JPH01206257A - ウロビリノーゲン検出用試薬および器具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は体液、殊に尿中のウロビリノーゲンを検出する
ための試薬およびそれを担持したウロビリノーゲン検出
用器具に関する。

（従来の技術） ウロビリノーゲンは、生体内で腸内細菌によるビリルビ
ンの還元により生成される。

通常、健常者の場合、微屯のウロビリノーゲンが尿中に
排出されるが、肝機能障害や溶血性疾患などの場合はそ
の排出量は増加し、胆管閉塞の場合は逆に減少すること
が知られており、ウロビリノーゲンは臨床検査の分野で
有用な指標とされている。

体液中のウロビリノーゲンを検出する方法としては、古
くからエールリッヒ反応が一般によく知られている。こ
れは、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドとウロビリ
ノーゲンの活性メチレンとの縮合による赤紫色の色素形
成を測定することにより、ウロビリノーゲンを検出する
ものである。

これに対し、近年ジアゾニウム塩を用いたジアゾカプリ
ング反応によるウロビリノーゲンの検出法も報告されて
いる（特開昭４８−１１０９３号公報、特開昭４９−４
４７９７号公報、特開昭４９−９９０９１号公報、特開
昭５２−４９３号公報、特開昭５６−１１８６７０号公
報等参照）。

これら公報に記載の検出法は、エールリッヒ反応に比べ
て反応速度が早く、簡便にウロビリノーゲンが検出でき
るという利点がある。

（発明が解決しようとする課題） しかし、このような従来のウロビリノーゲンの検出法に
は種々の問題がある。

まずエールリッヒ反応はウロビリノーゲンに対する反応
速度が遅く、ウロビリノーゲン以外の尿中成分、たとえ
ば尿素、インドール酢酸、ボルホビリノーゲン等の影響
も受けるため、臨床検査で用いるには問題がある。また
、最近のジアゾニウム塩を用いた方法では、ウロビリノ
ーゲンとの反応による呈色が尿の色調と類似していて判
定が不明瞭となったり、尿中のビリルビンの影響を受け
たりする欠点を有するものがある。

本発明の目的は、このような従来のウロビリノーゲンの
検出法、特にジアゾニウム塩を用いるウロビリノーゲン
の検出法を改良し、体液、殊に尿中のウロビリノーゲン
を容易に検出でき、臨床検査の分野で用いることができ
るようにしたもので、尿中の尿素、インドール酢酸、ボ
ルホビリノーゲン、ビリルビン等の影響を受けることな
く、迅速かつ簡便にウロビリノーゲンが検出できるよう
なウロビリノーゲン検出用試薬および器具を提供するこ
とにある。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは、上述のような課題を解決し、その目的を
達成するために鋭意研究を進めた結果、ウロビリノーゲ
ンと特異的に反応する化合物として一般式； （式中、ＸおよびＹは同−又は異なった陰イオンを表わ
す。） で示される化合物を見い出し、さらに研究を重ねた結果
、当該化合物を含有することを特徴とするウロビリノー
ゲン検出用試薬を完成するに至った。

本発明に係るジアゾニウム塩化合物を示す式（１）中、
ＸおよびＹは、ジアゾニウム塩を安定化させるための安
定化陰イオンであり、ＸおよびＹは同一であっても、父
兄なっていても良い。このような陰イオンの例としては
、クロライド、サルフェート、テトラフルオロボレート
イオン等が挙げられる。

本発明のウロビリノーゲン検出用試薬を用いると、ノア
ゾニウム塩（Ｉ）がウロビリノーゲンと迅速に反応し、
桃色〜赤色〜橙褐色の赤色系色素を形成する。このウロ
ビリノーゲンとの反応は特異的に進み、尿素、インドー
ル酢酸、ボルホビリノーゲン等とはほとんど反応しない
。またビリルビンとは、正常の尿中のビリルビン債であ
れば反応せず、ビリルビン量が増加するとウロビリノー
ゲンとの反応の後で暗青色を示すため、ビリルビンを多
く含む検体であってもウロビリノーゲンの検出は何ら影
響を受けない。

本発明のウロビリノーゲン検出用試薬の有効成分である
ジアゾニウム塩（Ｉ）とウロビリノーゲンとの反応は、
酸性条件下、とりわけｐＨ３，０以下の条件下で促進す
ることができる。このため、本発明のウロビリノーゲン
検出用試薬には、反応系を酸性条件にするために公知の
有機酸又は無機酸を加えることができる。このような酸
の例としては、シュウ酸、クエン酸、コハク酸、マレイ
ン酸、酒石酸、メタリン酸、スルホサリチル酸などが挙
げられる。

