JPS60218324A - 生理活性物質ｓｐｆ−２及びその製法 - Google Patents
生理活性物質ｓｐｆ−２及びその製法Info
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- JPS60218324A JPS60218324A JP59072866A JP7286684A JPS60218324A JP S60218324 A JPS60218324 A JP S60218324A JP 59072866 A JP59072866 A JP 59072866A JP 7286684 A JP7286684 A JP 7286684A JP S60218324 A JPS60218324 A JP S60218324A
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規な生理活性物質８ＰＦ−２及びその製法
に関するものである。
に関するものである。
更に詳細には、本発明は、抗腫瘍性物質としてきわめて
有望な生理活性物質５ＰＦ−２及びその製法に関するも
のである。
有望な生理活性物質５ＰＦ−２及びその製法に関するも
のである。
従来、溶連菌の生菌体を弱毒化して製剤化したもの′は
、すでに制癌剤として使用されている。
、すでに制癌剤として使用されている。
また、ストレプトコッカス・ピオゲネスの菌体を破砕抜
水または塩類溶液で有効成分を抽出し、有機溶媒を加え
て、抗腫瘍性成分を沈澱として、回収する方法（特公昭
３Ｂ−１６４７）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチーム、セ
ルラーゼまたは蛋白質分解酵素によ、す、溶菌し、活性
画分を水溶性区分として分画する方法（英国特許第１１
６３８６５号）などが知られている。
水または塩類溶液で有効成分を抽出し、有機溶媒を加え
て、抗腫瘍性成分を沈澱として、回収する方法（特公昭
３Ｂ−１６４７）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチーム、セ
ルラーゼまたは蛋白質分解酵素によ、す、溶菌し、活性
画分を水溶性区分として分画する方法（英国特許第１１
６３８６５号）などが知られている。
このように、ストレプトコツカス属細菌そのものもしく
はその菌体成分に抗腫瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
可溶性もしくけ不溶性高分子細胞構成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したシし
て全体を分画しなければならなかった。このような処理
によれば、精製は複雑となシ、有効成分の単離はきわめ
て困難であった。実際に分離し、有効成分として測定さ
れた例では分子量１５０，０００の蛋白質が知られてい
る。（特公昭４Ｂ−４６８４１’）本発明者らは、よシ
すぐれた抗腫瘍性有効成分を溶連菌にめて鋭意研究した
結果、全く新規な生理活性物質５ＰＦ−２を培養液中に
見出すに至ったのである。
はその菌体成分に抗腫瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
可溶性もしくけ不溶性高分子細胞構成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したシし
て全体を分画しなければならなかった。このような処理
によれば、精製は複雑となシ、有効成分の単離はきわめ
て困難であった。実際に分離し、有効成分として測定さ
れた例では分子量１５０，０００の蛋白質が知られてい
る。（特公昭４Ｂ−４６８４１’）本発明者らは、よシ
すぐれた抗腫瘍性有効成分を溶連菌にめて鋭意研究した
結果、全く新規な生理活性物質５ＰＦ−２を培養液中に
見出すに至ったのである。
本発明の生理活性物質５ＰＦ−２Ｆｉ培養培養中外に排
出され、培養液中に存在するようになるので、菌体を濾
過して除去し、培養Ｆ液を精製すればよいので、単離は
かなシ容易なものとなる。
出され、培養液中に存在するようになるので、菌体を濾
過して除去し、培養Ｆ液を精製すればよいので、単離は
かなシ容易なものとなる。
本発明の生理活性物質５ＰＦ−２は培養液中忙排出され
るとともに一分子量が約７，０００〜２５．０００であ
ることＫよって特長づけられる。
るとともに一分子量が約７，０００〜２５．０００であ
ることＫよって特長づけられる。
