JPH027573B2

JPH027573B2 -

Info

Publication number: JPH027573B2
Application number: JP58166010A
Authority: JP
Inventors: Kyoshi Isono; Kenichi Asahi; Motofumi Suzuki; Yoko Oono
Original assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 1983-09-09
Filing date: 1983-09-09
Publication date: 1990-02-19
Also published as: JPS6058917A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、一般式：（式中、R₁は脂肪酸残基、R₂及びR₃は水素又は
脂肪酸残基を示す。ただし、R₂及びR₃が共に水
素の場合、R₁は炭素数20〜22の脂肪酸残基を示
す。）で表わされるグリセライドの１種又は２種以上を
有効成分として含有することを特徴とする制癌剤
に関するものである。従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナ
イトロジエンマスタード類、エチレンイミン類、
スルホン酸エステル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮
抗剤、プリン拮抗剤、ピリミジン拮抗剤）、植物
性核分裂毒（コルセミド、ビンブラスチン等）、
抗生物質（ザルコマイシン、カルチノフイリン、
マイトマイシン等）、ホルモン類（副腎ステロイ
ド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフイ
リン錯塩（マーフイリン、copp）等が用いられ
ている。しかしながら、その殆んどは、細胞毒型
の物質であり、重大な副作用を呈するため、低毒
性で優れた制癌活性を有する制癌剤の開発が強く
望まれている。本発明者らは、上記趣旨に鑑み、低毒性で制癌
性を有する物質を探索した結果、前記一般式で示
されるグリセライドが動物の腫瘍細胞に対して分
化誘導活性を有することを新たに見出し、且つ著
しく低毒性で、優れた制癌活性を有することの新
たな知見を得て、本発明を完成するに至つた。本
発明の制癌剤の有効成分は、人、家畜、犬、ねこ
等の温血動物に対する優れた癌化学療法剤となり
得るものである。本発明の端緒は、上記制癌性を有する物質を
動・植物、微生物界の広い生物範囲から探索を行
つたところ、コイの浮袋（Carp swim bladder）
よりモノグリセライドが、又ニジマス
（Salmagairdneri）の12〜14日胚よりジグリセラ
イドが見出されたことにある。更に種々のグリセ
ライドについても制癌活性の試験を行つて、その
効果を確認して本発明を完成したものである。〔コイ浮袋中のモノグリセライドについて〕コイ浮袋をホモジナイズし、アセトンで抽出す
る。アセトン抽出液を濃縮し、酢酸エチルで抽出
する。酢酸エチル抽出液を濃縮して得られる黄色
油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフイーに
付し、ｎ−ヘキサン、エーテル、アセトンで順次
溶出する。アセトン−エーテル（２：１、ｖ／
ｖ）により溶出される赤血球性白血病細胞及び奇
形腫癌細胞の分化誘導活性画分を高速液体クロマ
トグラフイー（HPLC）Nucleosil5C18、φ8×30
mm、100％メタノール２ml／分により精製すると、
保持時間8.5分、9.5分、9.5分、10.5分の位置に、
それぞれ

【式】

〔ニジマスの胚中のジグリセライドについて〕

ニジマスの受精後12〜14日後の胚をホモジナイ
ズし、アセトン、エーテル及びクロロホルム−エ
タノール（２：１、Ｖ／Ｖ）混液によつて順次抽
出し、３つの抽出物を混合し、減圧濃縮した後、
シリカゲルカラムクロマトグラフイーに付しクロ
ロホルム−ヘキサン（０〜100％）及びメタノー
ル−クロロホルム（０〜100％）で展開した。活
性区分は、クロロホルムおよびクロロホルム−メ
タノール（９：１、ｖ／ｖ）画分に含まれる。こ
れを、更にヘキサン−エーテルを用いシリカゲル
カラムクロマトグラフイーに付す。活性区分は、
ヘキサン−エーテル＝85：15（ｖ／ｖ）の画分に
含まれる。この画分を更に調製シリカゲル薄層クロマトグ
ラフイー（溶媒：クロロホルム−アセトン＝96：
４、ｖ／ｖ）に付し、得られた画分の内、画分Ｄ
（Rf値0.6）を、メタノールを用いて逆相高速液体
クロマトグラフイー（HPLC；Nucleosil、5C₁₈、
φ8×30mm、100％メタノール、２ml／分）に付
し、保持時間34分の画分を、3.5％ホウ酸を侵透
させたシリカゲル薄層クロマトグラフイ（溶媒：
クロロホルム：アセトン＝96：４、ｖ／ｖ）に付
し、精製すると次の２種類の物質（DG−１及び
DG−２）が得られた。

