
衝液で洗浄後０．１Ｍリン酸緩衝液で溶出させるだけで
著しるしく簡潔に行うことができるものである。

本発明の抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は、元素分
析、呈色反応、赤外線吸収スペクトル、電気泳動等から
糖を含むペプチド様物質と考えられるが、紫外線吸収ス
ペクトルおよび赤外線吸収スペクトルから、既知の抗腫
瘍性物質とは相違する新規な物質と認められるものであ
る。

本発明は、ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性成分
ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０生産菌を培養し、培養物から抗腫
瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０を採取することを特徴と
する抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の製造法を包含
するものである。

本発明においては、ストレプトコッカス属に属する抗Ｍ
１瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０生産菌が広く使用でき
る。

次に抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０生産菌の例を記
載する。

ストレプトコッカス・ピオゲネス　ＡＴＣＣ２１５４７
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）培
養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、プレイン・ハ
ート・インフュージョン培地（ＢＨＩ培地）等の天然培
地がよく用いられるが、ストレプトコッカス属細菌の生
育に適した培地であれば任意の培地を使用できる。

培養ｐ）１は、５．０〜８．０、好ましくは、６．１〜
７．２であり、温度は３０〜４０℃、好ましくは３５℃
〜３７℃であり、嫌気的に静置培養または撹拌培養を行
うことができる。

培養時間は、対数増殖期にかかって後１〜３０時間、好
ましくは２〜２０時間である。

培養液は遠心分離によって菌体を除去し、濾液を得る。

濾液は、硫安を添加し５０〜９０％飽和度の画分とし濃
縮するか、もしくは、限外濾過膜を用いて濃縮すること
もできる。

得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０を含む濃縮
液は、凍結状態で保存することもできる。

抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は、培養濾液もしく
は濃縮液に、メタノール、エタノール等のアルコール類
、アセトン等の有機溶媒を添加することにより、沈澱物
として得られる。

メタノール、エタノール等のアルコール類又はアセトン
等の有機溶媒は、培養濾液又は濃縮液１部に対して０．
６５〜３部、好ましくは０．６５〜１．５部撹拌しなが
ら添加する。その場合抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２
０を含む沈澱物は、遠心分離により分離できる。

このようにして得た沈澱物は、水もしくはＢＳ液に溶解
し、ハイドロキシアパタイトに吸着させ、０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液で充分洗浄後０．１Ｍリン酸緩衝液で溶出さ
せるとき、抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０を得るこ
とができる。

次に、実施例１で得られた抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ
−２０の凍結乾燥標品は次の理化学的性質を示す。

抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の理化学的性質。

１、元素分析Ｃ３８，２〜４０．５Ｈ５，５〜　６．６Ｎ　　　　２．３〜３．２０　　　５０．９〜４６．３Ａｓｈ　　　　３．１〜３．４２、分解点本物質は１８５℃で褐変し、２６７℃になると黒色とな
り分解する。

３、比旋光度〔α）２０℃ｇＯ°〜１５０”　（Ｃ＝１．００）４、
紫外線吸収スペクトル本物質の水溶液の紫外線吸収スペクトルは第１図に示さ
れる。

５、赤外線吸収スペクトル第２図に示される。

６、塩基性、酸性、中性の区別本物質の０．１％の水溶液のｐＨは５．３〜５．７であ
る。

７、物質の色白ないし微黄色８、呈色反応ローリ−反応　　　　　十ビューレット反応　　　十ニンヒドリン反応　　　十アンスロン硫酸反応　　十システィン硫酸反応　　十オルシン反応　　　　　− ９、分子量ゲル濾過法による測定では、分子量１０，０００以上で
ある。

１０、陰イオン交換体に対する挙動ハイドロキシアパタイトに吸着され、０．１Ｍリン酸緩
衝液により溶出される。

１１、溶剤に対する溶解性水に可溶であるが、メタノール、エタノール、ｎ−プロ
パノール、アセトン、エチルエーテル、ｎ−ヘキサン、
クロロホルム、酢酸エチル等の溶剤には、難溶又は不溶
である。

