JPS6334124B2

JPS6334124B2 -

Info

Publication number: JPS6334124B2
Application number: JP3200878A
Authority: JP
Inventors: Setsuo Takeuchi; Mutsuyuki Kochi; Akira Kawarada; Shinichiro Esumi; Kazuya Sasaki; Shozo Kawabata; Tsuneo Saida; Yukio Inoe; Tadasu Yamamoto; Takaharu Sekine; Koji Amamya; Katsumasa Saga
Original assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 1978-03-20
Filing date: 1978-03-20
Publication date: 1988-07-08
Also published as: JPS54126731A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は次式（）（但し、式中R₁は水素、低級アルコキシ基又
は低級アルコキシカルボニル基を表わし、R₂は
R₁が水素のときニトロ基、R₁が低級アルコキシ
基のときヒドロキシ基、R₁が低級アルコキシカ
ルボニル基のとき水素をそれぞれ表わし、又は、
R₁とR₂が協同して環状ケタールまたはアセター
ルを表わす。）で表わされる化合物を有効成分として含有する制
癌剤に係わるものである。式（）の化合物は公知化合物であつて、その
製法は後記する如く種々の文献に記載の方法によ
り容易に得ることが出来るが、之等の化合物が制
癌性を有することに就いては未だ知られていな
い。従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナ
イトロゼンマスタード類、エチレンイミン類、ス
ルフオン酸エステル類、ニトロソウレア類）、代
謝拮抗物質（メトトレキセート、フトラフール、
シトシンアラビノサイド、シクロシチジン等）、
植物性抗癌剤（コルセミド、ビンブラスチン、ポ
ドフイリン等）、抗性物質（ブレオマイシン、ア
ドリアマイシン、マイトマイシン等）、ホルモン
類（副腎ステロイド、男性ホルモン、女性ホルモ
ン）免疫賦活剤（クレスチン、ピシバニール等）
及びポルフイリン錯塩（マーフイリン、COPP）
等が用いられているが一般に制癌物質の作用は癌
細胞だけでなく正常細胞にも作用するために毒性
が強く、重大な副作用を呈するので、感染症に対
する化学療法剤の如く大量の薬剤を使用すること
によつて十分な効果をあげることは困難な現状に
ある。本発明者は、先にベンズアルデヒドを有効成分
とする新規且つ有用な制癌剤を開発し（特開昭52
−108027号公報参照）、この有効成分の作用が癌
細胞を直接攻撃するものではなく、従来考えられ
て来た化学療法剤とは別異の作用機作で治療効果
を生ずるものと考えられる特異的な抗癌作用であ
ることを新たに見出したが、更に制癌活性物質の
探索について鋭意研究の結果、式（）のベンズ
アルデヒド誘導体が制癌活性を有することを見出
し、これらの物質が癌治療に顕著な効果を発揮し
得ることの新たな知見を得てここに本発明の制癌
剤を完成した。従来の癌化学療法剤の多くがSV₄₀発癌ウイル
スによる癌化細胞よりもエールリツヒ腫瘍などの
移植癌に対して感受性が高い、いわゆる生体細胞
毒性型の物質であるのに対し、本発明の制癌剤の
有効成分は、SV₄₀発癌ウイルスによつて癌化し
た細胞に作用して高い感受性を示す点において、
従来の癌化学療法剤の作用機作とは異なる特異的
な制癌作用に基づくものと考えられ、制癌剤とし
てすぐれた特色を有するものである。本発明に用いる制癌活性を有する式（）の芳
香族アルデヒド誘導体を例示すれば、第１表のと
おりである。

