JPS5978690A - 高度好熱菌に由来する新規プラスミド - Google Patents
高度好熱菌に由来する新規プラスミドInfo
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- JPS5978690A JPS5978690A JP57189525A JP18952582A JPS5978690A JP S5978690 A JPS5978690 A JP S5978690A JP 57189525 A JP57189525 A JP 57189525A JP 18952582 A JP18952582 A JP 18952582A JP S5978690 A JPS5978690 A JP S5978690A
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- plasmid
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- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
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- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高度好熱菌を宿主とする組換えＤＮＡ実験のベ
クターとして有用な新規なプラスミドに関するものであ
り、より詳しくはその分子量が約３．１メガダルトンで
あり、図に示される制限酵素開裂地図により特徴づけら
れる新規なプラスミドに関するものである。
クターとして有用な新規なプラスミドに関するものであ
り、より詳しくはその分子量が約３．１メガダルトンで
あり、図に示される制限酵素開裂地図により特徴づけら
れる新規なプラスミドに関するものである。
従来、組換えＤＮＡ実験は主として大腸菌を宿主とする
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。大腸菌の宿主・ベクター系はほ
ぼ完成されており、また大腸菌以外にも酵母、枯草菌な
どで宿主・ベクター系が開発され応用への道が検討され
つつある。しかし、上記の菌はいずれも生育温度が３０
℃〜３７℃の中温菌である点に問題がある。
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。大腸菌の宿主・ベクター系はほ
ぼ完成されており、また大腸菌以外にも酵母、枯草菌な
どで宿主・ベクター系が開発され応用への道が検討され
つつある。しかし、上記の菌はいずれも生育温度が３０
℃〜３７℃の中温菌である点に問題がある。
一方、好熱性細菌は、生育上限温度が５５℃〜７５℃に
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱性酵素及
び耐熱性生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。従って、好熱
性細菌の育種が重要と考えられるが、その為の一つの、
しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌の宿主・ベク
ター系の開発研究、とりわけ高度好熱菌の宿主・ベクタ
ー系の開発研究は、これまで全く行なわれていない。し
かも、ベクターの開発研究の基礎となるべきプラスミド
ＤＮＡの検索という点についても、高度好熱菌を材料と
した研究は以下の２報しか知られていない。
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱性酵素及
び耐熱性生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。従って、好熱
性細菌の育種が重要と考えられるが、その為の一つの、
しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌の宿主・ベク
ター系の開発研究、とりわけ高度好熱菌の宿主・ベクタ
ー系の開発研究は、これまで全く行なわれていない。し
かも、ベクターの開発研究の基礎となるべきプラスミド
ＤＮＡの検索という点についても、高度好熱菌を材料と
した研究は以下の２報しか知られていない。
（１）高度好熱菌よりの染色体外ＤＮＡの分類ヒシヌマ
、Ｔ．、タナカ、Ｔ．アンド サカグチ、Ｋ．Ｊ．Ｇｅ
ｎ．Ｍｉｃｒｏｂ．、１０４、１９３−１９９（１９７
