JPS62207234A - ジイン化合物を含む制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ、　ｇｉｎｓｅ
ｎｇＣ，八０Ｍｅｙｅｒ）の根又はカルスより抽出され
る新規なジイン化合物と該化合物を有効成分として含有
することを特徴とする制癌剤に関するものである。

（発明の背景） 従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナイトログ
エンマスタード類、エチレンイミン類、スルホン酸エス
テル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、
ピリミジン拮抗剤）、植物性核分裂前（コルセミド、ビ
ンブラスチン等）、抗生物質（ザルコマイシン、カルチ
ノフィリン、マイトマイシン等）、ホルモン類（副腎ス
テロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィ
リン錯塩（マーフィリン、Ｃ０ＰＰ）等が用いられてい
る。

しかしながら、その殆んどは、細胞毒型の物質であり、
重大な副作用を呈するため、低毒性で優れた制癌活性を
有する制癌剤の開発が望まれている。

本発明者らは、上記趣旨に鑑み、低毒性で制癌活性を有
する物質を動・植物、微生物界の広い生物範囲から探索
を行った結果、オタネニンジンの根又はそのカルスより
抽出された新規なジイン化合物が、優れた制癌活性を有
し、且つ毒性の極めて少いことを見出し、本発明を完成
したものである。

（発明の目的） 本発明の目的は、オタネニンジンの根又はそのカルスよ
り、制癌活性を有する新規なジイン化合物を抽出・単離
することにある。

又、本発明の目的は、上記ジイン化合物を有効成分とし
て含有する制癌剤を提供することにある。

（発明の構成） 本発明の新規なジイン化合物は、後述の物理的性質を有
し、オタネニンジンの根又はカルスより抽出・単離され
る。上記ジイン化合物は、次の一般式を有する化合物で
ある。

一般式： 〔但し、式中、ＲＩはメチル基又はクロルメチル基でか
つＲ２は水素原子又は水酸基であるかあるいはＲ，とＲ
２が一体になってメチレン基を示す。

Ｒ５は水酸基で、かつＲ４は水素原子又は水酸基である
か、あるいはＲ５とＲ１が一体になってオキソ基を示す
。

Ｒ３及びＲ６は水酸基を示し、あるいはＲ３とＲ６が一
体になってオキシ基を示す。〕上記ジイン化合物の例と
しては、次の化合物が挙げられる。

以下に、これらの化合物の抽出・単離方法の一例を示す
。

オタネニンジンの根又はそのカルスをミキサーにて粉砕
後、超音波処理しながら酢酸エチル等の溶媒で抽出する
。抽出液を濾過後、濃縮し、得られた油状物を、例えば
、ダイヤイオン（Ｄｉａｉｏｎ　）ＨＰ−２０等を用い
て吸着クロマトグラフィーに付す（溶出液は、例えば、
混合比を変えた含水メタノール、アセトンを用いる）。

得られた各分画について、後述の吉日肉腫培養細胞を用
いた制癌活性試験を行う。

このうち、最も強い活性のある分画を、更にシリカゲル
カラムクロマトグラフィーに付し再分画を行って６つの
分画を得る（Ａ−Ｆ）。次いで分画Ｃを、例えばヌクレ
オシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）　５０−５を用いて高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰｔ、Ｃ）で分離精製を行
うと３種類のＣＩ、−アセチレン誘導体（化合物〔ＩＤ
、［Ｉｌｌ、〔■〕）のピークを得、それぞれのピーク
を分取して濃縮、結晶化を行って、それぞれの純品を得
る。

一方、分画Ｂを同様に分離精製を行うと化合物［ｒＶ］
のピークを得、同様に濃縮、結晶化を行って純品を得る
。かくして得られる化合物［ＩＤ、［１１］、〔■〕及
び〔Ｉｖ〕は、下記の物理的性質を有する。

〔化合物〔Ｉ：］　　（４，６−へブタデカジイン−３
＝オキソ−９，１０−ジオール）の物理的性質〕（１）
物質の形態：無色油状物質 ２５６（２５０２）、　２７０（３２９４）。

