JPS61115489A - 溶菌酵素の製造法 - Google Patents
溶菌酵素の製造法Info
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- JPS61115489A JPS61115489A JP59237126A JP23712684A JPS61115489A JP S61115489 A JPS61115489 A JP S61115489A JP 59237126 A JP59237126 A JP 59237126A JP 23712684 A JP23712684 A JP 23712684A JP S61115489 A JPS61115489 A JP S61115489A
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、細胞性枯菌ポリスホンドリウム属（Ｐｏｌｙ
ｓｈｏｎｄｙｌｉｕｍ ） に属する微生物を用いて
細菌菌体溶菌酵素を製造する方法に関する。
ｓｈｏｎｄｙｌｉｕｍ ） に属する微生物を用いて
細菌菌体溶菌酵素を製造する方法に関する。
（従来の技術）
細菌菌体溶菌酵素は、溶菌酵素とも呼ばれ、卵白から得
られたりゾチームがよく知られている。
られたりゾチームがよく知られている。
しかしながら、卵白リゾチームの溶菌スペクトルは、グ
ラム陽性細菌の一部に限られ、ラクトバチルス属、スト
レプトコツカス属などに代表される乳酸菌には一般に作
用しない。
ラム陽性細菌の一部に限られ、ラクトバチルス属、スト
レプトコツカス属などに代表される乳酸菌には一般に作
用しない。
（発明が解決しようとする問題）
本発明者等は、卵白リゾチームよりも溶菌スペクトルの
広い酵素を得ることを目的として挿々研究した結果、土
壌より得られた細胞性枯菌、さらに詳しくはポリスホン
ドリウム属に属する新規な微生物（新菌株）を分離する
ことができ、かつそれが産生ずる酵素は、卵白リゾチー
ムの働かなかった乳酸菌に対しても速やかに溶菌作用を
示すことを見出し、本発明を完成した。
広い酵素を得ることを目的として挿々研究した結果、土
壌より得られた細胞性枯菌、さらに詳しくはポリスホン
ドリウム属に属する新規な微生物（新菌株）を分離する
ことができ、かつそれが産生ずる酵素は、卵白リゾチー
ムの働かなかった乳酸菌に対しても速やかに溶菌作用を
示すことを見出し、本発明を完成した。
本発明の酵素は、前記の如く細胞性枯菌の培養により製
造されるもので、起源的にめずらしいものである。また
、従来公知の卵白リソチームと相異し、溶菌スペクトル
が広いという特徴を有している。さらに公知の溶菌酵素
、例えば、アクロモバクタ−・ルナータスやバチルス・
ズブチルスなどの菌株から得られた溶菌酵素の作用しな
いような低酸性域でさえ、作用するという従来その例を
見ない特徴を有する新規な溶菌酵素である。
造されるもので、起源的にめずらしいものである。また
、従来公知の卵白リソチームと相異し、溶菌スペクトル
が広いという特徴を有している。さらに公知の溶菌酵素
、例えば、アクロモバクタ−・ルナータスやバチルス・
ズブチルスなどの菌株から得られた溶菌酵素の作用しな
いような低酸性域でさえ、作用するという従来その例を
見ない特徴を有する新規な溶菌酵素である。
（問題点を解決するための手段）
本発明者等は、各地の土壌より数多くの微生物菌株を分
離し、その溶菌酵素生産の有無を検索し、その結果、前
述の特徴を有する酵素を産生ずる新規な菌株を分離する
ことに成功した。
離し、その溶菌酵素生産の有無を検索し、その結果、前
述の特徴を有する酵素を産生ずる新規な菌株を分離する
ことに成功した。
ここに分離された微生物菌株はポリスホンドリウム・パ
リディンＬＥ−１（工業技術院微生物工業技術研究所
寄託微工研条寄 第６３３号）、ポリスホンドリウム・
バイオラセウムＬＥ−１（同寄託微工研条寄 第６３２
号）と名づけ、オリーブ著「ジ・ミセトゾーンズＪ（１
９７５年）によって、細胞性枯菌ポリスホンドリウム属
に属する菌株であると同定した。
リディンＬＥ−１（工業技術院微生物工業技術研究所
寄託微工研条寄 第６３３号）、ポリスホンドリウム・
バイオラセウムＬＥ−１（同寄託微工研条寄 第６３２
号）と名づけ、オリーブ著「ジ・ミセトゾーンズＪ（１
９７５年）によって、細胞性枯菌ポリスホンドリウム属
に属する菌株であると同定した。
本菌株の菌学的性質は次の通りである。
