JP2665412B2 - 高感度のイオン測定方法、該方法に適する物質の使用および対応する試薬 - Google Patents

高感度のイオン測定方法、該方法に適する物質の使用および対応する試薬

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JP2665412B2 JP3110266A JP11026691A JP2665412B2 JP 2665412 B2 JP2665412 B2 JP 2665412B2 JP 3110266 A JP3110266 A JP 3110266A JP 11026691 A JP11026691 A JP 11026691A JP 2665412 B2 JP2665412 B2 JP 2665412B2
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、水性液中のイオンが水
性液と非混和性である相に移り、その結果、そこに存在
する pＨインジケーターがイオン測定に用いられる色相
変化を受ける、水性液、特に、血液、血漿または尿のよ
うな体液中のイオンを測定する方法に関する。加えて、
本発明は、かかる方法の測定感度の増大をもたらす物質
の使用に関する。さらに、本発明は、水と非混和性であ
る媒体中にイオノフォアおよびpＨインジケーターを有
する、水性液中のイオン測定用の試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術および課題】溶液中のイオン、特に、アル
カリ性およびアルカリ土類性イオンを測定するための多
くの方法が知られている。炎光光度測定、原子吸光測光
法、さらに最近は、この点においてイオン選択電極法が
最も重要となっている。これらのすべての方法はかなり
の機器を必要とする。このため、操作がより簡単な方法
で使用者がイオンを測定することを可能とする別法を探
しだす試みがなされてきた。かかる方法は、海水の脱塩
でのナトリウムイオンの速やかな測定に、軟水化等にお
けるカルシウムイオンの速やかな測定に利点がある。速
やかに実施することができ、操作が簡単である方法は、
心臓血管系の障害、筋肉障害、腎障害または種々の原因
の発作症状等の実験診断および緊急診断における血液、
血漿、血清または尿のような体液中のナトリウムおよび
カルシウムイオンの測定に特に重要である。リチウム測
定は、例えば、抗鬱治療のモニター観察において必要で
ある。
【０００３】着色アニオンの液−液抽出に基づく多くの
方法が、イオン、特に、前記の診断問題で特に重要であ
るアルカリ性イオンの簡単な測定法として知られてい
る。これらの方法においては、アニオン性染料をカチオ
ンの水溶液に加え、つづいてそれをイオノフォアを含有
し、水と非混和性である溶媒と一緒に振盪することによ
り抽出する。アルカリ性イオンの複合剤であるイオノフ
ォアは、比例量の染料と一緒に該イオンを有機相中に引
き入れる。水相（過剰の染料含有）を除去した後、有機
相を光度測定により分析する。
【０００４】この方法は、広く、湿式化学にて用いられ
るが、いわゆる、乾式化学においてはあまり用いられて
いない。この語は、試験担体が、さらには前記の速やか
な診断法における試験反応に必要な試薬のすべてが、吸
収物質または膨張能を有する物質のごとき１個または数
個の担体マトリックス中または上にて乾式状態で存在す
ることを包含すると認識されている。物質を定量測定す
る場合、液体試料を試験担体に塗布し、そこで該試料を
試験反応に必要な試薬と接触させるようにする。測定物
質の測度として測定可能なシグナルが形成される。該シ
グナルが色相形成または色相変化からなる場合、視覚的
にまたは光度測定的に、好ましくは反射率光度測定法に
より評価することができる。
【０００５】試験担体の簡素化の原理は、染料をイオン
測定用試料に加え、ついでその過剰量を除去しなければ
ならないことと矛盾している。したがって、ＥＰ−Ａ−
００４１１７５号に開示されているかかる方法が乾式試
験において重要視されないことは意外なことではない。
【０００６】いわゆる「不均一系 pＨ反応」の原理に基
づくカチオン測定法は、試験担体の場合により適してい
る。
【化１１】
【０００７】この場合、水相と有機相の２相系が存在す
る。検出すべきカチオン用の特定のイオノフォアおよび
pＨインジケーターを有機相に溶かす。また、両方の化
学種はクロモイオノフォア（chromoionophore）とし
て、すなわち、化学結合を介して結合し、単一分子を形
成して存在しうる。検出イオンは２相界面でイオノフォ
アにより捕縛され、有機層に移り、有機層においてイオ
ン−イオノフォア複合体として存在する。電荷を平衡に
するため、有機相中に存在する pＨインジケーターはプ
ロトン放出を引き起こし、該プロトンは水相に移る。こ
のようにして、水相中、当初に存在する検出イオンの濃
度に比例する量の着色インジケーターアニオンが形成さ
れる。
【０００８】この原理は、最初、イオノフォアとしてバ
リノマイシンを用い、pＨインジケーターとしてテトラ
ブロモフェノールフタレインエチルエステルを用いるイ
ー・エス・ハイマン（Ｅ.Ｓ.Ｈyman），バイオフィジカ
ル・ソサイエティー・アブストラクツ（Ｂiophysical
Ｓociety Ａbstracts），１９７１、７２ａにおける液
−液抽出にて言及された。
【０００９】クロモイオノフォアを用いる記載は、例え
ば、ケイ・ウエノおよびエム・タカギ（Ｋ.Ｕenoおよび
Ｍ.Ｔakagi），スタディーズ・イン・フィジカル・アン
ド・セオレティカル・ケミストリー（Ｓtudies in Ｐhy
sical and Ｔheoretical Ｃhemistry）２７，２７９〜
２９３（１９８２）ならびにエッチ・ナカムラ（Ｈ.Ｎa
kamura）ら，分析化学 ３１，Ｅ１３１〜Ｅ１３４（１
９８２）に示されている。
【００１０】該刊行物においては、該液−液抽出を分析
操作として用いている。この原理に基づくイオンの速や
かな診断に関する具体例が数例記載されている。それら
は主にそれを実施する方法において、すなわち、速やか
な診断に有用な形態が有機相においていかなるものであ
るかの認識で異なるにすぎない。一般に、これらすべて
の適用において、有機相は、比較的非揮発性の有機液体
および／または水と非混和性である疎水性ポリマーから
なる。両者が固溶体として存在する場合、その場合、可
塑性プラスチックと称される。
【００１１】ＥＰ−Ａ−０１２５５５５号において、有
機相が可塑性、非極性、非孔性プラスチックフィルムと
して存在し、その中にイオノフォアおよびインジケータ
ーを溶かした具体例が記載されている。ＥＰ−Ａ−０１
７５９９０号においては、親水性で、好ましくは可溶性
粒子の適当な有機ポリマーを、疎水性、フィルム形成の
水不溶性ポリマーの有機相に固定している。適用の形態
がＥＰ−Ａ−０１２５５５４号に記載されており、そこ
では有機疎水相は親水性マトリックスに固定された小滴
の形態である。ＥＰ−Ａ−０１５３６４１号は、クロモ
フォアとイオノフォアを含有する有機疎水相で含浸させ
た多孔性担体マトリックスを記載している。好ましい担
体マトリックスとして紙が記載されている。ＥＰ−Ａ−
０１４１６４７号においては、着色した可塑性プラスチ
ックとしての有機相が記載されており、そのためさらに
クロモイオノフォアも用いられる。
【００１２】当該分野におけるかかる状況は、不均一系
pＨ反応の原理に基づくイオン試験を評価する際に生じ
うる一般的問題に対する解決を何ら示していない。その
問題とは、最も高い測定感度の範囲が、必ずしも、臨床
的に関連する濃度範囲に対応していないことである。こ
のことは、例えば、次のこと：ヒト血漿中のカリウムの
正常な範囲は３.５〜５.５ミリモル／Ｌであることから
示される。正常な値以上のまたは以下の値は正確に測定
しなければならない。結果として、最適の分析結果を得
るには、測定操作の最高精度の範囲はこの濃度範囲を包
含していなければならない。不均一系 pＨ反応の原理に
従ってイオンを測定する場合、これは、pＨインジケー
ターの色相変化が、測定されなければならないイオンの
濃度範囲にて、測定しうるならびに可能であるシグナル
変化を生じさせることを意味する。反射率測定の場合、
これは、反射率の変化が測定されるべき問題のイオンの
濃度範囲にてできる限り大きくなければならないことを
意味する。しかしながら、これは必ずしもそうであると
は限らない。
【００１３】実際、不均一系 pＨ反応の原理によれば、
酸を有機相に加えることにより、pＨインジケーターの
色相変化の範囲を、すなわち、イオン測定における最高
精度の測定範囲をシフトさせることは可能である。これ
に関して以下の機構が考えられる：電解質イオンがイオ
ノフォアにより有機相中に引き入れられると、その場
合、水相中の電化平衡を維持するための必要なプロトン
の切断は、酸の強度、およびその中に存在する酸および
インジケーターの濃度にのみ依存する。酸によって切断
されると、その場合、色相変化は生じない。反対に、p
Ｈインジケーターによって切断されると、その場合、色
相変化が生じる。したがって、該インジケーターよりも
さらに酸性である酸がまずイオン均等物を消耗し、その
結果、該インジケーターは、該イオンの高濃度範囲にお
いてのみ色相変化を生じさせることとなるであろう。
【００１４】しかしながら、ハロゲン−カルボン酸、ハ
ロゲン−およびニトロベンゾールカルボン酸、リン酸ジ
エステルおよび類似酸のような通常の脂肪親和性の強酸
での実験により、実際問題として、これらの酸が、不均
一系 pＨ反応の原理に従って、イオン測定においてほと
んどまったく効果を有さないこと、すなわち、高感度の
範囲にてほとんど効果を有さないことが証明された。
【００１５】
【課題を解決するための手段】したがって、本発明の目
的は、不均一系 pＨ反応の原理に基づくイオン測定方法
における物質、または該反応の高感度の範囲を検査イオ
ンの濃度範囲に適合させて用いることのできる適当な試
薬における物質を提供することである。
【００１６】当該目的は本願特許請求の範囲に記載され
ている発明により達成される。
【００１７】本発明は、水性液中のイオンが該水性液と
非混和性である相に移り、その結果、そこに存在する p
Ｈインジケーターがイオン測定に用いることのできる色
相変化を受ける水性液中のイオン測定方法であって、測
定感度を増加させるために、式Ｉ：
【化１２】 ［式中、Ｒ1〜Ｒ4基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲンで置換されたアルキル基を意味
する］で示される化合物、式ＩＩ：
【化１３】 ［式中、Ｒ5〜Ｒ9基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基であるか、ま
たはＲ5およびＲ6がニトロである場合、Ｒ8およびＲ9は
また水素とすることができる］で示される化合物、およ
び式ＩＩＩ：
【化１４】 ［式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13およびＲ14は同一また
は異なり、各々、水素、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ア
ルキルスルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基を意
味する］で示される化合物からなる群からの物質を、水
性液と非混和性である相において用いることを特徴とす
る水性液中のイオンの測定方法を提供する。
【００１８】本発明のさらなる目的は、イオン測定方法
の測定感度を増加させるために、式Ｉ：
【化１５】 ［式中、Ｒ1〜Ｒ4基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基を意味する］
で示される化合物、式ＩＩ：
【化１６】 ［式中、Ｒ5〜Ｒ9基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基であるか、ま
たはＲ5およびＲ6がニトロ基である場合、Ｒ8およびＲ9
はまた水素とすることができる］で示される化合物、お
よび式ＩＩＩ：
【化１７】 ［式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13およびＲ14は同一また
は異なり、各々、水素、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ア
ルキルスルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基を意
味する］で示される化合物からなる群からの物質の使用
にある。
【００１９】加えて、本発明は、測定感度を増加させる
ため、水と非混和性である媒体中にてイオノフォアおよ
