JPS60199821A - 新規なコリン含有リン脂質ｂ及びその制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 不発明は、新規なコリン含有リン側１１Ｂ及び該物ダ′
ｆを有効成分として含有することを特徴とする制ｆ、’
ｊｉ剤に関するものである。

従来、癌化学寮洗剤として、アルキル化剤（ナイ］・口
・ツエンマスタード類、エチレンイミン類、スルホン酸
エステル＠４）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮
抗剤、ビＩＪ　ミジン拮抗剤）、植物性ｔＡ　分裂ｎ”
、　（コα・セミドゞ、ビングラスチン等）、ｆ：Ｔ、
　／ｌ＝　物質（ザルコマイシン、カルチンフィリン、
フイトマインン等）、ホルモンｍ　（副腎ステロイド、
男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィリンＩｉ’
Ｊ　Ｊｆａ　（マーフィリン、ｃｏｐｐ　）　等が用い
られている。しかしながら、その殆んどは、細胞毒型の
物質であり、重大な副作用を呈するため、低毒性で優れ
た制御＋％活性を有する制癌剤の開発が強く望まれてい
る。

本発明者らは、上記趣旨に艦み、低毒性で制癌性を有す
る物質を動・イイＪ物、（１ｙ生物界の広い生物範囲か
ら探索を１ｊった帖果、ザリガニ（Ｐｒｏｃａｍｂａｒ
ｕｓＣｌａｒｋｌｌ　）　ノクロロホルムーメタノール
抽出物中に含まれるコリン含廟リン脂質を分離し、該物
質が文献未載の特異的な理化学的性質を有する全く新し
い＠質であることを見出し１、更に該物質が鳥動物の腫
ｌＪｉ、細Ｈａに対して分化ル妻導活性を有すること倉
！ｒだに見出し、且つ著しく仕組性で、優れた制癌活性
を有することの新たな知見を得て、不発明を完成するに
至った。本発明の１ｂＪ癌剤の有効成分は、人、家畜、
犬、ねこ等の混血動物に対する優れた六り化学療法剤と
なり得るものである。

以下に、本発明の新規なコリン含有リン脂質Ｂ（以下、
「リン脂グｔＢ」と称するっ）に−〕いて説明する。

〔分離及びその構製法〕

ザリガニ（，２，７ｋｇ）　ｋ　、クロロホルム−メタ
ノール（，２：／）で抽出し、抽出物をノリカケ゛ルカ
ラムクロマトグ２フィー（Ｍｍ：クロロホルム−メタノ
ール−水）に付し、活性画分（クローホルム−メタノー
ル＝−２：　ｆ溶出部）を、史に晶速液体りｏｗトゲラ
フイー（Ｎｕｃｌｅｏｓｌｌ　５　Ｃ１８。

溶媒：りｊ％ＭｅＯＨ、流速二２４／分）に付した。

活性画分は＼保持時１１Ｕ　／　Ｚ　Ｊ−分に得られ、
次いで、この両分を溶媒留去・濃縮して、羊−な活性物
質が無色油状物として３　ｍｇ得られた。

かくして得られたリン脂′ＲＢの理化学的性質は、次の
とおりである。

〔リン脂質Ｂの理化学的性質〕

（１）物質の形状：　無色油状物 （２）賀！分析：　ＦＤ−ＭＳ、ＦＡＢ−ＭＳより分子
量ｊ０り （３）ＬＪ、Ｖ、スペクトル ２Ｍｅ”Ｈ：　、２３３ｎｍ（ａニア７０）ａｘ （４）　１．Ｒ，スペクトル にＳｒ　−１。

