JPS5978683A - 新規なプラスミドを保有する新規な微生物 - Google Patents
新規なプラスミドを保有する新規な微生物Info
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- JPS5978683A JPS5978683A JP57189522A JP18952282A JPS5978683A JP S5978683 A JPS5978683 A JP S5978683A JP 57189522 A JP57189522 A JP 57189522A JP 18952282 A JP18952282 A JP 18952282A JP S5978683 A JPS5978683 A JP S5978683A
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- Japan
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- novel
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高度好熱菌を宿主とする組換えＤＮＡ実験のベ
クターとして有用な新規なプラスミドを保有する新規な
微生物に関するものであり、より詳しくはその分子量が
約０．９メガダルトンであり、図に示される制限酵素開
裂地図により特徴づけられる新規なプラスミドを保有す
る新規なサーマス・フラバスに関するものである。
クターとして有用な新規なプラスミドを保有する新規な
微生物に関するものであり、より詳しくはその分子量が
約０．９メガダルトンであり、図に示される制限酵素開
裂地図により特徴づけられる新規なプラスミドを保有す
る新規なサーマス・フラバスに関するものである。
従来、組換えＤＮＡ実験は主として大腸菌を宿主とする
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。大腸菌の宿主・ベクター系はほ
ぼ完成されており、また大腸菌以外にも酵母、枯草菌な
どで宿主・ベクター系が開発され応用への道が検討され
つつある。しかし、上記の菌はいずれも生育温度が３０
℃〜３７℃の中温菌である点に問題がある。
系で広く研究がおこなわれインシュリン、インターフェ
ロン、ヒト成長ホルモン等が大腸菌で量産されるなど大
きな成果を挙げている。大腸菌の宿主・ベクター系はほ
ぼ完成されており、また大腸菌以外にも酵母、枯草菌な
どで宿主・ベクター系が開発され応用への道が検討され
つつある。しかし、上記の菌はいずれも生育温度が３０
℃〜３７℃の中温菌である点に問題がある。
一方、好熱性細菌は、生育上限温度が５５℃〜７５℃に
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱性酵素及
び耐熱性生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。従って、好熱
性細菌の育種が重要と考えられるが、その為の一つの、
しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌の宿主・ベク
ター系の研究開発、とりわけ高度好熱菌の宿主・ベクタ
ー系の開発研究は、これまで全く行われていない。しか
も、ベクターの開発研究の基礎となるべきプラスミドＤ
ＮＡの検索という点についても、高度好熱菌を材料とし
た研究は以下の２報しか知られていない。
ある中等度好熱菌と、生育上限温度が７５℃以上である
高度好熱菌とに大別されるが、いずれについても、その
有する酵素、生体成分が耐熱性、耐溶媒性に優れている
事が知られており、とりわけ好熱菌由来の耐熱性酵素及
び耐熱性生体機能のバイオリアクター等の工業プロセス
への応用という点から注目を集めている。従って、好熱
性細菌の育種が重要と考えられるが、その為の一つの、
しかも有力な手段と考えられる好熱性細菌の宿主・ベク
ター系の研究開発、とりわけ高度好熱菌の宿主・ベクタ
ー系の開発研究は、これまで全く行われていない。しか
も、ベクターの開発研究の基礎となるべきプラスミドＤ
ＮＡの検索という点についても、高度好熱菌を材料とし
た研究は以下の２報しか知られていない。
（１）高度好熱菌よりの染色体ＤＮＡの分類ヒシヌマ，
