JPH0418046A

JPH0418046A - ジイン化合物および制癌剤

Info

Publication number: JPH0418046A
Application number: JP2121859A
Authority: JP
Inventors: Yasuo Fujimoto; 康雄藤本; Yoshitsuru Sato; 佐藤　美鶴; Chohachi Konno; 今野　長八
Original assignee: Nitto Denko Corp
Current assignee: Nitto Denko Corp
Priority date: 1990-05-10
Filing date: 1990-05-10
Publication date: 1992-01-22
Anticipated expiration: 2013-06-25
Also published as: JP2768805B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】く産業上の利用分野〉本発明ｔｒｉ、アメリカニンジン（Ｐａｎａｘ　Ｑｕｉ
ｎｑｕｅｆｏｌ　ｆｔ！ｒｎＬ、）またにその組織培養
物から抽出される新規なジイン化合物と該化合物を有効
成分として含有する制癌剤に関する。

〈従来の技術〉従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナイトロジ
エンマスタード類、エチレンイミン類、スルホン酸エス
テル類）１代謝乳抗吻質（葉酸猪抗剤、プリン＃抗剤、
ピリミジン祐抗剤）、植物性核分裂毒（コルセミド、ビ
ンブラスチン等）。

抗生物質（サルコマイシン、カルチノフイリン。

マイトマイシン等）、ホルモン類（副腎ステロイド、男
性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィリン錯ｋＭ（
マーフィリン、Ｃ０ＰＰ）等が用いらｎでいる。

しかしながら、その殆んどは、細胞毒型の物質であり１
重大な副作用を呈するため、低毒性で優７″１．た制癌
活性を有する制癌剤の開発が望まれている。

本発明者らに、上記趣旨に鑑み、低毒性で制癌活性１ｒ
有する物質を励・植物、微生物界の広い生物範囲から探
索を行った結果、オタ不ニンジンの根又はそのカルスよ
り抽出された新規なジイン化合物が、優ｎた制癌活性を
有し、且つ毒性も極めて少ないことを既に見い出した（
０開昭６２−２θ７２３ψ号公報〕。

〈発明が解決しようとする課題〉本発明の目的に、上記オタネニンジン以外のカルスから
、制癌活性を有する新規なツイン化合物を抽出・単離す
ることにある。

また１本発明の他の目的に、上記ジイン化合物を有効成
分として含有する制癌剤を提供することｒＣある。

く蛛題を解決するための手段〉１記目的を達成するために各種天然由来の＠質について
検討を僅ねた結果、アメリカニンジンの有ａ浴剤抽出物
から単離したジイン化合物が制癌作用を呈することを見
い出した。

本発明の新規なジイン化合物ぽ、後述の物理的性質を有
し、アメリカニンジン筐たμ組織培養物から抽出・単耐
さｎる。上記ジイン化合物は１次の一般式を有する化合
物である。

一般式：〔但し１式中、Ｂ：１は水酸基で、Ｒ３とＲ５が一体に
なってオキシ基であるか、またｒｉＲ＋ｒｉ水素原子ｆ
、Ｒ，ｒ！水酸基、Ｒｓはメトキシ基である。〕上記ジ
イン化合物の例としては１次の化合物が挙げらｎる。

以下に、こ九らの化合物の抽出・単離方法の一例を示す
。

アメリカニンジンまたはそのｍ敞培養物をミキサーにて
粉砕後、超音波処理しながら酢酸エチル等の有機浴剤で
抽出する。抽出液を鑵過後、ａ縮し、得られ几油状物を
１例えば、ダイヤイオン（Ｄｉａｌｏｎ）　ＨＰ　−２
０（商品名：三菱化成社製）等を用いて吸着クロマトグ
ラフィーに付す（溶出液は。

例えば混合比を変えた含水メタノール、アセトンを用い
る）。

得ら几た２分画について更にシリカゲルカラムクロマト
グラフィーなどを用いて再分画を行って４つの分画を得
る（Ａ−Ｄ）。次いで分画Ａを。

例えば５ｉｌｉｃａ　４２５１Ｎ　（商品名０日立製作
所製）を用いて高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）で分離精製を行うと化合物（１）の純品を得る。

