JPS594993B2 - 発酵法によるｌ−リジンの製法 - Google Patents
発酵法によるｌ−リジンの製法Info
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- JPS594993B2 JPS594993B2 JP15927776A JP15927776A JPS594993B2 JP S594993 B2 JPS594993 B2 JP S594993B2 JP 15927776 A JP15927776 A JP 15927776A JP 15927776 A JP15927776 A JP 15927776A JP S594993 B2 JPS594993 B2 JP S594993B2
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- lysine
- medium
- fermentation
- culture
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は発酵法によるＬ−リジンの製法に関する。
従来知られている発酵法によるＬ−ＩＪリジン製造法は
、ホモセリン要求性変異株等の栄養要求性変異株、スレ
オニン感受性変異株、５−（２−アミノエチル）Ｌ−シ
スティン（以下ＡＢＣと記す耐性変異株等の代謝調節変
異株を用いる方法の２つに分けられる。
、ホモセリン要求性変異株等の栄養要求性変異株、スレ
オニン感受性変異株、５−（２−アミノエチル）Ｌ−シ
スティン（以下ＡＢＣと記す耐性変異株等の代謝調節変
異株を用いる方法の２つに分けられる。
本発明者らは、より効率の高いＬ −ＩＪレジン産菌を
誘導すべく研究した結果、ブレビバクテリウム属又は、
コリネバクテリウム属に属し、リジンアナログに耐性を
有し、かつ少くとも一つのキノン又は、キノリン骨格を
有する化合物に耐性を有する変異株が、極めて高い収率
で、Ｌ −ＩＪリジン生産することを見い出した。
誘導すべく研究した結果、ブレビバクテリウム属又は、
コリネバクテリウム属に属し、リジンアナログに耐性を
有し、かつ少くとも一つのキノン又は、キノリン骨格を
有する化合物に耐性を有する変異株が、極めて高い収率
で、Ｌ −ＩＪリジン生産することを見い出した。
この発明は、この知見にもとすいて完成されるに到った
ものである。
ものである。
本発明の変異株が、著量のＬ−ＩＪリジン生産する機構
は、明らかでないが、上記栄養要求性変異株にも属さず
、又、上記の代謝調節変異株にも属さない新しい型の変
異株であることは明らかである。
は、明らかでないが、上記栄養要求性変異株にも属さず
、又、上記の代謝調節変異株にも属さない新しい型の変
異株であることは明らかである。
本発明に於て用いる微生物は、グルタミン酸生産菌とし
て知られている代表的な微生物、ブレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属、アルスロバクタ−属もしくは
、ノカルディア属などに属する微生物を親株として通常
の変異誘導法、およびスクリーニング法により採取され
るところのリジンアナログに耐性を有し、かつ少くとも
一つのキノン又はキノリン骨格を有する化合物に耐性を
有する変異株である。
て知られている代表的な微生物、ブレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属、アルスロバクタ−属もしくは
、ノカルディア属などに属する微生物を親株として通常
の変異誘導法、およびスクリーニング法により採取され
るところのリジンアナログに耐性を有し、かつ少くとも
一つのキノン又はキノリン骨格を有する化合物に耐性を
有する変異株である。
本発明におけるリジンアナログとは、以下のような性質
を有する化合物であり、例えばＡＢＣ１α−ハロゲノカ
プロラクタム、γ−メチルリジン等がある。
を有する化合物であり、例えばＡＢＣ１α−ハロゲノカ
プロラクタム、γ−メチルリジン等がある。
（１）化学構造がリジンに類似する。
（２）ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属等
の微生物の増殖を抑制する。
の微生物の増殖を抑制する。
（３）上記増殖の抑制は、培地にＬ −ＩＪリジン添加
することにより解除される。
