JPS61500972A - 静脈注射用のガンマグロブリンの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 静脈注射用のガンマグロプリ／の製法 発明の分野 この発明は、静脈注射に適したガンマグロブリンを吉川ｒる生成物およびそのも のの製造方法に関する。

この発明の背景 アメリカ特許４＋　１２＋３＋　８０５　（／ユナイダー）に：まコーンフラク ／ヨ７１１　ガンマグロブリンから静［注射に適した生成物を製造する方法か説 明されている。コー／　フラツフｇ／ｌｌはｐＨ６，７で緩衝水溶液に溶解され ている。この溶液は水酸化二手ル澱粉を含んでいる。その溶液をろ過した後、ポ リエチレングリコールを加えて１０％の濃度にする。／；ｌ：澱をろ過した後、 更にその溶液にポリエチレングリコール加えて、７Ω度を２０％にする。得られ た沈澱は静脈用に適した、修飾されない改良ガンマグロブリンである。

アメリカ特許４，１６５，３７０　（コバル）は　コーン　フラクション　ＩＩ 　ガンマグロブリン　から静脈注射に適した生成物を製造する方法を説明してい る。＝−ン　フラクション１１はｐＨ４，８−８，５および低イオンｌ；度の酸 を持ち、約３００−１０−６　ｃ＋ｗ−１オーム−１の電導度を持つ。・客演に 溶かされ、この溶液をろ過して、分子１４０００のポリエチレングリコールを加 えて、７；度を先ず４％とし、次いで５％のｌ；度にする。この溶液を遠心分離 にかけ、沈澱があれば除去し、その溶液に更にポリエチレングリコールを加え、 ７Ｈ度を１２％にする。

得られた沈澱は静脈に用いるに適し、−免疫学的に活性の修飾されないガンマグ ロブリンである。

上記の方法では、純粋のガンマグロブリンの収率はコーン　フラクションｉｌ　 のガンマグロブリンの約３０％である。収率を高める為に変更かなされたか、高 められｆ：収率は純度を犠牲にしてなされるのが普通で、一定の品質での高めふ れた収率は今まで不可能であった。

この発明の目的は静脈用に適した高純度ガンマグロブリンを高収率で分離するこ とである。

発明の要約 （ａ）血液又はその生成物からｉ′２：ａさせたガンマグロブ・Ｊンを溶液に溶 かし、 （ｂ）その溶液から不溶解沈澱を分離し、（Ｃ）分離した溶液にポリエチレング リコールを加え、（ｄ）ポリエチレングリコール溶液から沈澱を分離し、（ｅ） 溶液中のポリエチレングリコールの７２度を高くし、（ｆ）その高ｌ二度ポリエ チレング；ノコールｆ；液から沈澱しｎＷしたガンマグロブリンを分離し、 （ｇ）その精製ガンマグロブリンを、静Ｆ注射に適した溶液に溶解する静脈注射 用ガンマグロブリンの製造方法に於いて、 （１）ガンマグロブ、１ンのｌ８解、客演か中性のｐＨてあ、〕、（２）最初の ポリエチレングリコール添加工程で、ポリエチレングリコールを４．０−５．５ 重量％のｌ温度になるように加え、 （３）第２のポリエチレングリコール添加工程で、ポリエチレングリコールの７ コ度を、少なくとも９％で１６重量％を超えない様に増大させ、 （４）ポリエチレングリコールの添加工程のいずれか１つのデ゛ノエチレングノ フール添加の直前に、溶液に緩衝剤を加えることを特徴とする静脈注射に適した ガフマグロブリ／の改良製造方法 発明の詳細な説明 （ａ）血液生成物力鵡沈澱したガンマグロブリンの溶解。

本発明の生成物および方法の出発物質として用いられる力／マグロブリン：ヨ、 この技術分野で良く知みれているっ血液からガンマグロブリンを沈澱しそして分 離する特別の方法１よコーンの方法（コーン池Ｊ　、　Ａｘｅｒ、　Ｃｈｅｗ、 　Ｓｏｃ、　、Ｖｏｌ　、［ｉ８，４５９−４７５頁およびＶｏｌ　、７２．． ４７５−４７４７頁）またはコーン　フラクションＩ＋　の名称で知られている 。