１２、温度に対する安定性本物質の水溶液は、４５°Ｃ３０分の加熱後もインビト
ロで測定される抗腫瘍性活性の多くを保持する。

１３、蛋白質分解酵素に対する安定性本物質は、トリプシン又はプロアーゼによる処理後もイ
ンビトロで測定される抗腫瘍性活性の多くを保持する。

１４、ＳＤＳアクリルアミドゲル電気泳動で糖と蛋白に
分離するのが確認される。

次にインビトロにおける培養細胞Ｊ７７４−１に対する
抗腫瘍性活性の測定方法を示す。

培養細胞Ｊ７７４−１による抗腫瘍性活性の測定方法（
Ａ）培養細胞Ｊ７７４−１の生育阻止率（ＩＲ％）の測
定により行う方法。

標品（抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０）を目的濃度
になるように生理食塩水に溶解しファルコン社製平底９
６穴プレート（Ｎα３０７２）に２０μＱ注加し、２段
階希釈法により生理食塩水で希釈した。

別に、Ｊ７７４−１細胞を１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ　
１６４０培地（８０■／Ｑカナマイシン含有）に懸濁し
、この細胞ｉ１Ｊ　濁液２００μＱを上記プレートの各
穴に注加し、細胞数Ｉ　Ｘ　１０′″ｃｅｌｌｓ／νｅ
ｌｌになるようにした。このプレートは３７℃で５％Ｃ
Ｏ２存在下培養した。

７２時間後、上澄を完全に除去し、メチルアルコールを
加えることによって、細胞をプレート底に固定させた。

３０分後メチルアルコールを除去し、ＰＢＳ　（−）に
溶解した０、０５％メチレンブルーを加え細胞を染色し
た。この場合、生細胞のみがメチレンブルー色素を取り
込む。１時間後染色液を除去しＰＢＳ（−）で３回ウェ
ルを洗浄した後、３％Ｈ（、Ｑを用いて細胞内の色素を
抽出した。この抽出液は、６６５ｎｍの吸収値（００−
６ｓと略す）を測定し、次式を用いて生育阻止率（ＩＲ
％）を算出した。以下この方法をｄｙｅ　ｕｐｔａｋｅ
　ｍｅｔｈｏｄと略す。

ここで対照群は、標品を含まないウェルの平均値を示す
。

（Ｂ）検鏡による膨化活性の測定（Ａ）において、７２時間後Ｊ７７４−１細胞について
ｄｙｅｕｐｔａｋｅ　ｍｅｔｈｏｄを行う前に倒立顕微
鏡で形態観串を行った。

標品を含む群は、Ｊ７７４−１細胞に明確な膨化が観察
された。膨化の度合は、メチレンブルーによる色素取り
込み（ｄｙｅ　ｕｐｔａｋｅ　ｍｅｔｈｏｄ）で求めら
れるＩＲ％とよく一致し、膨化の認められる最少濃度を
標品の最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）とした。よって、簡
単に行うため検鏡で認められる膨化によって示されるＭ
ＩＣを用いた。

実施例１ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）　
ＡＴＣＣ２１０６０をＢＨＩ培地培地１００ｍ液種して
３７℃、８時間静置培養をおこなって得た種培養液を第
１表に示す培地Ａｌｆｌに接種し、種培養と同一条件で
嫌気的に前培養を行った。

第１表　培地Ａマルトース　　　　　　　０．２５％肉エキス　　　　　　　　１．０％ポリペプトン　　　　　　１．０％酵母エキス　　　　　　　０．２５％ＫＨ２ＰＯ４０，１％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０５％ＮａＣΩ　　　　　　　　　　　　　　　　０．１％ｐ
＋（６，５１０（２ジャーファーメンタ−に培地Ａ８Ｑを投入して
１２０℃、１０分間加熱殺菌後、３７℃まで冷却して、
前培養液ＩＱを接種し、３７℃、１５．５時間、ｐＨ６
，５，５０ｒ、９６ｍ、で撹拌しながら嫌気的に培養す
る。

得られた培養液を遠心分離にかけて菌体を除去し、培養
濾液を得た。培養濾液の濃縮方法は次の通り行った。

培養濾液は、分画分子ｆｉ１１０，０００の限外濾過膜
（米国、ロミコン社）を用いて、１．５Ｑに濃縮した。

この濃縮液を用いて下記の通り精製した。

濃縮液は、充分冷却しつつ、あらかじめ冷却しておいた
エチルアルコール１．ＯＱを少量づつ撹拌下に加え、４
時間放置した。この場合、１０°Ｃを超えないように処
理した。生じた沈澱物は、冷却下遠心分離機を用いて集
め、凍結乾燥した。凍結乾燥標品は、０．０１Ｍリン酸
緩衝液に溶解し、０．０昧リン酸緩衝液で平衡化したハ
イドロキシアパタイトカラムに吸着させ、Ｏ，０１Ｍリ
ン酸緩衝液で充分洗浄後０．１Ｍリン酸緩衝液で溶出し
てくるフラクションをプール後、脱イオン水に対して透
析し、凍結乾燥した。この凍結乾燥標品は抗腫瘍性成分
ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０であり、１１５ｍｇを得た。