（１）子実体の晒は太く、液胞性の細胞からなる□タマ
ホコリカビ科（Ｄｉｃｒｙｏｓｔｅｌ １ａｃｅａｅ）
（２）子実体は規則的に輪生技を形成する□ムラサキカ
ビモドキ属（Ｐｏｌｙｓｐｈｏｎｄｙｔｉｕｍ）（３−
ｉ）子実体は規則的に輪生技を形成し、赤紫色を帯びる
□ムラサキカビモドキ （Ｐ、 ｖｉｏｌａｃｅｕｍ） （３−ｉｉ）子実体は規則的に輪生技を形成し、白色で
ある□シロカビモドキ （Ｐ、 ｐａｌｌｉｄｕｍ） 本発明の方法は、ポリスホンドリウム属に属する溶菌性
酵素の生産菌を、培地に接種、培養することによって実
施される。
ホコリカビ科（Ｄｉｃｒｙｏｓｔｅｌ １ａｃｅａｅ）
（２）子実体は規則的に輪生技を形成する□ムラサキカ
ビモドキ属（Ｐｏｌｙｓｐｈｏｎｄｙｔｉｕｍ）（３−
ｉ）子実体は規則的に輪生技を形成し、赤紫色を帯びる
□ムラサキカビモドキ （Ｐ、 ｖｉｏｌａｃｅｕｍ） （３−ｉｉ）子実体は規則的に輪生技を形成し、白色で
ある□シロカビモドキ （Ｐ、 ｐａｌｌｉｄｕｍ） 本発明の方法は、ポリスホンドリウム属に属する溶菌性
酵素の生産菌を、培地に接種、培養することによって実
施される。
培地としては、固体状のものでも液体状のものでもよい
。通常は液体培地を使用し、振盪培養または通気攪拌培
養など、好気的条件下で実施するのが有利である。
。通常は液体培地を使用し、振盪培養または通気攪拌培
養など、好気的条件下で実施するのが有利である。
培地組成としては、通常用いられているものが用いられ
る。すなわち、炭素源としてはグルコース、ラクトース
などの糖類、窒素源としてはペプトン、酵素エキス、乾
燥菌体、脱脂粉乳、アンモニウム塩類、硝酸塩類などの
有機、無機の窒素含有化合物が用いられる。また無機塩
としてはカリウム、マグネシウムなどの金属をリン酸塩
、硫酸塩などの形で用いてもよい。
る。すなわち、炭素源としてはグルコース、ラクトース
などの糖類、窒素源としてはペプトン、酵素エキス、乾
燥菌体、脱脂粉乳、アンモニウム塩類、硝酸塩類などの
有機、無機の窒素含有化合物が用いられる。また無機塩
としてはカリウム、マグネシウムなどの金属をリン酸塩
、硫酸塩などの形で用いてもよい。
培養条件は、目的とする溶菌酵素の蓄積量が最大となる
ように適宜選択又は調整される。本発明者等の研究によ
れば、培地のｐＨは４，０〜８．０、好ましくは５．５
〜７．０、培養温度は１５〜４０℃好ましくは２０〜３
０℃で、培養時間は２〜４日の条件を、大体満足すれば
よいことが判明した。
ように適宜選択又は調整される。本発明者等の研究によ
れば、培地のｐＨは４，０〜８．０、好ましくは５．５
〜７．０、培養温度は１５〜４０℃好ましくは２０〜３
０℃で、培養時間は２〜４日の条件を、大体満足すれば
よいことが判明した。
かくて、所望の溶菌酵素は培養液や菌体中に充分蓄積さ
れる。
れる。
本発明に於いて、所望の酵素を取得するには、この種の
技術分野における通常の分離、精製手段を、採用し得る
。また必要により任意純度のものを得ることができる。
技術分野における通常の分離、精製手段を、採用し得る
。また必要により任意純度のものを得ることができる。
具体的には例えば次のように行う。
即ち、まず遠心分離または濾過などの方法によって、菌
体と培養液とを分離する。分離した菌体の方は、超音波
などを用いて菌体を破砕した後、さらに遠心分離により
細胞残渣を除去し、上澄液を得る。この上澄液はそのま
３使用しうる。前記上澄液は、また、後記する、培養液
と同様な処理を行ない、目的物をうろことができる。
体と培養液とを分離する。分離した菌体の方は、超音波
などを用いて菌体を破砕した後、さらに遠心分離により
細胞残渣を除去し、上澄液を得る。この上澄液はそのま
３使用しうる。前記上澄液は、また、後記する、培養液
と同様な処理を行ない、目的物をうろことができる。
一方、培養液の方は、そのままの状態で硫酸アンモニウ
ムのような塩を添加して塩析したり、あるいはアルコー
ル類、アセトンのような親水性有機溶媒を添加して目的
物を分画、沈殿させる。
ムのような塩を添加して塩析したり、あるいはアルコー
ル類、アセトンのような親水性有機溶媒を添加して目的
物を分画、沈殿させる。
さらに、イオン交換体に吸着、脱着させる方法あるいは
セファクリル（ファルマンア社製）やトヨパール（東洋
曹達工業型）などを用いたゲル濾過法などを、単独また
は適宜組み合わせることによりその精製度を高めること
ができる。