従来、溶連菌関連の生理活性物質で、培養液中に蓄積さ
れたものはなく、また分子量も敵方以下のものは知られ
ておらず、本発明の生理活性物質５ＰＦ−２は全く新規
な物質と認められる。
れたものはなく、また分子量も敵方以下のものは知られ
ておらず、本発明の生理活性物質５ＰＦ−２は全く新規
な物質と認められる。
また、本発明の生理活性物質５ＰＦ−４は、元素分析、
呈色反応等からペプチド性物質と認められるが、紫外線
吸収スはクトルで特異な吸収があシ、従来広く知られた
抗腫瘍活性物質などとも明らかに相違する物質であって
、物質として新規なものと認められるものである。
呈色反応等からペプチド性物質と認められるが、紫外線
吸収スはクトルで特異な吸収があシ、従来広く知られた
抗腫瘍活性物質などとも明らかに相違する物質であって
、物質として新規なものと認められるものである。
本発明は、ストレプトコツカス属に属する生理活性物質
５ＰＦ−２生産菌を培養し、培養物から生理活性物質５
ＰＦ−２を採取することを特徴とする生理活性物質５Ｐ
Ｆ−２の製法を包含するものである。
５ＰＦ−２生産菌を培養し、培養物から生理活性物質５
ＰＦ−２を採取することを特徴とする生理活性物質５Ｐ
Ｆ−２の製法を包含するものである。
本発明においては、ストレプトコツカス属に属する生理
活性物質５ＰＦ−２生産菌が広く使用さｈるが、その−
例としてストレプトコッカス・ピオゲネス（５ｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ） Ａ Ｔ Ｃ
Ｃ２１０６０があげられる。
活性物質５ＰＦ−２生産菌が広く使用さｈるが、その−
例としてストレプトコッカス・ピオゲネス（５ｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ） Ａ Ｔ Ｃ
Ｃ２１０６０があげられる。
培養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、プｔ、’４
ン・ハート・インフュージョン培地（ＢＨＩ培地）等の
天然培地がよく用いられるが、ストレプトコツカス属細
菌が有効に生育する培地であれば炭素源、窒素源等含ん
だ一般培地も使用することができる。
ン・ハート・インフュージョン培地（ＢＨＩ培地）等の
天然培地がよく用いられるが、ストレプトコツカス属細
菌が有効に生育する培地であれば炭素源、窒素源等含ん
だ一般培地も使用することができる。
培養はｐＨ５，０〜８．０、好ましくは６．１〜Ｚ２で
３０〜４０℃好ましくは６５〜３７℃であシ嫌気的に静
置培養をおこなうのが一般的であるが、その他攪拌培養
等の変法も採用することができる。
３０〜４０℃好ましくは６５〜３７℃であシ嫌気的に静
置培養をおこなうのが一般的であるが、その他攪拌培養
等の変法も採用することができる。
本発明においては、培養中の適当な時期にはニジリン又
はその関連物質を添加するととか、生理活性物質８ＰＦ
−２の取得忙重要な役割をはたすことになる。
はその関連物質を添加するととか、生理活性物質８ＰＦ
−２の取得忙重要な役割をはたすことになる。
ペニシリン又はその関連物質の添加時期は３７℃の培養
で対数増殖期にかかつて後３〜２０時間の間、特に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間好まし
くＦｉ３〜１５時間そのまま培養を続けることによって
、培養液中に生理活性物質５ＰＦ−２を多量蓄積させる
ことができる。
で対数増殖期にかかつて後３〜２０時間の間、特に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間好まし
くＦｉ３〜１５時間そのまま培養を続けることによって
、培養液中に生理活性物質５ＰＦ−２を多量蓄積させる
ことができる。
ハニシリン又はその関連物質としてはすでに知られたペ
ニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいかなる
ものでもよいが、ペニシリンＧが普通周込られる。添加
量はペニシリンＧで１００〜６０００単位／ゴ、好まし
くは３００〜１，５００単位／ｄ培養液程度で十分であ
る。
ニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいかなる
ものでもよいが、ペニシリンＧが普通周込られる。添加
量はペニシリンＧで１００〜６０００単位／ゴ、好まし
