JPS6026372B2 - 制癌剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な制癌剤に係り、構造式：（Ｒは、Ｈま
たはＣ＆を示す。

）で表わされる化合物を有効成分として含有する制癌剤
を提供するものである。

従釆、競化学療法剤として、アルキル化剤（ナイトロゼ
ンマスタード類、エチレンィミン類、スルフオン酸ェス
テル類）、代謝措抗物質（葵酸桔抗剤、プリン浩抗剤、
ピリミジン浩抗剤）、植物性核分裂毒（コルセミド、ビ
ンブラスチン等）、抗生物質（ザルコマィシン、カルチ
ノフィリン、マイトマィシン等）、ホルモン類（副腎ス
テロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィ
リン鏡塩（マーフィリン、ｃｏｐｐ）等が用いられてい
る。

しかしながら、その殆んどは細胞蓑型の物質であり、重
大な副作用を呈するため、低毒性ですぐれた制樺活性を
有する物質の開発が強く望まれている現状にある。本発
明者は、低毒性で制髭活性を有する物質を探索して、ベ
ニシリウム・ィスランジカム・ソツプ（Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉ肌ｍｉｓｌａｎｄｉｃｕｍＳｏｐｐ）の代謝産物の
生理活性につき鋭意研究の結果、前式で表わされる化合
物が著しく低毒性で、すぐれた制痛活性を有する事を見
出し、この物質が糠治療に顕著な効果を発揮し得ること
の新たな知見を得てここに本発明の制癌剤を完成した。
本発明の制癌剤の有効成分は、人、家畜、犬、猫等々の
溢血動物に対するすぐれた榛化学療法剤となり得るもの
である。

本発明に用し、る制髭活性を有する前式で表わされる化
合物について以下に説明する。

本発明の化合物を産生する微生物は、ベニシリゥム（Ｐ
ｅｎｉｃｍｉｕｍ）属に属する該化合物生産菌であり、
その一例としてべニシリウム・イスランジカム ，ソッ
プ（Ｐｅｎｉｃｉｍ肌 ｉｓｌａ肘に肌Ｓｏｐｐ）が有
利に用いられる〔ベニシリウム・イスランジカム・ソツ
プの菌学的性質については“ＭｉｃｒｏｂｉａＩ Ｔｏ
ｘｉ船”Ｖｏｌ・６（１９７１年）の「Ｙｅｌｌｏｗｅ
ｄ Ｒｉｃｅ Ｔｏ幻ｎｓ Ｌｕにｏｓｋｙｒｉ
ｎ ａｎｄＲｅｌａｔｅｄ ＣｏｍｐｏｕｎｄＳ ，
Ｃｈｌｏｒｉｎｅ − ＣｏｎｔａｉｎｉｎｇＣｏｍ
ｐｏｕ肘ｓ，ａ旭Ｃｉｔｒｉｎｉｎ」の項（第３０６頁
）参照上べニシリウム・イスランジカム・ソツプは、（
財）発酵研究所（ＩＦＯ）に保存されかつ自由に入手し
得るｍ０５２３２、ＩＦ０５２３５、ＩＦ０５２３６、
ｍ０５２３７、ＩＦ０５７３１、ＩＦ０５７３２、『０
６０１９、花０６１５９、ＩＦ０６１６０、ＩＦ０６２
０１、び０６９筋、ＩＦ０６９６４等が用いられ、又、
北海道大学農学部（ＡＨＵ）に保存されかつ自由に入手
し得るＡＨＵ８０８６及びＡＨＵ８雌７も用いることが
できる。

〔“ＪＦＣＣ Ｃａｔａｌｏ飢ｅ ｏｆ ｃ山ｔｕｒｅ
ｓ”１９７９ｒｈｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ参照〕。本発明
の化合物を工業的に有利に産生するためには、通常の静
瞳培養後に生じた菌蓋の反転培養法によって達成される
。

即ち、上記微生物を、例えば２週間２３〜２５ｑＣで平
面静暦培養を行って生じた菌蓋を培地中で反転し、更に
１０日間２３〜２５０で培養して菌蓋と炉液に分け、後
者を活性炭吸着、脱着及び有機溶剤処理して結晶性混合
物を得、引き続きこれをシリカゲル力ラムクロマトグラ
フイ（展開液：クロロホルム：メタノール＝４：１）に
付することにより目的物質を直接に高収率で得ることが
できる。

