JPH0380260B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は体液殊に尿中のウロビリノーゲンを検
出するための改良された試験用組成物を提供する
ものである。

（従来の技術） 臨床医学的に「増加ウロビリノーゲン」は肝臓
および胆疾患を診断するための重要な指標と見做
されている。

従来、尿中のウロビリノーゲンを検出するの
に、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド塩酸溶
液を用いる方法が標準的な方法となつておりこの
反応はエールリツヒ反応と呼ばれ広く普及されて
いる。ところで緊急検査・集団検診の必要性から
簡易性・迅速性が要求されている今日、これらの
条件を満たすべく、臨床検査に於いて試験片が重
要な役割を果して来ている。ウロビリノーゲンの
検出に於いても例外でなくエールリツヒ反応に基
づいた試験片が用いられている。しかしこの反応
に基づく試験片は以下に示す２つの大きな欠点を
有している。

ウロビリノーゲンとの反応に特異性が乏し
い。

呈色反応が極めて緩漫である。

これに対して近年、各種芳香族ジアゾニウム塩
を用いたジアゾ反応に基づくウロビリノーゲン検
出用の試験片も報告されている。（特開昭48−
11093号公報、特開昭49−99091号公報、特開昭55
−6248号公報、特開昭55−114954号公報）ジアゾ
反応に基づくこれらの試験片はエールリツヒ反応
に基づいた試験片に比較し、ウロビリノーゲンと
の反応速度は改善されている。

（発明が解決しようとする問題点） しかしながら共存するビリルビンと反応するも
のもあり、またウロビリノーゲン濃度の高低によ
る呈色の差が明確に現われないため濃度判定が困
難であるという欠点を有していた。

（問題点を解決するための手段） 本発明は上記事情に鑑みなされたもので、その
目的とするところはビリルビンの影響を受けずに
短時間でウロビリノーゲンを検出でき、かつウロ
ビリノーゲン濃度の判定が容易な試験用組成物を
提供することにある。

即ち本発明の要旨とするところは一般式 （式中、X′およびX″は同一または異なる安定化
陰イオンである） で表わされる化合物を必須成分として含有するこ
とを特徴とする体液中のウロビリノーゲンを検出
するための試験用組成物である。

本発明によれば、一般式〔〕で表わされる化
合物は、酸の存在下でウロビリノーゲンとほぼ瞬
間的に反応して赤橙色を呈する。尿素、パラアミ
ノサリチル酸、スルホンアミドとは反応せず、イ
ンドール・スカントール・ポルホビリノーゲンと
の反応もウロビリノーゲンに比較して著しく弱
い。尿中に大量のビリルビンが排泄された時には
反応するが、これはウロビリノーゲンとの反応が
すつかり展開した後に著しく異なつた（暗緑色を
帯びた）色調で現われるため、ビリルビンとウロ
ビリノーゲンが同時に存在しても、ウロビリノー
ゲンを特異的に検出することができる。

本発明によれば、一般式〔〕で表わされる化
合物とウロビリノーゲンとの反応は酸性、殊にPH
3.0以下で進行させるのが望ましく、この領域で
特に強い発色が観察される。従つてこのPHを与え
る酸であればいかなる酸であつても使用可能であ
る。特に本発明の試験組成物は吸収担体に含有せ
しめて、試験片として使用する場合が実用上最も
好ましい。

本発明に係る試験片を製造するにあたつては、
一般式〔〕で表わされる化合物、反応に必要な
酸、好適には固体の酸、必要に応じて湿潤剤およ
び安定化剤よりなる溶液を吸収担体、好ましくは
紙、ポリエステルフリース、多孔性プラスチツ
ク等に含浸させた後乾燥させて作成する。

本発明に使用される一般式〔〕で表わされる
化合物（４，4′−ビス−ジアゾニウムジフエニル
ジスルフイド）の安定化陰イオンとしては、サル
フエートイオン、テトラフルオロボレートイオ
ン、トリフルオロメチルスルホネートイオン、並
びにアリールスルホネートイオン等があげられ、
単独または数種の組合せで利用される。特にテト
ラフルオロボレートイオンを安定化陰イオンとし
て利用した場合が保有性に優れているという点で
好適であつた。量的には含浸溶液100mlに対して
0.005〜0.1ｇ、好ましくは0.01〜0.05ｇを添加す
る。ここで一般式〔〕で表わされる化合物（芳
香族テトラゾニウム塩）はジアゾ化学に於いて公
知の方法により調製することができる。あるいは
相当するアミン（４，4′−ジアミノジフエニルジ
スルフイド）よりジアゾ化学で公知の方法によ
り、含浸溶液中で調製することも可能である。

またウロビリノーゲンとのジアゾカツプリング
反応に十分な量の酸を添加することが必要であ
り、好ましくは常温で固体の酸、例えばクエン
酸、シユウ酸、スルホサリチル酸、ｐ−トルエン
スルホン酸およびメタリン酸等が単独あるいは混
合物として使用され特にメタリン酸を使用する場
合に、熱安定性に優れ保有性が高い。量的には含
浸液100mlに対して３〜30ｇ、有利には５〜20ｇ
の量を添加するのが好ましい。

