JPS5923793B2 - テトラサイクリン耐性を備えた新規プラスミド及びこれを保有する新規微生物 - Google Patents
テトラサイクリン耐性を備えた新規プラスミド及びこれを保有する新規微生物Info
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- JPS5923793B2 JPS5923793B2 JP57037539A JP3753982A JPS5923793B2 JP S5923793 B2 JPS5923793 B2 JP S5923793B2 JP 57037539 A JP57037539 A JP 57037539A JP 3753982 A JP3753982 A JP 3753982A JP S5923793 B2 JPS5923793 B2 JP S5923793B2
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- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
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- C12N15/75—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Bacillus
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は好熱菌を宿主とする組換えＤＮＡ実験のベクタ
ーとして有用な新規なプラスミド及びこれを保有する新
規な微生物に関するものであり、より詳しくはテトラサ
イクリン耐性の遺伝子を内部に備え、その分子量が約５
．６メガダルトンであり、図に示される制限酵素開裂地
図により特徴づけされる新規なプラスミド及び該プラス
ミドを保有する新規なバチルス、ステアロサーモフィル
スに関するものである。
ーとして有用な新規なプラスミド及びこれを保有する新
規な微生物に関するものであり、より詳しくはテトラサ
イクリン耐性の遺伝子を内部に備え、その分子量が約５
．６メガダルトンであり、図に示される制限酵素開裂地
図により特徴づけされる新規なプラスミド及び該プラス
ミドを保有する新規なバチルス、ステアロサーモフィル
スに関するものである。
従来、組換えＤＮＡ実験は主として大腸菌を宿主とする
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。
大腸菌の宿主−ベクター系はほぼ完成されており、また
大腸菌以外にも酵母、枯草菌などで宿主−ベクター系が
開発され応用への道が検討されつつある。
大腸菌以外にも酵母、枯草菌などで宿主−ベクター系が
開発され応用への道が検討されつつある。
しかし、上記の菌はいずれも生育温度が３０℃〜３７℃
の中温菌である点に問題がある。
の中温菌である点に問題がある。
一方、好熱曲細菌は、生育上限温度が５５℃〜７５℃に
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱准酵素及
び耐熱准生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱准酵素及
び耐熱准生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。
従って、好熱性細菌の育種が重要と考えられるが、その
為の一つの、しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌
の宿主−ベクター系の開発研究については、ベクターの
有力候補と考えられるプラスミドの検索を含めても以下
の報告しか知られていない。
為の一つの、しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌
の宿主−ベクター系の開発研究については、ベクターの
有力候補と考えられるプラスミドの検索を含めても以下
の報告しか知られていない。
（１）高度好熱菌よりの染色体外ＤＮＡの分離ヒシヌマ
、Ｆ、タナカ、Ｔ、アントサカグチ、Ｋ。
、Ｆ、タナカ、Ｔ、アントサカグチ、Ｋ。
Ｊ 、Ｇｅｎ、Ｍｉｃｒｏｂ、 １０４．１９３−１
９９（１９７８） （２）薬剤耐性の好熱性バチルス属細菌よりの４種類の
プラスミドの分離とその性質の部分解析ピングハム、Ａ
、Ｈ，Ａ、、ブルドン、Ｃ，Ｊ。
９９（１９７８） （２）薬剤耐性の好熱性バチルス属細菌よりの４種類の