【表】

【表】上記活性物質は、逆相HPLCにおいて単一なピ
ークを示したが、FD−MSにより、２つの分子
種からなる混合物であることが示された。 NaOCH₃処理により、C₁₅H₃₁COOH、
C₁₇H₃₃COOH、C₂₁H₃₁COOHの脂肪酸の存在及
び水溶性成分としては、トリメチルシリル
（TMS）化によりグリセロールの存在がGC−MS
によつて確認された。更に本物質のTMS化によ
り、C₁₅H₃₁CO−C₂₁H₃₁CO、C₁₇H₃₃CO−
C₂₁H₃₁COのジグリセリドの分子種がGC−MSに
よつて示された。本発明者らは、上記物質が分化
誘導活性を示したので、種々の合成モノ又はジグ
リセライドについても分化誘導活性を調べたとこ
ろ、顕著な活性を示した。以下、本発明の有効成分化合物について述べ
る。本有効成分化合物は、前記の一般式を有し、
脂肪酸残基としては炭素数10〜30の飽和又は不飽
和（二重結合数は、１〜10個程度）のものを挙げ
ることができる。これら脂肪酸残基としては、飽和のものとし
て、例えば、ラウリル基（C₁₁H₂₃CO−）、ミリ
スチル基（C₁₃H₂₇CO−）、パルミチル基
（C₁₅H₃₁CO−）、ステアリル基（C₁₇H₃₅CO−）
を挙げることができる。不飽和のものとしては、
例えば、オレイル基又はエライジル基
（C₁₇H₃₃CO−）、リノレイル基（C₁₇H₂₉CO−）、
アイコサモノエノイル基（C₁₉H₃₇CO−）、ドコ
サヘキサエノイル基（C₂₁H₃₁CO−）等を挙げる
ことができ、同一又は異つてもよい。本発明の有効成分であるモノ又はジグリセライ
ドとしては、例えば次の如くである。

【表】本発明の有効成分は、コイの浮袋あるいは、ニ
ジマスの胚のような動物中に本来存在するものよ
り単離された物質あるいは、それらに類似した化
合物であり、癌細胞から正常細胞への分化誘導作
用を示すので毒性の心配がない。本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいず
れも使用可能であり、経口投与する場合は、軟・
硬カプセル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤と
して投与され、非経口投与する場合は、水溶性懸
濁液、油性製剤などの皮下或いは静脈注射剤、点
滴剤及び固体状又は懸濁粘稠液状として持続的な
粘膜吸収が維持できるように坐薬のような剤型で
投与され得る。本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦
形剤、滑沢剤、佐剤、及び必要に応じて腸溶性製
剤とするために医薬的に許容し得る皮膜形成物
質、コーテイング助剤等を用いて適宜行うことが
でき、その具体例を挙げれば、次のとおりであ
る。本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめる
ために、界面活性剤、例えばアルコール、エステ
ル類、ポリエチレングリコール誘導体、ソルビタ
ンの脂肪酸エステル類、硫酸化脂肪アルコール類
等の１種又は２種以上を添加することができる。また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、デン
プン、結晶セルロース、マンニツト、軽質無水珪
酸、アルミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン
酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸カ
ルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カル
シウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム
等の１種又は２種以上を組合せて添加することが
できる。滑沢剤としては、例えばステアリン剤マグネシ
ウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加
することができ、また矯味剤及び矯臭剤として、
食塩、サツカリン、糖、マンニツト、オレンジ油
カンゾウエキス、クエン酸、ブドウ糖、メントー
ル、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味剤、香料、着
色料、保存料等を含有させてもよい。懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤しては、例えばココ
ナツト油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸
カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有
させることができる。また皮膜形成物質としては、セルロース、糖類
等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロー
ス（CAP）、またアクリル酸系共重合体、二塩基
酸モノエステル類等のポリビニル誘導体としてア
クリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体、メタ
アクリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体が挙
げられる。また、上記皮膜形成物質をコーテイングするに
際し、通常使用されるコーテイング助剤、例えば
可塑剤の他、コーテイング操作時の薬剤相互の付
着防止のための各種添加剤を添加することによつ
て皮膜形成剤の性質を改良したり、コーテイング
操作をより容易ならしめることができる。なお、
有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロカプセ
ル化してから賦形剤等と混合した剤型としても良
い。特に代表的な剤型における配合比は下記の通り
である。