−万１分画りを同様に分離精製を行うと化合物（ＩＩ）
の純品を得る。かくして得られる化合物〔Ｉ〕。

（ｎ）に、Ｆ記の物理的性質を有する。

（化合物（１）（４１６−へブタデカジイン−９゜１０
−エポキシ−３，８−ジオール）の物理的性質〕（１）
物質の形態：無色油状物質１２１　ＭＳ　ｍ／　ｚ　：　２７６　（Ｍ”）ｔ３１
　”Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ　Ｃ１ｓ、　４００ＭＨｚ、δ）
：０．８８Ｃ３Ｈ，ｔ、　Ｊ＝７．３Ｈｚ）１１．３Ｃ
６Ｈ９ｍ）？１．５１（ＬＨ，ｍ）、　１．６２（ＩＨ
，ｍ）？３．０６（ＩＨ，ｍ）、　３．１５（ＩＨ，ｄ
ｄ、　Ｊ”４．４ｔ７．３Ｈｚ）、　４．３７（ＬＨ，
ｂｒｓ）、　４．９５（ＬＨ。

ｂｒａ）、　５．２７（ｌＨｔ　ｄ＊　Ｊ＝９．８Ｈｚ
）。

５．４８（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝１６．９Ｈｚ）、５．９６（
ＩＨ。

ｄｄｄ、　　Ｊ＝５．１．　１０．３．　１６．９Ｈｚ
　）ｔ４１　”Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣＪｓ、１００ＭＨｚ
、　δ）：１４．１．　２２．６．　２６．５．　２７
．５．　２９．１．　２９．４゜３１．７．　５７．９
．　５８．０．　６０．７．　６３．４．　７０．１゜
７０．２．　７８．’Ｑ、、　　’１Ｂ、５．　１１７
．５．　１３５．７〔化合物〔■〕（４，６−へブタデ
カジイン−１０−メトキシ３，９−ジオール）の物理的
性質〕（１）物質の形態：無色油状物質１２１　ＭＳ　ｍ／ｚ　：　２９２　（Ｍ”）ｔ３１　
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ６ｓ、　４００ＭＨｚ、　Ｊ）：
０．８９（３１（、ｔ、　Ｊ＝７．３Ｈｚ）、　１．３
（６ｆ（、ｍ）？２．５５（２Ｈ，ｍ）、　２．５５（
ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝６．６゜１７．６Ｈｚ）、　２．５
９（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ−＝６．６．１７．６ＨｚＪ、　
３．２５（ＬＨ，ｍ）、　３．４４（３Ｈ，ａ）。

３．７３（ｌ）１．　ｄｄ、　Ｊ＝４．４．５．９Ｈｚ
）、　４．９１（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝５．１出→、　５．
２４（ｌＨ，ｄ、　Ｊ＝１０．３Ｈｚ）、　５．４６（
ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝１６．９Ｈｚ）。

５．９６（ＩＨ，ｄｄｄ、　、Ｔ−５，１，１０，３，
１６，９Ｈｚ）次に１本発明の２イン化合物を有効成分
とする制癌剤について説明する。

本発明の有効成分は、生薬として用いらｎτいるアメリ
カニンジンまたは、その組織培養物のような植物体中に
本米伴在するものから単離された物質であるので１台底
化学物質とは異なり、毒性の心配に極めて少ない。

本発明の制癌剤に、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤ま
たは錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与さ几、非経
口投与する場合に、水浴性懸濁液、油性製剤などの皮下
あるいは静脈注射剤。

点滴剤および固体状または懸濁粘稠液状として持続的な
粘膜吸収が維持できるように生薬のような剤型で投与さ
ＩＬ得る。

本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、および必要に応じて腸溶性製剤とする之め
に医薬的に許容し得る皮膜形成物質、コーティング助剤
等を用いて適宜行うことができ、その具体例を挙げれば
１次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、
界面活性剤、　５１えばアルコール、エステル類、ポリ
エチレングリコール誘導体、ンルピタンの脂肪酸エステ
ル類、硫酸化脂肪アルコール類等の１種またに２柚以上
を添加することができる。

′１之、賦形剤として０例えば蔗糖、乳糖、デンプン、
結晶セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン
酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合
成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、脚酸水累ナトリ
ウム、リン酸水素力′ルシウム、カルボキシメチルセル
ロースカルシウム等のｌ遣箇たけ２種以上を組合せて添
加することができる。

滑沢剤としては１例えばステアリン酸マグネシウム、メ
ルク、硬化油等を１種またに２種以上添加することがで
き、また矯味剤および矯臭剤として１食塩、？ツカリン
、糖、マンニント、オレンジ油、カンゾウエキス、クエ
ン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等
の甘味剤、香料、ｗ色別、保存料等を含有させてもよい
。