堵地の栄養源としては微生物の培地に通常用いられる炭
素源、窒素源その他を含有させることができるが、炭素
源としては殿粉、デキストリン、グリセリン、グルコー
ス、シユークロース、ガラクトース、イノシトール、マ
ンニトールなどが、また窒素源としてはイースト・エキ
ストラクト、べプトン、大豆粉、肉エキス、米ぬか、滋
、尿素、コーンスチープリカ−、アンモニウム塩、硝酸
塩、その他の有機又は無機の窒素化合物が用いられる。
窒素源として、特にイースト・エキストラクト又はべプ
トンは前記使用微生物の生育を極めて良好ならしめるた
めに好適な成分である。その他無機塩類、例えば食塩、
燐酸塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄
等の金属塩類を適宜に添加してもよい。培養温度、培養
時間等の培養条件は使用菌の発育に適し、しかも目的物
質の産生が最高となるような条件が選ばれる。例えば、
培地のｐＨは４〜８、特に７．０の中性附近がよく、培
養の温度、時間は２０〜３び０程度、１０日〜１５日程
度がよい。このようにして得られる培養物から目的物質
を得るには、まず淀液に活性炭を加えて吸着させ、アセ
トンで脱着した後、有機溶剤で処理して結晶性混合物を
集め、更に該混合物より有機溶剤との分配の差を利用す
る手段を用いればよい。

具体的には、まず炉液に活性炭を加えて吸着させ、アセ
トンで脱着して得られる含水アセトン溶液よりアセトン
を蟹去、ｎーブタノールで抽出、これを留去した残留物
をメタノールに熱時溶解し、放冷後、析出する結晶性混
合物を集める。前記化合物は該混合物中に存在するが、
その脂溶性の性質を利用して炉液より水と混和しない有
機溶剤で抽出することもできるが、このようにして得ら
れた結晶性混合物は、交雑する不純物を除く目的でシリ
カゲルを用いたカラムクロマトグラフイーで精製するこ
とができる。溶剤系としてはクロロホルムーメタノール
系が最適であり、混合比は蓬宜それを変化させ、犠牲を
次第に大きくしながら溶出する。これは段階的にもグラ
ジェントに変化させてもよく、シリカゲルカラムとして
は、市販のカラムクロマト用充填剤を用いて調整しても
よいし、既製のカラムを用いることもできる。活性区分
を集め、減圧濃縮し、残澄をメタノールより再結晶する
と、前記化合物の白色精製粉末（物質１）を収率よく得
ることができる。更に、物質１の結晶粉末をメチルアル
コールに溶解し、ジアゾメタンでェステル化すると、物
質１のメチルェステル（物質ロ）が得られる。かくして
得られた化合物の理化学的性質は次のとおりである。

‘１｝ 分子量 （物質１） ３５０ （物質０） ３６４ 【２｝ 分子式 （物質１） Ｃ，７日，８０８（物質
０） Ｃ，８日２。

０８ 脚 融 点 （物質１） １４０−１４５００１６５一
１粥℃（二重融点） （物質ロ） １４３一１４５ｑｏ ‘４’紫外線吸収スペクトル ＾帯留日：２３４（６、３２０００）、 ２６０（６、２３０００）、 ３３則ｍ（６、１４５００） ‘５｝ 赤外線吸収スペクトル （物質１）ＫＢｒ：３３００２繋ｕ１７１５（肩）、１
７０以１６７３１６００１２９〆 １１７５仇‐１ （物質０）ＫＢｒ：３５０止 １７３０（肩）、１７１
Ｕ１６９比か一１‘６｝ 核磁気共鳴吸収スペクトル（
ｍｍｒ）（物質１）６、ＣＤＣ１３、６皿ＭＨＺ：１．
斑（細、ｄ、Ｊ＝７．０ＨＺ）、４．１３（粗、Ｓ〉、 ４．５４（が、ｓ）、５．１２（が、 Ｓ）、 ５．５４（ＩＨ、ｄ、Ｊ＝１１．５ＨＺ）、６．１６（
ＩＨ、ｍ）、６．磯（ＩＨ、，ｔ、Ｊ＝１１．５日２）
、 ６．６５、７．斑（班、ＡＢｑ、Ｊ：１５．４Ｈｚ）、
７．３５（ＩＨ、ｂて．ｑ．Ｊ＝１１．５・１５４日２
）（物質０） ６、ＣＤＣ１３、１０加けＨＺ：１．８
７（幻、ｄｄ、Ｊ：２．止７．０日２、−ＣＨ３）、３
７９（３日、ｓ、 ＣＯＯＣＨ３）、 ４．１０（乳日、Ｓ、〇ＣＨ３）、２．５０（ＩＨ、ｔ
、ｊ＝５．８日２、一ＯＨ）、４．６２（が、ｄ、Ｊ＝
５，８ＨＺ、 ‐Ｃ比‐ＯＨ）、５．１８（が、ｓ、 ‐ＣＯＯＣＨ２一）、５．鼠（ＩＨ、ｄ、Ｊ＝１１．０
ＨＺ、＝ＣＨ−ＣＯＯ）、６．１０（ＩＨ、ｄｑ、Ｊ＝
７．い１５．０Ｈｚ、Ｃ比ＣＨ＝Ｃ）、６．５５（ＩＨ
、ｄｄ、Ｊ＝１１．０１１．０ＨＺ、一ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ
ＯＯ‐）、６．７＆ ７．５７（が、ＡＢｑ、Ｊ：１５
．４ＨＺ、一日Ｃ＝ＣＨ−ＣＯＯＣＨ３）、７．３７（
ＩＨ、ｄｄｑ、Ｊ＝２０１１．０１５．０Ｈｚ、ＣＨ３
一ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ：） ‘７’溶解性 （物質１） ５％ＮａＨＣＱに可溶、クロロホルム等の
有機溶媒に簸溶である。