び pＨインジケーターを有する、水性液中のイオン測定
用試薬であって、式Ｉ：
【化１８】 ［式中、Ｒ1〜Ｒ4基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基を意味する］
で示される化合物、式ＩＩ：
【化１９】 ［式中、Ｒ5〜Ｒ9基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基であるか、ま
たはＲ5およびＲ6がニトロ基である場合、Ｒ8およびＲ9
はまた水素とすることができる］で示される化合物、お
よび式ＩＩＩ：
【化２０】 ［式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13およびＲ14は同一また
は異なり、各々、水素、ニトロ、ハロゲン、シアノ、ア
ルキルスルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基を意
味する］で示される化合物からなる群からの物質を有す
ることを特徴とするイオン測定用試薬を提供する。
【００２０】加えて、本発明のさらなる目的は、イオン
測定用の試薬を製造するために、式Ｉ：
【化２１】 ［式中、Ｒ1〜Ｒ4基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基を意味する］
で示される化合物、式ＩＩ：
【化２２】 ［式中、Ｒ5〜Ｒ9基の一つはアルキル、アルコキシおよ
びアラルキルの群からの基であり、他の基は同一または
異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルス
ルホニルまたはハロゲン置換のアルキル基であるか、ま
たはＲ5およびＲ6がニトロである場合、Ｒ8およびＲ9は
また水素とすることができる］で示される化合物、およ
び式ＩＩＩ：
【化２３】 ［式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13およびＲ14は同一また
は異なり、各々、水素、ニトロ基、ハロゲン、シアノ
基、アルキルスルホニル基またはハロゲン置換のアルキ
ル基を意味する］で示される化合物からなる群からの物
質の使用にある。
【００２１】本発明の式Ｉの化合物の典型的なものとし
ては、式Ｉ'：
【化２４】 ［式中、Ｒ2'はアルキルまたはアルコキシ基であり；Ｒ
1'、Ｒ3'およびＲ4'は同一または異なり、各々、ニト
ロ、ハロゲン、シアノ、アルキルスルホニルまたはハロ
ゲン置換のアルキル基を意味する］で示される化合物が
挙げられる。
【００２２】さらに本発明は、式ＩＩ：
【化２５】 ［式中、Ｒ7はアルキル、アルコキシまたはアラルキル
基、特にアルコキシ基であり、他の基は同一または異な
り、各々、ニトロ、ハロゲン、シアノ、アルキルスルホ
ニルまたはハロゲン置換のアルキル基であるか、または
Ｒ5およびＲ6がニトロ基である場合、Ｒ8およびＲ9はま
た水素とすることができる］で示される化合物を提供す
る。
【００２３】最後に本発明は、物質：［（２,３,５,６
−テトラフルオロフェニル）−ヒドラゾノ］プロパンジ
ニトリル、［（２−トリフルオロメチル−４−ニトロフ
ェニル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル、［（２−
メタンスルホニル−４−ニトロフェニル）−ヒドラゾ
ノ］プロパンジニトリル、［（２,４−ジニトロ−６−
シアノフェニル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル、
および［（３,５−ジ−｛トリフルオロメチル｝フェニ
ル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリルからなる群から
の化合物を提供する。
【００２４】意外にも、不均一系 pＨ反応の原理に基づ
くイオン測定方法において、測定感度を増加させるため
に、水性液と非混和性である相中にて用いてかかるよう
に作用する酸が存在することが見いだされた。これら
は、脂肪親和性を増加させるために、電子を吸引し、ア
ルキル基、アルコキシ基またはアラルキル基を有する残
基を有するフェノールおよびナフトールである。加えて
さらに、フェニル基が電子吸引置換基を有するメソキサ
ル酸−ジニトリルのフェニルヒドラゾン誘導体も用いる
ことができる。
【００２５】前記と同意義の式Ｉ、式ＩＩおよび式ＩＩ
Ｉの化合物が好ましいことが分かった。Ｒ1〜Ｒ4または
Ｒ5〜Ｒ9基の定義中、それ自身またはアルコキシ基中に
存在するアルキル基は、１〜３０個の炭素原子を有する
アルキルである。しかしながら、５〜３０個の、さらに
は１０〜２０個の炭素原子を有することが好ましい。１
５〜１８個の炭素原子を有するアルキル基が特に好まし
い。アルキル残基それ自身またはアルコキシ残基におけ
るアルキル基は、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和
とすることができる。
【００２６】Ｒ1〜Ｒ4、Ｒ5〜Ｒ9またはＲ10〜Ｒ14基の
定義中、アラルキル基、アルキルスルホニル基またはハ
ロゲン置換のアルキル基の意義の範囲内のアルキル基は
１〜４個の炭素原子を有する。メチル基が特に好まし
い。
【００２７】Ｒ1〜Ｒ14基の意義の範囲内のハロゲンは
フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。フッ素、
塩素および臭素が特に好ましい。Ｒ1〜Ｒ14基の定義
中、ハロゲン置換のアルキル基の意義の範囲内におい
て、トリフルオロメチル基がとりわけ特に好ましい。
【００２８】Ｒ1〜Ｒ4またはＲ5〜Ｒ9基の定義におい
て、アラルキル基中の芳香族基は、６〜１０個の炭素原
子を有する芳香族である。それは芳香族炭化水素である
ことが好ましい。フェニル基がとりわけ特に好ましい。
アラルキル基の芳香族基は、有利には、ニトロ、ハロゲ
ンまたはシアノ基のような１個または数個の電子吸引基
によって置換されている。特に好ましいアラルキル基
は、１個または数個の電子吸引基を有するベンジル基で
ある。さらに、アラルキル基は、電子吸引基とは別個に
ヒドロキシ基を有することができる。１個または数個の
電子吸引基および１個のヒドロキシ基を有するベンジル
基がとりわけ特に好ましい。
【００２９】式Ｉで示される好ましい化合物は、Ｒ2が
アルキル、アルコキシまたはアラルキル基であり、
Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は同一または異なり、各々、ニト
ロ、ハロゲン、シアノ、アルキルスルホニルまたはハロ
ゲンで置換されたアルキル基である化合物である。本発
明によれば、これらの化合物のうち、Ｒ1、Ｒ3およびＲ
4基としてニトロ、ハロゲンおよびアルキルスルホニル
からなる群より選択される同一または異なる基を有する
化合物が特に好適である。
【００３０】顕著に効果的である式Ｉで示される化合物
の例は、例えば、３−ペンタデシル−２,４,６−トリニ
トロフェノールまたはヘキサクロロフェン（ビス−（２
−ヒドロキシ−３,５,６−トリクロロフェニル）−メタ
ン）である。
【００３１】式ＩＩで示される好ましい化合物は、Ｒ7
がアルキル、アルコキシまたはアラルキル基、特にアル
コキシ基であり、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8およびＲ9が同一または
異なり、各々、ニトロ基、ハロゲン、シアノ基、アルキ
ルスルホニル基またはハロゲン置換のアルキル基を意味
する化合物である。本発明によれば、これらの化合物の
うち、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8およびＲ9基としてニトロ、ハロゲ
ンおよびアルキルスルホニルからなる群より選択される
同一または異なる基を有する化合物が特に好適である。
式ＩＩを有する以下に示される化合物のうち、Ｒ6がニ
トロである化合物が特に好ましい。
【００３２】本発明の非常に好ましく用いることのでき
る式ＩＩの化合物の例は、２,４,６,８−テトラニトロ
−５−オクタデシルオキシ−１−ナフトールである。
【００３３】本発明の非常に好ましく用いることのでき
る式ＩＩＩの化合物の例は、Ｒ10〜Ｒ14基のうち少なく
とも２個が水素ではない化合物である。
【００３４】式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物は、前記
の「不均一系 pＨ反応」の原理に基づき、水性液、特
に、血液、血漿、血清または尿のような体液中のイオン
を測定する方法において、該方法の最高感度の範囲をイ
オン濃度の範囲に適合させるのに非常に好適である。該
化合物は水性液にほんのわずかに溶解するにすぎない
が、該化合物はすべて有機溶媒によく溶ける。この点に
おいて、該化合物を有機相に溶かすことができ、かつ意
図する目的のために使用することができる。本発明によ
れば、酸不在の場合よりも、酸の存在下において、pＨ
インジケーターの色相変化を介してイオン濃度をずっと
より正確に測定できることがわかった。
【００３５】この意味において、本発明の酸と、式Ｉ
Ｖ：
【化２６】 ［式中、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は同一または異なり、各
々、水素、アルキルまたはアルコキシ基で、ここで、少
なくとも一つの基は炭素数８〜３０のアルキルまたはア
ルコキシ基であり；Ｒ18は水素またはアルキルであり；
Ｒ19はニトロ、ハロゲン置換のアルキル基、シアノ、ス
ルホンアミドまたはアルキルスルホニルであり；Ｘは窒
素またはＣＲ20基であり；およびＹは硫黄またはＣＲ21
＝ＣＲ22基であり；ここで、Ｒ20、Ｒ21、Ｒ22は同一ま
たは異なり、各々、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、
アルキルまたはハロゲン置換アルキルまたはアルキルス
ルホニルを意味する］で示される pＨインジケーターの
組み合わせが特に好ましいことが分かった。かかる pＨ
インジケーターはＤＥ−Ａ−４０１５５９１.９号に記
載されている。
【００３６】Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ20、Ｒ21およ
びＲ22基の定義におけるアルキル基は、炭素数１〜３０
のアルキルである。特に、Ｒ18、Ｒ20、Ｒ21およびＲ22
基は炭素数１〜４のアルキル、とりわけ炭素数１〜２の
アルキルであることが好ましい。Ｒ15、Ｒ16およびＲ17
基に関して、該残基の１個だけが炭素数８〜３０、好ま
しくは１０〜２０のアルキルであることが好ましい。こ
の基のうち他の残基もまたアルキル基である場合、その
場合、炭素数１〜４の、とりわけ１〜２のアルキルであ
ることが好ましい。炭素数２以上のアルキル基は直鎖ま
たは分岐鎖とすることができる。加えて、該アルキル基
は不飽和であってもよい。
【００３７】Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21およびＲ22の定義におけ
るハロゲン置換のアルキル基は、フッ素、塩素、臭素ま
たはヨウ素によって置換された炭素数１〜４のアルキル
である。フッ素で置換された炭素数１〜２のアルキルが
好ましい。トリフルオロメチル基が特に好ましい。
【００３８】Ｒ15、Ｒ16およびＲ17基の定義におけるア
ルコキシ基は、炭素数８〜３０の、好ましくは１０〜２
０のアルコキシである。該アルコキシ基は直鎖または分
岐、飽和または部分的に不飽和とすることができる。
【００３９】Ｒ20、Ｒ21およびＲ22基の定義におけるハ
ロゲンは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味す
る；塩素または臭素が好ましい。
【００４０】Ｒ19、Ｒ20、Ｒ21およびＲ22基の定義にお
けるアルキルスルホニル基はアルキル−ＳＯ2−を意味
する。この場合、アルキル基は炭素数１〜４の、好まし
くは１〜２のアルキルを意味する。メチルスルホニル基
が特に好ましい。
【００４１】Ｒ19基の定義におけるスルホンアミド基
は、非置換アミド（−ＳＯ2ＮＨ2）または第１級または
第２級アミン（−ＳＯ2ＮＨＲまたは−ＳＯ2ＮＲ2）の
アミドである。アルキル、アリールまたはアラルキル基
をアミドの置換基（Ｒ）とすることができる。第２級ア
ミンのアミドの場合、置換基（Ｒ）は同一または異なっ
ていてもよい。この場合、アルキル基は炭素数１〜４の
基である。アリール基は炭素数６〜１０の芳香族基を意
味する。好ましいアリール基はフェニルまたはナフチル
基である。アラルキル基は、アリール基が炭素数６〜１
０の芳香族基で、アルキル基が炭素数１〜４である基を
いう。ベンジル基が好ましいアラルキル基である。非置
