JPS6030677A - ストレプトコツカス属細菌の培養法 - Google Patents
ストレプトコツカス属細菌の培養法Info
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- JPS6030677A JPS6030677A JP13938483A JP13938483A JPS6030677A JP S6030677 A JPS6030677 A JP S6030677A JP 13938483 A JP13938483 A JP 13938483A JP 13938483 A JP13938483 A JP 13938483A JP S6030677 A JPS6030677 A JP S6030677A
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- culture
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- penicillin
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明け、ストレプトコツカス属細菌の各種有効成分子
、＠体外に排出させる培養法に関するものである。
、＠体外に排出させる培養法に関するものである。
更に詳細には、本発明は、ストレプトコツカス属細菌の
培養中にペニシリン又はその関連物質を添加し、培養を
行うことによって各種菌体生産物ｆ、菌体外に排出させ
、培地中に蓄積きせる方法ｅこ関するものである。
培養中にペニシリン又はその関連物質を添加し、培養を
行うことによって各種菌体生産物ｆ、菌体外に排出させ
、培地中に蓄積きせる方法ｅこ関するものである。
従来、溶連菌（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｖ＋ｓ ｐｙｏ
ｇ＊ｎｅｓ）の生菌体を弱毒化して製剤化したものは、
すでに制癌剤として使用されている。
ｇ＊ｎｅｓ）の生菌体を弱毒化して製剤化したものは、
すでに制癌剤として使用されている。
また、ストレプトコッカス・ピオゲネスの菌体を破砕後
、水または塩類溶液で有効成分を抽出し、肩機溶媒を加
えて、抗腫瘍性成分を沈澱として、回収する方法（持分
昭５８−１６４７ ）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチー
ム、セルラーゼまたは、蛋白質分解酵素により、溶菌し
、活性両分を水溶性区分として分画する方法（英国１１
駅許第１１６５８６５号）々どが知られている。
、水または塩類溶液で有効成分を抽出し、肩機溶媒を加
えて、抗腫瘍性成分を沈澱として、回収する方法（持分
昭５８−１６４７ ）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチー
ム、セルラーゼまたは、蛋白質分解酵素により、溶菌し
、活性両分を水溶性区分として分画する方法（英国１１
駅許第１１６５８６５号）々どが知られている。
このように、ストレプトコツカス属細菌そのものもしく
けその菌体成分に抗＃瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは可
溶性もしくけ、不溶性高分子細胞格成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したりし
て全体を分画しなければなら々かった。このような処理
によれば、精製ｌ−ｉ複雑となり、有効成分の単離けき
わめて困難であった。実際に分離し、有効成分として測
定された例では分子量１５０．０００の蛋白質が知られ
ています。（特公昭４８−４５８４１）本発明者らは、
ストレプトコツカス属細菌の生産する各種菌体生産物を
培養中に、菌体外に排出させることができれは、その精
製はかなり答易なものとなり、更にＦｉより有用な生理
活性物質を見出し得るとの想定のもとに、培養法の改良
について鋭意研究した結果、培養中にはニジリンを添加
することによって、菌体生産物を菌体外に排出きせるこ
とに成功したのである。
けその菌体成分に抗＃瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは可
溶性もしくけ、不溶性高分子細胞格成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したりし
て全体を分画しなければなら々かった。このような処理
によれば、精製ｌ−ｉ複雑となり、有効成分の単離けき
わめて困難であった。実際に分離し、有効成分として測
定された例では分子量１５０．０００の蛋白質が知られ
ています。（特公昭４８−４５８４１）本発明者らは、
ストレプトコツカス属細菌の生産する各種菌体生産物を
培養中に、菌体外に排出させることができれは、その精
製はかなり答易なものとなり、更にＦｉより有用な生理
活性物質を見出し得るとの想定のもとに、培養法の改良
について鋭意研究した結果、培養中にはニジリンを添加
することによって、菌体生産物を菌体外に排出きせるこ
とに成功したのである。
本発明は、ストレプトコツカス属に属する細菌を培養す
