JPS5923253A - 直接型ビリルビン及び全ビリルビンを測定する方法及び試薬 - Google Patents
直接型ビリルビン及び全ビリルビンを測定する方法及び試薬Info
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- JPS5923253A JPS5923253A JP58122448A JP12244883A JPS5923253A JP S5923253 A JPS5923253 A JP S5923253A JP 58122448 A JP58122448 A JP 58122448A JP 12244883 A JP12244883 A JP 12244883A JP S5923253 A JPS5923253 A JP S5923253A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ビリルビンはヒトの生体中で主にヘモグロビンの非常に
重要な分解生成物として産出される。
重要な分解生成物として産出される。
ビリルビンは肝臓中では部分的にグルクロン酸と共役す
る。グルクロン酸共役したビリルビンを°°直接型″ビ
リルビンと表わす。グルクロン酸と共役しなかったもの
を”間接型”ビリルビンと表わす。正常濃度は次の通り
である：直接型ビリルビン： ０．２５ｍ！７７１００
ｍ１−（血清）まで （α４．ろμモル／ｌ’） 間接型ビリルビン： ０．７５ｍ９／ １００ｍｌ （
血清）まで る。この機構が種々の疾病で妨害をれる。例えばヘモグ
ロビン分解が増大する場合グルクロニド化系の負担が太
ぎく、直接型／間接型ビリルビンの比が変化する。新合
成でもグルクロニド化容量は不完全で、同様に直接型／
間接型ビリルビンの比の移動が惹起される。肝細胞疾患
、胆細管中への流出の妨害又は給脂管閉塞の場合、胆汁
を介するピリルぎンの膜中への分泌が減少するか又は完
全に遮断される。これにより血中ビリルビン濃度が上昇
する。その際に、ビリルビンの絶対濃度も直接型／開接
型−ビリルビンの比も影響を受けることがある。それ故
、両方の数値を測定することにより肝臓−胆汁一腸路の
一定の疾病の種類及び部位に関して重要１工診断の決定
をすることができる。従って、両方のビリルビン画分の
測定は医学的診断において特に重要になった。この際一
般に、初めに全ビリルビンを測定する。その後で直接型
ビリルビンの含量を測定する。間接型ビリルビンの割合
は両方の数値の差から明らかである。
る。グルクロン酸共役したビリルビンを°°直接型″ビ
リルビンと表わす。グルクロン酸と共役しなかったもの
を”間接型”ビリルビンと表わす。正常濃度は次の通り
である：直接型ビリルビン： ０．２５ｍ！７７１００
ｍ１−（血清）まで （α４．ろμモル／ｌ’） 間接型ビリルビン： ０．７５ｍ９／ １００ｍｌ （
血清）まで る。この機構が種々の疾病で妨害をれる。例えばヘモグ
ロビン分解が増大する場合グルクロニド化系の負担が太
ぎく、直接型／間接型ビリルビンの比が変化する。新合
成でもグルクロニド化容量は不完全で、同様に直接型／
間接型ビリルビンの比の移動が惹起される。肝細胞疾患
、胆細管中への流出の妨害又は給脂管閉塞の場合、胆汁
を介するピリルぎンの膜中への分泌が減少するか又は完
全に遮断される。これにより血中ビリルビン濃度が上昇
する。その際に、ビリルビンの絶対濃度も直接型／開接
型−ビリルビンの比も影響を受けることがある。それ故
、両方の数値を測定することにより肝臓−胆汁一腸路の
一定の疾病の種類及び部位に関して重要１工診断の決定
をすることができる。従って、両方のビリルビン画分の
測定は医学的診断において特に重要になった。この際一
般に、初めに全ビリルビンを測定する。その後で直接型
ビリルビンの含量を測定する。間接型ビリルビンの割合
は両方の数値の差から明らかである。
最も頻繁に行なわれたビリルビン検出反応はビリルビン
とジアゾニウム塩との結合に基く。
とジアゾニウム塩との結合に基く。
ゾエドシシック及びフレホルン（Ｊｅｎｄｒａｓｓｉｋ
及びＣｌｅｇｈｏｒｎ共著、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｚ、”
、 ２８９巻、１頁（１９３７年）〕によれば、直接
型ビリルビンの測定のためＫは、水中のスルファニル酸
５ｇ、濃塩酸１５ｍ１及び０．５％−亜硝酸す） ＩＪ
ウム溶液０．２５ ｍｌから成るシア・を混合物Ｑ、５
ｍｅを血清に加える。この６１１１定法では、反応を強
酸性媒体中で実施しなければならｌ、仁いということが
特に欠点である。
及びＣｌｅｇｈｏｒｎ共著、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｚ、”
、 ２８９巻、１頁（１９３７年）〕によれば、直接
型ビリルビンの測定のためＫは、水中のスルファニル酸
５ｇ、濃塩酸１５ｍ１及び０．５％−亜硝酸す） ＩＪ
ウム溶液０．２５ ｍｌから成るシア・を混合物Ｑ、５
ｍｅを血清に加える。この６１１１定法では、反応を強
酸性媒体中で実施しなければならｌ、仁いということが
特に欠点である。
全ビリルビンの測定に当っては、初めに試料にカフェイ
ン及び安息香酸す）・リウムを添加し、次いでジアゾ化
スルファニル酸と結合させる。
ン及び安息香酸す）・リウムを添加し、次いでジアゾ化
スルファニル酸と結合させる。
カフェインと安息香酸ナトリウムの添加は、間接型ビリ
ルビンをアルブミンへのその結合から解放１〜かつこれ
らを添加しないと起る蛋白質沈殿による妨害を排除する
という目的を有する。
ルビンをアルブミンへのその結合から解放１〜かつこれ
らを添加しないと起る蛋白質沈殿による妨害を排除する
という目的を有する。
し７か【−１これらの添加物を用いてこの測定反応を直
接型ビリルビンの測定のように強酸性媒体中で実施する
ことはできず、中性もしくはと、酸性範ｖｆｌで作業し
なければならない。しかしこムもの反応条件は、試料中
の他の内容物質（例えばフェノール）で、多くの場合試
験を妨害する褐色の副生成物が生じるという欠点を有す
