JP3505262B2 - ダスト中のグアニン乃至ダニの検出方法及びキット - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ダスト中のグアニン乃
至ダニを正確に且つ簡便に検出する方法並びにこの方法
に簡単且つ手軽に使用できるキットに関し、より詳細に
は、家屋内のダスト類の抽出液と芳香族ジアゾ化合物と
の呈色反応を行い、その呈色濃度に基いてダスト中のグ
アニン乃至ダニを正確に検出する方法及びキットに関す
る。

【０００２】

【従来の技術】家屋内に生息しているダニ、例えば、コ
ナ表皮ダニやヤケ表皮ダニ並びにダスト類中のダニの排
泄物及び死骸は、喘息或いは湿疹等を誘発する成分（ア
レルゲン）を含むため、ダニの駆除及びこのアレルゲン
を含むダスト類の除去を定期的に行うことが望まれてい
る。

【０００３】しかし、ダニが生息しているか否かの確認
は専門の検査室で顕微鏡等の器具を用いてのみ行うこと
ができるという困難を伴うため、さらにダニの排泄物及
び死骸に至ってはより複雑な検出作業を必要とするた
め、ダニの駆除等を行うべき時期の判断を家屋内で簡便
に行うことができなかった。

【０００４】近年、ダニの排泄物及び死骸中に含まれる
グアニンを家屋内のダスト類からアルカリ金属水酸化物
含水アルコール溶液で抽出し、得られた抽出液を芳香族
ジアゾ化合物の呈色反応に供して、この呈色濃度を定量
的に評価するグアニンの検出方法が提案された（特公平
４−６４５９１号公報）。

【０００５】この方法は、抽出液と芳香族ジアゾニウム
化合物とを混合するという簡便な操作のみでダスト中の
グアニンを定量的に検出することができる。従って、あ
らかじめ抽出用アルコール溶液と芳香族ジアゾ化合物、
及び呈色濃度とグアニン濃度の関係を示した評価資料を
用意すれば家屋内で専門の知識等がなくても容易にダニ
の排泄物等の存在を確認し、ダニアレルゲンの存在を予
測することができるという利点がある。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかし、この方法は、
抽出液として使用するアルカリ性アルコール溶液がグア
ニンを実用上のレベルに溶解し抽出できるとしても、そ
の呈色の感度において未だ不十分のものであり、グアニ
ン濃度が低い場合にはその含有量を正確に検出し得ない
という問題がある。

【０００７】即ち、上記先行技術で溶剤として使用して
いるアルコール類は、活性水素原子を有するため、芳香
族ジアゾ化合物と反応して発色し、グアニンの濃度が低
い場合には溶剤との反応による発色と区別がつかないよ
うになり、検出の精度が低下するのである。

【０００８】本発明者らは、ダスト中のグアニンの検出
のための抽出液の有機溶媒として、ジメチルスルフォキ
シドを使用すると、溶剤と芳香族ジアゾ化合物との反応
による発色が抑制され、低濃度で含有されるグアニンも
精度よく検出しうること及び上記ジメチルスルフォキシ
ドを使用するとグアニンの溶解度も高まり、一層精度及
び感度の高い検出が可能となることを見いだした。

【０００９】本発明の目的は、ダスト中のグアニン乃至
ダニの検出を、高感度でしかも精度よく且つ手軽に行い
うる方法及びこの方法に用いるキットを提供するにあ
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、家屋内
のダスト類を、アルカリ金属水酸化物のジメチルスルフ
ォキシド含水溶液で抽出し、得られる抽出液について芳
香族ジアゾ化合物との呈色反応を行い、その呈色濃度に
基いてダスト中のグアニン乃至ダニを検出する方法が提
供される。

【００１１】本発明によればまた、アルカリ金属水酸化
物のジメチルスルフォキシド含水溶液を収容し且つ家屋
内のダスト類を浸漬してグアニンを抽出するための小容
器と、芳香族ジアゾ化合物を基体に塗布乃至含浸させた
呈色試験要素と、グアニン濃度に対応する色見本の複数
をランク付けして配列した評価用サンプルとからなるこ
とを特徴とするダスト中のグアニン乃至ダニを検出する
ためのキットが提供される。