るに際し、啼養中の適当な時期にはニジリン又はその関
連物質を添加して培養し、各種菌体生産物を菌体外に排
出せしめることを特徴とするストレプトコツカス属細菌
の培養法である。
るに際し、啼養中の適当な時期にはニジリン又はその関
連物質を添加して培養し、各種菌体生産物を菌体外に排
出せしめることを特徴とするストレプトコツカス属細菌
の培養法である。
本発明の方法においては、ストレプトコツカス属細菌の
生産する各種菌体生産物は菌体外に排出芒れ、培養液中
に存在するようになるので、菌体を涙過して除去し、培
養炉液を精製すればよいので、単離けかなり容易なもの
となる。
生産する各種菌体生産物は菌体外に排出芒れ、培養液中
に存在するようになるので、菌体を涙過して除去し、培
養炉液を精製すればよいので、単離けかなり容易なもの
となる。
従来、ストレプトコツカス属細菌を培養し、得られた菌
をはニジリンで処理して弱毒化させる方法は知られてい
るが、培養中にｕ ニジリンを添加して、菌体生産物を
菌体外に排出きせる方法については全く知られていない
。
をはニジリンで処理して弱毒化させる方法は知られてい
るが、培養中にｕ ニジリンを添加して、菌体生産物を
菌体外に排出きせる方法については全く知られていない
。
本発明の方法においては、ストレプトコツカス属細菌で
あれば広く使用することができる。例示すれば、次の通
りである ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｓｒ、
ＡＴＣＣ２１５９７Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙ
ｏｇｅｈｅｓ ＡＴＣＣ２１５４６Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２１５４７Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙａｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ
２１５４８培養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、
プレイン・ハート・インクニージョン培地（ＢＨ工培地
）等の天然培地がよく用いられるが、ストレプトコツカ
ス属細菌が有効に生育する培地であれば、炭素源、窒素
源等含んだ一般培地も使用することができる。
あれば広く使用することができる。例示すれば、次の通
りである ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｓｒ、
ＡＴＣＣ２１５９７Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙ
ｏｇｅｈｅｓ ＡＴＣＣ２１５４６Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２１５４７Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙａｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ
２１５４８培養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、
プレイン・ハート・インクニージョン培地（ＢＨ工培地
）等の天然培地がよく用いられるが、ストレプトコツカ
ス属細菌が有効に生育する培地であれば、炭素源、窒素
源等含んだ一般培地も使用することができる。
培養はストレプトコツカス属細菌が生育する条件が選ば
れるが、ｐｉ（６，０〜８，０、好筐しくけ６８〜Ｚ２
で５０〜４０℃好１しくけ６５〜５７℃であり嫌気的に
静置培養をおこなうのが一般的であるが、その他攪拌培
養等の変法も採用することができる。
れるが、ｐｉ（６，０〜８，０、好筐しくけ６８〜Ｚ２
で５０〜４０℃好１しくけ６５〜５７℃であり嫌気的に
静置培養をおこなうのが一般的であるが、その他攪拌培
養等の変法も採用することができる。
本発明においては、培養中の適宜時期にペニシリン又に
その関連物賃金添加することＫよって菌体が生産する各
種有用物質を菌体外に排出させ、培養中に蓄積させるこ
とができるようになるものである。
その関連物賃金添加することＫよって菌体が生産する各
種有用物質を菌体外に排出させ、培養中に蓄積させるこ
とができるようになるものである。
ハニシリン又はその関連物質としてはすでに知られたは
ニジリンと類似の作用をもつ関連物質であれはいかなる
ものでもよいが、ｋ冊シリンＧが普通用いられる、添加
Ｊ＃ＬはペニシリンＧで１００〜５０００単位／ ｍｌ
、好ましくけ１０００単位／ｍ／培養液程度で十分で
ある。
ニジリンと類似の作用をもつ関連物質であれはいかなる
ものでもよいが、ｋ冊シリンＧが普通用いられる、添加
Ｊ＃ＬはペニシリンＧで１００〜５０００単位／ ｍｌ
、好ましくけ１０００単位／ｍ／培養液程度で十分で
ある。
ペニシリン又はその関連物質の添加時期は３７℃の培養
で対数増殖期にかかつて後３〜１５時間の間、特に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間、好ま