換スルホンアミド基（−ＳＯ2ＮＨ2）が特に好ましい。
【００４２】式ＩＶの特に好ましいナフトール誘導体
は、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17基の１個が炭素数８〜３０
の、好ましくは１０〜２０のアルキルまたはアルコキシ
基で、他の基が水素または炭素数１〜４の、好ましくは
１〜２のアルキルである化合物である。
【００４３】特に好ましいナフトール誘導体は、Ｒ15が
炭素数１０〜２０のアルコキシであり、Ｒ16およびＲ17
が水素であって、他の基が式ＩＶの記載と同意義である
化合物である。
【００４４】式ＩＶの化合物は公知方法と同様にして製
造することができる。式ＩＶのナフトール誘導体の製造
において、該方法のいくらかの変形が可能である。第１
に、式Ｖ：
【化２７】 ［式中、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は式ＩＶと同意義であ
る］で示されるナフトキノンを、式ＶＩ：
【化２８】 ［式中、Ｒ18、Ｒ19、ＸおよびＹは式ＩＶと同意義であ
る］で示されるヒドラジンと反応させることができる。
この反応は、ヒドラゾン形成における通常の条件下で実
施することができる。該反応は、酸性条件下で実施する
ことが好ましい。ヒドラゾン自身は不安定であり、転位
して式ＩＶの所望のナフトールを形成する。
【００４５】式ＩＶで示される本発明のナフトール誘導
体を製造する別の方法は、式ＶＩＩ：
【化２９】 ［式中、Ｒ18、Ｒ19、ＸおよびＹは式ＩＶと同意義であ
る］で示されるアミンを用いて出発する。これらのアミ
ンをジアゾ化し、得られたジアゾニウム塩を、アゾカッ
プリング反応にて、式ＶＩＩＩ：
【化３０】 ［式中、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は式ＩＶと同意義であ
る］で示されるナフトールと反応させる。
【００４６】式ＶＩＩのアミンのジアゾ化は常法にて実
施することができる。濃鉱酸、例えば、亜硝酸塩、好ま
しくは亜硝酸ナトリウムを一緒にした濃硫酸を調製し、
ついで室温に冷却しながら、式ＶＩＩのアミンに加える
ことが好ましいことが分かった。亜硝酸ナトリウムおよ
び濃硫酸とは別に氷酢酸をも有するジアゾ化混合物が特
に好ましいことが判明した。硫酸と氷酢酸の好ましい体
積比は１：１および２：１の間にある。亜硝酸塩と式Ｖ
ＩＩのジアゾ化されるアミンの比率は、通常、等モルで
ある。
【００４７】ジアゾ化反応が完了した後、該反応混合物
を水性処理する。この目的のためには、該反応混合物を
氷水中に注ぐことが好ましい。ジアゾニウム塩それ自身
は単離できないが、水性処理溶液中、式ＶＩＩＩのナフ
トールとアゾ−カップリングに付す。この操作は弱酸性
条件下で実施することが好ましい。式ＶＩＩＩのナフト
ールは水溶液にごくわずかに溶けるにすぎない。そこで
該化合物を有機溶媒に加える。有機溶媒としては、例え
ば、クロロホルムが非常に適している。この方法におい
ては、水性処理後に存するジアゾニウム塩溶液を、クロ
ロホルムおよび氷酢酸中、式ＶＩＩＩのナフトールの溶
液に加え、アセテートを加えて、反応媒体の pＨ値を緩
衝させることができる。大抵の場合、式ＩＶのナフトー
ル誘導体が形成され、該反応混合物から沈澱する。つい
で、該生成物を再結晶するかまたはクロマトグラフィー
により精製することができる。
【００４８】式ＩＶの pＨインジケーターは水溶液にほ
んのわずかに溶けるにすぎないが、有機溶媒に可溶性で
ある。
【００４９】本発明によれば、pＨインジケーターとし
て４−（２,６−ジブロモ−４−ニトロ−フェニルア
ゾ）−２−オクタデシルオキシナフトール−１と、酸と
して２,４,６,８−テトラニトロ−５−オクタデシルオ
キシ−ナフトール−１との組合せが著しく好適であるこ
とが分かった。
【００５０】pＨインジケーターと組合せた、式Ｉ、Ｉ
ＩおよびＩＩＩで示される本発明の酸が、前記に示した
ように「不均一系 pＨ反応」の原理に従って水性液中の
イオンを測定する方法の測定感度を増加させるのに非常
によく適している。このため、該化合物は、イー・エス
・ハイマン，バイオフィジカル・ソサイエティ・アブス
トラクツ，１９７１，７２ａによる原理にて記載されて
いる液−液抽出にて、ならびに不均一系 pＨ反応の原理
に従って作用する「乾式化学」試験担体において用いる
ことができる。不均一系 pＨ反応の原理に従って進行す
る水性液中のイオンの測定方法は、一般に、測定される
イオンが水性試料液から該水性液と非混和性の相に移動
し、その結果、そこにあるpＨインジケーターが着色変
化を受け、その着色変化をイオン測定に用いるものであ
る。
【００５１】水性液中のイオン測定用の本発明の試薬
は、水と非混和性である有機媒体中、該水性液から有機
相への測定すべきイオンの移動に関与するイオノフォア
を、さらには有機媒体に可溶性の pＨインジケーターお
よび式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される本発明の酸を含
有する。この点について、イオン測定に関する「乾式化
学」剤を以下においてさらに詳細に説明する。しかしな
がら、原則として、液−液抽出法と同様の方法にて、以
下の記載を非試験担体結合試験操作に応用することは当
業者にとって自明である。
【００５２】不均一系 pＨ反応の原理に基づくイオン測
定用の試験担体は、前記に示されている文献の記載より
公知である。それらは主にその具体化、すなわち、有機
相が試験担体に適する形態にてどのようにして生成され
るかで異なる。有機相は、一般に、水と非混和性である
相対的に非−揮発性の有機液体および／または疎水性ポ
リマーからなる。両者が固溶体として存在すると、その
場合、それらは可塑性プラスチックと称される。
【００５３】式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される本発明
の酸は、原則として、不均一系 pＨ反応の原理を用いて
実施することができる、文献記載より公知のイオン測定
用のすべての試験担体に用いることができる。しかしな
がら、該酸は、試験担体において、疎水性ポリマーとそ
の中に分散される固形不活性粒子とからなる液体耐性の
フィルムを有するフィルム層にて、式ＩＶで示されるナ
フトール誘導体と一緒に存在することが特に好ましいこ
とが分かった。かかる試験担体はＤＥ−Ａ−４０１５５
９０.０に記載されている。かかる試験担体の例を図１
および２に示す。
【００５４】血液中のイオンを測定するのに適する２つ
の試験担体を図１および２において立体的に示す。該担
体は全血から血清または血漿を分離し、こうして得られ
た液体中の問題のイオン測定の実施を可能とする。該試
験担体は、主に、その試験担体内部の緩衝物質の位置が
異なる。該装置の詳細な組成を以下に示す：
【００５５】図１：試料液体を試料適用ゾーン（７）か
ら試験ゾーン（８）に移動させるのに供する移動層
（２）を、不活性な担体ホイル（５）、例えば、プラス
チックホイル上に固定する。原則として、試験液体を試
料適用ゾーン（７）から試験ゾーン（８）に移動させる
ことのできる物質はすべて移動層（２）として適してお
り、分析を害することとなるようにそれを変更しない。
移動層（２）としてグラスファイバーパッドを用いるこ
とが特に好ましい。試料液体から小体成分を分離する層
（３）を移動層（２）に付着させ、それを部分的にカバ
ーする。基本的には、試料液体から小体成分、特に血液
成分を、とりわけ血液から赤血球を分離することがで
き、試験ゾーン（８）での試験反応を妨害しないように
実質量の赤血球を該ゾーンに到達させない、いずれの物
質もこの目的に用いることができる。加えて、分離層
（３）は、測定すべきそのイオン濃度が変化し、結果が
歪められるような試料液体における変化をもたらしては
ならない。例えば、ＥＰ−Ｂ−００４５４７６に記載さ
れているようなグラスファイバーパッドが、特に、分離
層（３）に適していることが分かった。試料適用の間、
例えば、ピペットでの分離層（３）への損傷を防ぐ意図
にて、保護層（４）を分離層（３）の全体にわたって取
り付けた。正味不活性な物質、例えば、プラスチックが
この目的に有用であることが分かった。保護層（４）お
よび分離層（３）を該不活性担体ホイル（５）上に固定
する。これは、例えば、熱溶解接着剤（６）を用いるこ
とにより実施することができる。測定を実施するのに必
要な試薬（式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される本発明の
化合物を包含する）を含有するフィルム層の透明プラス
チックからなる担体ホイル（１）を、移動層（２）の一
側面に取り付ける。これは、接着ジョイント（９）、例
えば、熱溶解接着剤により実施することが好ましい。フ
ィルム層（１）が移動層（２）と接触しうるようにフィ
ルム層の位置を決定し、かかる場合に不活性担体ホイル
（５）に対して透明担体ホイルを押さえ付けることによ
って液体移動が可能となる。
【００５６】該フィルム層（１）は、液体に対して耐性
であって、疎水性ポリマーとその中に分散させた粒子と
からなるフィルムを有する。該疎水性ポリマーは、試験
する液体に対して不浸透性であり、さらに測定イオンに
対してもまた不浸透性である。該粒子が試料液体をフィ
ルム層に浸透させる。かかるフィルム層（１）は試験液
体に対して不浸透性である。一定容量が採取されるにす
ぎない。好ましいことが判明した疎水性ポリマーは、特
に酢酸ビニルのコポリマーである。特に、ビニルラウレ
ートまたはマレイン酸ジブチルエステルとの酢酸ビニル
のコポリマーが好ましい。
【００５７】粒子として、試験する液体に不溶解性であ
り、８０〜２００、好ましくは１００〜１７０の吸油価
を有する固形、不活性、無機または有機粒子を用いるこ
とができる。特に、未焼成または天然のキーゼルガー、
か焼または焼成キーゼルガー、フロー焼成または活性化
キーゼルガーのような種々の型の珪藻土が、特に、フィ
ルム層（１）に好ましいことがわかった。
【００５８】吸油価は、例えば、フィラーとして用いる
粒子の塗装および被覆の分野において周知のパラメータ
ーである。それは、粒子とそれを分散させる媒体との間
の相互作用についての測定価である。吸油価は測定する
のが簡単である。測定はＤＩＮ（ドイツ工業規格）５３
１９９に従って実施する。この規格によれば、吸油価
は、該粒子１００ｇを凝集性パテ状物体に加工処理する
のに必要な亜麻仁油のｇ量を示す。
【００５９】一般に、用いる粒子は不規則な形状を有す
る。その粒径は、通常、０.１と２００μｍの間、好ま
しくは０.２と３０μｍの間である。本発明に従って用
いる粒子の特徴は、それらが気体および湿式液体を浸透
させることができるキャビティを有していることであ
る。この特性の発現は、特に５０〜２５０、好ましくは
８０〜１８０ｇ／Ｌの低嵩密度においてである。
【００６０】疎水性ポリマーの粒子に対する重量比５：
１〜１：１０がフィルム層（１）にとって実用的であ
る。該重量比は、好ましくは１：１〜１：３である。疎
水性ポリマーの粒子に対する最適重量比は、いずれにお
いても、用いるポリマーおよび粒子の特性に依存する。
該疎水性ポリマーが酢酸ビニルとビニルラウレートおよ
び／またはマレイン酸ジブチルエステルとのコポリマー
であり、該粒子が珪藻土である場合、最適重量比は１：
１.５と１：２.５の間にある。
【００６１】フィルム層（１）のさらなる必須の構成成
分は、水と非混和性である揮発しにくい液体、イオノフ
ォア、pＨインジケーターおよび測定感度を増加させる
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される酸である。これらの
成分を疎水性ポリマー中に均質に分配する。
【００６２】水と非混和性である揮発しにくい液体は、
プラスチック用可塑剤として認識されている。ポリマー
と一緒に、それを不均一系 pＨ反応の原理に従ってイオ
ンを測定する方法における実際の有機相として供する。
可塑剤として、すべての商業上利用しうる型の可塑剤、
好ましくは、セバシン酸、アクリル酸、フタール酸およ
びリン酸エステル類ならびにシリコーンが考えられる。
加工処理に関する技術的理由から、非常に揮発しにくい
ウビヌルRＮ５３９（２,２−ジフェニル−１−シアノ−
アクリル酸エチルヘキシルエステル）が特に好ましい。
【００６３】試験層における疎水性ポリマーの、揮発し
にくい疎水性の有機液体に対する重量比は約５：１〜約
１：５、特に、約２：１〜約１：２の間とすることがで
きる。
【００６４】イオンを複合化し、測定されるイオンに対
して特異的であって非水相に十分に可溶性であるすべて
の物質をイオノフォアとして用いることができる。この
点について、クラウンエーテル、クリプタンド、ポダン
ドおよび環式またはアクリル性の対応するペプチドが考