【表】物質
特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロー
ズ、カルボキシメチルセルロースカルシウムであ
る。また、投与量は、対象腫瘍を有効に治療するに
十分な量であり、腫瘍の症状、投与経路、剤型な
どによつて左右されるが、一般に、経口投与の場
合、大人では１日当り、約0.01〜100mg／Kg体重
（小人では、0.01〜60mg／Kg体重）の範囲で、そ
の上限は好ましくは約50mg／Kg体重、更に好まし
くは約10mg／Kg体重程度であり、非経口投与の場
合、その上限は約10mg／Kg体重程度であり、好ま
しくは５mg／Kg体重、更に好ましくは２mg／Kg体
重が適当である。次に、本発明の化合物の制癌活性を確認した制
癌性試験について述べる。〔1〕フレンド白血病細胞（mouse erythroid
leukemia cell、B8細胞）に対する試験GIBCO
製HAMのＦ−12培地に、15％の牛胎児血清及
び60mg／のカナマイシンを加えたものに、25
×10⁴cell／mlとなるようにB8細胞を接種し、
これに所定量の被験化合物を加える（最終容量
５ml）。 7.5％CO₂中、37℃７日間培養した後、オル
キン（Orkin）のベンジジン染色法により染色
し、染色された細胞数、すなわち、赤血球への
分化によりヘモグロビンを生成するようになつ
た細胞数を測定し、分化誘導率を求める。分化誘導率（％）＝染色された細胞数／全細胞数×10
0 〔2〕マウス奇形腫細胞（mouse
teratocarcinoma）に対する試験：テラトーマ
細胞をマウスの腹腔から腹腔へ移植後、１ケ月
経過したものを用いた。テラトーマ細胞は、腹
腔中では初期胚に似た胚様体（embrold
body）という細胞塊として存在し、それらを
トリプシン処理などを行うことなく用いた。採
取した腹水中で自然沈下させて得られる胚様体
をダルベコー変法培地、あるいはハンクス液で
３度洗浄後、10％牛胎児血清を含む培地に接種
し、所定量の被験化合物を加え、37℃で
CO₂7.5〜８％を含む水蒸気を飽和して、空気
中で１週間培養する。遠心分離（2000r.p.m.10
分）して得た胚様体を0.86％NaCl溶液で洗浄
後、ナフトールAS−MXホスフエートとジア
ゾ試薬（Fast Violet Ｂ Salt）を加えて１時
間室温で放置する。これを遠心分離（2000r.p.
m.、10分）して胚様体を分離し、エタノール
を加えて１時間室温で放置する。（未分化の細胞は、赤く着色する）。これを、535nｍの吸収を測定し、アルカリホ
スフアターゼ活性（分化誘導の程度）を求める。ヘキサメチレンビスアセトアミド（HMBA）
５ｍＭを加えた場合（アルカリホスフアターゼ活
性を全く示さない。）を「＋＋」とし、HMBAを
加えない場合（アルカリホスフアターゼ活性を極
めて強く示す。）を「−−」とし、分化誘導の程
度を次の段階で示した。＋＋：アルカリホスフアターゼ活性を全く示さな
い。＋：アルカリホスフアターゼ活性をほとんど示
さない。 ± ：アルカリホスフアターゼ活性を若干示す。 −：アルカリホスフアターゼ活性を強く示す。 −−：アルカリホスフアターゼ活性を極めて強く
示す。なお、後述の試験例では、分化誘導作用をもつ
て、制癌活性を示した。以下に、本発明を製剤例及び試験例によつて具
体的に説明する。製剤例１（注射・点滴剤）化合物(1)10mgを含有するように粉末ぶどう糖５
ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密封した
上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷
暗所に保存する。使用前にエタノールに溶解し、
0.85％生理的食塩水100mlを添加して静脈内注射
剤とし、１日、10〜100mlを症状に応じて静脈内
注射又は点滴で投与する。製剤例２（注射・点滴剤）化合物(2)２mgを用いて、製剤例１と同様の方法
により軽症用静脈内注射剤とし、１日、10〜100
mlを症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与す
る。製剤例３（腸溶性カプセル剤）化合物(12)５ｇ、乳糖2.46ｇ及びヒドロキシプロ
ピルセルロース0.04ｇを各々とり、よく混合した
後、常法に従つて粒状に成形し、これをよく乾燥
して篩別してビン、ヒートシール包装などに適し
た顆粒剤を製造する。次に、酢酸フタル酸セルロ
ース0.5ｇ及びヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースフタレート0.5ｇを溶解して被覆基材となし、
前記顆粒を浮遊流動させつゝこの基材を被覆して
腸溶性の顆粒剤とする。この組成物をカプセルに
充填して腸溶性カプセル製剤100個を製造する。試験例前記化合物を用い、前記試験法〔１〕、〔２〕よ
り、フレンド白血病細胞の分化誘導率及びマウス
奇形腫細胞の分化誘導程度を調べたところ、それ
ぞれ、第１表及び第２表に示す結果が得られた。

【表】

【表】＊比較例

【表】

【表】＊＊比較例

Claims

【特許請求の範囲】１一般式：（式中、R₁は脂肪酸残基、R₂及びR₃は水素又は
脂肪酸残基を示す。ただし、R₂及びR₃が共に水
素の場合、R₁は炭素数20〜22の脂肪酸残基を示
す。）で表されるグリセライドの１種又は２種以上を有
効成分として含有することを特徴とする制癌剤。２非経口投与形態による特許請求の範囲第１項
記載の制癌剤。３経口投与形態による特許請求の範囲第１項記
載の制癌剤。