JPS5978684A - 新規プラスミドを保有する新規微生物 - Google Patents
新規プラスミドを保有する新規微生物Info
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- JPS5978684A JPS5978684A JP57189524A JP18952482A JPS5978684A JP S5978684 A JPS5978684 A JP S5978684A JP 57189524 A JP57189524 A JP 57189524A JP 18952482 A JP18952482 A JP 18952482A JP S5978684 A JPS5978684 A JP S5978684A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
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- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高度好熱菌を宿主とする組換えＤＮＡ実験のベ
クターとして有用な新規なプラスミドを保有する新規な
微生物に関するものであり、より詳しくはその分子量が
約１．０メガダルトンであり、図に示される制限酵素開
裂地図により特徴づけられる新規なプラスミドを保有す
る親規なサーマス・フラバスに関するものである。
クターとして有用な新規なプラスミドを保有する新規な
微生物に関するものであり、より詳しくはその分子量が
約１．０メガダルトンであり、図に示される制限酵素開
裂地図により特徴づけられる新規なプラスミドを保有す
る親規なサーマス・フラバスに関するものである。
従来、組換えＤＮＡ実験は主として大腸菌を宿主とする
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。大腸菌の宿主・ベクター系はほ
ぼ完成されており、また大腸菌以外にも酵母、枯草菌な
どで宿主・ベクター系が開発され応用への道が道が検討
されつつある。しかし、上記の菌はいずれも生育温度が
３０℃〜３７℃の中温菌である点に問題がある。
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。大腸菌の宿主・ベクター系はほ
ぼ完成されており、また大腸菌以外にも酵母、枯草菌な
どで宿主・ベクター系が開発され応用への道が道が検討
されつつある。しかし、上記の菌はいずれも生育温度が
３０℃〜３７℃の中温菌である点に問題がある。
一方、好熱性細菌は、生育上限温度が５５℃〜７５℃に
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱性酵素及
び耐熱性生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。従って、好熱
性細菌の育種が重要と考えられるが、その為の一つの、
しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌の宿主・ベク
ター系の開発研究、とりわけ高度好熱菌の宿主・ベクタ
ー系の開発研究は、これまで全く行なわれていない。し
かもベクターの開発研究の基礎となるべきプラスミドＤ
ＮＡの検索という点についても、高度好熱菌を材料とし
た研究は以下の２報しか知られていない。
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱性酵素及
び耐熱性生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。従って、好熱
性細菌の育種が重要と考えられるが、その為の一つの、
しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌の宿主・ベク
ター系の開発研究、とりわけ高度好熱菌の宿主・ベクタ
ー系の開発研究は、これまで全く行なわれていない。し
かもベクターの開発研究の基礎となるべきプラスミドＤ
ＮＡの検索という点についても、高度好熱菌を材料とし
た研究は以下の２報しか知られていない。
（１）高度好熱菌よりの染色体外ＤＮＡへの分離ヒシヌ
マ、Ｔ．、タナカ、Ｔ．アンド サカグチ、Ｋ．Ｊ．Ｇ
ｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂ．、１０４、１９３−１９９（１９
７８）（２）サーマス・サーモフィルスから単離された