【００１２】

【作用】グアニンとは、下記式（１）

【化１】 で示される化合物であり、ダニの代謝系において最終排
泄物として特異的に多く含まれることが知られている。
家屋内のダスト類においては、ＷＨＯがダニアレルゲン
の指標物質として認めており、１９８８年の提唱案で
は、ハウスダスト１ｇにつき０．６ｍｇのグアニンがダ
ニ数で１００匹に相当するとされている。

【００１３】グアニンと芳香族ジアゾ化合物、例えばジ
アゾスルファニル酸とのアゾカップリングによる呈色反
応は、下記式（２）

【化２】 の反応式で示されるものである。

【００１４】本発明では、家屋内のダスト類からグアニ
ンを抽出する抽出媒体として、アルカリ金属水酸化物の
ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）含水溶液を使用す
ることが顕著な特徴であり、これにより家屋内のダスト
類中に含まれるグアニンの検出を高感度でしかも精度よ
く行うことができる。尚、含水溶液中にアルカリ金属水
酸化物を含有させるのは、グアニンは中性付近で有機溶
媒や水への溶解度が極めて低く、アルカリ金属水酸化物
の添加によりアルカリ性とすることにより溶解度が増大
することによる。

【００１５】後述する実施例を参照されたい。アルカリ
金属水酸化物の含水有機溶媒溶液としてメタノールを使
用した場合、芳香族ジアゾ化合物水溶液との呈色は、最
も高濃度の発色を１０及び無発色を１の１０段階で評価
して、抽出液中のグアニン濃度がゼロであっても既に５
のレベルの呈色を示す。また、グアニン濃度１００ｐｐ
ｍでの評価は７のレベルであるが、グアニン濃度１０ｐ
ｐｍおよび２０ｐｐｍでの評価はいずれも６のレベルで
あって、グアニン濃度が１００ｐｐｍを下回ると精度の
よい検出ができない。

【００１６】これに対して、本発明に従い、アルカリ金
属水酸化物の含水有機溶媒溶液としてジメチルスルフォ
キシドを使用すると、芳香族ジアゾ化合物水溶液との呈
色は、同様に評価して、抽出液中のグアニン濃度がゼロ
ではのレベル１の呈色（無発色）であり、また、グアニ
ン濃度１００ｐｐｍでの評価は７のレベルであるが、グ
アニン濃度１０ｐｐｍおよび２０ｐｐｍでの評価はそれ
ぞれ４及び５のレベルであって、グアニン濃度が１００
ｐｐｍを下回る低濃度においても精度のよい検出が可能
となることがわかる。

【００１７】更に、アルカリ金属水酸化物の含水有機溶
媒溶液としてジメチルスルフォキシドを使用すると、家
屋内のダスト類からグアニンを短時間の内に高濃度で抽
出いうるという利点が達成される。後述する実施例の表
１を参照されたい。即ち、メタノールを使用する場合に
比して、ジメチルスルフォキシドを使用する場合には、
抽出液中のグアニン濃度を５０％或いはそれ以上増加さ
せることができる。

【００１８】本発明で溶剤として使用するジメチルスル
フォキシドは、水混和性の極性溶剤であり、下記式
（３）

【化３】 で示されるとおり、活性水素原子を有しない溶剤、非プ
ロトン性溶剤であるという特徴を有する。この特徴によ
り、芳香族ジアゾ化合物との望ましくない呈色反応が防
止され、更にグアニンの高濃度での抽出が可能となるも
のと思われる。

【００１９】本発明のダスト中のグアニン乃至ダニの検
出方キットは、アルカリ金属水酸化物のジメチルスルフ
ォキシド含水溶液を収容し且つ家屋内のダスト類を浸漬
してグアニンを抽出するための小容器と、芳香族ジアゾ
化合物を基体に塗布乃至含浸させた呈色試験要素と、グ
アニン濃度に対応する色見本の複数をランク付けして配
列した評価用サンプルとから構成される。