８）（２）サーマス・サーモフィルスから単離されたプ
ラスミド（ｐＴＴ１）の物理的性状 エベルハード、Ｍ．Ｄ．、バスクエズ、Ｃ．、バレンズ
エラ、Ｐ．、ビキュナ、Ｒ．アンド エデレビック、Ａ
．上記２報に記載されているプラスミドは、いずれもそ
の性質が不明ないわゆるクリプティック・プラスミドで
あり、またそれらの分子量も６メガダルトン程度とやや
大きい。従って、このままの形でベクターとして利用す
る、或いはこれらを素材としてベクター開発を行う事に
は、あまりに困難が大きいものと考えられる。そこで、
本発明者らは、高度好熱菌より、選択マーカー（そのプ
ラスミドが宿主内に存在していることを示すマーカー）
を有し、しかも分子量の小さいプラスミドの検索を行っ
た。その結果ストレプトマイシン耐性を示したサーマス
・フラバスから分子量約３．１メガダルトンのプラスミ
ドを単離する事に成功した。
、Ｔ．、タナカ、Ｔ．アンド サカグチ、Ｋ．Ｊ．Ｇｅ
ｎ．Ｍｉｃｒｏｂ．、１０４、１９３−１９９（１９７
８）（２）サーマス・サーモフィルスから単離されたプ
ラスミド（ｐＴＴ１）の物理的性状 エベルハード、Ｍ．Ｄ．、バスクエズ、Ｃ．、バレンズ
エラ、Ｐ．、ビキュナ、Ｒ．アンド エデレビック、Ａ
．上記２報に記載されているプラスミドは、いずれもそ
の性質が不明ないわゆるクリプティック・プラスミドで
あり、またそれらの分子量も６メガダルトン程度とやや
大きい。従って、このままの形でベクターとして利用す
る、或いはこれらを素材としてベクター開発を行う事に
は、あまりに困難が大きいものと考えられる。そこで、
本発明者らは、高度好熱菌より、選択マーカー（そのプ
ラスミドが宿主内に存在していることを示すマーカー）
を有し、しかも分子量の小さいプラスミドの検索を行っ
た。その結果ストレプトマイシン耐性を示したサーマス
・フラバスから分子量約３．１メガダルトンのプラスミ
ドを単離する事に成功した。
このプラスミドは、前記の制限酵素開裂地図に示される
如く、分子量が小さくしかも数種の制限酵素による切断
点を特異的に有している（以下、本プラスミドをｐＮＨ
Ｓ２１１と略称する）。
如く、分子量が小さくしかも数種の制限酵素による切断
点を特異的に有している（以下、本プラスミドをｐＮＨ
Ｓ２１１と略称する）。
なお、図に示されている制限酵素の略称は次のとおりで
ある。
ある。
Ｘｂａ■はキサントモナス・バドリイ由来の酵素、Ａｃ
ｃ■はアシネトバクター・カルコアセティカス由来の酵
素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニア由来の酵素
、Ｈｉｎｃ■はハエモフィルス・インフルエンザ由来の
酵素を示す。
ｃ■はアシネトバクター・カルコアセティカス由来の酵
素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニア由来の酵素
、Ｈｉｎｃ■はハエモフィルス・インフルエンザ由来の
酵素を示す。
以下、これまでに報告されているサーマス属細菌、即ち
高度好熱菌由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
高度好熱菌由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
表から明らかなように、ｐＮＨＳ２１１は既知のプラス
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
プラスミドＤＮＡがベクターたり得る為には、そのプラ
スミドが宿主内での自律的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須である。しかし、高度好
熱菌の様に、その生育環境が栄養源に乏しくしかも抗生
物質が存在しない様な温泉である菌について考えた場合
、薬剤耐性遺伝子等を有するプラスミドを得る事は容易
ではない。従って、性質が不明のいわゆるクリプティッ
ク・プラスミドに宿主染色体由来のマーカーを賦与する
という方式でベクター開発を行わなければならないであ
ろう。その際にｐＮＨＳ２１１を利用すれば、極めて便
利であるものと考えられる。
スミドが宿主内での自律的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須である。しかし、高度好
熱菌の様に、その生育環境が栄養源に乏しくしかも抗生
物質が存在しない様な温泉である菌について考えた場合
、薬剤耐性遺伝子等を有するプラスミドを得る事は容易