慮される。２,３−ナフト−１５−クラウン−５が、カ
リウムの測定に特に有利であることが分かった。天然の
イオノフォアのバリノマイシンが特に好ましい。ナトリ
ウムの測定には、例えば、Ｎ,Ｎ'−ジベンジル−Ｎ,Ｎ'
−ジフェニル−１,２−フェニレン−ジオキシジアセト
アミドが、リチウムの場合、Ｎ,Ｎ'−ジヘプチル−５,
５−ジメチル−Ｎ,Ｎ'−ジ（３−オキサペンチル）−
３,７−ジオキサノナン−ジアミドが、およびカルシウ
ムの場合、ジメチル−Ｎ,Ｎ'−［（４Ｒ,５Ｒ）−４,５
−ジメチル−１,８−ジオキソ−３.６−ジオキサ−オク
タメチレン］−ビス−（１２−メチルアミノドデカノエ
ート）が考えられる。本発明の酸によりプロトン化さ
れ、その結果、測定すべきイオンに対して選択的である
複合体を形成する能力を喪失する塩基性窒素原子を有す
る天然のイオノフォアは用いることができない。このこ
とは、特に、クリプタンドに当てはまる。しかしなが
ら、イオノフォアの大部分は、本発明の普遍性がほとん
ど限定されないような試験条件下にてプロトン化されう
る窒素原子を有していない。
【００６５】原則として、有機相に十分に溶解し、測定
すべき水性試料と一緒に有機相から抽出されないように
疎水性であるすべての pＨインジケーターが考えられ
る。例えば、テトラブロモフェノールフタレインエステ
ルまたはＥＰ−Ａ−０１２８３１７およびＥＰ−Ａ−０
１２８３１８に記載されている、異なる長さのアルキル
側鎖を有するインドナフトール誘導体を用いることがで
きる。さらに、クロモイオノフォアを用いることもでき
る。しかしながら、すでに前記にて特徴付られている式
ＩＶのナフトール誘導体が特によく適している。
【００６６】pＨインジケーターが用いられ、該インジ
ケーターは pＨの変化に対して敏感であるため、さらに
フィルム層（１）にて緩衝剤を組み入れることが特に好
ましい。不均一系 pＨ反応に基づくイオン測定方法にお
いては、緩衝剤の pＨが非水性相から水性相へのプロト
ンの移動を調整する。体液中のイオン測定用診断薬にお
いて、緩衝物質は、その pＨを５〜１０、好ましくは７
〜８の間の値に調整しうるように選択することが好まし
い。原則として、水に溶け、試験反応を妨げるイオンを
有しない条件で、通常のすべての緩衝剤をこの目的に考
慮することができる。例えば、Ｎ,Ｎ−ビス−（ヒドロ
キシエチル）−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、３
−［Ｎ−トリスヒドロキシメチル］−メチルアミノ−ヒ
ドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）またはＮ−
ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ−プロパンスルホン酸
（ＨＥＰＰＳ）のような、いわゆるグッド・バファー・
シリーズからの緩衝剤が好適であることが分かった。
【００６７】測定イオンに対して十分に選択的でないイ
オノフォアを用いる場合、その場合、障害イオンをマス
キングする水溶性錯化剤を添加することができる。すな
わち、例えば、カルシウムがナトリウム試験を妨害する
可能性は、エチレンジアミンテトラアセテート（ＥＤＴ
Ａ）で防止される。
【００６８】加えて、湿潤剤を用いてフィルムの製造ま
たは試験すべき試料によるフィルムの湿潤性を改良する
ことができる。この目的には、該試験反応を妨害しない
試薬のみを用いることができる。これらの化合物は、非
−イオン性かつ双極性の化合物である。例えば、非−イ
オン性の湿潤剤のうち、ポリエチレングリコールエーテ
ル類またはエステル類、好ましくは、トリトンRＸ１０
０（ＴritonRＸ１００）が好ましいことが分かった。有
利には、双極性湿潤剤としてｎ−デシル−Ｎ,Ｎ−ジメ
チル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート（ツ
ヴィタージェントR３−１０）（ＺwittergentR３−１
０）を用いることができる。
【００６９】フィルム層（１）のコンシステンシーを改
良するため、付加的に増粘剤を用いることができる。こ
の目的には、エチルセルロースが特に有利であることが
分かった。これに加えて、さらに、例えば、ヒドロキシ
エチル−またはヒドロキシプロピルセルロースのような
親水性増粘剤を、フィルム層（１）を分析する水性液で
湿潤させた後、存在する水相のフィルム層（１）に加え
ることができる。
【００７０】水性液、特に、血液、血漿、血清または尿
のような体液中のイオン測定にフィルム層を用いる場
合、フィルム層（１）を得るには、水相にて吸収され
ず、むしろ有機相、すなわち、フィルム層に残留させる
すべての成分（疎水性ポリマー；水と非混和性の揮発し
にくい液体； pＨインジケーター；本発明の酸；所望に
より、フィルム層のコンシステンシーを改良するための
増粘剤）を、高揮発性ないし中揮発性の有機溶媒に溶か
す。粒子をこの溶液中に撹拌し、均質に分散させる。そ
の後、該ペーストをドクターブレードでサポート上に広
げ、乾燥させる。当然、ロールコーティング、フィルム
キャスティングまたは類似する方法のような他の適当な
適用方法を用いることができる。該乾燥フィルム層は厚
みが２０〜５００、好ましくは２０〜１５０μｍであ
る。
【００７１】水性試料液体をフィルム層（１）に適用す
る場合、水相中に吸収される成分（緩衝剤；所望によ
り、錯化剤；所望により、湿潤剤；所望により、水相の
コンシステンシーを変えるための増粘剤）を配合するに
は種々の方法がある。１つの方法は、蒸発させ、噴霧乾
燥させることにより該粒子を前記成分と一緒にコーティ
ングするか、または該粒子を該成分の水溶液と一緒に凍
結乾燥する方法である。ついで、この方法にてコーティ
ングした粒子を前記に示した有機溶媒中にて撹拌する。
別の方法は、第１に未処理粒子でのフィルム層を得、つ
いで前記成分の水溶液で再度コーティングし、最後に乾
燥させる方法である。
【００７２】図２は、測定反応の間に水相中に吸収され
る物質を含有する層（１１）を、例えば、熱溶解接着剤
である接着ジョイント（９）を介してフィルム層（１
０）と移動層（２）の間に取り付ける点で図１と異なっ
ている。しかしながら、さらに錯化剤、湿潤剤または水
相のコンシステンシーを変えるための増粘剤を、図１の
試験担体のフィルム層（１）または図２の試験担体のフ
ィルム層（１０）に配合する代わりに、図２の試験担体
の付加層（１１）に配合することができる。付加層（１
１）の材料として、吸収材料と接触すると、別の層への
液体移動を可能とする吸収材料が考えられる。この目的
には、紙が特に都合よく用いることができるが、さらに
プラスチックのような不活性材料で製造されたネットも
また可能である。
【００７３】図面で示されている試験担体の１つを用い
て血液中のイオンを測定するには、試料を保護層（４）
に適用する。該血液は分離層（３）に浸透し、赤血球が
血漿または血清から分離する。このようにして得られた
液体は毛管引力により試験ゾーンに吸収される。移動層
（２）における水相を、フィルム層（１）または（１
０）での担体ホイルの圧力でフィルム層と接触させ、液
体をフィルム層に浸透させて測定反応を開始させる。反
応の結果としてフィルム層にて形成される着色を視覚に
より観察するか、またはフィルム層（１）または（１
０）の担体ホイルを介する反射光度測定法により測定す
る。
【００７４】以下の表１は、フィルム層（１）または
（１０）の成分の有利なおよび好ましい重量％を示す： 表 １： フィルム層の成分 フィルム層の含量（重量％） 有利な重量％ 好ましい重量％ ポリマー ５〜６０ ２０〜４０ 水と非混和性の揮発しにくい液体 ５〜７０ ２０〜４０ 粒子 １５〜８０ ３０〜５０ イオノフォア ０.０５〜５.０ ０.２〜１.０ pＨインジケーター ０.０５〜５.０ ０.２〜０.７ 本発明の酸 ０.００５〜５.０ ０.０２〜０.７
【００７５】緩衝物質をフィルム層（１）にまたは上に
適用する場合、これは５〜３０、好ましくは１０〜２０
重量％の緩衝剤を包含する。所望により使用していもよ
い物質、例えば、錯化剤、湿潤剤または増粘剤を、フィ
ルム層（１）にまたはその上に適用する場合、その使用
量は本発明のフィルム層の０.００５〜５、好ましく
は、０.０２〜２重量％である。
【００７６】試験担体において、測定すべきイオンの量
の測度として、pＨインジケーターの色相変化を視覚的
に評価することができる。しかしながら、反射式光学測
定法によればさらに正確に評価することができる。一般
に、図３は、水性液中のイオン測定用の試験担体で測定
した反射率（Ｒ）と濃度（ｃ）との関係を表す典型的な
曲線（ａ）を示す。曲線ａは本発明の酸を添加しないで
得られる過程を示すが、曲線ｂは pＨインジケーターと
は別にさらに本発明の酸が有機相中に存在する場合の反
射率と濃度の間の関係を示す。曲線ｂ（酸含有）の勾配
は曲線ａの勾配よりも大きいため、曲線ｂにてより正確
な濃度測定が可能となる。したがって、図３（曲線ｂ）
から、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される酸を pＨイン
ジケーターと合することにより、不均一系 pＨ反応の原
理に基づくイオン測定において、酸を有しないかかる試
験と比較して感度の増加が可能であることがわかる。
【００７７】式Ｉ'：
【化３１】 ［式中、Ｒ2'はアルキルまたはアルコキシ基であり、Ｒ
1'、Ｒ3'およびＲ4'は同一または異なり、各々、ニト
ロ、ハロゲン、シアノ、アルキルスルホニルまたはハロ
ゲン置換のアルキル基を意味する］で示される化合物は
新規であり、よって該化合物もまた本発明の目的物であ
る。
【００７８】Ｒ1'〜Ｒ4'基の定義の意義は、式ＩのＲ1
〜Ｒ4基にて示されている意義に対応する。
【００７９】該化合物は公知方法と同様にして製造する
ことができる。特に、該化合物は、対応する出発化合物
の芳香族置換により製造することができる。Ｒ1'、Ｒ3'
およびＲ4'がすべて同じであり、各々、ニトロ基である
式Ｉ'で示される化合物は、例えば、まず最初に硫酸
を、ついで硝酸を、式ＩＸ：
【化３２】 ［式中、Ｒ2'はアルキルまたはアルコキシ基を意味す
る]で示される化合物に添加するようにして製造するこ
とができる。まず出発物質のスルホン化を、特に、濃硫
酸で行う。要すれば、このために９０℃に加熱しなけれ
ばならない。次のニトロ化においては、最高室温以下ま
たはまでの温度にて、好ましくは０〜２５℃で、ニトロ
基を所望の位置に導入する。
【００８０】式ＩＩ：［ここで、Ｒ7はアルキル、アル
コキシまたはアラルキル、特にアルコキシであり、他の
基は、同一または異なり、各々、ニトロ、ハロゲン、シ
アノ、アルキルスルホニルまたはハロゲン置換アルキル
基であるか、またはＲ5およびＲ6がニトロである場合、
Ｒ8およびＲ9は水素とすることもできる］で示される化
合物もまた新規である。Ｒ5〜Ｒ9基の定義の意義は、前
記の意義に対応する。
【００８１】式ＩＩで示される化合物は公知方法と同様
の方法にて製造することができる。特に、該化合物は、
対応する出発化合物の芳香族置換により（式Ｉ'で示さ
れる化合物と同様にして）入手することができる。
【００８２】Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8およびＲ9が同一であり、各
々、ニトロ基である式ＩＩで示される化合物は、例え
ば、まず最初に硫酸を、ついで硝酸を、式Ｘ：
【化３３】 ［式中、Ｒ7はアルキル、アルコキシまたはアラルキ
ル、特に、アルコキシを意味する]で示される化合物に
添加する、かかる方法にて製造することができる。まず
出発化合物を、特に、濃硫酸を用いてスルホン化する。
要すれば、このために５０℃に加熱しなければならな
い。次のニトロ化においては、特に、最高室温以下また
はまでの温度にて、好ましくは０〜１０℃で、該スルホ
ン酸基を置換し、ニトロ基を導入する。
【００８３】式Ｘで示される化合物を、好ましくは、氷
酢酸中、室温にて、硝酸と直接反応させると、式ＸＩ：
【化３４】 ［式中、Ｒ7は、式Ｘで示される化合物についてと同意
義である］で示される化合物を得る。
【００８４】式ＩＩＩで示される化合物の群より選択さ
れる新規な化合物は：［（２,３,５,６−テトラフルオ
ロフェニル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル、
［（２−トリフルオロメチル−４−ニトロフェニル）−
ヒドラゾノ］プロパンジニトリル［（２−メタンスルホ
ニル−４−ニトロフェニル）−ヒドラゾノ］プロパンジ
ニトリル、［（２,４−ジニトロ−６−シアノフェニ
ル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル、および［３.