また、本発明のウロビリノーゲンの検出用試薬に公知の
陰イオン界面活性剤を加えると、反応性が向上する。こ
のような陰イオン界面活性剤の例としては、ドデシルベ
ンゼンスルホン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム
、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウムなどが挙げられ
る。

本発明のウロビリノーゲン検出用試薬は、臨床検査で用
いる場合、使用上の簡便性や試薬の安定性を考慮し、ス
ティックの形態とするのが好ましい。このようなスティ
ックを作製するには、まずジアゾニウム塩（１）と必要
に応じ前記の有機酸又は無機酸、及び陰イオン界面活性
剤を含有する試薬組成物を吸液性担体に含浸し、乾燥さ
せて試験紙を作る。このような吸液性担体の例としては
、濾紙、ガラス繊維紙、ポリエステルフリースなどが挙
げられる。次に、試薬を含浸した試験紙をプラスチック
シートなどの支持体に貼合し、スティックの形態とする
。試験紙に含浸させる試薬の濃度　・は−概に定めるこ
とができないが、ジアゾニウム塩（１）は、通常１０〜
５００肩９／ｄρ、好ましくは５０〜４００　ｍ９／ｄ
Ｑの濃度で吸液性担体に含浸させる。また有機酸又は無
機酸は、通常１〜５０ｇ／ｄ０．、好ましくは５〜２０
９／ｄｃの濃度で、陰イオン界面活性剤は、同様に通常
１０〜２０００ｍｇ／ｄＱ、好ましくは１００〜！、０
００巧／ｄｃの濃度で担体に含浸させることができる。

このようにして作製したスティックは、これを被検体と
しての尿中に浸し、その呈色を既知のウロビリノーゲン
濃度に対する呈色と比較することにより、尿中のウロビ
リノーゲンの濃度を測定することかできる。

（実施例） 次に本発明の実施例を示すが、これらは本発明を同等限
定するものではない。

実施例１ ジアゾニウム塩（Ｉ）として２．２°−ジメチル上ベン
ジル−４，４°−ビスジアゾニウム四フッ化硼酸塩１０
０ｍ９、シュウ酸１０９およびラウリル硫酸ナトリウム
５００１９を、精製水中に全ｆｆ１１００ｙｎＱとなる
ように溶解して本発明のウロビリノーゲン検出用試薬組
成物を調製した。

実施例２ ジアゾニウム塩（１）として２，２°−ジメチル上ベン
ジル−４，４°−ビスジアゾニウム塩酸塩１００ｍ９、
シュウ酸１０ｇおよびラウリル硫酸ナトリウム５００巧
を、精製水中に全ｆｆ１１００ｉ（ｉとなるように溶解
して本発明のウロビリノーゲン検出用試薬組成物を調製
した。

実施例３ 実施例１で調製した本発明のウロビリノーゲン検出用試
薬組成物を濾紙（東洋濾紙５１４Ａ）に含浸させ、５０
〜５５℃で乾燥し、その小片をプラスチックシートに貼
合してスティックを作製した。このスティックを次のよ
うな既知の濃度でウロビリノーゲンを含む尿に浸すと、
１０秒以内に呈色が観察された。

この呈色と比較することにより、ウロビリノーゲン濃度
を測定することができる。

更にこのスティックを、尿素１　ｇ／ｄρの溶液及びイ
ンドール酢酸４ｍ９／ｄＱの溶液にそれぞれ浸したとこ
ろ、反応は認められなかった。

またビリルビン４ｎ／ｄＱの溶液に浸したところ、１分
後に暗緑色を呈した。上記ウロビリノーゲンの反応と比
較すると、反応時間が遅く、色調も全く異なることから
、ウロビリノーゲンの検出には影響しないことがわかっ
た。

また、実施例２で調製した本発明のウロビリノーゲン検
出用試薬組成物についても同様にしてスティックを作製
し、同様に試験したところ、同様の結果が得られた。

（発明の効果） 本発明のウロビリノーゲン検出用試薬はウロビリノーゲ
ンに対する特異性が高いので、従来法の欠点である体液
、殊に尿中の各種の干渉物質の影響を受けることなくウ
ロビリノーゲンの検出ができ、更にスティックの形態を
とることにより迅速かつ簡便にウロビリノーゲンが測定
できることから、臨床検査に大きく寄与できるものであ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＸおよびＹは、同一又は異なった陰イオンを表
   わす。） で示されるジアゾニウム塩を含有することを特徴とする
   ウロビリノーゲン検出用試薬。 ２、特許請求の範囲第１項記載のジアゾニウム塩を吸液
   性担体に含浸させて成るウロビリノーゲン検出用器具。 ３、ジアゾニウム塩を含浸させた吸液性担体を支持体に
   結合したスティック状である特許請求の範囲第２項記載
   のウロビリノーゲン検出用器具。