することにより解除される。
本発明におけるキノンまたはキノリン骨格を有する化合
物とは以下のような性質を有する化合物であり、例えば
８−ハイドロキシキノリン（以下８−Ｑと記す）、８−
ハイドロキシキノリン−５−スルフォン酸、５，８−ジ
オキソ−６−アミツーアークロロキノリン（以下ＰＹと
記す）等のキノリン誘導体、１，４−ナフトキノン（以
下１゜４−ＮＱと記す）、１，２−ナフトキノン（以下
１．２−ＮＱと記す）、２，３−ジクロロナフトキノン
（以下ＣＮＱと記す）、５−カルボキシ−３１−チア−
６′−アザ−２，３−シクロヘキセノナフタレン−１，
４−キノン、６ ’−（Ｓ）−カルボキシ−３′−チア
−７フーアザー２，３−シクロへブテノナフタレン−１
，４−キノン（以下ＰＸと記す）、Ｎα、Ｎε−ビス（
３−クロロ−１，４−ナフト−２−キノリル）−Ｌ−Ｉ
ＪリジＣ以下ＰＬと記す）及びグラナチシン（以下ＧＲ
と記す：等がある。
物とは以下のような性質を有する化合物であり、例えば
８−ハイドロキシキノリン（以下８−Ｑと記す）、８−
ハイドロキシキノリン−５−スルフォン酸、５，８−ジ
オキソ−６−アミツーアークロロキノリン（以下ＰＹと
記す）等のキノリン誘導体、１，４−ナフトキノン（以
下１゜４−ＮＱと記す）、１，２−ナフトキノン（以下
１．２−ＮＱと記す）、２，３−ジクロロナフトキノン
（以下ＣＮＱと記す）、５−カルボキシ−３１−チア−
６′−アザ−２，３−シクロヘキセノナフタレン−１，
４−キノン、６ ’−（Ｓ）−カルボキシ−３′−チア
−７フーアザー２，３−シクロへブテノナフタレン−１
，４−キノン（以下ＰＸと記す）、Ｎα、Ｎε−ビス（
３−クロロ−１，４−ナフト−２−キノリル）−Ｌ−Ｉ
ＪリジＣ以下ＰＬと記す）及びグラナチシン（以下ＧＲ
と記す：等がある。
（１）ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属等
の微生物の増殖を抑制する。
の微生物の増殖を抑制する。
（２） この増殖の抑制はＬ−ロイシンを培地に添加
することにより部分的に又は全部解除される。
することにより部分的に又は全部解除される。
以下に本発明の変異株について、その具体的誘導方法の
１例と得られた菌株について、キノン又は、キノリン誘
導体に対する耐性の度合いを示す実験例を示す。
１例と得られた菌株について、キノン又は、キノリン誘
導体に対する耐性の度合いを示す実験例を示す。
なおＣＣＬはα−クロロカプロラクタムを示す。
（１） ｊレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム
ＡＪ１１０８２（ＦＥＲＭ−Ｐ ３８４０）（ＡＥＣ
’ ＣＣＬｒＡｌａ−）を、常法ニヨリＮ−メチルーＮ
′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンにて処理（２５０
ｔｄ！／ｍｌ、 ３０℃で３０分）した後、以下に示
す最少培地に、８−Ｑ、ＰＹ。
ＡＪ１１０８２（ＦＥＲＭ−Ｐ ３８４０）（ＡＥＣ
’ ＣＣＬｒＡｌａ−）を、常法ニヨリＮ−メチルーＮ
′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンにて処理（２５０
ｔｄ！／ｍｌ、 ３０℃で３０分）した後、以下に示
す最少培地に、８−Ｑ、ＰＹ。
１’、４−ＮＱ、１．２−ＮＱ、ＣＮＱ、ＧＲ。
ＰＸ、又はＰＬをそれぞれ、５ ｐｆｉ／ｍｌ 、 ５
μｇ７＜ｍｌ 、 １０μＬ／続、１０μｍ／ｌ 、
１０μｇ／ｍｌ 、 ｉ ｐ、ｇ／ｍｌ 、 ３０ ｐ
、 ｇ／ｍｌ、又は３０ｐｇ／ｄ添加した培地に接種し
、３１．５℃で振とうし、耐性株の集積培養を行なった
。
μｇ７＜ｍｌ 、 １０μＬ／続、１０μｍ／ｌ 、
１０μｇ／ｍｌ 、 ｉ ｐ、ｇ／ｍｌ 、 ３０ ｐ
、 ｇ／ｍｌ、又は３０ｐｇ／ｄ添加した培地に接種し
、３１．５℃で振とうし、耐性株の集積培養を行なった
。
２〜７日後、菌の生育が認められた培養液を、下記培地
組成の分離用培地に塗床し、２〜４日間３１℃にて培養
し、生じたコロニーを採取した。
組成の分離用培地に塗床し、２〜４日間３１℃にて培養
し、生じたコロニーを採取した。
最少培地組成
グルコース ２ ｇ／ｄｌｌ尿素
０．２５ ｇ／ｄｌ 硫酸アンモニウム １ ｇ／ｄｌＫＨ２Ｐ
０． ０．１ ９／ａ１ＭｇＳ０４・７Ｈ２