しくけ５〜１５時間そのまま培養を続けることによって
、培養液中に菌体生産物を多量に蓄積させることができ
る。
で対数増殖期にかかつて後３〜１５時間の間、特に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間、好ま
しくけ５〜１５時間そのまま培養を続けることによって
、培養液中に菌体生産物を多量に蓄積させることができ
る。
本発明はストレプトコツカス属細菌の菌体から菌体生産
物を菌体外に排出させる方法を提案するもので、排出さ
れる菌体生産物はいかなるものでもよく、必要によって
培養液から各種有用物質が分離される。
物を菌体外に排出させる方法を提案するもので、排出さ
れる菌体生産物はいかなるものでもよく、必要によって
培養液から各種有用物質が分離される。
得られた培養液は、遠心分離によって菌体を分離し、ｐ
液に硫安を添加し、沈澱物として有効成分を得ることが
できる。
液に硫安を添加し、沈澱物として有効成分を得ることが
できる。
沈澱物は凍結状態で保存することができ、必要によって
、イオン交換樹脂、ゲル濾過材５等を組合せた精製法に
よって精製して行くことができる。
、イオン交換樹脂、ゲル濾過材５等を組合せた精製法に
よって精製して行くことができる。
菌株によって生芹物は変化し、種々の物質を分離するこ
とができるが１次に本発明方法によって５ｔｒｅｐｔｏ
ｃａｃｃｕｓ ’ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２１０６
０から抗菌性ならびに抗腫瘍性を有する各種菌体生産物
が培地中に排出蓄積される。例えばその一つとして次の
ような理化学的性質を有する生理活性物質５ＰＦ−１が
得らｈた。
とができるが１次に本発明方法によって５ｔｒｅｐｔｏ
ｃａｃｃｕｓ ’ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴＣＣ２１０６
０から抗菌性ならびに抗腫瘍性を有する各種菌体生産物
が培地中に排出蓄積される。例えばその一つとして次の
ような理化学的性質を有する生理活性物質５ＰＦ−１が
得らｈた。
１、 元素分析
２９分子量
ゲル濾過法による測定では、分子量約５００〜７．ＯＤ
Ｄである。
Ｄである。
６、分解点
本物質は１７０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
シ分解する。
シ分解する。
４、比旋光度
加
〔α） ＝−１−６３，３〜６４．６°（Ｃ＝１．０４
）５、紫外線吸収スペクトル 本物質の３３チの水溶液の紫外線吸収スはクトルは第１
図に示され、３．１チの水溶液の紫外線吸収スはクトル
は第２図に示される。
）５、紫外線吸収スペクトル 本物質の３３チの水溶液の紫外線吸収スはクトルは第１
図に示され、３．１チの水溶液の紫外線吸収スはクトル
は第２図に示される。
いずれも％ ２５７ｎｍ、２６５ｎｍ、２８０ｎｍ。
２８７ｎｍに吸収がみられ、特徴的である。
６、赤外線吸収ス啄りトル
第６図に示される。
ｌ 溶剤に対する溶解性
水に可溶であるが、メタノール、エタノ−４，ｙｌ−ブ
タノール、インブタノール、ｎ−プロパツール、ｎ−へ
キサン、クロロホルム、アセトン、メチルイソブチルケ
トン、エチルエーテル等の溶剤には不溶である。
タノール、インブタノール、ｎ−プロパツール、ｎ−へ
キサン、クロロホルム、アセトン、メチルイソブチルケ
トン、エチルエーテル等の溶剤には不溶である。
８、塩基性、酸性、中性の区別
本物質のＣ１，８５％水溶液のｐＨは６．５である。
９ 物質の色
白色粉末状である。
１０ 呈色反応
ニンヒドリン反応 十
ビュウレット反応 士
モーリッシュ反応 −
デイシエ反応 −
アンスロン反応 −
システィン硫酸反応 −
１１、安定化
本物質はＬ−システィン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン（ＮＨ４
）ｚ ８０４ 、食塩等の添加によって安定化される。
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン（ＮＨ４
）ｚ ８０４ 、食塩等の添加によって安定化される。
次に本発明の実施例を示す。
なお実施例における生理活性物質５ＰＦ−１の活性単位
の測定は鵜高法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉ
ｏｔｉｃｓＶｏｌ ろ５ Ｎｏ、１０ １３１９〜１５
２５０ＣＴ、１９８２ ）によった。測定には高分子透
過性大腸菌変異株ＭＰ−２（ＦＥＩＩＭ−Ｐ ５４３２
） （Ａｇｒｉｃ、 Ｉ’３ｉｏ＋。
の測定は鵜高法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉ
ｏｔｉｃｓＶｏｌ ろ５ Ｎｏ、１０ １３１９〜１５
２５０ＣＴ、１９８２ ）によった。測定には高分子透
過性大腸菌変異株ＭＰ−２（ＦＥＩＩＭ−Ｐ ５４３２
） （Ａｇｒｉｃ、 Ｉ’３ｉｏ＋。
Ｃｈｅｍ、、 ４３．３７１（１９７９）を使用してＭ
Ｐ−２に対する抗菌活性を指標としてバイオ・アッセイ
する。