【表】上記化合物(1)〜(4)（以下、上記化合物は化合物
番号をもつて示す。）についての参考文献及び物
性値を第２表に示す。

【表】本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいず
れも使用可能であり、経口投与する場合は、軟・
硬カプセル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤と
して投与され、非経口投与する場合は、注射剤、
点滴剤及び固体状又は懸濁粘稠液状として持続的
な粘膜吸収が維持できるように坐薬のような剤型
で投与され得る。本発明の制癌剤組成物の有効成分の割合は、剤
型によつて変更し得るが、通常、経口又は粘膜吸
収に投与されるとき、ほぼ0.3〜15.0重量％が適
当であり、非経口投与されるときは、ほぼ0.01〜
10重量％が適当である。また、本発明の有効成分を製剤化するに当つて
は、式（）の化合物は常法に従い、水溶性懸濁
液、油性製剤などにして皮下或いは静脈注射用製
剤とすることができる他、カプセル剤、錠剤、細
粒剤等の剤型に製剤化して経口用に供することが
できるが、上記化合物は、不安定な刺戟性があ
り、その変質防止及び刺戟性の除去が要求され、
その自動酸化を防止すると共にその刺戟性を改善
しなければならない。この方法としては、例えば、コレイン酸やシク
ロデキストリン（Cyclodextrin）の包接能を利用
した薬理的に許容される包接化合物とすることが
適当であり、またマイクロカプセルによる製剤化
も有効である。また、上記包接化合物を長時間の保存に耐える
安定性及び耐酸性を附与して薬効を完全に持続さ
せるために、更に医薬的に許容し得る皮膜を施し
て製剤化すれば、すぐれた安定性を有する制癌剤
組成物とすることができる。本発明の有効成分の製剤化に用いられる界面活
性剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤及び医薬的に許容し
得る皮膜形成物質等を挙げれば、次のとおりであ
る。本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめる
ために、界面活性剤、例えばアルコール、エステ
ル類、ポリエチレングリコール誘導体、ソルビタ
ンの脂肪酸エステル類、硫酸化脂肪アルコール類
等の１種又は２種以上を添加することができる。また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、デン
プン、結晶セルロース、マンニツト、軽質無水珪
酸、アルミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミ酸
マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸カル
シウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カルシ
ウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム等
の１種又は２種以上を組合せて添加することがで
きる。滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシ
ウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加
することができ、また矯味剤及び矯臭剤として、
食塩、サツカリン、糖、マンニツト、オレンジ
油、カンゾウエキス、クエン酸、ブドウ糖、メン
トール、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味剤、香
料、着色料、保存料等を含有させてもよい。懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばコ
コナツト油、オリーブ油、ゴム油、落下生油、乳
酸カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含
有させることができる。また皮膜形成物質としては、セルロース・糖類
等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロー
ス（CAP）、またアクリル酸系共重合体、二塩基
酸モノエステル類等のポリビニル誘導体としてア
クリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体、メタ
アクリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体が挙
げられる。また、上記皮膜形成物質をコーテイングするに
際し、通常使用されるコーテイング助剤、例えば
可塑剤の他、コーテイング操作時の薬剤相互の付
着防止のための各種添加剤を添加することによつ
て皮膜形成剤の性質を改良したり、コーテイング
操作をより容易ならしめることができる。また、投与量は、所望の治療効果及び治療期間