実施例２ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第２表に示した培地Ｂを用いて実施例１と同様に培養し
た。培養濾液の濃縮方法、及び精製方法は、実施例１と
同様に行ない抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０を６８
ｍｇ得た。

第２表　培地Ｂグルコース　　　　　　　０．３％プロテオースペプトン　　０．５％酵母エキス　　　　　　　０．２５％ＫＨ２ＰＯ４０，１％Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４・７１（、ＯＯ，０５％ＮａＣ１０，
１％ｐＨ６，５実施例３ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第３表に示した培地Ｃを用いて実施例１と同様に培養し
た。

この場合培養は４０℃、６時間、ｐＨ６，０で撹拌しな
がら行なった。培養濾液の濃縮方法及び精製方法は実施
例１に示す方法で行ったが、エチルアルコール１．ＯＱ
に代えてメチルアルコールを１．５Ｑ用いた。ここで得
た抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は１１０ｍｇであ
った。

第３表　培地Ｃマルトース　　　　　　　０．２５％肉エキス　　　　　　　　０．５％ポリペプトン　　　　　　０．５％酵母エキス　　　　　　　０．２５％ＫＨ，ＰＯ４０，０１％ＭｇＳＯ４・７１１□Ｏ’　　　　　　　０．００５％
ＮａＣＱ　　　　　　　　　　　Ｏ，１％ＰＨ６，０実施例４ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第４表に示した培地りを用いて実施例１と同様に培養し
た。

この場合培養は３０℃、２０時間、ｐＨ７，０で撹拌し
ながら行なった。

第４表　培地Ｄグルコース　　　　　　　０．５％カザミノ酸　　　　　　　０．５％酵母エキス　　　　　　　０．２５％ＫＨ２Ｐ０．　　　　　　　　　０．１％ＭｇＳＯ４・
７１１□ＯＯ，０５％ＮａＣΩ　　　　　　　　　　０．１％ｐＨ７，０培養濾液の濃縮方法及び精製方法は実施例１に示す方法
で行ったが、エチルアルコール１．０　Ｑに代えてエチ
ルアルコールを３．ＯＱ用いた。ここで得た抗腫瘍性成
分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は６７ｍｇであった。

実施例５ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１０６０を
第５表に示した培地Ｅを用いて実施例１と同様に培養し
た。

この場合培養は３７℃、１０時間、ＰＨ６，５で撹拌し
ながら行なった。

第５表　培地Ｅフラクトース　　　　　　０．３％ポリペプトン　　　　　　１．０％酵母エキス　　　　　　　０．５％ＫＨ□ＰＯ，０，１％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０５％ＮａＣＱ　　　　　　　　　　　Ｏ，１％ｐＨ６，５培養濾液の濃縮方法及び精製方法は実施例１に示す方法
で行ったが、エチルアルコール１．ＯＱに代えてエチル
アルコール１．２３０を用いた。ここで得た抗腫瘍性成
分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は１０ｍｇであった。

実施例６ストレプトコッカス・エスピーＡＴＣＣ２１５９７を第
２表に示した培地Ｂを用いて実施例２と全く同様に培養
した。

この場合、培養条件、さらに濃縮方法及び精製方法は実
施例２と全く同じ条件で行った。

こへで得た抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は６３ｍ
ｇであった。

実施例７ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１５４６を
第２表に示した培地Ｂを用いて実施例２と同じ条件で培
養した。

こ＼で得た抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は５７ｍ
ｇであった。

実施例８ストレプトコッカス・ピオゲネスＡＴＣＣ２１５４７を
第２表に示した培地Ｂを用いて実施例２と全く同様に培
養した。

ここで得た抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は５８ｍ
ｇであった。

実施例９ストレプトコッカス・ピオゲネスＡ　ＴＣＣ６２１５４
８を第２表に示した培地Ｂを用いて実施例２と全く同様
に培養した。

ここで得た抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０は６３ｍ
ｇであった。

実験例１抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０のインビトロにおけ
る抗腫瘍性試験は１本文中に記載した抗腫瘍性活性の測
定方法により行ない、その結果を第６表及び第７表に示
す。