くは３００〜１，５００単位／ｄ培養液程度で十分であ
る。
得られた培養液は、遠心分離によって菌体を除去し、涙
液に硫安を添加し５０〜９０俤飽和度の両分を分取して
得られた沈澱物を安定剤を加えた緩衝液に溶解する。
液に硫安を添加し５０〜９０俤飽和度の両分を分取して
得られた沈澱物を安定剤を加えた緩衝液に溶解する。
生理活性物質８ＰＦ−２含有液は凍結状態で又は凍結乾
燥して保存することができる。この物質は必要に応じて
イオン交換体あるいはゲル濾過剤と接触せしめてさらに
精製することができる。イオン交換体としてはイオン交
換樹脂、イオン交換セルローズ、イオン交換セファデッ
クス（ファルマシア社製）等が用いられ、ゲル沢過剤と
しては、 １トヨバー＃ＨＷ５０ＦまｆｃはＨＷ−５０
ＳＦ （東洋曹達（株）ｆｆ）、セファデックス（ファ
ルマシア社製）等が用いらり、る。またカルシウムホス
フェートゲルはそのままでも使用できるが、ハイトロキ
シルアパタイトの形で使用するのが便利である。前記の
ようにして得られた物質の水溶液をこれらのイオン交換
体又はゲル濾過剤を充填し九カラムに、適当な速度で通
過せしめるか、あるいはイオン交換体又はゲル濾過剤を
入れた一定容器中に一度にその水溶液を加えて、これら
の処理剤と有効物質を接触させる。溶出は適当な塩濃度
と…の緩衝液を用いて行なう。イオン変換体、ゲル濾過
剤又はカルシウムホスフェートゲルは２種以上組合わせ
て用りることもできる。たとえばＤＥＡＲセファデック
スと接触させ、溶出した液を更にトヨパールＨＷ５０Ｆ
ｔたは５０８Ｆと接触させそして溶出を行なうと、更に
精製の効果を上げることができる。
燥して保存することができる。この物質は必要に応じて
イオン交換体あるいはゲル濾過剤と接触せしめてさらに
精製することができる。イオン交換体としてはイオン交
換樹脂、イオン交換セルローズ、イオン交換セファデッ
クス（ファルマシア社製）等が用いられ、ゲル沢過剤と
しては、 １トヨバー＃ＨＷ５０ＦまｆｃはＨＷ−５０
ＳＦ （東洋曹達（株）ｆｆ）、セファデックス（ファ
ルマシア社製）等が用いらり、る。またカルシウムホス
フェートゲルはそのままでも使用できるが、ハイトロキ
シルアパタイトの形で使用するのが便利である。前記の
ようにして得られた物質の水溶液をこれらのイオン交換
体又はゲル濾過剤を充填し九カラムに、適当な速度で通
過せしめるか、あるいはイオン交換体又はゲル濾過剤を
入れた一定容器中に一度にその水溶液を加えて、これら
の処理剤と有効物質を接触させる。溶出は適当な塩濃度
と…の緩衝液を用いて行なう。イオン変換体、ゲル濾過
剤又はカルシウムホスフェートゲルは２種以上組合わせ
て用りることもできる。たとえばＤＥＡＲセファデック
スと接触させ、溶出した液を更にトヨパールＨＷ５０Ｆ
ｔたは５０８Ｆと接触させそして溶出を行なうと、更に
精製の効果を上げることができる。
実施例８で得られた本発明活性物質５ＰＦ−２はベゾチ
ド性物質で、凍結乾燥すると淡黄色の粉末となる。
ド性物質で、凍結乾燥すると淡黄色の粉末となる。
次に、生理活性物質５ＰＦ−２の理化学的性質を示す。
１、 元素分析
２ 分子量
ゲル濾過法による測定では、分子量約
７．０００〜２５．０００である。
３、分解点
本物質は１６０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
り分解する。
り分解する。
４、比旋光度
〔α）＝＋３０．７°（ｃ＝１．ＯＤ）５、紫外線吸収
スはクトル 本物質の０．２チの水溶液の紫外線吸収スペクトルは第
１図に示される。２５７ｎｍ。
スはクトル 本物質の０．２チの水溶液の紫外線吸収スペクトルは第
１図に示される。２５７ｎｍ。
２６５ｎｍ、２７５ｎｍ、２８０ｎｍ、２８７ｎｍ。
および５２５ ｎｍに吸収がみらｔ、特徴的である。
６、赤外線吸収スペクトル
第２図に示される。
Ｚ 溶剤に対する溶解性
水に可溶であるが、メタノール、エタノール、ニは一部
溶解し、ｎ−ブタノール、インブタノール、ｎ−プ四パ
ノール、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、アセトン、メチ
ルイソブチルケトン、エチルエーテル等の溶剤には難溶
又は不溶である。
溶解し、ｎ−ブタノール、インブタノール、ｎ−プ四パ
ノール、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、アセトン、メチ
ルイソブチルケトン、エチルエーテル等の溶剤には難溶