プラスミドの分離とその性質の部分解析ピングハム、Ａ
、Ｈ，Ａ、、ブルドン、Ｃ，Ｊ。
アンドアトキンソン、Ｔ。
Ｊ、Ｇｅｎ、Ｍｉｃｒｏｂ、１１４．４０１−４０８（
１９７９） （３） バチルス、ステアロサーモフィルスのプラス
ミドｐＡＢ １２４の解析及び欠失誘導体の創製ピング
ハム、Ａ、Ｈ，Ａ、、ブルドン、Ｃ，Ｊ。
１９７９） （３） バチルス、ステアロサーモフィルスのプラス
ミドｐＡＢ １２４の解析及び欠失誘導体の創製ピング
ハム、Ａ、Ｈ，Ａ、、ブルドン、Ｃ，Ｊ。
アンドアトキンソン、Ｔ。
Ｊ、Ｇｅｎ、Ｍｉｃｒｏｂ、１１９．１０９−１１５（
１９８０） （４）好熱性バチルス属細菌よりの薬剤耐はプラスミド
の分離と解析、及び部分欠失プラスミドの創製 イマナカ、Ｔ、フジイ２Ｍ、アンドアイバ、ＳＪ 、Ｂ
ａｃｔ、、１４６（３）、１０９１−１０９７（１９８
１） そこで、本発明者らは、その宿主が好熱性の微生物であ
って、その内部にテトラサイクリン耐性の遺伝子を備え
た微生物を自然界より検索した結果、バチルス属に属す
る一菌株から新規なプラスミドを得ることに成功した。
１９８０） （４）好熱性バチルス属細菌よりの薬剤耐はプラスミド
の分離と解析、及び部分欠失プラスミドの創製 イマナカ、Ｔ、フジイ２Ｍ、アンドアイバ、ＳＪ 、Ｂ
ａｃｔ、、１４６（３）、１０９１−１０９７（１９８
１） そこで、本発明者らは、その宿主が好熱性の微生物であ
って、その内部にテトラサイクリン耐性の遺伝子を備え
た微生物を自然界より検索した結果、バチルス属に属す
る一菌株から新規なプラスミドを得ることに成功した。
このプラスミドは前記の制限酵素開裂地図に示され、分
子量は小さく、また種々の制限酵素による特異的な切断
点を有し、テトラサイクリンに対する耐性遺伝子をプラ
スミドＤＮＡ上に有しており、前記の制限酵素切断地図
上の約６０〜８０係の位置にかけて存在する。
子量は小さく、また種々の制限酵素による特異的な切断
点を有し、テトラサイクリンに対する耐性遺伝子をプラ
スミドＤＮＡ上に有しており、前記の制限酵素切断地図
上の約６０〜８０係の位置にかけて存在する。
（以下、本プラスミドを「ｐＴＨＴ２２Ｊと略する。
なお、図に示されている制限酵素の略称は次とおりであ
る。
る。
（１） ＢｇＩＩＩ はバチルス、グロビギイ由来
の酵素（２）ＥｃｏＲＩはニジエリア、コリ由来の酵素
（３）ＨｉｎｄｌＩはハエモフイルス、インフルエンザ
工由来の酵素を示す。
の酵素（２）ＥｃｏＲＩはニジエリア、コリ由来の酵素
（３）ＨｉｎｄｌＩはハエモフイルス、インフルエンザ
工由来の酵素を示す。
以下、テトラサイクリン耐はを有する既知の好熱性細菌
由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
表から明らかなように、ｐＴＨＴ２２は既知の７°ラス
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
プラスミドＤＮＡがベクターたり得る為には、そのプラ
スミドが宿主内での自律的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須であるが、ｐＴＨＴ２２
は好熱菌及び枯草菌での自律的増殖能及びテトラサイク
リン耐性という極めて選択に有利なマーカーを有してい
る。
スミドが宿主内での自律的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須であるが、ｐＴＨＴ２２
は好熱菌及び枯草菌での自律的増殖能及びテトラサイク
リン耐性という極めて選択に有利なマーカーを有してい
る。
更にｐＴＨＴ２２は図からも明らかなように、Ｂｇｌｌ
ｌ 、ＥｃｏＲＩ 、Ｈｉｎｄｌｌｌ などの制限酵
素による開裂部位を特定のしかも限られた位置に有して
いる。
ｌ 、ＥｃｏＲＩ 、Ｈｉｎｄｌｌｌ などの制限酵
素による開裂部位を特定のしかも限られた位置に有して
いる。
このことはｐＴＨＴ２２をベクターとして利用する際に
、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有意に保持できる
という点で有利である。
、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有意に保持できる
という点で有利である。
また、ｐ ＴＨＴ ２２は枯草菌でも好熱菌でもベクタ
ーとして利用できる点で有利である。
ーとして利用できる点で有利である。