セファクリル（ファルマンア社製）やトヨパール（東洋
曹達工業型）などを用いたゲル濾過法などを、単独また
は適宜組み合わせることによりその精製度を高めること
ができる。
本発明の酵素の作用は、ｐＨが約２〜７という広い範囲
で認められる。特に、ρ１１が３〜６の酸性側で、高い
活性を有する（第１図；なおρ■の調整はマクルベイン
氏緩衝液（イオン強度０．０６ ）によって行った。）
。
で認められる。特に、ρ１１が３〜６の酸性側で、高い
活性を有する（第１図；なおρ■の調整はマクルベイン
氏緩衝液（イオン強度０．０６ ）によって行った。）
。
また、ｐＨ安定性についてもＩ）Ｈが約２〜８において
、比較的安定である〔第２図；なおｐ１安定性は、本発
明の実施の結果得られる酵素を、 ｐ１１２〜４（○で表示）は、グリシン−塩酸緩衝液（
０，０１μ）、 ｐＨ４〜６（・で表示）は、酢酸緩衝液（〃）、 ９１１６〜８（△で表示）は、リン酸緩衝液（〃）、 ｐＨ８〜１０ （ムで表示）は、アンモニウム緩衝液（
〃）、 に加え、３０℃ １６時間保った後、残存酵素活性を測
定したものである。〕。
、比較的安定である〔第２図；なおｐ１安定性は、本発
明の実施の結果得られる酵素を、 ｐ１１２〜４（○で表示）は、グリシン−塩酸緩衝液（
０，０１μ）、 ｐＨ４〜６（・で表示）は、酢酸緩衝液（〃）、 ９１１６〜８（△で表示）は、リン酸緩衝液（〃）、 ｐＨ８〜１０ （ムで表示）は、アンモニウム緩衝液（
〃）、 に加え、３０℃ １６時間保った後、残存酵素活性を測
定したものである。〕。
酵素反応の至適温度は約４５〜５５℃付近である（第３
図）。
図）。
さらに熱安定性については、６０℃、１０分間の加熱も
充分安定である〔第４図；なお熱安定性は、酵素をｐＨ
４，ｏ（酢酸緩衝液０．０１Ｍ）、ｐＨ７，０（’Ｊン
酸緩衝液０．０１Ｍ）に加え、各温度で１５分加熱し、
残存活性を測定した。〕。
充分安定である〔第４図；なお熱安定性は、酵素をｐＨ
４，ｏ（酢酸緩衝液０．０１Ｍ）、ｐＨ７，０（’Ｊン
酸緩衝液０．０１Ｍ）に加え、各温度で１５分加熱し、
残存活性を測定した。〕。
なお、酵素の溶解作用の測定（算定）は、次の方法で行
った： 基質としては、（別設の言及のない限り）ミクロコツカ
ス・リゾダイクチカス（Ｍｉｃｒｏｃｃｕｓしｙｓｏｄ
ｅｉｋｔｉｃｕｓ ） の乾燥菌体（シクマ社製）ヲ
用いた。この基質をマクルベイン氏緩衝液（ｐＨ３，５
、イオン強度０．０６ ）に加え、５７０ｍμの光学密
度（０ｐｔｉｃａｌ Ｄｅｎｓｉｔｙ 以下、０．Ｄ
、と略称）が０．７になるように調整した懸濁液３．０
ミＩＪ ＩＪットルに対し、酵素液０．１ ミＩＪ Ｉ
Ｊットルを加え、３７℃に保温し、その時の上記波長に
おける濁度減少度をもって溶菌活性とした。また、０．
０．５７０ｍμを毎分０．００１だけ減少させる酵素量
を溶菌活性の１単位と定義した。尚、対照液としては酵
素液の代りに水を加えたものを用いた。
った： 基質としては、（別設の言及のない限り）ミクロコツカ
ス・リゾダイクチカス（Ｍｉｃｒｏｃｃｕｓしｙｓｏｄ
ｅｉｋｔｉｃｕｓ ） の乾燥菌体（シクマ社製）ヲ
用いた。この基質をマクルベイン氏緩衝液（ｐＨ３，５
、イオン強度０．０６ ）に加え、５７０ｍμの光学密
度（０ｐｔｉｃａｌ Ｄｅｎｓｉｔｙ 以下、０．Ｄ
、と略称）が０．７になるように調整した懸濁液３．０
ミＩＪ ＩＪットルに対し、酵素液０．１ ミＩＪ Ｉ
Ｊットルを加え、３７℃に保温し、その時の上記波長に
おける濁度減少度をもって溶菌活性とした。また、０．
０．５７０ｍμを毎分０．００１だけ減少させる酵素量
を溶菌活性の１単位と定義した。尚、対照液としては酵
素液の代りに水を加えたものを用いた。
本発明に係わる新規溶菌酵素は、イオン交換り ｉロマ
トグラフィーにかけると、ミクロコツカス・リゾタイク
チカスに対して溶解作用を示す活性成分が少なくとも３
種類認められ、数種類の酵素の混合物であることがわか
る。従って、酵素の採取、精製に当たっては、完全に各
酵素を精製、単離してもよいし、目的によっては２種以
上の酵素の混った任意純度の部分精製品として採取し、
これを使用してもよい。溶解作用の進行と共にエルソン
・モルガン反応［Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ Ｆ、Ｎｅｕｆｅ
ｌｄ外−名著； Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ ” ［’ｏｍｐｌｅｘＣａｒｂｏｈｙｄｒａ