又は不溶である。
８、塩基性、酸性、中性の区別
本物質の１．０チ水溶液の声は６．５である。
９ 物質の色
淡黄色粉末状である。
１０、呈色反応
ニンヒドリン反応 十
ビュウレット反応 十
モーリッシュ反応 −
デイシエ反応 −
アンスロン反応 −
システィン硫酸反応 −
１１、安定化
本物質はＬ−システィン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、α−およ
びβ−サイクロデキストリン、（Ｎ）Ｔ４）２ｓｏ４、
食塩等の添加によって安定化される。
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、α−およ
びβ−サイクロデキストリン、（Ｎ）Ｔ４）２ｓｏ４、
食塩等の添加によって安定化される。
次に本発明の実施例を示す。
なお実施例における生理活性物質８ＰＦ−２の活性単位
の測定は鵜高法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉ
ｏｔｉｃｓｖｏ１３５Ａ１０ １５１９〜１５２５ ０
ＣＴ１９８２）によった。測定には高分子透過性大腸菌
変異株ＭＰ−２（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５２）（Ａｇｒｉｃ
、Ｂｉｏｌ。
の測定は鵜高法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉ
ｏｔｉｃｓｖｏ１３５Ａ１０ １５１９〜１５２５ ０
ＣＴ１９８２）によった。測定には高分子透過性大腸菌
変異株ＭＰ−２（ＦＥＲＭ−Ｐ５４５２）（Ａｇｒｉｃ
、Ｂｉｏｌ。
Ｃｈｅｍ、４３ ３７１（１９７９）を使用してＭＰ−
２姉対する抗菌活性を指標としてバイオ・アッセイする
。
２姉対する抗菌活性を指標としてバイオ・アッセイする
。
すなわち、バクト・アンチパイオチックメディアム３（
ディフコ社製品）１．７５％、寒天１．６チよシ成る培
地（Ｍ、培地）を１２０℃、１５分加熱殺菌し、２０ｄ
ずつシャーレに分注し、放冷してプレート培地を調製す
る。
ディフコ社製品）１．７５％、寒天１．６チよシ成る培
地（Ｍ、培地）を１２０℃、１５分加熱殺菌し、２０ｄ
ずつシャーレに分注し、放冷してプレート培地を調製す
る。
一方、ベゾトン０，５チ、肉エキｘ ０．５ ％、Ｎａ
Ｃ１０，３％、寒天０．８％よシ成る培地を１２０℃、
１５分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培
地の温度が４２℃になったらあらかじめ６７℃で１７時
間培養したＭＰ−２菌を１ｄ中に１０番個の細胞が存在
する様に培地中に加える。ピペットによって２ｍｌを採
取し、あらかじめ作製して置いたＭ、培地表面上に加え
、すはやく均一にひろげ同化させる。生理活性物質８Ｐ
Ｆ−２を含む被験液を適当に希釈して、その溶液０．Ｄ
５ｍＪをペーパー・ディスク（直径８闘）（東洋濾紙）
にしみ込まぜる。このペーパー・ディスクを前記作製プ
レート上に置き、６７℃で１７時間培養し、生理活性物
質８ＰＦ−２によってできる阻止円の大きさを測定する
。阻止円の直径１０ｘｍを与える８ＰＦ−２の濃度を１
単位（１ｕ）と定義する。
Ｃ１０，３％、寒天０．８％よシ成る培地を１２０℃、
１５分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培
地の温度が４２℃になったらあらかじめ６７℃で１７時
間培養したＭＰ−２菌を１ｄ中に１０番個の細胞が存在
する様に培地中に加える。ピペットによって２ｍｌを採
取し、あらかじめ作製して置いたＭ、培地表面上に加え
、すはやく均一にひろげ同化させる。生理活性物質８Ｐ
Ｆ−２を含む被験液を適当に希釈して、その溶液０．Ｄ
５ｍＪをペーパー・ディスク（直径８闘）（東洋濾紙）
にしみ込まぜる。このペーパー・ディスクを前記作製プ
レート上に置き、６７℃で１７時間培養し、生理活性物
質８ＰＦ−２によってできる阻止円の大きさを測定する
。阻止円の直径１０ｘｍを与える８ＰＦ−２の濃度を１
単位（１ｕ）と定義する。
実施例１゜
次の組成の培地Ａ、９１を用いた。
肉エキス １％
ポリはプトン １ｑ６
酵母エキス ０．２５％
カザミノ酸 ０．２５％
ＮａＣＡ！ ０．１９６
ｐＨ＝６．９
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を（ＢＨＩ培地１００プに接種して６７