また必要に応じて湿潤剤として界面活性剤を添
加することが望ましく、特にウロビリノーゲンと
一般式〔〕の芳香族テトラゾニウム塩との反応
呈色物質を深色化するという点で陰イオン界面活
性剤を添加するのが好ましい。例えばジオクチル
スルホコハク酸ナトリウム、ドデシルベンゼンス
ルホン酸ナトリウムあるいはラウリル硫酸ナトリ
ウム等があげられる。量的には含浸液100mlに対
して0.005〜2.0ｇ、有利には0.01〜1.0ｇを添加す
るのが望ましい。

さらにジアゾ化学より公知の、一般式〔〕の
芳香族テトラゾニウム塩を安定化する添加物を使
用することもできる。例えば弗化硼素酸ナトリウ
ム、アリールスルホン酸ナトリウム、メタリン酸
ナトリウム等を１種または数種類を組合せて使用
することが望ましい。また有機被膜形成体として
知られているプルラン（林原生物化学研究所製）
を添加すると安定性が向上する。

上記組成溶液を吸収担体に含浸させた後乾燥さ
せた試験紙を両面テープ等でプラスチツクフイル
ムに貼り、これを四角に切断して使用の便に供す
ることができる。

試験結果の判定は、ウロビリノーゲン各濃度と
反応して生じた試験片上の色調と予め作成した標
準色表とを数秒後に対比することにより体液中、
殊に尿中のウロビリノーゲン濃度をビリルビンの
影響を受けることなく容易に判定することができ
た。

ところで、試験片は本発明に係る試験用組成物
の優れた実施形であるが本発明を溶液状で使用す
ることもでき、その場合、被検液と接触させて予
め作成した色度図表あるいはスペクトルフオトメ
ーターによりウロビリノーゲンを定量することも
可能である。この場合、生じた色素をクロロホル
ムのような有機溶剤中に抽出して色度図表と対比
するかあるいは吸光度を測定するのが望ましい。

（実施例） 次に本発明を以下の実施例により更に具体的に
説明するがこれにより本発明の範囲が限定される
ものではない。

実施例 １ 濾紙（東洋濾紙社製No.514）を次の組成の溶液
で含浸させかつ45℃で乾燥させた。

４，4′−ビス−ジアゾニウムジフエニル 0.03ｇ ジスルフイド弗化硼素酸塩メタリン酸 ７ｇ ラウリル硫酸ナトリウム 0.5ｇ メタノール 10ml 水 90ml 得られた試験片を次の尿中の浸漬すると２〜５
秒後に次の呈色が観察された。

●ウロビリノーゲンを含まない尿；変色せず ●４mg／dlのビリルビン含有尿；変色せず（約３
分後に暗緑色） ●１mg／dlのウロビリノーゲン含有尿；淡黄桃色 ●４mg／dlのウロビリノーゲン含有尿；赤橙色 実施例 ２ 濾紙（東洋濾紙社製No.514）を次の組成の溶液
で含浸させ各々45℃で乾燥させた。

溶液（） ４，4′−ジアミノジフエニルジスルフイド 0.04ｇ スルホサリチル酸 3.5ｇ 亜硝酸ナトリウム 0.025ｇ プルラン 1.0ｇ 水 100ml 溶液（） ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム 0.05ｇ 酢酸エチル 100ml 得られた試験片は例１の試験片とほぼ同等な性
能を有していた。

比較製造例 １ 濾紙（東洋濾紙社製No.514）を次の組成の溶液
で含浸させかつ50℃で乾燥した。

ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド 0.5ｇ シユウ酸 10ｇ ラウリル硫酸ナトリウム 0.3ｇ メタノール 100ml 得られた試験片はウロビリノーゲン（４mg／dl
と１mg／dl）含有尿中に浸漬すると尿素との呈色
が有意に現われ、約１分後に黄褐色の濃淡での呈
色が観察されたが、実施例１および２で得られた
試験片に比較し呈色差が少なく判定に要する時間
も長かつた。

比較製造例 ２ 濾紙（東洋濾紙No.514）を次の組成で含浸させ
かつ60℃で乾燥させた。

スチルベン−４，4′−ビスジアゾニウム弗化硼素
酸塩 0.3ｇ メタリン酸 10ｇ ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム 0.5ｇ メタノール ５ml 水 100ml 得られた試験片は４mg／dlのウロビリノーゲン
含有尿で約10秒後に紫色を呈したが、２mg／dlの
ビリルビン含有尿でも約45秒後に緑褐色を呈しビ
リルビンの影響を受けた。

（発明の効果） 以上詳細に説明した通り、本発明に係る試験用
組成物は尿中の尿素あるいはビリルビンの影響を
受けることなく、短時間でウロビリノーゲンの特
異的な検出が可能であるため、臨床検査業務に於
ける正確性、迅速性および簡便性に寄与する効果
が著しい。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中、X′およびX″は同一または異なる安定化
   陰イオンである） で表わされる化合物を必須成分として含有するこ
   とを特徴とする体液中のウロビリノーゲンを検出
   するための試験用組成物。