ｔｅｓ ” ｖｏｌ、 ＩＩＩ、 ６９１〜６９２ 、
１９６６：］に呈色するヘキソサミンが可溶化される（
第５図）。
トグラフィーにかけると、ミクロコツカス・リゾタイク
チカスに対して溶解作用を示す活性成分が少なくとも３
種類認められ、数種類の酵素の混合物であることがわか
る。従って、酵素の採取、精製に当たっては、完全に各
酵素を精製、単離してもよいし、目的によっては２種以
上の酵素の混った任意純度の部分精製品として採取し、
これを使用してもよい。溶解作用の進行と共にエルソン
・モルガン反応［Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ Ｆ、Ｎｅｕｆｅ
ｌｄ外−名著； Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ ” ［’ｏｍｐｌｅｘＣａｒｂｏｈｙｄｒａ
ｔｅｓ ” ｖｏｌ、 ＩＩＩ、 ６９１〜６９２ 、
１９６６：］に呈色するヘキソサミンが可溶化される（
第５図）。
なお、第５図は次の処方による；
まずＯ，ＯＩＭの酢酸緩衝液に溶解した本発明の酵素液
７．５ ｎｌｉを、Ｂ、 Ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍのペプ
チドグリカン１５ｍｇに加え、３７℃にて反応させた。
７．５ ｎｌｉを、Ｂ、 Ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍのペプ
チドグリカン１５ｍｇに加え、３７℃にて反応させた。
濁度の減少は０．１］、５７０ｎｍの変化で表わした。
Ｎ−アセチルアミノ糖の測定はＧｈｙｓｅｎらの手法に
従い行った。
従い行った。
（本発明の効果）
本発明により１坪られる溶菌酵素は、卵白リゾチームに
比べはるかに広い溶菌スペクトルを示す。
比べはるかに広い溶菌スペクトルを示す。
すなわち乳酸菌を含むほとんどのダラム陽性閑に対し溶
菌作用を有する。殊に、公知の各種溶菌酵素が比較的作
用しないような低酸性域でも、作用するという点におい
て大きな特徴がある。
菌作用を有する。殊に、公知の各種溶菌酵素が比較的作
用しないような低酸性域でも、作用するという点におい
て大きな特徴がある。
本発明の酵素は、たとえば医学、薬学の領域における抗
菌物質として用いられる。また食品製造の分野において
は、副作用の少ない天然防腐剤として用いることができ
る。更に近年バイオテクノロジー分野で、話題になって
いる細胞融合技術に用いうるなど、広範な応用が期待さ
れる。
菌物質として用いられる。また食品製造の分野において
は、副作用の少ない天然防腐剤として用いることができ
る。更に近年バイオテクノロジー分野で、話題になって
いる細胞融合技術に用いうるなど、広範な応用が期待さ
れる。
実施例１
ヘフトン０．５％酵母エキス０．０５％、グルコース０
．５％、リン酸−カリウム０．２２５％、リン酸ニカリ
ウム０．０６７％、硫酸マグネシウム（７水加物） ０
．０５％を含む液体培地１５リツトルを５０リツトル容
培養タンクに入れ、１２１℃に於いて、１５分間滅菌し
、クレブシェラ・エロゲネス菌を接種し、３５℃、１５
０回転／分、２０リットル／分の通気条件で４８時間培
養を行った。菌の生育に伴って生ずる泡は消泡剤を添加
して防止した培養終了後、培養液を１２１℃に於いて、
５分間滅菌し、２日間の振盪フラスコ培養により得たポ
リスホンドリウム・パリディンＬＥ−１のアメーバをこ
の滅菌培養液に加えた。ついで２５℃、１５０回転／分
、２０リットル／分の通気条件下で７２時間培養を行っ
た。この培養の終了後、遠心分離により得たアメーバ細
胞（湿重量９７ｇ）を脱イオン水で洗浄し、次に細胞量
の各重量の水を加え、冷却しながら２０ＫＨｚ、２０分
間の条件で超音波発振器にかけ細胞を破砕した。ついで
遠心分離法により細胞残渣を除去し、上澄液１１０ミＩ
Ｊ ＩＪットルを得た。この上澄液の１ミリリツトル当
たりの酵素活性量は１８０単位であった。
．５％、リン酸−カリウム０．２２５％、リン酸ニカリ
ウム０．０６７％、硫酸マグネシウム（７水加物） ０
．０５％を含む液体培地１５リツトルを５０リツトル容
培養タンクに入れ、１２１℃に於いて、１５分間滅菌し
、クレブシェラ・エロゲネス菌を接種し、３５℃、１５
０回転／分、２０リットル／分の通気条件で４８時間培
養を行った。菌の生育に伴って生ずる泡は消泡剤を添加
