JPH013124A - 制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、抗生物質ＲＳ−４４を有効成分として含有す
ることを特徴とする新規な制癌剤に関するものである。

（発明の背景） 従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナイトロン
エンマスタード類、エチレンイミン類、スルフォン酸エ
ステル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤
、ピリミジン拮抗剤）、植物性核分裂前（コルセミド、
ビンブラスチン等）、抗生物質（ザルコマイシン、カル
チノフィリン、マイトマイシン等）、ホルモン類、（副
腎ステロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポル
フィリン錯塩（マーフィリン、ｃｏｐｐ）　　等が用い
られている。

本発明者らは、すぐれた制癌活性を有する物質を探索し
て、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属
に属する微生物の代謝産物の生理活性につき、鋭意研究
の結果、新規抗生物質ＲＳ−４４が、優れた制癌活性を
有することを見出し、この物質が癌治療に顕著な効果を
発揮し得ることの新たな知見を得て、本発明の制癌剤を
完成するに至った。

（発明の目的） 本発明の目的は、新規な制癌剤を提供することにある。

（発明の構成） 本発明の目的は抗生物質ＲＳ−４４を有効成分きする制
癌剤により達成される。

本発明に用いる制癌活性を有する抗生物質ＲＳ−４４及
びその生産菌については、特願昭６１−１０７５０９号
明細書に詳述されているが、以下にその製造例について
述べる。

〈抗生物質ＲＳ−４４の製造例〉 グルコース２％、可溶性澱粉１％、肉エキス０．１％：
乾燥酵母０．４％、大豆粉２．５％、食塩０．２％、リ
ン酸第２カリウム０．００５％の組成からなる培地にス
トレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）ＳＰ、
ＲＳ−４４（微工研菌寄第８６８４号（ＦＥＲＭＰ−８
６８４））を接種して、９６時間、２８℃で振とう培養
した。この培養液３６βをｐＨ４で酢酸エチルで抽出後
、減圧下に濃縮すると油状物４．８ｇが得られた。この
後、径５５ｍｍ、長さ７００胴のシリカゲルカラムを、
溶媒、クロロホルム−メタノール（２：　１）の系で調
製し、メタノールに溶解した試料をかけ展開した。分画
量は１０ｍｌで分画Ｎｏ、　１０１−１４０に活性区分
が得られた。

上記活性区分を集め減圧下に濃縮すると、１．　Ｏｇの
濃縮物が得られた。この後、高速液体クロマトグラフィ
ーを行うことによりＲＳ−４４が精製される。カラムは
、ヌクレオシル５Ｃ＋ａ　：径２０ｍｍ。

長さ３０ｃｍを用い、溶剤は、メタノール−水（８：２
）に対して１％のジエチルアミン−ギ酸（ｐ＋＋７．５
）を加えた系で、流速８．０ｍｊ！／分、圧力１７０ｋ
ｇ／ｃｍ２で行うと展開時間２０分にＲＳ−４４画分が
現われる。このＲＳ−４４画分を集め、０、ＩＮ塩酸で
ｐＨ４に調整し、メタノールがなくなるまで減圧下で濃
縮し、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、濃縮すると、
ＲＳ−４４が粉末とじてて１００ｍｇ得られた。

この後、高速液体クロマトグラフィーによりさらに精製
を行った。カラムはＨｉｇｈ−Ｃａｒｂｏｎ　ＯＤＳ＝
径長１０ｍｍ、長さ２５ｃｍを用い、溶剤は、メタノー
ル−水−１％のジエチルアミン−ギ酸（ｐｆ１７．０＞
　　（８：　１　：　１）の系で、流速１．４ｆｔｌｆ
’／分、圧力１５０ｋｇ／ｃｍ２で行うと展開時間２３
分にＲＳ−４４画分が現われる。このＲＳ−４４画分を
集め、０．ＩＮ塩酸でｐＨ４に調整し、メタノールがな
くなるまで減圧下で濃縮し、酢酸エチルで抽出し、０．
ＩＮ塩酸で洗い、次に水で洗浄し、濃縮した。この後、
メタノールに溶解し、水を加えた。

メタノールがなくなるまで減圧下で濃縮し、凍結乾燥す
ると純粋な白色粉末が４０ｍｇ得られた。

こうして得られたＲＳ−４４の理化学的性質は次のとお
りである。

く抗生物質ＲＳ−４４の理化学的性質〉分解点：１６０
°以上で徐々に分解する。

元素分析：炭素６３．３６％　水素８．６９％酸素２６
．７２％ 比旋光度：　〔α　）−ｎ　−＋３．４°（Ｃ−１％、
クロロホルム） 溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホ
ルム、ベンゼンに易溶、水に難溶、ヘキサン、ペンタン
に不溶。

分子量：　（ＦＤマススペクトルによる）７６６分子式
：　Ｃ４２Ｈ２Ｏ０１２ 呈色反応ニアニスアルデヒド−硫Ｍ、２，４−ジニトロ
フェニルヒドラジンに陽性 Ｆｅｃｉ’３、ニンヒドリン、ライドン−スミスに陰性 物質の色：白色粉末 薄層クロマトグラフィー（米国メルク　（Ｍｅｒｃｋ）
社製薄層板０．２５ｍＩ［ｌ＞ シリカゲル （溶媒クロロホルム：メタノール−２：１）による　　
　　　　Ｒｆ値　　　０．４２ （溶媒酢酸エチル：ベンゼン−４：１）によるＲｆ値　
０．１６ マウス急性毒性（Ｌ、　Ｄ５［＋　）　　７．５ｍｇ　
／　ｋｇ　（経口投与）　、＜　５ｍｇ／ｋｇ　（腹腔
的投与）本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいず
れも使用可能であり、経口投与する場合は軟・硬カプセ
ル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、
非経口投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤などの
皮下或いは静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘稠
液状として持続的な粘膜吸収が維持できるように生薬の
ような剤型で投与され得る。