従って、ｐＴＨＴｐ ＴＨＴ ２２をベクターとして用
いることにより異種遺伝子を同時に枯草菌にクローン化
することも可能である。
いることにより異種遺伝子を同時に枯草菌にクローン化
することも可能である。
また、枯草菌とｐＴＨＴ２２の分離源である好熱菌、バ
チルス、ステアロサーモフィルスとは同じバチルス属に
属するという共通点を有するためその近縁匪から既に枯
草菌で発現している異種遺伝子は、好熱菌でも発現され
る可能性が高いものと考えられる。
チルス、ステアロサーモフィルスとは同じバチルス属に
属するという共通点を有するためその近縁匪から既に枯
草菌で発現している異種遺伝子は、好熱菌でも発現され
る可能性が高いものと考えられる。
そこで、既に枯草菌にクローン化されている遺伝子を、
本プラスミドを用いて好熱菌に移住する事によって、も
しその遺伝子産物が５５℃付近での耐熱曲を有するなら
ば、醗酵工業における冷却コストの節減が、好熱菌によ
る醗酵生産によって達成される事となる。
本プラスミドを用いて好熱菌に移住する事によって、も
しその遺伝子産物が５５℃付近での耐熱曲を有するなら
ば、醗酵工業における冷却コストの節減が、好熱菌によ
る醗酵生産によって達成される事となる。
また、耐熱性、耐溶媒性等の性質に優れた好熱菌の酵素
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
ｐＴＨＴ２２の入手は、本発明者らが土壌中から新たに
分離した中等度好熱菌、バチルス、ステアロサーモフィ
ルスＴ２２株をＴＹＳ培地により対数増殖後期迄増殖さ
せて得た菌体を、リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌
させる事によって達せられる。
分離した中等度好熱菌、バチルス、ステアロサーモフィ
ルスＴ２２株をＴＹＳ培地により対数増殖後期迄増殖さ
せて得た菌体を、リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌
させる事によって達せられる。
また、バチルス、ステアロサーモフィルスＴ２２株は好
気註の有胞子桿菌、ダラム染色陽註であり、生育至適温
度が約５５℃で３７℃では生育しない菌株であるがｐＴ
ＨＴ２２を保有する点では従来には認められない新規な
微生物である。
気註の有胞子桿菌、ダラム染色陽註であり、生育至適温
度が約５５℃で３７℃では生育しない菌株であるがｐＴ
ＨＴ２２を保有する点では従来には認められない新規な
微生物である。
本菌株はテトラサイクリンに対して耐性を示したのみな
らず、他のテストした６種の抗生物質について、エリス
ロマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ストレプト
マイシンの４剤にも耐性を示し、アンピシリン、クロラ
ムフェニコールに対シては感装置であった。
らず、他のテストした６種の抗生物質について、エリス
ロマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ストレプト
マイシンの４剤にも耐性を示し、アンピシリン、クロラ
ムフェニコールに対シては感装置であった。
なお、本菌株は微工研菌寄第６４３７号として寄託され
ている。
ている。
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述する。
実施例１（菌株のスクリーニング）
茨城県筑波郡谷田部町の土壌サンプル約１ｇをＴＹＳ培
地（ディフコ、トリプトン２係、ディフコ、イースト、
エキストラクト１％、ＮａＣ１１％）１００ｍｌに加え
５５℃で約８時間振盪培養後、テトラサイクリン（２０
μｇ、４’）を含むＴＹＳ寒天寒天上板上育したコロニ
ーの一つからバチルス、ステアロサーモフィルスＴ２２
株（微工研菌寄第６４３７号）が得られた。
地（ディフコ、トリプトン２係、ディフコ、イースト、
エキストラクト１％、ＮａＣ１１％）１００ｍｌに加え
５５℃で約８時間振盪培養後、テトラサイクリン（２０
μｇ、４’）を含むＴＹＳ寒天寒天上板上育したコロニ
ーの一つからバチルス、ステアロサーモフィルスＴ２２
株（微工研菌寄第６４３７号）が得られた。
実施例 ２
プラスミドｐＴＨＴ２２のバチルス、ステアロサーモフ
ィルスＴ２２株からの分離 バチルス、ステアロサーモフィルスＴ２２株（微工研菌
寄第６４３７号）の生物学的に純粋な培養基から１００
ｍのＴＹＳ培地（ディフコ、バクト、トリプトン２％、
ディフコ、イースト、エキストラクト１係、ＮａＣ１１