して防止した培養終了後、培養液を１２１℃に於いて、
５分間滅菌し、２日間の振盪フラスコ培養により得たポ
リスホンドリウム・パリディンＬＥ−１のアメーバをこ
の滅菌培養液に加えた。ついで２５℃、１５０回転／分
、２０リットル／分の通気条件下で７２時間培養を行っ
た。この培養の終了後、遠心分離により得たアメーバ細
胞（湿重量９７ｇ）を脱イオン水で洗浄し、次に細胞量
の各重量の水を加え、冷却しながら２０ＫＨｚ、２０分
間の条件で超音波発振器にかけ細胞を破砕した。ついで
遠心分離法により細胞残渣を除去し、上澄液１１０ミＩ
Ｊ ＩＪットルを得た。この上澄液の１ミリリツトル当
たりの酵素活性量は１８０単位であった。
実施例２
実施例１の培養で１等だアメーバ細胞を除去した培養上
澄液１０００ミリリツトルに対して、６８４ｇの割合で
硫酸アンモニウム（７水加物）を添加し、さらに４℃に
て一夜静置し、塩析された沈澱物を遠心分離により集め
た。これを充分量の水で透析した。この濃縮透析内液５
０ ミＩＪ ＩＪットルの１ミリ当たりの酵素活性量は
、５５０単位であった。
澄液１０００ミリリツトルに対して、６８４ｇの割合で
硫酸アンモニウム（７水加物）を添加し、さらに４℃に
て一夜静置し、塩析された沈澱物を遠心分離により集め
た。これを充分量の水で透析した。この濃縮透析内液５
０ ミＩＪ ＩＪットルの１ミリ当たりの酵素活性量は
、５５０単位であった。
実施例３
実施例１でｉ尋だ上澄液を酵素源として各種微生物菌体
に対する溶解試験を行った。第１表に示す各種細菌をそ
れぞれ液体培養し、遠心分；雄により菌体を採取し、マ
クルベイン氏緩衝液（ｐＨ３，５、イオン強度０．０６
）に懸濁させ、先に述べた溶菌活性測定法に従って溶
菌の有無を判定した。
に対する溶解試験を行った。第１表に示す各種細菌をそ
れぞれ液体培養し、遠心分；雄により菌体を採取し、マ
クルベイン氏緩衝液（ｐＨ３，５、イオン強度０．０６
）に懸濁させ、先に述べた溶菌活性測定法に従って溶
菌の有無を判定した。
その結果を第１表に示す。
尚、リゾチームの溶菌活性測定法としては、マクルベイ
ン氏緩衝液の代りに、リン酸緩衝液（ｐＨ７，０、イオ
ン強度０．０６ ）を用いること、本発明の酵素の代り
にリゾチーム液（１５μ９／ｒｎｉ濃度）を用いること
以外は、すべて前記した溶菌活性測定法に従った。
ン氏緩衝液の代りに、リン酸緩衝液（ｐＨ７，０、イオ
ン強度０．０６ ）を用いること、本発明の酵素の代り
にリゾチーム液（１５μ９／ｒｎｉ濃度）を用いること
以外は、すべて前記した溶菌活性測定法に従った。
第１表から明らかなように、本発明に基く酵素はｐＨ３
，５の酸性下において卵白リゾチームよりも作用範囲が
広いことが明らかである。
，５の酸性下において卵白リゾチームよりも作用範囲が
広いことが明らかである。
実施例４
ヘフトン０．５％、酵母エキス０．０５％、クルコース
０．５％、クレブシェラ・エロゲネス凍結乾燥菌体１．
０％、リン酸−カリウム０．２２５％、リン酸二カリウ
ム０．０６７％、硫酸マグネシウム（７水加物） ０．
０５％を含む液体培地を５００ ミＩＪ ＩＪットル容
・坂ロフラスコ１０本に５０ミリリツトルずつ分注し、
１２１℃に於いて１５分間滅菌した。次いでポリスホン
ドリウム・バリディンＬＥ−１のアメーバを接種し、２
２℃で３日間振盪培養を行った。培養終了後、遠心分離
によりアメーバ細胞破砕液を遠心分離した上澄液の１ミ
リリツトル当たりの酵素活性量を測定したところ、１７
０単位であった。また、培養上澄液の実施例２と同様に
硫酸アンモニウムで塩析後、透析した透析内液の酵素活
性量は、４６単位であった。
０．５％、クレブシェラ・エロゲネス凍結乾燥菌体１．
０％、リン酸−カリウム０．２２５％、リン酸二カリウ
ム０．０６７％、硫酸マグネシウム（７水加物） ０．
０５％を含む液体培地を５００ ミＩＪ ＩＪットル容
・坂ロフラスコ１０本に５０ミリリツトルずつ分注し、
１２１℃に於いて１５分間滅菌した。次いでポリスホン
ドリウム・バリディンＬＥ−１のアメーバを接種し、２
２℃で３日間振盪培養を行った。培養終了後、遠心分離
によりアメーバ細胞破砕液を遠心分離した上澄液の１ミ
リリツトル当たりの酵素活性量を測定したところ、１７
０単位であった。また、培養上澄液の実施例２と同様に
硫酸アンモニウムで塩析後、透析した透析内液の酵素活
性量は、４６単位であった。
実施例５
大豆レシチン０．０８％、脱脂粉乳２％、プロテオース