懸濁剤６潤滑剤の如き佐剤としては０例えばココナツツ
油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また皮膜形成物質としては、セルロース、ｍ類等の戻水
化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース、またアクリ
ル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル類等のポリビニ
ル誘導体としてアクリル酸メチル・メタクリル酸共重合
体、メタクリル酸メチル・メタクリル酸共重合体が挙げ
られる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し１通
常使用されるコーティング助剤０例えば可塑剤の他、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
たり、コーティング操作をより容易ならしめることがで
きる。なお。

有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロカプセル化し
てから賦形剤等を混合した剤型としても良い。

次に代表的な剤型における配合比は下記の通りである。

有効成分　　　　　　　　　　　　　　　特に好ましい
範囲抽ｌｆｌ物のとき　　１〜９０　　重量％　　　　
３〜５ｏ　　欧菫％ジ１：／化合物　０．１〜９ｏ　　
取量％　　　０．３〜１５　　重音％のとき賦形剤１０〜９９．８　重量％　　８５〜９９．４　重
ｔ％滑沢剤０〜５０重音％　０〜２０　Ｎｆ％界面活性
剤　０〜５０　　重量％　　　０〜２０　　重量％皮膜
形吠物′Ｅ　ｏ、１〜５０　　ｌ！ｔ％　　　０．３〜
２０　　　Ｋ雪％特に好ましい賦形剤に、乳糖、結晶セ
ルロース。

カルボキシメチルセルロースカルシウムである。

また、投与１ｔｔｒｉ対象腫３ｓを有効に治療するに充
分な童であり、腫瘍の氷状、投与経路、剤型などによっ
て左右さ几るが、一般に抽出物では経口投与の場合、大
人でｒ１１日当り、約０．０１〜ｌ　Ｏ、！ｉ／１ｋｇ
体１！（小人では０．０１〜６ｇ／ゆ体重〕範囲で、そ
の上限は好ましくは約５１／に９の体重、さらに好まし
くは１ｇ／ゆ体重程度であり、非経口投与の場合。

その上限はｌＩＺ〜体賑程度であり、好ましくは０．５
９／に９体重、さらに好ましくは０．１．９／ｋ１１体
重が適当である。またジイン化合物でに、経口投与の場
合、大人では１日当たり、約０．０１〜４０（Ｈ＋＋ｇ
／に９体重（小人でｎ　０．０１〜６　ｔｌ　ｍｇ　／
ｋｇ体重）範囲で、その上限は好’Ｅ　Ｌ　（ｒｉ５０
ｍ９７に９体重、さらに好ましくは１０■／に９体重程
度であり、非経口投与の場合。

その上＠にｌＯ■／ゆ体重、好ましくに５〜／ゆ体重、
さらに好ましくは１０１僧体重が適当である。

次に１本発明の抽出物および化合物の制癌活性を確認し
た制癌性試験性について述べる。

１５％の子牛血清全含有するＭＥＭ培地にツスイ製）に
、マウス白血球癌化細胞（Ｌ＝１２１＋ｊ）を接種して
培養し、細胞数が約１０　Ｘ　ｌ　Ｏ’　ｃｅｌｌｓ／
ｍ　Ｋなった時点で上記培地で５倍に希釈（２０Ｘ　１
０’　ｃｅｌｌｓ／’）Ｌ、１ｍｊづつバイアルビンに
分注する。次いで、各濃度の供試化合物のサンプルのメ
タノールまたはアセトン浴液を力口元。ゴム栓をして３
７℃で培養し約３日後にトリパンブルーにて染色後。

生細胞数を計測する。供試細胞増殖の抑制率は。

〈実施例〉以下に本発明を実施例、製剤例および試験例によって具
体的Ｋｌ明する。

実施例アメリカニンジンの乾燥物（１，２ｋｌ？）をミキサー
にて粉砕後、超音ｅ、をかけながら酢酸エチルにて３回
抽出する。次いで抽出物を濾過後、減圧下。

低温にて濃縮し、得られた油状物をカラムクロマトグラ
フィー（カラムニアφＸ　６（１１！、　Ｄｉａｉｏｎ
　ＨＰ　−２０、浴出液メタノール：水：＝Ｑ　：　１
００〜１００：Ｏ。

アセトン）に付して、８分画（各分画２０００＊／）に
分け、そｒＬぞ九分画について、＃Ｊ記Ｌ−１２１０細
胞に対する生育阻害活性試験を行った。尚、上記油状物
もＬ−１２１０細胞に対して生育阻害活性を示した。