静脈注射用には不都合な、このガンマグロブリン製品は中性ｐＨで水溶液に溶解 さｎる。この水溶液はイオン強度か低い。

この低いイ万ンｆ′ａ度は原料が７マグロブリン製品中に存在する塩に起因する か、または添加緩衝剤に帰することか出来る。生理的に認容性のある塩は、全て 緩衝剤として適当である。それらは燐酸　塩、クエン酸塩およびトリヒドロキシ −エチル−アミ／−メタンを含んで℃・る。

イγ／ｌ二度は０．００１−０．０１５　Ｍｏｌ／ｌの範囲内にあることが出来 る。緩衝液を加えるとすれば、その範囲：よ０．０ｆ−０，０１５Ｍｏｌ／Ｚの 間か好ましい。

その溶液のｐＨは適当な酸または塩基、例えばクエ／酸、クエン酸ナトリウムま たは、必要により、水酸化ナトリウムを加えることにより調整できる。クエン酸 塩か好ましい。

いま、溶液のイτ〉濃度は出来るたけ高く、その温度は出来る１こけ低くするへ きであることが？１った。もし、附加的を緩衝液を用いｔいなみば、溶液の１反 は室温であることか出来る。もし、イｔンｌＨ度か０．０１　０．０１５　Ｍｏ ｌ／１であルＪ−きは、その（星度は５−１５’Ｃの間で灯るへきである。

ガンマグロブリンは１−７重量％のｌ＝度で溶液に溶かされる。

好ましい濃度は３．１−４．９％である。

その７ＳＬ＋！ｉには、アメ・ツカ特許４，１２６．　６０５に公開されている ように、ヒドロニ／エチＪし澱粉、デモストローズ、アルブミ／、ポリアルコー ル、および４ゴリビニルビロリドンのような「ヒドロコロイド」が存在して良い 。

（ｂ）溶液からの非溶解性沈澱の分離。

ガンマグロブリンを溶解した後、不溶性不純物を、例えば、傾しＱｌろ過、また は遠心分離によって取り除く。

（Ｃ）分離した溶液へのポリエチレングリコールのｍ加。

得ろれた上澄液に分子１１２０００−６０００のポリエチレングリフール（ＰＥ Ｇ）を加える。このＰＥＧは４０００の平均分子ｌであるのがよい。

このＰＥＧは粉末としてバルク状でその上澄液に加えてよく、ＰＥＧ溶解溶液と して加えてもよい。ＰＥＧは室温で３−６、殊に４．０−５．５重量％なる。温 度になる様に分離溶液に加える。ＰＥＧ添加工程の一つのＰＥＧ添付の直前にガ ンマグロブ・ノン／ｇ液に緩＃：剤を加えることが重要である。有用な緩衝剤は 上に列記した。

緩衝剤添ｊＸ］＋７）ｉのイオンｉａｉは０．０２５−０．２５Ｍｏｌ　／］で ある。

（ｄ）ＰＥＧ溶液沈澱物の分離。

３−８％の２５１度になる様に、ＰＥＧを加えると、沈澱物が生成する。沈澱は 傾しめ、ろ過または遠心分離によって除去される。

’ｊ！ＦｉＦＪｏ　６　Ｌ−５００９７２（３）（ｅ）ポリエチレングリコール 濃度の増大。

溶液中のＰＥＧ７Ｅｉ度はＰＥＧの添加によって９−１６重量％まで増大する。

この段階の溶液温度は、おそら＜ｏ−ｔｏ’　ｃに減少するか、室温に維持さ机 る。

Ｃｆ）純粋ガンマグロブノン沈澱物の分離。

ＰＥＧ７Ｗ度を増加することにより沈澱するｖｊ製免疫グロブＪ＞を、べいで、 温和な分離方法、例えば、傾しゃ、ろ過、または遠心分離によって分離する。望 ましく；ま、その分離は遠心分離による。

得られた精製ガンマグロブリンは天然のもので、ＡＣＡか低く、静脈注射用に使 用するのに適している。

（ｇ）静脈注射用溶液への精製ガンマグロブリンの溶解。

静脈注射用溶液ガンマグロブリンを２−１０％、好ましくは約５％の１８度で水 溶液に溶解するのがよい。溶液は緩衝剤、例えばクエン酸及び／又は燐酸塩、糖 類、例えばグルコース、マルト−ス、サッカロース、及び等張化剤、例えば塩化 ナトリウムを含んでもよい。クエン酸塩か望ましい。２−３重量％のグルコース 及びｐＨ７のクエン酸塩５−；３０ａｎｃｌを含量する溶液か好ましい。