（物質０） ５％ＮａＨＣ０３に不溶、メタノール、エ
タノール、クロロホルム等の有機溶媒に可溶である。

徹毒性 物質１，０共にマウスに対し１００雌′ｋ９を連続投与
しても何ら毒性を認めない。

本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤又
は錠剤、額粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口
投与する場合は、注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘
楓液状として持続的な粘膜吸収が維持できるように坐薬
のような剤型で投与され得る。

また、本発明の有効成分を製剤化するに当っては、前式
で表わされる化合物は常法に従い、水溶性懸濁液、油性
製剤などにして皮下或いは静脈注射用製剤とすることが
できる他、カプセル剤、錠剤、細粒剤等の剤型に製剤化
して経口用に供することができる。

本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮して腸溶性製剤
とするために医薬的に許容し得る皮膜形成物質、コーテ
ィング助剤等を用いて適宜行うことができ、その具体例
を挙げれば、次のとおりである。

本発明の組成物の崩穣、溶出を良好ならしめるために、
界面活性剤、例えばアルコール、ェステル類、ポリエチ
レングリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸ェステル類
、硫酸化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加
することができる。

また、賦形剤として、例えば廉糖、乳糖、デンプン、結
晶セルロース、マンニット、隆質無水珪酸、アルミン酸
マグネシウム、メタ珪酸フルミン酸マグネシウム、合成
珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウ
ム、リン酸水素カルシウム、力ルポキシメチルセルロ−
スカルシウム等の１種又は２種以上を絹合せて添加する
ことができる。滑沢剤としては、例えばステアリン酸マ
グネシウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加
することができ、また績味剤及び溝臭剤として、食塩、
サッカリン、糖、マンニット、オレンジ油、カンゾウヱ
キス、クエン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、
リンゴ酸等の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有さ
せてもよい。

懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばココナット
油、オリーブ油、ゴマ油、落下生油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。また、皮膜形成物質としては、セルロース、槍類等の
炭水化物議導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ
）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノェステル
類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタ
アクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体が挙げられる。また、上記皮膜形成物質
をコーティングするに際し、通常使用されるコーティン
グ助剤、例えば可塑剤の他、コーティング操作時の薬剤
相互の付着防止のための各種添加剤を添加することによ
って皮膜形成剤の性質を改良したり、コーティング操作
をより容易ならしめることができる。

なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロカプセ
ル化してから賦形剤等と混合した剤型としても良い。特
に代表的な剤型における配合比は下記の通りである。

特岬ましい鰯有効成分 ０．１へ９０ 重量％
０．３〜１５ 重量協賦形剤 １０ へ９９．９
８５ へ９９．７滑沢剤 ０ へ６０
０ 〜２０覆面霧ｏ｛ｏ 〃 ｏ〜２０ 〃蚤鯵
蜜 。

