JPS60120997A - クラビンアルカロイド生産性微生物及びその製造方法 - Google Patents

クラビンアルカロイド生産性微生物及びその製造方法

Info

Publication number
JPS60120997A
JPS60120997A JP59165757A JP16575784A JPS60120997A JP S60120997 A JPS60120997 A JP S60120997A JP 59165757 A JP59165757 A JP 59165757A JP 16575784 A JP16575784 A JP 16575784A JP S60120997 A JPS60120997 A JP S60120997A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
strain
fusiformis
medium
production
alkaloid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP59165757A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS6357035B2 (ja
Inventor
マリア　トリン
ガブリエラ　コルデイク
エバ　ウドバルデイ　ナジイ
ジユジヤンナ　ビダ
エルジエベト　ジヨカ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Richter Gedeon Nyrt
Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Nyrt
Original Assignee
Richter Gedeon Nyrt
Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar RT
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Richter Gedeon Nyrt, Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar RT filed Critical Richter Gedeon Nyrt
Publication of JPS60120997A publication Critical patent/JPS60120997A/ja
Publication of JPS6357035B2 publication Critical patent/JPS6357035B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
    • C12P17/183—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system containing an indolo[4,3-F,G]quinoleine nucleus, e.g. compound containing the lysergic acid nucleus as well as the dimeric ergot nucleus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） この発明は、次の一般式（１）、 （式中、Ｒはメチル基又はヒドロキシメチル基である〕 で表わされるクラビンアルカロイドの微生物学的製造方
法、及びこのアルカロイドを生産するタラヒセプス−７
ジ７　＃　ルミ：ｘ、　（Ｃ１ａｖｌｃｅｐｓ　ｆｕｓ
ｊ　−ｆｏｒｍｌｓ　）変異株Ａ　００２１１の生物学
的に純粋な培養物、並びにこの生物学的に純粋な培養物
を得そして維持する方法に関する。
（従来の技術） 製造される上記アルカロイドの内、エリモクラヒン（ｅ
ｌｙｍｏｃｌａｖｉｎｅ）　（ＦＬ＝ヒドロキシメチル
〕が、興奮効果及び抗パーキンソン効果を有する薬剤と
して、並びにグロラクチン分泌りｔ阻害するものとして
、まず興味深い（Ｂ、Ｂｅｒｄｅ　及び０゜Ｓｃ旧Ｉｄ
　：　Ｅｒｇｏｔｓ　ａｌｋａｌｏｉｄ！ｊａｎｄ　ｒ
ｅｌａｔｅｄｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　；　Ｈａｎｄｂ、　
Ｅｘｐ、Ｐｈａｒｍ、、　４９゜スブリンガー　フェル
ラ−クワベルリン（１９７８）］。
さらに、エリモクラビンはりゼルゴール（Ｉｙｓｅｒ−
ｇｏｌ）合成の可能性ある出発材料であり、そしてニセ
ルゴリン（ｎｉｃｅｒｇｏｌｉｎｅ　）の中間体である
。
アルボフラビン（Ｒ−メチル）はエリモクラビンの＠躯
体である。
クラビセブス菌株は、宿主−寄生生物相互関係において
、ライ麦上で麦角アルカロイドを生合成することができ
ることが知られている。クラピン生産性クラビセブス株
について、これらが死物寄生条件下においても問題のア
ルカロイドを生産することも知られ７）（Ｍ、へｂｅ等
、　Ｊ、Ａｇｒｌｃ。
Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ、（日本）　２５．４５８　（１９５
２））。後者の方法はプラントスクールの製造には使用
されなかったが、骨格の生合成の研究のために適切な基
礎を与えた（　Ｌ、ＣｏＶｌｎｌｎｇ、　Ｃａｎ、　Ｊ
、　Ｍｌｃｒｏｈｉｏｌ。
１２、９１５　（１９６０〕；及びＨｌＧ、　Ｆｌｏｓ
ｓ、　Ｔｅｔｒａ　−ｂｅｄｒｏｎ　５２．８７３　（
１９７６）］。
工業的に使用される第一の方法ばＧ、Ｔ、　Ｂａｎｋｓ
＋等により解決された（　Ｊ、　Ｇｅｎ１Ｍ１ｃｒｏｈ
ｉｏｌ。
８２、３４５　（１９７４）］。この方法において、ク
ラビセプスーフジフォルミスが、ペンニセツムーティボ
イディウムースクレロテウム（Ｐｅｎｎ１９ｅｔｕｍｔ
ｙｐｂｏｉｄｅｕｍ　ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ　）　から
分離され、そして、反復選択によって改良てれ、高収避
株が得られた。この新株はアルボフラビンを生産した。
そして、Ｒｅ　ｈ　ａ　ｃ　ｅ　ｋ等は　クラビセプス
Φプルプレ７　（Ｃ１ａｖｌｃｅｐｓ　ｐｕｒｐｕｒｅ
ａ　）　ｔＤ新変異株を調Ｍしたａｌつの変異株は主と
してアルボフラビンを生産したが、他の２つの株は主と
してエリモクラビンを生産した。しかしながら、エリモ
クラビン生産変異株の両者においてアルカロイドレベル
は発酵ブロス中３００〜６００ｐｆ／−に過ぎなかった
（Ｊ、Ｎａｔ、Ｐｒｏｄ、　４４．２２５　（１９８１
））。
ソ連特許明細悔’Ａ７３５，０１０、及びＰｒ１ｋｌ。
Ｂｉｏｋ、ｆＶ・ｆｉｃｒｏｂｉｏｌ、　１６．５９６
　（１９８１１１）は、６種類ノ異ルアルカロイドを生
産するクラビセブス・フジフォルミスの天然法を開示し
ているが、この合計アルカロイドレベルｉｊ　１２２０
　ｐＬ／ｍｌ　テあり、エリモクラビン部分が７０〜７
５蟹を占める。
Ｓ、Ｉ（Ａｍｂｉｋｅｔ　等（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ、９
．１９５３−５８　（１９７０））は、タラビセブス・
プルプレア型のクラビン生産株がチトクロームＰ−４５
０を含有シ、そのレベルが７エノバルビトンによって増
加し、同時にこの菌株によって生産されるアルカロイド
レベルが上昇することを見出し念。
（発明が解決しようとする問題点） 発明者等は、クラビンアルカロイド類、主としてエリモ
クラビンを、高収量で、場合によってはエリゴクラビン
から容易に分離することができるアルカロイド類と一緒
に、生産することができる菌株を得ることを目的とする
。
（問題点を解決するための手段〕 グリセリン−ペプトン培地上で主たるアルカロイドとし
てアグロクラビンを生産しそして少いアルカロイドとし
てエリモクラビンを生産するメイブのクラビセブスーフ
ジ７オルミスの菌株を用いてモデル実験が行われた（　
Ａ、Ｔｏｎｏｉｏ　及びＥ。
Ｕｄｖａｒｄｙ−Ｎａｇｙ、　ＡｃｔａｏＭｌｃｒｏｂ
ｉｏｌ、Ａｃａｄ。
Ｓｃ１．Ｈｕｎｇ、　１５．２９　（１９６Ｂ））　、
この菌株は、７ｑｙ７年５月２日ｐｃ、ナシ冒ナルコレ
クシＢンオブ　ミクロオーガニスムク。ナシ、ナルイン
スティテーート　フォアパブリックヘルス（Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｌｃｒｏｏｒ
ｇａｎｌｓｍｓ。