ペプトン１％、リン酸−カリウム０．６８％を含む液体
培地を５００ ミＩＪ ＩＪットル容・坂ロフラスコ１
０本に５０ミリリツトルずつ分注し、１２１℃に於いて
１５分間滅菌した。次いでポリスホンドリウム・パリデ
ィンＬＥ−１のアメーバを接種し、２２℃で３日間振盪
培養を行った。培養終了後、遠心分離によりアメーバ細
胞と培養液とを分離した。実施例１と同様の方法で得た
アメーバ細胞破砕液の遠心分離した上澄液の１ミリリツ
トル当たりの酵素活性量は７２単位であった。また、培
養上澄液を実施例２と同様に硫酸アンモニウムで塩析後
、透析した透析内液５０ ミＩＪ ＩＪットルにおける
１ミリリツトル当たりの酵素活性量は６００単位であっ
た。
ペプトン１％、リン酸−カリウム０．６８％を含む液体
培地を５００ ミＩＪ ＩＪットル容・坂ロフラスコ１
０本に５０ミリリツトルずつ分注し、１２１℃に於いて
１５分間滅菌した。次いでポリスホンドリウム・パリデ
ィンＬＥ−１のアメーバを接種し、２２℃で３日間振盪
培養を行った。培養終了後、遠心分離によりアメーバ細
胞と培養液とを分離した。実施例１と同様の方法で得た
アメーバ細胞破砕液の遠心分離した上澄液の１ミリリツ
トル当たりの酵素活性量は７２単位であった。また、培
養上澄液を実施例２と同様に硫酸アンモニウムで塩析後
、透析した透析内液５０ ミＩＪ ＩＪットルにおける
１ミリリツトル当たりの酵素活性量は６００単位であっ
た。
実施例６
ポリスホンドリウム・バイオラセウムＬＥ−１のアメー
バを実施例４で示した条件で３日間振盪培養した。培養
終了後、遠心分ｉｉ！ して集めたアメーバ細胞を実施
例１と同様の方法で超音波により破砕した・さらに・遠
心分離して得た上澄液の１１ミリリツトル当たりの酵素
活性量は１７０単位であり、しかも各種微生物に対して
実施例３と同様の洛菌作用を示した。また、アメーバ細
胞を取り除いた培養上澄液１００ミリリツトルについて
実施例２と同様に硫酸アンモニウムを加えて塩析し、つ
づいて塩析物を少量の水に溶かし透析して濃縮酵素液５
０ ミ！Ｊ ＩＪットルを辱た。この濃縮酵素液１ミリ
リツトル当たりの酵素活性量は４２単位であった。
バを実施例４で示した条件で３日間振盪培養した。培養
終了後、遠心分ｉｉ！ して集めたアメーバ細胞を実施
例１と同様の方法で超音波により破砕した・さらに・遠
心分離して得た上澄液の１１ミリリツトル当たりの酵素
活性量は１７０単位であり、しかも各種微生物に対して
実施例３と同様の洛菌作用を示した。また、アメーバ細
胞を取り除いた培養上澄液１００ミリリツトルについて
実施例２と同様に硫酸アンモニウムを加えて塩析し、つ
づいて塩析物を少量の水に溶かし透析して濃縮酵素液５
０ ミ！Ｊ ＩＪットルを辱た。この濃縮酵素液１ミリ
リツトル当たりの酵素活性量は４２単位であった。
第１図は、本発明によって得られる酵素の至適ｐｔｌの
曲線を示すものでなる。 第２図は、本発明によって碍られる酵素の至適ｐＨの安
定性を示すものである。 第３図は、本発明によって得られる酵素の至適温度を示
すものである。 第４図は、本発明によって得られる酵素の至適熱安定性
を示すものである。 第５図は、本発明によって得られる酵素の溶解性を示す
ものである。 第１図 （ｐＨ） 第２図 （ｐＨ） 第３図 反Ｅ：温度（’Ｃ）’ 温 度 （０Ｃ） 及刀厄碕Ｒ（ｈｒ）
曲線を示すものでなる。 第２図は、本発明によって碍られる酵素の至適ｐＨの安
定性を示すものである。 第３図は、本発明によって得られる酵素の至適温度を示
すものである。 第４図は、本発明によって得られる酵素の至適熱安定性
を示すものである。 第５図は、本発明によって得られる酵素の溶解性を示す
ものである。 第１図 （ｐＨ） 第２図 （ｐＨ） 第３図 反Ｅ：温度（’Ｃ）’ 温 度 （０Ｃ） 及刀厄碕Ｒ（ｈｒ）
Claims (1)
- 微生物の細胞壁を溶解する酵素を生産するポリスホンド
リウム属に属する菌株を炭素源、窒素源、無機塩類及び
その他の栄養物質を含有する培地に於いて培養し、培養
物から前記性質を有する酵素を採取することを特徴とす
る溶菌酵素の製造法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59237126A JPS61115489A (ja) | 1984-11-10 | 1984-11-10 | 溶菌酵素の製造法 |