％）に接種し５５℃で１６〜１８時間振盪培養する。
ィルスＴ２２株からの分離 バチルス、ステアロサーモフィルスＴ２２株（微工研菌
寄第６４３７号）の生物学的に純粋な培養基から１００
ｍのＴＹＳ培地（ディフコ、バクト、トリプトン２％、
ディフコ、イースト、エキストラクト１係、ＮａＣ１１
％）に接種し５５℃で１６〜１８時間振盪培養する。
この培養液を１１のテトラサイクリン２０μｇ／ｒｒｔ
ｌを含有するＴＹＳ培地に接種し、５５℃で５時間培養
する。
ｌを含有するＴＹＳ培地に接種し、５５℃で５時間培養
する。
菌体を遠心によって集め、ＴＥＳ（２０ｍＭＴｒｉｓ−
ＨＣｌ、５ｍＭＥＤＴＡ、１００ｍＭ ＮａＣ１ｐＨ７
，５）で洗滌後閑体湿重量４ｇ当り１０ＴＬｌ（７）２
５％シヨ糖含有ＴＢＳに懸濁する。
ＨＣｌ、５ｍＭＥＤＴＡ、１００ｍＭ ＮａＣ１ｐＨ７
，５）で洗滌後閑体湿重量４ｇ当り１０ＴＬｌ（７）２
５％シヨ糖含有ＴＢＳに懸濁する。
リゾチーム（１０Ｊｕｇ／ｍ）を２ｍｌ：、 ０．２５
Ｍ−ＥＤＴＡ（ｐＨ８，０）４ｍｌを加え、０℃で１０
分間静置、続いて３７℃に１０分間保温する。
Ｍ−ＥＤＴＡ（ｐＨ８，０）４ｍｌを加え、０℃で１０
分間静置、続いて３７℃に１０分間保温する。
この細胞混合液に２ｍｌの１０％ＳＤＳ、５ｍｌの５Ｍ
ＮａＣ１を加え４℃に１５〜１８時間静置する。
ＮａＣ１を加え４℃に１５〜１８時間静置する。
これを２８００Ｏｒｐｍ、１時間の超遠心によって遠心
し、上清を得る。
し、上清を得る。
この上清にポリエチレングリコール６０００を１０％（
Ｗ／Ｖ）加え、２〜３時間時間区静置、２２０Ｏｒｐｍ
、２分の遠心で沈澱を得る。
Ｗ／Ｖ）加え、２〜３時間時間区静置、２２０Ｏｒｐｍ
、２分の遠心で沈澱を得る。
この沈澱を１５ｒｕｌのＴＥＳに溶解し、ＣｓＣ１及び
エチジウムブロマイドを加えて密度を１．６１〜１．６
２に調整する。
エチジウムブロマイドを加えて密度を１．６１〜１．６
２に調整する。
この試料を３８００Ｏｒｐｍ で３０〜４０時間、平衡
密度勾配遠心する。
密度勾配遠心する。
生じたプラスミドＤＮＡのバンドを集め、イソアミルア
ルコールでエチジウムブロマイドを除去した後、Ｔ Ｅ
Ｎ（２０ｍＭＴｒｉｓ −、Ｅ（Ｃ１，１ｍＭ ＥＤ
ＴＡ。
ルコールでエチジウムブロマイドを除去した後、Ｔ Ｅ
Ｎ（２０ｍＭＴｒｉｓ −、Ｅ（Ｃ１，１ｍＭ ＥＤ
ＴＡ。
２０ｍＭＮａＣ１）に透析する事によって純粋なｐ Ｔ
ＨＴ ２２が得られる。
ＨＴ ２２が得られる。
ｐＴＨＴ２２の特注決定の手順
ｐＴＨＴ２２の分子量は、その超らせん構造（Ｓｕｐｅ
ｒｃｏｉｌｅｄ ５ｔｒｕｃｔｕｒｅ） （７）ＤＮＡ
及び制限酵素によって切断された断片のアガロースゲル
電気泳動より得られた。
ｒｃｏｉｌｅｄ ５ｔｒｕｃｔｕｒｅ） （７）ＤＮＡ
及び制限酵素によって切断された断片のアガロースゲル
電気泳動より得られた。
この際の分子量マーカーはｐＢＲ３２２Ｄ ＮＡ （２
，６７ｍｄ） 、 Ｃｏ ＩＥＩＤＮＡ（４，２ｍｄ）
及びラムダＤＮＡのＨｉｎｄｌｌＩ分解断片（１４，６
，５，８４，４，０５，２，６７，１，４０゜１．２１
，０．３４）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲＩ分解断片（１
３，７，４，７４，３，７３、３，４８、３，０２。
，６７ｍｄ） 、 Ｃｏ ＩＥＩＤＮＡ（４，２ｍｄ）
及びラムダＤＮＡのＨｉｎｄｌｌＩ分解断片（１４，６
，５，８４，４，０５，２，６７，１，４０゜１．２１
，０．３４）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲＩ分解断片（１
３，７，４，７４，３，７３、３，４８、３，０２。
２．１３）を用いた。
制限酵素による切断は、プラスミドＤＮＡ溶液からエタ
ノール沈澱によってＤＮＡを沈澱させ、適当な緩衝液に
溶解して行った。
ノール沈澱によってＤＮＡを沈澱させ、適当な緩衝液に
溶解して行った。
制限酵素は宝酒造よりの市販品を用いた。アガロースゲ
ル電気泳動はシーケム社のアガロースを０．５係又は０
．７係の濃度で用い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル
長さ１ｃＩｆＬ当り１．５■の定電圧で１５〜１７時間
行った。
ル電気泳動はシーケム社のアガロースを０．５係又は０
．７係の濃度で用い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル
長さ１ｃＩｆＬ当り１．５■の定電圧で１５〜１７時間
行った。
ｐＴＨＴ２２が、そのＤＮＡ上にテトラサイクリン耐曲
遺伝子を有している事は、枯草菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５
ｕｂｔｉｌｉｓ ＲＭ１２５株プロトプラストへの形質
転換実験によって確かめられた。
遺伝子を有している事は、枯草菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５
ｕｂｔｉｌｉｓ ＲＭ１２５株プロトプラストへの形質
転換実験によって確かめられた。
バチルス、スブチリスＲＭ１２５株のプロトプラストの
調製、形質転換、プロトプラストの再生の手順はＣｈａ
ｎｇ＆Ｃｏｈｅｎの方法（Ｍｏｌｅｃ。
調製、形質転換、プロトプラストの再生の手順はＣｈａ
ｎｇ＆Ｃｏｈｅｎの方法（Ｍｏｌｅｃ。
Ｇｅｎ、Ｇｅｎｅｔ、１６８ １１１−１１５ （１
９７９））によって行った。
９７９））によって行った。
この方法の概略はＲＭ１２５株の対数増殖菌体を等張液
中でリゾチーム処理によってプロトプラスト化し、この
プロトプラスト懸濁液にプラスミドＤＮＡ溶液を加え、
ポリエチレングリコール６０００によってＤＮＡのプロ
トプラスト内への取込みを促した後、再生培地上でプロ
トプラストから栄養細胞への再生を図るというものであ
る。
中でリゾチーム処理によってプロトプラスト化し、この
プロトプラスト懸濁液にプラスミドＤＮＡ溶液を加え、
ポリエチレングリコール６０００によってＤＮＡのプロ
トプラスト内への取込みを促した後、再生培地上でプロ
トプラストから栄養細胞への再生を図るというものであ
る。
ｐＴＨＴ２２ＤＮＡ約０．５μｇを用いて、ＲＭ１２５
株のプロトプラスト懸濁液０．２５ｍＡ’（約１０９プ
ロトプラスト／１１１１）に対して形質転換を行い、再
生培地上でテトラサイクリン耐は株の出現を検討したと
ころ、この際のプロトプラストの再生率０．１％（１〜
２Ｘ １０６／ｍｌ）に対して１〜２×１０３／ｒｒＩ
Ｊ！の頻度でテトラサイクリン耐は株が生じた。
株のプロトプラスト懸濁液０．２５ｍＡ’（約１０９プ
ロトプラスト／１１１１）に対して形質転換を行い、再
生培地上でテトラサイクリン耐は株の出現を検討したと
ころ、この際のプロトプラストの再生率０．１％（１〜
２Ｘ １０６／ｍｌ）に対して１〜２×１０３／ｒｒＩ
Ｊ！の頻度でテトラサイクリン耐は株が生じた。
一方、プラスミドＤＮＡ溶液を加えなかった系（コント
ロール）ではテトラサイクリン耐性株は１０７（ｆ５以
上のプロトプラストを撒いても生じてはこなかった。
ロール）ではテトラサイクリン耐性株は１０７（ｆ５以
上のプロトプラストを撒いても生じてはこなかった。
ここで得られたＲＭ１２５株のテトラサイクリン耐性株
よりプラスミドＤＮＡを、バチルス・ステアロサーモフ
ィルスニー２２株よりのプラスミドＤＮＡの抽出の際と
同様（リゾチーム処理の温度）及び時間が３７°Ｇ３０
分間である点が異なる）の方法で抽出し検討したところ
、ｐ ＴＨＴ ２２と同一分子量で、制限酵素による切
断パターンも全く同一なプラスミドＤＮＡが回収された
。
よりプラスミドＤＮＡを、バチルス・ステアロサーモフ
ィルスニー２２株よりのプラスミドＤＮＡの抽出の際と
同様（リゾチーム処理の温度）及び時間が３７°Ｇ３０
分間である点が異なる）の方法で抽出し検討したところ
、ｐ ＴＨＴ ２２と同一分子量で、制限酵素による切
断パターンも全く同一なプラスミドＤＮＡが回収された
。
この事実は、ｐＴＨＴ２２がテトラサイクリン耐曲遺伝
子を有しており、このプラスミドＲＭ１２５株に入った
事によってＲＭ１２５株がテトラサイクリン耐性の形質
を示すに到った事を証明するものである。
子を有しており、このプラスミドＲＭ１２５株に入った
事によってＲＭ１２５株がテトラサイクリン耐性の形質
を示すに到った事を証明するものである。
同時に、ｐＴＨＴ２２が、好熱菌及び枯草。菌で、自律
的増殖能及び形質の発現が可能なプラスミドである事、
つまり本プラスミドが両菌株でベクターとして利用し得
る事実を明らかにするものである。
的増殖能及び形質の発現が可能なプラスミドである事、
つまり本プラスミドが両菌株でベクターとして利用し得
る事実を明らかにするものである。
テトラサイクリン耐性を有する好熱菌のプラスミドとし
ては前記の表に示したとおりであるが、ｐＴＨＴ２２と
他のものでは前述のように明らかに異なっており、ｐＴ
ＨＴ２２は従来認められない新規なプラスミドである。