本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮して腸溶性製剤
とするために医薬的に許容し得る皮膜形成物質、コーテ
ィング助剤等を用いて適宜行うことができ、その具体例
を挙げれば、次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、
界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチ
レングリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類
、硫酸化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加
することができる。

また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、結
晶セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸
マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成
珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素すｌ・リ
ウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等の１種又は２種以上を組合わせて添加
することができる。

滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タ
ルク、硬化油等を１種又は２種以上添加することができ
、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、サッカリン、糖
、マンニット、オレンジ油カンゾウエキス、クエン酸、
ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味
剤、香料、着色料、保存料等を含有させてもよい。

懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばココナツツ
油、オリーブ油、ゴマ油、落花土浦、乳酸カルシウム、
ベーバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また皮膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭水
化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣΔＰ）、
またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル類等
のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアクリル
酸共重合体が挙げられる。

また、」１記皮膜形成物質をコーティングするに際し、
通常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の他、
コーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種
添加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良
したり、コーティング操作をより容易ならしめることが
できる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイク
ロカプセル化してから賦形剤等と混合した剤型としても
良い。

特に代表的な剤型における配合比は下記の通りである。

特に好ましい範囲 有効成分　　屹１〜９０重量％　０．１〜１５重量％賦
　　形　　剤　　　　　１０〜９９．８〃　　　　　８
５〜９９．４　／／滑　　沢　　剤　　　　　０〜５０
　　〃　　　　　０〜２０　　〃界面活性剤　　　０〜
５０　〃　　　０〜２０／ｌ皮膜形成物質　０．１〜５
０／１０．３〜２０／ｌ特に好ましい賦形剤は、乳糖、
結晶セルロース、カルボキンメチルセルロースカルシウ
ムである。

また、投与量は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量
であり、腫瘍の症状、投与経路、剤型などによって左右
されるが、一般に、経口投与の場合、大人では１日当り
、約０．０１．−５ｍｇ／ｋｇ体重（小人では、０．０
１〜３ｍｇ／　ｋｇ体重）の範囲で、その上限は好まし
くは約２．５ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは約０．５
ｍｇ／ｋｇ体重程度であり、非経口投与の場合、その上
限は約０．５ｍｇ／ｋｇ体重程度であり、好ましくは０
．２５　／　ｋｇ体重、更に好ましくは０．１ｍｇ／ｋ
ｇ体重が適当である。

次にＲＳ−４４ｒ）−トマイシン（ｔａｕｔｏｍｙｃｉ
ｎ）　Ｊともいう。）の制癌活性を確認した制癌性試験
について述べる。

各種細胞をＲＰＭ　Ｉ　１６４０　（Ｇｉｂｃｏ製）（
１０％牛血清培地を含む）培地で３７℃、５％Ｃ０２を
含む培養器中で培養し、１０５Ｃｅｌｌ　／ｍβとなっ
た時に９６穴平底マイクロプレートに１００μｐ／穴宛
分注し各種濃度のトートマイシンを添加し、更に３７℃
、５％ＣＤ２　条件下で４８〜７２時間インキュベート
する。その後、トリパンブルーを用いた色素排除試験法
を用い、顕微鏡下でほぼ１００％細胞が死んだ場合（染
色される）の濃度（最小生育阻止濃度：ＭＩＣ）を求め
る。

結果を次表に示す。

使用細胞　　　　　　　　　　旧Ｃ（μｇ／ｍｌマウス
赤血球性白血病細胞１．０ ヒト赤血球性白血病細胞（Ｋ　５６２）　　　０．３ヒ
ト骨髄性白血病細胞　（ＨＬ６０）　　　０．３この結
果、本発明の有効成分は極めて低濃度で各種白血病細胞
に対して生育明害作用を示すことから優れた制癌剤とし
て利用できることがわかる。

以下に本発明の制癌剤の製剤例を示す。

製剤例１（注射・点滴剤） トートマイシン１０ｍｇを含有するように粉末ぶどう糖
５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密封した上、
窒素、ヘリウム等の不活性ガスを密封して冷暗所に保存
する。使用前に０．８５％生理的食塩水１００ｔＴｌｊ
？を添加して静脈内注射剤とし、１日、１０〜１００ｍ
Ａを症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例２（注射・点滴剤） トートマイシン２ｍｇを用いて、製剤例１と同様の方法
により軽症用静脈内注射剤とし、１日、１０〜１００ｍ
ｊｌ！を症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例３（腸溶性カプセル剤） トートマイシン０．５　ｇ乳糖２．４６　ｇ及びヒドロ
キシプロピルセルロース０．０４　ｇを各々とり、よく
混合した後、常法に従って粒状に成形し、これをよく乾
燥して篩別してビン、ヒートシール包装置１ などに適した顆粒剤を製造する。次に、酢酸フタル酸セ
ルロース０．５ｇ及びヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースフクレート０．５　ｇを溶解して被覆基材となし、
前記顆粒を浮遊流動させつつこの基材を被覆して腸溶性
の顆粒剤とする。この組成物をカプセルに充填して腸溶
性カプセル製剤１００個を製造する。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）抗生物質ＲＳ−４４を有効成分として含有するこ
   とを特徴とする制癌剤。
2. （２）非経口投与形態による特許請求の範囲第１項記載
   の制癌剤。
3. （３）経口投与形態による特許請求の範囲第１項記載の
   制癌剤。