‐１〜５０ ｏ‐３〜２０特に好ましい賭形剤は、乳
糖、結晶セルロース、カルポキシメチルセルロースカル
シウムである。

また、投与量は、対象種場を有効に治療するに十分な量
であり、瞳湯の症状、投与経路、剤型などによって左右
されるが、一般に、経口投与の場合、大人では１日当り
、約０．０１〜１００の９／ｋｇ体重（小人では、０．
０１〜６０雌／ｋ９体重）の範囲で、その上限は好まし
くは約５０の９／ｋｇ体重、更に好ましくは約１０のｃ
／ｋ９体重であり、非経口投与の場合、その上限は約１
帆９／ｋ９体重程度であり、好ましくは５ｍｏ／ｋ９体
重、更に好ましくは２Ｍ／ｋ９体重が適当である。

次に、上記化合物の制癌活性を確認した制漣性試験法に
ついて述べる。

ラツトの腹水から吉田肉腹細胞（Ｙｏｓｉｄａｓａｒｃ
ｏｍぽｃｅｌｌｓ）を取り出し、２０％の牛胎児血清を
含むＤＭ−１６０培地（蛋白質、脂質を含まず、アミノ
酸組成として必須アミノ酸の他に可欠アミノ酸を含む組
織培養用純合成培地）で１の‘中に１０〜１５×１ぴ個
の細胞数になるように希釈する。

この細胞浮遊液２０ＭをＴＤゆフラスコに移して３７０
０で３〜４日間培養すると、細胞は増殖して１泌中１１
０〜１３０×１び個になる。この増殖した細胞浮遊液を
再び前記ＤＭ−１６０宅地で希釈して１必中１５〜２０
×１び個の細胞数になるようにする。この希釈細胞浮遊
液の２０叫をＴＤ４。フラスコに移し、３７℃で３〜４
日間培養して細胞を増殖させる。このようにＴＤｗフラ
スコ内で前記ＤＭ−１６０者地を用いて増殖、希釈、増
殖順序を繰り返すことによって青田肉瞳細胞の組織培養
を継代維持する。組織培養に移されて、ＴＤ４。フラス
コ内で増殖した吉田肉腫細胞を前記ＰＭ−１６０培地中
に懸濁して１必中に２０〜２２×１ぴ個の細胞数になる
ように調整する。この細胞浮遊液の２の‘を各々のバイ
アルに分注し、被鹸化合物を最終濃度が所定の値になる
ように１０ムタのメタ／ールに溶解して各々のバィアル
に加えて３７０で４日間培養する。培養後、バィアル中
の細胞浮遊液の一部を取り、血球計算滋を用いて顕微鏡
下に細胞数を教える。供謎細胞増殖の抑制率は、次式に
より求めた。（被鹸化合物投与バィアル中の細胞数） 抑制率（％）ｉ（１−（被駿化合物無投与バィァル中の
細胞数））×１００以下に、本発明を製剤例及び試験例
によって具体的に説明する。

製剤例１（注射・点滴剤） 物質１ １０の９を含有するように粉末ぶとう糖５夕を
加えてバィアルに無菌的に分配し、密封した上、窒素、
ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷膳所に保存する。

使用前に、０．８５％生理的食塩水１００叫を添加して
静脈内注射剤とし、１日、１０〜１００叫を症状に応じ
て静脈内注射又は点滴で投与する。製剤例２（注射・点
滴剤） 物質１ ２奴を用いて、製剤例１と同様の方法により軽
症用静脈内注射剤とし、１日、１０〜１００の‘を症状
に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例３（腸溶性カプセル剤） 物質ロ ５夕、乳糖２．４６夕及びヒドロキシプロピル
セルロース０．０４夕を各々とり、よく混合した後、常
法に従って粒状に成形し、これをよく乾燥して節別して
ビン、ヒートシール包装などに適した額粒剤を製造する
。

次に、酢酸フタル酸セルロース０．５夕及びヒドロキシ
プロピルメチルセルロースフタレート０．５夕を溶解し
て被覆基材となし、前記類粒を浮遊流動させつ）この基
材を被覆して腸溶性の額粒剤とする。この組成物をカプ
セルに充填して腸港性カプセル製剤ＩＯＮ圏を製造する
。試験例 上記化合物を用い、前記試験法により吉田肉腫細胞（Ｙ
ｏｓｉ地ｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓ）の増殖の抑制率（
％）を算出したところ、第１表に示す結果が得られた。

第１表上記試験例の結果から明らかなように、上記被鹸
化合物は、癌細胞の増殖抑制にすぐれた効果を発揮する
ことが立証された。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｒは、ＨまたはＣＨ＿３を示す。 ）で表わされる化合物を有効成分として含有する制癌剤
   。 ２ 非経口投与形態による特許請求の範囲第１項記載の
   制癌剤。３ 経口投与形態による特許請求の範囲第１項
   記載の制癌剤。