℃、８時間静置培養によシ得られた前培養を培地Ａｌｌ
に接種し、同一培養液条件で培養した後、培地Ａに接種
し、１０１ジャーファーメンタ−を用いて６７℃、１１
．５ ｈｒ、３００ ｒｐｍで攪拌しながら嫌気的に培
養後、ぼニジリン０１０００単位／ ｍｌを添加し、更
に培養を５ ｈｒ ｌｉ続する。得られた培養液を遠心
分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を（ＢＨＩ培地１００プに接種して６７
℃、８時間静置培養によシ得られた前培養を培地Ａｌｌ
に接種し、同一培養液条件で培養した後、培地Ａに接種
し、１０１ジャーファーメンタ−を用いて６７℃、１１
．５ ｈｒ、３００ ｒｐｍで攪拌しながら嫌気的に培
養後、ぼニジリン０１０００単位／ ｍｌを添加し、更
に培養を５ ｈｒ ｌｉ続する。得られた培養液を遠心
分離し、菌体を除去した。
培養涙液には生理活性物質５ＰＦ−２が９５単位／ゴ含
有されていた。
有されていた。
実施例２゜
次の組成の培地Ｂ、９１を用いた。
肉エキス １．０％
ポリペプトン １．０％
酵母エキス ０．２５％
ＮａＣｌ ０．１％
ｐｌ（＝ ７．０
８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同材に前培養した培養液１
１を培地Ｂに接種し、１０ノジヤーフアーメンターを用
いて３７℃、１１ｈｒ３００ｒｐｍで攪拌しながら嫌気
的に培養後、はニジリン０８００単位／ｍｅを添加し、
更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心分離
し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同材に前培養した培養液１
１を培地Ｂに接種し、１０ノジヤーフアーメンターを用
いて３７℃、１１ｈｒ３００ｒｐｍで攪拌しながら嫌気
的に培養後、はニジリン０８００単位／ｍｅを添加し、
更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心分離
し、菌体を除去した。
培養Ｆ液には生理活性物質８ＰＦ−２が１０５．６単位
／−含有されていた。
／−含有されていた。
実施例６゜
次の組成の培地Ｃ１９１を用いた。
肉エキス １チ
ポリはプトン １チ
酵母エキス ０．２５チ
カザミノ酸 ０．２５％
ＮａＣｌ ０．５％
ｐＨ＝６．２
８ｔｒｅｐｔｏｃａｃｃｕｓ ｐｙ６ｇｅｎｅａ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
）を培地Ｃに接種し、１０／ジャーファーメンタ−を用
いて３７℃、１４ ｈｒ ３００ｒｐｍ で攪拌し々が
ら嫌気的に培養後、ぼニジリン０１０００単位／ｌｕｔ
を添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液
を遠心分離し菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
）を培地Ｃに接種し、１０／ジャーファーメンタ−を用
いて３７℃、１４ ｈｒ ３００ｒｐｍ で攪拌し々が
ら嫌気的に培養後、ぼニジリン０１０００単位／ｌｕｔ
を添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液
を遠心分離し菌体を除去した。
培養Ｐｉには生理活性物質８ＰＦ−２が８９単位／ゴ含
有されていた。
有されていた。
実施例４゜
次の組成の培地り、９１を用いた。
肉エキス ０．５チ
ポリペプトン １．０チ
酵母エキス ０．２５チ
カザミノ酸 ０．２５ ％
ＮａＣ１Ｏ，５％
ｐＨ＝６．５
８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
１を培地りに接種し、１０ノジヤーフアーメンターを用
いて３７℃、１５．５ ｈｒ ３００ ｒｐｍ で攪拌
しながらｔ、１ １魚釣に培養後、ペニシリンＧ１，２
００単位／ｄを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得
られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
１を培地りに接種し、１０ノジヤーフアーメンターを用
いて３７℃、１５．５ ｈｒ ３００ ｒｐｍ で攪拌
しながらｔ、１ １魚釣に培養後、ペニシリンＧ１，２