プラスミド（ｐＴＴ１）の物理的性状 エベルハードＭ．Ｄ．、バスクエズ．Ｃ．、バレンズエ
ラ、Ｐ．、ビキュナ、Ｒ．アンド ユデレビック、Ａ．
Ｐｌａｓｍｉｄ．６、１−Ｇ（１９８１）上記２報に記
載されているプラスミドは、いずれもその性質が不明な
いわゆるクリプティック・プラスミドであり、またそれ
らの分子量も６メガダルトン程度とやや大きい。従って
、このままの形でベクターとして利用する、或いはこれ
らを素材としてベクター開発を行う事には、あまりに困
難が大きいものと考えられる。そこで、本発明者らは、
高度好熱菌より、選択マーカー（そのプラスミドが宿主
内に存在していることを示すマーカー）を有し、しかも
分子量の小さいプラスミドの検索を行った。その結果ナ
マイシン耐性を示したサーマス・フラバスから分子量約
１．０メガダルトンのプラスミドを単離する事に成功し
た。
マ、Ｔ．、タナカ、Ｔ．アンド サカグチ、Ｋ．Ｊ．Ｇ
ｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂ．、１０４、１９３−１９９（１９
７８）（２）サーマス・サーモフィルスから単離された
プラスミド（ｐＴＴ１）の物理的性状 エベルハードＭ．Ｄ．、バスクエズ．Ｃ．、バレンズエ
ラ、Ｐ．、ビキュナ、Ｒ．アンド ユデレビック、Ａ．
Ｐｌａｓｍｉｄ．６、１−Ｇ（１９８１）上記２報に記
載されているプラスミドは、いずれもその性質が不明な
いわゆるクリプティック・プラスミドであり、またそれ
らの分子量も６メガダルトン程度とやや大きい。従って
、このままの形でベクターとして利用する、或いはこれ
らを素材としてベクター開発を行う事には、あまりに困
難が大きいものと考えられる。そこで、本発明者らは、
高度好熱菌より、選択マーカー（そのプラスミドが宿主
内に存在していることを示すマーカー）を有し、しかも
分子量の小さいプラスミドの検索を行った。その結果ナ
マイシン耐性を示したサーマス・フラバスから分子量約
１．０メガダルトンのプラスミドを単離する事に成功し
た。
このプラスミドは、前記の制限酵素開裂地図に示される
如く、分子量が極めて小さくしかも数種の制限酵素によ
る切断点を特異的に有している（以下、本プラスミドを
ｐＮＨＫ１０１略称する）。
如く、分子量が極めて小さくしかも数種の制限酵素によ
る切断点を特異的に有している（以下、本プラスミドを
ｐＮＨＫ１０１略称する）。
なお、図に示されている制限酵素の略称は次のとおりで
ある。
ある。
ＢａｍＨ■はバチルス・アミロリクエファシエンス由来
の酵素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニアエ由来
の酵素、ＢｓｔＮ■はバチルス・ステアロサーモフィル
ス由来の酵素を示す。
の酵素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニアエ由来
の酵素、ＢｓｔＮ■はバチルス・ステアロサーモフィル
ス由来の酵素を示す。
以下、これまでに報告されているサーマス属細菌、即ち
高度好熱菌由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
高度好熱菌由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
表から明らかなように、ｐＮＨＫ１０１は既知のプラス
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
プラスミドＤＮＡがベクターたり得る為には、そのプラ
スミドが宿主内での自律的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須である。しかし、高度好
熱菌の様に、その生育環境が栄養源に乏しくしかも抗生
物質が存在しない様な温泉である菌について考えた場合
、薬剤耐性遺伝子等を有するプラスミドを得る事は容易
ではない。従って、性質が不明のいわゆるクリプティッ
ク・プラスミドに宿主染色体由来のマーカーを賦与する
という方式でベクター開発を行わなければならないであ
ろう。その際にｐＮＨＫ１０１を利用すれば、極めて便
利であるものと考えられる。
スミドが宿主内での自律的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須である。しかし、高度好
熱菌の様に、その生育環境が栄養源に乏しくしかも抗生
物質が存在しない様な温泉である菌について考えた場合
、薬剤耐性遺伝子等を有するプラスミドを得る事は容易
ではない。従って、性質が不明のいわゆるクリプティッ