ではない。従って、性質が不明のいわゆるクリプティッ
ク・プラスミドに宿主染色体由来のマーカーを賦与する
という方式でベクター開発を行わなければならないであ
ろう。その際にｐＮＨＳ２１１を利用すれば、極めて便
利であるものと考えられる。
何故ならば、第１にｐＮＨＳ２１１は高度好熱菌で複製
が可能なプラスミドであるからであり、第２には、他の
高度好熱菌由来の既知のクリプティック・プラスミドに
比べて小さい分子量を有するという点から、本プラスミ
ドの必須領域、例えば複製開始点領域、複製に関与する
遺伝子等の解析が、他の分子量より大きなプラスミドよ
りも、容易に行えるという利点を有しているからである
。
が可能なプラスミドであるからであり、第２には、他の
高度好熱菌由来の既知のクリプティック・プラスミドに
比べて小さい分子量を有するという点から、本プラスミ
ドの必須領域、例えば複製開始点領域、複製に関与する
遺伝子等の解析が、他の分子量より大きなプラスミドよ
りも、容易に行えるという利点を有しているからである
。
更にｐＮＨＳ２１１は図からも明らかなように、Ａｃｃ
■、Ｘｂａ■などの制限酵素による開裂部位を特定のし
かも限られた位置に存している。
■、Ｘｂａ■などの制限酵素による開裂部位を特定のし
かも限られた位置に存している。
このことはｐＮＨＳ２１１をベクターとして利用する際
に、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有為に保持でき
るという点で有利である。
に、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有為に保持でき
るという点で有利である。
さて、本プラスミドをベクターとして異種の耐熱性を有
する遺伝子を好熱菌に導入すれば、酵素工業に於ける冷
却コストの節減が達成されよう。
する遺伝子を好熱菌に導入すれば、酵素工業に於ける冷
却コストの節減が達成されよう。
また、耐熱性、耐溶媒性等の性質に優れた好熱菌の酵素
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
ｐＮＨＳ２１１の人手は、本発明者らが温泉水中から新
たに分離した高度好熱菌、サーマス・フラバスＴＳ２１
株をサーマス培地（ディフコ・イーストエキストラクト
０．４％、ポリペプトン（五大栄養）０．８％ＮａＣｌ
０．２％）により対数増殖後期迄増殖させて得た菌体を
、リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌させる事によっ
て達せられる。
たに分離した高度好熱菌、サーマス・フラバスＴＳ２１
株をサーマス培地（ディフコ・イーストエキストラクト
０．４％、ポリペプトン（五大栄養）０．８％ＮａＣｌ
０．２％）により対数増殖後期迄増殖させて得た菌体を
、リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌させる事によっ
て達せられる。
また、サーマス・フラバスＴＳ２１株は好気性のグラム
染色陰性の桿菌で、黄色々素を産生しＤＮＡのＧＣ含量
が約７０％、生育至適温度が７０℃の菌株であるがｐＮ
ＨＳ２１１を保有する点では従来には認められない新規
な微生物である。本菌株はストレプトマイシン耐性株と
して温泉水中より分離されたものである。
染色陰性の桿菌で、黄色々素を産生しＤＮＡのＧＣ含量
が約７０％、生育至適温度が７０℃の菌株であるがｐＮ
ＨＳ２１１を保有する点では従来には認められない新規
な微生物である。本菌株はストレプトマイシン耐性株と
して温泉水中より分離されたものである。
なお、本菌株は、微工研菌寄第６７５２号として寄託さ
れている。
れている。
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述する。
実施例１（菌株のスクリーニング）
静岡県の熱川温泉の温泉水約１ｍｌをサーマス培地（デ
ィフコ・イーストエキストラクト０．４％、ポリペプト
ン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％）１００ｍ
ｌに加え７０℃で約１８時間振盪培養後、ストレプトマ
イシン（２０μｇ／ｍｌ）を含むサーマス寒天平板状で
生育したコロニーの一つからサーマス・フラバスＴＳ２
１株（微工研菌寄第６７５２号）が得られた。
ィフコ・イーストエキストラクト０．４％、ポリペプト
ン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％）１００ｍ