００単位／ｄを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得
られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養ろ液には生理活性物質５ＰＦ−２が１０５．５単位
／ｄ含有されていた。
／ｄ含有されていた。
実施例５゜
次の組成の培地Ｂ、９１を用いた。
酵母エキス ６．０％
…＝６．５
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｉ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した種培養液
１１を培地Ｅに接種し、１０１ジャーファーメンタ−を
用いて３７℃、１５ｈｒ３００ｒｐｍで攪拌しなから嫌
気的に培養後、ペニシリンＧ１．０００単位／ＩＩＬｌ
を添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液
を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した種培養液
１１を培地Ｅに接種し、１０１ジャーファーメンタ−を
用いて３７℃、１５ｈｒ３００ｒｐｍで攪拌しなから嫌
気的に培養後、ペニシリンＧ１．０００単位／ＩＩＬｌ
を添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液
を遠心分離し、菌体を除去した。
培養ｐ液には生理活性物質５ＰＦ−２が４５．５単位／
ｄ含有されていた。
ｄ含有されていた。
実施例６゜
下記の培地Ｆ、９１を用いた。
マルトース ０．３％
肉エキス ２．０チ
ポリペプトン １．０％
酵母エキス ０．２５チ
ーニア０
８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
Ｃ’Ｃ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培
養液１１を培地Ｆ＆Ｃ接種し、１０ノジヤー７アーメン
ターで３７℃、１０．５ｈｒ５００ｒｐｍ攪拌しながら
嫌気的に培養後、ペニシリン０１０００単位／ｄを添加
し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心
分離し、菌体を除去した。
Ｃ’Ｃ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培
養液１１を培地Ｆ＆Ｃ接種し、１０ノジヤー７アーメン
ターで３７℃、１０．５ｈｒ５００ｒｐｍ攪拌しながら
嫌気的に培養後、ペニシリン０１０００単位／ｄを添加
し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心
分離し、菌体を除去した。
培養Ｆ液には生理活性物質５ＰＦ−２が６７．５単位／
ｍｌ含有されていた。
ｍｌ含有されていた。
実施例２
下記の培地Ｇ、９１を用すた。
肉エキス １． ［１％
ポリペプトン ｉ、ｏチ
ＮａＣｌ０．５ ％
ｍ＝ＺＯ
８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１１を培地Ｇに接種し、１０ノジヤーフアーメンター
を用いて３７℃、１５ｈｒ３００ｒｐｍで攪拌しながら
嫌気的に培養後、ハエシリンＧ１０００単位／１ｎｌを
添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１１を培地Ｇに接種し、１０ノジヤーフアーメンター
を用いて３７℃、１５ｈｒ３００ｒｐｍで攪拌しながら
嫌気的に培養後、ハエシリンＧ１０００単位／１ｎｌを
添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
培養ｐ液には生理活性物質８ＰＦ−２が１００単位／ｍ
ｌ含有されていた。
ｌ含有されていた。
実施例８゜
実施例３の培養で得た培養Ｆ液５１Ｉ／′ｉ生理活性物
質１５０Ｘ１０’単位含有していた。
質１５０Ｘ１０’単位含有していた。
培養Ｆ液には硫安を添加し５０〜９０％飽和度の両分を
分取して沈澱物を得た。この沈澱物は生理活性物質５Ｐ
Ｆ−２を１２６ｘｌＯ’単位含有していた。
分取して沈澱物を得た。この沈澱物は生理活性物質５Ｐ
Ｆ−２を１２６ｘｌＯ’単位含有していた。
この沈澱物全量を安定剤含有緩衝液３００−に溶解し、
溶解液をＤＥＡＲ−セルロースカラム（５ｘ７０ｃＩＩ
Ｌ）Ｋ加え、生理活性物質ＳＰＦを吸着させた。これに