【００２０】上記小容器には、予めアルカリ金属水酸化
物のジメチルスルフォキシド含水溶液が所定量収容され
ているので、家屋内で採取されたダスト類をこの溶液に
浸漬することにより、グアニンの抽出液を容易に調製す
ることができ、またこの抽出液中に呈色試験要素を浸漬
することにより、グアニンと芳香族ジアゾ化合物との呈
色反応を試験要素上で容易に行うことができ、呈色した
試験要素を評価用サンプルと対比することにより、家屋
内のダスト類に含まれるグアニンの量、即ちダニアレル
ゲンの量を検出することが可能となる。

【００２１】また、上記各部品はキット化されているの
で、持ち運びが容易であり、検出すべき現場に手軽に持
ち込んで試験を行うことができ、しかも少しの訓練のみ
で、専門家や熟練者でなくともダスト中のグアニン乃至
ダニの検出が精度よく行いうるという衛生管理の点で多
大の利点が奏される。

【００２２】

【発明の好適態様】アルカリ金属水酸化物のＤＭＳＯ含
水溶液は、アルカリ金属水酸化物、ＤＭＳＯ及び水を混
合して調製する。アルカリ金属水酸化物としては、例え
ば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等が使用され
る。また、ＤＭＳＯとしては、工業薬品として、また試
薬として入手できるものが何れも使用される。水として
は、蒸留水やイオン交換による精製水、所謂純水等が使
用される。

【００２３】溶液の組成は、全体が均一でありしかもグ
アニンの溶解濃度が高まるように定める。グアニンの溶
解性の点で、ＤＭＳＯは溶液全体当たり５乃至９５重量
％、特に１０乃至５０重量％となる量で用いるのがよ
く、一方アルカリ金属水酸化物は０．１乃至１０重量％
となるような量で存在させるのがよい。

【００２４】アルカリ金属水酸化物は、一般に０．１乃
至１０重量％程度の溶液の形で液に添加するのがよい。
各成分の添加順序には制限はなく、ＤＭＳＯ及び水の混
合溶液にアルカリ金属水酸化物を添加してもよいし、Ｄ
ＭＳＯにアルカリ金属水酸化物の水溶液を添加してもよ
い。

【００２５】家屋内のダスト類の捕集は、例えば電気掃
除機等の吸引装置やほうき等を使用して行うことができ
る。取得したダスト試料は、例えば粗大な断片を取り除
いて抽出溶媒に浸漬しやすい状態とし、抽出溶媒として
のアルカリ金属水酸化物のＤＭＳＯ含水溶液に浸漬し
て、目的とするグアニンを抽出する。

【００２６】ダスト類と上記抽出溶媒との比率は、特に
厳密のものではないが、一回の抽出に１乃至１０ｇ程度
の抽出溶媒を使用するのがよく、この抽出溶媒に０．０
１乃至１ｇ程度のダスト類検体を添加してもよい。ま
た、他の具体例としては、家屋内のダスト類とアルカリ
金属水酸化物のジメチルスルフォキシド含水溶液とを、
ダスト類０．１ｍｇ当たりアルカリ金属水酸化物のジメ
チルスルフォキシド含水溶液が０．１乃至１０ｍｌとな
る割合で混合し抽出してもよい。

【００２７】抽出温度は、室温で十分であるが、所望に
よっては加温してもよい。抽出時間は、ごく短時間でよ
く、一般に５秒乃至数１０秒程度で十分である。グアニ
ン類の抽出を有効に行うために、ダスト類を添加した液
をよく振るなどして、十分振とうさせることも有効であ
る。小型のキャップ付き容器に前記抽出溶媒の所定量を
充填しておくと、ダスト類の添加及び振とうを手軽に行
えるので便利である。

【００２８】次いでグアニン抽出液と芳香族ジアゾ化合
物とを接触させて呈色反応を行わせる。芳香族ジアゾ化
合物は、これを溶解した溶液の形で用いることもできる
し、或いは芳香族ジアゾ化合物を基体に塗布乃至含浸さ
せた呈色試験要素の形で用いることもできる。