Ｆ．，タナカ，Ｔ．アンド サカグチ，Ｋ．Ｊ．Ｇｅｎ
．Ｍｉｃｒｏｂ．，１０４，１９３−１９９（１９７８
）（２）サーマス・サーモフィルから単離されたプラス
ミド（ｐＴＴ１）の物理的性状 エルバート，Ｍ．Ｄ．，バスクエズ，Ｃ．，バレンズエ
ラ，Ｐ．，ビキュナ，Ｒ．アンド ユデレビック，Ａ．
Ｐｌａｓｍｉｄ．６．１−６（１９８１）上記２報に記
載されているプラスミドは、いずれもその性質が不明な
いわゆるクリプティック・プラスミドであり、またそれ
らの分子量も６メガダルトン程度とやや大きい。従って
、このままの形でベクターとして利用する、或いはこれ
らを素材としてベクター開発を行う事には、あまりに困
難が大きいものと考えられる。そこで、本発明者らは、
高度好熱菌より、選択マーカー（そのプラスミドが宿主
内に存在していることを示すマーカー）を有し、しかも
分子量の小さいプラスミドの検索を行った。その結果ス
トレプトマイシン耐性を示したリーマス・フラバスから
分子量０．９メガダルトンのプラスミドを単離する事に
成功した。
Ｆ．，タナカ，Ｔ．アンド サカグチ，Ｋ．Ｊ．Ｇｅｎ
．Ｍｉｃｒｏｂ．，１０４，１９３−１９９（１９７８
）（２）サーマス・サーモフィルから単離されたプラス
ミド（ｐＴＴ１）の物理的性状 エルバート，Ｍ．Ｄ．，バスクエズ，Ｃ．，バレンズエ
ラ，Ｐ．，ビキュナ，Ｒ．アンド ユデレビック，Ａ．
Ｐｌａｓｍｉｄ．６．１−６（１９８１）上記２報に記
載されているプラスミドは、いずれもその性質が不明な
いわゆるクリプティック・プラスミドであり、またそれ
らの分子量も６メガダルトン程度とやや大きい。従って
、このままの形でベクターとして利用する、或いはこれ
らを素材としてベクター開発を行う事には、あまりに困
難が大きいものと考えられる。そこで、本発明者らは、
高度好熱菌より、選択マーカー（そのプラスミドが宿主
内に存在していることを示すマーカー）を有し、しかも
分子量の小さいプラスミドの検索を行った。その結果ス
トレプトマイシン耐性を示したリーマス・フラバスから
分子量０．９メガダルトンのプラスミドを単離する事に
成功した。
このプラスミドは、前記の制限酵素開裂地図に示された
如く、分子量が極めて小さくしかも数種の制限酵素によ
る切断点を特異的に有している（以下、本プラスミドを
ｐＮＨＳ１７１と略称する）。
如く、分子量が極めて小さくしかも数種の制限酵素によ
る切断点を特異的に有している（以下、本プラスミドを
ｐＮＨＳ１７１と略称する）。
なお、図に示されている制限酵素の略称は次のとおりで
ある。
ある。
ＢａｍＨＩはバチルス・アクロリクエファシエンス由来
の酵素、ＫｐｎＩはクレブシエラ・ニューモニア由来の
酵素、ＢｓｔＮＩはバチルス・ステアロサーモフィルス
由来の酵素を示す。
の酵素、ＫｐｎＩはクレブシエラ・ニューモニア由来の
酵素、ＢｓｔＮＩはバチルス・ステアロサーモフィルス
由来の酵素を示す。
以下、これまでに報告されているサーマス属細菌、即ち
高度好熱菌由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
高度好熱菌由来のプラスミドとの相違点を表に示す。
表から明らかのように、ＰＮＨＳ１７１は既存のプラス
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
ミドに較べ、分子量、制限酵素による切断パターンが明
らかに異なっており、新規なプラスミドであることが認
められる。
プラスミドＤＮＡがベクターたり得る為には、そのプラ
スミドが宿主内での自立的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須である。しかし、高度好
熱菌の様に、その生育環境が栄養源に乏しくしかも抗生
物質が存在しない様な温泉である菌について考えた場合
、薬剤耐性遺伝子等を有するプラスミドを得る事は容易
ではない。従って、性質が不明のいわゆるクリプティッ
ク・プラスミドに宿主染色体由来のマーカーを賦与する
という方式でベクター開発を行わなければならないであ
ろう。その際にｐＮＨＳ１７１を利用すれば、極めて便
利であるものと考えられる。
スミドが宿主内での自立的増殖能、及び選択マーカー（
そのプラスミドが宿主内に存在していることを示すマー