２９３０（ｓ）、　２８５０（ｍ）、　２２４０（ｓ）
。

２１’５０（ｗ）、　１６６５（ｓ）、　１６５０（ｓ
ｈ）。

１４５５（ｍ）、　１４００（ｗ）、　１３７５（ｗ）
。

１３５０　（ｗ） （４）ＭＳ　ｍ／ｅ　：　２７Ｂ（Ｍ”）（５）　’　
Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤαｓ、　４００ＭＨｚ、δ）：０、８
９　（３１１，ｔ、　Ｊ＝７Ｈｚ）　、　１．１５　（
３Ｈ，ｔ、　Ｊ＝７Ｈｚ）１．３０（ｂｒ）、　　　　
　１．５１（ＬＨ，ｍ）１．９０（１）１．ｄ、Ｊ＝６
Ｈｚ）、　２Ｊ６（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）２．６０（
ＬＨ，ｄ、Ｊ＝６１１ｚ）、　２．６７（ｌｔｌ、ｄ、
Ｊ＝６１（ｚ）３．６０（ｌｉｔ、　ｍ）　　　　３．
７０（ｌｔｌ、　ｍ）〔化合物［：ＩＤ　　（４，６−
ヘプタデカジイン−３゜９．１０−）ジオール）の物理
的性質〕（１）物質の形態：無色油状物質 ２５４ｓｈ　（３６４）　、　２６６ｓｈ　（３５Ｂ）
　。

２８２ｓｈ　（２３８） ２８５０（ｍ）、　２２２０（ｗ）、　１４５０（ｍ）
。

１３７０（ｗ） （４）　ＭＳ　　ｍ／ｅ　　：　　２８０（Ｍ＋）（５
）　’　ＩＩ−ＮＭＲ（ＣＤα３．４００Ｍｔｌｚ、δ
）：０．８８（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）、　１．０２（
３）１．ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）１．３０（ｂｒ）、　　　　
　１．５０（ｌｔｌ、　ｂｒ）１．７４（２Ｈ，ｂｒ）
、　　２．５７（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝６．１５ｔｌｚ）２
．５９（Ｉｌｌ、ｄｄ、Ｊ＝６．１５Ｈｚ）、　３．５
９（１ｔ１．ｍ）。

３．６５（ＩＨ，ｍ）、　　　４Ｊ７（ＩＨ，ｔ、Ｊ＝
６）１ｚ）〔化合物（Ｉ［ＩＤ（１−クロロ−４，・６
−へブタデカジイン−９，１０−エポキシ−２，３−ジ
オール）の物理的性質〕 （１）物質の形態：無色油状物質 ２８５０（ｓ）、　２２５０（ｗ）、　１４５０（ｍ）
。

１３７０（ｍ） （３）　？ＪＳ　ｍ／ｅ　：　３１２（Ｍ”　）（４）
　’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊ３．４００ＭＨｚ、δ）：０
．８７（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）、　１．２９（ｂｒ）
１．５０（２Ｈ，ｂｒ）　　２．４ＨＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝
７，１８ｔ（ｚ）２、６９　（ｌｔｌ、　ｄｄ、　Ｊ＝
６．１８Ｈｚ）　　２．９８　（ＩＨ，ｍ）３．１５（
ＩＨ，ｍ）、　　３．６８（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝６．１２
Ｈｚ）３゜７８　（ＬＨ，ｄｄ、　Ｊ＝４．１２ｔｌｚ
）、　３．９２　（１Ｎ、　ｂｒｓ）４、５４（ＩＨ，
ｂｒｓ） 〔化合物［ｒＶ］（１−へブタデセン−４，６−ジイン
−９，１０−エポキシ−３−オール）の物理、的性質〕 （１）物質の形態：無色油状物質 ２８８０　（ｓ）　、　２２７０　（ｗ）　、　１６６
０　（ｗ）。

１６４０（ｉｌｌ）、　１４６０（ｍ）、　１３８０（
ｍ）（３）　ＭＳ　ｍ／ｅ　：　２６０（Ｍ”　）（４
）　’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤα３．　４００ＭＨｚ、δ）
：０、８９　（３Ｈ，ｔ、　Ｊ＝７Ｈｚ）　、　　１．
２９　（ｂｒ）１．５２（２Ｈ，ｂｒ）　　　２．３９
（Ｉｔ（、ｄｄ、Ｊ＝７．１８Ｈｚ）２．７１　（ＬＨ
，ｄｄ、　Ｊ＝５．１８Ｈｚ）　、　　２．９７　（Ｌ
Ｈ，ｍ）３．１５（ＩＨ，ｍ）、　　　４．９３（Ｉｌ
ｌ、ｂｒｓ）５、２６　（１８，ｄｔ、　Ｊ＝１．１０
Ｈｚ＞。