る。
接型ビリルビンの測定のように強酸性媒体中で実施する
ことはできず、中性もしくはと、酸性範ｖｆｌで作業し
なければならない。しかしこムもの反応条件は、試料中
の他の内容物質（例えばフェノール）で、多くの場合試
験を妨害する褐色の副生成物が生じるという欠点を有す
る。
反応溶液自体も長時間安定ではない。試料が存在し７な
くても酸性媒体中で無色であるが、中性範囲では既に黄
色でありかつアルカリ性では赤色である物質が生じる。
くても酸性媒体中で無色であるが、中性範囲では既に黄
色でありかつアルカリ性では赤色である物質が生じる。
この妨害に基いて起り得る誤差を小さくしておくために
、時々非常に複雑な工程が提案される。例えば、ジェド
ラシツク及びフレホルンにより２種の異なる波長で作業
するか、又は弱酸性乃至中性範囲でジアゾ化反応の終結
後同性の試験パッチの測定前にアルカリ性媒体に移す〔
Ｊｅｎｄｒａｓｓｉｋ及び０ｒｏｆ共著、” Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、 Ｚ、 ”、 ２９７巻、８１〜８９頁（１９
３８年）〕。
、時々非常に複雑な工程が提案される。例えば、ジェド
ラシツク及びフレホルンにより２種の異なる波長で作業
するか、又は弱酸性乃至中性範囲でジアゾ化反応の終結
後同性の試験パッチの測定前にアルカリ性媒体に移す〔
Ｊｅｎｄｒａｓｓｉｋ及び０ｒｏｆ共著、” Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、 Ｚ、 ”、 ２９７巻、８１〜８９頁（１９
３８年）〕。
すべてのこれらの測定法は実施においてやっかいで非実
用的である。その上、多数の工程の為常に大きな不正揶
さと誤差が伴なう。それ故、直接型ビリルビンと全２リ
ルビンの測定法を改良する実験は常に行なわれた。
用的である。その上、多数の工程の為常に大きな不正揶
さと誤差が伴なう。それ故、直接型ビリルビンと全２リ
ルビンの測定法を改良する実験は常に行なわれた。
例工ば、全ビリルビンの測定を強酸性媒体中に移し変え
ることも実験された。このため、とりわけ、強酸性媒体
中で蛋白質結合を遮断することのできる助剤をさがすこ
とが必要であった。
ることも実験された。このため、とりわけ、強酸性媒体
中で蛋白質結合を遮断することのできる助剤をさがすこ
とが必要であった。
例えば、バーテルズ及びベーマー〔Ｂａｒｔｅｌｓ及び
Ｂｏｅｈｍｅｒ共著、 ” Ｚ、 Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅ
ｍ、 Ｃ１１ｎ、Ｂｉｏ−ｃｈｅｍ、 ” 、 ７巻
、４４４頁（１９６９年）〕Ｋより分散剤が、及びウィ
ンステン及びシェリク（Ｗｉｎｓｔｅｎ及びＣｅｈｐｌ
ｙｋ共著、Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅｍ。
Ｂｏｅｈｍｅｒ共著、 ” Ｚ、 Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅ
ｍ、 Ｃ１１ｎ、Ｂｉｏ−ｃｈｅｍ、 ” 、 ７巻
、４４４頁（１９６９年）〕Ｋより分散剤が、及びウィ
ンステン及びシェリク（Ｗｉｎｓｔｅｎ及びＣｅｈｐｌ
ｙｋ共著、Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅｍ。
Ａｃｔａ″、２５巻、４４１頁（１９６９年）〕Ｋより
ジメチルスルホキシドが間接型ビリルビンの溶解助剤と
して使用され、それにより次いで直接型ビリルビンを測
定するための測定と同じようにして全ビリルビンを強酸
性媒体中で実施することができる。
ジメチルスルホキシドが間接型ビリルビンの溶解助剤と
して使用され、それにより次いで直接型ビリルビンを測
定するための測定と同じようにして全ビリルビンを強酸
性媒体中で実施することができる。
数多くの態形にもかかわらず、文献中に従来記載された
直接型ビリルビン及び全ビリルビンの試験法は当業界を
なお満足させるものではなく、例えば種々の方法の結果
の一致は不良であるＣ Ｊａｃｏｂｓ及びその他共著、
” Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅｍ、”。
直接型ビリルビン及び全ビリルビンの試験法は当業界を
なお満足させるものではなく、例えば種々の方法の結果
の一致は不良であるＣ Ｊａｃｏｂｓ及びその他共著、
” Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅｍ、”。
１０巻、４６３〜４３９頁（１９６４年）〕。
とりわけ、ある程度有用な鑑別を達成するため従来公知
の測定法をその中で実施しなければならない強酸性の腐
食性媒体（前記文献引用中）は試験を実際に実施するＫ
は有利ではない。
の測定法をその中で実施しなければならない強酸性の腐
食性媒体（前記文献引用中）は試験を実際に実施するＫ
は有利ではない。
それ故、本発明の課題は、弱酸性乃至はぼ中性のｐＨ範
囲で実施することができ、簡単かつ容易に実施すること
ができかつ信頼できる数値を与える直接型ビリルビン及
び全ビリルビンの測定法を開示することであった。
囲で実施することができ、簡単かつ容易に実施すること
ができかつ信頼できる数値を与える直接型ビリルビン及
び全ビリルビンの測定法を開示することであった。
ビリルビンとの結合に、一定の置換されたシアゾニウム
塩、例えばジアゾ化２−アミノー５−クロルートルエン
（Ｆａｓｔ Ｒｅｄ ＴＲ）又はジアゾ化２−メ＋−キ
シー５−クロル−アニリン（Ｆａｓｔ Ｒｅｄ ＲＣ）
を使用する場合に、直接型ビリルビン及び全ビリルビン
の測定が弱酸性乃至はぼ中性の範囲で可能であることが
判明し驚異的であった。
塩、例えばジアゾ化２−アミノー５−クロルートルエン
（Ｆａｓｔ Ｒｅｄ ＴＲ）又はジアゾ化２−メ＋−キ
シー５−クロル−アニリン（Ｆａｓｔ Ｒｅｄ ＲＣ）
を使用する場合に、直接型ビリルビン及び全ビリルビン
の測定が弱酸性乃至はぼ中性の範囲で可能であることが
判明し驚異的であった。