５−ジ−｛トルフルオロメチル｝フェニル）−ヒドラゾ
ノ］プロパンジニトリルである。
【００８５】該化合物もまた本発明の目的物である。
【００８６】該化合物は、対応するアニリン誘導体
（２,３,５,６−テトラフルオロアニリン、２−トリフ
ルオロメチル−４−ニトロアニリン、２−メタンスルホ
ニル−４−ニトロアニリン、２,４−ジニトロ−６−シ
アノアニリン、３,５−ジ−（トリフルオロメチル）−
アニリン）を対応するジアゾニウム塩に変え、マロジニ
トリルと反応させることにより製造することができる。
【００８７】アニリン誘導体のジアゾ化は常法にて実施
することができる。濃鉱酸、例えば、亜硝酸塩、好まし
くは、亜硝酸ナトリウムとの濃硫酸を調製し、室温に冷
却しながらアニリン誘導体を添加することが都合よいこ
とが分かった。亜硝酸ナトリウムを有し、濃硫酸とは別
にさらに氷酢酸を含有するジアゾ化混合物が、特に好ま
しいことが分かった。硫酸および氷酢酸の好ましい容量
比は、１：１と２：１の間にある。ニトリルとジアゾ化
するアニリンの比は、通常、等モルである。
【００８８】このようにして製造したジアゾニウム塩溶
液を、マロジニトリルの水性、好ましくはアセテート−
緩衝溶液に加える。通常、形成されたプロパンジニトリ
ルが該反応混合物から沈澱し、ついで再結晶によりまた
はクロマトグラフィー手段により精製することができ
る。
【００８９】次に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく
説明する。
【実施例】実施例１ ３−ペンタデシル−２,４,６−トリニトロフェノール ペンタデシルフェノール（９０％）６７.５ｇ（０.２モ
ル）を、撹拌しながら、５００ｍＬのエルレンマイヤー
フラスコ中、９０℃に加熱した濃硫酸１００ｍＬに加
え、それによって撹拌が困難である暗褐色の高粘度ペー
ストを得、これを９０℃にて１時間保持する。１Ｌの分
離三つ口フラスコにて、６５％硝酸７０ｍＬ（約１モ
ル）を氷浴で１０℃に冷却する。前記製造の高粘度のス
ルホン化生成物を、温度が２５℃を越えないように氷浴
で冷却しながら、少しづつ約２時間にわたって硝酸に加
え（ヘアードライヤーを用いて該粘性ペーストを液状に
保持する）、この過程において撹拌が困難である灰白色
ペーストを得、それを室温にてさらに１時間撹拌する。
その後、該ペーストを氷５００ｇ上に注ぎ、その間に細
かい沈澱物を形成する。こうして得られた粗製生成物は
かろうじて吸引濾過できるにすぎないため調製物全体を
遠心分離に付すことが好ましい。上澄液をデカントした
後、付着する酸を除去するため、各時点で水を加え、デ
カンテーション操作を２回繰り返し、得られた沈澱物
を、エタノール５００ｍＬでフラスコ中に洗い落とし、
５０℃（水浴にて）に加熱することにより溶解させ、氷
浴中に置いて結晶化させる。該生成物を激しく吸引した
後、エタノールでわずかに湿っている、薄灰白色の３−
ペンタデシル−２,４,６−トリニトロフェノール３７.
５ｇ（収率４２.６％）を得る。融点５３〜５６℃，Ｔ
ＬＣ：シリカゲル６０，移動溶媒：酢酸エチル／メタノ
ール／氷酢酸 ９０：５：５，Ｒf＝０.８
【００９０】該物質を五酸化二リンで乾燥させた後、３
−ペンタデシル−２,４,６−トリニトロフェノール３
５.７５ｇ（収率４０.１％）を得る。凝固点Ｆｐ５９〜
６１℃。
【００９１】実施例２ Ａ）２,４,６,８−テトラニトロ−５−オクタデシルオ
キシ−１−ナフトール ａ）５−オクタデシルオキシ−１−ナフトール １,５−ジヒドロキシナフタレン（Ｊanssen ９９％）
４０ｇ（０.２５モル）を、クライセン・アタッチメン
ト（Ｃlaisen attachment）、温度計、塩化カルシウム
管および滴下漏斗を備えた２Ｌの３つ口フラスコ中、新
たに蒸留したジメチルホルムアミド４００ｍＬに懸濁さ
せ、９７％水素化ナトリウム６ｇ（０.２５モル）を４
０分の範囲内で少しづつ加える。この過程において、溶
けて青色となり、付加的に水素を形成し、温度は３６℃
に上昇する。さらに３０分間撹拌し、９６％の１−オク
タデシルブロミド８３.３ｇ（０.２５モル）を３５℃の
該暖かい溶液に１０分の範囲内で滴下する。つづいて、
室温にて２４時間再度撹拌する。形成した粗製生成物を
激しく吸引濾過し、残渣を水６００ｍＬと一緒に１５分
間撹拌する。この操作を再度繰り返し、濾過残渣を、濾
液が無色となるまで水（約８００ｍＬ）で洗浄する。そ
の後、濾過ケーキを、五酸化二リンの乾燥棚中、４０℃
にて乾燥させる。融点７６〜７８℃の明灰白色結晶９
８.６ｇを得る。
【００９２】さらに精製する場合、該生成物を各７５０
ｍＬの酢酸エチルと一緒に３回撹拌し、不溶解性成分
（４０.８ｇ）の明灰白色結晶を濾去し、母液をチャコ
ールで２回処理し、真空下にて濃縮する。融点９０〜９
２℃の灰白色結晶５３.２ｇ（収率５１.９％）を得る。
この生成物を、テトラニトロ化化合物（実施例２ｂ）の
製造に直接用いる。ＴＬＣ，シリカゲル６０（merc
k），移動溶媒：トルオール／メタノール＝５０：１，
Ｒf＝０.３６
【００９３】ｂ）２,４,６,８−テトラニトロ−５−オ
クタデシルオキシ−１−ナフトール 濃硫酸１.２Ｌを、大型スターラーおよび温度計を備え
た２Ｌの三つ口フラスコに加え、４０℃に加熱し、５−
オクタデシルオキシ−１−ナフトール４９.５２ｇ（０.
１２モル）を激しく撹拌しながら、できる限り速やかに
添加する。５〜１０分後、粘性の結晶軟塊を形成し、温
度は２〜３℃上昇する。ついで、該生成物を加熱するこ
となくさらに２０分間撹拌し、ついで約０℃に冷却し、
硝化酸（硝酸（６５％）３４.９ｍＬを、撹拌し、１０
〜２０℃に冷却しながら約１５分の範囲内で濃硫酸７０
ｍｌに添加することにより製造）を、０〜５℃にて３０
分の範囲内で滴下する。この過程において、該反応混合
物は、灰褐色から赤褐色になる。５〜１０℃にてさらに
４時間撹拌した後、約５ｋｇの氷上に注ぎ、粗製生成物
を酢酸エチル２Ｌで３回抽出する。その後、該酢酸エチ
ル相を合し、各水１Ｌで２回洗浄し、該酢酸エチル相を
硫酸ナトリウムで乾燥させ、吸引して蒸発乾固する。暗
褐色の樹脂残渣約８０ｇを得る。これをカラムクロマト
グラフィーにより精製する。内径７.５ｃｍ、充填高約
１１０ｃｍのカラム、充填剤：シリカゲル６０（Ｍerc
k）を用い、移動溶媒：トルオール／アセトン ５：
２、主フラクションＲf＝０.２４である。
【００９４】この粗製物質を約４００ｍＬの移動溶媒と
再度混合し、全部溶解しない場合、それを吸引濾過し
（残渣はカラムを遮断する）、濾液を該カラムに用い、
フラクションにて溶出する。８０ｍＬづつのフラクショ
ンを採取する。前溶出分（無色溶出液）は約２Ｌであ
る。該物質を含有するフラクション（３０〜１４０）を
蒸発により濃縮する。赤褐色の粘性ペースト２１ｇを
得、それを長期間放置して析出させる。この生成物をア
セトン４２ｍＬに溶かし、５倍量のイソヘキサンを室温
にてゆっくりと添加することにより最終生成物を沈澱さ
せる。５時間撹拌した後、該生成物を吸引濾過し、濾過
ケーキをイソヘキサンで洗浄し、真空下、室温にて五酸
化二リンおよびモレキュラーシーブで乾燥させる。所望
のテトラニトロ−オクタデシルオキシナフトール１４.
９ｇ（収率２１％）を得る。凝固点２３６〜２３８℃
（分解）。ＴＬＣ：シリカゲル６０（Ｍerck），移動溶
媒：塩化メチレン／メタノール ８：１；Ｒf＝０.２
７。
【００９５】Ｂ）２,４−ジニトロ−５−オクタデシル
オキシ−１−ナフトール 硝酸（密度１.５２ｇ／ｃｍ3）３.７８ｇ（２.５ｍＬ）
（０.０６モル）および氷酢酸２０ｍＬの混合物を、ス
ターラーおよび温度計を備えた２５０ｍＬの三つ口フラ
スコにおける氷酢酸４０ｍＬ中、５−オクタデシルオキ
シ−１−ナフトール８.２５ｇ（０.０２モル）の懸濁液
に、２０〜３０℃にて激しく撹拌しながら滴下し、該混
合物をさらに２時間３０℃にて撹拌し、沈澱した粗製生
成物をガラスフィルターで吸引濾過し、残渣を少量のイ
ソヘキサンで洗浄する。五酸化二リンおよびモレキュラ
ーシーブで乾燥させた後、褐色結晶６.４ｇを得る。該
物質をシリカゲル６０（イー・メルク社（Ｅ．Ｍerc
k），ダーマスタット、ドイツ）カラム（直径４.５ｃ
ｍ，充填高８０ｃｍ）、移動溶媒：トルオール／メタノ
ール＝４９：１のクロマトグラフィーに付して精製す
る。適当なフラクションを蒸発により濃縮し、橙−赤色
結晶３.５ｇを得る。ｎ−ヘプタン５０ｍＬから再結晶
後、明褐色結晶として所望のジニトロ化合物２.８２ｇ
（収率２７.１％）を得る。凝固点８７〜８９℃。ＴＬ
Ｃ：シリカゲル６０（イー・メルク社、ダーマスタッ
ト、ドイツ），移動溶媒：トルオール／メタノール ３
０：１，Ｒf＝０.６６。
【００９６】実施例３ ［（２,６−（ジクロロ）−４−（メチルスルホニル）
−フェニル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル 亜硝酸ナトリウム２.１ｇ（０.０３モル）を濃硫酸３０
ｍＬに溶かす。この過程にて温度は５０℃に上昇する。
該混合物を２０℃に冷却し、１５〜２０℃にて氷酢酸２
０ｍＬを滴下し、２,６−ジクロロ−４−（メチルスル
ホニル）−アニリン７.２ｇ（０.０３モル）を少しづつ
加え、２０℃にてさらに１時間再度撹拌する。
【００９７】マロジニトリル１.９８ｇをエタノール７
５ｍＬに溶かし、水３５ｍＬ中、酢酸ナトリウム三水和
物７４ｇの溶液を加え、前記製造のジアゾニウム塩溶液
を、１９℃にて撹拌しながら滴下する。再度１時間撹拌
した後、形成した結晶を吸引濾過し、濾過残渣を水３０
０ｍＬに加え、塩化メチレンで抽出し、トリクロロエタ
ン２００ｍＬを加え、抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、蒸発により約１００ｍＬに濃縮する。沈澱した結晶
を吸引濾過して乾燥させる。砂色結晶として７.１２ｇ
（収率７４.８％）を得る。凝固点１６５〜１６８℃。
【００９８】実施例４ 以下のプロパンジニトリルヒドラゾンを実施例３と同様
にして製造する： ａ）［（２,３,５,６−テトラフルオロフェニル）−ヒ
ドラゾノ］プロパンジニトリル，凝固点１０３〜１０６
℃，２,３,５,６−テトラフルオロアニリンから製造 ｂ）［（４−ニトロフェニル）−ヒドラゾノ］プロパン
ジニトリル，凝固点２２０℃，ｐ−ニトロアニリンから
（リソゴエ、トッド、トファム（Ｌithgoe,Ｔodd,Ｔoph
am）、ケミカル・ソサイエティ（Ｃhem.Ｓoc.），１９
４４，３１５） ｃ）［２,４−ジニトロフェニル）−ヒドラゾノ］プロ
パンジニトリル，ＴＬＣ，シリカゲル６０（Ｍerck），
移動溶媒：塩化メチレン／メタノール＝９８：２，Ｒf
＝０.２８，２,４−ジニトロアニリンから（ＮＬ−Ａ−
６４１１１８９）
【００９９】ｄ）［（２,４−ジクロロフェニル）−ヒ
ドラゾノ］プロパンジニトリル，凝固点１１４〜１１６
℃，２,４−ジクロロアニリンから（ＮＬ−Ａ−６４１
１１８９） ｅ）［（３,５−ジクロロフェニル）−ヒドラゾノ］プ
ロパンジニトリル，凝固点２００℃（分解），３,５−
ジクロロアニリンから（ＮＬ−Ａ−６４１１１８９） ｆ）［（３,５−ジクロロ−２,４,６−トリブロモフェ
ニル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル，凝固点１９
３〜１９６℃，３,５−ジクロロ−２,４,６−トリブロ
モアニリンから（ＮＬ−Ａ−６４１１１８９）
【０１００】ｇ）［（２,４−ジクロロ−６−ブロモフ
ェニル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル，凝固点１
３４〜１３６℃，２,４−ジクロロ−６−ブロモアニリ
ンから（ユーロ・ジェイ・メド・ケム・クリン・セラプ
（Ｅur.Ｊ.Ｍed.Ｃhem.Ｃlin.Ｔherap.）１２，３６１
［１９７７］） ｈ）［２,４,６−トリクロロフェニル）−ヒドラゾノ］
プロパンジニトリル，凝固点２２５〜２２６℃，２,４,
６−トリクロロアニリンから（ユーロ・ジェイ・メド・
ケム・クリン・セラプ １２，３６１［１９７７］） ｉ）［（２−トリフルオロメチル−４−ニトロフェニ
ル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル，凝固点２４５
℃，２−トリフルオロメチル−４−ニトロアニリンから
【０１０１】 ｊ）［（２,４,６−トリブロモフェニル）−ヒドラゾ
ノ］プロパンジニトリル，凝固点１５３℃， ２,４,６−トリブロモアニリンから（ユーロ・ジェイ・
メド・ケム・クリン・セラプ １２，３６１［１９７
７］） ｋ）［（２−メタンスルホニル−４−ニトロフェニル）
−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル， 凝固点２２０℃， ２−メタンスルホニル−４−ニトロアニリンから ｌ）［（２,４−ジニトロ−６−シアノフェニル）−ヒ
ドラゾノ］プロパンジニトリル， ＴＬＣ，シリカゲル６０（Ｍerck），移動溶媒：トルオ
ール／メチルエチルケトン １：２，Ｒf＝０.５０， ２,４−ジニトロ−６−シアノアニリンから（ダブリュ
・チエル（Ｗ.Ｔhiel）ら、ジェイ・プラクト・ケム
（Ｊ.Ｐract.Ｃhem.）３２８，４９９（１９８６）） ｍ）［（３,５−ジ−｛トリフルオロメチル｝フェニ
ル）−ヒドラゾノ］プロパンジニトリル， 凝固点１５０〜１５１℃， ３,５−ジ−（トリフルオロメチル）−アニリンから
【０１０２】実施例５ ４−［２,６−ジブロモ−４−ニトロフェニル）アゾ］
−２−オクタデシルオキシ−１−ナフトール ａ）２−オクタデシルオキシナフタレン ２−ナフトール（９８％）１７２.８ｇ（１.２モル）
を、スターラー、冷却器および温度計を備えた４Ｌの三
つ口フラスコにおけるエタノール１Ｌ中、水酸化ナトリ
ウム（９９％）４８ｇ（１.２モル）の溶液に加え、溶
解した後、ｎ−オクタデシルブロミド４１７ｇ（１.２
５モル）を加え、該反応混合物を還流下にて１４時間加
熱する。さらにエタノール１Ｌを添加した後、該熱溶液
をサイツ・フィルター（Ｓeitz filter）を介して吸引
濾過し、無機物質を除去し、氷浴中にて３０分間放置す
ることにより薄ピンク色の濾液を結晶化させる。ほぼ無
色の結晶を吸引濾過した後、該濾過ケーキを約７００ｍ
Ｌのエタノールで少しづつ洗浄し、五酸化二リンで乾燥
させ、無色結晶として２−オクタデシルオキシナフタレ
ン３７１.９ｇ（収率９３.７％）を得る。凝固点６４〜
６８℃。ＴＬＣ：シリカゲル６０（Ｍerck），移動溶
媒：ｎ−ヘプタン／メチルエチルケトン ２：１，Ｒf
＝０.３４
【０１０３】ｂ）２−オクタデシルオキシ−１−ナフト
ール ２−オクタデシルオキシナフタレン５９４ｇ（１.５モ
ル）およびテトラ酢酸鉛３９７ｇ（０.７５モル）を、
スターラー、クライセン・アタッチメント、温度計およ
び塩化カルシウム管と一緒に冷却器を備えた１０Ｌの三
つ口フラスコにおける氷酢酸３Ｌおよび無水酢酸６００
ｍＬの混合物に加え、５５℃に加熱する。４日間にわた
って、さらにテトラ酢酸鉛４００ｇを２４時間の間隔で
撹拌しながら少しづつ（１００ｇづつ）加える。その
後、形成した黄色溶液を室温に冷却し、再度３０分間撹
拌し、水１.５Ｌの添加後、形成する結晶スラリーを吸
引濾過し、水２Ｌで少しづつ洗浄する。該湿式粗生成物
をトルオール４Ｌに溶かし、１Ｌ部の水で３回、１Ｌの
飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪し、ついで再度
１Ｌの水で３回振盪する。硫酸ナトリウムでトルオール
相を乾燥させた後、吸引濾過および蒸発濃縮に付し、褐
色粗製生成物６３５ｇを得、それを以下のようにクロマ
トグラフィーに付して精製する：得られた生成物をトル
オール／イソヘキサン（５：２）１.３Ｌの混合物に溶
かし、該溶液を内径１１.５ｃｍ、充填高１.２ｍのシリ
カゲル６０（Ｍerck）カラムに加える。移動溶媒として
トルオール／イソヘキサン（５：２）を用い、約３００
ｍＬづつのフラクションを採取する。フラクション９〜
５２を合し、重量が安定化するまで蒸発により濃縮す
る。２−オクタデシルオキシ−１−ナフトールアセテー
ト３２４.２ｇを得る。凝固点６７〜６８℃。さらに精
製することなく、該化合物を加熱しながらメタノール
１.８Ｌに溶かして２０℃に冷却する。濃硫酸９３ｍＬ
を冷却することなく撹拌しながら、１５分の範囲内で得
られた懸濁液に滴下し、その結果、温度が３５℃に上昇
する。その後、還流下にて２時間加熱し、ついで氷浴中
にて冷却し、氷で冷却しながらさらに３０分間撹拌す
る。形成した結晶を吸引濾過し、氷冷メタノール１５０
ｍＬで洗浄し、五酸化二リンの乾燥棚中、３５℃にて乾
燥する。無色結晶の２−オクタデシルオキシ−１−ナフ
トール２９４.４ｇ（収率４７.５％）を得る。凝固点５
８〜５９℃。
【０１０４】ｃ）４−［（２,６−ジブロモ−４−ニト
ロフェニル）アゾ］−２−オクタデシルオキシ−１−ナ
フトール 亜硝酸ナトリウム２２.７ｇ（０.３３モル）を、スター
ラー、クライセン・アタッチメントおよび温度計を備え
た２Ｌの三つ口フラスコにおける濃硫酸３００ｍＬに、
１０〜１５分間にわたって撹拌しながら加え、反応溶液
の温度３５℃に上昇させる。ついで、該溶液を２０℃に
冷却し、温度が２０〜２５℃に保持されるように氷で冷
却しながら氷酢酸２３０ｍＬを約１５〜２０分間にて滴
下する。その後、２,６−ジブロモ−４−ニトロアニリ
ン（リーデル・デ・ハーン（Ｒiedel de Ｈean［９９％
ＧＣ］）９７.６ｍＬ（０.３３モル）を、随時冷却し、
温度を１９〜２１℃に保持しながら１０分間にわたって
少しづつ加え、再度さらに３時間撹拌する。その後、該
混合物を氷水３.５Ｌ上に注ぎ、得られたジアゾニウム
塩溶液を、氷酢酸３Ｌおよび酢酸ナトリウム三水和物１
８０ｇ（１.３３モル）を加えたクロロホルム３００ｍ
Ｌの混合物中、２−オクタデシルオキシ−１−ナフトー
ル１２４ｇ（０.３モル）の溶液に速やかに加える。
（ナフトールエーテルの溶液の製造において、酢酸ナト
リウムを加えた氷酢酸／クロロホルムに添加した後、温
度が約４５℃に上昇した後に再度２０℃に冷却すること
に注意しなければならない。）氷浴中にて３時間撹拌し
た後、形成した結晶を吸引濾過し、残渣を各５００ｍＬ
の水で３回洗浄し、乾燥棚中、４０℃にて乾燥させる。
粗生成物−明褐色結晶２９５.５ｇ−をクロマトグラフ
ィーに付して精製する。該アゾ化合物をトルオール／塩
化メチレン（２：５）１Ｌに溶かし、内径１１.５ｃ
ｍ、充填高１.２ｍのシリカゲル６０（Ｍerck）カラム
に加え、トルオール／塩化メチレン（２：５）で溶出す
る。約７０ｍＬづつのフラクションを採取する。フラク
ション５７〜１７３を合し、蒸発させて濃縮する。褐色
結晶１３４.２ｇを得る。これらを８０℃にてトルオー
ル４８０ｍＬに溶かし、６５℃に冷却し、激しく撹拌し
ながらイソヘキサン８００ｍＬを加える。撹拌しながら
２０℃に冷却し、冷蔵庫中にて一夜放置し、形成した結
晶を吸引濾過し、濾過ケーキを氷冷トルオール／イソヘ
キサン（１：１.３）３００ｍＬで２回、つづいてイソ
ヘキサン３００ｍＬで洗浄する。その後、重量が安定化
するまで、乾燥棚中、五酸化二リンで、４０℃にて乾燥
させる。明褐色結晶のアゾ化合物１１９.９ｇ（収率５
５.５％）を得る。凝固点１０２〜１０３℃。ＴＬＣ，
シリカゲル６０（Ｍerck），移動溶媒：トルオール／塩
化メチレン（２：５），Ｒf＝０.３７
【０１０５】実施例６ ４−［（２−ブロモ−４−ニトロ−６−トリフルオロメ
チルフェニル）−アゾ］−２−オクタデシルオキシ−１
−ナフトール ２−ブロモ−４−ニトロ−６−トリフルオロメチルアニ
リンから実施例５と同様にして製造する（エム・ハウプ
トシェイン（Ｍ.Ｈauptschein）ら，ジャーナル・オブ
・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー（Ｊ.Ａmer.