ク・プラスミドに宿主染色体由来のマーカーを賦与する
という方式でベクター開発を行わなければならないであ
ろう。その際にｐＮＨＫ１０１を利用すれば、極めて便
利であるものと考えられる。
何故ならば、第１にｐＮＨＫ１０１は高度好熱菌で複製
が可能なプラスミドであるからであり、第２には、他の
高度好熱菌由来の既知のクリプティック・プラスミドに
比べてはるかに小さい分子量しか有しないという点から
、本プラスミドの必須領域、例えば複製開始点領域、複
製に関与する遺伝子等の解析が、他の分子量のより大き
なプラスミドよりも、はるかに容易に行えるという利点
を有しているからである。
が可能なプラスミドであるからであり、第２には、他の
高度好熱菌由来の既知のクリプティック・プラスミドに
比べてはるかに小さい分子量しか有しないという点から
、本プラスミドの必須領域、例えば複製開始点領域、複
製に関与する遺伝子等の解析が、他の分子量のより大き
なプラスミドよりも、はるかに容易に行えるという利点
を有しているからである。
更にｐＮＨＫ１０１は図からも明らかなように、Ｋｐｎ
■、ＢａｍＨ■などの制限酵素による開裂部位を特定の
しかも限られた位置に有している。
■、ＢａｍＨ■などの制限酵素による開裂部位を特定の
しかも限られた位置に有している。
このことはｐＮＨＫ１０１をベクターとして利用する際
に、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有意に保持でき
るという点で有利である。
に、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有意に保持でき
るという点で有利である。
さて、本プラスミドをベクターとして異種の耐熱性を有
する遺伝子を好熱菌に導入すれば、醗酵工業に於ける冷
却コストの節減が達成されよう。
する遺伝子を好熱菌に導入すれば、醗酵工業に於ける冷
却コストの節減が達成されよう。
また、耐熱性、耐溶媒性等の性質に優れた好熱菌の酵素
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
ｐＮＨＫ１０１の人手は、本発明者等が温泉水中から新
たに分離した高度好熱菌、サーマス・フラバスＴＫ１０
株をサーマス培地（ディフュ・イーストエキストラクト
０．４％、ポリペプトン（大五栄養）０．８％、ＮａＣ
ｌ０．２％）により対数増殖後期迄増殖させて得た菌体
を、リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌させる事によ
って達せられるが、本プラスミドを保有する点で本菌株
は新規である。
たに分離した高度好熱菌、サーマス・フラバスＴＫ１０
株をサーマス培地（ディフュ・イーストエキストラクト
０．４％、ポリペプトン（大五栄養）０．８％、ＮａＣ
ｌ０．２％）により対数増殖後期迄増殖させて得た菌体
を、リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌させる事によ
って達せられるが、本プラスミドを保有する点で本菌株
は新規である。
また、サーマス・フラバスＴＫ１０株は好気性のグラム
染色陰性の桿菌で、黄色々素を産生しＤＮＡのＧＣ含量
が約７０％、生育至適温度が７０℃の菌株であるがｐＮ
ＨＫ１０１を保有する点では従来には認められない新規
な微生物である。本菌株はカナマイシン耐性株として温
泉水中より分離されたが、エリスロマイシン、ストレプ
トマイシンにも耐性を示し、アンピシリン、クロラムフ
ェニコール、ネオマイシン、テトラリイクリンには感受
性があった。
染色陰性の桿菌で、黄色々素を産生しＤＮＡのＧＣ含量
が約７０％、生育至適温度が７０℃の菌株であるがｐＮ
ＨＫ１０１を保有する点では従来には認められない新規
な微生物である。本菌株はカナマイシン耐性株として温
泉水中より分離されたが、エリスロマイシン、ストレプ
トマイシンにも耐性を示し、アンピシリン、クロラムフ
ェニコール、ネオマイシン、テトラリイクリンには感受
性があった。
なお、本菌株は株は微工研菌寄第６７５０号として寄話
されている。
されている。
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述する。
実施例１（菌株のスクリーニング）
静岡県の熱川温泉の温泉水約１ｍｌをサーマス培地（デ
ィフェ・イーストエキストラクト０．４％、ポリペプト
ン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％）１００ｍ
ｌに加え７０℃で約１８時間振盪培養後、カナマイシン