それ故、本発明の目的は、ビリルビンをジアゾニウム塩
と結合させかつそれにより生じた吸光度変化を公知方法
で測定することにより体液中の直接型ビリルビン及び全
ビリルビンを１ｌｌｌｌ定する方法であり、これは結合
を、試験溶液を弱酸性乃至はぼ中性ＯＰＨ値に調節する
緩衝剤の存在において実施しかつカップリング成分とし
て一般式■： ２ 〔式中 Ｒ工は水素、ハロゲン、低級アルキル基、低級アルコキ
シ基又はベンゾイルアミノ基を表わし、 Ｒ２は水素、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を表
わし、 Ｒ３は水素、ハロゲン、低級アルキル基又は低級アルコ
キシ基を表わし、 その際Ｒ１とＲ３が同時にハロゲンを表わしてはならず
、かつ 又はジアゾニウムイオンと貯蔵安定な塩を形成するアニ
オンを表わす〕のシアゾニウム塩を使用することを特徴
とする。
と結合させかつそれにより生じた吸光度変化を公知方法
で測定することにより体液中の直接型ビリルビン及び全
ビリルビンを１ｌｌｌｌ定する方法であり、これは結合
を、試験溶液を弱酸性乃至はぼ中性ＯＰＨ値に調節する
緩衝剤の存在において実施しかつカップリング成分とし
て一般式■： ２ 〔式中 Ｒ工は水素、ハロゲン、低級アルキル基、低級アルコキ
シ基又はベンゾイルアミノ基を表わし、 Ｒ２は水素、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を表
わし、 Ｒ３は水素、ハロゲン、低級アルキル基又は低級アルコ
キシ基を表わし、 その際Ｒ１とＲ３が同時にハロゲンを表わしてはならず
、かつ 又はジアゾニウムイオンと貯蔵安定な塩を形成するアニ
オンを表わす〕のシアゾニウム塩を使用することを特徴
とする。
置換基Ｒ１＊Ｒ２及びＲ３の定義における低級アルキル
基又は低級アルコキシ基としてはＣ原子１〜５個、殊に
１〜３個の基が挙げられる。
基又は低級アルコキシ基としてはＣ原子１〜５個、殊に
１〜３個の基が挙げられる。
メチル基、エチル基、あるいはメトキシ基及びエトキシ
基が特に優れている。
基が特に優れている。
ハロゲンでは弗素、塩素、臭素及び沃素が挙げられ、塩
素及び臭素が特に優れている。
素及び臭素が特に優れている。
シアゾニウムイオンと貯蔵安定な塩を形成するアニオン
としてはテトラフルオロボレート又はテトラクロロチン
ケートが該当する。
としてはテトラフルオロボレート又はテトラクロロチン
ケートが該当する。
本発明で使用されるジアゾニウム塩は公知の化合物であ
るか又は公知化合物と同様に容易に製造することができ
る。これらのシアゾニウム塩の一部はビリルビンの測定
に強酸性媒体中で使用されていた。しかし、ビリルビン
と一般式Ｉのシアゾニウム塩との間で弱酸性乃至はぼ中
性の媒体中でも結合が行なわれることは当業者にとって
驚異的であった。例えば、１′ンアイトシユリフトΦフ
ユア・クニリツシエ曝ヒエミー拳つント・クリニツシエ
・ビオヒエミー（２゜Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 Ｃ１１
ｎ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ）”〔９巻、２７３頁（１９
７１年）〕には、本発明で特に優れているジアゾニウム
塩、ジアゾ化２−アミノ−５−クロロトルエン（Ｆａｓ
ｔ Ｒｅｄ ＴＲ）がビリルビンとはＰ１１５．２では
反応しないと明記されている。
るか又は公知化合物と同様に容易に製造することができ
る。これらのシアゾニウム塩の一部はビリルビンの測定
に強酸性媒体中で使用されていた。しかし、ビリルビン
と一般式Ｉのシアゾニウム塩との間で弱酸性乃至はぼ中
性の媒体中でも結合が行なわれることは当業者にとって
驚異的であった。例えば、１′ンアイトシユリフトΦフ
ユア・クニリツシエ曝ヒエミー拳つント・クリニツシエ
・ビオヒエミー（２゜Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 Ｃ１１
ｎ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ）”〔９巻、２７３頁（１９
７１年）〕には、本発明で特に優れているジアゾニウム
塩、ジアゾ化２−アミノ−５−クロロトルエン（Ｆａｓ
ｔ Ｒｅｄ ＴＲ）がビリルビンとはＰ１１５．２では
反応しないと明記されている。
本発明の他の目的は、直接型ビリルビン及び全ビリルビ
ンを測定する本発明方法を実施するための剤であり、こ
れは測定に必要な成分のシアゾニウム塩及び緩衝剤を溶
液、粉末混合物、試薬錠剤、凍結乾燥体又は成分を含浸
させた吸収担体の形で含有する。
ンを測定する本発明方法を実施するための剤であり、こ
れは測定に必要な成分のシアゾニウム塩及び緩衝剤を溶
液、粉末混合物、試薬錠剤、凍結乾燥体又は成分を含浸
させた吸収担体の形で含有する。
全ビリルビン及び直接型ビリルビンの測定のため剤は付
加的に溶解助剤を含有してよい。
加的に溶解助剤を含有してよい。
本発明では、試験溶液をＰＩＩ範囲６．５〜８．０に調
節する緩衝剤を使用すると有利である。直接型ビリルビ
ンの測定には、ｐＨ範囲６．５〜６．０、殊に４．６〜
５．７で有効である緩衝剤を使用すると有利である。全
ビリルビンの測定にはＰＨ範囲５．５〜８、殊に６〜７
で有効な緩衝剤を使用すると有利である。
節する緩衝剤を使用すると有利である。直接型ビリルビ
ンの測定には、ｐＨ範囲６．５〜６．０、殊に４．６〜
５．７で有効である緩衝剤を使用すると有利である。全
ビリルビンの測定にはＰＨ範囲５．５〜８、殊に６〜７
で有効な緩衝剤を使用すると有利である。
緩衝剤としては、前記のＰＨ範囲で十分な緩衝能を有す
るものを使用することができる。例えば直接型ビリルビ
ンの測定にはクエン酸／トリス−（ヒドロキシメチル）
−アミノメタン、クエン酸／カセイソーダ−１酢酸／カ
セイソーダ、フタル酸水素カリウム／カセイソーダ又は
リン酸塩緩幀剤のような緩衝系が特に有用であると明ら
かとなり、最初に挙げた６種の緩衝系が特に優れている