Ｃhem.Ｓoc.）７６，１０５１（１９５４）），凝固点
８４℃。
【０１０６】実施例７ ａ）２−（３,７,１１,１５−テトラメチル−２−ヘキ
サデセニル）−３−メチル−４−（２,４−ジニトロフ
ェニル）アゾ］−１−ナフトール エタノール４００ｍＬ中、２,４−ジニトロフェニルヒ
ドラジン１９.８ｇ（０.１モル）を、濃塩酸９ｍＬ
（０.１１モル）を加えた、スターラー、冷却器および
温度計を備えた２Ｌの三つ口フラスコに懸濁させ、ビタ
ミンＫ1［２−メチル−３−（３,７,１１,１５−テトラ
メチル−２−ヘキサデシル）−１,４−ナフトキノン］
４５ｇ（０.１モル）を加え、室温にて１５分間撹拌
し、ついで還流下にて４時間加熱する。その後、真空下
にて濃縮する。赤褐色の粘性ペースト６４ｇを得る。内
径１０.５ｃｍ、充填高１１０ｃｍのシリカゲル６０
（Ｍerck）カラム上、移動溶媒として塩化メチレン／ｎ
−ヘプタンを用いてクロマトグラフィーに付して精製す
る。反応生成物は溶解度が小さいため、粗生成物は移動
溶媒３５０ｍＬに溶け、非溶解性成分をサイツ・フィル
ターを介して濾去し、それをシリカゲルカラムに用い
る。適当なフラクションを合し、真空下にて濃縮し、橙
色のワックス状生成物を、各々、ｎ−プロパノール／リ
グロイン（１：１）１００ｍＬから２回再結晶し、残渣
をｎ−プロパノール／リグロイン（１：１）で２回洗浄
し、重量が安定化するまで乾燥させる。橙色のワックス
状、ＴＬＣ−均一結晶１９.４１ｇ（収率３１％）を得
る。凝固点１１０℃。
【０１０７】以下の化合物を、同様の方法にて製造する
ことができる： ｂ）２−（３,７,１１,１５−テトラメチル−２−ヘキ
サデセニル）−３−メチル−４−（４−ニトロフェニ
ル）アゾ］−１−ナフトール ＴＬＣ，シリカゲル６０（Ｍerck），移動溶媒：トルオ
ール／メタノール＝５０：１；Ｒf＝０.２２，４−ニト
ロフェニルヒドラジンから製造
【０１０８】実施例８ 試験担体製造に関する一般的教示 図１の試験担体を製造するには、透明なポリエステルホ
イル（２００μｍ厚）を以下の実施例にて示す混合物で
コーティングして乾燥させる。該被覆ホイルを１５ｍｍ
幅のストリップに切断し、１５０ｍｍ幅の白色ポリエス
テルホイル（５）の縦方向に層（１）として熱溶解接着
剤を用いて接着させる。さらに、移動層（２）として単
位面積重量３０ｇ／ｍ2を有するグラスファイバーフリ
ースの、分離層（３）として単位面積重量６０ｇ／ｍ2
のグラスファイバーフリースの、および保護層（４）と
してポリアミド織物のストリップを、この白色ポリエス
テルホイル上、縦方向に接着させ、横に切断した後、図
１の６ｍｍ幅の試験ストリップを得る。
【０１０９】同様にして図２の試験担体を製造する。層
（１１）は緩衝物質を含浸させた濾紙からなる。
【０１１０】本発明のフィルム層または試験担体は、試
験すべき試料３０μＬをポリアミド織物（４）に塗布
し、ついで試験担体を市販の反射式測光器であるリフロ
トロンR（ＲeflotronR）（ドイツ国、マンハイム、ベー
リンガー・マンハイム社）に挿入する。液体がグラスフ
ァイバーパッド（３）に浸透し、全血の場合には、赤血
球がそこで分離され、移動層として供するガラスファイ
バーゾーン（８）に到達する。反射式測光器において、
フラップ（１）または（１０）の下にあるフィルムは、
フラップ圧により移動層（２）における液体と接触する
ようになり、形成色相を反射式測光器により６４２ｎｍ
および３７℃にて測定する。
【０１１１】実施例９ 以下の組成の混合物を製造し、透明ポリエステルホイル
に湿式フィルム厚３００μｍで塗布し、乾燥させる： ビニルアセテート−ビニルラウレート−コポリマー １３.１１ｇ （ドイツ国、ミュンヘン、ワッカー・ケミー（Ｗacker Ｃhemie）、 ビンナパスR（ＶinnapasR）Ｂ５００／２０ＶＬ） ２,２−ジフェニル−１−シアノ−アクリル酸− エチルヘキシルエステル １６.０４ｇ （ドイツ国、ルートヴィヒスハーフェン、バスフ（ＢＡＳＦ）、 ウビナルR（ＵvinulR）Ｎ５３９） ４−［（２,６−ジブロモ−４−ニトロフェニル）アゾ］−２ −オクタデシルオキシ−１−ナフトール ０.１７３ｇ （実施例５にて製造） ２,４,６,８−テトラニトロ−５−オクタデシルオキシ− ナフトール−１ ０.０４５６ｇ （実施例２） バリノマイシン ０.２６７３ｇ 珪藻土 ２５.１３ｇ （ＵＳＡ、シンシナティ、イーグル−ピッチャー（Ｅagle− Ｐicher）、セラトムR（ＣelatomR）ＭＷ２５） ブチルアセテート ４５.１７ｇ
【０１１２】湿式フィルム厚１５０μｍを有する以下の
組成の第２層をこの層に塗布し、同様に乾燥させる： 水中２％のヒドロキシエチルセルロース ２４ｇ （ＵＳＡ、デラウェア州、ウィルミントン（Ｗillmington）、 ハーキュレス社（Ｈercules Ｉnc.）、 ナトロソールR（ＮatrosolR）２５０Ｇ） Ｎ,Ｎ−ビス−（ヒドロキシエチル）−アミノエタンスルホン酸 ８.２ｇ （ＢＥＳ） エタノール ４２ｍＬ ＬiＯＨで pＨ７.５に調整する。
【０１１３】加えて、２,４,６,８−テトラニトロ−５
−オクタデシルオキシ−ナフトール−１を用いない以
外、同一の組成の試験フィルムを製造する。
【０１１４】図１の試験ストリップを実施例８の記載に
従って被覆ホイルから調製して測定する。該試料と試薬
フィルムとの接触の６０秒後に測定を行う。
【０１１５】種々のカリウム含量の血清を用いた場合、
カリウム含量において以下の反射率（％Ｒ）依存性が見
いだされる： 表 ２ カリウム含量 反射率［％Ｒ］ ［カリウム（ｍｍｏｌ）／Ｌ］ ２,４,６,８−テトラニトロ−５−オクタ デシルオキシ−ナフトール−１ 有 無 ０.２４ ６２.０ ３４.４ １.０９ ５５.８ ２８.５ １.８７ ５０.３ ２４.８ ３.１８ ４３.２ ２１.２ ４.１５ ３８.３ １９.３ ６.０８ ３２.３ １６.８ ８.１０ ２７.５ １５.０ １０.２２ ２４.０ １３.８ １２.１０ ２１.５ １２.９
【０１１６】約２〜６ミリモル／Ｌのカリウムの診断学
的に重要な範囲において、本発明の酸を有する場合、測
定値において約１８％Ｒの差異を得ることができたのに
対して、該酸を有していない場合、わずか約８％Ｒを達
成するにすぎないことが明らかである。 実施例１０ 以下の組成の混合物を製造し、透明ポリエステルホイル
に湿式フィルム厚３００μｍで塗布し、乾燥させる： ビニルアセテート−マレイン酸ジブチルエステルコポリマー １４.７ｇ （ドイツ国、フランクフルト、ヘキスト（Ｈoechst）、 モビリスR（ＭowilithR）35／73） ２,２−ジフェニル−１−シアノ−アクリル酸− エチルヘキシルエステル １８.４ｇ （ドイツ国、ルートヴィヒスハーフェン、バスフ、ウビナルRＮ５３９） ４−［（２,６−ジブロモ−４−ニトロフェニル）アゾ］−２ −オクタデシルオキシ−１−ナフトール ０.１３０ｇ （実施例５にて製造） ビス−（２−ヒドロキシ−３,５,６−トリクロロフェニル） −メタン ０.０２９ｇ （ドイツ国、シュタインハイム、アルドリッチ（Ａldrich）、 ヘキサクロロフェン（Ｈexachlorophene）） バリノマイシン ０.６００ｇ 珪藻土 ２８.２ｇ （ＵＳＡ、シンシナティ、イーグル−ピッチャー、セラトムRＭＷ２５） ブチルアセテート ５０.７ｇ
【０１１８】湿式フィルム厚１５０μｍを有する以下の
組成の第２層をこの層に塗布し、同様に乾燥させる： 水中４％のヒドロキシエチルセルロース ４１.５ｇ （ＵＳＡ、デラウェア州、ウィルミントン、ハーキュレス社、 ナトロソールR２５０Ｇ） Ｎ,Ｎ−ビス−（ヒドロキシエチル）−アミノエタンスルホン酸 ８.５ｇ （ＢＥＳ） エタノール ６４ｍＬ ＬiＯＨで pＨ７.８に調整する。
【０１１９】加えて、ヘキサクロロフェンを用いないこ
とを除いて、同一の組成の試験フィルムを製造する。
【０１２０】図１の試験ストリップを実施例８の記載に
従って被覆ホイルから調製して測定する。該試料と試薬
フィルムとの接触の６０秒後に測定を行う。
【０１２１】種々のカリウム含量の血清を用いた場合、
カリウム含量において以下の反射率（％Ｒ）依存性が見
いだされる： 表 ３ カリウム含量 反射率［％Ｒ］ ［カリウム（ｍｍｏｌ）／Ｌ］ ヘキサクロロフェン 有 無 １.００ ５４.２ ３３.４ １.９８ ４７.８ ２８.５ ２.９９ ４１.６ ２５.１ ４.１２ ３７.４ ２２.７ ６.００ ３０.８ １９.３ ８.０４ ２６.４ １７.１ １０.１２ ２３.２ １５.４ １１.９８ ２１.７ １４.３
【０１２２】約２〜６ミリモル／Ｌのカリウムの診断学
的に重要な範囲において、本発明の酸を有する場合、測
定値において約１７％Ｒの差異を得ることができたのに
対して、該酸を有していない場合、わずか約９％Ｒを達
成するにすぎないことが明らかである。
【０１２３】実施例１１ 以下の組成の混合物を製造し、透明ポリエステルホイル
に湿式フィルム厚３００μｍで塗布し、乾燥させる： ビニルアセテート−ビニルラウレートコポリマー １９.６ｇ （ドイツ国、ミュンヘン、ワッカー・ケミー、 ビンナパスRＢ５００／２０ＶＬ） ２,２−ジフェニル−１−シアノ−アクリル酸− エチルヘキシルエステル ２４.０ｇ （ドイツ国、ルートヴィヒスハーフェン、バスフ、ウビナルRＮ５３９） ４−［（２−ブロモ−４−ニトロ−６−トリフルオロメチル フェニル）アゾ］−２−オクタデシルオキシ−１−ナフトール ０.０７１ｇ （実施例６にて製造） ［（２,４−ジニトロフェニル）ヒドラゾノ］プロパンジニトリル （実施例４ｃ） ０.０５２ｇ バリノマイシン ０.３０ｇ 珪藻土 ３７.５ｇ （ＵＳＡ、シンシナティ、イーグル−ピッチャー、セラトムRＭＷ２５） ｍ−キシロール ６７.４ｇ
【０１２４】加えて、［（２,４−ジニトロフェニル）
−ヒドラゾノ］プロパンジニトリルを用いないことを除
いて同様の組成を有する試験フィルムを調製する。
【０１２５】ロング・ファイバー・ペーパー（Ｌong fi
bre paper）６７７６（ドイツ国、ゲルンバック（Ｇern
sbach）、シェラーおよびヘッシュ（Ｓchoellerおよび
Ｈoesch））を以下の溶液で含浸させて乾燥させる： Ｎ,Ｎ−ビス−（ヒドロキシエチル）−アミノエタンスルホン酸 ８.５ｇ （ＢＥＳ） ｎ−オクチルグルコシド ０.１ｇ 蒸留水 ９１.５ｍＬ ＬiＯＨで pＨ７.５に調整する。
【０１２６】図２の試験ストリップを実施例８の記載に
従って被覆ホイル（１０）および緩衝紙（１１）から調
製して測定する。該試料と試薬フィルムとの接触の６０
秒後に測定を行う。
【０１２７】種々のカリウム含量の血清を用いた場合、
カリウム含量に対して以下の反射率（％Ｒ）依存性が見
い出される： 表 ４ カリウム含量 反射率［％Ｒ］ ［カリウム（ｍｍｏｌ）／Ｌ］ ［（２,４−ジニトロフェニル）−ヒドラ ゾノ］プロパンジニトリル 有 無 ０.０８ ６３.６ ３３.９ １.０１ ５７.０ ２４.８ １.９８ ４６.３ ２１.２ ３.１０ ３７.６ １８.９ ４.０８ ３１.０ １７.６ ６.０８ ２５.０ １５.７ ８.０５ ２２.０ １４.５ ９.９０ ２０.０ １３.６
【０１２８】約２〜６ミリモル／Ｌのカリウムの診断学
的に重要な範囲において、本発明の酸を有している場
合、測定値において約２１％Ｒの差異を得ることができ
たのに対して、該酸を有していない場合、わずか約５.