Ｎａｔｌｏｎａｌ　Ｉｒ＋５ｔｌｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｐ
ｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　）叶ルスツァゴス　ケツエ
ゲスツエギュキーインテンエツ、　ブタペスト（Ｏｒｓ
ｚａｇｏｓＫｏｚｅｇｅｓｚ１！ｃｇｕｇｙｌＩｎｔｅ
ｎｚｅｔ、　Ｂｕｄａｐｅ９ｔ　）に、４００１６４と
して寄託１れｆｃｏ　この研究により、このモデル菌株
が交互酸化酵素すなわちチトクロームＰ−４５０を含有
し、そしてパルピッレート添加物がチトクロームＰ−４
５０含量及び全アルカロイド生産の両者を刺激すること
が示された。
扁００１６４株をパルピッレートの存在下で増殖せしめ
る場合ＶＣ％コロニーの形態及び色素生成が兄妹のそれ
と一実質上異ってくることがＱ　（Ｂされた。反復選択
の後、これらの新しい特徴は安定化し、そしてバルビル
−トの非存在下においても新しく選択された菌株の特徴
となった。
新変真珠の生化学的性質は親株、すなわち扁００１．５
４株のそれと異るａ￥ｆｒ変異株の場合、増殖速度及び
ポリサッカライド生成能は弱いが、アルカロイド及び色
素生成能はより強ｗｌｌ　＜べきことに、全アルカロイ
ドレベル中エリモクラビｒン〃；支配的であり、これに
対して親株は主としてアグロクラビンを生産した。
この新規な菌株は、１９８１年１０月１５日に、ナシ１
ナルコレクシ冒ンオブミクＩ：Ｉメーガニスムス、ナシ
四ナルインスティテーート　フォアパブリックへｙｂｙ
、　（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎｏｆ　
Ｍｒｃｒｏｏｒｇａｎ　１５ｍ１１＋、　Ｎａｔｊｏｎ
ａｌ　ＩｎＩＩｔｉｔｕｔｅｆｏｒ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈ
ｅａｌｔｈ　（オ）ｌ−スフ　７ゴスケツエゲスツエギ
ーギイーインテンエト、ブタペスト（Ｏｒｓｚａｇｏｓ
　Ｋｏｚｅｇｅｃ＋ｚｓ＋４ｕｇｙｉ　Ｉｎｔｅｚｅｔ
。
Ｂｕｄａｐｅ９ｔ　）に、Ａ［］０２１１として寄託さ
れた。
従って、この発明は、Ｒがメチル又はヒドロキシメチル
である一般式（Ｉ）のクラビンアルカロイドの新規な微
生物学的製造方法に関し、この方法は、炭素源、窒素源
及び鉱物塩類、並びに場合によっては他の添加物を含ん
で成る液体培地に、アルカロイド生産菌株としてカルビ
セプス嗜フジフォルミス変異株（寄託番号４００２１１
）を好気的条件下で培養し、そして生成したアルカロイ
ドを採取することを特徴とする。
この発明の他の対象は、一般式（１）のクラビンアルカ
ロイドを発酵生産することができるクラビセプス・フジ
フォルミス変異株４００２１１の生物学的に純粋な培養
物である。
この発明はさらにクラビセブスやフジフォルミス変異株
７１ＬＯＯ２１１の生物学的に純粋な培養物の製造方法
ＶｃｒＪＡシ、この方法は、クラビセブス・フジフォル
ミス屋００１６４株を、炭素源、窒素源、鉱物塩類及び
寒天、並びにチトクロームＰ−４５０の生成を促進する
添加物を含有する固体培地中に培養し、そして次に新菌
株４００２１１を選択的に分離することを特徴とする。
新菌株はチトクロームＰ−４５０の生成を促進する添加
物の存在下で得られる。この添加物はパルビンレート型
のものであり、そして１〜１０ｍモル／を発酵プロスの
濃度で適用される。培養物を２０℃〜２８℃にて７〜２
１日間インキ−ベートし、そして親株コロニーから容易
に区別することができる新株の紫色の平らな外部に拡が
ったコロニーを選択し、場合によってはバルビンレート
の存在下又は非存在下で選択を繰り返し、そして８５９
ど以上のエリモクラビンを生産する新開真珠を分離する
。
この発明知従えば、親株４００１６４は寒天で固化した
培地に増殖する。
親株の増殖に適する培地は次の組成を有する。
培地＾ シェークロース　１００．ＯＰ Ｌ−アスパラギン　Ｔｏ、Ｏｆ 硝酸カルシウム　１．Ｏｆ 燐酸−カリウム　Ｑ、２５　ｆ 硫酸マグネシウム　（１１，２５ｆ 塩化カリウム　０．１２５ｆ ｌｊ［第一鉄　０．［１３３ｒ 硫酸亜鉛　Ｑ、０２７　ｆ Ｌ−システィン塙酸塩　α０１０を 酵母エキストラクト（ディフコ）　（Ｌ１００ｒ寒天（