ｌに加え７０℃で約１８時間振盪培養後、ストレプトマ
イシン（２０μｇ／ｍｌ）を含むサーマス寒天平板状で
生育したコロニーの一つからサーマス・フラバスＴＳ２
１株（微工研菌寄第６７５２号）が得られた。
実施例２
プラスミドｐＮＨＳ２１１のサーマス・フラバスＴＳ２
１株からの分離。
１株からの分離。
サーマス・フラバスＴＳ２１株（微工研菌寄第６７５２
号）の生物学的に純粋な培養基から１００ｍｌのサーマ
ス培地（ディフコ・イーストエキストラクト０．４％、
ポリペプトン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％
、ｐＨ７．５）に接種し７０℃で１６〜１８時間振盪培
養する。
号）の生物学的に純粋な培養基から１００ｍｌのサーマ
ス培地（ディフコ・イーストエキストラクト０．４％、
ポリペプトン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％
、ｐＨ７．５）に接種し７０℃で１６〜１８時間振盪培
養する。
この培養液を１ｌのストレプトマイシン２０μｇ／ｍｌ
を含有するサーマス培地に接種し、７０℃で５時間培養
する。菌体を遠心によって集め、ＴＥＳ（２０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭＥＤＴＡ、１００ｍＭＮａＣｌｐ
Ｈ７．５）で洗浄後菌体湿重量４ｇ当り、１０ｍｌの２
５％ショ糖含有ＴＥＳに懸濁する。リゾチーム（１０ｍ
ｇ／ｍｌ）を２ｍｌ、０．２５Ｍ−ＥＤＴＡ（ｐＨ８．
０）４ｍｌを加え、０℃で１０分間静置、続いて３７℃
に１０分間保温する。この細胞混合液に２ｍｌの１０％
ＳＤＳ、５ｍｌの５Ｍ−ＮａＣｌを加え４℃に１５〜１
８時間静置する。これを２８０００ｒｐｍ、１時間の超
遠心によって遠心し、上清を得る。この上清にポリエチ
レングリコール６０００を１０％（ｗ／ｖ）加え、２〜
３時間０℃に静置、２２００ｒｐｍ、２分の遠心で沈澱
を得る。この沈澱を１５ｍｌのＴＥＳに溶解し、ＣｓＣ
ｌ及びエチジウムブロマイドを加えて密度を１．６１〜
１．６２に調整する。この試料を３８０００ｒｐｍで３
０〜４０時間、平衝密度勾配遠心する。生じたプラスミ
ドＤＮＡのバンドを集め、イソアミルアルコールでエチ
ジウムブロマイドを除去した後、ＴＥＮ（２０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、２０ｍＭＮａＣｌ）に
透析する事によってプラスミド溶液が得られる。このプ
ラスミド溶液はｐＮＨＳ２１１と分子量約５．４メガダ
ルトンのｐＮＨＳ２１２及び分子量約１０メガダルトン
のｐＮＨＳ２１３との混合物であるが、このプラスミド
溶液を１．０％の低融点アガロース（ＢＲＥ社製）によ
る電気泳動に供し、生ずるｐＮＨＳ２１１に相当するバ
ンドを切り出してＤＮＡを回収する事によって純粋なｐ
ＮＨＳ２１１が得られる。
を含有するサーマス培地に接種し、７０℃で５時間培養
する。菌体を遠心によって集め、ＴＥＳ（２０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭＥＤＴＡ、１００ｍＭＮａＣｌｐ
Ｈ７．５）で洗浄後菌体湿重量４ｇ当り、１０ｍｌの２
５％ショ糖含有ＴＥＳに懸濁する。リゾチーム（１０ｍ
ｇ／ｍｌ）を２ｍｌ、０．２５Ｍ−ＥＤＴＡ（ｐＨ８．
０）４ｍｌを加え、０℃で１０分間静置、続いて３７℃
に１０分間保温する。この細胞混合液に２ｍｌの１０％
ＳＤＳ、５ｍｌの５Ｍ−ＮａＣｌを加え４℃に１５〜１
８時間静置する。これを２８０００ｒｐｍ、１時間の超
遠心によって遠心し、上清を得る。この上清にポリエチ
レングリコール６０００を１０％（ｗ／ｖ）加え、２〜
３時間０℃に静置、２２００ｒｐｍ、２分の遠心で沈澱
を得る。この沈澱を１５ｍｌのＴＥＳに溶解し、ＣｓＣ
ｌ及びエチジウムブロマイドを加えて密度を１．６１〜
１．６２に調整する。この試料を３８０００ｒｐｍで３
０〜４０時間、平衝密度勾配遠心する。生じたプラスミ
ドＤＮＡのバンドを集め、イソアミルアルコールでエチ
ジウムブロマイドを除去した後、ＴＥＮ（２０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、２０ｍＭＮａＣｌ）に
透析する事によってプラスミド溶液が得られる。このプ
ラスミド溶液はｐＮＨＳ２１１と分子量約５．４メガダ
ルトンのｐＮＨＳ２１２及び分子量約１０メガダルトン