。全ビリルビンの測定にはクエン酸／トリス−（ヒドロ
キシメチル）−アミノメタン、塩酸／トリス−（ヒドロ
キシメチル）−アミノメタンが特に優れている。塩酸７
／イミダゾール緩衝剤を使用することもできる。
るものを使用することができる。例えば直接型ビリルビ
ンの測定にはクエン酸／トリス−（ヒドロキシメチル）
−アミノメタン、クエン酸／カセイソーダ−１酢酸／カ
セイソーダ、フタル酸水素カリウム／カセイソーダ又は
リン酸塩緩幀剤のような緩衝系が特に有用であると明ら
かとなり、最初に挙げた６種の緩衝系が特に優れている
。全ビリルビンの測定にはクエン酸／トリス−（ヒドロ
キシメチル）−アミノメタン、塩酸／トリス−（ヒドロ
キシメチル）−アミノメタンが特に優れている。塩酸７
／イミダゾール緩衝剤を使用することもできる。
全ビリルビン及び直接型ぎリルビンを測定するに当り、
付加的に溶解助剤を添加することができる。この目的に
はジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テト
ラヒドロフラン、ジオキサン又は種々のグリコールが特
に好適であることが明らかＫなった。ジメチルホルムア
ミドが特に優れている。直接型ビリルビンの測定には、
非イオン型清浄剤、殊にトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ ）
Ｘ １００ （Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ社、フィラデル
フィア在）を添加することができ、その際トリトン×１
００の濃度は約０．１〜１．０％である。非イオン型清
浄剤の他の例はトウイーン（Ｔｗｅｅｎ ） ２１又は
４０（製造者ＩＣＩ ）、タージトール（Ｔｅｒｇｉｔ
ｏｌ ） １５− Ｓ −１２（ＵｎｉｏｎＣａｒｂｉ
ｄｅ Ｃｏｒｐ、 ）、ＢＲＩＪ ７８ （ＩＣＩ ）
である。
付加的に溶解助剤を添加することができる。この目的に
はジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テト
ラヒドロフラン、ジオキサン又は種々のグリコールが特
に好適であることが明らかＫなった。ジメチルホルムア
ミドが特に優れている。直接型ビリルビンの測定には、
非イオン型清浄剤、殊にトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ ）
Ｘ １００ （Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ社、フィラデル
フィア在）を添加することができ、その際トリトン×１
００の濃度は約０．１〜１．０％である。非イオン型清
浄剤の他の例はトウイーン（Ｔｗｅｅｎ ） ２１又は
４０（製造者ＩＣＩ ）、タージトール（Ｔｅｒｇｉｔ
ｏｌ ） １５− Ｓ −１２（ＵｎｉｏｎＣａｒｂｉ
ｄｅ Ｃｏｒｐ、 ）、ＢＲＩＪ ７８ （ＩＣＩ ）
である。
直接型ビリルビン及び全ビリルビンを測定するため、測
定すべき試料をジアゾニウム塩、緩衝剤及び場合により
溶解助剤と接触させる。添加される物質は溶液、粉末混
合物、試薬錠剤、４（［結乾燥体どして又はそれを含浸
さ一■た吸収性担体の形で存在してよい。種々の形状を
組合せることができる。例えば、緩衝剤を好適な溶剤中
の溶液として、シアゾニウム塩を錠剤の形で使用するこ
とができる。
定すべき試料をジアゾニウム塩、緩衝剤及び場合により
溶解助剤と接触させる。添加される物質は溶液、粉末混
合物、試薬錠剤、４（［結乾燥体どして又はそれを含浸
さ一■た吸収性担体の形で存在してよい。種々の形状を
組合せることができる。例えば、緩衝剤を好適な溶剤中
の溶液として、シアゾニウム塩を錠剤の形で使用するこ
とができる。
試験パッチ中の測定すべきビリルビンの濃度は０．５〜
２５μモル／ｌであるべきである。場合により出発試料
を相応して稀釈すべきである。
２５μモル／ｌであるべきである。場合により出発試料
を相応して稀釈すべきである。
シア・戸ニウム塩、緩衝剤及び場合により溶解助剤の使
用量′は、最終試験溶液中で次の濃度が達成されるよう
に選択する： ジアゾニウム項二０．５〜３０ミリモル／ｌ、殊に５〜
１５ミリモル／ｌ 緩衝剤： ０．０２〜１．０モル／ｌ、殊に０．０５〜
０．６モル／ｌ 場合により添加する溶解助剤：全ビリルビン測定では０
．１〜４モル／ｌ、殊に１〜３モル／ｌ及び直接型ビリ
ルビンでは０．０１〜０．１モル／１ 本発明による直接型ビリルビン及び全ビリルビンの測定
法の重要な利点は、その都度の反エモ条件が試験溶液の
Ｐ１１値の僅かな差によって異なるということである。
用量′は、最終試験溶液中で次の濃度が達成されるよう
に選択する： ジアゾニウム項二０．５〜３０ミリモル／ｌ、殊に５〜
１５ミリモル／ｌ 緩衝剤： ０．０２〜１．０モル／ｌ、殊に０．０５〜
０．６モル／ｌ 場合により添加する溶解助剤：全ビリルビン測定では０
．１〜４モル／ｌ、殊に１〜３モル／ｌ及び直接型ビリ
ルビンでは０．０１〜０．１モル／１ 本発明による直接型ビリルビン及び全ビリルビンの測定
法の重要な利点は、その都度の反エモ条件が試験溶液の
Ｐ１１値の僅かな差によって異なるということである。
従って、両方の測定をほぼ同一の試薬を用いて相互に実
施することができる。直接型ビリルビン及び全ピリルぎ
ンのち１１）定には同じジアゾニウム塩を使用すると有
オＩＪである。必要なＰＨ値の差はＰＩＩ値を決める緩
衝物質の組成を若干変動することにより達成される。
施することができる。直接型ビリルビン及び全ピリルぎ
ンのち１１）定には同じジアゾニウム塩を使用すると有
オＩＪである。必要なＰＨ値の差はＰＩＩ値を決める緩
衝物質の組成を若干変動することにより達成される。
実際には、直接型ビリルビンと全ビリルビンを測定する
ため、同じシアゾニウム塩を含有するが、緩衝剤成分の
組成は異なるそれぞれ別個の試薬組成物を調製するよう
に行なうことができる。両方の測定のために、シアゾニ
ウム塩と、それぞれの測定パラメータのためのＰＩ３値
