JPH0712810A - ウロビリノーゲン試験具を有効化する方法及び試験具 - Google Patents
ウロビリノーゲン試験具を有効化する方法及び試験具Info
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- JPH0712810A JPH0712810A JP6123700A JP12370094A JPH0712810A JP H0712810 A JPH0712810 A JP H0712810A JP 6123700 A JP6123700 A JP 6123700A JP 12370094 A JP12370094 A JP 12370094A JP H0712810 A JPH0712810 A JP H0712810A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又はｐ
−ジエチルアミノベンズアルデヒドを含有する試薬に対
する対照試験の方法において、（ａ）該試薬を、一般式
（Ｉ）： 【化６】 で示されるインドールの水性溶液といっしょにする工
程、及び（ｂ）該水性溶液における色の形成を測定する
工程を含むことを特徴とする方法。 【効果】 本発明の方法に用いられるインドールは、水
に非常に溶け易く、濾紙を含浸するのに充分な高濃度で
溶解することができ、そして水中で再構成されて、ウロ
ビリノーゲン試薬片に対する陽性対照を与えることがで
きる。
−ジエチルアミノベンズアルデヒドを含有する試薬に対
する対照試験の方法において、（ａ）該試薬を、一般式
（Ｉ）： 【化６】 で示されるインドールの水性溶液といっしょにする工
程、及び（ｂ）該水性溶液における色の形成を測定する
工程を含むことを特徴とする方法。 【効果】 本発明の方法に用いられるインドールは、水
に非常に溶け易く、濾紙を含浸するのに充分な高濃度で
溶解することができ、そして水中で再構成されて、ウロ
ビリノーゲン試薬片に対する陽性対照を与えることがで
きる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ウロビリノーゲンの診
断試験に用いられるエールリッヒ試薬に対する対照試験
の方法における、特定のスルホン酸インドールの用途に
関する。
断試験に用いられるエールリッヒ試薬に対する対照試験
の方法における、特定のスルホン酸インドールの用途に
関する。
【０００２】
【従来の技術】各種の病的状態、例えば溶血性疾患、肝
臓疾患、胆管閉塞およびその他の胆管機能不全によっ
て、尿中のウロビリノーゲンの異常に高いレベルが生じ
ることが知られている。
臓疾患、胆管閉塞およびその他の胆管機能不全によっ
て、尿中のウロビリノーゲンの異常に高いレベルが生じ
ることが知られている。
【０００３】尿中のウロビリノーゲンを検出するための
標準的方法は、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸の水性
溶液（しばしばエールリッヒ試薬と呼ばれる）を用いる
エールリッヒ反応を利用している。ウロビリノーゲンの
存在下では、エールリッヒ試薬との錯体が形成され、こ
れが可視スペクトルでの吸収を示す。生じた色は、尿試
料中のｐ−アミノサリチル酸、ポルホビリノーゲン及び
尿素などの干渉物質の存在に応じて、様々な色調の赤褐
色のうちの一つとなり得る。
標準的方法は、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸の水性
溶液（しばしばエールリッヒ試薬と呼ばれる）を用いる
エールリッヒ反応を利用している。ウロビリノーゲンの
存在下では、エールリッヒ試薬との錯体が形成され、こ
れが可視スペクトルでの吸収を示す。生じた色は、尿試
料中のｐ−アミノサリチル酸、ポルホビリノーゲン及び
尿素などの干渉物質の存在に応じて、様々な色調の赤褐
色のうちの一つとなり得る。
【０００４】現在利用できる「浸漬して読み取る(dip-a
nd-read)」方式の試薬片には、エールリッヒ試薬、すな
わちｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸を組
み込むことができる。そのような小片を尿中に浸漬し、
その際に発色した色を、該試薬片と併用するために作成
された標準色チャートと比較して、ウロビリノーゲンの
存在及び近似的濃度を判定する。
nd-read)」方式の試薬片には、エールリッヒ試薬、すな
わちｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド及び塩酸を組
み込むことができる。そのような小片を尿中に浸漬し、
その際に発色した色を、該試薬片と併用するために作成
された標準色チャートと比較して、ウロビリノーゲンの
存在及び近似的濃度を判定する。
【０００５】試験片の読み取りに用いられる器具を検査
するために、または、試験が肉眼での観察を必要とする
ならば技術者の技量を検査する際に、ウロビリノーゲン
の存在によって生じるのと同じ色反応を生じることがで
きる対照溶液を用いることが慣用的である。そのような
対照は、ウロビリノーゲン試験を実施する最良の方法を
技術者に教えることなどの教育目的にも役立つ。
するために、または、試験が肉眼での観察を必要とする
ならば技術者の技量を検査する際に、ウロビリノーゲン
の存在によって生じるのと同じ色反応を生じることがで
きる対照溶液を用いることが慣用的である。そのような
対照は、ウロビリノーゲン試験を実施する最良の方法を
技術者に教えることなどの教育目的にも役立つ。
【０００６】Analytical Biochemistry 、第８巻（1964