ディフコ）　３０．Ｏｆ 以下余白 上記の成分の溶液のｐＨｔ水酸水酸イトナトリウムり５
，２にＷ＠整し、この液を水で１０００がｅに稀釈し、
そして次に１１０℃にて３０分間殺菌する。
冷却後、培地は固化する。
培地Ｂ 培地ＡＩＣついて記載し六方法により、ポテト−グルコ
ース寒天（ディフコ）３９Ｆから１０００−の培地を調
製する。
培地Ｃ シェークロース　１００．０　ｆ コハク酸　ｉｏ、ｏ　ｙ 硝酸カルシウム　１，０２ 硝酸アンモニウム　１．Ｏｆ 燐酸−カリウム　０．２５９ 硫酸マグネシウム　０．２５５’ 塩化カリウム　０．１２５Ｆ 硫酸第一鉄　０．００９　Ｆ 硫酸亜鉛　０５００３ｆ 寒天（ディフコ）　１．Ｏｆ 上記の混合物のｐＨを水酸化アンモニウムにより５．５
〜５．６に調整し、そして次に培地Ａについて記載した
のと同様にして１ｔの培地？：調製する。
培地Ｄ グリセリン　１００ｔ ペプトン（ディ７コ〕２０ｆ 寒天〔ディフコ〕３０２ 上記の成分を水で１０００艷に稀釈し、溶液のｐ）（ｔ
６．ｓ　〜６．８ＶＣ調整し、次にコノ１ｆｌＷ？１１
１１０℃にて３０分間殺菌する。
培養は、上記の培地のいずれかにおいて、無菌的好気的
条件下において２０℃〜２８℃にて、チトクロームＰ−
４５０の生成全促進する添加物。
好ましくはパルピッレート類の存在下で、実施する。パ
ルビンレート型の添加物トして、Ｎ−フェニルバルビン
レート、［Ｆｌｌｊはフェノバルビタール又はメチルフ
ェノバルビタールを挙げることができる。培養ｆｒニア
〜２４日間行い、そして新歯株のコロニーを分離する。
新菌株は寒天スラント上に、又は凍結乾燥物の形で維持
することができる。
新菌株を親株から区別する主な形態学的及び生化学的特
徴を次表に示す。
以下余白 上記の新菌株ＡＯＯ２１１は、次のようにしてクラビン
アルカロイドの製造のために使用することができる。
発酵法において、炭素源、窒素源、鉱物塩類。
及び場合によってはその他の添加物を含廂する適当な液
体培地を使用する。
アルカロイド生産発酵においては特に次の培地組成を用
いる。
培地Ｅ マンニトール　４０．Ｏｆ／ｌ コハク酸　１０．Ｏｆ／ｌ コーンスチープリ力−２，ｏｙ／を 燐酸−カリウム　１．Ｏｆ／を 硫酸マグネシウム　０，５ｆ／を 上記成分の浴液のｐＨを水酸化アンモニウムにより５２
〜５．３に調整する。
培地ｌ゛ シュークロース　５０．Ｏｆ／４ つぶしたポテト　１０．Ｏｆ／を 硝酸アンモニウム　１．　ｏ　７　を 燐酸−カリウム　０．２５ｆ／を 硫酸マグネシウム　Ｑ、　２５　ｆ／を上記成分の溶液
のｐＨを水酸化アンモニウムにより５．４〜５５に調整
する。
培地Ｇ ンルビトール　６０．Ｏｆ／ｌ コハク酸　５６．０’ｆ／を 燐酸−カリウム　０．２５ｒ／を 硫酸マグネシウム　０ｉＯｒ／を 硫酸第一鉄　０，００９９／を 硫酸亜鉛　ｏ、０ｏｓｅ／を 上記成分の溶液のｐＨを水酸化アンモニウムにより５４
４〜５．５に調整する。
上記の組成物はいずれも５０〜６０℃において水に溶解
し、そして１１０℃にて３０分間殺菌する。
上記の培地ＪＰ、及びＧ、並びに寒天を加えないで調製
した培地Ｃ９及びＤはアルカロイドの製造のために適当
である。発酵は、無菌的、好気的条件下で、深部培養に
より、２０℃〜２８℃にて１０〜２５日間、４．５〜６
．０のｐＨ範囲において行う。
次に、例によりこの発明をさらに詳細に説明する。但し
、これによりこの発明の範囲を限定するものではない。
例　１ 培地Ａ上に増殖したクラビセブス・フジフォルミス変異
株Ａ　００２１１の１４日目のコロー−ヲ５　ｍｅの生
理的塩水溶液を用いて寒天表面から取り出した。得られ
た懸濁液をホモジナイズし、そして１　ｍｌの種醒を、
寒天を含まない１００づの培地Ｃを収容した５００−の
エルレンマイヤーフラスコに移した。この培養物を、ロ
ータリーシェーカー　（２４Ｏｒｐｍ　、　２副振幅）
上で２４℃にて７時間インギーベートした。
４　ｍｌの得られた培養物を、１００ｍ／の前殺醒した
培地Ｃを収容した５　００　＋＋＋／のエルレンマイヤ
ーフラスコに移した。この培養物を上記の条件で１２日
間増殖せしめた。５日目及び５日目に、殺菌した１０％
酵母エキストラクト水溶液ｌ　ｒｎｌずつを培地に加え
た。
１２日目の培地中乾燥醒体祉は１８　？／ｌであった。
ベージ−色〜紫色の繭糸を培地から分離ｌ〜た。ｐ液中