その結果、メタノール：水：９０：１０及び８０：２０
の分画が極めて強い阻害活性を示した。そこで、更にこ
の分画をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム：３．
５φｘ　６ｏｃ＊、　５ｉｎｓ　、　ヘー？サン：酢醒
エチル＝２：１）で再分画を行い６つの分画（Ａ〜＃細
胞生育阻害活性の強いｌＩ３画Ｃ及びＢを次のように処
理し之。

そこで、まずメタノール：水＝２０：８０の分画につい
て、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラＡ　；
　３，５　Ｘ　６０ｃＩｎ、５ｔ（ｈ　、　浴出液へ＋
　２　ンー酢酸エチル＝１＝１）で再分画を行い３分画
（Ａ〜Ｃ）＆て分けた（各分画１５０ａｄ）。このうち
、Ｌ−１２１Ｏ細胞に対する成育阻害活性の強いＡ分画
を高速液体りｐマドグラフィー（カラム：８Ｘ３０ｃ１
ｎ。

５ｉｌｉｅａ　４２５１Ｎ　（日立）、射出社ヘキ丈ン
ー酢酸エチル＝２＝１．流速２Ｍ／分つに付【−６保持
時ｎセ３５分のピークを分取し、濃、催してン１ン化合
物（１）　７．３　ｍｙ　’ｃ　＃た、次いで、水：メタノール＝２（１：８０　の分ＷＪＪｖ
こついて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラ
ム：　３．５　ｘ　６０ｃＩｆｔ、５ｉＯｚ　、　ｆｉ
ｌｌ出故ヘキサン−酢酸エチル−２：ｌ）で再分画を行
い３分画（Ｄ−Ｆ）に分けた（各分画１５０ｄ）。Ｌ　
−１２１０細胞に対する成育阻害活性の強いＤ分画につ
いて、高速液体クロマトグラフィー（カラム：　８　Ｘ
　３（１ｍ−５ｆｌｉｅ＆４２５１　Ｎ　（日立）、浴
出液ヘキサンー酢酸エチル＝３　：　ｌ　、流速２ｄ／
分）を行い、保持時間２７分のピークを分取し、濃縮し
てジイン化合物（Ｉｆ）９１■を得た。

製剤例１（注射・点滴剤）化合物（１）又は〔■〕２！Ｒｇを含有するように粉末
ぶどう糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し。

密封した上、窒累、ヘリウム等の不活性ガスを封入して
冷暗所に保存した。ザ用罰にエタノールに浴解し、　０
．８５％生理的食塩水１００ｄを添加して静脈内注射剤
とし、１日、１０〜１００１を近状に応じて静脈内注射
又は点滴で投与した。

製剤例２（腸溶性カプセル剤）アメリカニンジンの酢酸エチル抽出物５０．！ｉ’、　
乳糖２４．６９及ヒヒドロキシグロビルセルロース０．
４ｇを各々とり、よく混合した後、常法に従って粒状Ｖ
Ｃ成形し、これをよく乾燥して篩別してビン。

ヒートシール包装などに適した顆粒剤を製造した。

次に、酢酸フタル酸セルロース５ｇ及びヒドロキジプロ
ピルセルロースフタレート５．９’に＋ｌＩＩ［Ｌ−Ｕ
被覆基材となし、前記顆粒を浮遊流動させつつこの基材
を被覆して腸爵性の顆粒剤とした。この組数物をカプセ
ルに充填して腸浴性カプセル製剤１００個を製造した。

試験例アメリカニンジンの酢酸エチル抽出物及び化合物（１）
、（■〕を用い、前記試験法によりマウス白血球癌化細
胞Ｌ−１２１０の増殖抑制ＷＡ（％）を算出した。その
結果を第１表に示す。

（以下余白）第　　１　　表コントロールの生細胞数ｔｉｔ　１００ＸＩＯ’　１１
１であった。

〈発明の効果〉以上のように、ウコギ科に属するアメリカニンジン′ま
たはその組絨培養物からの抽出物は優れた制癌活性を示
す。また、その分画体であるジイン化合物は新規な化合
物であり、制癌活性を呈するものである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）▲数式、化学式、表等があります▼ 〔但し、式中、Ｒ＿１は水酸基で、Ｒ＿２とＲ＿３が一
体になつてオキシ基であるか、またはＲ＿１は水素原子
で、Ｒ＿２は水酸基、Ｒ＿３はメトキシ基である。〕で
示されるジイン化合物。
（２）請求項（１）で示されるジイン化合物を有効成分
とする制癌剤。