年）７５〜８１ページには、インドール及びトリプトフ
ァンは、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドとの反応
によって有色生成物を形成できることが記載されてい
る。この参考文献に開示されたインドールは、エールリ
ッヒ試薬と反応して、尿中のウロビリノーゲンとエール
リッヒ試薬との反応によって形成される色に酷似した赤
褐色を生じることから、ウロビリノーゲン用対照試薬と
して用いられてきた。改良された水溶性を有するインド
ールが望ましいと思われ、それは、より溶け易いインド
ールは、より濃縮された含浸液の調製を可能にして、吸
収性試薬片への充分量のインドールの取り込みを可能に
するからである。その上、より溶け易いインドールは、
試薬片から好適な濃度の試験液へのその再構成を容易に
する。
年）７５〜８１ページには、インドール及びトリプトフ
ァンは、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドとの反応
によって有色生成物を形成できることが記載されてい
る。この参考文献に開示されたインドールは、エールリ
ッヒ試薬と反応して、尿中のウロビリノーゲンとエール
リッヒ試薬との反応によって形成される色に酷似した赤
褐色を生じることから、ウロビリノーゲン用対照試薬と
して用いられてきた。改良された水溶性を有するインド
ールが望ましいと思われ、それは、より溶け易いインド
ールは、より濃縮された含浸液の調製を可能にして、吸
収性試薬片への充分量のインドールの取り込みを可能に
するからである。その上、より溶け易いインドールは、
試薬片から好適な濃度の試験液へのその再構成を容易に
する。
【０００７】米国特許第4,405,718 号明細書は、一般式
（II）：
（II）：
【０００８】
【化３】
【０００９】〔式中、Ｒ1 及びＲ2 はＨ又は非置換Ｃ
1-4 アルキル、Ｒ3 はＨ、非置換Ｃ1-4アルキル、非置
換Ｃ1-4 アルコキシ又はハロゲンである〕によって特徴
付けられるインドールの、ウロビリノーゲン用対照標準
としての非イオン洗剤中での用途を開示している。
1-4 アルキル、Ｒ3 はＨ、非置換Ｃ1-4アルキル、非置
換Ｃ1-4 アルコキシ又はハロゲンである〕によって特徴
付けられるインドールの、ウロビリノーゲン用対照標準
としての非イオン洗剤中での用途を開示している。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】上記配合物は所望の色
応答を与えはするものの、該インドールは、対照試薬と
しての用途に充分な程に水溶性ではなく、それゆえ、非
イオン界面活性剤と混合しなければ用いることができな
い。インドール／非イオン界面活性剤という配合物は、
水性環境中に置かれて、ウロビリノーゲン試験片中のエ
ールリッヒ溶液を試験するのに必要な量のインドールを
与える吸湿性物質の小片に対照試薬が単に吸収されるだ
けのタイプのフォーマットで用いるには不適当である。
応答を与えはするものの、該インドールは、対照試薬と
しての用途に充分な程に水溶性ではなく、それゆえ、非
イオン界面活性剤と混合しなければ用いることができな
い。インドール／非イオン界面活性剤という配合物は、
水性環境中に置かれて、ウロビリノーゲン試験片中のエ
ールリッヒ溶液を試験するのに必要な量のインドールを
与える吸湿性物質の小片に対照試薬が単に吸収されるだ
けのタイプのフォーマットで用いるには不適当である。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明は、ｐ−ジメチル
アミノベンズアルデヒドを含有する試薬系に対する対照
試験の方法に関する。この方法は、水溶液中で、試薬を
一般式（Ｉ）：
アミノベンズアルデヒドを含有する試薬系に対する対照
試験の方法に関する。この方法は、水溶液中で、試薬を
一般式（Ｉ）：
【００１２】
【化４】
【００１３】〔式中、Ｒは、ｎが２〜６（好ましくは２
〜４）である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -、又はｘが２若し
くは３であってｍが１若しくは２である、−〔ＯＣＨ2
−（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示される基である〕で示さ
れるインドールといっしょにする工程を含む。ｐ−ジメ
チルアミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベ
ンズアルデヒドの存在は、検出し得る変色によって確認
される。
〜４）である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -、又はｘが２若し
くは３であってｍが１若しくは２である、−〔ＯＣＨ2
−（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示される基である〕で示さ
れるインドールといっしょにする工程を含む。ｐ−ジメ
チルアミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベ
ンズアルデヒドの存在は、検出し得る変色によって確認
される。
【００１４】代表的には、スルホン化されたインドール
が、適当量のインドールを担持する吸湿性又は非吸湿性
物質のマトリックスの小片の形態で提供される。
が、適当量のインドールを担持する吸湿性又は非吸湿性
物質のマトリックスの小片の形態で提供される。
【００１５】本発明のウロビリノーゲン用対照標準は、
その水性溶液の形態で、ｐ−ジメチルアミノベンズアル
デヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩
酸を含有する試薬片を、インドールを含有する溶液に単
に浸漬し、そして予測された変色が起こるか否かを判定
するだけで用いることができる。代表的には、本発明の
インドールは、従来の担体物質及びインドールを含有す
る圧縮又は成形された錠剤の形態で担体中に包含させる
ことができる。好ましい実施態様においては、担体マト
リックスにインドールを包含させ、小片フォーマットで
用いることができる。担体マトリックスという用語は、
水又は生理学的流体に接触したときに、それらに不溶で
あり、かつその構造的完全性を維持する、吸湿性若しく
は非吸湿性のマトリックスを指すものとする。用い得る
好適な吸湿性マトリックスとしては、紙、セルロース、
木材及び合成樹脂のフリース（毛状繊維）並びに織布及
び不織布が挙げられる。このように、本発明の１種類又
はそれ以上のスルホン化インドールで含浸した担体マト
リックスを選ぶことにより、インドールを含有する小片
を水に単に浸すだけで、インドールを試験溶液に導入す
るための簡便な方法が与えられる。本発明に有用なスル
ホン化インドールの独自の溶解度特性は、それらが担体
マトリックスから容易に溶け出して、試験片中のエール
リッヒ組成物を試験するのに適した水性溶液を与えるこ
とから、このフォーマットでのそれらの使用を容易にす
る。
その水性溶液の形態で、ｐ−ジメチルアミノベンズアル
デヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒド及び塩
酸を含有する試薬片を、インドールを含有する溶液に単
に浸漬し、そして予測された変色が起こるか否かを判定
するだけで用いることができる。代表的には、本発明の
インドールは、従来の担体物質及びインドールを含有す
る圧縮又は成形された錠剤の形態で担体中に包含させる
ことができる。好ましい実施態様においては、担体マト
リックスにインドールを包含させ、小片フォーマットで
用いることができる。担体マトリックスという用語は、
水又は生理学的流体に接触したときに、それらに不溶で
あり、かつその構造的完全性を維持する、吸湿性若しく
は非吸湿性のマトリックスを指すものとする。用い得る
好適な吸湿性マトリックスとしては、紙、セルロース、
木材及び合成樹脂のフリース（毛状繊維）並びに織布及
び不織布が挙げられる。このように、本発明の１種類又
はそれ以上のスルホン化インドールで含浸した担体マト
リックスを選ぶことにより、インドールを含有する小片
を水に単に浸すだけで、インドールを試験溶液に導入す
るための簡便な方法が与えられる。本発明に有用なスル
ホン化インドールの独自の溶解度特性は、それらが担体
マトリックスから容易に溶け出して、試験片中のエール
リッヒ組成物を試験するのに適した水性溶液を与えるこ
とから、このフォーマットでのそれらの使用を容易にす
る。
【００１６】本発明のスルホン化インドールは、一般式
（Ｉ）：
（Ｉ）：
【００１７】
【化５】
【００１８】〔式中、Ｒは、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -（ｎ
は２〜６である）、又は−〔ＯＣＨ2−（ＣＨ2 ）x 〕m
ＳＯ3 -（ｘは２又は３、ｍは１又は２である）で示さ
れる基である〕で示される。これらのスルホン化アルキ
ル及びスルホン化アルキルエーテルは、所望の溶解度特
性を示しながらも、エールリッヒ試薬のｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズア
ルデヒドとの有色錯体を形成できるというそれらの前駆
体の能力を保持している。
は２〜６である）、又は−〔ＯＣＨ2−（ＣＨ2 ）x 〕m
ＳＯ3 -（ｘは２又は３、ｍは１又は２である）で示さ
れる基である〕で示される。これらのスルホン化アルキ
ル及びスルホン化アルキルエーテルは、所望の溶解度特
性を示しながらも、エールリッヒ試薬のｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒド又はｐ−ジエチルアミノベンズア
ルデヒドとの有色錯体を形成できるというそれらの前駆
体の能力を保持している。
【００１９】
【実施例】下記の実施例を用いて、本発明を更に説明す
る。
る。
【００２０】実施例１ ２−メチル−５−（４−スルホナトブトキシ）インドー
ルの製造 （ａ）５−ヒドロキシ−２−メチルインドール ５−メトキシ−２−メチルインドール８．６ｇ（５３．
４mmol）をＣＨ2 Ｃｌ2 １１０mlに溶解した−６５℃の
溶液に、三臭化ホウ素３０．４ｇ（１１７mmol）を滴下
した。反応混合物を室温まで暖め、３０分間攪拌した。
混合物を５℃まで冷却した後、水／クロロホルム５０％
溶液２００mlを注意深く加えた。水層を分離し、水酸化
ナトリウム水溶液でpHを５．８に調整した。酢酸エチル
１００mlで混合物を２回抽出し、次いで乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾過して濃縮することによって、生成物５．
３ｇが黄色固体として得られた。融点：１２４〜１２６
℃。1 H NMR（60MHz 、20％DMSO d6/CDCl3)δ：8.05（s 、1
H、NH）、7.05（d 、J=8Hz 、1H）、6.80（d 、J=2Hz
、1H）、6.55（dd、J=2、 8Hz、1H）、5.90（幅広いs
、1H、インドールのCH）、2.40（s 、3H）。
ルの製造 （ａ）５−ヒドロキシ−２−メチルインドール ５−メトキシ−２−メチルインドール８．６ｇ（５３．
４mmol）をＣＨ2 Ｃｌ2 １１０mlに溶解した−６５℃の