５、４７（ｌｔｌ、　ｄｔ、　ｄ＝１．１７Ｈｚ）。

５、９５　（ＩＨ，ｄｄｄ、　Ｊ＝５．’　１０．１７
Ｈｚ）これらの化合物は、マウスに対し、１００ｍｇ／
ｋｇ連続投与しても何ら毒性を認めなかった。

次に、本発明のジイン化合物を有効成分とする制癌剤に
ついて説明する。

本発明の有効成分は、生薬として用いられているオタネ
ニンジンの根又は、そのカルスのような植物体中に本来
存在するものより単離された物質であることから、合成
化学物質とは異なり、毒性の心配は極めて少ない。

本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤又
は錠剤、頴粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口
投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤などの皮下或
いは静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘稠液状と
して持続的な粘膜吸収が維持できるように生薬のような
剤型で投与され得る。

本発明の有効成分の静剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び必要に応じて腸溶性製剤とするために
医薬的に許容し得る被膜形成物質、コーティング助剤等
を用いて適宜行うことができ、その具体例を挙げれば、
次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、
界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチ
レングリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類
、硫酸化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加
することができる。

また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、結
晶セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸
マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成
珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウ
ム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム等の１種又は２種以上を組合せて添加する
ことができる。

滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タ
ルク、硬化油等を１種又は２種以上添加することができ
、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、サッカリン、糖
、マンニット、オレンジ油カンゾウエキス、クエン酸、
ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味
剤、香料、着色料、保存料等を含有させてもよい。

懸濁剤、潤滑剤の如き佐剤としては、例えばココナツト
油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また被膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭水
化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、
またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル類等
のポリビニル誘導体とじてアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアクリル
酸共重合体が挙げられる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し、通
常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の他、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
たり、コーティング操作をより容易ならしめることがで
きる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロ
カプセル化してから賦形剤等を混合した剤型としても良
い。

次に代表的な剤型における配合比は下記の通りである。

有効成分　０．１〜９０　　重量％　０．３〜１５　　
重量％賦　　形　　剤　　１０〜９９．８〃８５〜９９
．４　　〃滑　　沢　　剤　　θ〜５０〃０〜２０〃界
面活性剤　　　０〜５０〃０〜２０〃皮膜形成物質　０
．１〜５０〃０．３〜２０〃特に好ましい賦形剤は、乳
糖、結晶セルローズ、カルボキシメチルセルロースカル
シウムである。

また、投与量は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量
であり、腫瘍の症状、投与経路、剤型などによって左右
されるが、一般に、経口投与の場合、大人では１日当り
、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重（小人では０．０
１〜６０ｍｇ／ｋｇ体重）範囲で、その上限は好ましく
は約５０ｍｇ／ｋｇの体重、更に好ましくは約１０ｍｇ
／ｋｇ体重程度であり、非経口投与の場合、その上限は
約１０ｍｇ／ｋｇ体重程度であり、好ましくは５ｍｇ／
ｋｇ体重、更に好ましくは２ｍｇ／ｋｇ体重が適当であ
る。

次に、本発明化合物の制癌活性をｖｆｉ認した制癌性試
験法について述べる。

１５％の子牛血清を含有するＭＥＭ培地にッスイ製）に
、ラットの腹水から取り出した吉川肉腫細胞（Ｙｏｓｉ
ｄａ　ｓａｒｃｏｍａ　ｃｅｌｌｓ）を接種して培養し
、細胞数が約１０　Ｘ　１０’ｃｅｌｌｓ／−になった
時点で上記培地で５倍に希釈（２０Ｘ　１０　’ｃｅｌ
ｌｓ／−）シ、１ｒｎｔづつバイアルビンに分注する。

次いで、各濃度の供試化合物サンプルのメタノール又は
アセトン溶液を加え、ゴム栓をして３７℃で培養し約３
日後にトリパンブルーにて染色後、生細胞数を計測する
。供試細胞増殖の抑制率は、次式により求めた。

以下に本発明を実施例、製剤例及び試験例によって具体
的に説明する。

実施例 オタネニンジンカルスの乾燥物（４ｋｇ）をミキサーに
て粉砕後、超音波をかけながら酢酸エチルにて３回抽出
する。次いで抽出物を濾過後、濃縮し、得られた油状物
をカラムクロマトグラフィー（カラムニアφＸ　６０ｃ
ｍ５ＤｉａｉｏｎＨＰ　−２０、溶出液メタノール：水
＝１０：１００〜１００：Ｏ、アセトン）に付して、８
分画（各分画２０００ｍ　）に分け、それぞれ分画につ
いて、前記吉川肉腫細胞に対する生育阻害活性試験を行
った。