カー）を有していることが必須である。しかし、高度好
熱菌の様に、その生育環境が栄養源に乏しくしかも抗生
物質が存在しない様な温泉である菌について考えた場合
、薬剤耐性遺伝子等を有するプラスミドを得る事は容易
ではない。従って、性質が不明のいわゆるクリプティッ
ク・プラスミドに宿主染色体由来のマーカーを賦与する
という方式でベクター開発を行わなければならないであ
ろう。その際にｐＮＨＳ１７１を利用すれば、極めて便
利であるものと考えられる。
何故ならば、第１にｐＮＨＳ１７１は高度好熱菌で複製
が可能なプラスミドであるからであり、第２には、他の
高度好熱菌由来の既知のクリプティック・プラスミドに
比べてはるかに小さい分子量しか有しないという点から
、本プラスミドの必須領域、例えば複製開始点領域、複
製に関与する遺伝子等の解析が、他の分子量のより大き
なプラスミドよりも、はるかに容易に行えるという利点
を有しているからである。
が可能なプラスミドであるからであり、第２には、他の
高度好熱菌由来の既知のクリプティック・プラスミドに
比べてはるかに小さい分子量しか有しないという点から
、本プラスミドの必須領域、例えば複製開始点領域、複
製に関与する遺伝子等の解析が、他の分子量のより大き
なプラスミドよりも、はるかに容易に行えるという利点
を有しているからである。
更にｐＮＨＳ１７１は図からも明らかなように、Ｋｐｎ
Ｉ、ＢａｍＨＩなどの制限酵素による開裂部位を特定の
しかも限られた位置に有している。
Ｉ、ＢａｍＨＩなどの制限酵素による開裂部位を特定の
しかも限られた位置に有している。
このことはｐＮＨＳ１７１をベクターとして利用する際
に、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有意に保持でき
るという点で有利である。
に、挿入すべき異種遺伝子の導入部位を有意に保持でき
るという点で有利である。
さて、本プラスミドをベクターとして異種の耐熱性を有
する遺伝子を好熱菌に導入すれば、酵素工業に於ける冷
却コストの節減が達成されよう。
する遺伝子を好熱菌に導入すれば、酵素工業に於ける冷
却コストの節減が達成されよう。
また、耐熱性、耐溶媒性等の性質に優れた好熱菌の酵素
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
の遺伝子を、本プラスミドをベクターとして好熱菌宿主
にクローン化し、その量産を図る事によって、バイオリ
アクター等への応用が可能であり、工業プロセスへの応
用が期待される。
ｐＮＨＳ１７１の入手は、本発明者らが温泉水中から新
たに分離した高度好熱菌、リーマス・フラバスＴＳ株を
サーマス培地（ディフコ・イーストエキストラクト０．
４％、ポリペプトン（大五栄養）０．８％、ＮａＣｌ０
．２％）により対数増殖後期迄増殖させて得た菌体を、
リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌させる事によって
達せられるが、本プラスミドを保有する点で本菌株は新
規である。
たに分離した高度好熱菌、リーマス・フラバスＴＳ株を
サーマス培地（ディフコ・イーストエキストラクト０．
４％、ポリペプトン（大五栄養）０．８％、ＮａＣｌ０
．２％）により対数増殖後期迄増殖させて得た菌体を、
リゾチーム、ＳＤＳ処理によって溶菌させる事によって
達せられるが、本プラスミドを保有する点で本菌株は新
規である。
また、サーマス・フラバスＴＳ１７株は好気性のグラム
染色陰性の桿菌で、黄色々素を産出しＤＮＡのＧＣ含量
が約７０％、生育至適温度が７０℃の菌株であるがｐＮ
ＨＳ１７１を保有する点では従来には認められない新規
な微生物である。本菌株はストレプトマイシン耐性株と
して温泉水中より分離されたが、エリスロマイシン、カ
ナマイシンにも耐性を示し、アンピシリン、クロラムフ
ェニコール、ネオマイシン、テトンサイクリンには感受
性があった。
染色陰性の桿菌で、黄色々素を産出しＤＮＡのＧＣ含量
が約７０％、生育至適温度が７０℃の菌株であるがｐＮ
ＨＳ１７１を保有する点では従来には認められない新規
な微生物である。本菌株はストレプトマイシン耐性株と
して温泉水中より分離されたが、エリスロマイシン、カ
ナマイシンにも耐性を示し、アンピシリン、クロラムフ
ェニコール、ネオマイシン、テトンサイクリンには感受