本発明の方法では、出発物質中のガンマグロブリン量に対し７０％、或はそれ以 上の高純度の生成物か得られる。生成物の叉施斑−１ コーン　フラクシｊンＩＩ−粉末をＮ　Ｏ，１ｍｏｌの燐酸塩クエン酸塩緩衝液 （７，０ＯｐＨ１１０“Ｃ）に注意深く撹拌し乍ら溶解、３．５％のプロティン 濃度にす払　ヒトじキノエチル澱粉か０．５％の、・２度で存在する。

生成沈澱物を除去し、溶液を一回のろ過工程で、層ろ過で澄明にする。プロティ ンの１度を２．５％に調整し、燐酸塩クエン酸塩濃度をＯ−ｉ２Ｍｏｌに調整し 、０．　５鳳○ｌの憐酸塩々工／酸塩緩衝液にｏ１濃度は燐酸塩／クエン酸塩の 含量に関する）を加えることにより、ｐＨを、７．０±０．１にエコする。、溶 液の温度を２０’　Ｃに加熱した後、５．５％のｌ二重室になる才で固体のボ・ ノエチレングリフール（ＰＥＧ４０００分子量４０００）を注意深く撹拌しなか らＯ−５％の７二度になるまで加え、完全に、溶解した。

その後、上澄液を傾しゃして、生成した沈殿物を除去し、層ろ過により精製した 。

精製上澄液を１０’Ｃに冷却し、１０゛ＣでＰＥＧ４０００の０．０３ｍｏｌの ｆＡ酸塩クりン酸塩縁衝液中５０％溶液で、撹拌し乍ら、ＰＥＧ４０００濃度が １４％になるまで希釈した。

得ちれた沈澱（ペースト状）を連続遠心分離によって集めた。

このペーストを２０ｉｍｏｌのクエン酸ナトリウム（溶液（ｐＨ＝７゜０±０． １）に溶解し、２．５％のグルコースを加える。こうして造られた溶液は次記の 特性値を示す。

プロティア　５．４％ ｐＨ７，００±０．０５ グルフース　２．５％±０．５Ｖ。

滲透度　３００−３３０モスＭｏｌ／ＩＡＣＡ　１０［ｉ／窮Ｉ ＨＰＬＣ：ダイマー＋モノ′マー　９９％この溶液を滅菌ろ過し瓶に入れ、場合 に上り凍結乾燥する。

夫胤医−２ コーン　ワラクンコン１１−粉末を、基層て、７ＡるｐＨて、注意深く撹拌した ら、注射用の水に溶解し、５％のプロティン濃度にする。ヒドロキシエチル澱粉 は０．５％の４度で存在する。

生成沈殿物を除去、溶液を一回のろ過工程で、層ろ過で澄明にする。ポリエチレ ン　グリコール（ＰＥＧ４０００）を、４０％溶液として、注意深く撹拌しなが ら加え、４．０％の濃度にする。沈澱を深ろ過して除去する。この澄明な上澄液 に０．３Ｎ１の燐酸塩緩衝液を加え、１０容；％の温度にする。そのＰＥＧ４０ ００の濃度は１０．４％に上昇している。

得られた沈澱（ペースト状）を連続遠心分離によって集める。

このペーストを附加的に０．９％のＮａＣ１と２．５％のグルコースを宵する１ ０ｍＭのクエン酸塩／燐酸塩緩衝液（ｐＨ＝７．０±０．１）に溶解する。

この再溶解溶液は次記の特性値を示す。

プロティン　５．４％ ｐＨ７，ＯＯ±０．０５ グルコース　２．５％±０．５％ ＡＣ，Ａ　１０［１／１ ＨＰＬＣ：ダイマー＋モノマー　９９％この溶液を無菌的にろ過し、瓶にいれ、 場合により、凍結乾燥する。コーン　フラクションＩｌ中の免疫プロブリ／の％ に対する免疫グロブリンの収率は７０％以上である。