００，０４ｇ／ｄｌ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１ｒｒ１？／ｄ１ Ｍｎ Ｓ ０４ ・４Ｈ２０１”９／ ｄ １１ビオチ
ン ５０ μｇ／ １３サイアミン塩酸
塩 １００ μｇ／１１ＮａＣ１５ｍｌ／ｄｌ Ｌ−７ラー＝−７ｐＨ７，２５０ｍ９７ ｄｌｌニコチ
ン酸アミド ０．５ ■／ｄ７この様にして
得られた各種キノン又はキノリン骨格を有する化合物に
耐性を有しかつリジンアナログに耐性を有する菌の内、
Ｌ −ＩＪレジン産能のすぐれた変異株としてＡＪ１１
０８３（ＦＥＲＭ−Ｐ３８４１ ）（ＡＥＯｒ、ＣＣＬ
ｒ、ＡＡａ−，８−Ｑ’）ＡＪ１１０８４（ＦＥＲＭ−
Ｐ３８４２）（ＡＥＣｒ。
０．２５ ｇ／ｄｌ 硫酸アンモニウム １ ｇ／ｄｌＫＨ２Ｐ
０． ０．１ ９／ａ１ＭｇＳ０４・７Ｈ２
００，０４ｇ／ｄｌ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１ｒｒ１？／ｄ１ Ｍｎ Ｓ ０４ ・４Ｈ２０１”９／ ｄ １１ビオチ
ン ５０ μｇ／ １３サイアミン塩酸
塩 １００ μｇ／１１ＮａＣ１５ｍｌ／ｄｌ Ｌ−７ラー＝−７ｐＨ７，２５０ｍ９７ ｄｌｌニコチ
ン酸アミド ０．５ ■／ｄ７この様にして
得られた各種キノン又はキノリン骨格を有する化合物に
耐性を有しかつリジンアナログに耐性を有する菌の内、
Ｌ −ＩＪレジン産能のすぐれた変異株としてＡＪ１１
０８３（ＦＥＲＭ−Ｐ３８４１ ）（ＡＥＯｒ、ＣＣＬ
ｒ、ＡＡａ−，８−Ｑ’）ＡＪ１１０８４（ＦＥＲＭ−
Ｐ３８４２）（ＡＥＣｒ。
ＣＣＬ’、Ａｌａ 、ＰＹｒ）、ＡＪ １１０８５（
１０８５（ＦＥＲ４３）（ＡＥＣｒ、ＣＣＬ’、Ａｌａ
−，１，４−ＮＱｒ）、ＡＪ１１０８６（ＦＥＲＭ−Ｐ
３８４４）（ＡＥＯｒ、ＣＣＬｒ、Ａｌａ−，１，２−
ＮＱｒ）ｊＡＪ −１１０８７（ＦＥＲＭ−Ｐ３８１０
８７（ＦＥＲ。
１０８５（ＦＥＲ４３）（ＡＥＣｒ、ＣＣＬ’、Ａｌａ
−，１，４−ＮＱｒ）、ＡＪ１１０８６（ＦＥＲＭ−Ｐ
３８４４）（ＡＥＯｒ、ＣＣＬｒ、Ａｌａ−，１，２−
ＮＱｒ）ｊＡＪ −１１０８７（ＦＥＲＭ−Ｐ３８１０
８７（ＦＥＲ。
ＣＣＬｒ、ＡＡａ−、ＣＮＱｒ）、ＡＪ １１０８８（
ＦＥＲＭ−Ｐ３１０８８（ＦＥＲ，ＣＣＬ’、Ａｌａ−
、ＧＲ’）、ＡＪ１１０８９（ＦＥＲＨ−Ｐ３８４７）
（ＡＥＣｒ。
ＦＥＲＭ−Ｐ３１０８８（ＦＥＲ，ＣＣＬ’、Ａｌａ−
、ＧＲ’）、ＡＪ１１０８９（ＦＥＲＨ−Ｐ３８４７）
（ＡＥＣｒ。
ＣＣＬｒ、ＡＡａ−、ＰＸｒ）、及びＡＪ１１０９０（
ＦＥＲＭ−Ｐ３８４８ ）（ＡＲＣｒ、ＣＣＬｒ。
ＦＥＲＭ−Ｐ３８４８ ）（ＡＲＣｒ、ＣＣＬｒ。
Ａｌａ−ｔｐｘｒ）、を採取した。
又、同様の方法によりコリネバクテリウム・アセトグル
タミクムＡＪ１１０９４（ＦＦＲＭ−Ｐ３８１０９４（
ＦＦＲ。
タミクムＡＪ１１０９４（ＦＦＲＭ−Ｐ３８１０９４（
ＦＦＲ。
Ａｌａ−）を親株として処理することにより、Ｌ −リ
ジン生成能の優れたキノンまたはキノリン骨格を有する
化合物に耐性を有する変異株としてＡＪ１１０９５（Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ３８５７）（ＡＥＣｒ。
ジン生成能の優れたキノンまたはキノリン骨格を有する
化合物に耐性を有する変異株としてＡＪ１１０９５（Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ３８５７）（ＡＥＣｒ。
Ａｌａ−，８−Ｑｒ）およびＡＪ １１０９６（ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ３８５８）（ＡＥＣｒ、ＡＡａ−、ＰＸｒ）を採
取した。
Ｍ−Ｐ３８５８）（ＡＥＣｒ、ＡＡａ−、ＰＸｒ）を採
取した。
（２） ＡＪ １１０８３ 、 ＡＪ １１０８４
、 ＡＪｌ １０８５ 、 ＡＪ １１０８６ 、 Ａ
Ｊ １１０８７ 。
、 ＡＪｌ １０８５ 、 ＡＪ １１０８６ 、 Ａ
Ｊ １１０８７ 。
ＡＪ １１０８８ 、 ＡＪ １１０８９ 、及びＡＪ
１１０９０についてキノン又はキノリン骨格を有する化
合物に対する耐性の度合いを調べた。
１１０９０についてキノン又はキノリン骨格を有する化
合物に対する耐性の度合いを調べた。
結果を第２表に示す。
ＡＪ １１０８３ 、 ＡＪ １１０８４ 、 ＡＪ１
１０８５、ＡＪ−１１０８６，ＡＪ１１０８７゜ＡＪ