【００２９】芳香族ジアゾ化合物としては、グアニンと
カップリング可能で且つ呈色する芳香族ジアゾ化合物で
あれば、何れをも使用できるが、階調性に優れたもの、
即ち、グアニン濃度に応じて色調或いは色濃度がほぼ直
線的に変化するものが好ましい。更に、水溶性でしかも
耐光性のあるものが好ましく、鮮明な色調、例えば、
赤、青、紫等に発色するものが好適に使用される。芳香
族ジアゾ化合物は、アゾ染料等の分野において多くのも
のが知られており、これらは何れも本発明の目的に使用
できる。適当な例は、決してこれに限定されないが、４
−ジアゾベンゼンスルホン酸（ジアゾスルファニル
酸）、ジアゾアミノチアゾール等である。芳香族ジアゾ
化合物は、酸付加塩の形で安定化させて使用するのがよ
く、この目的に、無機酸、例えば、塩酸、硫酸等が使用
される。また、芳香族ジアゾ化合物の分解を防止するた
めに、安定化剤、特に亜硝酸塩、例えば、亜硝酸ナトリ
ウム、亜硝酸カリウム等を共存させるのが望ましい。

【００３０】芳香族ジアゾ化合物は、水或いはＤＭＳＯ
或いはこれらの混合物に溶解させた溶液の形で用いるこ
とができる。この溶液中における芳香族ジアゾ化合物の
濃度は、０．１乃至２．５重量％の範囲にあることが好
ましい。

【００３１】また、芳香族ジアゾ化合物を、基体に塗布
乃至含浸させた呈色試験要素の形で使用すると、呈色反
応操作を手軽に行いうるので便利である。基体として
は、濾紙、コート紙等の各種紙や、紙とプラスチックフ
ィルムとの積層体等が使用される。基体に前述した芳香
族ジアゾ化合物の溶液を含浸させ、或いはコートするこ
とにより、呈色試験要素を形成させる。芳香族ジアゾ化
合物の塗布量は、基体の単位面積（１平方メートル）当
たり、０．０１乃至１ｇていどであることが好ましい。
呈色試験要素は、細い短冊状等の形をしていることが、
抽出液との接触の点で好ましい。

【００３２】抽出液中のグアニンと芳香族ジアゾ化合物
とのカップリング反応は、ほとんど瞬間的に進行するの
で、発色溶液或いは発色試験要素の発色濃度に基づい
て、比色法によりダスト中のグアニンを検出する。

【００３３】比色法による評価は、例えば、予め濃度既
知のグアニンの溶液について呈色反応を行い、各グアニ
ンの濃度における光学的濃度や色を比色計や分光光度計
等を用いて測定し、グアニン濃度に応じた検量線を作成
し、この検量線に基づいて濃度を測定、評価する方法で
行うことができる。また、現場で簡易にできる比色法と
して、グアニン濃度に対応する色見本の複数をランク付
けして配列した評価用サンプルを作製し、呈色反応物が
どの色見本に対応するかで、グアニン濃度を測定するこ
とができる。前記評価用サンプルは、写真でも印刷物で
あってもよい。

【００３４】本発明のダスト中のグアニンを検出するた
めのキットは、図１に示すとおり、アルカリ金属水酸化
物のジメチルスルフォキシド含水溶液１を収納し且つ家
屋内のダスト類を浸漬してグアニンを抽出するための蓋
付き小容器２と、芳香族ジアゾ化合物を基体に塗布乃至
含浸させた呈色試験要素３と、グアニン濃度に対応する
色見本の複数をランク付けして配列した評価用サンプル
４とからなる。

【００３５】図１に示す具体例においては、呈色試験要
素３は短冊形の紙からなっており、小容器５の中に充填
されており、この小容器５の外面には、評価用サンプル
４が貼着されていて、ダスト中のグアニン濃度を簡便に
しかも正確に検出できるようになっている。