| US06/795,406 US4737461A (en) | 1984-11-10 | 1985-11-06 | Novel bacteriolytic enzyme and process for preparing the same |
| GB08527424A GB2168705B (en) | 1984-11-10 | 1985-11-07 | Novel bacteriolytic enzyme and process for preparing the same |
| SE8505264A SE460853B (sv) | 1984-11-10 | 1985-11-07 | Bakteriolytiskt enzym och foerfarande foer dess framstaellning genom odling av polysphondylium |
| DE19853539702 DE3539702A1 (de) | 1984-11-10 | 1985-11-08 | Bakteriolytisches enzym und verfahren zu seiner herstellung |
| CH4810/85A CH666049A5 (fr) | 1984-11-10 | 1985-11-08 | Enzyme bacteriolytique et son procede de preparation. |
| FR8516664A FR2573091B1 (fr) | 1984-11-10 | 1985-11-12 | Nouvelle enzyme bacteriolytique et son procede de preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59237126A JPS61115489A (ja) | 1984-11-10 | 1984-11-10 | 溶菌酵素の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61115489A true JPS61115489A (ja) | 1986-06-03 |
| JPH0480675B2 JPH0480675B2 (ja) | 1992-12-21 |
Family
ID=17010791
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59237126A Granted JPS61115489A (ja) | 1984-11-10 | 1984-11-10 | 溶菌酵素の製造法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4737461A (ja) |
| JP (1) | JPS61115489A (ja) |
| CH (1) | CH666049A5 (ja) |
| DE (1) | DE3539702A1 (ja) |
| FR (1) | FR2573091B1 (ja) |
| GB (1) | GB2168705B (ja) |
| SE (1) | SE460853B (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT393134B (de) * | 1989-12-27 | 1991-08-26 | Danubia Petrochemie | Verfahren zur freisetzung von poly-3-hydroxycarbonsaeuren |
| DE4003827A1 (de) * | 1990-02-08 | 1991-08-22 | Danubia Petrochem Deutschland | Verfahren zur freisetzung von poly-3-hydroxycarbonsaeuren |
| US5449618A (en) * | 1991-04-26 | 1995-09-12 | Martin Marietta Energy Systems, Inc. | Methods of degrading napalm B |
| WO1992019373A1 (en) * | 1991-04-26 | 1992-11-12 | Martin Marietta Energy Systems, Inc. | Amoebae/bacteria consortia and uses for degrading wastes and contaminants |