Ｐ−２に対する抗菌活性を指標としてバイオ・アッセイ
する。
すなわち、バクト・アンチバイオチツクメディアム３（
ディフコ社製品） １．７５ ％、寒天１．３チよシ成
る培地（馬培地）を１２０℃％ １５分加熱設定し、２
０ｒｎｌずつシャーレに分注し、放置してプレート培地
を調製する。
ディフコ社製品） １．７５ ％、寒天１．３チよシ成
る培地（馬培地）を１２０℃％ １５分加熱設定し、２
０ｒｎｌずつシャーレに分注し、放置してプレート培地
を調製する。
一方％スプトン０．５チ、肉エキス０．５％、 ＮａＣ
１１Ｏ１６チ、寒天０，８チより成る培地を１２０℃、
１５分加熱放置する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培
地の温度が４２℃になったらあらかじめ６７℃で１７時
間培養したＭＰ−２菌を１ｍｌ中に１０４個の細胞が存
在する様に培地中に加える。ピペットによって２１を採
取し、あらかじめ作製して置いたＭ、培地表面上に加え
、すばやく均一にひろげ固化させる。生理活性物質８Ｐ
Ｆ−１を含む被膜層を適当に希釈して、その溶液０．０
５ ｍ／’をペーパー・ディスク（直径８ｎ）（東洋１
紙）Ｖｃｌ。
１１Ｏ１６チ、寒天０，８チより成る培地を１２０℃、
１５分加熱放置する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培
地の温度が４２℃になったらあらかじめ６７℃で１７時
間培養したＭＰ−２菌を１ｍｌ中に１０４個の細胞が存
在する様に培地中に加える。ピペットによって２１を採
取し、あらかじめ作製して置いたＭ、培地表面上に加え
、すばやく均一にひろげ固化させる。生理活性物質８Ｐ
Ｆ−１を含む被膜層を適当に希釈して、その溶液０．０
５ ｍ／’をペーパー・ディスク（直径８ｎ）（東洋１
紙）Ｖｃｌ。
み込ませる。このペーパー・ディスクを前記作製プレー
ト上に置き、３７℃で１７時曜培養し、生理活性物質５
ＰＦ−１によってできる阻止内の大きさを確定する。阻
止内の直径１０闘を与える８ＰＦ−１の濃度を１単位（
１ｕ）と定義する。
ト上に置き、３７℃で１７時曜培養し、生理活性物質５
ＰＦ−１によってできる阻止内の大きさを確定する。阻
止内の直径１０闘を与える８ＰＦ−１の濃度を１単位（
１ｕ）と定義する。
実施例１
次の組成の培地Ａ２／に、
肉エキス １チ
ポリにプトン １％
ＮａＣ１０，５％
ｐｉ（＝７．１
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を（Ｂ ）Ｉ Ｉ培地１０［］ｗＬｌに
接種してろ７℃、８時間静置培養により前培養をおこな
った培養液１００ｄを）接種し、３７℃、１５ｈｒ攪拌
しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０１０００単位／
ｍｅを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培
養液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を（Ｂ ）Ｉ Ｉ培地１０［］ｗＬｌに
接種してろ７℃、８時間静置培養により前培養をおこな
った培養液１００ｄを）接種し、３７℃、１５ｈｒ攪拌
しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０１０００単位／
ｍｅを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培
養液を遠心分離し、菌体を除去した。
Ｉ＠養ろ液には生理活性物質５ＰＦ−１が１２０単位／
１ＴＬｌ含有されていた。
１ＴＬｌ含有されていた。
実施例２
次の組成の培地Ｂ２１に、
酵母エキス ５０１１
ＢＨＩ １．０φ
ポリペプトン １．０％
マルトース ０５チ
藷ｚＰＯ４０，１％
Ｍｇ８０．・７Ｈ，ＯＯ，０２チ
ｐｌ（＝７．２
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に、前培養した培養液
１００ｍＡ’を接種し、５７℃、１５ｈｒ攪拌しながら
嫌気的に培養後、はニジリン（）１０００単位／ ｍｌ
を添加し、更に培養を５１１「継続する。得られた培養
液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に、前培養した培養液
１００ｍＡ’を接種し、５７℃、１５ｈｒ攪拌しながら
嫌気的に培養後、はニジリン（）１０００単位／ ｍｌ
を添加し、更に培養を５１１「継続する。得られた培養
液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養涙液には生理活性物質５ＰＦ−１が１５２単位／
ｍｌ含有されていた。
ｍｌ含有されていた。
実施例６
次の組成の培地Ｃ２７に、
肉エキス １％
ポリペプトン １％
ＮａＣ／ ０．５％
マルトース ０６％
ＫＨ，ＰＯ４０，１％
Ｍｇ ＳＯ２・７Ｈ２００，０２％
ｐＨ＝ ７．１
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｎｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００ｍ１を接種し、３７℃、１５ｈｒ攪拌しながら嫌気