５％Ｒを達成するにすぎないことが明らかである。
【０１２９】２,４−ジニトロフェニルヒドラゾンの代
わりに、メソキサル酸ジニトリルの３,５−ジ−トリフ
ルオロメチルフェニルヒドラゾン（実施例４ｍ）を用い
た場合、反射率において同様の差を有する試験ストリッ
プが得られる。
【０１３０】実施例１２以下の組成の混合物を製造し、
透明ポリエステルホイルに湿式フィルム厚３００μｍで
塗布し、乾燥させる： ビニルアセテート−ビニルラウレートコポリマー ５.９ｇ （ドイツ国、ミュンヘン、ワッカー・ケミー、 ビンナパスRＢ５００／２０ＶＬ） ２,２−ジフェニル−１−シアノ−アクリル酸− エチルヘキシルエステル ７.２ｇ （ドイツ国、ルートヴィヒスハーフェン、バスフ、ウビナルRＮ５３９） ２−（３,７,１１,１５−テトラメチル−２−ヘキサデセニル）−３− メチル−４−（４−ニトロフェニル）アゾ］−１−ナフトール ０.０３２ｇ （実施例７にて製造） ２,４,６−トリニトロ−３−ペンタデシル−フェノール ０.０２０ｇ （実施例１） バリノマイシン ０.１２０ｇ 珪藻土 １１.３ｇ （ＵＳＡ、シンシナティ、イーグル−ピッチャー、セラトムRＭＷ２５） ブチルアセテート ２０.３ｇ
【０１３１】湿式フィルム厚１５０μｍを有する以下の
組成の第２の層をこの層に塗布し、同様にして乾燥させ
る： 水中２％のヒドロキシエチルセルロース １５０ｇ （ＵＳＡ、デラウェア州、ウィルミントン、ハーキュレス社、 ナトロソールR２５０Ｇ） ホウ酸 ４.６４ｇ エタノール １９８ｍｌ ＬiＯＨで pＨ９.５に調整する。
【０１３２】加えて、２,４,６−トリニトロ−３−ペン
タデシルフェノールを有しない以外は同様の組成を有す
る試験フィルムを調製する。
【０１３３】図１の試験ストリップを実施例８の記載に
従って被覆ホイルから調製して測定する。該試料と試薬
フィルムとの接触の６０秒後に測定を行う。
【０１３４】種々のカリウム含量の血清を用いた場合、
以下の反射率値が測定される： 表 ５ カリウム含量 反射率［％Ｒ］ ［カリウム（ｍｍｏｌ）／Ｌ］ ２,４,６−トリニトロ−３− ペンタデシルフェノール 有 無 ０.２４ ６６.５ ５４.３ １.０９ ６２.８ ４８.４ １.８７ ５９.９ ４４.２ ３.１８ ５５.８ ３９.８ ４.１５ ５２.７ ３７.７ ６.０８ ４７.８ ３３.９ ８.１０ ４３.６ ３１.３ １０.２２ ４０.１ ２９.０ １２.１０ ３７.４ ２７.１
【０１３５】約２〜６ミリモル／Ｌのカリウムの診断学
的に重要な範囲において、本発明の酸を有している場
合、測定値において約１２％Ｒの差異を得ることができ
たのに対して、該酸を有していない場合、わずか約１０
％Ｒを達成するにすぎないことが明らかである。
【０１３６】２,４,６−トリニトロ−３−ペンタデシル
フェノールの代わりに、等モル量の２,４−ジニトロ−
５−オクタデシルオキシ−ナフトール−１（実施例２Ｂ
にて製造）を有する同様の組成の試験ストリップで、約
１１.５％の測定差を示す同様の結果が得られる。
【発明の効果】本発明によれば、水性液中のイオンの測
定感度を増加させる方法およびその対応する試薬を得る
ことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明のイオン測定方法を実施するための好
ましい試験担体の斜視図である。
【図２】 本発明のイオン測定方法を実施するための別
の好ましい試験担体の斜視図である。
【図３】 水性液中のイオン測定用の試験担体で測定さ
れる反射率（Ｒ）と濃度（ｃ）の間の関係を表す曲線で
ある。
【符号の説明】
１…フィルム層 ２…移動層 ３…分離層 ４…保護層 ５…不活性担体ホイル ６…接着剤 ７…試料適用ゾーン ８…試験ゾーン ９…接着ジョイント １０…フィルム層 １１…付加層 ａ…本発明の酸を添加していない場合の反射率と濃度の
関係を示す曲線 ｂ…本発明の酸を添加した場合の反射率と濃度の関係を
示す曲線
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｃ 255/66 9357−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 255/66 317/22 7419−4Ｈ 317/22 317/46 7419−4Ｈ 317/46 (72)発明者 ヴェルナー・ギュートライン ドイツ連邦共和国デー−6800マンハイム 24、イム・ゼンタイヒ31番 (72)発明者 デトレフ・ティーム ドイツ連邦共和国デー−6800マンハイム １、デー３・２番 (72)発明者 ペーター・フォーゲル ドイツ連邦共和国デー−6944ヘムスバッ ハ、シューベルトヴェーク５番

Claims (4)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 水性液中のイオンが該水性液と非混和性
    である相に移り、その結果、そこに存在する pＨインジ
    ケーターがイオン測定に用いることのできる色相変化を
    受ける水性液中のイオン測定方法であって、その測定感
    度を増加させるために、式Ｉ： 【化１】 ［式中、Ｒ1〜Ｒ4基の一つはアルキル基およびアラルキ
    ル基からなる群から選択される基であり、他の基は同一
    または異なり、各々、ニトロ基またはハロゲンを意味す
    る］で示される化合物、式ＩＩ： 【化２】 ［式中、Ｒ5〜Ｒ9基の一つはアルコキシ基であり、他の
    基はニトロ基である］で示される化合物、および式ＩＩ
    Ｉ： 【化３】 ［式中、Ｒ10〜Ｒ14は同一または異なり、各々、水素、
    ニトロ基、またはハロゲン置換のアルキル基を意味す
    る］で示される化合物からなる群から選択される物質
    を、水性液と非混和性である相中にて用いるイオン測定
    方法。
  2. 【請求項２】 pＨインジケーターとして、式ＩＶ： 【化４】 ［式中、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は同一または異なり、各
    々、水素、アルキル基またはアルコキシ基で、ここで、
    少なくとも一つの基は炭素数８〜３０のアルキル基また
    はアルコキシ基であり；Ｒ18は水素またはアルキル基で
    あり；Ｒ19はニトロ基、ハロゲン置換のアルキル基、シ
    アノ基、スルホンアミド基またはアルキルスルホニル基
    であり；Ｘは窒素またはＣＲ20基であり；およびＹは硫
    黄またはＣＲ21＝ＣＲ22基であり；ここで、Ｒ20、Ｒ21
    およびＲ22は同一または異なり、各々、水素、ハロゲ
    ン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基またはハロゲン置
    換のアルキル基またはアルキルスルホニル基を意味す
    る］で示されるナフトール誘導体を用いる請求項１記載
    の方法。
  3. 【請求項３】 水と非混和性である媒体中にイオノフォ
    アおよび pＨインジケーターを含有する、水性液中のイ
    オンを測定する試薬であって、測定感度を増加させるた
    め、式Ｉ： 【化５】 ［式中、Ｒ1〜Ｒ4基の一つはアルキル基およびアラルキ
    ル基からなる群から選択される基であり、他の基は同一
    または異なり、各々、ニトロ基またはハロゲンを意味す
    る］で示される化合物、式ＩＩ： 【化６】 ［式中、Ｒ5〜Ｒ9基の一つはアルコキシ基であり、他の
    基はニトロ基である］で示される化合物、および式ＩＩ
    Ｉ： 【化７】 ［式中、Ｒ10〜Ｒ14は同一または異なり、各々、水素、
    ニトロ基、またはハロゲン置換のアルキル基を意味す
    る］で示される化合物からなる群から選択される物質を
    含有するイオン測定用試薬。
  4. 【請求項４】 pＨインジケーターとして、式ＩＶ： 【化８】 ［式中、Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は同一または異なり、各
    々、水素、アルキル基またはアルコキシ基で、ここで、
    少なくとも一つの基は炭素数８〜３０のアルキル基また
    はアルコキシ基であり；Ｒ18は水素またはアルキル基で
    あり；Ｒ19はニトロ基、ハロゲン置換のアルキル基、シ
    アノ基、スルホンアミド基またはアルキルスルホニル基
    であり；Ｘは窒素またはＣＲ20基であり；およびＹは硫
    黄またはＣＲ21＝ＣＲ22基であり；ここで、Ｒ20、Ｒ21
    およびＲ22は同一または異なり、各々、水素、ハロゲ
    ン、ニトロ基、シアノ基、アルキル基またはハロゲン置
    換のアルキル基またはアルキルスルホニル基を意味す
    る］で示されるナフトール誘導体を含有する請求項３記
    載の試薬。
JP3110266A 1990-05-15 1991-05-15 高感度のイオン測定方法、該方法に適する物質の使用および対応する試薬 Expired - Lifetime JP2665412B2 (ja)

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DE4015592A DE4015592A1 (de) 1990-05-15 1990-05-15 Verfahren zur bestimmung eines ions mit erhoehter empfindlichkeit, verwendung hierfuer geeigneter substanzen und entsprechendes mittel
DE4015592.7 1990-05-15

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