溶液に、三臭化ホウ素３０．４ｇ（１１７mmol）を滴下
した。反応混合物を室温まで暖め、３０分間攪拌した。
混合物を５℃まで冷却した後、水／クロロホルム５０％
溶液２００mlを注意深く加えた。水層を分離し、水酸化
ナトリウム水溶液でpHを５．８に調整した。酢酸エチル
１００mlで混合物を２回抽出し、次いで乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾過して濃縮することによって、生成物５．
３ｇが黄色固体として得られた。融点：１２４〜１２６
℃。1 H NMR（60MHz 、20％DMSO d6/CDCl3)δ：8.05（s 、1
H、NH）、7.05（d 、J=8Hz 、1H）、6.80（d 、J=2Hz
、1H）、6.55（dd、J=2、 8Hz、1H）、5.90（幅広いs
、1H、インドールのCH）、2.40（s 、3H）。
【００２１】（ｂ）２−メチル−５−（４−スルホナト
ブトキシ）インドール ２５％水素化カリウムで洗浄したトルエン２．７２ｇ
（１６．２mmol）とＤＭＳＯ３０mlとの混合物に、５−
ヒドロキシ−２−メチルインドール２．０ｇ（１３．６
mmol）を加えた。ジブロモブタン１１．５ｇ（５４．５
mmol）をＤＭＳＯ３０mlに溶解した溶液を、１５分間に
わたって滴下した。反応混合物を３０分間攪拌し、次い
でＣＨＣｌ3 ／水５０％溶液２００mlで希釈した。水層
をＣＨＣｌ3 １００mlで更に２回抽出し、そうして有機
抽出物を併合し、Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥して濃縮した。残
渣を１５０ｇのシリカゲル６０によるクロマトグラフィ
ーにかけ、ＣＨＣｌ3 で溶出させて、５−（４−ブロモ
ブトキシ）−２−メチルインドール１．１ｇを白色固体
として生成させた。融点：７７〜７９℃。
ブトキシ）インドール ２５％水素化カリウムで洗浄したトルエン２．７２ｇ
（１６．２mmol）とＤＭＳＯ３０mlとの混合物に、５−
ヒドロキシ−２−メチルインドール２．０ｇ（１３．６
mmol）を加えた。ジブロモブタン１１．５ｇ（５４．５
mmol）をＤＭＳＯ３０mlに溶解した溶液を、１５分間に
わたって滴下した。反応混合物を３０分間攪拌し、次い
でＣＨＣｌ3 ／水５０％溶液２００mlで希釈した。水層
をＣＨＣｌ3 １００mlで更に２回抽出し、そうして有機
抽出物を併合し、Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥して濃縮した。残
渣を１５０ｇのシリカゲル６０によるクロマトグラフィ
ーにかけ、ＣＨＣｌ3 で溶出させて、５−（４−ブロモ
ブトキシ）−２−メチルインドール１．１ｇを白色固体
として生成させた。融点：７７〜７９℃。
【００２２】５−（４−ブロモブトキシ）−２−メチル
インドール５．３ｇ（１８．７mmol）、及び水５０mlに
溶解した亜硫酸ナトリウム２．６ｇ（２０．６mmol）の
混合物を一晩還流し、上清液を熱いうちに傾瀉（デカン
テーション）した。溶液が室温まで冷えた後、沈澱が観
察される時点までＮａＣｌを加えた。混合物を濾過して
白色固体を得たが、依然として多少の塩を含有していた
ので、熱エタノール７０mlにてスラリー化し、熱いうち
にスラリーを濾過した。冷却すると、ゼラチン状塊体が
エタノールから分離した。これが溶解するまで水を加
え、溶液を濃縮して薄膜（フィルム）にした。残渣を強
減圧下で結晶させて、５重量％の塩を含有する生成物
２．１ｇを得た。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：7.2 （d 、J=8.5Hz 、
1H）、6.88（d 、J=2.3Hz 、1H）、6.60（dd、J=2.3 、
8.5Hz 、1H）、6.00（t 、J=1Hz 、1H）、3.89（t 、J=
6Hz 、2H）、2.5 （t 、J=7Hz 、2H）、1.75（m 、4
H）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：152.59、136.11、131.31、12
9.19、111.00、102.47、99.05 、67.98 、51.32 、28.5
0 、22.15 、13.55 。
インドール５．３ｇ（１８．７mmol）、及び水５０mlに
溶解した亜硫酸ナトリウム２．６ｇ（２０．６mmol）の
混合物を一晩還流し、上清液を熱いうちに傾瀉（デカン
テーション）した。溶液が室温まで冷えた後、沈澱が観
察される時点までＮａＣｌを加えた。混合物を濾過して
白色固体を得たが、依然として多少の塩を含有していた
ので、熱エタノール７０mlにてスラリー化し、熱いうち
にスラリーを濾過した。冷却すると、ゼラチン状塊体が
エタノールから分離した。これが溶解するまで水を加
え、溶液を濃縮して薄膜（フィルム）にした。残渣を強
減圧下で結晶させて、５重量％の塩を含有する生成物
２．１ｇを得た。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：7.2 （d 、J=8.5Hz 、
1H）、6.88（d 、J=2.3Hz 、1H）、6.60（dd、J=2.3 、
8.5Hz 、1H）、6.00（t 、J=1Hz 、1H）、3.89（t 、J=
6Hz 、2H）、2.5 （t 、J=7Hz 、2H）、1.75（m 、4
H）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：152.59、136.11、131.31、12
9.19、111.00、102.47、99.05 、67.98 、51.32 、28.5