１１０８９およびＡＪ １１０９０の菌体を下記組成の
液体培地で洗浄後その６ｒｒＬｌにそれぞれけん濁した
。
１０８５、ＡＪ−１１０８６，ＡＪ１１０８７゜ＡＪ
１１０８９およびＡＪ １１０９０の菌体を下記組成の
液体培地で洗浄後その６ｒｒＬｌにそれぞれけん濁した
。
（このけん濁液の５６２ｍμにおける吸光度はその２６
倍希釈液として０．３３０゜０°３００．０．３２０．
０．３３０．０．３００ 。
倍希釈液として０．３３０゜０°３００．０．３２０．
０．３３０．０．３００ 。
０．３００，０．３３０であった。
）これを、下記の液体培地に第２表に記載した濃度の８
−Ｑ。
−Ｑ。
ＰＹ、１．４−ＮＱ、１．２−ＮＱ、ＣＮＱ。
ＧＲ，ＰＸ、又はＰＬを添加した培地を、３１ｒＬｌづ
つ入れた試験管に、０．１ ｄづつ接種して３０℃にて
２４時間培養した。
つ入れた試験管に、０．１ ｄづつ接種して３０℃にて
２４時間培養した。
又、対照としてＡＪ １１０８２を同様に培養した。
培地組成ニ
ゲルコース ２ ９／ｄｌ（ＮＨ４）２
Ｓ０４ １ ｇ／ｄｌＫＨ２Ｐ０．
０．１ ｊｉ／ｄｉ！；ＭｇＳＯ４・７Ｈ
２００，０４９／ｄｌ ＮａＣＩ Ｏ，０５ｇ／ｄｌ尿素
０．２５ｇ／ｄｌ ビオチン ５０ μｍ１／１サイアミン
塩酸塩 ２００ ／１ＦｅＳＯ４−’ｙＨ
２ｏ １〜／ＵＭｎＳＯ４・４Ｈ２ｏ
１ ’％’／ ＵＬ−アラニン
５０ η／Ｕニコチン酸アミド ５
■／ｌｐＨ７、２（ＫＯＨによる） 結果は、第１表の如くであり、親株のＡＪ１１０８２株
は、キノン及びキノリン骨格を有する化合物を含有する
培地ではほとんど生育し得なかったが、ＡＪ１１０８３
．ＡＪ１１０８４゜ＡＪ１１０８５．ＡＪ１１０８６．
ＡＪ１１０８７．ＡＪ１１０８８、ＡＪ１ｉ０８９．及
びＡＪ１１０９０は十分生育した。
Ｓ０４ １ ｇ／ｄｌＫＨ２Ｐ０．
０．１ ｊｉ／ｄｉ！；ＭｇＳＯ４・７Ｈ
２００，０４９／ｄｌ ＮａＣＩ Ｏ，０５ｇ／ｄｌ尿素
０．２５ｇ／ｄｌ ビオチン ５０ μｍ１／１サイアミン
塩酸塩 ２００ ／１ＦｅＳＯ４−’ｙＨ
２ｏ １〜／ＵＭｎＳＯ４・４Ｈ２ｏ
１ ’％’／ ＵＬ−アラニン
５０ η／Ｕニコチン酸アミド ５
■／ｌｐＨ７、２（ＫＯＨによる） 結果は、第１表の如くであり、親株のＡＪ１１０８２株
は、キノン及びキノリン骨格を有する化合物を含有する
培地ではほとんど生育し得なかったが、ＡＪ１１０８３
．ＡＪ１１０８４゜ＡＪ１１０８５．ＡＪ１１０８６．
ＡＪ１１０８７．ＡＪ１１０８８、ＡＪ１ｉ０８９．及
びＡＪ１１０９０は十分生育した。
これらの微生物をもちいてＬ−ＩＪレジン生産せしめる
には、とくに困難はなく、炭素源、窒素源、無機塩類、
生育因子および使用する微生物が要求する栄養物質を含
有する通常の栄養培地をもちいて常法によりおこなう。
には、とくに困難はなく、炭素源、窒素源、無機塩類、
生育因子および使用する微生物が要求する栄養物質を含
有する通常の栄養培地をもちいて常法によりおこなう。
もちいられる炭素源としては、グルコーズ、シュークロ
ーズ、糖蜜、デンプン加水分解液などの糖類、酢酸、プ
ロピオン酸などの有機酸、エタノール、プＯ／々ソール
などのアルコール類、安息香酸などの有機化合物、更ｔ
こ菌を選べば、炭化水素なども使用できる。
ーズ、糖蜜、デンプン加水分解液などの糖類、酢酸、プ
ロピオン酸などの有機酸、エタノール、プＯ／々ソール
などのアルコール類、安息香酸などの有機化合物、更ｔ
こ菌を選べば、炭化水素なども使用できる。
窒素源としては、硫安、硝安、塩安、リン安、尿素アン
モニアその他を使用できる。
モニアその他を使用できる。
又、栄養要求性を示す変異株に対しては、栄養要求物質
を、純標品として、もしくはそれらを含有するもの、例
えば、大豆タンパク質加水分解物、コーン・ステイープ
・リカー、酵母エキス、あるいはペプトンなどの形で、
天然物質を、添加使用することができる。
を、純標品として、もしくはそれらを含有するもの、例
えば、大豆タンパク質加水分解物、コーン・ステイープ
・リカー、酵母エキス、あるいはペプトンなどの形で、
天然物質を、添加使用することができる。
更にＡＪ１１０８２株および、それから誘導された変異
株の場合は、ニコチン酸アミド、にコチン酸でも可）の
添加によって、その生育が促進されるので、本菌の培養
に当っては、ニコチン酸アミド（又は、ニコチン酸）、
含有物質、又はニコチン酸アミド（又はニコチン酸）そ
のものを必要に応じて添加することが好ましい。
株の場合は、ニコチン酸アミド、にコチン酸でも可）の
添加によって、その生育が促進されるので、本菌の培養
に当っては、ニコチン酸アミド（又は、ニコチン酸）、
含有物質、又はニコチン酸アミド（又はニコチン酸）そ
のものを必要に応じて添加することが好ましい。
本発酵の条件は、通気培養が良く、発酵湯度は、２４〜
３７℃、発酵日数は通常２〜７日である。
３７℃、発酵日数は通常２〜７日である。
発酵開始時および培養中のｐＨは４．０〜９．０が良く
、ｐＨの調整には、無機あるいは有機の酸性あるいはア
ルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニ
アガスなどを使用することができる。
、ｐＨの調整には、無機あるいは有機の酸性あるいはア
ルカリ性物質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニ
アガスなどを使用することができる。
発酵液からのＬ −ＩＪレジン採取は、通常イオン交換
樹脂法、その他の公知の方法を組み合わせることにより
、おこなわれ、培地の種類によっては、直接晶析法によ
り行なうことも可能である。
樹脂法、その他の公知の方法を組み合わせることにより
、おこなわれ、培地の種類によっては、直接晶析法によ
り行なうことも可能である。
実櫂例 １
下記の組成の培地を２０ｄ宛、５００ｄ容振とうフラス
コに分注し、１１０℃にて５分間蒸気殺菌した。
コに分注し、１１０℃にて５分間蒸気殺菌した。
培地組成
グルコース １０ ｆｌ／ｄｌ硫酸
アンモニウム ４．５ ｇ／ｄｌＫＨ２ＰＯ
４０，１ｇ／ｄ１ ＭｇＳＯ，・７Ｈ２００，０４ｇ／ｄｌｌＦｅＳ０ ・
７ＨＯ１■／ｄ１ ２ Ｍｎ５０ ・４ＨＯ１ｍ９／ｄ１ ２ ビオチン ５販Ｅｌ／１ サイアミン塩酸塩 ２０ｏｌｔｇ／ｌ 大豆タンパク塩酸加水 分解液濃ｉｍｒ物１．５ ｍｌ／ ａ ｌ（総窒素 ７
係） 炭酸カルシウム （別殺菌添加） ５ ｇ／ｄｌ ｐＨ７，０ 上記の如く調整したフラスコ中の培地に、あらかじめグ
ルコーズ・ブイヨンフラント上で生育せしめたブレビバ
クテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ１１０８３．Ａ
Ｊ１１０８４．ＡＪ１１０８５、ＡＪ１１０８６．ＡＪ
１１０８８゜ＡＪ１１０８９．もしくはＡＪ１１０９０
、またはコリネバクテリウム・アセトグルタミクムＡＪ
１１０９５もしくはＡＪ−１１０９６を１白金耳つつ接
種し、それらを３１℃にて７２時間振とう培養した。
アンモニウム ４．５ ｇ／ｄｌＫＨ２ＰＯ
４０，１ｇ／ｄ１ ＭｇＳＯ，・７Ｈ２００，０４ｇ／ｄｌｌＦｅＳ０ ・
７ＨＯ１■／ｄ１ ２ Ｍｎ５０ ・４ＨＯ１ｍ９／ｄ１ ２ ビオチン ５販Ｅｌ／１ サイアミン塩酸塩 ２０ｏｌｔｇ／ｌ 大豆タンパク塩酸加水 分解液濃ｉｍｒ物１．５ ｍｌ／ ａ ｌ（総窒素 ７
係） 炭酸カルシウム （別殺菌添加） ５ ｇ／ｄｌ ｐＨ７，０ 上記の如く調整したフラスコ中の培地に、あらかじめグ
ルコーズ・ブイヨンフラント上で生育せしめたブレビバ
クテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ１１０８３．Ａ
Ｊ１１０８４．ＡＪ１１０８５、ＡＪ１１０８６．ＡＪ
１１０８８゜ＡＪ１１０８９．もしくはＡＪ１１０９０
、またはコリネバクテリウム・アセトグルタミクムＡＪ
１１０９５もしくはＡＪ−１１０９６を１白金耳つつ接
種し、それらを３１℃にて７２時間振とう培養した。
又、対照として、親株であるブレビバクテリウム・ラク
トフェルインタムＡＪ１１０８２および、コリネバクテ
リウム・アセトグルタミクムＡＪ −１１０９４を同じ
培地、培養条件で培養した。
トフェルインタムＡＪ１１０８２および、コリネバクテ
リウム・アセトグルタミクムＡＪ −１１０９４を同じ
培地、培養条件で培養した。
７２時間培養後の培地中のＬ−ＩＪレジン成量を、酸性
−銅ニンヒドリン反応を用いる比色法によって行なった
。
−銅ニンヒドリン反応を用いる比色法によって行なった
。
結果を第２表に示す。ＡＪ１１０８９株の培養終了液を
集め遠心分離によって、菌体及びカルシウム塩を除いた
上清液１１を、強酸性イオン交換樹脂（「アンバーライ
トＪ Ｉ Ｒ−１２０ＣＨ型）に通過させ、Ｌ−リジン
を吸着させた。
集め遠心分離によって、菌体及びカルシウム塩を除いた
上清液１１を、強酸性イオン交換樹脂（「アンバーライ
トＪ Ｉ Ｒ−１２０ＣＨ型）に通過させ、Ｌ−リジン
を吸着させた。
ついで、３％アンモニア水で、吸着したＬ −リジンを
溶出し、溶出液を減圧濃縮した。
溶出し、溶出液を減圧濃縮した。
濃縮液に塩酸を添加したのち、冷却し、Ｌ−リジンを、
Ｌ−リジン塩酸塩第２水加物として析出させ、結晶３７
、５．９を得た。
Ｌ−リジン塩酸塩第２水加物として析出させ、結晶３７
、５．９を得た。
実姉例 ２
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ１１０
８９及び、その親株ＡＪ １１０８２をそれぞれスラン
ト上より１白金耳かきとり、欠配種培養培地５０１′Ｉ
Ｌｌに接種し、１８時間、３１℃にて通気攪拌培養をお
こなって種培養液を調整した種培養培地組成： グリコース １．５７９／ｄｌｌ酢
酸アンモニウム ０．３９７ｄｌ尿素
０．１ Ｖｃｔノ ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ／ｄ１ ＭｇＳ０４・７Ｈ２００，０４ｇ／ｄ １ＦｅＳＯ４・
７Ｈ２０１”／ｄＡ’ ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０１ｍ９／／ｄｌ ピオチン ５０４／ｉｔサイアミ
ン塩酸塩 ２００ ｔｔｌ／１３大豆タンパ
ク塩酸加水 分解液濃縮物 ２ ｍｌ！／ｄｌ（
総窒素 ７条） ｐＨ７，５ 一方、１ノ容小型ガラス製ジヤー・ファーメンタ−に欠
配の組成より成る主発酵培地を３００ゴ宛分注し、常法
により殺菌した。
８９及び、その親株ＡＪ １１０８２をそれぞれスラン
ト上より１白金耳かきとり、欠配種培養培地５０１′Ｉ
Ｌｌに接種し、１８時間、３１℃にて通気攪拌培養をお
こなって種培養液を調整した種培養培地組成： グリコース １．５７９／ｄｌｌ酢
酸アンモニウム ０．３９７ｄｌ尿素
０．１ Ｖｃｔノ ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ／ｄ１ ＭｇＳ０４・７Ｈ２００，０４ｇ／ｄ １ＦｅＳＯ４・
７Ｈ２０１”／ｄＡ’ ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０１ｍ９／／ｄｌ ピオチン ５０４／ｉｔサイアミ
ン塩酸塩 ２００ ｔｔｌ／１３大豆タンパ
ク塩酸加水 分解液濃縮物 ２ ｍｌ！／ｄｌ（
総窒素 ７条） ｐＨ７，５ 一方、１ノ容小型ガラス製ジヤー・ファーメンタ−に欠
配の組成より成る主発酵培地を３００ゴ宛分注し、常法
により殺菌した。
これらに上記の種培養液をそれぞれ１５１ｒＬｌ宛接種
し、３１℃にて通気攪拌培養を開始した。
し、３１℃にて通気攪拌培養を開始した。
主発酵培地組成：
グルコーズ ２１７７ｄｌ酢酸アン
モニウム ０．５ ｇ／ｄｌ尿素
０．２ ｆｉ／ｄｌ ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ／ｄ１ Ｍｇ ８０４・７Ｈ２００，０４９／ｄｌＦｅＳ０４・
７Ｈ２０１ｒｒＬＶｄ１ ＭｎＳＯ４”４Ｈ２０１ｍｐ／ｄＡ’ ピオチン ５０ μｇ／／１サイア
ミン塩酸塩 ５０４／ｌニコチン酸アミド
１■／ｌ大豆タンパク塩酸加水 分解液濃縮物 ３ＴＬｌ／ｄｌ（総
窒素 ７係） ｐＨ７，２ 培養液中に、酢酸と酢酸アンモニウムとの混合液（酢酸
：酢酸アンモニウムとの混合液のモル比は１：０．２５
、混合液の酢酸濃度は６０チ）を培地のｐＨを、７．２
〜８．０の間ｌこ保持するように添加して３１°〜３３
℃で、５５時間培養を行なった。
モニウム ０．５ ｇ／ｄｌ尿素
０．２ ｆｉ／ｄｌ ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ／ｄ１ Ｍｇ ８０４・７Ｈ２００，０４９／ｄｌＦｅＳ０４・
７Ｈ２０１ｒｒＬＶｄ１ ＭｎＳＯ４”４Ｈ２０１ｍｐ／ｄＡ’ ピオチン ５０ μｇ／／１サイア
ミン塩酸塩 ５０４／ｌニコチン酸アミド
１■／ｌ大豆タンパク塩酸加水 分解液濃縮物 ３ＴＬｌ／ｄｌ（総
窒素 ７係） ｐＨ７，２ 培養液中に、酢酸と酢酸アンモニウムとの混合液（酢酸
：酢酸アンモニウムとの混合液のモル比は１：０．２５
、混合液の酢酸濃度は６０チ）を培地のｐＨを、７．２
〜８．０の間ｌこ保持するように添加して３１°〜３３
℃で、５５時間培養を行なった。
結果を第３表に示す。
ＡＪ１１０８９の発酵終了液３００ｄから、実施例１と
同様の方法により１８．１のＬ−リジン塩酸塩第２加水
物結晶を得た。
同様の方法により１８．１のＬ−リジン塩酸塩第２加水
物結晶を得た。
実姉例 ３
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＪ１１０
８９及びその親株である同ＡＪ１１０８２を、それぞれ
１白金耳、実姉例２に示した種培養培地（但し、酢酸ア
ンモニウムの代りにエチルアルコールを０．５％使用し
、さらに尿素を０．３９／ｄｌに変更した）５０１ｒＬ
ｌに接種し、１８時間３１℃にて通気攪拌培養を行なっ
た。
８９及びその親株である同ＡＪ１１０８２を、それぞれ
１白金耳、実姉例２に示した種培養培地（但し、酢酸ア
ンモニウムの代りにエチルアルコールを０．５％使用し
、さらに尿素を０．３９／ｄｌに変更した）５０１ｒＬ
ｌに接種し、１８時間３１℃にて通気攪拌培養を行なっ
た。
一方、１１容の小型ガラス製ジャーファーメンタ−に実
姉例２において示した主発酵培地（但し、グルコーズ濃
度は、１ｉ／ｄｌになるようにし、酢酸アンモニウムの
代りにエチルアルコールを１ｆｉ／ｄｌ、硫酸アンモニ
ウムを０．５ｇ／ｄｌ添加した。
姉例２において示した主発酵培地（但し、グルコーズ濃
度は、１ｉ／ｄｌになるようにし、酢酸アンモニウムの
代りにエチルアルコールを１ｆｉ／ｄｌ、硫酸アンモニ
ウムを０．５ｇ／ｄｌ添加した。
）を３００１１Ｌｌ宛分注し、殺菌した。
これらに上記の種培養液をそれぞれ１５ｒｒＬｌ宛接種
し、３１℃にて通気攪拌培養を開始した。
し、３１℃にて通気攪拌培養を開始した。
培養中、アンモニアガスによりｐＨを、７．２〜８．２
の間に保持した。
の間に保持した。
エチルアルコールは、その消費をカスクロマトグラフで
定量し、その培地中の濃度が０．３ｉ／ｄｌに減少した
とき少量培地に添加した。
定量し、その培地中の濃度が０．３ｉ／ｄｌに減少した
とき少量培地に添加した。
３１〜３３℃で、４８時間培養後、それぞれ第４表に示
す量のＬ−ＩＪグリン培養液中に蓄積した。
す量のＬ−ＩＪグリン培養液中に蓄積した。
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属
に属し、リジンアナログに耐性を有し、少くとも一つの
キノン又はキノリン骨格を有する化合物に耐性を有し、
かつＩ、−ＩＪリジン生成蓄積する能力を有する変異株
を培養し、生成蓄積したＬ−リジンを採取することを特
徴とする発酵法によるＬ−リジンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15927776A JPS594993B2 (ja) | 1976-12-29 | 1976-12-29 | 発酵法によるｌ−リジンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15927776A JPS594993B2 (ja) | 1976-12-29 | 1976-12-29 | 発酵法によるｌ−リジンの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5386089A JPS5386089A (en) | 1978-07-29 |
| JPS594993B2 true JPS594993B2 (ja) | 1984-02-02 |
Family
ID=15690258
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15927776A Expired JPS594993B2 (ja) | 1976-12-29 | 1976-12-29 | 発酵法によるｌ−リジンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS594993B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012157699A1 (ja) | 2011-05-18 | 2012-11-22 | 味の素株式会社 | 動物用免疫賦活剤、それを含む飼料及びその製造方法 |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2015060391A1 (ja) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
| EP3385389A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid from fructose |
| WO2020071538A1 (en) | 2018-10-05 | 2020-04-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57115186A (en) * | 1980-12-29 | 1982-07-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-lysine by fermentation |
| EP0175309A3 (en) * | 1984-09-14 | 1987-11-11 | Toray Industries, Inc. | A method for producing l-lysine |
| JPS6312292A (ja) * | 1986-07-03 | 1988-01-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Ｌ−リジンの製造法 |
| CA2813540C (en) | 2004-10-07 | 2018-06-05 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing basic substance |
| JP2010041920A (ja) | 2006-12-19 | 2010-02-25 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2011067095A (ja) | 2008-01-10 | 2011-04-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
| JP5526785B2 (ja) | 2008-01-23 | 2014-06-18 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JPWO2011013707A1 (ja) | 2009-07-29 | 2013-01-10 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2012223091A (ja) | 2009-08-25 | 2012-11-15 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| WO2012077741A1 (ja) * | 2010-12-08 | 2012-06-14 | 東レ株式会社 | カダベリンの製造方法 |
-
1976
- 1976-12-29 JP JP15927776A patent/JPS594993B2/ja not_active Expired
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012157699A1 (ja) | 2011-05-18 | 2012-11-22 | 味の素株式会社 | 動物用免疫賦活剤、それを含む飼料及びその製造方法 |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2015060391A1 (ja) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
| EP3385389A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid from fructose |
| WO2020071538A1 (en) | 2018-10-05 | 2020-04-09 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5386089A (en) | 1978-07-29 |
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