νｍａｘｃＩＩＬ　、３０θθ１．２り３０．／７３θ
。

ｉ＜１−３ｏ、ｉ−乙θ、／／≠ｊ （５）　ｔｄ　１１　性：クロロホルム、メタノールに
可溶 （６）　試薬に対する反応： ドラーグンドルフ試薬　陽性 ディトマー、・レスター試薬　陽　性 ＫＭｎＯａ　陽性 アンスロン試薬　陰　性 上記理化学的性質を検討すると、リン脂′ｈＢは、）’
　ラ−１”　ｙドル７　試薬及びディトマー−レスター
試薬に対して陽性を示すので、コリン及びリン酸をその
分子内に有すること、アンスロン試薬に対して陰性であ
るので、アミノ酸及び糖を含有しないこと、Ｕ、　Ｖ、
スペクトルにより、２３３ｎｍの極大値を示すので、共
役二重結合を有すること、１、Ｒ，ｘ−ｅクトルより、
／７３θｃｍ−１に吸収帯を示すので、エステル結合を
含有すること、及びスフィンゴミエリ”　（Ｓｐｈｉｎ
ｇｃｍｙｅｌ　Ｉｎ　）のアミド結合が見出されないこ
と、及び後述のホスポリノや−ゼＡ□の加水分解により
脂肪酸が見出されることホスホリ／ｆ−ゼＡ２の加水分
解により脂肪酸が見出されないこと、ホスホリ／４′−
ゼＣ，ボスホリａ４−ゼＤで処理して、コリンリン酸あ
るいは、コリンが見出されることから、本発明の物質は
、グリセリンの末端に脂肪酸がエステル結合したプリン
含有リン脂質であることが妥当と結論された。次に、こ
の脂肪酸の位置を決定するため、次の方法により処理し
た。リン脂質Ｂを、ホスホリ・ぐ−ゼＡ工活性（選択的
に７位のエステル結合を加水分ＦＳ　する０　）を有す
るリゾ−ゲス・デレマー・すｐ４’−ゼ（Ｒｈ１ｚｏｐ
ｕｓ　ｄｅｌｅｍａｒ目ｐａｓｅ　）により加水分解し
、ジアゾメタンでエステル化した＆　、ＧＣ−ＭＳで分
析した結果、Ｃ２０”３□ＣＯＯＣＨ３に相当する脂肪
酸エステルが同定された。

この結果、７位に、Ｃ２０Ｈ３□Ｃ０ＯＨに相当する脂
肪酸が結合していることが分った。

次に、本発明の制癌剤について説明する。

本発明の制癌剤は、前記のリン脂質Ｂを有効成分として
含有することを特徴とするものである。

す／脂ＩＲ６は、ザリガニのような動物中に本来存在す
るものより単離された物質であり、癌細胞がら正常細胞
への分化誘導作用を示すことから毒性の心配が全くない
。

本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・映カプセル剤又
は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口
投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤などの皮下或
いは静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘稠液状と
して持続的な粘膜吸収が維持できるように生薬のような
剤型で投与され得る。

本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び必要に応じて腸溶性製剤とするために
医薬的に許容し得る皮膜形成物質、コーティング助剤等
を用いて適宜行うことができ、その具体例を挙げれば、
次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、
界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ホリエチ
レングリコール誘導体、ノルビタンの脂肪酸エステル類
、硫酸化脂肪アルコール類等の７Ｍ又は２種以上を添加
することができる。

また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、ｆメタン、結
晶セルロース、マンニット、軽質１水珪酸、アルミン酸
マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成
珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウ
ム、リン酸水素カルシウム、カル鱈？キシメチルセルロ
ースカルシウム等の７種又は２種以上を組合せて添加す
ることができる。

滑ｌＩｔ！剤としては、例えばステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、硬化油等を７種又は２種以上添加すること
ができ、また矯味剤及び矯臭剤として１食塩、サッカリ
ン、糖、マンニット、オレンジ油カンゾウエキス、クエ
ン酸、ブト”り糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸
等の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させてもよ
い。

懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばココナツト
油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳限カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また皮膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭水
化物誘導体として酢酸７タル酸セルロース（ＣＡＰ）、
またアクリル酸系共重合体、二基Ｍａｔモノエステル類
等のポリビニル杓導体としてアクリル酸メチル・メタア
クリル酸共止合体、メタアクリル酸メチル・メタアクリ
ル酸共重合体が拳げられる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し、通
常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の他、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
たり、コーティング操作をより容易ならしめることがで
きる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロ
カブ七ル化してから賦形剤等と混合した剤型としても良
い。

特に代表的な剤型における配合比は下記の通りである。

特に好ましい範囲 有効成分　Ｏ３／〜り０Ｍ貴−〇、３〜／ｊ重量％賦　
形　剤　１０〜りＺざ　〃　どｊ　〜りＺ４Ｌ　＃滑沢
剤　０〜３０　＃　０〜．２０　＃界面活性剤　０〜３
０　１　０−２０．　＃皮膜形成物質　０．７〜Ｊ゛θ
　Ｎ　０．３〜．２θ　〃特に好ましい賦Ｊし剤は、乳
糖、結晶セルローズ、カルＣ■シメチルセルロースカル
シウムテアル。

また、投与方丈は、対象腫瘍を有効に治療するに−１分
なト１であり、膝嬉の症状、投与経路、剤型などによっ
て左右されるが、一般に、経口投与の場合、大人では７
日当り、約０．０１ＮＩＯθ■／ｋｇ体重（小人では、
０．０　／　−＋　ｏｍｙ／ｋｇ体重）ノ範囲で、その
上１９（は好ましくは約３°θｍ９７ｋｇ体重、更に好
ましくは約／θＩｒｙ／に９体重程度であり、非経口投
与の場合、その上限は約１０ダ／ｋｌＦ体重程度であり
、好ましくはｊ　”９　／　ｋｇ体重、史に好ましくは
２　ｉｆ　／　ｋｇ体重が適当である。

次に、リン脂質Ｂの制癌活性を確認した制癌性試験につ
いて述べる。

〔１〕　フレンド白血病細胞（ｍｏｕｓｅ　ｅｒｙｔｈ
ｒｏｌｄｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｌ　＊　８８細胞）
に対する試験Ｇ　Ｉ　ＢＣＯ製ＨＡＭのＦ−１２培地に
、１ｓｔｓの牛胎児血清及び１．０１１に９／ｌのカナ
マイシンを加えたものに、λ、、３；Ｘ１０　ｃｅｌｌ
／−となるように８８細胞を接種し、これに所定源、の
被験化合物を加える（最終秤量ｊｍ／）。

ＺｊチＣＯ２中、３７℃７日間培養した後〜オルキ：’
　（０ｒｋｌｎ　）のベンジジン染色法により染色し、
染色された細胞数、すなわち、赤血球への分化によりヘ
モグロビンを生成するようになった細ＦＩ！数を測定し
、分化誘導率をめる。

〔２〕　マウス骨髄性白血病細胞（ｍｏｕｓｅ　ｍｙｅ
ｌｏｌｄｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｌ　ｔ　Ｍ　１　）
に対する試験Ｇ　Ｉ　ＢＣＯ製イーグルＭＥＭ培地に、
１０チの馬血清及び乙Ｏｍ９／ｌのカナマイシンを加え
たものに、よθＸ　／　０’　ｃｅｌｌ／　ｔｎｔとな
るようにＭ１細胞を接種し、これに所定量の被験化゛合
物を加える（最終秤量ｊｇＲ１）。

７．５チＣ０２中、３７℃７日間培養した後、貧食細胞
、あるいは顆粒球への分化により誘導されたリゾチーム
活性を調べる。なお、リゾチーム活性の７単位（ｕｎｌ
ｔ　）　とは、ミクロコツカスリノデイクテイカス（Ｍ
ｌｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｙｓｏｄｅＩｋＮｃｕｓ　）
菌体の懸濁液を基質として、リゾチームを作用させ、）
”　Ａ、　、２４’　％　湿明ｊ　３　℃で測定し、’
Ａ　ｊ　Ｏｍｐ　の波長の吸光度を毎分０．θＯ／減少
させるようなリゾチームの川をいう。