性があった。
なお、本菌株は微工研菌寄第６７５１号として寄託され
ている。
ている。
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述する。
実施例１（菌株スクリーニング）
静岡県の熱川温泉の温泉水約１ｍｌをサーマス培地（デ
ィフコ・イーストエキストラクト０．４％、ポリペプト
ン（大五栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％）１００ｍ
ｌに加え７０℃で約１８時間振盪培養後、ストレプトマ
イシン（２０μｇ／ｍｌ）を含むリーマス寒天平板上で
生育したコロニーの一つからサーマス・フラバスＴＳ１
７株〈微工研菌寄第６７５１号〉が得られた。
ィフコ・イーストエキストラクト０．４％、ポリペプト
ン（大五栄養）０．８％、ＮａＣｌ０．２％）１００ｍ
ｌに加え７０℃で約１８時間振盪培養後、ストレプトマ
イシン（２０μｇ／ｍｌ）を含むリーマス寒天平板上で
生育したコロニーの一つからサーマス・フラバスＴＳ１
７株〈微工研菌寄第６７５１号〉が得られた。
実施例２
プラスミドｐＮＨＳ１７１のサーマス・フラバスＴＳ１
７株からの分離サーマス・フラバスＴＳ１７株（微工研
菌寄第６７５１号）の生物学的に純粋な溶媒基から１０
０ｍｌのサーマス培地（ディフコ・イーストエキストラ
クト０．４％、ポリペプトン（大五栄養）０．８％、Ｎ
ａＣｌ０．２％、ｐＨ７．５）に接種し７０℃で１６〜
１８時間振盪培養する。
７株からの分離サーマス・フラバスＴＳ１７株（微工研
菌寄第６７５１号）の生物学的に純粋な溶媒基から１０
０ｍｌのサーマス培地（ディフコ・イーストエキストラ
クト０．４％、ポリペプトン（大五栄養）０．８％、Ｎ
ａＣｌ０．２％、ｐＨ７．５）に接種し７０℃で１６〜
１８時間振盪培養する。
この培養液を１ｌのストレプトマイシン２０μｇ／ｍｌ
を含有するサーマス培地に接種し、７５℃で５時間培養
する。菌体を遠心によって集め、ＴＥＳ（２０ｍＭＴｒ
ｉｓ−Ｈｃｌ），５ｍＭＥＤｌＡ，１００ｍＭＮａＣｌ
ｐＨ７．５）で洗浄後菌体湿重量４ｇ当り、１０ｍｌ
の２５％ショ糖含有ＴＥＳに懸濁する。リゾチーム（１
０ｍｇ／ｍｌ）を２ｍｌ、０．２５Ｍ−ＥＤＴＡ（ｐＨ
８．０）４ｍｌを加え、０℃で１０分間静置、続いて３
７℃に１０分間保温する。この細胞混合液に２ｍｌの１
０％ＳＤＳ、５ｍｌの５Ｍ−ＮａＣｌを加え４℃に１５
〜１８時間静置する。これを２８０００ｒｐｍ、１時間
の超遠心によって遠心し、上清を得る。この上清にポリ
エチレングリコール６０００を１０％（ｗ／ｖ）加え、
２〜３時間０℃に静置、２２００ｒｐｍ、２分の遠心で
沈殿を得る。この沈殿を１５ｍｌにＴＥＳに溶解し、Ｃ
ｓＣｌ及びエチジウムプロマイドを加えて密度を１．６
１〜１．６２に調整する。この試料を３８００ｒｐｍで
３０〜４０時間、平衡密度勾配遠心する。生じたプラス
ミドＤＮＡのバンドを集め、イソアミルアルコールでエ
チジウムプロマイドを排除した後、ＴＥＮ（２０ｍＭＴ
ｒｉｓ−Ｈｃｌ，１ｍＭＥＤＴＡ，２０ｍＭＮａＣｌ）
に透析する事によってプラスミド溶液が得られる。この
プラスミド溶液はｐＮＨＳ１７１と分子量約１０メガダ
ルトンのｐＮＨＳ１７２との混合物であるが、このプラ
スミド溶液を１．０％の低融点アガロース（ＢＲＬ社製
）による電気泳動に供し、生ずるｐＮＨＳ１７１に相当
するバンドを切り出しｃＤＮＡを回収する事によって純
粋ｐＮＨＳ１７１が得られる。
を含有するサーマス培地に接種し、７５℃で５時間培養
する。菌体を遠心によって集め、ＴＥＳ（２０ｍＭＴｒ
ｉｓ−Ｈｃｌ），５ｍＭＥＤｌＡ，１００ｍＭＮａＣｌ
ｐＨ７．５）で洗浄後菌体湿重量４ｇ当り、１０ｍｌ
の２５％ショ糖含有ＴＥＳに懸濁する。リゾチーム（１
０ｍｇ／ｍｌ）を２ｍｌ、０．２５Ｍ−ＥＤＴＡ（ｐＨ
８．０）４ｍｌを加え、０℃で１０分間静置、続いて３
７℃に１０分間保温する。この細胞混合液に２ｍｌの１
０％ＳＤＳ、５ｍｌの５Ｍ−ＮａＣｌを加え４℃に１５
〜１８時間静置する。これを２８０００ｒｐｍ、１時間
の超遠心によって遠心し、上清を得る。この上清にポリ
エチレングリコール６０００を１０％（ｗ／ｖ）加え、
２〜３時間０℃に静置、２２００ｒｐｍ、２分の遠心で
沈殿を得る。この沈殿を１５ｍｌにＴＥＳに溶解し、Ｃ
ｓＣｌ及びエチジウムプロマイドを加えて密度を１．６
１〜１．６２に調整する。この試料を３８００ｒｐｍで
３０〜４０時間、平衡密度勾配遠心する。生じたプラス
ミドＤＮＡのバンドを集め、イソアミルアルコールでエ
チジウムプロマイドを排除した後、ＴＥＮ（２０ｍＭＴ
ｒｉｓ−Ｈｃｌ，１ｍＭＥＤＴＡ，２０ｍＭＮａＣｌ）
に透析する事によってプラスミド溶液が得られる。この
プラスミド溶液はｐＮＨＳ１７１と分子量約１０メガダ
ルトンのｐＮＨＳ１７２との混合物であるが、このプラ
スミド溶液を１．０％の低融点アガロース（ＢＲＬ社製
）による電気泳動に供し、生ずるｐＮＨＳ１７１に相当
するバンドを切り出しｃＤＮＡを回収する事によって純
粋ｐＮＨＳ１７１が得られる。
低融点アガロースゲルからのＤＮＡの回収は以下の手順
によった。切り出したゲルスライスを６５℃に保温して
融解、これに２倍量の０．５ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を加え、３７
℃に移し保温する。これに等量の０．１ＭＴｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ緩衝液（ｐＨ８．０）で飽和させたフェノールを加
え混合、遠心（３０００〜５０００ｒｐｍ、５分）後、
上層の水層を分取する。フェノール抽出をもう一度行い
エーテルによってフェノールを水層より除去した後、３
Ｍ酢酸アンモニウム溶液を１／１０容加え、３容エタノ
ールによりエタノール沈殿を行う。与えられた沈殿をＴ
ＥＮに溶解してプラスミド溶液とした。
によった。切り出したゲルスライスを６５℃に保温して
融解、これに２倍量の０．５ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）を加え、３７
℃に移し保温する。これに等量の０．１ＭＴｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ緩衝液（ｐＨ８．０）で飽和させたフェノールを加
え混合、遠心（３０００〜５０００ｒｐｍ、５分）後、
上層の水層を分取する。フェノール抽出をもう一度行い
エーテルによってフェノールを水層より除去した後、３
Ｍ酢酸アンモニウム溶液を１／１０容加え、３容エタノ
ールによりエタノール沈殿を行う。与えられた沈殿をＴ
ＥＮに溶解してプラスミド溶液とした。
ｐＮＨＳ１７１の特性決定の手順
ｐＮＨＳ１７１の分子量は、その超らせん構造（ｓｕｐ
ｅｒｃｏｉｌｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）のＤＮＡ及び制
限酵素によって切断された断片のアガロースゲル電気泳
動及びポリアクリルアミド・ゲル電気泳動より得られた
。
ｅｒｃｏｉｌｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）のＤＮＡ及び制
限酵素によって切断された断片のアガロースゲル電気泳
動及びポリアクリルアミド・ゲル電気泳動より得られた
。
この際の分子量マーカーはｐＢＲ３２２ＤＮＡ（２．６
７ｍｄ）、ＣｏｌＥＩＤＮＡ（４．２ｍｄ）及びラムダ
ＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩ分解断片（１４．６、５．８４
、４．０５、２．６７、１．３０、１．１７、０．３４
ｍｄ）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲＩ分解断片（１３．７
、４．７４．３．７３、３．４８、３．０２、２．１３
ｍｄ）、φ×１７４ＤＮＡのＨａｅＩＩＩ分解断片（０
．８３６、０．６６６、０．５３９、０．３７３、０．
１９２、０．１７４、０．１６７、０．１４５、０．１
２０、０．０７３、０．０４４ｍｄ）を用いた。制限酵
素による切断は、プラスミドＤＮＡ溶液からエタノール
沈殿によってＤＮＡを沈殿させ、適当な緩衝液に溶解し
て行なった。制限酵素は宝酒造および、ベーリンガー・
マンハイム社よりの市販品を用いた。アガロースゲル電
気泳動はシーケム社のアガロースを０．５％又は０．７
％の濃度で用い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル長さ
１ｃｍ当り１．５Ｖの定電圧で１５〜１７時間行なった