の全アルカロイド含量は、エリモクラビン標準を用いる
ｖａｎ　Ｕｒｋ試薬によりば、１３００μｆ’／　ｍｌ
であった。培地中のエリモクラビン及びアなゴクラビン
を次のようにして測定し／こ。
ホモジナイズした２０ｍ７！の培養物を、ｐｌ（９にお
いて、クロロホルム／インプロパツール（４：１）混合
物４０ｒｎ！、により抽出した。１０ｍ１の有機相を減
圧下で蒸発乾燥した。残渣をクロロホルム／メタノール
ｉ：１）混合物０．５　ｔｈ／中に溶解した。
２０　ｐｔの溶液を、ＤＣＡｌｕｆｏｌｉｎ　Ｋｉｅｓ
ｅ１ｇｅ１６０Ｆ２５４（メルク　Ａｒｔ、５５５４）
吸着材、及びクロロホルム／エタノール（４：１）混合
ｉ　開削を用いる薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に
付しだ。スポットをＵＶ光により２５４ｎｍにて検出し
た。エリモクラビン（Ｒ，ｆ、＝０．２０）　及びアル
ボフラピン（ｎｒ＝ｏ、３ａ）　を、メタノール／酒石
酸（１：１）混合物中２８３ｎｍ　における分光光度法
によシ測定した。エリモクラビン含量が１１５０μ？／
ｍｅ　であシ２そしてアグロクラビンレベル１は５５７
ＪＰ／屑ｌであった。
例２ クラビセプス・フジフォルミス変異株Ａ　００２１１の
凍結乾燥コロニーを２　ｍｌの生理的塩溶液に懸濁した
。ホモジナイズした懸濁液を、１００πＦの前殺菌した
培地Ｅを収容した５０１１ｍｌ！のエルレンマイヤーフ
ラスコに移しだ。この培養物を例１に記載したのと同様
の条件下で７日間増殖せしめた。
２　Ｘ　２　ｍｅの得られた培養物を、１００ｍ／の培
地（］を収容ｆる５　００　ｍｌのエルシンマイヤーフ
ラスコ２本に移した。培養物を２４℃にて５日間振とり
（７ながら増殖せしめた。得られた種菌を、５ｔの殺菌
培地Ｇを収容した１０ｔのガラス製ファーメンタ−に移
した。この培養物を、通気（０，５１７１７分）及び攪
拌（４３０れｐ、ｍ、）のもとて２４℃にて１２時間増
殖せしめた。必要に応じて、０．５ｆｎ！、／ｌの殺菌
した５ｔｒｕｋｔｏｌ　ＳＢ　２０２０　消泡剤を加え
た。
発酵の終点において、培養液は１６　ｆ／ｌの乾燥菌体
を含有していた。例１に記載した方法により測定した全
アルカロイド含量は１５　Ｂ　Ｏｐ？／ｍｌであり、こ
の内エリモクラビンが１４３５μｆ／ｍｌ。
アグロクラビンが９ＤＩＩＰ／ｍ／であった。
例６ クラビセブス・フジフォルミス変異株４００２１１の凍
結乾燥コロニーを２　ｍｌの生理的塩溶液に懸濁し１、
そしてホモジナイズした懸濁液を培地Ｂ上（で接種した
。培養物を２４℃、暗所にて１４日間インキ−ベート１
−７だ。こうして得られた種母培養物を表面から取り出
し、そして５ｍ１！の生理的塩溶液と共にホモジナイズ
した。２　×２１ｎｌのホモジナイズした培養物を１０
０ｍ７！の培地Ｆを収容した５００ｍ１のエルシンマイ
ヤーフラスコ２本に移シタ。この培養物を２４℃にて５
日間振とうし、そ１．て次に、５ノの殺菌シ、ン午培地
Ｃを収容（また１Ｄｔの〃ラス製ファーメンターに移し
だ１゜ 培養物を、２４℃にて、通気（０，５ｔ／ｌ／分）及び
攪拌（４３０ｒ、ｐｏｍ、　）のもとて２日間増殖仕し
めた。こうして得られた種イけを、２０　ｙｙｔの塩化
すｌ−ＩＪウムを補光ｌ、た殺菌１−、た培地Ｃ１１０
ｔを収容した１６０ｔのステンレス鋼発酵槽に移した。
この培養物を２４℃にて、通気（ｏ、４ｔｙｔ／分）及
び攪拌（２００ｒ、　ｐ、ｍ、）のも、１：で１２日間
培養１−た。発酵中に、殺菌し〕た５ｔｒｕｋｔｏｌ　
８Ｂいた。−また１８１５μｙ／、ｎｅの全アルカロイ
ド全Ｎ有し、この内エリモクラピンが１６６０μ？／ｅ
であり、そ（７てアルボフラビンが２４０　ｌｉ？、／
　ｍ！であった。培養液を濾過し、そ［−５て謔液中の
］−リモクラビン及びアルボフラビンをＨＰ　Ｌ、　Ｃ
（吸着剤：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　１０　Ｃ１Ｂ　？　５
Ａｆｔ剤：アセｌ−＝　＋−リル／　０．　ＯＩ　Ｍ炭
酸アンモニウム水溶液＝３：コ；ＴＪ　Ｖ　検出　２８
　［１ｎｍ　）で測５ｆＬ、だ、３エリモクラビンは８
．７分間の保持時間で現われ、アグロクラビンのそれは
３２．０分間であ−っだ。
【図面の簡単な説明】