第６表　ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０のＪ７７４−１に対する
抗腫瘍活性の結果Ｊ７７４−１に対するＭＩＣ実施例１　　　　　３２μｇ／ｍｌ実施例２　　　　　１６μｇ／ｍｌ実施例３　　　　　３２μｇ／ｍｌ実験例２抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０のインビボにおける
抗腫瘍性活性試験は、Ｃｒｊ　；　ＣＤ−１（ＩＣＲ系
、雄性５週齢）マウスを使用した。腫瘍細胞としては、
Ｓａｒｃｏｍａ−１８０腹水癌細胞を用い、これを生理
食塩水に浮遊させ、マウスの腹腔内に５　Ｘ　１０’ｃ
ｅｌｌｓ／マウス接種した。

癌細胞接種２４時間後から、１日１回５日間連続してＳ
ＰＦ−ＰＣＯ−２０を腹腔内に投与してその生存数をｉ
ｓしその結果を第７表に示す。

第７表　ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の抗腫瘍活性−マウスの
生存数日　　数　　　　　　　　　　　　　　０　　　
１０　　　１５　　　２０　　　２５　　　３０コント
ロール　　　　　８／８　８／８　２／８　０／８　０
／８　０／８実施例１（２■／マウス）　　８／８　８
／８　８／８　７／８　６／８　６／８実施例２（２■
／マウス）　　８／８　８／８　８／８　８／８　６／
８　６／８実施例３（２■／マウス）　　８／８　８／
８　７／８　７／８　７／８　６／８

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の紫外吸
収スペクトルを示し、第２図は同じ＜ＫＢｒ法による赤
外線吸収スペクトルを示す。代理人　弁理士　戸　１）親　男第　　１　　図１Ｉ、ＫＪｊＬＪＩＪ　　　　　　　　４１ＪＬＪ　　
　　　　　　ｕｍ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の理化学的性質を有する抗腫瘍性成分ＳＰＦ
−ＰＣＯ−２０。１、元素分析Ｃ　　３８．２〜４０．５Ｈ　　　５．５〜６．６Ｎ　　　２．３〜３．２Ｏ　　５０．９〜４６．３Ａｓｈ　３．１〜３．４２、分解点本物質は１８５℃で褐変し、２６７℃になると黒色とな
り分解する。３、比旋光度〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝８０°〜１５０°（Ｃ＝１．００
）４、紫外線吸収スペクトル本物質の水溶液の紫外線吸収スペクトルは第１図に示される。５、赤外線吸収スペクトル第２図に示される。６、塩基性、酸性、中性の区別本物質の０．１％の水溶液のｐＨは５．３〜５．７であ
る。７、物質の色白ないし微黄色８、呈色反応ローリー反応　　　　＋ビューレット反応　　＋ニンヒドリン反応　　＋アンスロン硫酸反応　＋システイン硫酸反応　＋オルシン反応　　　　− ９、分子量ゲル濾過法による測定では、分子量１０，０００以上で
ある。１０、陰イオン交換体に対する挙動ハイドロキシアパタイトに吸着され、０．１Ｍリン酸緩
衝液により溶出される。１１、溶剤に対する溶解性水に可溶であるが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、アセトン、エチルエーテル、ｎ
−ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル等の溶剤には難
溶又は不溶である。１２、温度に対する安定性本物質の水溶液は、４５℃３０分の加熱後もインビトロ
で測定される抗腫瘍性活性の多くを保持する。１３、蛋白質分解酵素に対する安定性本物質は、トリプシン又はプロアーゼによる処理後もインビトロで測定される抗腫瘍性活性の多く
を保持する。１４、ＳＤＳアクリルアミドゲル電気泳動で糖と蛋白に
分離するのが確認される。
（２）ストレプトコッカス属に属する抗腫瘍性成分ＳＰ
Ｆ−ＰＣＯ−２０生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性
成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０を採取することを特徴とする
抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の製法。
（３）抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の採取が培養
細胞Ｊ７７４−１の生育を阻害する画分を分取するもの
であることを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の
抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の製法。
（４）抗腫瘍性成分ＳＰＦ−ＰＣＯ−２０の採取が、培
養液を限外濾過膜で濃縮し、得られた濃縮液を溶剤沈澱
せしめ、次いでハイドロキシアパタイトに吸着させ、０
．１Ｍリン酸緩衝液で溶出せしめるものであることを特
徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗腫瘍性成分Ｓ
ＰＦ−ＰＣＯ−２０の製法。