| US5246584A (en) * | 1992-07-28 | 1993-09-21 | Martin Marietta Energy Systems, Inc. | Method and apparatus for destroying organic contaminants in aqueous liquids |
| JPH06247964A (ja) * | 1993-02-22 | 1994-09-06 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 新規生理活性物質ｈｓ−１及びその製造方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU519470A1 (ru) * | 1973-09-28 | 1976-06-30 | Днепропетровский Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.300-Летия Воссоединения Украины С Россией | Способ получени литических ферментов |
| JPS5332189A (en) * | 1976-09-07 | 1978-03-27 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Treatment of unicellular agar |
| US4144327A (en) * | 1978-03-20 | 1979-03-13 | G. D. Searle & Co. | Antimicrobial composition comprising lytic enzymes from physarum and an antimycotic agent |
-
1984
- 1984-11-10 JP JP59237126A patent/JPS61115489A/ja active Granted
-
1985
- 1985-11-06 US US06/795,406 patent/US4737461A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-07 SE SE8505264A patent/SE460853B/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-11-07 GB GB08527424A patent/GB2168705B/en not_active Expired
- 1985-11-08 CH CH4810/85A patent/CH666049A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1985-11-08 DE DE19853539702 patent/DE3539702A1/de active Granted
- 1985-11-12 FR FR8516664A patent/FR2573091B1/fr not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2573091B1 (fr) | 1988-04-15 |
| DE3539702C2 (ja) | 1987-06-11 |
| SE460853B (sv) | 1989-11-27 |
| GB2168705A (en) | 1986-06-25 |
| GB2168705B (en) | 1988-07-13 |
| CH666049A5 (fr) | 1988-06-30 |
| DE3539702A1 (de) | 1986-05-22 |
| JPH0480675B2 (ja) | 1992-12-21 |
| GB8527424D0 (en) | 1985-12-11 |
| US4737461A (en) | 1988-04-12 |
| FR2573091A1 (fr) | 1986-05-16 |
| SE8505264D0 (sv) | 1985-11-07 |
| SE8505264L (sv) | 1986-05-11 |
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