第１図は１ｏ０１６４株のコロニーの形態を示し、そし
て第２図は７４５００２１１株のコロニーの（ｊ、２　
ＦＡＴＡを示し、いずれも微生物の形態を表わす図面に
代る写真である。 特許出願人 リヒター　ゲデオン　ベジェセｊイ ジャーノＬ　アール、　ブー。 ４！ＦＷ’Ｆ　Ｉｔ　ｊ　、’触代工」人うｆセ１！十
ｖ　木　朗 弁理士　西　舘　和　之 弁理士　福　本　積 弁理士　山　口　昭　之 升埋土、西山雅也 第１頁の続き ０発　明　者　ジュジャンナ　ビダ　ハンガリー国。 ア、２７ ０発　明　者　エルジエベト　ジョ力　ハンガリー国。 ８／ア ブダペスト　１１１８．エレパタク　ウララブダペスト
　１１４１．ピザフナ　ウッツア。 手続補正書（方式） ％式％ １、　事件の表示　“ 昭和５９年特許願第１６５７５’７号 ２、　発明の名称 クラビンアルカロイドの製造方法 ３、　補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏名　リヒター　ゲデオン　ベジェセティジャール　ア
ール、チー。 ４、代理人 ５　補正命令の１］付 昭和５９年１１月２７日（発送日） ６、補正の対象 図面に代わる写真 ７、補正の内容 図面に代わる写真（内容に変更なし） ８、添付書類の目録 図面に代わる写真　１通

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、　次の一般式（１） （式中％　Ｒはメチル基又はヒドロキシメチル基である
    ） で表わされるクラビンアルカロイドの微生物学的製造方
    法であって、炭素源、窒素源、鉱物塩類及び場合によっ
    ては他の添加物を含んで成る液体培地中で、アルカロイ
    ド生産菌としてタラビセブス書フジフォルミス（Ｃｌａ
    ｖｉｃｅｐｇｆｕｓｌｆｏｒｍｉｓ　）　ノ変異株（寄
    託番号Ａ　００２１１）を培養し、そしてアルカロイド
    を採取するごどを特徴とする方法。 ２、発酵を２０℃〜２８℃（Ｄｍｅ、４．２〜＆　０の
    ｐＨ範囲において行う特許請求の範囲第１項記載の方法
    。 ３、　次の一般式（１） （式中、Ｒはメチル基又はヒドロキシメチル基である〕 で表わされるクラビンアルカロイドを生産するととがで
    きるタラビセブス・フジフォルミス（Ｃ１ａｖｉｃｅｐ
    ｓ　ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ　）変異株４００２１１の生
    物学的に純粋な培養物。 ４、　クラビセプスーフジフォルミス（Ｃｌａｖｉｃｅ
    ｐｓｆｕｓｌｆｏｒｍｉｓ　）　ｆ真珠Ａ　００２１１
    の生物学的に純粋な培養物の製造方法であって、クラビ
    セブス・フジフォルミス（Ｃｌａｖｌｃｅｐｇｆｕｓｌ
    ｆｏｒｍｌｓ＋　）　４００１６４株を、炭素源、窒素
    源、鉱物塩類及び寒天、並びにチトクロームＰ−４５０
    の生成を促進する添加物を含有する固体培地に培養し、
    そして選択によって新菌株４００２１１を分離すること
    を特徴とする方法。 ５、ｆトクｏ−ムＰ−４５０の生成を促進する添加物が
    、１〜１０ｍモル／１１−発酵プロスの量で使用される
    パルピッレート類である特許請求の範囲第４項記載の方
    法。
JP59165757A 1983-08-10 1984-08-09 クラビンアルカロイド生産性微生物及びその製造方法 Granted JPS60120997A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU2251/2817/83 1983-08-10
HU832817A HU190141B (en) 1983-08-10 1983-08-10 New process for production of clavin-type rye-smut alcaloids

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS60120997A true JPS60120997A (ja) 1985-06-28
JPS6357035B2 JPS6357035B2 (ja) 1988-11-10

Family