【００３６】

【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこ
れらにより何ら限定されるものではない。

【００３７】実施例１ 呈色反応の感度及び精度を確かめるため、前記従来技術
におけるメタノール抽出液（３％ＫＯＨ／８０％メタノ
ール水溶液）と、本発明によるＤＭＳＯ抽出液（３％Ｋ
ＯＨ／５０％ＤＭＳＯ水溶液）にそれぞれグアニンを溶
かし、同量のジアゾスルファニル酸（２％液）と反応さ
せた場合の発色を判定スコアでみると、下記表１のとお
りとなった。

【００３８】

【表１】

【００３９】上記の結果から、ＤＭＳＯを抽出液に使用
する場合には、芳香族ジアゾ化合物との副反応が抑制さ
れ、グアニンの低濃度域での識別にＤＭＳＯ抽出液がす
ぐれていることがわかる。

【００４０】実施例２ 次に、抽出溶媒への溶解性を調べるため、次の実験を行
った。即ち、ＫＯＨ濃度３％のＤＭＳＯ含水溶液及びＫ
ＯＨ濃度３％のメタノール含水溶液のグアニンの溶解量
を表２に示す。

【００４１】

【表２】

【００４２】以上の結果から、ジメチルスルフォキシド
の使用は、グアニンの溶解量を増大させ、検出の感度を
高めるのに有効であることが了解される。

【００４３】実施例３ （Ａ）呈色試験要素の作成 スルファニル酸１３．６ｇ及び亜硝酸ナトリウム６．７
ｇを各々粉末状態で混合し、得られた混合物を氷冷下
（約５℃）で０．１規定塩酸１リットルに溶解して、紙
ディスクに含浸させ、凍結乾燥してダストチェッカーを
作成した。作成したダストチェッカーは遮光し、冷蔵保
存した。

【００４４】（Ｂ）グアニン検出評価表（ダストチェッ
カー判定スコア表）の作成 表３に示す濃度のグアニンを含有する標準グアニン溶液
を調製した。この標準グアニン溶液は、５０容量％ＤＭ
ＳＯ水溶液にＫＯＨを容量当たりの重量で３重量％添加
して調製した抽出液に、さらに表２に示す濃度となるよ
うグアニン（和光純薬社製）を溶解して調製した。

【００４５】

【表３】

【００４６】各々の標準グアニン溶液について、前記ダ
ストチェッカーを用いた呈色反応を行った。また、グア
ニン濃度に応じた判定スコアを用いて、抽出液中のグア
ニン濃度を評価した。

【００４７】呈色反応の結果、各々のダストチェッカー
は、グアニン濃度が高くなる順に、その呈色が、各々
黄、橙、赤、紫へと変化したものとして得られた。呈色
したダストチェッカーとグアニン検出評価表とを対比し
たところほぼ１：１の対応が認められた。

【００４８】実施例４ 実施例３のシステムを用いて、一般家庭掃除機のハウス
ダスト４点について色見本による判定（スコア）、含有
グアニン量、ダニアレルゲン量の測定を行った。その結
果、下記表４に示す結果が得られた。

【００４９】

【表４】

【００５０】実施例５ 家屋内のダスト類中のグアニン量とダニアレルゲンとの
関係を調べるため、次の実験を行った。即ち、採取した
家屋内のダスト類について以下の測定を行った。 （１）グアニン：本発明にて測定 （２）ダニアレルゲン：モノクロナール抗体測定法によ
るアレルゲンＤｅｒ ｐＩ（コナ表皮ダニ、Ｉは糞由来
のものを示す、以下同様）及びＤｅｒ ｆ Ｉ（ヤケ表
皮ダニ）） （３）ダニ抗原タンパク：プール血清によるサンドイッ
チ法ラストインヒビション法

【００５１】グアニン含有量と上記アレルゲンＤｅｒ
ｐ Ｉ（コナ表皮ダニ、Ｉは糞由来のもの）含有量との
相関関係を図２に示す。この結果によると、グアニン含
有量とＤｅｒ ｐ Ｉとの間には、高い相関性（ｒ＝
０．９３２６）が認められた。