的に培養後、ペニシリンｆ１１０００単位／Ｍを添加し
、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心分
離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００ｍ１を接種し、３７℃、１５ｈｒ攪拌しながら嫌気
的に培養後、ペニシリンｆ１１０００単位／Ｍを添加し
、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心分
離し、菌体を除去した。
培養Ｆ液には生理活性物質５ＰＦ−１が２４０単位／
ｍｌ含有されていた。
ｍｌ含有されていた。
実施例４
次の組成の培地Ｄ２１に、
肉エキス １．５％
ポリペプトン １．０チ
ＮａＣ１０，５％
カザミノ酸 ０５チ
酵母エキス ０２係
ｐｉｆ、＝７１
８ｔｒｅｐｔｎｃｎｃｃｕｓ ｐｙｎｇｅｎｅｓ ＡＴ
（コＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液
１００−の−２０℃保存物を接種し、６７℃、１５ｈｒ
攪拌しながら嫌気的に培養後、はニジリン（１１０ｎＯ
単位／ｄを賂加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られ
た培養液を遠心分離し、菌体を除去し７た。
（コＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液
１００−の−２０℃保存物を接種し、６７℃、１５ｈｒ
攪拌しながら嫌気的に培養後、はニジリン（１１０ｎＯ
単位／ｄを賂加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られ
た培養液を遠心分離し、菌体を除去し７た。
培養Ｆ液には生理活性物質５ＰＦ−１が１０８単位／
ｍｌ含有されていた。
ｍｌ含有されていた。
実施例５
次の組成の培地Ｅ２１に、
肉エキス １．５％
ポリペプトン １．０係
ＮａＣ１１Ｏ，５％
カザミノ酸 ０２５チ
酵母エキス ０．２５チ
ｐＨ＝７．１
Ｓｔｒｅｐｔｎｃｎｃｃｕｓ ｐｙｎｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と四６ｋに前培養した種培養
液１００ｍ１を接種し、３７℃、１５ｈｒ攪拌しながら
嫌気的に培養後、はニジリンｆ１１０００単位／ ｍｌ
を添加し、更ＫＪ＠養′ｆｒ：５ｈｒ継続する。得られ
た培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と四６ｋに前培養した種培養
液１００ｍ１を接種し、３７℃、１５ｈｒ攪拌しながら
嫌気的に培養後、はニジリンｆ１１０００単位／ ｍｌ
を添加し、更ＫＪ＠養′ｆｒ：５ｈｒ継続する。得られ
た培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養Ｆ液には生理活性物質５ＰＦ−１が１８０単位／ｄ
含有されていた。
含有されていた。
実施例６
前記培地Ｅ２７に
５ｔｒｅｐｔｎｃｎｃｃｕｓ ｐｙｎｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１［１６０を実施例１と同様に前培養した培養液
１００ｍ１の一２０℃保存物を接種し、６７℃、１５ｈ
ｒ攪拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０１０１１
０単位／ＩＩＬｌｆ：添加し、更に培養を５ｈｒ継続す
る。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１［１６０を実施例１と同様に前培養した培養液
１００ｍ１の一２０℃保存物を接種し、６７℃、１５ｈ
ｒ攪拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０１０１１
０単位／ＩＩＬｌｆ：添加し、更に培養を５ｈｒ継続す
る。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養Ｐ液には生理活性物質５ＰＦ−１が１００単位／
ｍｌ含有されていた。
ｍｌ含有されていた。
実施例７
下記の培地Ｆ２Ａに、
肉エキス ３．０係
ポリペプトン １．０％
ＮａＣ１０，５％
カザミノ酸 ０．５係
田二１１
Ｓｔｒｅｐｔｎｃｎｃｃｕｓ ｐｙｎｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１００ｍ１の一２０℃保存物を、接種し、３７℃、５
．５ｈｒする。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除
去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１００ｍ１の一２０℃保存物を、接種し、３７℃、５
．５ｈｒする。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除
去した。
培養ｐ液には生理活性物質８ＰＦ−１が１２０単位／Ｍ