を調節するための緩衝剤を含有する共通の試薬組合せ物
を調製することもできる。他方のパラメータを測定する
ためのＰＩ３値は更に好適な緩衝物質の添加により調節
する。
ため、同じシアゾニウム塩を含有するが、緩衝剤成分の
組成は異なるそれぞれ別個の試薬組成物を調製するよう
に行なうことができる。両方の測定のために、シアゾニ
ウム塩と、それぞれの測定パラメータのためのＰＩ３値
を調節するための緩衝剤を含有する共通の試薬組合せ物
を調製することもできる。他方のパラメータを測定する
ためのＰＩ３値は更に好適な緩衝物質の添加により調節
する。
溶液の形の、直接型ビリルビン又は全ビリルビンを測定
する本発明による製剤は試験に必要な全試薬を含有する
。溶剤としては、水又は水と水溶性有機溶剤、例えばメ
タノール、エタノール、アセトン又はジメチルホルムア
ミドとの混合物が該当する。安定性の理由から、試験罠
必要な試薬を溶液２つ以上に分け、それを測定に際して
初めて一緒にするのは有利であり得る。
する本発明による製剤は試験に必要な全試薬を含有する
。溶剤としては、水又は水と水溶性有機溶剤、例えばメ
タノール、エタノール、アセトン又はジメチルホルムア
ミドとの混合物が該当する。安定性の理由から、試験罠
必要な試薬を溶液２つ以上に分け、それを測定に際して
初めて一緒にするのは有利であり得る。
粉末混合物又は試薬錠剤の形の本発明による製剤は、必
要１．Ｃ試験成分に常用のが−レン式添加物を加えかつ
造粒して製造することができる。
要１．Ｃ試験成分に常用のが−レン式添加物を加えかつ
造粒して製造することができる。
例えば、この種の添加物はモノ−、オリゴ−又はポリサ
ツカリドのような炭水化物、マンニット、ソルビット又
はキシリットのような糖アルコール、あるいはＪ？リエ
チレングリコール又はポリビニルピロリドンのような他
の可溶性不活性化合物である。一般に、試薬錠剤は最終
重量約２０〜２００＋１１＆、殊Ｋ ５ Ｄ 〜８０
ｍ’；／を有する。
ツカリドのような炭水化物、マンニット、ソルビット又
はキシリットのような糖アルコール、あるいはＪ？リエ
チレングリコール又はポリビニルピロリドンのような他
の可溶性不活性化合物である。一般に、試薬錠剤は最終
重量約２０〜２００＋１１＆、殊Ｋ ５ Ｄ 〜８０
ｍ’；／を有する。
凍結乾燥体の製造に際し、測定に必要な全試薬と共に常
用の骨格ビルダー、例えばポリビニルピロリドン、及び
場合により他の充填剤、例えばマンニット、ソルビット
又はキシリットを含有する溶液を凍結乾燥させる。
用の骨格ビルダー、例えばポリビニルピロリドン、及び
場合により他の充填剤、例えばマンニット、ソルビット
又はキシリットを含有する溶液を凍結乾燥させる。
ビリルビンを測定するため、吸収性担体に吸着させた形
の本発明による製剤を製造するに当り、吸収性担体、殊
に濾紙、セルロース又は合成繊維フリースに例えば水、
メタノール、エタノール又はアセトンのような易揮発性
溶剤中の必要な試験成分の溶液を含浸させる。調製試験
紙をそのままで使用することができあるいは公知方法で
握りに接着するかまたは有利に西ドイツ国特許第２１１
８４５５号明細書によりプラスチックと細メツシユ網材
との間に封入することができる。
の本発明による製剤を製造するに当り、吸収性担体、殊
に濾紙、セルロース又は合成繊維フリースに例えば水、
メタノール、エタノール又はアセトンのような易揮発性
溶剤中の必要な試験成分の溶液を含浸させる。調製試験
紙をそのままで使用することができあるいは公知方法で
握りに接着するかまたは有利に西ドイツ国特許第２１１
８４５５号明細書によりプラスチックと細メツシユ網材
との間に封入することができる。
ビリルビンの１ｌｌｌｌ定に必要な単一試薬を試験片上
に施すこともできる。この場合には、試薬成分を含有す
る試験区域上にビリルビン含有試料、例えば血清を滴加
しかつ惹起される色の変化に基いて公知方法で試料のビ
リルビン含液を測定する。
に施すこともできる。この場合には、試薬成分を含有す
る試験区域上にビリルビン含有試料、例えば血清を滴加
しかつ惹起される色の変化に基いて公知方法で試料のビ
リルビン含液を測定する。
次Ｋ、本発明を実施例につき詳説する。
例 １
１）溶液
緩衝溶液ニドリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタ
ン１ロアミリモル及びクエン酸８３ミリモルを蒸留水に
溶解して全１：Ｌ１ｄとする。
ン１ロアミリモル及びクエン酸８３ミリモルを蒸留水に
溶解して全１：Ｌ１ｄとする。
この溶液はＰＨ５，０を有する。
反応溶液１：前記の緩衝溶液１０ｍｅ中にファストレッ
ドＴＲ（ジアゾ化された２−アミノ−５−クロル−トル
エンｘ ”／、 ＺｎＣ７Ｉ２ ） ２ ［］ ｍ９を
溶解する。この溶液は室温で少なくとも２４時間安定で
ある。
ドＴＲ（ジアゾ化された２−アミノ−５−クロル−トル
エンｘ ”／、 ＺｎＣ７Ｉ２ ） ２ ［］ ｍ９を
溶解する。この溶液は室温で少なくとも２４時間安定で
ある。
溶液２（全ビリルビン測定用の添加試薬）ニドリス〜（
ヒドロキシメチル）−アミノメタン０．９モルを蒸留水
で溶解して全ｉ１１とする。
ヒドロキシメチル）−アミノメタン０．９モルを蒸留水
で溶解して全ｉ１１とする。
実施例
マイクロキュベツト（層厚１ｃｍ）中に異なる試薬溶液
を次のようにピペット装入する：各試験別に関して試薬
盲検値を測定する。この数値は、血清を同量の水に代オ
、て前記の”測定値”に記載されているのと同様に行な
うことにより得られる。
を次のようにピペット装入する：各試験別に関して試薬
盲検値を測定する。この数値は、血清を同量の水に代オ
、て前記の”測定値”に記載されているのと同様に行な
うことにより得られる。
３） ｉｆ？′価
測定した吸光度から吸光度差は次のようにして計３９す
るニ ア１″；、、＝（Ｆ２−ｇｌ）八−測定キュペッド−（
Ｆ２ Ｅｌ）Ａ−盲検値キュペット−（Ｆ２−Ｅｘ ）
Ａ＝試薬盲検値 Δ霜瓢Ｅ２−Ｅｘ）Ｂ−測定キュベット−（Ｆ２−Ｅｌ
）Ｂ−盲検値キュベツト−（Ｆ２−Ｅｌ）Ｂ−試薬盲検
値 得られた吸光度差から試料のビリルビン含量は次のよう
に計算する： ΔＥＡｘ ０−９６＝直接型ビリルビンミリモル／ｌΔ
ＥＢ Ｘ Ｃ０９ろ１全ビリルビン ミリモル／１例
２ １）溶液 緩衝溶液Ａ（直接型ビリルビン用）：水中のクエン［０
，１３モルの溶液にトリス−（ヒドロキシメチル）−ア
ミタフ２フｏ、３５モルヲ加えかつ水を装入して全−ｉ
１１とする。この溶液はｐＨ５，７を有する。
るニ ア１″；、、＝（Ｆ２−ｇｌ）八−測定キュペッド−（
Ｆ２ Ｅｌ）Ａ−盲検値キュペット−（Ｆ２−Ｅｘ ）
Ａ＝試薬盲検値 Δ霜瓢Ｅ２−Ｅｘ）Ｂ−測定キュベット−（Ｆ２−Ｅｌ
）Ｂ−盲検値キュベツト−（Ｆ２−Ｅｌ）Ｂ−試薬盲検
値 得られた吸光度差から試料のビリルビン含量は次のよう
に計算する： ΔＥＡｘ ０−９６＝直接型ビリルビンミリモル／ｌΔ
ＥＢ Ｘ Ｃ０９ろ１全ビリルビン ミリモル／１例
２ １）溶液 緩衝溶液Ａ（直接型ビリルビン用）：水中のクエン［０
，１３モルの溶液にトリス−（ヒドロキシメチル）−ア
ミタフ２フｏ、３５モルヲ加えかつ水を装入して全−ｉ
１１とする。この溶液はｐＨ５，７を有する。
緩衝姪葦」（全ビリルビン用）：水中のトリス−（ヒド
ロキシメチル）−アミノメタン０．２モルの溶液を塩酸
でＰＨ７，０にする。ジメチルボルムアミド５３ｍ１を
加えかつ蒸留水を装入して全量１１とする。
ロキシメチル）−アミノメタン０．２モルの溶液を塩酸
でＰＨ７，０にする。ジメチルボルムアミド５３ｍ１を
加えかつ蒸留水を装入して全量１１とする。
試薬溶液ＡないしはＢ：緩衝液ＡないしはＢそれぞれ１
０ｍ１にファストバイオレットＢ（ジアゾ化６−ペンゾ
イルアミノー４−メトキシ−３−アミノ−トルエン×％
ＺｎＣｌ２ ） ４０ ｍ９を溶解する。
０ｍ１にファストバイオレットＢ（ジアゾ化６−ペンゾ
イルアミノー４−メトキシ−３−アミノ−トルエン×％
ＺｎＣｌ２ ） ４０ ｍ９を溶解する。
実施例
キュベツト（層厚１ｃｍ）中に下記の溶液をピペット装
入する： 各試験料に関して試薬盲検値を測定する。この数値は、
血清を同量の緩衝液ＡないしはＢに代えて前記の″測定
値″に記載したのと同様にして得られる。
入する： 各試験料に関して試薬盲検値を測定する。この数値は、
血清を同量の緩衝液ＡないしはＢに代えて前記の″測定
値″に記載したのと同様にして得られる。
試薬溶液の代りに相当量の緩衝溶液を使用する例１に相
応する盲検値キュベツトは明らかに混濁しているないし
は溶血血清の場合にのみ必要である。
応する盲検値キュベツトは明らかに混濁しているないし
は溶血血清の場合にのみ必要である。
ろ）評価
測定した吸光度から吸光度差を次のように計算する：
Δ欧−（］”２ Ｅｌ）Ａ−測定キュペット−（ｇ２Ｅ
ｌ）Ａ−試薬盲検値７都−（Ｆ’２−Ｅｌ ）Ｂ−測定
キュベット−（Ｅ２ ｍｌ）Ｂ−試薬盲検値得られた吸
光度差から試料中のビリルビン含量は次のように計算す
る： ΔＥＡＸ ０．４９ ＝直接型ビリルビンミリモル／ｌ
Δ稲Ｘ Ｏ，４９＝全ビリルビンミリモル／ｌ場合によ
り、ビリルビン測定を、開始して１分後と５分後の間の
吸光度差を読み取ることにより行なうこともできる（動
力学的測定）。
ｌ）Ａ−試薬盲検値７都−（Ｆ’２−Ｅｌ ）Ｂ−測定
キュベット−（Ｅ２ ｍｌ）Ｂ−試薬盲検値得られた吸
光度差から試料中のビリルビン含量は次のように計算す
る： ΔＥＡＸ ０．４９ ＝直接型ビリルビンミリモル／ｌ
Δ稲Ｘ Ｏ，４９＝全ビリルビンミリモル／ｌ場合によ
り、ビリルビン測定を、開始して１分後と５分後の間の
吸光度差を読み取ることにより行なうこともできる（動
力学的測定）。
試料中のビリルビン含量は、一定の知られているビリル
ビン含量の種々の血清試料を測定することにより検量線
を作成する方法でも測定することができ、この検量線か
ら、未知のビリルビン含量の試料の測定で得られたそれ
ぞれの吸光度差に関して相応するビリルビン濃度を読み
とることができる。
ビン含量の種々の血清試料を測定することにより検量線
を作成する方法でも測定することができ、この検量線か
ら、未知のビリルビン含量の試料の測定で得られたそれ
ぞれの吸光度差に関して相応するビリルビン濃度を読み
とることができる。
緩衝液Ａの代りにトリトン×１００を添加したクエン酸
塩緩衝液を使用する場合に、直接型ビリルビンに関して
前記のような同じ数値が得られる。
塩緩衝液を使用する場合に、直接型ビリルビンに関して
前記のような同じ数値が得られる。
例 ６
１）溶液
緩ｆ＋Ｉｊ溶液ニドリス−（ヒドロキシメチル）−アミ
ノメタンフロミリモル及びクエン酸４９ミリモルを蒸留
水で溶解しかつ全Ｆｔ１１にする。
ノメタンフロミリモル及びクエン酸４９ミリモルを蒸留
水で溶解しかつ全Ｆｔ１１にする。
この溶液けｐＨ４，３を有する。
反応溶液１：この緩衝液１０ｍ１中にファストレツ）−
’Ｒｃ（ジアゾ化２＝メトキシ−５−クロルアニリンＸ
１／２ＺｎＯ１２） ２Ｑ ｍｙを溶ｍｔ−ル。
’Ｒｃ（ジアゾ化２＝メトキシ−５−クロルアニリンＸ
１／２ＺｎＯ１２） ２Ｑ ｍｙを溶ｍｔ−ル。
この溶液は室温で少なくとも２４時間安定である。
溶′Ｏ，２（全ビリルビン用添加試薬）ニドリス−（ヒ
ドロキシメチル）−アミノメタン０．７５モルを蒸留水
を加えて１１とする。
ドロキシメチル）−アミノメタン０．７５モルを蒸留水
を加えて１１とする。
実施例
マイクロキュベツト（層厚１ ｃｍ ）中に室温で次の
溶液を記載のようにピペット装入する：それぞれの試験
別に関して、試薬盲検値を測定する。これは、前記の”
測定値”に記載されているように行なうが、血清の代り
に同量の水を使用する。
溶液を記載のようにピペット装入する：それぞれの試験
別に関して、試薬盲検値を測定する。これは、前記の”
測定値”に記載されているように行なうが、血清の代り
に同量の水を使用する。
ろ）評価
測定した吸光度から吸光度差を次のように計算する：
ΔＢＡ＝（Ｅ２−’ｈ）八−測定キュベラｌ−（Ｋ２−
Ｅｌ）Ａ−盲検値キュベット−（Ｋ２＝に１）八−試薬
キュベラ１． ７へ＝ （ｘ２−１ｃ１）Ｂ−測定キュベツト−（）！
’２１！’１）Ｂ−盲検値キュペット−（Ｅ２ Ｅｌ）
Ｂ−試薬盲検値 得られた吸光度差から試料のビリルビン含量を言ｔＫす
ることができる： Δｇ、Ｘ０．８３＝直接型ビリルビン ミリモル／ｌΔ
ＥＢｘ０．８ろ＝全ビリルビン ミリモル／ｌ前記の反
応溶液１中でファストレッドＲＯ２０ｍノをファストブ
ルーＢＢ（ジアゾ化された２、５〜ジェトキシ−４−ベ
ンゾイルアミノ−アニリンｘ ’／２ ＺｎＣｌ２ ）
４０ ｍ９又はファストブルーＲＲ（ジアゾ化された
２、５−ジメトキシ−４−ベンゾイルアミノ−アニリン
ｘｙ２ＺｎＣ／２ ） ４ ｏｍ９に代える場合に比較
可能な結果が得られる。
Ｅｌ）Ａ−盲検値キュベット−（Ｋ２＝に１）八−試薬
キュベラ１． ７へ＝ （ｘ２−１ｃ１）Ｂ−測定キュベツト−（）！
’２１！’１）Ｂ−盲検値キュペット−（Ｅ２ Ｅｌ）
Ｂ−試薬盲検値 得られた吸光度差から試料のビリルビン含量を言ｔＫす
ることができる： Δｇ、Ｘ０．８３＝直接型ビリルビン ミリモル／ｌΔ
ＥＢｘ０．８ろ＝全ビリルビン ミリモル／ｌ前記の反
応溶液１中でファストレッドＲＯ２０ｍノをファストブ
ルーＢＢ（ジアゾ化された２、５〜ジェトキシ−４−ベ
ンゾイルアミノ−アニリンｘ ’／２ ＺｎＣｌ２ ）
４０ ｍ９又はファストブルーＲＲ（ジアゾ化された
２、５−ジメトキシ−４−ベンゾイルアミノ−アニリン
ｘｙ２ＺｎＣ／２ ） ４ ｏｍ９に代える場合に比較
可能な結果が得られる。
例 ４
Ａ）蒸留水１１中にクエン酸０．１６モル、トリス−（
ヒドロキシメチル）−アミノメタン０．６５モル及びフ
ァストバイオレットＢ ４．Ｏｇを含有する溶液、 Ｂ） 蒸留水１７！中にトリス−（ヒドロキシメチル）
−アミノメタン０．２モル、５％−）リドンｘｉｏｏ及
びファストバイオレッ） Ｂ ４．０ 、！９を含有し
かつ塩酸でｐＨ７，０に調節された溶液を用いて濾紙（
例えばＢｉｎｚｅｒ社のｖｓ５３２）を含浸しかつ６０
°Ｃで乾燥する。
ヒドロキシメチル）−アミノメタン０．６５モル及びフ
ァストバイオレットＢ ４．Ｏｇを含有する溶液、 Ｂ） 蒸留水１７！中にトリス−（ヒドロキシメチル）
−アミノメタン０．２モル、５％−）リドンｘｉｏｏ及
びファストバイオレッ） Ｂ ４．０ 、！９を含有し
かつ塩酸でｐＨ７，０に調節された溶液を用いて濾紙（
例えばＢｉｎｚｅｒ社のｖｓ５３２）を含浸しかつ６０
°Ｃで乾燥する。
直接型ビリルビンの測定には試験片Ａ上に及び全ビリル
ビンの測定には試験片Ｂ上にそれぞれ血清１滴を与える
。約５〜１０分後に、帯祝色−紫色への色の変化が見ら
れる。この色変化から既知ビリルビン含量の血清試料を
用いて確定したカラースケールと比較することにより試
料のビリルビン含量を確定する。色変化は反射光度計を
用いて５７８ ｎｍで吸光度変化を測定することにより
確定することもできる。
ビンの測定には試験片Ｂ上にそれぞれ血清１滴を与える
。約５〜１０分後に、帯祝色−紫色への色の変化が見ら
れる。この色変化から既知ビリルビン含量の血清試料を
用いて確定したカラースケールと比較することにより試
料のビリルビン含量を確定する。色変化は反射光度計を
用いて５７８ ｎｍで吸光度変化を測定することにより
確定することもできる。
前記のファストバイオレツｌ−Ｂの代りにファストレッ
ドＴＲ，ファストレッドＲＣ１ファストブルーＢＢ又は
ファストブルーＲＲを含有する溶液で濾紙を含浸する際
に同じ結果が得られる。
ドＴＲ，ファストレッドＲＣ１ファストブルーＢＢ又は
ファストブルーＲＲを含有する溶液で濾紙を含浸する際
に同じ結果が得られる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 ビリルビンをジアゾニウム塩と結合させかつそれ
釦より生じた吸光度変化を公知方法により測定すること
により体液中の直接型どりルピン及び全ビリルビンを測
定する方法において、結合を、試験溶液を弱酸性乃至は
ぼ中性のＰＨ値に調節する緩衝剤の存在において実施し
かつカップリング成分として一般式Ｉ：２ 〔式中 Ｒ工は水素、ハロゲン、低級アルキル基、低級アルコキ
シ基又はベンゾイルアミノ基を表わし、 Ｒ２は水素、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を表
わし、 Ｒ３は水素、ハロゲン、低級アルキル基又は低級アルコ
キシ基を表わし、 その際Ｒ１とＲ３が同時にハロゲンを表わしてはならず
、かつ Ｘはジアゾニウムイオンと貯蔵安定な塩を形成するアニ
オンを表わす〕のジアゾニウム塩を使用することを特徴
とする直接型ビリルビン及び全ビリルビンを測定する方
法。 ２、試験溶液をＰ（Ｉ範囲３．５〜８．０に調節する緩
衝剤を使用する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、 シアゾニウム塩を濃度［１，５〜６０ミリモル／
ｌ（試験溶液）及び緩衝剤を濃度０．０２〜１モル／ｌ
（試験溶液）で使用する特許請求の範囲第１１は第２項
記載の方法。 ４ ジアゾニウム塩を濃度５〜１５ミリモル／ｌ（試験
溶液）及び緩衝剤を濃度０．［］ ５〜０．３モル／ｌ
（試験溶液）で使用する特許請求の範囲第３項記載の方
法。 ５． 直接型ビリルビンを測定するに当り試験溶液はＰ
１１範囲６．５〜６．０を有する特許請求の範囲第１項
〜第４項のいずれか１項に記載の方法。 ６、 全ビリルビンを測定するに当り試験溶液はＰＨ範
囲６．５〜８を有する特許請求の範囲第１項〜第４項の
いずれか１項に記載の方法。 ７、 付加的に溶解助剤を使用する特許請求の範囲第１
項〜第６項のいずれか１項に記載の方法。 ８、溶解助剤としてジメチルホルムアミドを使用する特
許請求の範囲第７項記載の方法。 ９、 試験溶液中の溶解助剤の濃度は全ピリルぎンの測
定では０．１〜４モル／ｌ及び直接型ビリルビンの測定
では０．０１〜０．１モル／ｌである特許請求の範囲第
７項又は第８項記載の方法。 １０ 弱酸性乃至はぼ中性のＰＨ範囲で有効な緩衝剤系
及び一般式■： ２ 〔式中 Ｒ１は水素、ハロゲン、低級アルキル基、低級アルコキ