その結果、メタノール：水＝９０：１０の分画が極めて
強い阻害活性を示した。そこで、更にこの分画をシリカ
ゲルクロマトグラフィー（カラム：３．５φｘ　（ｉ　
Ｑｃｍ、　ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル＝２　：　
１）で再分画を行い６つの分画（Ａ−Ｆ）に分けた（各
分画１５０ｍＮ）。このうち、吉川肉腫細胞生育阻害活
性の強い分画Ｃ及びＢを次のように処理した。

分画Ｃを高速液体クロマトグラフィー（カラム：８φＸ
３０ｃｍ５Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　　５０−５、ヘキサン
：酢酸エチル＝２＝１、流速−７分）に付し、保持時間
１５分、２３分、１２分のピークを分取、濃縮を行って
、それぞれ化合物［１］１５０ｍｇ、化合物ＣＩＩ：）
１０ｍｇ、化合物（ＩＩＩＩ　　１５ｍｇを得た。

又、分画Ｂを高速液体クロマトグラフィー（カラム：８
φＸ　３０　ｃｍ、　Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　　５０−５
、ヘキサン：酢酸エチル＝３＝１、流速３−７分及び；
カラム：６φＸ　１５ｃｍ、　０ＤＳ−２１５１、メタ
ノール：水＝４＝１、流速２−７分）に付し、保待時間
５分のピークを分取し、濃縮して化合物［ｒＶｌ］　３
５ｍｇを辱だ。

製剤例１（注射・点滴剤） 化合物〔Ｉ〕又は［：１１１１０ｍｇを含有するように
粉末ぶどう糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、
密封した上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して
冷暗所に保存した。使用前にエタノールに溶解し、０．
８５％生理的食塩水１００−を添加して静脈内注射剤と
し、１日、１０〜１０〇−を症状に応じて静脈内注射又
は点滴で投与した。

製剤例２（注射・点滴剤） 化合物ＣＩＩＩ］又は［：ＩＶ］　２ｍｇを用いて、製
剤例１と同様の方法により軽症用静脈内注射剤とし、１
日、１０〜１００−を症状に応じて静脈内注射又は点滴
で投与した。

′製剤例３　（Ｉｌｌ溶性カプセル剤）化合物〔ＩＩ］
又は［：ＩＩＩ〕５ｇ、乳糖２．４６　ｇ及びヒドロキ
シプロピルセルロース０．０４ｇを各々とり、よく混合
した後、常法に従って粒状に成形し、これをよく乾燥し
て篩別してビン、ヒートシール包装などに適した頚粒剤
を製造した。次に、酢酸フタル酸セルロース０．５ｇ及
びヒドロキシプロピルセルロースフタレート０．５　ｇ
　’ｄａｍ　して被覆基材となし、前記類粒を浮遊流動
させつつこの基材を被覆して腸溶性の頴粒剤とした。こ
の組成物をカプセルに充填して腸溶性カプセル製剤１０
０個を製造した。

試験例 化合物［Ｉ］、〔■〕、［ＩＩ［］、〔■〕を用い、前
記試験法により吉゛田肉腫細胞の増殖抑制率（％）を算
出した。その結果を第１表に示す。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔但し、式中、Ｒ＿１はメチル基又はクロルメチル基で
   、かつＲ＿２は水素原子又は水酸基であるか、あるいは
   Ｒ＿１とＲ＿２が一体になってメチレン基を示す。 Ｒ＿３は水酸基で、かつＲ＿４は水素原子又は水酸基で
   あるか、あるいはＲ＿３とＲ＿４が一体になってオキソ
   基を示す。 Ｒ＿５及びＲ＿６が水酸基であるか、あるいはＲ＿５と
   Ｒ＿６が一体になってオキシ基を示す。〕で示されるジ
   イン化合物。
2. （２）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第（１）項記載の化合物。
3. （３）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第（１）項記載の化合物。
4. （４）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第（１）項記載の化合物。
5. （５）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第（１）項記載の化合物。
6. （６）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔但し、式中、Ｒ＿１はメチル基又はクロルメチル基で
   、かつＲ＿２は水素原子又は水酸基であるか、あるいは
   Ｒ＿１とＲ＿２が一体になってメチレン基を示す。 Ｒ＿３は、水酸基で、かつＲ＿４は水素原子又は水酸基
   であるか、あるいはＲ＿３とＲ＿４が一体になってオキ
   ソ基を示す。 Ｒ＿５及びＲ＿６は水酸基であるか、あるいはＲ＿５と
   Ｒ＿６が一体になってオキシ基を示す。〕で示されるジ
   イン化合物を有効成分とする制癌剤。