含有されていた。
含有されていた。
実施例８
下記の培地Ｇ２Ｊに、
Ｂ ＨＩ ３．７ チ
ボリベプト７ ０．５％
マルトース ０５６チ
ＫＨ２ＰＯ４Ｄ、 １チ
ＭｇＳＯ４・７Ｈ，００，０２チ
ｐｌＩ＝ＺＩ
Ｓｐｒｅｐｔｎｃｎｃｃｕｓ ｐｙｎｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１００ｍ１を接種し、３７℃、１５ｈ「攪拌し寿から
嫌気的に培養後、ペニシリンｆ１１０００単位／αを添
加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠
心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１００ｍ１を接種し、３７℃、１５ｈ「攪拌し寿から
嫌気的に培養後、ペニシリンｆ１１０００単位／αを添
加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠
心分離し、菌体を除去した。
培養Ｐ液には生理活性物質５ＰＦ−１が３００単位／
ｍｌ含有されていた。
ｍｌ含有されていた。
実施例９
前記培地Ｅ３１に、
５ｔｒｅｐｔｎｃｎｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を、６７℃で８ｈｒ静置培養して得た種
培養液３００ｍ／を添加接種し６７℃、１５ｈｒ攪拌し
ながら嫌気的に培養後、ペニシリンｎ１ｏｏｏ単位／プ
を添加し、更にＦ＠責を５ｈｒ継続する。得られた培養
液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を、６７℃で８ｈｒ静置培養して得た種
培養液３００ｍ／を添加接種し６７℃、１５ｈｒ攪拌し
ながら嫌気的に培養後、ペニシリンｎ１ｏｏｏ単位／プ
を添加し、更にＦ＠責を５ｈｒ継続する。得られた培養
液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養涙液６１には生理活性物質５ＰＦ−１を５６×１０
４単位含壱していた。
４単位含壱していた。
培養Ｐ液には硫安を添加し５０〜８０係飽オ［１度の両
分を分取して、沈澱物を得だ。この沈澱物は生理活性物
質Ｓ、ＰＦ−１を５０Ｘ１０’単位含有していた。
分を分取して、沈澱物を得だ。この沈澱物は生理活性物
質Ｓ、ＰＦ−１を５０Ｘ１０’単位含有していた。
この沈殿物全量を安定剤含有緩衝液ろｊｌ Ｑ ｒｕｌ
に溶解し、溶解液をＤ Ｅ Ａ、 Ｐｉ−セルロースカ
ラム（５ｘ７０α）に加え、生理活性物質ＳＰＦ’−１
を吸着させた。これに０．３ Ｍ Ｎａ（Ｊ！浴溶液、
用いて段階的に溶出させ、活性部分を分取する。侍られ
ＤＥＡＲ−セファデックスＡ−２５のカラム（２４×５
０ｃＭＬ）に加え、活性部分を吸着はせ、これ罠燐酸緩
衝液中の食塩濃度を直線的に上昇させつつ溶出を行い、
活性部分を分取する。得られた活性汀１［］、（ＳＸＩ
Ｏ’単位であった。
に溶解し、溶解液をＤ Ｅ Ａ、 Ｐｉ−セルロースカ
ラム（５ｘ７０α）に加え、生理活性物質ＳＰＦ’−１
を吸着させた。これに０．３ Ｍ Ｎａ（Ｊ！浴溶液、
用いて段階的に溶出させ、活性部分を分取する。侍られ
ＤＥＡＲ−セファデックスＡ−２５のカラム（２４×５
０ｃＭＬ）に加え、活性部分を吸着はせ、これ罠燐酸緩
衝液中の食塩濃度を直線的に上昇させつつ溶出を行い、
活性部分を分取する。得られた活性汀１［］、（ＳＸＩ
Ｏ’単位であった。
史に、この溶出液を濃縮しゲル濾過材トヨノξ−ルＨＷ
−５０ＦのカラＡ（２Ｘ１００ｃｍ）に加え、活性画分
を分取する。得られた活性は２．２ＸＩＤ’単位であっ
た。
−５０ＦのカラＡ（２Ｘ１００ｃｍ）に加え、活性画分
を分取する。得られた活性は２．２ＸＩＤ’単位であっ
た。
ここに得られた溶出液を凍結乾燥し生理活性物質８ＰＦ
−１の白色粉末３５１］ｍ９を得た。
−１の白色粉末３５１］ｍ９を得た。
第１図は生理活性物質８ＰＦ−１３，５係水溶液の紫外
線吸収スペクトルを示し、第２図は同じく６．１チ水溶
液の紫外線吸収スはクトルを示し、第３図は同じく赤外
線吸収スペクトルを示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 簾１ ｌ ｎｍ 第２図 ｍ
線吸収スペクトルを示し、第２図は同じく６．１チ水溶
液の紫外線吸収スはクトルを示し、第３図は同じく赤外
線吸収スペクトルを示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 簾１ ｌ ｎｍ 第２図 ｍ
Claims (1)
- （１）ストレプトコツカス属に属する細菌を培養するに
際し、培養中の適当な時期にペニシリン又はその関連物
質を添加して培養し７、各種菌体生産物を菌体外に排出
せしめることを特徴とするストレプトコツカス属細菌の
培養法。
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13938483A JPS6030677A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | ストレプトコツカス属細菌の培養法 |
| CA000459394A CA1237085A (en) | 1983-08-01 | 1984-07-20 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| GB08418745A GB2146028B (en) | 1983-08-01 | 1984-07-23 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| AU31000/84A AU572529B2 (en) | 1983-08-01 | 1984-07-24 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| CH3684/84A CH663033A5 (fr) | 1983-08-01 | 1984-07-30 | Substance-melange dite ''spf-100'' et procede pour sa preparation. |
| DE19843428017 DE3428017A1 (de) | 1983-08-01 | 1984-07-30 | Spf-100 und verfahren zu seiner herstellung |
| KR1019840004559A KR850002276A (ko) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Spf-100의 제조방법 |
| SE8403914A SE461532B (sv) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Cancermotverkande och immunaktiverande aemne (spf-100) |
| FR8412119A FR2550223B1 (fr) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Spf-100 et procede de preparation |
| NL8402388A NL8402388A (nl) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Geneesmiddel spf-100 en werkwijze voor de bereiding hiervan. |
| US06/746,514 US4656037A (en) | 1983-08-01 | 1985-06-19 | SPF-100 and process for the preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13938483A JPS6030677A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | ストレプトコツカス属細菌の培養法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6030677A true JPS6030677A (ja) | 1985-02-16 |
| JPH026511B2 JPH026511B2 (ja) | 1990-02-09 |
Family
ID=15244054
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13938483A Granted JPS6030677A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | ストレプトコツカス属細菌の培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6030677A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5615685A (en) * | 1979-07-16 | 1981-02-14 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Induction of l-form bacterium of hemolytic streptococcus |
-
1983
- 1983-08-01 JP JP13938483A patent/JPS6030677A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5615685A (en) * | 1979-07-16 | 1981-02-14 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Induction of l-form bacterium of hemolytic streptococcus |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH026511B2 (ja) | 1990-02-09 |
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