シ基又はベンゾイルアミノ基を表わし、 Ｒ２は水素、低級アルキル基又は低級アルコキシ基を表
わし、 Ｒ３は水素、ハロケ９ン、低級アルキル基又は低級アル
コキシ基を表わし、 その際Ｒ１とＲ３は同時にハロゲンを表わしてはならず
、かつ Ｘはジアゾニウムイオンと貯蔵安定な塩を形成するアニ
オンを表わす〕のジアゾニウム塩を含有する体液中の直
接型ビリルビン及び全ビリルビンを測定する試薬。 １１、溶液、粉末混合物、試薬錠剤、凍結乾燥体として
又は成分を含浸させた吸収性担体として存在する特許請
求の範囲第１０項記載の試薬。 １２、ジアゾニウム塩及び緩衝剤が、直接型ビリルビン
及び全ビリルビンを測定する試験溶液中でジアゾニウム
塩最終濃度０．５〜３０ミリモル／ｌ及び緩衝剤最終濃
度０．０２〜１モル／ｌが得られる濃度で存在する特許
請求の範囲第１０項又は第１１項記載の試薬。 １３、最終濃度は試験溶液１１当りシアゾニウム塩５〜
１５ミリモル及び緩衝剤０．０５〜０．６モルである特
許請求の範囲第１２項記載の試薬。 １４、付加的に、溶解助剤を含有する特許請求の範囲第
１０項〜第１３項のいずれか１項に記載の試薬。 １５、溶解助剤としてジメチルホルムアミドを含有する
特許請求の範囲第１４項記載の試薬。 １６、溶解助剤が、全ビリルビンを測定する試験溶液中
で最終濃度帆１〜４モル／ｌが達成される濃度で存在す
る特許請求の範囲第１４項又は第１５項記載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3225331.1 | 1982-07-07 | ||
| DE19823225331 DE3225331A1 (de) | 1982-07-07 | 1982-07-07 | Verfahren zur bestimmung von direktem und gesamt-bilirubin sowie hierfuer geeignetes reagens |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5923253A true JPS5923253A (ja) | 1984-02-06 |
| JPH0324629B2 JPH0324629B2 (ja) | 1991-04-03 |
Family
ID=6167814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58122448A Granted JPS5923253A (ja) | 1982-07-07 | 1983-07-07 | 直接型ビリルビン及び全ビリルビンを測定する方法及び試薬 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4892833A (ja) |
| EP (1) | EP0098562B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5923253A (ja) |
| AT (1) | ATE18464T1 (ja) |
| AU (1) | AU559319B2 (ja) |
| CA (1) | CA1211348A (ja) |
| DE (2) | DE3225331A1 (ja) |
| DK (1) | DK159174C (ja) |
| ES (1) | ES8403623A1 (ja) |
| IE (1) | IE55209B1 (ja) |
| YU (1) | YU144783A (ja) |
| ZA (1) | ZA834852B (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60235063A (ja) * | 1984-04-09 | 1985-11-21 | イーストマン コダック カンパニー | 総ビリルビン定量用試薬組成物、乾式要素及び方法 |
| JPS61223651A (ja) * | 1985-03-29 | 1986-10-04 | Kyowa Medetsukusu Kk | ビリルビンの定量方法 |
| JPS6352060A (ja) * | 1986-04-16 | 1988-03-05 | Kyowa Medetsukusu Kk | 間接ビリルビンの定量法及び定量用キツト |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5278073A (en) * | 1991-05-08 | 1994-01-11 | Streck Laboratories, Inc. | Method of bilirubin assay |
| JP3091094B2 (ja) * | 1993-12-28 | 2000-09-25 | ユニチカ株式会社 | 直接型ビリルビン測定用試薬 |
| AU697785B2 (en) | 1994-07-19 | 1998-10-15 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Analytical element,composition and method using modified apo-horseradish peroxidase |
| US6066300A (en) * | 1995-07-07 | 2000-05-23 | Bayer Corporation | Reagent handling system and configurable vial carrier for use therein |
| US5609822A (en) * | 1995-07-07 | 1997-03-11 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Reagent handling system and reagent pack for use therein |
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