0 、22.15 、13.55 。
【００２３】実施例２ ２−メチル−５−（２−スルホナトエチル）インドール
の製造 （ａ）塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒド
ラジン ４−ニトロフェネチルアルコール５ｇ、及び無水エタノ
ール５０ml中で炭素に１０％付加したＰｄ０．５８ｇの
スラリーを、５０psi のＨ2 下で一晩振盪した。混合物
を濾過し、濃縮して、４−（２−ヒドロキシエチル）ア
ニリン３．６ｇを得た。融点：１０１〜１０２℃。
の製造 （ａ）塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒド
ラジン ４−ニトロフェネチルアルコール５ｇ、及び無水エタノ
ール５０ml中で炭素に１０％付加したＰｄ０．５８ｇの
スラリーを、５０psi のＨ2 下で一晩振盪した。混合物
を濾過し、濃縮して、４−（２−ヒドロキシエチル）ア
ニリン３．６ｇを得た。融点：１０１〜１０２℃。
【００２４】このヒドロキシエチルアニリン７．０６ｇ
（５６．３mmol）、濃ＨＣｌ１６．９ml及び水１５０ml
の溶液を調製し、５℃に冷却した。水２５mlに溶解した
硝酸ナトリウム（４．０８ｇ、５９mmol）を滴下した。
１５分間攪拌した後、少量のスルファミン酸の添加によ
って過剰なＮａＮＯ3 を分解し、これをヨード澱粉紙を
用いて決定した。次いで、濃ＨＣｌ４８mlに加えた塩化
第二スズ二水和物４８ｇ（２１８mmol）の５℃の混合物
に、これを滴下した。室温まで暖め、１時間攪拌した
後、ＮａＯＨ水溶液でpHを５に調整し、そうして溶液を
濾過し、ＨＣｌ水溶液でpHを１．５まで下げた。この時
点で、混合物を濃縮し、濃縮の間定期的に濾過して、沈
澱したＮａＣｌを除去した。更に濃縮すると、ヒドラジ
ン塩酸塩３．６ｇが白色の結晶性固体として析出した。
融点：１９４〜１９５℃（分解）。1 H NMR（60MHz 、DMSO-d6 ）δ：7.1 （d 、2H、J=8Hz
）、6.9 （d 、2H、J=8Hz ）、3.70（大きく幅広いt
、12H 、水、NH及びOCH2）、2.70（t 、2H、J=8Hz）。
（５６．３mmol）、濃ＨＣｌ１６．９ml及び水１５０ml
の溶液を調製し、５℃に冷却した。水２５mlに溶解した
硝酸ナトリウム（４．０８ｇ、５９mmol）を滴下した。
１５分間攪拌した後、少量のスルファミン酸の添加によ
って過剰なＮａＮＯ3 を分解し、これをヨード澱粉紙を
用いて決定した。次いで、濃ＨＣｌ４８mlに加えた塩化
第二スズ二水和物４８ｇ（２１８mmol）の５℃の混合物
に、これを滴下した。室温まで暖め、１時間攪拌した
後、ＮａＯＨ水溶液でpHを５に調整し、そうして溶液を
濾過し、ＨＣｌ水溶液でpHを１．５まで下げた。この時
点で、混合物を濃縮し、濃縮の間定期的に濾過して、沈
澱したＮａＣｌを除去した。更に濃縮すると、ヒドラジ
ン塩酸塩３．６ｇが白色の結晶性固体として析出した。
融点：１９４〜１９５℃（分解）。1 H NMR（60MHz 、DMSO-d6 ）δ：7.1 （d 、2H、J=8Hz
）、6.9 （d 、2H、J=8Hz ）、3.70（大きく幅広いt
、12H 、水、NH及びOCH2）、2.70（t 、2H、J=8Hz）。
【００２５】（ｂ）５−ヒドロキシエチル−２−メチル
インドール 塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒドラジン
３．３５ｇ、２，２−ジメトキシプロパン２．５ｇ、ア
セトン５ml及びアセトニトリル２mlの混合物を調製し、
室温で２時間攪拌した。濾過によって、ヒドラゾン３．
３ｇが白色固体として生成した。融点：１２２〜１２４
℃。それ以上精製することなく、ヒドラゾン２ｇを濃Ｈ
Ｃｌ５０ml中で２時間還流した。混合物を１０mlの体積
にまで濃縮し、次いでＮａＨＣＯ3 水溶液で中和した。
混合物をＥｔＯＡｃ１００mlで抽出し、乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾取して、蒸発させた。残渣を、１００％の
シリカゲル６０でのクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ3
ＯＨ／ＣＨＣｌ3 ５％溶液で溶出した。適切な画分の蒸
発によって、生成物１．３ｇが淡黄色の油として生成し
た。1 H NMR（60MHz 、CDCl3 ）δ：8.2 （幅広いs 、1H、N
H）、7.3 〜6.6 （m 、3H、芳香環のCH）、6.1 （幅広
いs 、1H、インドール環のCH）、3.8 （t 、J=8Hz、2
H、CH2 ）、2.9 （t 、J=8Hz 、2H、CH2 ）、2.3 （s
、3H、CH3 ）。
インドール 塩酸４−（２−ヒドロキシエチル）フェニルヒドラジン
３．３５ｇ、２，２−ジメトキシプロパン２．５ｇ、ア
セトン５ml及びアセトニトリル２mlの混合物を調製し、
室温で２時間攪拌した。濾過によって、ヒドラゾン３．
３ｇが白色固体として生成した。融点：１２２〜１２４
℃。それ以上精製することなく、ヒドラゾン２ｇを濃Ｈ
Ｃｌ５０ml中で２時間還流した。混合物を１０mlの体積
にまで濃縮し、次いでＮａＨＣＯ3 水溶液で中和した。
混合物をＥｔＯＡｃ１００mlで抽出し、乾燥し（Ｎａ2
ＳＯ4 ）、濾取して、蒸発させた。残渣を、１００％の
シリカゲル６０でのクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ3
ＯＨ／ＣＨＣｌ3 ５％溶液で溶出した。適切な画分の蒸
発によって、生成物１．３ｇが淡黄色の油として生成し