のｐＮＨＳ２１３との混合物であるが、このプラスミド
溶液を１．０％の低融点アガロース（ＢＲＥ社製）によ
る電気泳動に供し、生ずるｐＮＨＳ２１１に相当するバ
ンドを切り出してＤＮＡを回収する事によって純粋なｐ
ＮＨＳ２１１が得られる。
低融点アガロースゲルからのＤＮＡの回収は以下の手順
によった。切り出したゲルスライスを６５℃に保温して
融解、これに２倍量の０．５ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を加え、３７
℃に移し保温する。これに等量の０．１ＭＴｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ緩衝液（ｐＨ８．０）で飽和させたフェノールを加
え混合、遠心（３０００〜５０００ｒｐｍ、５分）後、
上層の水層を分取する。フェノール抽出をもう一度行い
エーテルによってフェノールを水層より除去した後、３
Ｍ酢酸アンモニウム溶液を１／１０容加え、３容のエタ
ノールによりエタノール沈澱を行う。得られた沈澱をＴ
ＥＮに溶解してプラスミド溶液とした。
によった。切り出したゲルスライスを６５℃に保温して
融解、これに２倍量の０．５ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を加え、３７
℃に移し保温する。これに等量の０．１ＭＴｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ緩衝液（ｐＨ８．０）で飽和させたフェノールを加
え混合、遠心（３０００〜５０００ｒｐｍ、５分）後、
上層の水層を分取する。フェノール抽出をもう一度行い
エーテルによってフェノールを水層より除去した後、３
Ｍ酢酸アンモニウム溶液を１／１０容加え、３容のエタ
ノールによりエタノール沈澱を行う。得られた沈澱をＴ
ＥＮに溶解してプラスミド溶液とした。
ｐＮＨＳ２１１の特性決定の手順
ｐＮＨＳ２１１の分子量は、その超らせん構造（ｓｕｐ
ｅｒｃｏｉｌｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）のＤＮＡ及び制
限酵素によって切断された断片のアガロースゲル電気泳
動及びポリアクリルアミド・ゲル電気泳動より得られた
。
ｅｒｃｏｉｌｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）のＤＮＡ及び制
限酵素によって切断された断片のアガロースゲル電気泳
動及びポリアクリルアミド・ゲル電気泳動より得られた
。
この際の分子量マーカーはｐＢＲ３２２ＤＮＡ（２．６
７ｍｄ）、ＣｏｌＥＴＤＮＡ（４．２ｍｄ）及びラムダ
ＤＮＡのＨｉｎｄ■分解断片（１４．６、５．８４、４
．０５、２．６７、１．３０、１．１７、０．３４ｍｄ
）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲ■分解断片（１３．７、４
．７４、３．７３、３．４８、３．０２、２．１３ｍｄ
）、φ×１７４ＤＮＡのＨａｅ■分解断片（０．８３６
、０．６６６、０．５３９、０．３７３、０．１９２、
０．１７４、０．１６７、０．１４５、０．１２０、０
．０７３、０．０４４ｍｄ）を用いた。制限酵素による
切断は、プラスミドＤＮＡ溶液からエタノール沈澱によ
ってＤＮＡを沈澱させ、適当な緩衝液に溶解して行った
。制限酵素は宝酒造及び、ベーリンカー・マンハイム社
よりの市販品を用いた。アガロースゲル電気泳動はシー
ケム社のアガロースを０．５％又は０．７％の濃度で用
い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル長さ１ｃｍ当り１
．５Ｖの定電圧で１５〜１７時間行なった。
７ｍｄ）、ＣｏｌＥＴＤＮＡ（４．２ｍｄ）及びラムダ
ＤＮＡのＨｉｎｄ■分解断片（１４．６、５．８４、４
．０５、２．６７、１．３０、１．１７、０．３４ｍｄ
）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲ■分解断片（１３．７、４
．７４、３．７３、３．４８、３．０２、２．１３ｍｄ
）、φ×１７４ＤＮＡのＨａｅ■分解断片（０．８３６
、０．６６６、０．５３９、０．３７３、０．１９２、
０．１７４、０．１６７、０．１４５、０．１２０、０
．０７３、０．０４４ｍｄ）を用いた。制限酵素による
切断は、プラスミドＤＮＡ溶液からエタノール沈澱によ
ってＤＮＡを沈澱させ、適当な緩衝液に溶解して行った
。制限酵素は宝酒造及び、ベーリンカー・マンハイム社
よりの市販品を用いた。アガロースゲル電気泳動はシー
ケム社のアガロースを０．５％又は０．７％の濃度で用
い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル長さ１ｃｍ当り１
．５Ｖの定電圧で１５〜１７時間行なった。
ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動は、生化学工業社製
のポリアクリルアミド・ビスアクリルアミドを用い、５
％濃度３０：１の架橋度のゲルによって垂直型スラブゲ
ル電気泳動槽により、ゲル長さ１ｃｍあたり１０Ｖの定
電圧によって２〜３時間行った。
のポリアクリルアミド・ビスアクリルアミドを用い、５
％濃度３０：１の架橋度のゲルによって垂直型スラブゲ
ル電気泳動槽により、ゲル長さ１ｃｍあたり１０Ｖの定
電圧によって２〜３時間行った。
高度好熱菌のプラスミドとしては、前記の表に示したと
おりであるがｐＮＨＳ２１１と他のものでは前述のよう
に明らかに異なっており、ｐＮＨＳ２１１は従来認めら
れない新規なプラスミドである。
おりであるがｐＮＨＳ２１１と他のものでは前述のよう
に明らかに異なっており、ｐＮＨＳ２１１は従来認めら
れない新規なプラスミドである。
図面はｐＮＨＳ２１１の制限酵素開裂地図を示し、図中
のＸｂａ■はキサントモナス・バドリイ由来の酵素、Ａ
ｃｃ■はアシネトバクター・カルコアセティカス由来の
酵素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニア由来の酵
素、Ｈｉｎｃ■はハエモフィルス・インフルエンザ由来
の酵素をそれぞれ示している。
のＸｂａ■はキサントモナス・バドリイ由来の酵素、Ａ
ｃｃ■はアシネトバクター・カルコアセティカス由来の
酵素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニア由来の酵
素、Ｈｉｎｃ■はハエモフィルス・インフルエンザ由来
の酵素をそれぞれ示している。
Claims (1)
- 分子量が約３．１メガダルトンであり、図に示される制
限酵素地図で特徴づけられる高度好熱菌由来の新規プラ
スミド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189525A JPS5953837B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 高度好熱菌に由来する新規プラスミド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189525A JPS5953837B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 高度好熱菌に由来する新規プラスミド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5978690A true JPS5978690A (ja) | 1984-05-07 |
| JPS5953837B2 JPS5953837B2 (ja) | 1984-12-27 |
Family
ID=16242744
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57189525A Expired JPS5953837B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 高度好熱菌に由来する新規プラスミド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5953837B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6122526U (ja) * | 1984-07-13 | 1986-02-10 | 光洋機械産業株式会社 | ペ−スト用のミキサ− |
| JPH0261605U (ja) * | 1988-10-27 | 1990-05-08 |
-
1982
- 1982-10-28 JP JP57189525A patent/JPS5953837B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5953837B2 (ja) | 1984-12-27 |
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