。
７ｍｄ）、ＣｏｌＥＩＤＮＡ（４．２ｍｄ）及びラムダ
ＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩ分解断片（１４．６、５．８４
、４．０５、２．６７、１．３０、１．１７、０．３４
ｍｄ）、ラムダＤＮＡのＥｃｏＲＩ分解断片（１３．７
、４．７４．３．７３、３．４８、３．０２、２．１３
ｍｄ）、φ×１７４ＤＮＡのＨａｅＩＩＩ分解断片（０
．８３６、０．６６６、０．５３９、０．３７３、０．
１９２、０．１７４、０．１６７、０．１４５、０．１
２０、０．０７３、０．０４４ｍｄ）を用いた。制限酵
素による切断は、プラスミドＤＮＡ溶液からエタノール
沈殿によってＤＮＡを沈殿させ、適当な緩衝液に溶解し
て行なった。制限酵素は宝酒造および、ベーリンガー・
マンハイム社よりの市販品を用いた。アガロースゲル電
気泳動はシーケム社のアガロースを０．５％又は０．７
％の濃度で用い、水平ゲル電気泳動槽によってゲル長さ
１ｃｍ当り１．５Ｖの定電圧で１５〜１７時間行なった
。
ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動は、生化学工業社製
のポリアクリルアミド・ビスアクリルアミドを用い、５
％濃度３０：１の架橋度のゲルによって垂直型スラブゲ
ル電気泳動槽により、ゲル長さ１ｃｍあたり１０Ｖの定
電圧によって２〜３時間行った。
のポリアクリルアミド・ビスアクリルアミドを用い、５
％濃度３０：１の架橋度のゲルによって垂直型スラブゲ
ル電気泳動槽により、ゲル長さ１ｃｍあたり１０Ｖの定
電圧によって２〜３時間行った。
高度好熱菌のプラスミドとしては、前記の表に示したと
おりであるがｐＮＨＳ１７１と他のものでは前述のよう
に明らかに異なっており、ｐＮＨＳ１７１は従来認めら
れない新規なプラスミドである。
おりであるがｐＮＨＳ１７１と他のものでは前述のよう
に明らかに異なっており、ｐＮＨＳ１７１は従来認めら
れない新規なプラスミドである。
Claims (1)
- 分子量が葯０．９メガダルトンであり、図に示される制
限酵素地図で特徴づけられるプラスミドを保存する新規
なサーマス・フラバスＴＳ１７株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189522A JPS5953830B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規なプラスミドを保有する新規な微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189522A JPS5953830B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規なプラスミドを保有する新規な微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5978683A true JPS5978683A (ja) | 1984-05-07 |
| JPS5953830B2 JPS5953830B2 (ja) | 1984-12-27 |
Family
ID=16242692
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57189522A Expired JPS5953830B2 (ja) | 1982-10-28 | 1982-10-28 | 新規なプラスミドを保有する新規な微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5953830B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03540Y2 (ja) * | 1984-10-26 | 1991-01-10 |
-
1982
- 1982-10-28 JP JP57189522A patent/JPS5953830B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5953830B2 (ja) | 1984-12-27 |
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