た。1 H NMR（60MHz 、CDCl3 ）δ：8.2 （幅広いs 、1H、N
H）、7.3 〜6.6 （m 、3H、芳香環のCH）、6.1 （幅広
いs 、1H、インドール環のCH）、3.8 （t 、J=8Hz、2
H、CH2 ）、2.9 （t 、J=8Hz 、2H、CH2 ）、2.3 （s
、3H、CH3 ）。
【００２６】（ｃ）２−メチル−５−（２−スルホナト
エチル）インドール ヒドロキシエチルインドール０．４８ｇ（２．７５mmo
l）、ＰＢｒ3 ０．３７ｇ（１．３mmol）、及びＣＨ2
Ｃｌ2 １０mlに溶解したピリジン０．０７５mlの混合物
を、室温で６時間攪拌した。反応混合物をＣＨ2 Ｃｌ2
５０mlで希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。
混合物を乾燥し（Ｎａ2 ＳＯ4 ）、濾過して濃縮した。
１００ｇのシリカゲル６０での残渣のクロマトグラフィ
ーによって、５−（２−ブロモエチル）−２−メチルイ
ンドール０．２ｇが白色固体として生成した。融点：１
００〜１０２℃。これを、Ｎａ2 ＳＯ3 ０．１３ｇ
（１．０３mmol）及び３：１の水−ＤＭＦ１．４mlの混
合物に加えた。１００℃で７時間の加熱後、混合物を濃
縮乾固し、水５mlを加えた。混合物をＣＨＣｌ3 で１回
抽出し、水層を約２mlの体積にまで濃縮した。少量のＮ
ａＣｌの添加によって生成物を塩析した後、５−スルホ
ナトエチルインドール０．０５ｇが白色固体として得ら
れた。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：10.8（幅広いs 、1H、
NH）、7.16（s 、1H、芳香族のH ）、7.14（d 、J=8Hz
、芳香族のH ）、6.8 （dd、J=1.5 、8Hz 、1H、芳香
族のH ）、6.01（s 、1H、インドールのCH）、2.89（m
、2H、-O3SCH2 ）、2.66（m 、2H、ベンジルのCH
2 ）、2.35（s 、3H、CH3 ）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：135.48、134.65、130.95、12
8.87、120.48、117.85、110.30、98.70 、54.19 、31.7
0 、13.40 。
エチル）インドール ヒドロキシエチルインドール０．４８ｇ（２．７５mmo
l）、ＰＢｒ3 ０．３７ｇ（１．３mmol）、及びＣＨ2
Ｃｌ2 １０mlに溶解したピリジン０．０７５mlの混合物
を、室温で６時間攪拌した。反応混合物をＣＨ2 Ｃｌ2
５０mlで希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。
混合物を乾燥し（Ｎａ2 ＳＯ4 ）、濾過して濃縮した。
１００ｇのシリカゲル６０での残渣のクロマトグラフィ
ーによって、５−（２−ブロモエチル）−２−メチルイ
ンドール０．２ｇが白色固体として生成した。融点：１
００〜１０２℃。これを、Ｎａ2 ＳＯ3 ０．１３ｇ
（１．０３mmol）及び３：１の水−ＤＭＦ１．４mlの混
合物に加えた。１００℃で７時間の加熱後、混合物を濃
縮乾固し、水５mlを加えた。混合物をＣＨＣｌ3 で１回
抽出し、水層を約２mlの体積にまで濃縮した。少量のＮ
ａＣｌの添加によって生成物を塩析した後、５−スルホ
ナトエチルインドール０．０５ｇが白色固体として得ら
れた。1 H NMR（300MHz、DMSO-d6 ）δ：10.8（幅広いs 、1H、
NH）、7.16（s 、1H、芳香族のH ）、7.14（d 、J=8Hz
、芳香族のH ）、6.8 （dd、J=1.5 、8Hz 、1H、芳香
族のH ）、6.01（s 、1H、インドールのCH）、2.89（m
、2H、-O3SCH2 ）、2.66（m 、2H、ベンジルのCH
2 ）、2.35（s 、3H、CH3 ）。13 C NMR （DMSO-d6 ）δ：135.48、134.65、130.95、12
8.87、120.48、117.85、110.30、98.70 、54.19 、31.7
0 、13.40 。
【００２７】実施例３ ２−メチル−５−（４−スルホナトブトキシ）インドー
ルのナトリウム塩２５ｇを水１L に溶解した溶液を調製
し、１５cm×８cmの濾紙のウェブを飽和させた。濾紙を
１００℃で６分間空気乾燥させた。この濾紙の約１．０
cm×約１．０cm（２／５インチ×２／５インチ）の部分
を蒸留水に浸漬し、２分間振盪した。この溶液を更に２
８分間放置し、その後、濾紙を除去した。「浸漬して読
み取る」試薬片〔Multistix （商品名）１０ＳＧ〕を溶
液に浸漬し、飽和後直ちに取り出し、６０秒後に読み取
った。試薬片のウロビリノーゲンパッドは変色し、これ
を更に２５秒後に肉眼及びClinitek（商品名）２００＋
という反射率分光光度計によって読み取った。インドー
ル試験の対照は、Multistix のウロビリノーゲンパッド
が１mg/dL(１エールリッヒ単位/dL)の読みを示すなら
ば、充分であると思われた。Clinitek２００＋により下
記のアルゴリズムを用いて解読結果(decodes)を算出し
た： 解読結果＝（５５０nmでの反射率／６３０nmでの反射
率）×１０００
ルのナトリウム塩２５ｇを水１L に溶解した溶液を調製
し、１５cm×８cmの濾紙のウェブを飽和させた。濾紙を
１００℃で６分間空気乾燥させた。この濾紙の約１．０
cm×約１．０cm（２／５インチ×２／５インチ）の部分
を蒸留水に浸漬し、２分間振盪した。この溶液を更に２
８分間放置し、その後、濾紙を除去した。「浸漬して読
み取る」試薬片〔Multistix （商品名）１０ＳＧ〕を溶