（１０μｇ／ｍｌ）を含むサーマス寒天平板上で生育し
たコロニーの１つからサーマス・フラバスＴＫ１０株（
微工研菌寄第６７５０号）が得られた。
ィフェ・イーストエキストラクト０．４％、ポリペプト
ン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％）１００ｍ
ｌに加え７０℃で約１８時間振盪培養後、カナマイシン
（１０μｇ／ｍｌ）を含むサーマス寒天平板上で生育し
たコロニーの１つからサーマス・フラバスＴＫ１０株（
微工研菌寄第６７５０号）が得られた。
実施例２
プラスミドｐＮＨＫ１０１のサーマス・フラバスＴＫ１
０株からの分離 サーマス・フラバスＴＫ１０株（微工研菌寄第６７５０
号）の生物学的に純粋な培養基から１００ｍｌのサーマ
ス培地（ディフェ・イーストエキストラクト０．４％ポ
リペプトン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％、
ｐＨ７．５）に接種し７０℃で１６〜１８時間振盪培養
する。
０株からの分離 サーマス・フラバスＴＫ１０株（微工研菌寄第６７５０
号）の生物学的に純粋な培養基から１００ｍｌのサーマ
ス培地（ディフェ・イーストエキストラクト０．４％ポ
リペプトン（五大栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％、
ｐＨ７．５）に接種し７０℃で１６〜１８時間振盪培養
する。
この培養液を１ｌのカナマイシン１０μｇ／ｍｌを含有
するサーマス培地に接種し、７０℃で５時間培養する。
するサーマス培地に接種し、７０℃で５時間培養する。
菌体を遠心によって、ＴＥＳ（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ、５ｍＭＥＤＩＡ、１００ｍＭＮａＣｌｐＨ７．５）
で洗浄後菌体湿重量４ｇ当り、１０ｍｌの２５％ショ糖
含有ＴＥＳに懸濁する。リゾチーム（１０ｍｇ／ｍｌ）
を２ｍｌ、０．２５ＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）４ｍｌを
加え、０℃で１０分間静置、続いて３７℃に１０分間保
温する。この細胞混合液に２ｍｌの１０％ＳＤＳ、５ｍ
ｌの５Ｍ−ＮａＣｌを加え４℃に１５〜１８時間静置す
る。これを２８００Ｏｒｐｍ、１時間の超遠心によって
遠心し、上清を得る。この上清にポリエチレングリコー
ル６０００を１０％（ｗ／ｖ）加え、２〜３時間０℃に
静置、２２００ｒｐｍ、２分の遠心で沈澱を得る。この
沈澱を１５ｍｌのＴＥＳに溶解し、ＣｓＣｌ及びエチジ
ウムブロマイドを加えて密度を１．６１〜１．６２に調
整する。この試料を３８０００ｒｐｍで３０〜４０時間
、平衝密度勾配遠心する。生じたプラスミドＤＮＡのバ
ンドを集め、イソアミルアルコールでエチジウムブロマ
イドを除去した後、ＴＥＮ（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ
、１ｍＭＥＤＴＡ、２０ｍＭＮａＣｌ）に透析する事に
よってプラスミド溶液が得られる。このプラスミド溶液
はｐＮＨＫ１０１と分子量約９メガダルトンのｐＮＨＫ
１０２との混合物であるが、このプラスミド溶液を１．
０％の低融点アガロース（ＢＲｌ社製）による電気泳動
に供し、生ずるｐＫＨＫ１０１に相当するバンドを切り
出してＤＮＡを回収する事によって純粋なｐＮＨＫ１０
１が得られる。
ｌ、５ｍＭＥＤＩＡ、１００ｍＭＮａＣｌｐＨ７．５）
で洗浄後菌体湿重量４ｇ当り、１０ｍｌの２５％ショ糖
含有ＴＥＳに懸濁する。リゾチーム（１０ｍｇ／ｍｌ）
を２ｍｌ、０．２５ＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）４ｍｌを
加え、０℃で１０分間静置、続いて３７℃に１０分間保
温する。この細胞混合液に２ｍｌの１０％ＳＤＳ、５ｍ
ｌの５Ｍ−ＮａＣｌを加え４℃に１５〜１８時間静置す
る。これを２８００Ｏｒｐｍ、１時間の超遠心によって
遠心し、上清を得る。この上清にポリエチレングリコー
ル６０００を１０％（ｗ／ｖ）加え、２〜３時間０℃に
静置、２２００ｒｐｍ、２分の遠心で沈澱を得る。この
沈澱を１５ｍｌのＴＥＳに溶解し、ＣｓＣｌ及びエチジ
ウムブロマイドを加えて密度を１．６１〜１．６２に調
整する。この試料を３８０００ｒｐｍで３０〜４０時間
、平衝密度勾配遠心する。生じたプラスミドＤＮＡのバ
ンドを集め、イソアミルアルコールでエチジウムブロマ
イドを除去した後、ＴＥＮ（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ
、１ｍＭＥＤＴＡ、２０ｍＭＮａＣｌ）に透析する事に
よってプラスミド溶液が得られる。このプラスミド溶液
はｐＮＨＫ１０１と分子量約９メガダルトンのｐＮＨＫ
１０２との混合物であるが、このプラスミド溶液を１．
０％の低融点アガロース（ＢＲｌ社製）による電気泳動
に供し、生ずるｐＫＨＫ１０１に相当するバンドを切り
出してＤＮＡを回収する事によって純粋なｐＮＨＫ１０
１が得られる。
低融点アガロースゲルからのＤＮＡの回収は以下の手順
によった。切り出したゲルスライスを６５℃に保温して
融解、これに２倍量の０．５ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を加え、３７
℃に移し保温する。これに等量の０．１ＭＴｒｉｓ Ｈ
Ｃｌ緩衝液（ｐＨ３．０）で飽和させたフェノールを加
え混合、遠心（３０００〜５０００ｒｐｍ、５分）後、
上層の水層を分取する。フェノール抽出をもう一度行い
エーテルによってフェノールを水層より除去した後、３
Ｍ酢酸アンモニウム溶液を１／１０容加え、３容のエタ
ノールによりエタノール沈澱を行う。得られた沈澱をＴ
ＥＮに溶解してプラスミド溶液とした。
によった。切り出したゲルスライスを６５℃に保温して
融解、これに２倍量の０．５ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を加え、３７
℃に移し保温する。これに等量の０．１ＭＴｒｉｓ Ｈ
Ｃｌ緩衝液（ｐＨ３．０）で飽和させたフェノールを加
え混合、遠心（３０００〜５０００ｒｐｍ、５分）後、
上層の水層を分取する。フェノール抽出をもう一度行い
エーテルによってフェノールを水層より除去した後、３
Ｍ酢酸アンモニウム溶液を１／１０容加え、３容のエタ
ノールによりエタノール沈澱を行う。得られた沈澱をＴ
ＥＮに溶解してプラスミド溶液とした。
ｐＮＨＫ１０１の特性決定の手順
ｐＮＨＫ１０１の分子量は、その超らせん構造（ｓｕｐ
ｃｒｃｏｉｌｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）のＤＮＡ及び制
限酵素によって切断された断片のアガロースゲル電気泳
動及びポリアクリルアミド・ゲル電気泳動より得られた
。
ｃｒｃｏｉｌｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）のＤＮＡ及び制
限酵素によって切断された断片のアガロースゲル電気泳
動及びポリアクリルアミド・ゲル電気泳動より得られた
。
この際の分子量マーカーはｐＢＲ３２２ＤＮＡ（２．６
７ｍｄ）、ＣｏｌＦＴＤＮＡ（４．２ｍｄ）及びラムダ
ＤＮＡのＨｉｎｄ■分解断片（１４．６、５．８４、４
．０５、２．６７、１．３０、１．１７、０．３４ｍｄ
）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲＴ分解断片（１３．７、４
．７４、３．７３、３、４８、３．０２、２．１３ｍｄ
）、φ×１７４ＤＮＡのＨａｅ■分解断片（０．８３６
、０．６６６、０．５３９、０．３７３、０．１９２、
０．１７４、０．１６７、０．１４５、０．１２０、０
．０７３、０．０４４ｍｄ）を用いた。制限酵素による
切断は、プラスミドＤＮＡ溶液からエタノール沈澱によ
ってＤＮＡを沈澱させ、適当な緩衝液に溶解して行なっ
た。制限酵素は宝酒造及び、ベーリンガー・マンハイム
社よりの市販品を用いた。アガロースゲル電気泳動はシ
ーケム社のアガロースを０．５％又は０．７％の濃度で
用い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル長さ１ｃｍ当り
１．５Ｖの定電圧で１５〜１７時間行なった。
７ｍｄ）、ＣｏｌＦＴＤＮＡ（４．２ｍｄ）及びラムダ
ＤＮＡのＨｉｎｄ■分解断片（１４．６、５．８４、４
．０５、２．６７、１．３０、１．１７、０．３４ｍｄ
）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲＴ分解断片（１３．７、４
．７４、３．７３、３、４８、３．０２、２．１３ｍｄ
）、φ×１７４ＤＮＡのＨａｅ■分解断片（０．８３６
、０．６６６、０．５３９、０．３７３、０．１９２、
０．１７４、０．１６７、０．１４５、０．１２０、０
．０７３、０．０４４ｍｄ）を用いた。制限酵素による
切断は、プラスミドＤＮＡ溶液からエタノール沈澱によ
ってＤＮＡを沈澱させ、適当な緩衝液に溶解して行なっ
た。制限酵素は宝酒造及び、ベーリンガー・マンハイム
社よりの市販品を用いた。アガロースゲル電気泳動はシ
ーケム社のアガロースを０．５％又は０．７％の濃度で
用い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル長さ１ｃｍ当り
１．５Ｖの定電圧で１５〜１７時間行なった。
ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動は、生化学工業社製
のポリアクリルアミド・ビスアクリルアミドを用い、５
％濃度３０：１の架橋度のゲルによって垂直型スラブゲ
ル電気泳動槽により、ゲル長さ１ｃｍあたり１０Ｖの定
電圧によって２〜３時間行った。
のポリアクリルアミド・ビスアクリルアミドを用い、５
％濃度３０：１の架橋度のゲルによって垂直型スラブゲ
ル電気泳動槽により、ゲル長さ１ｃｍあたり１０Ｖの定
電圧によって２〜３時間行った。
高度好熱菌のプラスミドとしては、前記の表に示したと
おりであるがｐＮＨＫ１０１と他のものでは前述のよう
に明らかに異なっており、ｐＮＨＫ１０１は従来認めら
れない新規なプラスミドである。
おりであるがｐＮＨＫ１０１と他のものでは前述のよう
に明らかに異なっており、ｐＮＨＫ１０１は従来認めら
れない新規なプラスミドである。
図面はｐＮＨＫ１０１の制限酵素開裂地図を示し、図中
のＢａｍＨ■はバチルス・アミロリクエファシエンス由
来の酵素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニアエ由
来の酵素、ＢｓｔＮ■はバチルス・ステアロサーエフィ
ルス由来の酵素をそれぞれ示している。
のＢａｍＨ■はバチルス・アミロリクエファシエンス由
来の酵素、Ｋｐｎ■はクレブシエラ・ニューモニアエ由
来の酵素、ＢｓｔＮ■はバチルス・ステアロサーエフィ
ルス由来の酵素をそれぞれ示している。
Claims (1)
- 分子量が約１．０メガダルトンであり、図に示される制
限酵素地図で特徴づけられるプラスミドを保有する新規
なサーマス・フラバスＴＫ１０株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189524A JPS5953831B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規プラスミドを保有する新規微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189524A JPS5953831B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規プラスミドを保有する新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5978684A true JPS5978684A (ja) | 1984-05-07 |
| JPS5953831B2 JPS5953831B2 (ja) | 1984-12-27 |
Family
ID=16242725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57189524A Expired JPS5953831B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規プラスミドを保有する新規微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5953831B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6125923U (ja) * | 1984-06-20 | 1986-02-15 | 株式会社ナブコ | 圧縮空気乾燥装置 |
| JPH0541767Y2 (ja) * | 1984-09-05 | 1993-10-21 | ||
| JPS6323948Y2 (ja) * | 1985-09-05 | 1988-07-01 | ||
| JPH04257689A (ja) * | 1991-02-06 | 1992-09-11 | Sumitomo Metal Mining Co Ltd | 湿潤金属の乾燥方法 |
-
1982
- 1982-10-28 JP JP57189524A patent/JPS5953831B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5953831B2 (ja) | 1984-12-27 |
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