０．３ Ｍ ＮａＣ１溶液を用いて段階的に溶出させ、
活性部分を分取する。得られた活性は１１５Ｘ１０４単
位であった。
溶解液をＤＥＡＲ−セルロースカラム（５ｘ７０ｃＩＩ
Ｌ）Ｋ加え、生理活性物質ＳＰＦを吸着させた。これに
０．３ Ｍ ＮａＣ１溶液を用いて段階的に溶出させ、
活性部分を分取する。得られた活性は１１５Ｘ１０４単
位であった。
活性部分をＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５のカラム
（２，５Ｘ７０ｃＩｒＬ）Ｋ：加え、活性部分全吸着さ
せ、これに燐酸緩衝液中の食塩濃度を直線的に上昇させ
つつ溶出を行い、活性部分を分取する。
（２，５Ｘ７０ｃＩｒＬ）Ｋ：加え、活性部分全吸着さ
せ、これに燐酸緩衝液中の食塩濃度を直線的に上昇させ
つつ溶出を行い、活性部分を分取する。
得られた活性は８５Ｘ１０’単位であった。
更に１この溶出液を濃縮しゲル濾過材トヨバー＃ＨＷ＝
５０Ｆのカラム（２，６Ｘｌ ０ Ｑｃｍ）Ｋ加えて吸
着させ、次いで、１／１００ＭＩＪン酸緩衝液（ＫＨｚ
ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ４）で溶出し、活性画分を分取し
、これを８ＰＦ−２とした。得られた５ＰＦ−２活性は
２２．５Ｘ１０’単位であった。
５０Ｆのカラム（２，６Ｘｌ ０ Ｑｃｍ）Ｋ加えて吸
着させ、次いで、１／１００ＭＩＪン酸緩衝液（ＫＨｚ
ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ４）で溶出し、活性画分を分取し
、これを８ＰＦ−２とした。得られた５ＰＦ−２活性は
２２．５Ｘ１０’単位であった。
ここに得られた溶出液を凍結乾燥し生理活性物質ＳＰＦ
′−２の淡黄色粉末７５０ ｍｇを得た。
′−２の淡黄色粉末７５０ ｍｇを得た。
第１図は生理活性物質５ＰＦ−２０，２％水溶液の紫外
線吸収スペクトルを示し、第２図は同じ〈赤外線吸収ス
ペクトルを示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男
線吸収スペクトルを示し、第２図は同じ〈赤外線吸収ス
ペクトルを示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１１下記の理化学的性質を有する生理活性物質８ＰＦ
−２゜ １、元素分析 Ｃ：５３．６４チ、Ｈ： ５．９８チ、Ｎ：１１．６３
チ／ ／ ／ ４８．５７チ ５．０２％ １０．５０チ２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約 ７．０００〜２５，０００である。 五 分解点 本物質は１６０℃で褐変し、２００’Ｃになると黒色と
なシ分解する。 ４、比旋光度 ０ 〔α）、＝＋３０．７°（ｃ＝１．００）５、紫外線吸
収スペクトル 本物質の０．２％の水溶液の紫外線吸収スペクトルは第
１図に示される。・２５７ｎｍ、２６ｊｎｍ、２７３ｎ
ｍ、２８０ｎｍ。 ２Ｂ’７ｎｍおよび３２５ ｎｍに吸収がみられ、特徴
的である。 ６、赤外線吸収スはクトル 第２図に示される。 ２ 溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタ ノール、には一部溶解しｎ−ブタノール、イソブタノー
ル、ｎ−プロパツール、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、
アセトン、メチルインブチルケトン、エチルエーテル等
の溶剤には難溶又は不溶である。 ８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質の１．０チ水溶液のｐＨは６．５である。 ９ 物質の色 淡黄色粉末状である。 １０、呈色反応 ニンヒドリン反応 十 ビュウレット反応 十 モーリッシュ反応 − デイシエ反応 − アンスロン反応 − システィン硫酸反応 − １１、安定化 本物質はＬ−システィン、ジチオスレ イトール（ＤＴＴ）、グリセロール、アルブミン、グロ
ブリン、α−およびβ−サイクロデキストリン、（ＮＨ
４）２８０４、食塩等の添加によって安定化される。 （２）ストレプトコツカス属に属する生理活性物質８Ｐ
Ｆ−２生産菌を培養し、培養物から生理活性物質８ＰＦ
−２を採取することを特徴とする生理活性物質５ＰＦ−
２の製法。 （３）ストレプトコツカス属に属する生理活性物質８Ｐ
Ｆ−２生産菌を培養するに際し、培養中の適当な時期に