液に浸漬し、飽和後直ちに取り出し、６０秒後に読み取
った。試薬片のウロビリノーゲンパッドは変色し、これ
を更に２５秒後に肉眼及びClinitek（商品名）２００＋
という反射率分光光度計によって読み取った。インドー
ル試験の対照は、Multistix のウロビリノーゲンパッド
が１mg/dL(１エールリッヒ単位/dL)の読みを示すなら
ば、充分であると思われた。Clinitek２００＋により下
記のアルゴリズムを用いて解読結果(decodes)を算出し
た： 解読結果＝（５５０nmでの反射率／６３０nmでの反射
率）×１０００
【００２８】最初の解読結果の値と６時間後のそれとの
間の相関関係は、再構成された対照溶液はこの期間にわ
たって安定的であることを示した。
間の相関関係は、再構成された対照溶液はこの期間にわ
たって安定的であることを示した。
【００２９】表１を参照すると、mg/dL の欄は、観測さ
れた解読結果の値に対応するウロビリノーゲンの濃度を
表す。ウロビリノーゲンのそれぞれの濃度についての解
読結果の範囲は、標準分析法を用いて機器により評価し
た人為的研究及び臨床的研究を通じて判定した。
れた解読結果の値に対応するウロビリノーゲンの濃度を
表す。ウロビリノーゲンのそれぞれの濃度についての解
読結果の範囲は、標準分析法を用いて機器により評価し
た人為的研究及び臨床的研究を通じて判定した。
【００３０】
【表１】
【００３１】上記のデータから、本発明の方法は、水中
に置いたときに、固有のウロビリノーゲン濃度に対応す
る反射率の読みを与えるインドール溶液を提供する対照
用試験片を作成するのに用い得ると判定できる。
に置いたときに、固有のウロビリノーゲン濃度に対応す
る反射率の読みを与えるインドール溶液を提供する対照
用試験片を作成するのに用い得ると判定できる。
【００３２】本発明のインドールは、水に非常に溶け易
く、濾紙を含浸するのに充分な高濃度で溶解することが
でき、そして水中で再構成されて、ウロビリノーゲン試
薬片に対する陽性対照を与えることができる。試験片に
おいてエールリッヒ試薬と反応したその他のインドール
は、水に充分溶解し得ないか〔例えば２，５−ジメチル
インドール、５−メトキシ−２−メチルインドール、イ
ンドール−２−カルボン酸、インドール−３−酢酸及び
５−メトキシインドール−３−酢酸〕、機器で読み取る
には反応が遅過ぎるか〔例えば１−（４−スルホブチ
ル）−２−メチルインドール〕、または対照溶液中の他
の分析対象物の反応に干渉されるか〔例えばトルエンに
含浸した２−メチルインドール〕のいずれかであった。
く、濾紙を含浸するのに充分な高濃度で溶解することが
でき、そして水中で再構成されて、ウロビリノーゲン試
薬片に対する陽性対照を与えることができる。試験片に
おいてエールリッヒ試薬と反応したその他のインドール
は、水に充分溶解し得ないか〔例えば２，５−ジメチル
インドール、５−メトキシ−２−メチルインドール、イ
ンドール−２−カルボン酸、インドール−３−酢酸及び
５−メトキシインドール−３−酢酸〕、機器で読み取る
には反応が遅過ぎるか〔例えば１−（４−スルホブチ
ル）−２−メチルインドール〕、または対照溶液中の他
の分析対象物の反応に干渉されるか〔例えばトルエンに
含浸した２−メチルインドール〕のいずれかであった。
フロントページの続き (72)発明者 マリリン・ラドケ アメリカ合衆国、インデイアナ州、46614、 サウス・ベンド、オレンジ・ロード 62244
Claims (10)
- 【請求項１】 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒドを含有する試薬
に対する対照試験の方法において、（ａ）該試薬を、一
般式（Ｉ）： 【化１】 〔式中、Ｒは、ｎが２〜６である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ
3 -、又はｘが２若しくは３であってｍが１若しくは２で
ある、−〔ＯＣＨ2 −（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示され
る基である〕で示されるインドールの水性溶液といっし
ょにする工程、及び（ｂ）該水性溶液における色の形成
を測定する工程を含むことを特徴とする方法。 - 【請求項２】 Ｒが−（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 -であり、ｎが
２〜４である、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 ｎが４である、請求項２記載の方法。
- 【請求項４】 インドールが、適当量の該インドールを
担持するマトリックス物質の小片の形態で与えられ、そ
して水性媒体中に置かれて、溶解によって水性溶液を与
える、請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 マトリックスが濾紙である、請求項４記
載の方法。 - 【請求項６】 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド又
はｐ−ジエチルアミノベンズアルデヒドを含有する組成
物の効力を試験するための試験片であって、一般式
（Ｉ）： 【化２】 〔式中、Ｒは、ｎが２〜６である、−（ＣＨ2 ）n ＳＯ
3 -、又はｘが２若しくは３であってｍが１若しくは２で
ある、−〔ＯＣＨ2 −（ＣＨ2 ）x 〕m ＳＯ3 -で示され
る基である〕で示されるインドールを含有する担体マト
リックスからなることを特徴とする試験片。 - 【請求項７】 ｎが２〜４である、請求項６記載の試験