ては前記の表に示したとおりであるが、ｐＴＨＴ２２と
他のものでは前述のように明らかに異なっており、ｐＴ
ＨＴ２２は従来認められない新規なプラスミドである。
図面はｐＴＨＴ２２の制限酵素開裂地図を示し、図中の
Ｂｇｌ…はバチルス、グロビギイ由来の酵素、ＥｃｏＲ
Ｉはニジエリア、コリ由来の酵素、Ｈｉｎｄ Ｎはハエ
モフイルス、インフルエンザエ由来の酵素をそれぞれ示
している。 また、図中の０内の数字は前記の制限酵素による切断部
位の位置関係を示す。
Ｂｇｌ…はバチルス、グロビギイ由来の酵素、ＥｃｏＲ
Ｉはニジエリア、コリ由来の酵素、Ｈｉｎｄ Ｎはハエ
モフイルス、インフルエンザエ由来の酵素をそれぞれ示
している。 また、図中の０内の数字は前記の制限酵素による切断部
位の位置関係を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ テトラサイクリン耐性の遺伝子を内部に保有し、そ
の分子量が約５．６メガダルトンであり図に示される制
限酵素地図で特徴づけられるテトラサイクリン耐曲を備
えた新規プラスミド。 ２ 図に示されたテトラサイクリン耐性を備えたプラス
ミドを保有する新規なバチルス、ステアロサーモフィル
スＴ２２株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57037539A JPS5923793B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | テトラサイクリン耐性を備えた新規プラスミド及びこれを保有する新規微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57037539A JPS5923793B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | テトラサイクリン耐性を備えた新規プラスミド及びこれを保有する新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58170800A JPS58170800A (ja) | 1983-10-07 |
| JPS5923793B2 true JPS5923793B2 (ja) | 1984-06-05 |
Family
ID=12500326
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57037539A Expired JPS5923793B2 (ja) | 1982-03-09 | 1982-03-09 | テトラサイクリン耐性を備えた新規プラスミド及びこれを保有する新規微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5923793B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106834188A (zh) * | 2017-03-07 | 2017-06-13 | 东北农业大学 | 寒区豆粕发酵菌种扩繁低成本培养基组合物 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4894337A (en) * | 1989-01-17 | 1990-01-16 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Process for the bioproduction of cyclic hydroxides |
-
1982
- 1982-03-09 JP JP57037539A patent/JPS5923793B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106834188A (zh) * | 2017-03-07 | 2017-06-13 | 东北农业大学 | 寒区豆粕发酵菌种扩繁低成本培养基组合物 |
| CN106834188B (zh) * | 2017-03-07 | 2021-07-06 | 东北农业大学 | 寒区豆粕发酵菌种扩繁低成本培养基组合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58170800A (ja) | 1983-10-07 |
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