ID=10961237

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59165757A Granted JPS60120997A (ja) 1983-08-10 1984-08-09 クラビンアルカロイド生産性微生物及びその製造方法
JP63045978A Granted JPS63313593A (ja) 1983-08-10 1988-03-01 クラビンアルカロイドの製造方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63045978A Granted JPS63313593A (ja) 1983-08-10 1988-03-01 クラビンアルカロイドの製造方法

Country Status (13)

Country Link
US (1) US4618581A (ja)
JP (2) JPS60120997A (ja)
AT (1) AT383828B (ja)
BE (1) BE900294A (ja)
CH (1) CH664758A5 (ja)
CS (1) CS248719B2 (ja)
DE (1) DE3429573A1 (ja)
ES (1) ES8604306A1 (ja)
FR (1) FR2550549B1 (ja)
GB (1) GB2148278B (ja)
HU (1) HU190141B (ja)
NL (1) NL8402466A (ja)
PT (1) PT79051B (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02250747A (ja) * 1989-03-24 1990-10-08 Seiro Japan:Kk Ｃｎｃタッピング・ドリリング・ミィリングマシン
CA2093422C (en) * 1990-10-05 2001-04-03 DETERGENT COMPOSITIONS CONTAINING LOW CBH I CONTENT CELLULASE COMPOSITIONS
WO2003080059A1 (en) * 2002-03-25 2003-10-02 Council Of Scientific And Industrial Research Antibiotic pharmaceutical composition with lysergol as bio-enhancer and method of treatment

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE975919C (de) * 1951-11-02 1963-03-21 Takeda Pharmaceutical Ind Verfahren zur Gewinnung eines Mutterkornalkaloidgemisches
CH444175A (de) * 1964-05-27 1967-09-30 Sandoz Ag Verfahren zur Isolierung von Ergolen-Carbonsäuren
HU164957B (ja) * 1971-02-19 1974-05-28
US3884762A (en) * 1972-04-21 1975-05-20 Richger Gedeon Vegyeszeti Gyar Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids
GB1584464A (en) * 1977-04-19 1981-02-11 Farmaceutici Italia Ergot alkaloids
JPS6234061U (ja) * 1985-08-15 1987-02-28
JPS6263775A (ja) * 1985-09-12 1987-03-20 清水建設株式会社 免震ダンパ−

Also Published As

Publication number Publication date
ES535102A0 (es) 1986-01-16
AT383828B (de) 1987-08-25
CH664758A5 (de) 1988-03-31
HU190141B (en) 1986-08-28
FR2550549B1 (fr) 1988-03-18
PT79051B (en) 1986-08-12
DE3429573A1 (de) 1985-02-28
JPS63313593A (ja) 1988-12-21
HUT35011A (en) 1985-05-28
US4618581A (en) 1986-10-21
JPS6357035B2 (ja) 1988-11-10
JPH0159877B2 (ja) 1989-12-20
ES8604306A1 (es) 1986-01-16
GB2148278B (en) 1986-11-26
BE900294A (fr) 1985-02-04
ATA258284A (de) 1987-01-15
CS248719B2 (en) 1987-02-12
FR2550549A1 (fr) 1985-02-15
PT79051A (en) 1984-09-01
NL8402466A (nl) 1985-03-01
GB2148278A (en) 1985-05-30
GB8420369D0 (en) 1984-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH0789946B2 (ja) 微生物によるｌ−アスコルビン酸の製造法
WO2007136824A1 (en) High-yield bacitracin-producing microorganism
KR100198039B1 (ko) 발효에 의한 l-글루탐산의 제조방법
JPS60114191A (ja) 水溶液中のｓ‐トリアジン誘導体の分解方法
CA1314012C (en) Process for the preparation of 2-arylpropionic acids
JPS58155086A (ja) シユ−ドモナス属微生物及び該微生物を使用する水溶液の浄化方法
JPS60120997A (ja) クラビンアルカロイド生産性微生物及びその製造方法
TWI627278B (zh) 生產l-組胺酸之麩胺酸棒狀桿菌變異株與使用其生產l-組胺酸之方法
JPH0564597A (ja) 発酵法によるリボフラビンの製造法
JP3193412B2 (ja) ヒドロキシル化した複素環式化合物を製造するための微生物学的方法
CZ27293A3 (en) Microbiological process of nitrogenous heterocyclic carboxylic acids
JPH03198785A (ja) Ｌ・アルファ・アミノ酸の製造方法
JP3570741B2 (ja) アスタキサンチンの製造法
JPH05328987A (ja) 芳香族複素環式ヒドロキシカルボン酸の微生物学的製造方法
JPH0838188A (ja) イノシトールの製造方法およびグルコース代謝拮抗物質耐性株の取得法
JP2518218B2 (ja) 微生物菌体の製造方法
US3061522A (en) Process for the production of demethyltetracyclines
KR100447423B1 (ko) 세팔로스포린c 생산미생물 및 이를 이용한 세팔로스포린c의 제조방법
Shiio et al. Genetically altered repression pattern of purine nucleotide synthesizing enzymes and inosine production in 8-azaguanine resistant mutants of Bacillus subtilis
JPH05328978A (ja) ゼアキサンチンの製造法及びこれに用いる新規フレキシバクター属微生物
JPS6228678B2 (ja)
KR820001221B1 (ko) 하이드록시아미노 하이드로카르본포스폰산 유도체의 제조방법
SU1074902A1 (ru) Способ получени бактериальных амилаз
US3923601A (en) Process for the manufacture of cephalosphorin C
JPS63248393A (ja) 微生物によるｄ−ピペコリン酸の製造法