片。 - 【請求項８】 ｎが４である、請求項７記載の試験片。
- 【請求項９】 担体マトリックスが吸湿性物質で構成さ
れる、請求項６記載の試験片。 - 【請求項１０】 吸湿性物質が濾紙である、請求項９記
載の試験片。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US7244193A | 1993-06-07 | 1993-06-07 | |
| US072441 | 1993-06-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0712810A true JPH0712810A (ja) | 1995-01-17 |
| JP3426030B2 JP3426030B2 (ja) | 2003-07-14 |
Family
ID=22107594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12370094A Expired - Fee Related JP3426030B2 (ja) | 1993-06-07 | 1994-06-06 | ウロビリノーゲン試験具を有効化する方法及び試験具 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5468641A (ja) |
| EP (1) | EP0628821A3 (ja) |
| JP (1) | JP3426030B2 (ja) |
| KR (1) | KR100289853B1 (ja) |
| AU (1) | AU670371B2 (ja) |
| CA (1) | CA2114764A1 (ja) |
| TW (1) | TW290641B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5076876A (en) * | 1989-06-21 | 1991-12-31 | Diemat, Inc. | Method of attaching an electronic device to a substrate |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5866424A (en) * | 1995-07-10 | 1999-02-02 | Bayer Corporation | Stable liquid urobilinogen control composition |
| KR100498590B1 (ko) * | 1998-06-30 | 2005-09-30 | 주식회사 하이닉스반도체 | 반도체 소자의 소자분리막 형성 방법 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4405718A (en) * | 1981-07-20 | 1983-09-20 | Miles Laboratories, Inc. | Method and composition for urobilinogen control standard |
-
1994
- 1994-01-31 TW TW083100775A patent/TW290641B/zh active
- 1994-02-02 CA CA002114764A patent/CA2114764A1/en not_active Abandoned
- 1994-05-03 US US08/238,003 patent/US5468641A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-25 EP EP94108036A patent/EP0628821A3/en not_active Withdrawn
- 1994-06-03 AU AU64529/94A patent/AU670371B2/en not_active Ceased
- 1994-06-03 KR KR1019940012496A patent/KR100289853B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-06-06 JP JP12370094A patent/JP3426030B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5076876A (en) * | 1989-06-21 | 1991-12-31 | Diemat, Inc. | Method of attaching an electronic device to a substrate |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2114764A1 (en) | 1994-12-08 |
| EP0628821A2 (en) | 1994-12-14 |
| US5468641A (en) | 1995-11-21 |
| AU670371B2 (en) | 1996-07-11 |
| EP0628821A3 (en) | 1995-09-20 |
| JP3426030B2 (ja) | 2003-07-14 |
| KR100289853B1 (ko) | 2001-05-15 |
| AU6452994A (en) | 1994-12-08 |
| TW290641B (ja) | 1996-11-11 |
| KR950001304A (ko) | 1995-01-03 |
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |