JPH01203322A - 制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、ドコサヘキサエノイルモノグリセリド（ｄｏ
ｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｙｌ　ｍｏｎｏｇｌｙｃｅｒｉ
ｄｅ）を有効成分とする制癌剤に関する。

（発明の背景） 従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナイトクジ
エンマスタード類、エチレンイミン類、スルホン酸エス
テル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、
ピリミジン拮抗剤）、植物性核分裂等（コルセミド、ビ
ンブラスチン等）、抗生物質（ザルコマイシン、カルチ
ノフイリン、マイトマイシン等）、ホルモン類（副腎ス
テロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィ
リン錯塩（マーフィリン、ＣｏＰＰ）等が用いられてい
る。しかしながら、その殆んどは、細胞毒型の物質であ
り、重大な副作用を呈するため、低毒性で優れた制癌活
性を有する制癌剤の開発が強く望まれている。

本発明者らは、そのような趣旨に鑑み、低毒性で制癌性
を有する物質を探索した結果、先にコイの浮袋より、奇
形腫細胞や赤芽球性白血病細胞に対し強力な分化誘導活
性を示すグリセリドを単離し、その構造解析を行い、該
物質が優れた制癌剤として用いうろことを見出した（特
開昭６０−５８９１７号公報参照）。

その後、更に研究を進め、該物質の各種誘導体の化学合
成あるいは半合成を行って、その制癌活性（分化誘導活
性）を調べたところ、特定の脂肪酸残基を有するドコサ
ヘキサエノイルモノグリセリドが優れた制癌活性を示す
ことを見出し、本発明を完成した。

（発明の目的） 本発明の目的は、ドコサヘキサエノイルモノグリセリド
を有効成分とする制癌剤を提供することにある。

（発明の構成） 例えば、次のようにして合成することができる。

Ｄ−ＭＧの合成 ■　ドコサヘキサエン酸（ＤＮＡ）８ｇ　（２４，４ｍ
ｔＪ）を脱水ジクロロメタン２５ｒＩｆ、に溶解しＮ、
Ｎ’ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）２．４
ｇ（１１，６ｍＭ）を加えて室温で２４時間反応させＤ
ＨＡ無水物６．０ｇを得た。

■　ＤＨＡ無水物６．０ｇ（９，４ｍＭ）と脱水ジクロ
ロメタン２０ｒｎｌとグリセロホスホリルコリン（ＧＰ
Ｃ）　１．０　ｇ　（３，９ｍＭ）と４−ジメチルアミ
ノピリジン（ＤＭＡＰ）　０．４７ｇ　（３，９ｍＭ）
を加え常温で２４時間反応させた。反応後濾別し脱溶媒
して粗フォスファチジルコリン（ＰＣ）を得た。

■　粗ＰＣをクロロホルム−メタノール混液に溶解し、
イオン交換樹脂アンバーライト２００Ｃ２を充填したカ
ラムに通して触媒を除去した。

■　脱溶媒後、脱水冷アセトン１００ｒｎｌを添加し冷
凍庫に３時間放置したのち、３０００ＲＰＭＸＩＯ分間
遠心分離した。この操作を２回繰り返して脱溶媒後、微
黄色の油状物を得た。

■　油状物をシリカゲル（富士ゲル社製　ＣＧ３）の中
圧カラム（２，２ｃｍ　Ｘ　３０　ｃｍ　）に付した。

メタノール−クロロホルム（０〜１００％）で展開した
。クロロホルム−メタノール（４：　ｌｖ／ｖ）の両分
に１．２−シトコサへキサエノイル・フォスファチジル
コリン（ＤＤ−ＰＣ）４．５ｇを得た。

■　得られたＤ　Ｄ　−Ｐ　Ｃ２，５ｇに脱水エーテル
−脱水メタノール（９８：　２ｖ／ｖ）とハブ毒ホスホ
リパーゼＡ、（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓ　ｆｌａｒｏ
ｖｉｒｉｄｉｓ和光純薬工業社製）　２５ｍｇと１００
ｍＭ塩化カルシウム溶液５０ｍ１と２００ｍＭ）リス−
塩酸緩衝液２００−を添加し３７℃で２４時間インキニ
ベートした。

■　Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法により抽出し、脱溶媒後、
脱水冷アセトン１００−を添加して冷凍庫に３時間放置
した。放置後３０００ＲＰＭｘｌＯ分間遠心分離した。

この操作を２回繰り返し、脱溶媒後、白色の油状物を得
た。

■　油状物をシリカゲル（富士ゲル社製　ＣＧ３）の中
圧カラム（２，２ｃｍＸ３０ｃｍ）に付した。メタノー
ル−クロロホルム（０〜１００％）で展開した。クロロ
ホルム−メタノール（１：　４ｖ／ｖ）の両分にドコサ
ヘキサエノイルーリゾフォスファチジルコリン（Ｄ−Ｌ
ＰＧ）１．９ｇを得た。

■　Ｄ−ＬＰＣ１ｇｃ！：脱水エーテル−エタノール（
９８：　２ｖ／ｖ）と細菌ホスホリパーゼＣ（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓＣｅｒｅｕｓシグマ社製）２０ｍｇと１００ｍ
Ｍ塩化カルシウム３５ｍ１と２００ｍＭ）リス−塩酸緩
衝液６０ｍ１！を加え３７℃で６０分間インキニベート
した。反応後エーテル５０ｍ１！で抽出した。抽出物を
窒素気流下で脱溶媒しＤ−ＭＧ６５０ｍｇを得た。

分析値は次の通りである。

１）物質の形状：白色透明の油状物 ２）ＧＣ（キャピラリーガスクロマトグラフィー）によ
る脂肪酸組成分析 Ｃ２２：６　　９９．８％ ３）　ＨＰ　Ｌ　Ｃに正るＤ−ＭＧ組成分析ＯＤＳカラ
ム、流速０．７　ｒｎｌ／ｍｉｎ　ＳＵ　Ｖ２３０ｎｍ
：溶出液：テトラヒドロフラン／Ｈ２０＝６０／４０、
単一ピーク。

４）質量分析：　ＦＡＢ−ＭＳより分子量Ｍ４０２（（
Ｍ＋Ｈ）”　　４０３、（Ｍ＋Ｎａ″）”　　４２５）
を有する。

本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤又
は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口
投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤などの皮下或
いは静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘稠液状と
して持続的な粘膜吸収が維持できるように生薬のような
剤型で投与され得る。

本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び必要に応じて腸溶性製剤とするために
医薬的に許容し得る被膜形成物質、コーティング助剤等
を用いて適宜行うことができ、その具体例を挙げれば、
次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるだめに、
界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチ
レングリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類
、硫酸化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加
することができる。

また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、結
晶セルロース、マンニット、軟質無水珪酸、アルミン酸
マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成
珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウ
ム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム等の１種又は２種以上を組合せて添加する
ことができる。

滑沢剤としては、例えばステアリン酸マクネシウム、タ
ルク、硬化油等を１種又は２種以上添加することができ
、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、サッカリン、糖
、マンニット、オレンジ油カンゾウエキス、クエン酸、
ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味
剤、香料、着色料、保存料等を含有させてもよい。

懸濁剤、潤滑剤の如き佐剤としては、例えばココナツト
油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また皮膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭水
化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＰΔ）、
またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル類等
のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアクリル
酸共重合体が挙げられる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し、通
常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の他、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
たり、コーティング操作′をより容易ならしめることが
できる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイク
ロカプセル化してから賦形剤等を混合した剤型としても
良い。

次に代表的な剤型における配合比は下記の通りである。

有　効　成分　０．１〜９０　　　重量％０．３〜１５
　　　重量％賦　　形　　剤　　１０〜９９．８　　　
　〃　　８５〜９９．４　　　　”滑　　沢　　剤　　
　０〜５０　　　　　　〃　　′　Ｏ〜２０　　　　　
〃界面活性剤　０〜５０〃０〜２０〃 皮膜形成物質　０．１〜５０〃０．３〜２０〃特に好ま
しい賦形剤は、乳糖、結晶セルロース、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウムである。

また、投与量は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量
であり、腫瘍の症状、投与経路、剤型などによって左右
されるが、一般に、経口投与の場合、大人では１日当り
、約０．０１〜１００ｍｇ　／　ｋｇ体重（小人では０
．０１〜６０ｍｇ／ｋｇ体重）の範囲で、その上限は好
ましくは約５０■／　ｋｇ体重、更に好ましくは約１０
ｍｇ／ｋｇ体重程度であり、非経口投与の場合、その上
限は約１０■／　ｋｇ体重程度であり、好ましくは５　
ｍｇ　／　ｋｇ体重、更に好ましくは２　ｍｇ　／　ｋ
ｇ体重が適当である。

次に、本発明化合物の制癌活性を確認した制癌性試験法
について述べる。

フレンド白血病細胞（マウス赤芽球性白血病細胞、Ｂ８
細胞）に対する試験を行った。

ＨＡＭのＦ−１２培地（ＧＩＢＣＯ製）に１５％の牛胎
児血清及び６０■／Ａのカナマイシンを加えたものに、
２．５　Ｘ　１０　’ｃｅｌｌ／−となるように８８細
胞を接種し、これに所定量の被験化合物を加える（最終
容量５ｍ１）。

８．０％炭酸ガス中、３７℃で７日間培養した後、オル
キン（Ｑｒｋｉｎ）のベンジジン染色法により染色し、
染色された細胞数、即ち、赤血球への分化によりヘモグ
ロビンを生成するようになった細胞数を測定し、全細胞
に対する比率から分化誘導率を求めた。

以下に、本発明を製剤例及び試験例によって具体的に説
明する。

製剤例１（注射・点滴剤） 化合物　Ｄ−ＭＧ　　１０ｍｇを含有するように粉末ぶ
どう糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密封し
た上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所
に保存した。使用前にエタノールに溶解し、０．８５％
生理的食塩水１００−を添加して静脈内注射剤とし、１
日、１０〜１００−を症状に応じて静脈内注射又は点滴
で投与する。

製剤例２（注射・点滴剤） 化合物Ｄ−ＭＧ２ｍｇを用いて、製剤例１と同様の方法
により軽症用静脈内注射剤とし、１日、ｌＯ〜１００ｒ
ｎｌを症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例３（腸溶性カプセル剤） 化合物Ｄ−ＭＧ５ｇ、乳糖、２．４６　ｇ及びヒドロキ
シプロピルセルロース０．０４ｇを各々とり、よく混合
した後、常法に従って粒状に成形し、これをよく乾燥し
て篩別してピン、ヒートシール包装などに適した顆粒剤
を製造した。次に、酢酸フタル酸セルロース０．５ｇ及
びヒドロキシプロピルセルロースフタレート０．５ｇを
溶解して被覆基材となし、前記顆粒を浮遊流動させつつ
この基材を被覆して腸溶性の顆粒剤とした。この組成物
をカプセルに充填して腸溶性カプセル製剤１００個を製
造する。

試験例（制癌活性試験） 化合物Ｄ−ＭＧを用い、前記試験法により、フレンド白
血病（Ｂ８）細胞の分化誘導活性を調べ た。その結果を次に示す。

ＤＭＳＯ：ジメチルスルホヰシド

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ドコサヘキサエノイルモノグリセリドを有効成分とする
   制癌剤。