国際調査報告　ＰＣで三Ｐｓ三００３二〇ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　ＴＨｈ　工’Ｊτ Ｅ弦ＩＡτｌ０ＮＡＬ　５ＥＡＲＣＨｉｉ：？ＯＲＴ　ＯＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．（ａ）血液又はその生成物から沈澱させたガンマグロブリンを溶液に溶かし 、 （ｂ）その溶液から不溶解沈澱を分離し、（ｃ）分離した溶液にポリエチレング リコールを加え、（ｄ）ポリエチレングリコール溶液から沈澱を分離し、（ｅ） 溶液中のポリエチレングリコールの濃度を高くし、（Ｆ）その高濃度ポリエチレ ングリコール溶液から沈澱した精製ガンマグロブリンを分離し、 （ｇ）その精製ガンマグロブリンを静脈注射に適した溶液に溶解する静脈注射用 ガンマダブリンの製造方法に於いて、（１）血液又は血液製品から析出したガン マグロブリンを中性ｐＨの溶液に溶かし： （２）最初のポリエチレングリコール添加工程で、ポリエチレングリコールを４ ．０−５．５重量％の濃度になる様に加え、（３）第２のポリエチレングリコー ル添加工程で、ポリエチレングリコール濃度を、少なくとも９％であるが１６重 量％を超えることのない濃度に増大させ、 （４）何れか一方のポリエチレングリコール添加工程の直前に、その溶液に緩衝 剤を加えること、 を特徴とする静脈注射に適したガンマグロブリンの改良された製造方法 ２．ポリエチレングリコールの平均分子量が約４０００である特許請求の範囲１ の方法 ３．２０℃を超えることのない温度で、０．００１−０．０５ｍｏｌ／１のイオ ン濃度にガンマグロブリンを溶解する工程（ａ）の別の改良からなる特許請求の 範囲１の方法４．緩衝液がクエン酸である特許請求の範囲１の方法５．ヒドロキ シエチル澱粉を工程（ａ）の溶液に加える特許請求の範囲１の方法 ６．工程（ａ）で、ガンマグロブリンを０．０１０−０．０１５ｍｏｌ／１の範 囲のイオン濃度の溶液に１０℃を超えることのない温度で溶解する特許請求の範 囲１の方法７．工程（ａ）で、ガンマグロブリンを電解質を有しない溶液に、１ ５−３０℃の温度で溶解する特許請求の範囲１の方法８．緩衝剤の添加が最初の ポリエチレングリコール添加の直前であり、溶液のイオン濃度を０．０６−０． ２５ｍｏｌ／１に上げる特許請求の範囲５の方法 ９．緩衝剤の附加を第２のポリエチレングリコール添加の直前に行う特許請求の 範囲６の方法 １０．緩衝液が０．３Ｍの燐酸塩緩衝液の１／１０容量である特許請求の範囲８ の方法 １１．緩衝剤がクエン酸塩である特許請求の範囲８の方法１２．（ａ）コーンフ ラクションＩＩの粉末３．０−７．５重量％を０．３５−１重量％のヒドロキシ エチル澱粉を含む中性ｐＨ水溶液に溶かし、 （ｂ）その溶液から不溶解沈澱を分離し、（ｃ）約４０００の分子量のポリエチ レングリコールをその溶液に加え、４．０−５．０％の濃度にし、（ｄ）溶液か ら沈殿を分離し、その溶液に燐酸塩緩衝剤を加えて０．０２−０．０４Ｍの濃度 にし、 （ｅ）約４０００の分子量のポリエチレングリコールをその溶液に加えて、９． ５−１１．０％の濃度とし、その溶液に燐酸塩緩衝剤を加えて０．０２−０．０ ４Ｍの濃度にし、（ｆ）そのル溶液から精製ガンマグロブリンを分離し、（ｇ） その精製ガンマグロブリンを静脈注射に適した溶液に溶解することよりなる静脈 注射用ガンマグロブリンの製造方法。 １３．特許請求の範囲１の方法により造られた静脈注射に適した生成物。 １４．特許請求の範囲１０の方法で造った静脈注射用の生成物。 １５．生成物が７．００±０．０５なるｐＨ、３００−３３０モスｍｏｌ／１の 滲透度、５％のプロテイン濃度に対し１０ｕ／ｍｏｌまたは、それ以下のアンチ コンプレメント活性、そしてＨＰＬＣにより判断して、約９９％またはそれ以上 の純度を持つ、２−１０％の天然ガンマグロブリン、場合により、緩衝剤、場合 により、糖類、および注射用の水を含有する静脈注射に適した生成物。