によつて左右されるが、大人では通常、１日当り
上記化合物として0.5〜5000mg、小人では通常、
0.5〜3000mgである。次に、上記化合物の制癌活性を確認した制癌性
試験法について述べる。 C3Hマウスの腎細胞をSV₄₀発癌ウイルスで癌
化させた細胞W2K.11を供試細胞とし、これを次
の方法によつて培養した。 (1) 増殖培養液の調製イーグルMEM培地9.4ｇを蒸留水900mlに溶か
し、120℃、15分間加圧滅菌し、冷却後、仔牛血
清100ml及び別途115℃、15分間加圧滅菌した10％
炭酸水素ナトリウム液を３〜５ml加えてPH7.1〜
7.2に補正する。培地使用直前にミリポア．フイ
ルターで過したＬ−グルタミン（2.92ｇ／100
ml）溶液10mlを加える。なお、供試細胞の保存には、更に最終濃度10％
のジメチルスルホキサイドを加える。 (2) 移植細胞の調製ジープ・フリーザー（−80℃）で保存された供
試細胞を室温で溶解させ、670×ｇ５分間遠心分
離して上清を捨て、沈殿した細胞を増殖培地50ml
に懸濁した後にルー・フラスコに移し、37℃で培
養すると、細胞はフラスコ底面に附着しながら増
殖を始め、３〜４日で十分に増殖する。培養液を
デカントし、次いで0.2％トリプシン溶液〔イー
グルMEM培地（日水製薬(株)製）4.7ｇ、重曹0.6
ｇ及びトリプシン１ｇを蒸留水500mlに溶かし、
ミリポア・フイルターで過した溶液〕10mlを加
えて室温で２〜３分間トリプシン処理した後、ト
リプシン溶液をデカントする。更に新鮮な増殖培
地50mlを加え、駒込ピペツトで附着している細胞
を洗い落して細胞浮遊液とする。一部はルー・フ
ラスコを用いて継代培養する。 (3) 細胞培養と被験化合物の投与前記細胞浮遊液1.8mlをデイスポーザル・シヤ
ーレ（直径35mm）に分注し、炭酸ガスインキユベ
ーター（５％CO₂，95％air）中で37℃、24時間
培養する。この時点で被験化合物の溶液0.2mlを投与して
培養を継続する。細胞増殖の状態は、倒立顕微鏡を用いて連日観
察し、投与後、48時間に細胞の生存数を数える。
なお、被験化合物は蒸留水又はエタノール（最終
濃度２％）に溶解させた後、ミリポア・フイルタ
ーで過する。 (4) 細胞数の数え方被験化合物投与後、48時間のシヤーレをデカン
トして上清（培養液）を捨て、前記0.2％トリプ
シン溶液1.0mlでシヤーレの底に附着した細胞を
処理すると単細胞になる。これをデカントしてト
リプシン溶液を除去し、10ミリモルの燐酸緩衝液
（PH7.0）を含む生理食塩水で細胞浮遊液を作り、
その一部の１ないし２滴を血球計算板により、カ
バーグラスをかぶせて顕微鏡下で細胞数を数え
る。供試細胞増殖の抑制率は、次式により求めた。抑制率（％）＝（被験化合物無投与シヤーレ中の細胞数）−（被
験化合物投与シヤーレ中の細胞数）／（被験化合物無投
与シヤーレ中の細胞数）×100 次に、本発明の有効成分の化合物の毒性につい
ては、いずれの化合物も低分子構造のために速か
に生体外に排泄されるので副作用を生じないこ
と、またマウスの皮下注射及び経口投与における
LD₅₀値もいずれも他の制癌物質に比し低毒性で
あり、上記化合物のマウスの経口投与の場合の
LD₅₀（mg／Kg）は、それぞれ第３表のとおりであ
る。以下に、本発明を製剤例及び試験例によつて具
体的に説明する。製剤例１（注射・点滴剤）上記化合物(2)500mgを含有するように粉末ぶど
う糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密
封した上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入
して冷暗所に保存する。使用前に、0.85％生理的
食塩水500mlを添加して静脈内注射剤とし、１日、
10〜500mlを症状に応じて静脈内注射又は点滴で
投与する。製剤例２（注射・点滴剤）上記化合物(2)50mgを用いた他は、製剤例１と同
様の方法により軽症用静脈内注射剤とし、１日、
10〜500mlを症状に応じて静脈内注射又は点滴で
投与する。製剤例３（注射剤、カプセル剤）上記化合物(2)30mgを精製ゴマ油１ｇ及びステア
リン酸アルミニウムゲル100mgに溶解し密封した
上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷
暗所に保存し、皮下注射用製剤とする。症状に応
じて１日に１回、１〜10mlを皮下注射で投与す
る。また、前記製剤を0.5mlづつカプセルに分注し
て経口用カプセル剤とし、１日、１〜10カプセル
を症状に応じて経口投与する。製剤例４（腸溶性錠剤） β−シクロデキストリン（日本食品化工(株)製）
の飽和水溶液3000mlに上記化合物(3)15ｇを入れて
混合し、５時間撹拌すると包接物が沈殿するの
で、この沈殿物を減圧乾燥すると、100ｇの上記
化合物(3)の包接化合物が得られる。以下の成分組成で腸溶性錠剤大人用(イ)及び小人
用(ロ)各々1000個を製造した。