以下、本発明を製剤例及び試験例によって具体的に説明
する。

製剤例　／（注射・点滴剤） リン脂’Ｊ’ｊＢ　／　０ｒｌｌを含有するように粉末
ぶどう糖ｊｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密封
した上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗
所に保存する。使用前にエタノールに溶解し、ｏ、ｚｓ
ｔｓ生理的食塩水１００−を添加して静脈内注射剤とし
、７日、１０−１００−を症状に応じて静脈内注射又は
点滴で投与する。

製剤例　！（注射・点滴剤） リン脂質Ｂ２ｒｎ９を用いて、製剤例／と同様の方法に
より軽症用静脈内注射剤とし、７日、１０〜１００−を
症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例　３（腸ｍ性カグセル剤） リンｌｌｔ’？　質Ｂ　３　／ｌ　、乳糖２．≠乙Ｉ及
びヒドロキシゾロピルセルロースＯ０Ｏ≠１を各々とり
、よく混合した後、常法に従って粒状に成形し、これを
よく乾燥して篩別してビン、ヒートシール包装などに適
した顆粒剤を製造する。次に、酢酸フタル酸セルロース
ｏ、ｓｇ及びヒドロキシゾロビルセルロース７タレート
θ、ｊｇを溶解して被覆基材となし、前記顆粒を浮遊流
動させつつこの基材を被覆して腸溶性の顆粒前とする。

この組成物をカプセルに充填して腸溶性カプセル製剤７
００個を製造する。

試験例 ＋７７脂質Ｂを用い、前記試験法［１］及びＥｌ）によ
り、フレンド白血病細胞の分化誘導率、マウス骨髄性白
血病細胞の分化誘導によるリゾチーム活性を調べたとこ
ろ、フレンド白血病細胞（ＥＬＣ）に対し、７０〜１０
０μｇ／−で、マウス骨髄性白血病細胞（ＭＬＣ）に対
し！Ｏｐ９／−で分化誘導活性を示すことが分った。こ
の結果を第１表に示す。

第１表 上記試験例の結果から明らかなように、リン脂質Ｂは癌
細胞に対して、正常細胞への分化誘導作用を示すことか
ら、（ｉ７件の少ない侵れた制癌活性を示すことが立証
された。

昭和　年　月　日 １、事イ′１の表示　昭和５９年９１を許顎部５５３３
５号２、発明の名称　新規なコリン含有リン脂質Ｂ及び
その制癌剤 ３、補正をする者 事件との関係　出願人 名称　（６７９）理化学研究所 ４、代理人 ７補正の内容　別紙のとおり 明細書の浄書（内容に変更なし）。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）　１記の理化学的性質を有する２ｙノ含有リン脂
   ＊Ｂ０ １）物質の形状：無色油状物 、２）質量分析　：　ＦＤ−ＭＳ、ＦＡＢ−ＭＳより分
   子量ｊＯり ３）　Ｕ、Ｖ、スペクトル ｌＡ）　１．Ｒ，スペクトル ｌ≠３０．／２乙０．／／４’３ ｊ）Ｍｕ／４性：クロロオルム、メタノールに可溶 ６）試薬に対する反応： ドラーグンドル７試薬　附　性 ディトマーーレスター試＃　陽　性 にＭｎＯ４陽性 アンスロン試薬　陰　性
2. （２）　特許請求の範囲第１項で定ａされたコリン含有
   リン脂質Ｂを有効成分として含有することを特徴とする
   制癌剤。
3. （３）非経口投与形態１ｃよる特許請求の範囲第２項記
   載の制癌剤。
4. （４）経口投与形態による特許請求の範囲第２項記載の
   制癌剤。