はニジリン又はその関連物質を添加して培養することを
特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の生理活性物質
８ＰＦ−２の製法。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59072866A JPS60218324A (ja) | 1984-04-13 | 1984-04-13 | 生理活性物質ｓｐｆ−２及びその製法 |
| CA000459394A CA1237085A (en) | 1983-08-01 | 1984-07-20 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| GB08418745A GB2146028B (en) | 1983-08-01 | 1984-07-23 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| CH3684/84A CH663033A5 (fr) | 1983-08-01 | 1984-07-30 | Substance-melange dite ''spf-100'' et procede pour sa preparation. |
| DE19843428017 DE3428017A1 (de) | 1983-08-01 | 1984-07-30 | Spf-100 und verfahren zu seiner herstellung |
| KR1019840004559A KR850002276A (ko) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Spf-100의 제조방법 |
| SE8403914A SE461532B (sv) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Cancermotverkande och immunaktiverande aemne (spf-100) |
| FR8412119A FR2550223B1 (fr) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Spf-100 et procede de preparation |
| NL8402388A NL8402388A (nl) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Geneesmiddel spf-100 en werkwijze voor de bereiding hiervan. |
| US06/746,514 US4656037A (en) | 1983-08-01 | 1985-06-19 | SPF-100 and process for the preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59072866A JPS60218324A (ja) | 1984-04-13 | 1984-04-13 | 生理活性物質ｓｐｆ−２及びその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60218324A true JPS60218324A (ja) | 1985-11-01 |
| JPH0155275B2 JPH0155275B2 (ja) | 1989-11-22 |
Family
ID=13501678
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59072866A Granted JPS60218324A (ja) | 1983-08-01 | 1984-04-13 | 生理活性物質ｓｐｆ−２及びその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60218324A (ja) |
-
1984
- 1984-04-13 JP JP59072866A patent/JPS60218324A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0155275B2 (ja) | 1989-11-22 |
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