【００５２】グアニン含有量とトータルのアレルゲンＤ
ｅｒ Ｉ（Ｄｅｒ ｐ Ｉ＋Ｄｅｒｆ Ｉ）含有量との
相関関係を図３に示す。この結果によると、グアニン含
有量とＤｅｒ Ｉとの間にも、高い相関性（ｒ＝０．９
０７４）が認められた。

【００５３】ダニ抗原タンパクとトータルのアレルゲン
Ｄｅｒ Ｉ含有量との相関関係を図４に示す。この結果
によると、ダニ抗原タンパクとＤｅｒ Ｉとの間には、
高い相関性（ｒ＝０．９５４４８）が認められた。

【００５４】

【発明の効果】本発明のグアニンの検出方法によれば、
ダニアレルゲンと相関性のあるグアニンを精度よくしか
も低濃度においても感度よく検出することができる。更
に、本発明によれば、専門的な知識、高度な測定技術等
がなくとも、屋内で簡便にダニアレルゲンの存在を確認
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のダスト中のグアニン検出用キットの斜
視図である。

【図２】グアニン含有量とアレルゲンＤｅｒ ｐ Ｉ含
有量との相関関係を示すグラフである。

【図３】グアニン含有量とトータルのアレルゲンＤｅｒ
Ｉ含有量との相関関係を示すグラフである。

【図４】ダニ抗原タンパクとアレルゲンＤｅｒ Ｉ含有
量との相関関係を示すグラフである。

【符号の説明】

１ ジメチルスルホキシド含水溶液 ２ 蓋付き小容器 ３ 呈色試験要素 ４ 評価用サンプル ５ 小容器

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 33/48 A01M 1/00 G01N 33/50 G01N 33/52

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 家屋内のダスト類を、アルカリ金属水酸
   化物のジメチルスルフォキシド含水溶液で抽出し、得ら
   れる抽出液について芳香族ジアゾ化合物との呈色反応を
   行い、その呈色濃度に基いてダスト中のグアニン乃至ダ
   ニを検出する方法。
2. 【請求項２】 アルカリ金属水酸化物のジメチルスルフ
   ォキシド含水溶液が０．１乃至１０重量％のアルカリ金
   属水酸化物及び５乃至９５重量％、特に１０乃至５０重
   量％のジメチルスルフォキシドを含有する含水溶液であ
   ることを特徴とする請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 家屋内のダスト類とアルカリ金属水酸化
   物のジメチルスルフォキシド含水溶液とを、ダスト類
   ０．１ｍｇ当たりアルカリ金属水酸化物のジメチルスル
   フォキシド含水溶液が０．１乃至１０ｍｌとなる割合で
   混合し抽出する請求項１または２記載の方法。
4. 【請求項４】 前記呈色反応を、前記抽出液と芳香族ジ
   アゾ化合物を含む呈色試験要素とを接触させることによ
   り行う請求項１乃至３の何れかに記載の方法。
5. 【請求項５】 前記呈色反応を、前記抽出液と芳香族ジ
   アゾ化合物を含む溶液とを混合させることにより行う請
   求項１乃至３の何れかに記載の方法。
6. 【請求項６】 前記呈色濃度によるグアニン量及びダニ
   数の検出を、グアニン量既知の前記抽出液と芳香族ジア
   ゾ化合物との呈色見本と対比することにより行う請求項
   １乃至５の何れかに記載の方法。
7. 【請求項７】 アルカリ金属水酸化物のジメチルスルフ
   ォキシド含水溶液を収容し且つ家屋内のダスト類を浸漬
   してグアニンを抽出するための小容器と、芳香族ジアゾ
   化合物を基体に塗布乃至含浸させた呈色試験要素と、グ
   アニン濃度に対応する色見本の複数をランク付けして配
   列した評価用サンプルとからなることを特徴とするダス
   ト中のグアニン乃至ダニを検出するためのキット。