〔Ａ〕

主剤（上記化合物(3)の包接化合物）100（ｇ）乳糖 737 ヒドロキシプロピルセルロース３〔Ｂ〕酢酸フタル酸セルロース 80（ｇ）ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレ
ート 80 〔Ａ〕の成分を各々とり、よく混合した後、常
法に従つて粒状に成形し、それをよく乾燥して篩
別し、ビン、ヒートシール包装などに適した顆粒
剤を製造した。次に、この顆粒を浮遊流動させな
がら溶解した〔Ｂ〕の基材を被覆し、腸溶性の顆
粒剤とする。この顆粒剤は、日局の崩壊試験器を
用いて崩壊試験を行つたところ、PH1.2の人工胃
液に１時間振盪しても崩壊しない。PH7.5の人工
腸液では５分で崩壊した。製剤例６（腸溶性カプセル剤）以下の成分で腸溶性カプセル剤1000個を製造し
た。

【表】セルロースフタレート
上記の成分で製剤例５に記載した同様の方法で
カプセル用に適した腸溶性の顆粒剤を製造し、そ
の組成物をカプセルに充填して腸溶性カプセルと
した。このカプセルは、日局の崩壊試験器を用いて崩
壊試験を行つたところ、PH1.2の人工胃液に１時
間振盪しても崩壊または溶出を認めず、PH7.5の
人工腸液に５分で崩壊または全量が溶出した。試験例上記芳香族アルデヒド誘導体の被験化合物とし
て上記化合物(1)〜(4)を用い、前記試験法により
SV₄₀発癌ウイルスによつて癌化したC3Hマウス
の癌細胞W2K・11の増殖抑制率（％）を算出す
ると、第３表に示す結果が得られた。

〔考案〕

試験例の結果から明らかなように、上記被験化
合物は、すぐれた制癌活性を有することが立証さ
れた。なお、上記被験化合物は従来の癌化学療法剤の
多くが動物の移植癌に比し、SV₄₀発癌ウイルス
による癌化細胞に活性が極めて低いのに対して上
記化合物がこれに作用して抑制効果を示し、且
つ、いずれの化合物も極めて低毒性であることは
極めて特徴的であることに注目すべきである。即ち、従来の細胞毒性型の制癌剤の多くは動物
の実験腫瘍、即ち移植癌に対して顕著な活性を示
すのに比し臨床的には多くの問題点を残してお
り、有効例は極めて少いのが実状であつて、これ
は移植癌と初発癌との間の根本的な差異に基づく
ものと考えられ、人為的な初発癌ともいえる
SV₄₀ウイルス誘発癌に活性を有し、且つ低毒性
である上記化合物は極めて特徴的な制癌活性を有
するものと認められるものである。

Claims

【特許請求の範囲】１次式（）（但し、式中R₁は水素、低級アルコキシ基又
は低級アルコキシカルボニル基を表わし、R₂は
R₁が水素のときニトロ基、R₁が低級アルコキシ
基のときヒドロキシ基、R₁が低級アルコキシカ
ルボニル基のとき水素を表わし、又はR₁とR₂が
協同して環状ケタール又はアセタールを表わす。）を有効成分として含有する制癌剤。２式（）の化合物を薬理的に許容される包接
化合物として用いる特許請求の範囲第１項記載の
制癌剤。３経口投与剤である特許請求の範囲第１項記載
の制癌剤。４有効成分を0.3〜15.0重量％の量含有する特
許請求の範囲第３項記載の制癌剤。５非経口投与剤である特許請求の範囲第１項記
載の制癌剤。６有効成分を0.01〜10重量％の量含有する特許
請求の範囲第５項記載の制癌剤。７腸溶性投与形態をとる特許請求の範囲第１，
３，５項のいずれかに記載の制癌剤。